TWI713822B - 兩性嵌段共聚物、含彼之奈米粒子及其醫藥組成物暨其用於抑制核醣核酸結合至人類抗原ｒ蛋白的方法 - Google Patents

Abstract

本發明提供一種兩性嵌段共聚物、含彼之奈米粒子及醫藥組成物暨其用於抑制核醣核酸結合至人類抗原R蛋白的方法。前述兩性嵌段共聚物可專一性結合至人類抗原R蛋白的核醣核酸結合區。含有兩性嵌段共聚物的奈米粒子可應用於醫藥組成物及其用於抑制核醣核酸結合至人類抗原R蛋白的方法。

Description

兩性嵌段共聚物、含彼之奈米粒子及其 醫藥組成物暨其用於抑制核醣核酸結合至人類抗原R蛋白的方法

本發明是有關於一種兩性嵌段共聚物、含彼之奈米粒子及其應用，特別是有關於一種專一性結合至人類抗原R蛋白的核醣核酸結合區的兩性嵌段共聚物、含彼之奈米粒子及醫藥組成物與用於抑制核醣核酸結合至人類抗原R蛋白的方法。

慢性發炎與惡性腫瘤一直都是全球投注高醫療資源的疾病。傳統抗發炎藥與化療藥大多易使人體產生不必要的副作用。近來研究各種生物高分子(如胜肽)，可選擇性抑制發炎或誘發癌細胞死亡，而且對正常細胞影響不大。例如，在Nicole-Claudia Meisner等人在2007年於期刊 Nature Chemical Biology第3期第508-515頁發表之「Identification and mechanistic characterization of low-molecular-weight inhibitors for HuR」一文中，揭露MS-444；Min-Ju Chae等人在2009年於期刊Exp.Mol.Med.第41卷第11期第824-831頁發表之「Chemical inhibitors destabilize HuR binding to the AU-rich element of TNF-α mRNA」一文中揭露檞皮素(quercetin)；前述MS-444及檞皮素皆對HuR蛋白具有某一程度的結合能力，能抑制HuR蛋白與核醣核酸(RNA)的結合，而達到抑制發炎與癌症相關基因的表現。

然而，在小鼠的疾病模式相關實驗中，上述高分子對人類抗原R蛋白的結合能力有限，因此在小鼠急性肝發炎模式顯示其改善肝臟血管口細胞壞死、細胞質空洞化、發炎造症後脾臟腫大、耳朵乾癬治療情況(發紅、增厚與脫屑)等等的程度並不理想，導致總體上治療發炎的效果仍有進步空間。另外，大部分藥物在體內進入發炎或癌症組織位置時，會影響其他細胞的正常生理代謝。

有鑑於此，實有必要提供一種抑制人類抗原R蛋白與核糖核酸結合的藥物分子，以針對特定發炎組織/細胞或癌組織/細胞，提高治療效果，並解決上述問題。

因此，本發明之一態樣是在提供一種兩性嵌段共聚物，其中此兩性嵌段共聚物係專一性結合人類抗原R蛋 白。

本發明之另一態樣係在提供一種奈米粒子，包含上述之兩性嵌段共聚物。

本發明之又一態樣係在提供一種抑制人類抗原R蛋白與核糖核酸結合的方法。包含令前述奈米粒子專一性結合至人類抗原R蛋白的核醣核酸結合區。

本發明之再一態樣係在提供一種抑制人類抗原R蛋白與核醣核酸結合的醫藥組成物，其包含上述奈米粒子以及醫藥學上可接受的載劑。

根據本發明之上述態樣，提出一種兩性嵌段共聚物，具有如下式(I)所示之分子結構：

在上述實施例中，式(I)的Y基可為親水性聚合鏈，可包括但不限於聚乙二醇衍生基團、多肽類衍生基團或多醣類衍生基團；R基可為疏水性聚合鏈，且此疏水性聚合鏈可例如為含苯基之胺基酸基，或經苯基或其衍生物修飾之胺基酸基；以及n為3至40的整數，且此兩性嵌段共聚物係專一性結合至人類抗原R蛋白的核醣核酸結合區。

在本發明的一實施例中，上述含苯基之胺基酸基可例如為L-色胺酸基或L-苯基丙胺酸基。

在本發明的一實施例中，上述經苯基或其衍生物修飾之胺基酸基可包含但不限於羰基苯甲氧基 (carbobenzyloxy；Cbz；Z)-L-離胺酸基、γ-苯甲基-L-麩胺酸基、β-苯甲基-L-天門冬胺酸基、O-苯甲基-L-酪胺酸基、O-苯甲基-L-蘇胺酸基、S-苯甲基-胱胺酸基、O-苯甲基-絲胺酸基以及Z,Z-L-精胺酸基。

在本發明的一實施例中，上述n可例如為3至20的整數。在一例示中，上述n可例如為5至20的整數。

根據本發明之上述態樣，再提出一種兩性嵌段共聚物，具有如下式(I-1)所示之分子結構：

在上述實施例中，式(I-1)的m可例如為45至245的整數，n可例如為5至20的整數，且兩性嵌段共聚物係專一性結合人類抗原R蛋白的核醣核酸結合區。

在本發明的一實施例中，上述m可例如為45至112的整數，且n可例如為5至8的整數。

根據本發明之另一態樣，提出一種奈米粒子，包含上述任一種的兩性嵌段共聚物，其中上述奈米粒子的粒徑範圍為50至500奈米。

根據本發明之又一態樣，提出一種抑制人類抗原R蛋白與核醣核酸結合的方法，包含令上述之奈米粒子專一性結合至人類抗原R蛋白的核醣核酸結合區。

根據本發明之再一態樣，提出一種抑制人類抗 原R蛋白與核醣核酸結合的醫藥組成物，包含上述奈米粒子以及醫藥學上可接受的載劑。在一實施例中，基於醫藥組成物之總含量為100%計，奈米粒子的含量可例如為20%至80%。

在本發明的一實施例中，上述醫藥組成物可例如為口服醫藥組成物或外用醫藥組成物。

應用本發明之兩性嵌段共聚物、含彼之奈米粒子及醫藥組成物暨其用於抑制核醣核酸結合至人類抗原R蛋白的方法，其中此兩性嵌段共聚物係專一性結合至人類抗原R蛋白的核醣核酸結合區，有效抑制核醣核酸結合至人類抗原R蛋白，更可應用於HuR相關疾病的醫藥組成物。

101‧‧‧N端子域

103‧‧‧C端子域

105‧‧‧核醣核酸結合區

為讓本發明之上述和其他目的、特徵、優點與實施例能更明顯易懂，所附圖式之詳細說明如下：

〔圖1A〕至〔圖1F〕係顯示本發明一實施例之兩性嵌段共聚物與人類抗原R蛋白的分子配對立體圖。

〔圖1G〕係顯示本發明一實施例之兩性嵌段共聚物與人類抗原R蛋白之間的親和力及鍵結能之長條圖。

〔圖1H〕係顯示本發明一實施例之兩性嵌段共聚物與人類抗原R蛋白的之氫鍵分布圖。

〔圖1I〕係顯示本發明一實施例之兩性嵌段共聚物與人類抗原R蛋白之間的原態膠體電泳結果。

〔圖2A〕係顯示在LPS誘發的巨噬細胞模式中，HuR 蛋白分布(HuR)、本發明一實施例之兩性嵌段共聚物的分布(PEG)、細胞核分布(DAPI)及合併上述結果之免疫螢光染色圖。

〔圖2B〕係顯示在LPS誘發的巨噬細胞模式中，細胞核(N)及細胞質(C)中HuR蛋白(HuR)與本發明一實施例之兩性嵌段共聚物(PEG)的免疫墨點分析結果。

〔圖2C〕至〔圖2F〕係顯示在LPS誘發的巨噬細胞模式中，本發明數個實施例之兩性嵌段共聚物對LPS引起發炎相關的細胞因子的免疫墨點分析結果。

〔圖3A〕係顯示在LPS/GalN誘發的小鼠肝炎模式中，本發明數個實施例之兩性嵌段共聚物抑制HuR蛋白之肝組織切片圖。

〔圖3B〕至〔圖3E〕係顯示在LPS/GalN誘發的小鼠肝炎模式中，本發明數個實施例之兩性嵌段共聚物抑制肝炎相關的轉胺酶活性(圖3B)、細胞激素含量(圖3C)、病理分級(圖3D)及存活率(圖3E)。

〔圖3F〕至〔圖3G〕係顯示在LPS/GalN誘發的小鼠肝炎模式中，本發明數個實施例之兩性嵌段共聚物抑制脾臟腫大的結果。

〔圖4A〕至〔圖4C〕係顯示在咪喹莫特(imiquimod；IMQ)誘發巨噬細胞的模式中，本發明一實施例之兩性嵌段共聚物抑制乾癬相關的細胞激素結果。

〔圖5A〕至〔圖5D〕係顯示在IMQ誘發小鼠乾癬的模式中，本發明一實施例之兩性嵌段共聚物對小鼠耳部皮膚 外觀(圖5A)以及臨床評分(圖5B至圖5D)的結果。

〔圖6A〕至〔圖6C〕係顯示在IMQ誘發小鼠乾癬的模式中，本發明一實施例之兩性嵌段共聚物抑制乾癬症狀之耳朵皮膚組織染色切片圖(圖6A)、耳朵表皮厚度(圖6B)及耳朵表皮層數(圖6C)的直條圖。

〔圖7A〕係顯示在IMQ誘發小鼠乾癬的模式中，HuR蛋白分布之皮膚免疫組織染色切片圖。

〔圖7B〕至〔圖7C〕係顯示在IMQ誘發小鼠乾癬的模式中，本發明一實施例之兩性嵌段共聚物抑制乾癬相關細胞激素VEGF(圖7B)及IL-23(圖7C)的直條圖。

〔圖7D〕係顯示在IMQ誘發小鼠乾癬的模式中，以PEG抗體偵測本發明一實施例之兩性嵌段共聚物在皮膚、肝臟及脾臟分布的皮膚免疫組織染色切片圖。

〔圖7E〕至〔圖7F〕係顯示在IMQ誘發小鼠乾癬的模式中，本發明一實施例之兩性嵌段共聚物抑制血清ALT(圖7E)及AST(圖7F)的直條圖。

〔圖8〕係顯示在IMQ誘發小鼠乾癬的模式中，本發明一實施例之兩性嵌段共聚物抑制耳朵皮膚之細胞激素的蛋白質矩陣結果。

本發明所提到的單數形式“一”、“一個”和“所述”包括複數引用，除非上下文另有明確規定。數值範圍(如10%~11%的A)若無特定說明皆包含上、下限值(即10% ≦A≦11%)；數值範圍若未界定下限值(如低於0.2%的B，或0.2%以下的B)，則皆指其下限值可能為0(即0%≦B≦0.2%)。上述用語是用以說明及理解本發明，而非用以限制本發明。

本發明提供一種兩性嵌段共聚物，其中此處所述之兩性嵌段共聚物係指專一性結合至人類抗原R蛋白的核醣核酸結合區且可與核糖核酸(RNA)競爭此核醣核酸結合區者。在一實施例中，適合的兩性嵌段共聚物的結構式可例如下式(I)所示：

在一例示中，式(I)的Y基可為親水性聚合鏈，其包括但不限於聚乙二醇衍生基團、多肽類衍生基團或多醣類衍生基團。

具體而言，上述多肽類衍生基團可為聚乙二醇化的多肽(pegylated polypeptides)，其具體例可包括但不限於聚乙二醇化的聚離胺酸基(pegylated poly-L-lysine)，例如聚(N-2-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]乙醯基離胺酸基〔poly(N-2-[2-(2-methoxyethoxy)ethoxy]acetyl-lysine)〕；聚乙二醇化的聚麩胺酸基(pegylated poly-L-glutamate)，例如聚(γ-(2-(2-甲氧基乙氧基))乙氧基]酯基-L-麩胺酸基〔poly(γ-(2-(2-methoxyethoxy)ethoxy)esteryl-L-glut amate)〕；乙醇酸化之聚-L-離胺酸基與聚-L-麩胺酸基(glycolated poly-L-lysine and poly-L-glutamate)；聚肌胺酸(polysarcosine)；聚L-離胺酸基〔poly(L-lysine)〕；聚L-麩胺酸基〔poly(L-glutamic acid)〕；聚精胺酸poly(L-arginine)；且前述多肽類衍生基團的胺基酸可以是L-式、D-式或其組合。

其次，上述多醣類衍生基團的例子可為寡醣(oligosaccharides)或聚醣，其具體例可包括但不限於藻膠酸(alginic acid)、直鏈澱粉(amylose)、纖維素(cellulose)、纖維素三酯(cellulose triester)、幾丁聚醣(chitosan)、卡德蘭(curdlan)膠、糊精(dextrin)、β-環糊精(β-cyclodextrin)、葡聚糖(dextran)、肝素(heparin)、玻尿酸(hyaluronan)、麥芽七糖(maltoheptaose)、麥芽糊精(maltodextrin)、類卵黏蛋白(ovomucoid)、三甲基纖維素(trimethylcellulose)、支鏈澱粉(pullulan)、裂褶多醣體(schizophyllan)、琥珀醯聚糖(succinoglycan)、三仙膠(xanthan)、木葡聚糖(xyloglucan)等。

在一例示中，上述式(I)的R基可為具有疏水性的聚合鏈，例如含苯基之胺基酸基，或經苯基或其衍生物修飾之胺基酸基。

申言之，上述含苯基之胺基酸基的例子可包括但不限於L-色胺酸基(如式II-7所示)或L-苯基丙胺酸基(如式II-5所示)。上述經苯基或其衍生物修飾之胺基酸基的例子可包括但不限於羰基苯甲氧基(carbobenzyloxy；Cbz； Z)-L-離胺酸基(如式II-1所示)、γ-苯甲基-L-麩胺酸基(如式II-2所示)、β-苯甲基-L-天門冬胺酸基(如式II-3所示)、O-苯甲基-L-酪胺酸基(如式II-4所示)、O-苯甲基-L-蘇胺酸基(如式II-6所示)、S-苯甲基-胱胺酸基(如式II-8所示)、O-苯甲基-絲胺酸基(如式II-9所示)或Z,Z-L-精胺酸基(如式II-10所示)。另外，式II-1至式II-10的圖號＊代表R基的鍵結點。

在一例示中，式(I)的n可例如為3至40的整數，以賦予嵌段共聚物之兼具親水性及疏水性的兩性性質，然而n以3至20的整數為佳，又以5至8的整數為較佳。

在一些具體例中，上述兩性嵌段共聚物的結構式可為PEG_45~245-b-PBLG_3~40，例如PEG₁₁₂-b-PBLG₃(簡稱為PBLG₃)、PEG₁₁₂-b-PBLG₄(簡稱為PBLG₄)、PEG₁₁₂-b-PBLG₅(簡稱為PBLG₅；式III-1)、PEG₁₁₂-b-PBLG₆(簡稱為PBLG₆)、PEG₁₁₂-b-PBLG₇(簡稱為PBLG₇；式III-2)、PEG₁₁₂-b-PBLG₈(簡稱為PBLG₈)、PEG₄₅-b-PBLG₂₀、PEG₁₁₂-b-PBLG₂₀(簡稱為PBLG₂₀)、PEG₂₄₅-b-PBLG₂₀、PEG₁₁₂-b-PBLG₄₀(簡稱為PBLG₄₀)等：

在本發明的一實施例中，上述兩性嵌段共聚物於溶液中可自組裝成奈米粒子(亦稱奈米複合物或微胞)。在上述實施例中，所得奈米粒子之平均粒徑可為50至500奈 米，例如100奈米、200奈米、300奈米、400奈米或500奈米，然不限於以上所舉。當上述兩性嵌段共聚物為PBLG₃至PBLG₈時，所得的奈米粒子之平均粒徑可為50至150奈米。

目前已知HuR目標核糖核酸(HuR target RNAs，特別是mRNA)可專一性結合到HuR蛋白的結合位置(binding site)，形成複合物(complex)後，可使目標核糖核酸穩定、其轉譯表現量被調升(up-regulated)或被抑制(repressed)。本發明此處所述與HuR蛋白相關的疾病係指HuR目標核糖核酸與HuR蛋白結合形成複合物後，因目標核糖核酸穩定、其轉譯表現量被調升或被抑制、HuR蛋白表現量提升或得以進入細胞質等而引起的疾病。

然而，本發明的兩性嵌段共聚物本身或含此之奈米粒子可專一性結合到HuR蛋白且與目標核糖核酸競爭相同或相近之結合位置，藉此干擾、減少及/或阻礙目標核糖核酸與HuR蛋白或抗HuR的抗體結合至HuR蛋白，使目標核糖核酸變得不穩定、轉譯表現量無法被調升(up-regulated)或被抑制(repressed)、HuR蛋白表現量下降等，進而減緩甚至治療與HuR蛋白相關的疾病。在本發明一些實施例中，上述兩性嵌段共聚物與HuR蛋白的結合力，大於核糖核酸與HuR蛋白的結合力，可與核糖核酸競爭在HuR蛋白的核糖核酸結合區。

在上述實施例中，由HuR蛋白穩定的目標核糖核酸之具體例子可包括但不限於c-Fos、細胞週期素依賴激 酶(cyclin-dependent kinase；cdk)抑制因子p21、細胞週期素(cyclins A2、B1、D1、E1)、誘導型一氧化氮合成酶(iNOS)、顆粒球巨噬細胞-群落刺激因子(granulocyte-macrophage-colony stimulating factor；GM-CSF)、真合起始因子(eukaryotic initiation factor；eIF)-4E、鼠雙微體(murine double minute；mdm)2、血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor；VEGF)、轉形生長因子(transforming growth factor)-β、沉默調節蛋白1(sirtuin 1；SIRT1)、腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor)-α、B細胞白血病(B-cell leukemia；Bcl)-2、骨髓性白血病細胞分化蛋白(myeloid leukemia cell differentiation protein；Mcl)-1、抑癌素M(oncostatin M；OSM)、環氧化酶(cyclooxygenase；COX)-2、γ-麩胺醯半胱胺酸合成酶重次單元(γ-glutamylcysteine synthetase heavy subunit(γ-GCSh)、運動神經元存活蛋白(survival of motor neuron；SMN)、SH2D1A、G蛋白訊息傳遞調節蛋白4(regulator of G-protein signaling 4；RGS4)、副甲狀腺荷爾蒙相關蛋白(parathyroid hormone-related protein；PTHrP)、Fas配體(Fas ligand；FasL)、肌細胞生成素(myogenin)、MyoD、乙醯膽鹼酯酶(acetylcholinesterase；AChE)、p53、發育不全Ras同源物成員I[aplasia Ras homolog member I(DIRAS3)；ARHI]、一氧化氮/可溶係鳥嘌呤核苷酸環化酶(nitric oxide/soluble guanylyl cyclase；sGC)、尿激酶血纖維蛋白溶酶原活化劑(urokinase plasminogen activator；uPA)及其受體(uPAR)、神經纖維瘤第1型(neurofibromatosis type 1；NF1)、逢希伯-林道蛋白(von Hippel-Lindau protein；pVHL)、類鐸受體(toll-like receptor 4；TLR4)、鋅指轉錄因子Snail(Snail)、基質金屬蛋白酶(matrix metalloprotease；MMP)-9、c-Fms、絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase；MAPK)磷酸酶(phosphatase)-1(MKP-1)、干擾素(interferon；IFN)-γ、HuR蛋白本身、介白素(interleukin；IL)-3、IL-4、IL-6及IL-8等的mRNA。

在上述實施例中，由HuR蛋白調升轉譯表現量的核糖核酸之具體例子可包括但不限於細胞週期素(cyclin)A2、前胸腺素α(prothymosin α；ProTα)、缺氧誘導因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α；HIF-1α)、Bcl-2、VEGF、凝血酶敏感蛋白-1(thrombospondin-1；TSP-1)、MKP-1、p53、陽離子胺基酸轉運蛋白-1(cationic amino acid transporter；CAT-1)、內生性細胞凋亡蛋白酶抑制因子XIAP(intrinsic cellular caspase inhibitor XIAP)、細胞色素c(cytochrome c)等的mRNA。

在上述實施例中，由HuR蛋白抑制轉譯表現量的目標核糖核酸之具體例子可包括但不限於p27、IGF-1R、凝血調節素(thrombomodulin；TM)、Wnt5a、c-Myc等的mRNA。

在上述實施例中，因HuR蛋白表現量提升之相關疾病包括發炎反應及癌症。HuR蛋白可提升促發炎因子的表現量、抑制抗發炎因子的表現量等。另外，HuR蛋白可促進癌細胞生長、免疫脫逃、侵襲及移行、血管新生等。

在一實施例中，上述兩性嵌段共聚物本身或形成奈米粒子後，可進一步應用於醫藥組成物，以治療與HuR蛋白相關的疾病，例如發炎反應(例如肝炎、乾癬等)及癌症等，惟本發明的應用不限於此處所舉，上述奈米粒子可應用於治療其他與HuR蛋白相關的疾病。

在本發明的一實施例中，醫藥組成物可包括但不限於上述奈米粒子以及醫藥學上可接受的載劑。當上述醫藥組成物為外用時，前述載劑可例如為水、凡士林或任何可以塗抹於皮膚的膏劑，可視需求而定，例如若該組合物是用於皮膚上，則可以選擇凡士林。當醫藥組成物為內用醫藥組成物時，則該載劑可為以水為主的載劑，例如生理緩衝液，並經由口服或注射方式投與。

在本發明的一實施例中，上述奈米粒子應用於醫藥組成物時，基於醫藥組成物之總含量為100%計，上述奈米粒子的含量可為20%至80%，例如20%、30%、40%、50%、60%、70%或80%，然不限於此。在上述實施例中，基於醫藥組成物之總含量為100%計，前述載劑的含量可為0.1%至20%，例如0.1%、0.5%、0.7%、1.5%、2%、5%、10%、15%或20%，然不限於此。

以下利用數個實施例以說明本發明之應用，然 其並非用以限定本發明，本發明技術領域中具有通常知識者，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可作各種之更動與潤飾。

實施例一、評估兩性嵌段共聚物與人類抗原R蛋白的結合力

1.評估兩性嵌段共聚物結合HuR蛋白的效果

以下實施例係利用市售分子配對(molecular docking)軟體(例如Dock 5.1)，模擬本發明一實施例之兩性嵌段共聚物、RNA(富含U的RNA序列為AUUUUUAUUUU，共11個核苷酸)、MS-444及檞皮素(Q)與HuR蛋白(重組人類HuR/ELAVL1蛋白；PDB code：4ED5)的分子配對立體圖，並利用UCSF Chimera軟體輸出分子3D圖式，其中HuR蛋白之緞帶模型如圖1A所示，HuR蛋白之核糖核酸結合區(亦稱為RNA辨識基序，RNA-recognition motif；RRM)的局部表面模型則如圖1B至圖1F所示。上述使用之RNA為富含U的RNA配體，其序列為AUUUUUAUUUU，共11個核苷酸。圖1B至圖1F之原子間的距離小於5埃(Å)。

其次，利用X-score軟體預測兩性嵌段共聚物、MS-444及檞皮素(Q)的親和力(pKD)，並利用HotLig軟體計分兩性嵌段共聚物、MS-444及檞皮素(Q)的鍵結能，其結果如圖1G及表2。另外，利用Ligplot軟體預測兩性嵌段共聚物與人類抗原R蛋白之間的氫鍵分布，其結果如圖1H所示。

請參閱圖1A至圖1F，其係顯示本發明一實施例之兩性嵌段共聚物、RNA、MS-444及檞皮素(Q)與人類抗原R蛋白的分子配對立體圖，其中兩性嵌段共聚物為聚苯基之L-麩胺酸基(PBLG₅、PBLG₇)之寡聚物，MS-444與檞皮素(Q)係作為對照化合物。MS-444係參照Nicole-Claudia Meisner等人於2007年在期刊Nature Chemical Biology第3期第508-515頁發表「Identification and mechanistic characterization of low-molecular-weight inhibitors for HuR」一文。檞皮素(Q)係參照Min-Ju Chae等人在2009年於期刊Exp Mol Med.第41卷第11期第824-831頁發表「Chemical inhibitors destabilize HuR binding to the AU-rich element of TNF-α mRNA」一文。

由圖1A至圖1F的結果顯示，HuR蛋白包含N端子域(N-terminal domain)101(圖1A、圖1B)、C端子域(C-terminal domain)103(圖1A、圖1B)以及核醣核酸結合區105(圖1B深灰色區域)，PBLG₅與PBLG₇可以結合至HuR蛋白的核醣核酸結合區(圖1E、圖1F)進行結合。對照化合物MS-444及檞皮素(Q)亦可結合至HuR蛋白的核醣核酸結合區，分別如圖1C及圖1D所示。

請參閱圖1G及表1，其中圖1G係顯示本發明一實施例之兩性嵌段共聚物與人類抗原R蛋白之間的親和力及鍵結能之長條圖，而表1則顯示圖1G各長條的數值。在表1中，Xscore的值越大，代表二者之間的親和力愈強； HotLig score計分的負數值愈大，代表二者之間的鍵結能愈高。

由圖1G及表1的結果顯示，本發明之兩性嵌段共聚物與HuR蛋白的鍵結能由大到小為PBLG₇(7-mer)>PBLG₆(6-mer)>PBLG₈(8-mer)>PBLG₅(5-mer)>PBLG₄(4-mer)>PBLG₃(3-mer)>Q>MS-444，代表本發明之兩性嵌段共聚物的PBLG₃至PBLG₈與HuR蛋白的結合能力皆優於檞皮素(Q)及MS-444。一般而言，配體與受體之間的鍵結能係隨著配體分子量的增加而增加，但圖1G及表1的結果顯示PBLG₇與PBLG₆優於PBLG₈與PBLG₅，不排除受到配體本身結構的彈性及/或受體的結合區空間大小的影響。

接著，請參閱圖1H，其係顯示本發明一實施例之兩性嵌段共聚物與人類抗原R蛋白之間的氫鍵分布圖，其中紫色粗線結構式代表PBLG₇，綠色虛線代表潛在的氫鍵，而黑色輻狀弧(spoked arcs)則代表HuR蛋白上非鍵結式接觸(non-bonded contacts)。

由圖1H的結果顯示，本發明之兩性嵌段共聚物的PBLG₇與HuR蛋白之間具有較多的氫鍵(共9個)以及非鍵結式(或疏水性)接觸，顯示二者之間具有較強的結合力， 可與RNA競爭HuR蛋白的核糖核酸結合區，可望作為HuR蛋白的抑制劑。

2.評估兩性嵌段共聚物阻礙HuR蛋白抗體辨識的效果

在此實施例中，本發明之兩性嵌段共聚物的PBLG₅經超音波震盪3分鐘後，與HuR蛋白(Novus Biologicals,LLC,US；0.4μg)在37℃下反應3小時。之後，進行原態膠體電泳(native-polyacrylamide gel electrophoresis；native-PAGE)，並利用抗體進行免疫墨點法(immunoblotting)偵測游離(free)的HuR蛋白的量(%)，並以未加入PBLG₅反應的HuR蛋白為100%計。上述所使用的抗體分別為抗HuR之第1-101個胺基酸的小鼠多株抗體(abcam,Cambridge,MA)、抗HuR之第1-280個胺基酸的小鼠單株抗體及抗HuR之第1-326個胺基酸的小鼠單株抗體(後二者製造商為Santa Cruz Biotechnology Inc.,CA)。並利用市售之增強型化學冷光(enhanced chemiluminescence；ECL)套組偵測各色帶的訊號，其結果如圖1I所示。

請參閱圖1I，其係顯示本發明一實施例之兩性嵌段共聚物與人類抗原R蛋白之間的原態膠體電泳結果，其中以未加入兩性嵌段共聚物的PBLG₅時的游離HuR蛋白之濃度作為100%。圖1I的圖號＊代表p<0.05，圖號＊＊代表p<0.01，圖號＊＊＊代表p<0.001。

由圖1I的結果顯示，當本發明之兩性嵌段共聚 物的PBLG₅的添加量越多，以不同抗體(分別為抗HuR之第1-101個胺基酸的抗體、抗HuR之第1-280個胺基酸的抗體及抗HuR之第1-326個胺基酸的抗體)所偵測到HuR蛋白之色帶訊號則越淡，代表PBLG₅與HuR蛋白的結合力較為優勢，不僅可阻礙抗HuR蛋白之抗體的辨識，也間接證明本發明之兩性嵌段共聚物的PBLG₅可以抑制、阻礙或干擾HuR蛋白與RNA的結合，進而抑制發炎反應等與HuR蛋白相關的疾病。

實施例二、評估兩性嵌段共聚物形成奈米粒子的功效

以下實施例係請參閱表2，其係分別顯示根據本發明數個實施例之兩性嵌段共聚物在水溶液自組裝成奈米粒子的平均聚集粒徑。

由表2的結果顯示，以PBLG₃至PBLG₈可獲致平均粒徑較小的奈米粒子，其平均粒徑為50至150奈米。

實施例三、評估兩性嵌段共聚物抑制發炎反應的功效

1.評估兩性嵌段共聚物抑制LPS引起發炎反應的效果

此實施例係利用細胞試驗評估以脂多醣(lipopolysaccharides；LPS)引起HuR蛋白過量表現後，兩性嵌段共聚物抑制發炎反應的效果。

在此實施例中，以巨噬細胞株Raw264.7(寄存於台灣新竹財團法人食品工業發展研究所生物資源保存及研究中心，寄存編號：BCRC 60001；或寄存於中國武漢中國典型培養物保藏中心，寄存編號：CCTCC GDC0143)建立體外細胞模式。一般而言，巨噬細胞株Raw264.7係培養在DMEM培養液〔含有10%的胎牛血清(FBS)及50μg/mL的健大黴素(gentamicin)〕中，於37℃、5% CO₂及相對飽和濕度環境中培養。

進行試驗時，巨噬細胞株Raw264.7以每孔2×10⁵細胞植入6孔培養盤中，先利用100μM的兩性嵌段共聚物PBLG₅預處理1小時後，再以LPS(Sigma-Aldrich,St.Louis,MO；0.25μg/mL)處理24小時。之後，利用甲醇固定細胞10分鐘後，利用含0.3% Triton-x100之5%低脂牛奶(low-fat milk)予以阻隔(blocking)。上述樣本經PBS清洗三次後，與初級抗體在4℃下反應至隔夜，其中初 級抗體包括小鼠抗HuR抗體(Santa Cruz Biotechnology,Inc.)及兔抗PEG抗體(Abcam plc.)或同型控制組(isotype control)IgG(Santa Cruz Biotechnology Inc.,CA)。上述樣本經PBS清洗三次後，與二級抗體在室溫下反應2小時，其中二級抗體包括結合德州紅之山羊抗小鼠IgG(texas red-conjugated goat anti-mouse IgG)以及結合FITC之山羊抗兔IgG(FITC-conjugated goat anti-rabbit IgG(前述二者皆為Jackson ImmunoResearch Inc.)。上述樣本經PBS清洗三次後，利用4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(4’,6-diamidino-2-phenylindole；0.1μg/mL)進行細胞核染色。30分鐘後，以共軛焦顯微法，利用多光子雷射掃描式顯微鏡(multiphoton laser scanning microscope；Olympus FV1000 MPE)並搭配60倍(60×)水浸物鏡(water-immersion objective lens)觀察細胞，其結果如圖2A所示。

請參閱圖2A及圖2B。圖2A係顯示在LPS誘發的巨噬細胞模式中，HuR蛋白分布(HuR)、本發明一實施例之兩性嵌段共聚物的分布(PEG)、細胞核分布(DAPI)及合併上述結果之免疫螢光染色圖。圖2B係顯示在LPS誘發的巨噬細胞模式中，細胞核(N)及細胞質(C)中HuR蛋白(HuR)與本發明一實施例之兩性嵌段共聚物(PEG)的免疫墨點分析結果，其中以未經LPS處理測得細胞核(N)或細胞質(C)的HuR蛋白(HuR)或兩性嵌段共聚物(PEG)的色帶螢 光強度作為1.00，計算各組相關數值，而β-肌動蛋白(β-actin)則為內部控制組。

由圖2A及圖2B的結果顯示，LPS處理1.5小時後，利用抗HuR蛋白之抗體偵測結果顯示，HuR蛋白在巨噬細胞之細胞核的含量減少，而在細胞質中的含量則增加。

由圖2A及圖2B的結果顯示，經LPS處理後，利用抗PEG之抗體偵測兩性嵌段共聚物PBLG₅在細胞質中的含量，分別是在細胞核含量的1.16倍(LPS處理0.5小時)及1.43倍(LPS處理1.5小時)。

而由圖2A合併上述影像觀察以及圖2B的結果顯示，HuR蛋白與兩性嵌段共聚物在細胞質中的分布，二者具有相關性，間接證明本發明之兩性嵌段共聚物的PBLG₅可透過競爭性結合(competitive binding)，進而抑制、阻礙或干擾抗HuR之抗體與HuR蛋白的結合。

2.評估兩性嵌段共聚物抑制LPS引起發炎相關訊息傳遞路徑的效果

在此實施例中，巨噬細胞株Raw264.7以每孔2x10⁵細胞植入6孔培養盤中，先利用100μM的兩性嵌段共聚物PBLG₅、PBLG₂₀、PBLG₄₀、糊精(dextrin)-b-PBLG₅、PEG₄₅-b-PBLG₂₀、PEG₂₄₅-b-PBLG₂₀預處理1小時後，再以LPS(Sigma-Aldrich；0.25μg/mL)處理24小時。之後，將收集所得之細胞溶解產物(cell lysate)利用SDS-PAGE分 析，利用抗體偵測LPS引起發炎相關訊息傳遞路徑之相關細胞因子的表現量，其中相關的細胞因子包括pNFκBp65、pAKT、pERK、pJNK、pp38、iNOS、COX2、凋亡蛋白酶原(procaspase)-3及凋亡蛋白酶(caspase)-3等，並以β-肌動蛋白(β-actin)作為內部控制組。抗pNFκBp65、pAKT、pERK、pJNK、pp38及凋亡蛋白酶-3之抗體係購自Danvers,MA。抗iNOS、COX2、HuR、β-肌動蛋白之抗體則購自Santa Cruz Biotechnology,Inc.。

其次，利用市售Griess分析套組(Sigma-Aldrich)偵測細胞培養液中的一氧化氮(NO)濃度，其結果如圖2C至圖2F所示。

請參閱圖2C至圖2F，其係顯示在LPS誘發的巨噬細胞模式中，本發明數個實施例之兩性嵌段共聚物對LPS引起發炎相關的細胞因子的免疫墨點分析結果。圖2F的圖號＊代表p<0.05，圖號＊＊代表p<0.01，圖號＊＊＊代表p<0.001。

由圖2C的結果顯示，雖然巨噬細胞經LPS處理0.5小時後，兩性嵌段共聚物PBLG₅無法顯著抑制pNFκBp65、pAKT、pERK、pJNK、pp38的產生，不過經LPS處理24小時後，兩性嵌段共聚物PBLG₅可抑制iNOS、COX2的產生，推測原因可能是兩性嵌段共聚物影響的層次是發炎相關基因的轉譯表現，而非LPS與細胞膜上TLR4相關蛋白的接觸。

由圖2D的結果顯示，不同長度的兩性嵌段共聚 物對於LPS引起發炎的巨噬細胞具有抗發炎及引起細胞凋亡的功效，但不引起正常細胞的細胞凋亡(apoptosis)。

由圖2E的結果顯示，將兩性嵌段共聚物、PEG₂₄₅-b-PBLG₅的親水端置換為糊精(dextrin)後，糊精-b-PBLG₅對於LPS引起發炎的巨噬細胞同樣具有抗發炎及引起細胞凋亡的功效，但不引起正常細胞的細胞凋亡。

由圖2F的結果顯示，巨噬細胞經LPS處理後，兩性嵌段共聚物PBLG₅、PBLG₂₀、PBLG₄₀、PEG₄₅-b-PBLG₂₀、PEG₂₄₅-b-PBLG₂₀皆可抑制一氧化氮(NO)的產生，此結果顯示，本發明之兩性嵌段共聚物的親水端置換為不同種類或長度，或改變疏水端PBLG的長度，對於LPS引起發炎的巨噬細胞而言，都具有抗發炎及細胞凋亡的功效。

3.評估兩性嵌段共聚物抑制肝炎的效果

此實施例係利用LPS/GalN誘發的小鼠肝炎模式，評估兩性嵌段共聚物抑制肝炎的效果。C57BL/6雄性小鼠(8-10週齡)係購自國家實驗研究院國家實驗動物中心(台北，台灣)，並依循國立成功大學實驗動物照護及使用委員會訂立的要點及台灣動物保護法的相關規定進行。

C57BL/6雄性小鼠以LPS/GalN(LPS[10μg/kg]+D-GalN[400mg/kg])誘發急性肝炎1小時後，以腹腔注射(intraperitoneal；i.p.)的方式投以兩性嵌段共聚物PBLG₅、PBLG₂₀、PBLG₄₀(20mg/kg)或檞皮素(50 mg/kg)。正對照組的小鼠在LPS/GalN誘發急性肝炎後，則投以等量不含藥的生理食鹽水。之後，採集小鼠的血液樣本，分析血漿的轉胺酶活性及細胞激素的表現量。

上述血液樣本可利用賴氏(Reitman-Frankel)法檢測血清的丙胺酸轉胺酶(alanine aminotransferase；ALT)與天冬胺酸轉胺酶(aspartate aminotransferase；AST)的活性，以評估肝損傷的程度。此外，利用ELISA套組(R&D)檢測血清的腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor；TNF)-α及介白素(interleukin；IL)-6含量，以評估發炎相關的細胞激素。

另外，採取上述小鼠的肝臟及脾臟的活體組織樣本，以4%的福馬林(formalin)固定及石蠟包埋後，進行蘇木素-伊紅(hematoxylin-eosin；HE)染色，並利用抗HuR蛋白之第1-326個胺基酸的小鼠單株抗體(Santa Cruz Biotechnology Inc.,CA)進行免疫組織染色。

請參閱圖3A，其係顯示在LPS/GalN誘發的小鼠肝炎模式中，本發明數個實施例之兩性嵌段共聚物抑制HuR蛋白之肝組織切片圖。

由圖3A的結果顯示，兩性嵌段共聚物PBLG₅的治療效果優於PBLG₂₀，而PBLG₂₀的治療效果又優於PBLG₄₀。其次，正對照組小鼠(LPS/GalN誘發急性肝炎，投以生理食鹽水)的肝組織切片結果顯示，細胞質空洞化(HE染劑較難染上顏色，第1行及第2行照片，各為顯微鏡放大100倍及200倍)，且肝臟血管口細胞壞死(第3行及第4行 照片，各為100倍及200倍)。相較之下，以兩性嵌段共聚物PBLG₅、PBLG₂₀、PBLG₄₀)處理的肝組織切片結果顯示，細胞質空洞化與肝臟血管口細胞壞死的情況確實明顯減少。

請參閱圖3B至圖3E，其係顯示在LPS/GalN誘發的小鼠肝炎模式中，本發明數個實施例之兩性嵌段共聚物抑制肝炎相關的轉胺酶活性(圖3B)、細胞激素含量(圖3C)、病理分級(圖3D)及存活率(圖3E)。圖3B至圖3E的圖號＊代表p<0.05，圖號＊＊代表p<0.01，圖號＊＊＊代表p<0.001。

由圖3B至圖3E的結果顯示，兩性嵌段共聚物PBLG₅、PBLG₂₀及PBLG₄₀皆可降低肝炎相關的轉胺酶活性及細胞激素(TNF-α及IL-6)含量，減少病理分級的計分，且提高肝炎小鼠的存活率。

請參閱圖3F至圖3G，其係顯示在LPS/GalN誘發的小鼠肝炎模式中，本發明數個實施例之兩性嵌段共聚物抑制脾臟腫大的結果。圖3F的圖號＊代表p<0.05，圖號＊＊代表p<0.01，圖號＊＊＊代表p<0.001。各組實驗至少三重複。

由圖3F至圖3G的結果顯示，小鼠急性肝炎會引起脾臟的重量變重(圖3F，生理食鹽水組)及尺寸變大(圖3G，生理食鹽水組)，經投予兩性嵌段共聚物PBLG₅、PBLG₂₀及PBLG₄₀後，可明顯降低脾臟重量及尺寸，甚至趨近於正常範圍值。

4.評估兩性嵌段共聚物抑制乾癬的效果

在此實施例中，巨噬細胞株Raw264.7以每孔2×10⁴細胞植入96孔培養盤中，先利用25μM至100μM的兩性嵌段共聚物PBLG₅預處理1小時後，再以IMQ(10μg/mL)處理18小時。之後，收集細胞上清液(cell supernatants)，利用ELISA套組(R&D)檢測TNF-α及IL-23含量，其結果如圖4A至圖4B。另外，將收集所得之細胞溶解產物(cell lysate)利用SDS-PAGE分析後，再利用抗體偵測IMQ引起凋亡蛋白酶原(procaspase)-3及凋亡蛋白酶(caspase)-3等表現量，並以GAPDH作為內部控制組，其結果如圖4C。

請參閱圖4A至圖4C，其係顯示在咪喹莫特(imiquimod；IMQ)誘發巨噬細胞的模式中，本發明一實施例之兩性嵌段共聚物抑制乾癬相關的細胞激素結果，分別包括TNF-α(圖4A)、IL-23(圖4B)、細胞凋亡酶原-3及細胞凋亡酶-3(圖4C)的結果，而圖4C的GAPDH則為內部控制組。

由圖4A至圖4B的結果顯示，IMQ誘發巨噬細胞乾癬的模式中，兩性嵌段共聚物PBLG₅可抑制乾癬相關的細胞激素TNF-α及IL-23的含量，且兩性嵌段共聚物的使用量與抑制細胞激素含量之間具有劑量依存關係。

由圖4C的結果顯示，兩性嵌段共聚物PBLG₅對於IMQ引起乾癬的巨噬細胞具有引起細胞凋亡的功效，且兩性嵌段共聚物的使用量與細胞凋亡酶含量增加之間具 有劑量依存關係，但不引起正常細胞的細胞凋亡。

上述細胞試驗的結果，在乾癬動物模式中可獲得確認。此實施例係利用BALB/c雄性小鼠(8至10週齡)建立乾癬動物模式，其購自國家實驗研究院國家實驗動物中心(台北，台灣)，並依循國立成功大學實驗動物照護及使用委員會訂立的要點及台灣動物保護法的相關規定進行。

BALB/c雄性小鼠以IMQ(每隻小鼠二片耳朵每天共塗13.88mg/kg)誘發乾癬連續5天後，以腹腔注射(intraperitoneal；i.p.)的方式投以兩性嵌段共聚物PBLG₅(20mg/kg或100mg/kg)或檞皮素(50mg/kg)進行處理。正對照組的小鼠在IMQ誘發乾癬後，則投以等量不含藥的生理食鹽水。治療5天後，觀察小鼠耳部皮膚外觀(圖5A)以及乾癬面積暨嚴重性指數(psoriasis area severity index；PASI)(圖5B至圖5D)後，評估兩性嵌段共聚物PBLG₅的療效。

請參閱圖5A至圖5D，其係顯示在IMQ誘發小鼠乾癬的模式中，本發明一實施例之兩性嵌段共聚物對小鼠耳部皮膚外觀(圖5A)以及臨床評分(圖5B至圖5D)的結果。各組實驗至少三重複。IMQ誘發小鼠乾癬10天後，根據PASI評估小鼠耳朵外觀的發紅(erythema；圖5B)、表皮增厚(thickness；圖5C)與脫屑(scaling；圖5D)的嚴重度，其中0代表無症狀，1代表輕微，2代表中度，3代表重度，4代表極重度。

由圖5A至圖5D的結果顯示，相較於乾癬對照 組(IMQ處理，投以生理食鹽水)，投予兩性嵌段共聚物PBLG₅確實可顯著改善乾癬的臨床症狀，且兩性嵌段共聚物的使用量與改善程度之間具有劑量依存關係，確實具有療效。

請參閱圖6A至圖6C係顯示在IMQ誘發小鼠乾癬的模式中，本發明一實施例之兩性嵌段共聚物抑制乾癬症狀之耳朵皮膚組織染色切片圖(圖6A)、耳朵表皮厚度(圖6B)及耳朵表皮層數(圖6C)的直條圖。

由圖6A至圖6C的結果顯示，投予兩性嵌段共聚物PBLG₅確實可顯著改善乾癬引起表皮增厚的臨床症狀，且兩性嵌段共聚物的使用量與改善程度之間具有劑量依存關係，確實具有療效。

5.評估兩性嵌段共聚物抑制HuR與乾癬相關訊息傳遞路徑的效果

請參閱圖7A，其係顯示在IMQ誘發小鼠乾癬的模式中，HuR蛋白分布之皮膚免疫組織染色切片圖。

由圖7A的結果顯示，相較於乾癬對照組(IMQ處理，投以生理食鹽水)，投予100mg/kg之兩性嵌段共聚物PBLG₅可顯著抑制乾癬小鼠皮膚中HuR蛋白的表現量。

請參閱圖7B至圖7C，其係顯示在IMQ誘發小鼠乾癬的模式中，本發明一實施例之兩性嵌段共聚物抑制乾癬相關細胞激素VEGF(圖7B)及IL-23(圖7C)的直條圖。各組實驗至少三重複。

由7B至圖7C的結果顯示，相較於乾癬對照組(IMQ處理，投以生理食鹽水)，投予兩性嵌段共聚物PBLG₅確實可顯著抑制VEGF及IL-23的表現量，且兩性嵌段共聚物的使用量與抑制VEGF及IL-23的程度之間具有劑量依存關係，確實具有療效。

請參閱圖7D，其係顯示在IMQ誘發小鼠乾癬的模式中，以PEG抗體偵測本發明一實施例之兩性嵌段共聚物在皮膚、肝臟及脾臟分布的皮膚免疫組織染色切片圖。

由圖7D的結果顯示，兩性嵌段共聚物PBLG₅可分布至皮膚、肝臟及脾臟。

上述IMQ誘發乾癬的小鼠血液樣本可利用賴氏(Reitman-Frankel)法檢測血清ALT與AST的活性，其結果如圖7E及圖7F所示。

請參閱圖7E及圖7F，其係顯示在IMQ誘發小鼠乾癬的模式中，本發明一實施例之兩性嵌段共聚物抑制轉胺酶活性的結果。

由圖7E及圖7F的結果顯示，相較於乾癬對照組(IMQ處理，投以生理食鹽水)，兩性嵌段共聚物PBLG₅可降低轉胺酶ALT(圖7E)與AST(圖7F)的活性。

請參閱圖8及表3。圖8係顯示在IMQ誘發小鼠乾癬的模式中，本發明一實施例之兩性嵌段共聚物抑制耳朵皮膚之細胞激素蛋白質矩陣結果。此實施例係將乾癬小鼠耳朵皮膚蛋白質溶解產物(ear skin protein lysate)，使用市售的細胞激素蛋白質矩陣(cytokine protein array；R&D) 進行分析，每個蛋白質溶解產物是由三個小鼠耳朵皮膚取得。圖8左下區域為投予生理食鹽水的各組，圖8右下區域為投予兩性嵌段共聚物PBLG₅的各組，綠框代表正對照組(IMQ誘發，投予生理食鹽水)，而紅框則代表負對照組(未經IMQ誘發，投予生理食鹽水)。表3係顯示圖8之細胞激素利用軟體ImageJ及光密度法度量點樣(dots)的濃度，再以正對照組進行標準化後所得的結果，其中p值小於0.05者以粗斜體表示，代表對應的蛋白質具有統計上的顯著差異性。

由圖8及表3的結果顯示，相較於乾癬對照組 (IMQ處理，投以生理食鹽水)，兩性嵌段共聚物PBLG₅可顯著降低CXCL13、CD54、IL-1α、IL-1β、IL-1ra、IL-16、CCL3、CXCL12、CXCL1、M-CSF、CCL2、TREM-1等表現量。

由上述結果顯示，本發明之兩性嵌段共聚物可專一性結合至HuR蛋白的核醣核酸結合區，又可干擾、減少及/或阻礙RNA或抗HuR的抗體結合至HuR蛋白，確實有潛力應用於HuR相關疾病的醫藥組成物，例如治療乾癬、肝炎等藥物。

綜言之，本發明雖以特定結構的兩性嵌段共聚物、特定的劑型、或特定的評估方式作為例示，說明本發明之兩性嵌段共聚物、含彼之奈米粒子及醫藥組成物暨其用於抑制核醣核酸結合至人類抗原R蛋白的方法，惟本發明所屬技術領域中任何具有通常知識者可知，本發明並不限於此，在不脫離本發明之精神和範圍內，本發明亦可使用其他結構的兩性嵌段共聚物、其他劑型或其他的評估方式進行。舉例而言，本發明所屬技術領域中任何具有通常知識者可針對欲應用的疾病及/或症狀，將本發明的兩性嵌段共聚物及/或奈米粒子，以20%至80%之有效劑量，添加於現有的外用藥物劑型、口服藥物劑型或注射藥物劑型中，抑制RNA或抗HuR的抗體結合至HuR蛋白，進而應用於HuR相關疾病的醫藥組成物。

由上述實施例可知，本發明之兩性嵌段共聚 物、含彼之奈米粒子及醫藥組成物暨其用於抑制核醣核酸結合至人類抗原R蛋白的方法，其優點在於此兩性嵌段共聚物係專一性結合至人類抗原R蛋白的核醣核酸結合區，有效抑制核醣核酸結合至人類抗原R蛋白，進而應用於HuR相關疾病的醫藥組成物。

雖然本發明已以數個實施例揭露如上，然其並非用以限定本發明，在本發明所屬技術領域中任何具有通常知識者，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可作各種之更動與潤飾，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。

Claims (6)

1. 一種兩性嵌段共聚物，具有如下式(I-1)所示之分子結構：

   

   其中該m為45至245的整數，該n為5至20的整數，且該兩性嵌段共聚物係專一性結合至人類抗原R蛋白的一核醣核酸結合區。
2. 如申請專利範圍第1項所述之兩性嵌段共聚物，其中該m為45至112的整數，且該n為5至8的整數。
3. 一種奈米粒子，包含如申請專利範圍第1項至第2項任一項所述之兩性嵌段共聚物，其中該奈米粒子的平均粒徑為50至500奈米。
4. 一種用於抑制人類抗原R蛋白與核醣核酸結合的醫藥組成物，包含：如申請專利範圍第3項所述之奈米粒子；以及一醫藥學上可接受的載劑，且其中基於該醫藥組成物之總含量為100%計，該奈米粒子的含量為20%至80%。
5. 如申請專利範圍第4項所述之醫藥組成物，其中該醫藥組成物為一口服醫藥組成物或一外用醫藥組成物。
6. 一種奈米粒子用於製備抑制人類抗原R蛋白與核醣核酸結合的醫藥組成物之用途，其中該醫藥組成物以如申請專利範圍第3項所述之奈米粒子為一有效成分，且基於該醫藥組成物之總含量為100%計，該奈米粒子的含量為20%至80%，藉此專一性結合至該人類抗原R蛋白的一核醣核酸結合區。

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