TWI682177B

TWI682177B - 蝦過敏原的用途及蝦過敏的診斷方法

Info

Publication number: TWI682177B
Application number: TW107140835A
Authority: TW
Inventors: 余旭勝; 李志宏; 田育彰; 吳佳晴; 余維泰; 聖文黃
Original assignee: 國立屏東科技大學
Priority date: 2018-11-16
Filing date: 2018-11-16
Publication date: 2020-01-11
Also published as: TW202020456A

Abstract

一種蝦過敏原的用途，係用以診斷一受試者是否具有對蝦過敏的可能性，其中，該蝦過敏原為丙酮酸激酶，且具有如SEQ ID NO：1所示之胺基酸序列。本發明另關於藉由該蝦過敏原診斷受試者是否對蝦過敏的蝦過敏的診斷方法。

Description

蝦過敏原的用途及蝦過敏的診斷方法

本發明係關於一種過敏原的用途，尤其是一種診斷受試者是否對蝦過敏的蝦過敏原的用途。本發明另關於藉由該蝦過敏原診斷受試者是否對蝦過敏的蝦過敏的診斷方法。

食物過敏(food allergy)是食物安全中的一個重要的議題，其可能會造成發癢、舌頭腫脹、嘔吐、腹瀉、蕁麻疹、呼吸困難或低血壓等症狀。一般而言，只能夠藉由減少與過敏原接觸的機會，來預防食物過敏的發生，而在台灣，蝦蟹類為最主要的食物過敏原，有鑑於此，若是能夠提供一種蝦過敏原，藉此能夠用以診斷一受試者是否具有對蝦過敏的可能性，確實能夠提供該受試者飲食生活的參考，以提升國人的生活品質。

為解決上述問題，本發明的目的是提供一種蝦過敏原的用途，係用以診斷受試者是否對蝦過敏者。

本發明的另一目的是提供一種蝦過敏的診斷方法，係藉由前述蝦過敏原診斷受試者是否對蝦過敏者。

本發明的蝦過敏原的用途，係用以診斷一受試者是否具有對蝦過敏的可能性，其中，該蝦過敏原為丙酮酸激酶，且具有如SEQ ID NO：1所示之胺基酸序列。

據此，本發明的蝦過敏原的用途，係藉由該蝦過敏原能夠與對蝦過敏的患者的免疫球蛋白E共同形成該複合物之特性，進而能夠應用於診斷該受試者是否為對蝦過敏的患者，為本發明之功效。

本發明的蝦過敏的診斷方法，包含：自一受試者取得一血清樣品；及使該血清樣品於體外接觸一蝦過敏原，該蝦過敏原為丙酮酸激酶，且具有如SEQ ID NO：1所示之胺基酸序列；其中，若該血清樣品中存在一免疫球蛋白E，且該免疫球蛋白E能夠與該蝦過敏原共同形成一複合物，則表示該受試者具有對蝦過敏的可能性。

據此，本發明的蝦過敏的診斷方法，係藉由使用如上述之蝦過敏原，進而能夠精確地診斷該受試者是否為對蝦過敏的患者，為本發明之功效。

〔第1圖〕十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺凝膠電泳分析結果。

〔第2a圖〕以質譜法分析之蛋白質序列之一。

〔第2b圖〕以質譜法分析之蛋白質序列之二。

為讓本發明之上述及其他目的、特徵及優點能更明顯易懂，下文特舉本發明之較佳實施例，並配合所附圖式，作詳細說明如下：本發明之蝦過敏原係為蝦的丙酮酸激酶(pyruvate kinase)，其具有如SEQ ID NO：1所示的胺基酸序列，藉由該蝦過敏原具有能夠與對蝦過敏的患者的免疫球蛋白E共同形成一複合物之特性，因此能夠應用於一蝦過敏的診斷方法，藉此診斷一受試者是否為對蝦過敏的患者。

詳而言之，於該蝦過敏的診斷方法中，係可以自該受試者取得一待測樣品，該待測樣品可以為一血清樣品。

接著，可以使該待測樣品於體外(ex vivo)接觸該蝦過敏原，此時，若是該蝦過敏原與該待測樣品中的免疫球蛋白E共同形成該複合物，則可以表示該受試者具有對蝦過敏的可能性。舉例而言，可以藉由二級抗體，利用ImmunoCAP或西方墨點法等方法偵測該複合物。

為證實本案之蝦過敏原確實能夠應用於該蝦過敏的診斷方法，藉此診斷該受試者是否為對蝦過敏的患者，遂製備一蝦萃取物，係取5公克之白蝦(whiteleg shrimp，Litopenaeus vannamei)混合25毫升之磷酸鹽緩衝生理鹽水緩衝液(PBS buffer，配方如第1表所示)，於4℃下均質(homogenize)1分鐘，離心(7,000g，30分鐘，4℃)以取得一過濾液後，再將該過濾液離心(15,000g，15分鐘，4℃)以取得一上清液，該上清液即為該蝦萃取物。

接著，自七名已被診斷為對蝦過敏的患者(患者1~7)取得各患者的血清樣品，及自未曾被診斷為對蝦過敏的患者取得血清樣品作為一控制組血清樣品(C)。

以十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分離該蝦萃取物，轉染至一聚偏氟乙烯膜(PVDF membrane)之後，分別與被診斷為對蝦過敏的患者(患者1~7)的血清樣品，以及該控制組血清樣品(C)進行反應，其如第1圖所示，患者1~7的血清樣品都於63kDa的位置存在一條帶(band)，而控制組血清樣品(C)則不存在此一條帶。

接著，將於63kDa的位置之條帶挖下，依序進行胰蛋白酶消化反應(trypsin digestion)及胜肽萃取反應(peptide extraction)之後，以質譜法(mass spectrometry)進行分析，結果如第2a、2b圖所例示，蛋白質序列分別為VLVVPSTGPTASIVK及IGHSYPVAIALDTK，將前述分析結果與美國國家生物技術信息中心後生動物蛋白質序列資料庫(NCBI metazoan protein sequence database)進行比對後可以確認，於63kDa的位置的蛋白質如有如SEQ ID NO：1所示之序列，即為本發明之蝦過敏原。

綜上所述，本發明的蝦過敏原的用途，係藉由該蝦過敏原能夠與對蝦過敏的患者的免疫球蛋白E共同形成該複合物之特性，進而能夠應用於診斷該受試者是否為對蝦過敏的患者，為本發明之功效。

再者，本發明的蝦過敏的診斷方法，係藉由使用如上述之蝦過敏原，進而能夠精確地診斷該受試者是否為對蝦過敏的患者，為本發明之功效。

雖然本發明已利用上述較佳實施例揭示，然其並非用以限定本發明，任何熟習此技藝者在不脫離本發明之精神和範圍之內，相對上述實施例進行各種更動與修改仍屬本發明所保護之技術範疇，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。

SEQUENCE LISTING<110> 國立屏東科技大學 <120> 蝦過敏原的用途及蝦過敏的診斷方法<130> <160> 1 <170> PatentIn version 3.5<210> 1<211> 591<212> PRT<213> Penaeus vannamei<400> 1Met Ser Lys Val Ala Pro Met Gln Leu Gly Ala Ala Asp Thr His Thr 1 5 10 15 Gln Val Asp His Met Ala Ala Leu Asp Ile Asp Ser Lys Pro Phe Ser 20 25 30 Lys Arg Leu Ser Gly Ile Ile Cys Thr Ile Gly Pro Val Ser Arg Ser 35 40 45 Val Glu Met Leu Glu Lys Met Met Glu Ala Gly Met Asn Ile Ala Arg 50 55 60 Met Asn Phe Ser His Gly Thr His Glu Tyr His Ser Glu Thr Met Met 65 70 75 80 Asn Val Arg Lys Ala Ala Gln Lys Tyr Ser Asp Lys Ile Gly His Ser 85 90 95 Tyr Pro Val Ala Ile Ala Leu Asp Thr Lys Gly Pro Glu Ile Arg Thr 100 105 110 Gly Leu Leu Glu Gly Gly Pro Ser Ala Glu Ile Glu Leu Lys Glu Gly 115 120 125 Ala Thr Ile Lys Leu Thr Thr Asp Ala Ser Tyr Tyr Glu Lys Cys Ser 130 135 140 Glu Asp Val Leu Tyr Leu Asp Tyr Val Asn Ile Thr Lys Val Val Lys 145 150 155 160 Pro Gly Asn Arg Ile Phe Val Asp Asp Gly Leu Ile Ser Leu Ile Ala 165 170 175 Lys Asp Val Gly Ser Asp Ser Ile Asp Cys Glu Val Glu Asn Gly Gly 180 185 190 Met Leu Gly Ser Lys Lys Gly Val Asn Leu Pro Gly Val Pro Val Asp 195 200 205 Leu Pro Ala Val Ser Glu Lys Asp Arg Gly Asp Leu Leu Leu Gly Val 210 215 220 Lys Met Gly Val Asp Ile Val Phe Ala Ser Phe Ile Arg Asp Ala Ala 225 230 235 240 Gly Val Arg Glu Ile Arg Asp Val Leu Gly Glu Lys Gly Lys Asn Ile 245 250 255 Lys Ile Ile Ser Lys Ile Glu Asn His Gln Gly Cys Lys Asn Ile Asp 260 265 270 Asp Ile Ile Glu Glu Gly Asp Gly Ile Met Ile Ala Arg Gly Asp Leu 275 280 285 Gly Ile Glu Ile Pro Ala Glu Lys Val Phe Val Ala Gln Lys Gln Met 290 295 300 Ile Ala Lys Cys Asn Lys Val Gly Lys Pro Val Ile Cys Ala Thr Gln 305 310 315 320 Met Leu Glu Ser Met Val Lys Lys Pro Arg Pro Thr Arg Ala Glu Val 325 330 335 Ser Asp Val Gly Asn Ala Ile Leu Asp Gly Ala Asp Cys Val Met Leu 340 345 350 Ser Gly Glu Thr Ala Lys Gly Gly Tyr Pro Leu Val Cys Val Arg Thr 355 360 365 Met Ala Asn Ile Ala Arg Glu Ala Glu Ala Ala Ile Trp His Lys Gln 370 375 380 Leu Phe Thr Glu Leu Ser Gln Gln Val His Leu Pro Thr Asp Ser Thr 385 390 395 400 His Thr Thr Ala Ile Ala Ala Val Glu Ala Ser Phe Lys Ala Met Ala 405 410 415 Thr Ala Ile Ile Val Ile Thr Pro Thr Gly Arg Ser Ala His Leu Val 420 425 430 Ser Lys Tyr Arg Pro Arg Cys Pro Ile Val Ala Val Thr Arg Tyr Pro 435 440 445 Gln Val Ala Arg Gln Cys His Leu Tyr Arg Gly Ile Ile Pro Ile His 450 455 460 Tyr Thr Val Pro Gln Asn Ala Glu Arg Ile Glu Asp Trp Met Asn Asp 465 470 475 480 Val Asn Ala Arg Val Asp Tyr Ala Val Gln Tyr Gly Lys Glu Cys Gly 485 490 495 Phe Ile Lys Pro Gly Asp Pro Val Val Val Val Thr Gly Trp Gln Lys 500 505 510 Gly Ala Gly Phe Thr Asn Thr Met Arg Val Leu Val Val Pro Ser Thr 515 520 525 Gly Pro Thr Ala Ser Ile Val Lys Leu Gly Ala His Ser Ser Val Lys 530 535 540 Ser Gly Pro Val Lys Ser Gly Pro Gln Ala Ser Gly Glu His Gln Arg 545 550 555 560 Thr Gly Lys Ala Gln Pro Asp Ile Pro Trp Pro Ser Phe Leu Ala His 565 570 575 Met Gly Pro Tyr His Leu Cys Ala Ala Ala Val Ala Asn Lys Ile 580 585 590

Claims

一種蝦過敏原的用途，係用以診斷一受試者是否具有對蝦過敏的可能性，其中，該蝦過敏原為丙酮酸激酶，且具有如SEQ ID NO：1所示之胺基酸序列。
一種蝦過敏的診斷方法，包含：自一受試者取得一血清樣品；及使該血清樣品於體外接觸一蝦過敏原，該蝦過敏原為丙酮酸激酶，且具有如SEQ ID NO：1所示之胺基酸序列；其中，若該血清樣品中存在一免疫球蛋白E，且該免疫球蛋白E能夠與該蝦過敏原共同形成一複合物，則表示該受試者具有對蝦過敏的可能性。