TWI697332B - 可活化能量、保護修復及抗皺的牛樟芽胚組織萃取物 - Google Patents

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Abstract

一種牛樟芽胚組織萃取物之萃取方法，步驟有：超音波萃取；以及過濾及去除溶劑。藉由整體於非高溫下進行，可避免低沸點與有效物質揮發及保持芽胚組織之生長活性，所得的萃取物之總多酚及總黃酮含量高，添加於化妝保養品中，具活化能量、保護修護、抗皺、抗氧化、抗發炎、美白及抗老化等功效。

Description

可活化能量、保護修復及抗皺的牛樟芽胚組織萃取物
本發明有關植物萃取方法，特別是指應用於牛樟芽胚組織萃取物之萃取方法，所製成的萃取物可作為醫藥品、化妝品、保養品、香氛或人體清潔用品等產品的原料者。
牛樟(學名：Cinnamomum kanehirae Hayata)为樟科樟屬下的一個種，又稱「樟牛」。據調查，牛樟為台灣特有種，在全島海拔400至2000公尺的山林中生長。在台灣，牛樟有三大集中地：苗栗南庄大湖一帶、南投東埔和社一帶與台東關山富里一帶。牛樟邊材呈淡黃褐色，心材呈暗紅褐色，質略柔軟，常用於雕刻、製造器具、或傢俱上。此外，牛樟枝葉亦可加以蒸餾而得牛樟精油。由此可知，如何開發牛樟的新應用確實為從事相關技術領域人士積極解決的課題之一。
由於牛樟的莖節部位具有優異的生長機能，通常此部位會成為一芽點，此一芽點的細胞擁有快速分裂和分化以產生新芽的特性，並可使芽軸不斷伸長，猶如動物的幹細胞再生功能，如能擷取牛樟莖節芽點細胞進行萃取，所得的萃取物活性成份含量與活性效益高，然而目前牛樟相關的應用技術尚未見有針對牛樟開花株的莖節部位進行萃取或提煉等技術；故本案發明人提供一種牛樟芽點切割及萃取技術，以創造牛樟的新應 用範疇，並獲得活性成份含量高且效果佳之牛樟芽點萃取物。
於是，本發明之一目的即在提供一種牛樟開花株莖節芽點之萃取方法及其萃取物，主要提供牛樟莖節芽點的培育、切割及萃取的完整流程，且僅擷取並收集牛樟最具有活性成份的莖節芽點之再生植物細胞來進行萃取作業，所製成的萃取物之總多酚及總黃酮含量高，添加於化妝保養品產品中，具有活化能量、保護修護、抗皺、抗氧化、抗發炎、美白及抗老化等功效。
本發明之另一目的即在提供一種牛樟開花株莖節芽點之萃取方法及其萃取物，以開花株其莖節芽點部位進行誘導培育，使長出再生新側芽後，且切割取得新側芽之新生植物組織，此一莖節芽點誘導培育方式可獲得大量的新生植物組織，而可符合大量生產的需求。
本發明之再一目的即在提供一種牛樟開花株莖節芽點之萃取方法及其萃取物，萃取方法於非高溫下操作，以減少溫度所造成的熱損失，亦可避免低沸點與有效物質揮發及保持芽點組織之生長活性。
本發明之更一目的即在提供一種牛樟開花株莖節芽點之萃取方法及其萃取物，經超音波萃取所製成的半成品萃取液，再進行過濾及去除溶劑作業，可獲得活性及穩定性高的萃取物。
有鑑於此，本發明所揭露牛樟芽胚組織萃取物之萃取方法，其步驟為：(a)超音波萃取：將芽胚組織秤取100公克，放入超音波萃取設備，於低溫下，以芽胚組織重量5倍量的純水為溶劑將芽胚組織覆蓋浸泡，以製成半成品萃取液；以及(b)過濾及去除溶劑作業：將半成品萃取液經由抽真空之過濾作業後，再利用減壓濃縮機將半成品萃取液進行去除溶劑 作業，以製成萃取物。
藉由上述步驟，整個流程於非高溫下進行，可避免低沸點與有效物質揮發及保持芽胚組織之生長活性，且所製成的萃取物之總多酚及總黃酮含量高，添加於化妝保養品產品中，具有活化能量、保護修護、抗皺、抗氧化、抗發炎、美白及抗老化等功效。
此外，本發明所揭露上述製成萃取物的用途為用於製備具活化能量、保護修護、抗皺、抗氧化、抗發炎、美白及抗老化功效的組合物，而此組合物可為醫藥品、化妝品、保養品、香氛或人體清潔用品。
另外，本發明所揭露上述製成萃取物的用途為用於製備具促進皮膚細胞粒線體再生的組合物，而此組合物可為醫藥品、化妝品、保養品、香氛或人體清潔用品。
圖1為一流程示意圖，說明本發明所揭露牛樟開花株莖節芽點之萃取方法。
圖2為一DNA膠體電泳結果圖，說明本發明所揭露之萃取物對質體DNA型態的影響。
圖3為一螢光偵測結果圖，說明本發明所揭露之萃取物對光產物CPD生成的影響。
請參照圖1，本發明所提供之一種牛樟開花株莖節芽點之萃取方法，其步驟依序為：(a)誘導再生新側芽；(b)切除梗芽並擷取新側芽；(c)去除壁膜；(d)收集新生植物組織；(e)超音波萃取；(f)過濾及 去除溶劑作業；及(g)製成萃取物；其中：
步驟(a)：將牛樟其開花株的莖節部位之梗芽，於梗芽側邊進行切割，以莖節為單位切出若干段梗芽，各梗芽於預定時間內所切割的部位將自行癒合，消毒後種入進行培育作業，使之長出新側芽；培育作業以蘋果、馬鈴薯、香蕉、胡蘿蔔為培養基；培養溫度為15至20℃；培養時間約為4至4.5週。
步驟(b)：將梗芽切除並擷取新側芽後，於兩片新側芽交接的位置往下0.1cm之部位的芽點組織，切成小片段。
步驟(c)：將各小片段之芽點組織去除壁膜，成為一新生植物組織，其再生的途徑為經由芽等器官形成新生植物胚胎；新生植物組織呈形狀一致的圓形。
步驟(d)：收集預設數量芽點新側芽之新生植物組織。
步驟(e)：將收集之新生植物組織秤取100公克，放入超音波萃取設備，於低溫下，以新生植物組織重量5倍量的逆滲透純水或滅菌之去離子水為溶劑將新生植物組織覆蓋浸泡，置入超音波設備內，水溫設定於50至60℃，功率設定為300瓦，時間設定為40分鐘，以超聲波震盪對芽點之新生植物組織進行萃取作業，以製成半成品萃取液。
步驟(f)：先將半成品萃取液經由抽真空之過濾作業；再利用減壓濃縮機以45℃加熱，以旋轉速度80轉，將半成品萃取液減壓濃縮，進行去除溶劑作業；且重覆此一去除溶劑作業1至4次，以完整萃取。
步驟(g)：製成之萃取物具有總多酚及總黃酮等成份；所製成之萃取物，約5.4公克，萃取率約5.4%；所製成之萃取物內含總多酚，每 克萃取物中所含沒食子酸(gallic acid)毫克數約為25至40；所製成之萃取物，以芸香苷(rutin)的標準曲線來計算，每克萃取物中含類黃酮化合物的量約為120至140mg；所製成之萃取物，可於冷凍乾燥後於溫度-20℃下保存冷藏；且所製成之萃取物可應用於醫藥品、化妝品、保養品、香精、香水或人體清潔用品等產品的原料。
藉由上述步驟，可提供針對牛樟芽點的培育、切割及萃取的完整流程，使整個流程於非高溫下進行，可避免低沸點與有效物質揮發及保持芽點組織之生長活性，且所製成的萃取物之總多酚及總黃酮含量高，添加於化妝保養產品中，具有活化能量、保護修護、抗皺、抗氧化、抗發炎、美白及抗老化等功效，同時此一芽點誘導培育方式可獲得大量的新生植物組織，而可因應大量生產的需求，並且具有高經濟價值與高實用性者。
為進一步瞭解本發明技術特徵、運用技術手段及所預期達成之功效，茲將本發明使用方式加以說明敘述如下：
實施例1
本發明之牛樟芽點萃取技術，主要針對牛樟的莖節部位具有優異生長機能之芽點部位，利用此一芽點的細胞擁有快速分裂和分化以產生新芽並可使芽軸不斷伸長的特性，擁有高生命力及活性的特質，且牛樟莖節芽點其再生的方式為經由芽等器官形成新生植物胚胎，猶如動物幹細胞的再生功能；藉此建立從芽點的培育、切割到萃取的一整套流程。再者，本發明可應用於所有品種的牛樟，以獲得活性成份高的萃取物。
本發明之牛樟芽點培育方法，請參照步驟(a)之誘導再生新側芽，本發明之誘導方式依開花株的莖節部位，先切出若干段梗芽，再 進行培育繁殖作業，約4至4.5週後，即能製成新側芽。
本發明之牛樟芽點切割擷取方法，請參照步驟(b)之切除梗芽並擷取新側芽及(c)之去除壁膜，將新側芽切除梗芽後，再除去壁膜，則可得圓形之新生植物組織，本發明只使用此一新生植物組織進行萃取。
本發明之牛樟芽點萃取方法，請參照步驟(e)超音波萃取，將前述所取的之新生植物組織，利用超音波高頻恆速震盪、疏密有秩的特性，將超音波振動對液體瞬間造成「增壓」及「減壓」，推動介質，產生空穴效應(cavitation)。當萃取液中無數細小的真空氣泡爆裂時，產生瞬間高溫及強大衝擊力，可將待萃取物之成份分離，而達到萃取效果。
經前述流程所獲得之萃取物，其總黃酮含量測定方法如下：黃酮類化合物在鹼性的環境下可與三氯化鋁(aluminum chloride)螯合生成紅色螯合物，在波長510nm具有特定吸光值。取1μL萃取物各別加入3μL的5%NaNO2溶液反應6分鐘，再加入3μL的10%AlCl3溶液反應6分鐘，最後加入40μL的4%NaOH溶液和4μL二次水反應15分鐘，以酵素免疫分析儀檢測510nm吸光值。此結果顯示1g的牛樟芽點萃取物含有相當於126.5mg芸香苷。
經前述流程所獲得之萃取物，其總多酚含量測定方法如下：福林酚試劑(Folin-Ciocalteu’s phenol reagent)中的磷鉬酸(phosphomolybdic acid)複合物會受苯酚(phenol)還原成鉬，試劑則由金黃色變成藍綠色，可用來定量樣品中的酚含量。取1μL萃取物各別加入25μL稀釋10倍的福林酚試劑反應5分鐘，再加入20μL的Na2CO3溶液和50μL二次水反應1小時，以酵素免疫分析儀檢測700nm吸光值。以不同濃度沒食子酸作為標準品製成檢量線。此結果顯示1g的牛樟芽點萃取物含有相當於31.6mg沒食子酸。
本發明之牛樟芽點萃取方法，具有下列功效：
一、本發明主要提供針對牛樟芽點的培育、切割及萃取的完整流程，且僅擷取並收集牛樟最具有活性成份的莖節芽點之再生植物組織，來進行萃取作業，所製成的萃取物活性成分之總多酚及總黃酮含量高，品質優。
二、因本發明之萃取物具有優異的活性成份含量及品質，因此將本發明之萃取物添加於化妝保養品產品中，具有活化能量、保護修護、抗皺、抗氧化、抗發炎、美白及抗老化等功效。
三、本發明以芽點部位進行誘導培育，使長出再生新側芽後，且切割取得新側芽之植物新生組織，此一莖節芽點誘導培育方式可獲得大量的新生植物組織，而可因應大量生產的需求。
四、本發明於芽點部位先進行培育以大量繁殖新側芽後，再切割出新生植物組織，此一莖節芽點切割作業可去除其他莖梗葉部位，只使用具有較高生長活性含量的新生植物組織進行萃取，故具有去蕪存菁的效果，進而可提升萃取物品質。
五、本發明之開花芽點之萃取方法，為於非高溫下操作，其萃取過程中溫度約50至60℃，以減少溫度所造成的熱損失，亦可避免低沸點與有效物質揮發及保持芽點組織之生長活性，故可維持新生植物組織的活性含量。
六、本發明以超音波水萃取方法，且只使用逆滲透純水，未有其他溶劑，故能改良傳統溶劑萃取方法成本高且萃取過程危險的缺點，又可減少處理時間和溶劑使用量並得到高產率。
七、本發明經超音波萃取所製成的半成品萃取液，再進行過濾及去除溶劑作業，因本發明所使用的溶劑為無毒無菌的純水，因此不會有使用醇類或醇類水溶液為溶劑之萃取方式的安全性問題，且本發明經此過濾及去除溶劑作業，可獲得活性高及穩定性佳的萃取物。
實施例2
本發明之牛樟芽點萃取技術所製成之萃取物，進行與「人體皮膚細胞安全性相關試驗」，其試驗方式為「細胞存活度試驗」，試驗方法詳述如下：人類皮膚角質株化細胞HaCaT及人類上皮層纖維母細胞Hs68以1.0x105個/mL密度種植於96孔盤中，然後在37℃保持溼度之5%二氧化碳濃度下培養至少24小時。之後，將不同濃度牛樟芽點萃取物加入培養24小時後，每孔細胞加入10μL的5mg/mL MTT溶液(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)並於37℃作用4小時後，移除上清液，再加入100μL之DMSO溶解formazan，震盪10分鐘後，測量其波長570nm的吸光值以計算細胞存活率。此結果顯示牛樟芽點萃取物(0.01、0.05、0.1、0.5mg/mL)作用人類皮膚角質株化細胞HaCaT後，細胞存活度分別為115.1±2.6%、116.2±1.8%、117.1±0.5%、87.1±0.3%。結果顯示0.01至0.1mg/mL牛樟芽點萃取物對人類皮膚角質株化細胞無毒性，且具些微的促進增生作用。
實施例3
針對牛樟芽點之活性評估，本發明亦建立相關測試方法，包括「粒線體再生試驗」、「粒線體活化因子JC-1生成試驗」、「保護因紫外線及氧化傷害而造成的DNA損傷試驗」、「偵測DNA損傷之環丁嘧啶二聚體 (cyclobutane pyrimidine dimers，CPD)生成量試驗」、「皮膚膠原蛋白生成試驗」、「DPPH(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl)自由基清除試驗」、「抑制發炎因子一氧化氮活性試驗」，茲分別詳細說明如下：本發明之牛樟芽點萃取技術所製成之萃取物，進行「粒線體再生試驗」，其試驗方式如下：人類皮膚角質株化細胞HaCaT以1×104個細胞/孔的密度培養於24孔盤，在37℃及5%CO2培養箱中培養至少24小時，加入不同濃度牛樟芽點萃取物處理，置入培養箱作用24小時。達反應時間後，移除培養液，加入PBS清洗，加入paraforaldehyde固定細胞，使用1%Triton X-100作用5分鐘，接著使用PBS清洗細胞，加入mitoview染劑及用Hoechst 33342 staining solution染細胞核(作為定量細胞數)，使用螢光免疫分析儀(BioTek，SynergyTM2，USA)測定粒線體(綠色，激發光：490nm，發射光：523nm)及細胞核螢光(藍色，激發光：346nm，發射光：460nm)表現；(3)粒線體表現計算公式如下：
Figure 107144527-A0305-02-0010-1
人類粒線體在體內有許多功能，最重要的功能為產生能量；然而，粒線體會隨著年齡增加逐漸減少，因此粒線體質量與健康和老化有極大關係。如結果所示，人類皮膚角質株化細胞HaCaT經牛樟芽點(0.05和0.1mg/mL)作用24小時後，粒線體質量分別為106.2±1.5%和108.5±1.7%。結果顯示牛樟芽點可促進人類皮膚角質株化細胞之粒線體再生。
本發明之牛樟芽點萃取技術所製成之萃取物，進行「粒線體活化因子JC-1生成試驗」，其試驗方式如下：細胞以1×105個細胞/mL的密度 種在24孔盤中24小時後加入萃取物培養，至培養時間24小時後移除上清液，PBS清洗後，置換新鮮培養液，加入5mg/mL的JC-1染劑於室溫下反應一小時。移除培養液後，先以PBS清洗，再加入定量PBS，後於免疫酵素分析儀測定螢光量。JC-1為帶正電的染劑，與健康細胞的粒線體上的負電荷結合後會發出橘紅色光，而細胞受損會導致粒線體膜電位下降，使JC-1染劑無法被吸引則呈現綠光，因此數據以橘光和綠光的比例計算，比例越高表示細胞越健康。
依此結果，牛樟芽點(0.01、0.05和0.1mg/mL)作用後，JC-1表現(R/G值)分別為1.0、1.2和1.3。此結果顯示牛樟芽點可促進粒線體活化因子JC-1之表現。
本發明之牛樟芽點萃取技術所製成之萃取物，進行「保護因紫外線及氧化傷害而造成的DNA損傷試驗」，其試驗方式如下：將質體DNApUC119依序加入萃取物、PBS、0.5mM的FeSO4溶液、1mM的H2O2溶液輕輕混合均勻後，先進行20mJ/cm2 UV照射然後在37℃反應1小時，接著將反應完的樣品加入適量的6xLoading dye，加至凝膠中的小孔，進行100V電泳。待DNA跑至適當距離後取出凝膠，以冷光照相系統(Avegene-SPOT)拍攝並以Image J電腦軟體分析pUC119的supercoiled form(SC)、linear form(LC)和open circular(OC)的表現。
如圖2所示，質體可受牛樟芽點萃取物(0.05、0.1、0.25、0.5、1mg/mL)保護，保有supercoiled form，免於受到氧化傷害及經UV傷害，證明萃取物具DNA保護效能，具有保護質體DNA不受自由基及UV傷害的功效。經UV及氧化傷害質體後supercoiled form定量為7.6%；而經牛樟芽 點萃取物(0.5、1mg/mL)作用質體、及經UV及氧化傷害質體後supercoiled form定量分別為43.2%、59.6%，顯示質體受到萃取物保護，免於受到UV及氧化傷害35.6%和52.0%之效能。
本發明之牛樟芽點萃取技術所製成之萃取物，進行「偵測DNA損傷之環丁嘧啶二聚體生成量試驗」，其試驗方式如下：將1.5x105個細胞/mL的密量培養在24孔盤中24小時後，加入萃取物培養4小時，抽乾上清液進行50mJ/cm2 UVB照射，再加入含有萃取物之無血清培養液於培養箱中反應4小時，達反應時間後，移除上清液，PBS清洗，加入500μL的4%甲醛溶液，放置室溫10分鐘進行固定。接著移除甲醛，以PBS清洗兩次，加入500μL的0.5%Triton X-100在冰上反應5分鐘後移除，以PBS清洗兩次。加入1mL的2M HCl溶液室溫下作用30分鐘，使細胞內DNA變性，再以PBS清洗五次。之後加入1mL的20%FBS在37℃下30分鐘進行blocking，以防非特異性蛋白結合，達時間後，再以PBS清洗五次。加入70μL的CPD(1：100)於37℃下均勻搖晃作用30分鐘，再以PBS清洗五次。最後加入等量PBS，於激發光530nm，發射光630nm以酵素免疫分析儀測其吸光值。之後加入70μL的Hoechst 33342 staining solution(10μg/mL，1：250)繼續搖晃5分鐘。於顯微鏡下觀察確定染進細胞核內，立即以PBS清洗5次，利用螢光顯微鏡觀察螢光表現。
CPD為一種光產物，可利用螢光偵測之特性進行試驗。如圖3所示，經過UVB照射後細胞受到傷害而碎裂並產生光產物堆積，CPD誘發為147.7%。皮膚細胞經牛樟芽點萃取物(0.05、0.1mg/mL)作用再經UVB照射後，僅有些許光產物產生，CPD誘發為82.5%和74.5%。此結果顯示牛 樟芽點萃取物具有保護細胞免於UVB傷害之效能。
本發明之牛樟芽點萃取技術所製成之萃取物，進行「皮膚膠原蛋白生成試驗」，其試驗方式如下：將3T3L-1細胞以2×105個細胞/mL密度培養在3公分盤中24小時後，移除上清液再加入含有不同濃度牛樟芽點萃取物之無血清培養液培養48小時，PBS清洗後，刮除細胞，離心1200rpm、5分鐘，再去除上清液。利用Sircol soluble collagen collagne assay kit進行膠原蛋白測定，為先將100μL細胞液混合1mL的sircol dye reagent，再於室溫下均勻搖晃30分鐘，再離心12000rpm、10分鐘，直接倒掉上清液，再加入750μL ice-cold acid-salt wash reagent，再離心12000rpm、10分鐘，將dye reagent完全去除乾淨。之後加入250μL的alkali reagent混合均勻，取100μL至96孔盤，在555nm下以酵素免疫分析儀測吸光值。
膠原蛋白為保持肌膚彈性及抗皺的重要因子，其合成量受到年齡的影響，因此若能適時促進膠原蛋白之合成量，可避免肌膚生成皺紋、失去彈力光澤的情形。依此結果，經過牛樟芽點萃取物(0.05和0.1mg/mL)作用後，可促進纖維母細胞中膠原蛋白的生成量約108.4±1.4%及117.3±0.1%。此結果顯示牛樟芽點萃取物對於促進膠原蛋白生成量具有優異的效果。
本發明之牛樟芽點萃取技術所製成之萃取物，進行「DPPH(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl)自由基清除試驗」，其試驗方式如下：將牛樟芽點萃取物配置成不同濃度，分別加入90μL新鮮配置的100μM的DPPH自由基乙醇溶液後一起添加至96孔盤中反應，以酵素免疫分析儀檢測517nm吸光值。試驗標準品為AA，DPPH自由基清除率公式如下：
Figure 107144527-A0305-02-0014-2
依此結果，牛樟芽點(0.05、0.1、0.5和1.0mg/mL)清除DPPH自由基能力分別為68.7±1.2%、81.9±0.2%、96.3±0.8%和98.2±1.2%。
本發明之牛樟芽點萃取技術所製成之萃取物，進行「抑制發炎因子一氧化氮活性試驗」，其試驗方式如下：取2μL牛樟芽點萃取物(0.05、0.1和0.5mg/mL)各別加入98μL的25mM硝普鈉(sodium nitroprusside，SNP)SNP反應120分鐘，之後加入100μL的Griess reagent反應10分鐘，以酵素免疫分析儀檢測546nm吸光值。
SNP本身是一氧化氮捐獻體的一種，與氧反應會形成亞硝酸(nitrite)，亞硝酸再與Griess reagent反應會變成粉紅色溶液，於波長546nm具有特定吸光值。若樣品能抑制一氧化氮生成的速率而減少亞硝酸產生，其吸光值會降低；吸光值愈低，表示樣品清除一氧化氮自由基的能力越強。依上述分析結果，牛樟芽點萃取物(0.05、0.1和0.5mg/mL)清除一氧化氮自由基能力分別為20.7±3.1%、23.8±1.4%和32.3±3.0%。
綜合上述，本發明係提供一種針對牛樟芽點切割及萃取技術，從培育、切割及萃取的完整流程，其利用牛樟芽點細胞會不斷分裂和分化的再生特性，擁有高生命力及活性的特質，於非高溫下進行，可避免低沸點與有效物質揮發及保持芽點組織之生長活性，且所製成的萃取物之總多酚及總黃酮含量高、品質佳，使用於化妝保養產品中，可提升活化能量、保護修護、抗皺、抗氧化、抗發炎、美白及抗老化等功效，且芽點誘導培育方式可因應大量生產的需求，又配合過濾及去除溶劑作業可獲得活 性及穩定性高的萃取物，據以獲致一實用性高與經濟價值高之牛樟活性萃取物，俾使整體確具產業實用性及成本效益，且其構成又未曾見於諸書刊或公開使用，誠符合發明專利申請要件，懇請 鈞局明鑑，早日准予專利，至為感禱。
需陳明者，以上所述乃是本發明之具體實施例及所運用之技術原理，若依本發明之構想所作之改變，其所產生之功能作用仍未超出說明書及圖式所涵蓋之精神時，均應在本發明之範圍內，合予陳明。

Claims (8)

  1. 一種牛樟芽胚組織萃取物的用途，係用於製備皮膚保護修護、皮膚抗皺、皮膚抗氧化、皮膚抗發炎、及皮膚抗老化的醫藥組合物，其中該牛樟芽胚組織萃取物的製備方法包含：(a)超音波萃取：將該牛樟芽胚組織放入超音波萃取設備，並於低溫下，以該牛樟芽胚組織重量5倍量的純水為溶劑將該牛樟芽胚組織覆蓋浸泡，以製成半成品萃取液；以及(b)過濾及去除溶劑作業：將該半成品萃取液經由抽真空的過濾作業後，利用減壓濃縮機將該半成品萃取液進行去除溶劑作業，以製成該牛樟芽胚組織萃取物。
  2. 如請求項第1項所述之用途，其中該牛樟芽胚組織為牛樟生長點新側芽的新生植物組織，而該牛樟生長點新側芽之新生植物組織的取得方法包含：(i)誘導再生新側芽：將該牛樟開花株之莖節部位的梗芽切出複數段梗芽，並進行培育作業使之長出新側芽；(ii)切除梗芽並擷取新側芽：將該梗芽切除並擷取該新側芽後，取出生長點組織；(iii)去除壁膜：將各小片段之該生長點組織去除壁膜，成為該牛樟生長點新側芽的新生植物組織；以及(iv)收集新生植物組織：收集預設數量之該牛樟生長點新側芽的新生植物組織。
  3. 如請求項第2項所述之用途，其中該誘導再生新側芽步驟中的培育作業以蘋果、馬鈴薯、香蕉、或胡蘿蔔為培養基，培養溫度為15至20℃，培養 時間為4至4.5週。
  4. 如請求項第1項所述之用途，其中每克該萃取物中沒食子酸(gallic acid)的含量為25至40mg，且以芸香苷(rutin)的標準曲線來計算，每克該萃取物中類黃酮化合物的含量為120至140mg。
  5. 一種牛樟芽胚組織萃取物的用途，係用於製備促進皮膚細胞粒線體再生的醫藥組合物，其中該牛樟芽胚組織萃取物的製備方法包含：(a)超音波萃取：將該牛樟芽胚組織放入超音波萃取設備，並於低溫下，以該牛樟芽胚組織重量5倍量的純水為溶劑將該牛樟芽胚組織覆蓋浸泡，以製成半成品萃取液；以及(b)過濾及去除溶劑作業：將該半成品萃取液經由抽真空的過濾作業後，利用減壓濃縮機將該半成品萃取液進行去除溶劑作業，以製成該牛樟芽胚組織萃取物。
  6. 如請求項第5項所述之用途，其中該牛樟芽胚組織為牛樟生長點新側芽的新生植物組織，而該牛樟生長點新側芽之新生植物組織的取得方法包含：(i)誘導再生新側芽：將該牛樟開花株之莖節部位的梗芽切出複數段梗芽，並進行培育作業使之長出新側芽；(ii)切除梗芽並擷取新側芽：將該梗芽切除並擷取該新側芽後，取出生長點組織；(iii)去除壁膜：將各小片段之該生長點組織去除壁膜，成為該牛樟生長點新側芽的新生植物組織；以及(iv)收集新生植物組織：收集預設數量之該牛樟生長點新側芽的新生植物組織。
  7. 如請求項第6項所述之用途，其中該誘導再生新側芽步驟中的培育作業以蘋果、馬鈴薯、香蕉、或胡蘿蔔為培養基，培養溫度為15至20℃，培養時間為4至4.5週。
  8. 如請求項第5項所述之用途，其中每克該萃取物中沒食子酸(gallic acid)的含量為25至40mg，且以芸香苷(rutin)的標準曲線來計算，每克該萃取物中類黃酮化合物的含量為120至140mg。
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