TWI590822B - 用於減少排尿頻率的延遲釋放製劑及其使用方法 - Google Patents

Description

用於減少排尿頻率的延遲釋放製劑及其使用方法

本申請大致涉及用於抑制肌肉收縮的方法和組合物，具體而言，本申請涉及用於抑制膀胱平滑肌收縮的方法和組合物。

逼尿肌是膀胱壁的一層，它是由螺旋束、縱向束和圓形束排列的平滑肌纖維形成的。當膀胱被拉伸時，這會向副交感神經系統發信號以收縮逼尿肌。從而促使膀胱通過尿道排出尿液。

為使尿液排出膀胱，自主控制(autonomically controlled)的內括約肌和意識控制(voluntarily controlled)的外括約肌必須都打開。這些肌肉的問題可能會導致失禁。如果尿量達到膀胱的絕對容量的100%，意識括約肌成為非意識的，且尿液將會立刻排出。

成人膀胱通常保存約300-350毫升的尿液(工作容量)，但根據個體的不同，一個完整的成人膀胱可容納高達約1000毫升(絕對量)。隨著尿液積聚，因膀胱壁的折疊(皺褶)而引起的壟狀隆起變平，且膀胱壁隨其拉伸而變薄，從而在內部壓力不會顯著上升的情況下允許膀胱存儲更大量的尿液。

對於多數個體來說，通常在膀胱中尿液的體積達到其工作容量的約125%時產生尿意。在這個階段，如果個體需要，他很容易抵制排尿衝動。隨著膀胱繼續被填充，尿意變得更加強烈且更難忽略。最終，膀胱被填充到排尿衝動不可被抵抗的程度，個體將不能再忽略它。對一些個體，在膀胱相對於其工作容量小於100%被填充時就開始產生了尿意。這種增加的尿意可能會影響正常活動，包括提供充足的不間 斷的休息的睡眠能力。在某些情況下，這種增加的尿意可能與醫學狀況有關，如男性的良性前列腺增生或前列腺癌，或女性的懷孕。然而，增加的尿意也發生在未受到其他醫學狀況影響的個體中，不論男性和女性。

因此，對於飽受膀胱在小於相對於其工作容量的100%被填充時即具有尿意之苦的男性和女性個體，存在著用於治療他們的組合物和方法的需求。該組合物和方法是用於抑制肌肉收縮的需要，從而允許該個體在膀胱中的尿液體積超過約其工作容量的100%時開始有尿意。

本申請的一方面涉及一種減少排尿頻率的方法。在一個實施態樣中，該方法包括向有需求的個體施用有效量的醫藥組合物，該醫藥組合物包括選自以下群組的第一鎮痛劑：阿司匹靈(aspirin)、布洛芬(ibuprofen)、萘普生鈉(naproxen sodium)、吲哚美辛(indomethacin)、萘丁美酮(nabumetone)和對乙醯胺基酚(acetaminophen)，其中，該醫藥組合物被製成延遲釋放(delayed release)製劑。在一個實施態樣中，第一鎮痛劑以每日劑量0.1微克至5毫克口服施用。

在另一個實施態樣中，該方法包括向有需求的個體施用有效量的醫藥組合物，該醫藥組合物包括多種活性成分，其中該多種活性成分包括：(1)一種或多種鎮痛劑和/或(2)一種或多種的抗毒蕈劑。在一個實施態樣中，該一種或多種鎮痛劑以每日聯合劑量0.1微克至5毫克口服施用。在一些實施態樣中，該一種或多種鎮痛劑係選自以下群組：阿司匹靈、布洛芬、萘普生鈉和對乙醯胺基酚。該抗毒蕈劑的例 子包括但不限於奧昔布甯(oxybutynin)、索非那(solifenacin)、達非那新(darifenacin)、非索羅定(fesoterodine)、托特羅定(tolterodine)、曲司氯銨(trospium)和阿托品(atropine)。

在另一個實施態樣中，該方法包括向有需求的人施用包含利尿劑的第一醫藥組合物；以及向其施用包含一種或多種鎮痛劑的第二醫藥組合物，其中，該第一醫藥組合物被配製並調製為在施用6小時以內具有利尿效果，且其在就寢前至少8小時施用，且其中該第二醫藥組合物在就寢前2小時內施用。

在另一個實施態樣中，該方法包括向有需求的個體施用一種或多種鎮痛劑和一種或多種抗利尿劑。

本申請的另一個方面涉及一種醫藥組合物，其包含多種活性成分和醫藥上可接受的載體。在一些實施態樣中，該多種活性成分包括一種或多種鎮痛劑和抗利尿劑。在另一些實施態樣中，該多種活性成分中的至少一種係配製為延遲釋放。

提出以下的詳細說明以使本領域的技術人員實施和使用本發明。為了解釋的目的，以下闡述具體術語以充分理解本發明。然而，對於本領域的技術人員來說，顯然這些具體的細節並不需要在本發明中實施。提供具體應用的表述僅用作典型的實施例。本發明並不意於限於所示的實施態樣，而是希望包括與在此公閉的原理和特徵相一致的可能的最寬範圍。

在此使用的術語「有效量」是指足以達到選定的結果的量。

在此使用的術語「鎮痛劑」是指用於緩解疼痛且抗發炎化合物的製試劑、化合物或藥物。例示性的鎮痛和/或抗發炎試製劑、化合物或藥物但不限於下列物質：水楊酸鹽、阿司匹靈、水楊酸、水楊酸甲酯、二氟尼柳(diflunisal)、雙水楊酯(salsalate)、奧沙拉嗪(olsalazine)、柳氮磺吡啶(sulfasalazine)、對胺基苯酚的衍生物、乙醯苯胺、對乙醯胺基酚、非那西汀(phenacetin)、芬那酸酯(fenamates)、甲芬那酸(mefenamic acid)、甲氯芬那酸酯(meclofenamate)、甲氯芬那酸鈉(sodium meclofenamate)、雜芳基醋酸衍生物、托美丁(tolmetin)、酮咯酸(ketorolac)、雙氯芬酸(diclofenac)、丙酸衍生物、布洛芬、萘普生鈉、萘普生、非諾洛芬(fenoprofen)、酮洛芬(ketoprofen)、氟比洛芬(flurbiprofen)、奧沙普嗪(oxaprozin)、烯醇酸、昔康(苯並噻嗪類)(oxicam)衍生物、吡羅昔康(piroxicam)、美洛昔康(meloxicam)、替諾昔康(tenoxicam)、安吡昔康(ampiroxicam)、屈噁昔康(droxicam)、匹伏昔康(pivoxicam)、吡唑酮衍生物(pyrazolone derivatives)、保泰松(phenylbutazone)、羥基保泰松(oxyphenbutazone)、安替吡啉(antipyrine)、胺基吡啉(aminopyrine)、安乃近(dipyrone)、考昔(cobix)類藥物、塞來考昔(celecoxib)、羅非考昔(rofecoxib)、萘丁美酮、阿札丙宗(apazone)、吲哚美辛、舒林達酸(sulindac)、依託度酸(etodolac)、和異丁基苯基丙酸、魯米考昔(lumiracoxib)、艾托考昔(etoricoxib)、帕瑞考昔(parecoxib)、伐地考昔(valdecoxib)、替拉考昔(tiracoxib)、達布非酮(darbufelone)、右酮洛芬(dexketoprofen)、醋氯芬酸(aceclofenac)、利克飛龍(licofelone)、溴芬酸(bromfenac)、普拉 洛芬(pranoprofen)、氯索洛芬(loxoprofen)、尼美舒利、西唑來汀(cizolirine)、3-甲醯基胺基-7-甲基磺醯基胺基-6-苯氧基-4H-1-苯並吡喃-4-酮、氯諾昔康(lornoxicam)、右旋吲哚布芬(d-indobufen)、莫苯唑酸(mofezolac)、呱胺托美丁(amtolmetin)、普拉洛芬(pranoprofen)、托芬那酸(tolfenamic acid)、舒洛芬(suprofen)、札托洛芬(zaltoprofen)、阿明洛芬(alminoprofen)、噻洛芬酸(tiaprofenic acid)，及其藥學上可接受的鹽、水合物和溶劑合物。

在此使用的術語「考昔(coxib)」和「COX抑制劑」是指能夠抑制COX2酶的活性或表現，或者能夠抑制或降低包括疼痛和腫脹在內的嚴重的發炎反應的嚴重程度的化合物的組合物。

膀胱有兩個重要的功能：儲存尿液和排空。儲存尿液發生在低壓力下，這意味著在填充階段逼尿肌放鬆。膀胱的排空需要協調的逼尿肌的收縮和尿道括約肌的鬆弛。儲存功能的紊亂可導致下尿道症狀，如尿急、頻尿和急迫性尿失禁(urge incontinence)，膀胱過度活動綜合症的組成部分。膀胱過度活動綜合症可能是由於在儲存階段膀胱平滑肌(逼尿肌)的非意識收縮，是一種常見和被低估的問題，在最近才評估其患病率。

本申請的一方面涉及透過向需要的人施用配製成延遲釋放製劑的醫藥組合物，從而減少排尿頻率的方法。該醫藥組合物包括一種或多種鎮痛劑，且視需要包括一種或多種抗毒蕈劑。

在此使用的術語「延遲釋放」是指一種不會立刻在體內崩解和釋放活性成分的藥物。在一些實施態樣中，術語「延遲釋放」參照具有延 遲釋放曲線的藥物製劑使用，所述藥物製劑中，存在施用後的藥物釋放的預定延遲。在一些實施態樣中，延遲釋放製劑包括腸溶包衣，這是應用於口服藥物的隔離層，以防止在藥物到達小腸之前釋放。如腸溶包衣的延遲釋放製劑防止對胃有刺激作用的藥物(如阿司匹靈)在胃中溶解。這種包衣還用於保護對酸不穩定的藥物暴露在胃的酸性環境中，將其遞送到鹼性pH環境中(腸道的pH值為5.5以上)，在該鹼性環境下其不會降解，並使他們起到所欲的作用。

術語「脈衝釋放」是延遲釋放的一種，其在此參照以下使用：在預定的延遲期間之後，在短時期內立即提供迅速且暫態的藥物釋放的藥物製劑，從而產生在施用藥物之後藥物的「脈衝」血漿分佈。製劑可以被設計為在施用後預定的時間間隔下提供單脈衝釋放或多個脈衝釋放。

多數腸溶包衣透過設置在較高的酸性pH條件(即胃中的條件)下穩定，但在較低的酸性pH條件(相對而言更鹼性)分解的表面而工作。因此，腸溶包衣的藥丸不溶於酸性胃液中(pH值~3)，但它們會溶於小腸中存在的鹼性環境(pH值7至9)。腸溶包衣材料的例子包括但不僅限於，丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸共聚物、醋酸纖維素琥珀酸酯、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯、羥丙基甲基纖維素醋酸酯琥珀酸酯(羥丙甲纖維素醋酸酯琥珀酸酯)、聚醋酸乙烯鄰苯二甲酸酯(PVAP)、甲基丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸共聚物、海藻酸鈉和硬脂酸。

在一些實施態樣中，醫藥組合物由不同的被設計為提供延遲釋放的藥物製劑口服施用。延遲釋放口服劑型包括，例如錠劑、膠囊、藥錠(caplet)，也可能包括多個可被膠囊封裝或者不被膠囊封裝的顆粒、 珠、粉末或丸劑。錠劑和膠囊代表最方便的口服劑型，在此情況下使用固體的藥物載體。

在延遲釋放製劑中，可以向丸劑、錠劑或膠囊應用一個或多個隔離包衣，以助於減緩藥物在腸道中的溶解和隨之而來的釋放。通常情況下，隔離包衣包含一種或多種聚合物，包圍、圍繞或形成層或膜在治療組合物或活性核心周圍。

在一些實施態樣中，在製劑中活性劑被遞送，從而在施用後的預定的時間提供延遲釋放。延遲可能高達約10分鐘、約20分鐘、約30分鐘、約1小時、約2小時、約3小時、約4小時、約5小時、約6小時或更長的時間。

延遲釋放的組合物可包括在單次的單位劑量中施用的給定的活性劑的總劑量的100%。或者，延遲釋放組合物可以作為被包含在聯合的釋放曲線製劑中的組分，其可透過醫藥製劑提供將要遞送的活性劑的總劑量的約30至95%。例如，立即釋放組分可以透過醫藥製劑提供將要遞送的活性劑的總劑量的約5至70%，或者約50%。在另一些實施態樣中，延遲釋放組分透過製劑提供將要遞送的活性劑的總劑量的約30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90或95%。

延遲釋放製劑通常包括延緩活性成分釋放的隔離包衣(barrier coating)。根據目的，隔離包衣可以由各種不同的材料組成。此外，製劑可包括多個隔離包衣以助於以按時方式釋放。該包衣可以是糖衣、薄膜包衣(例如以羥丙基甲基纖維素、甲基纖維素、甲基羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、羧甲基纖維素、丙烯酸酯共聚物、聚乙二醇和/或聚乙烯吡咯啶酮為基質)、或以甲基丙烯酸共聚物、醋酸鄰苯二 甲酸纖維素、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯、羥丙基甲基纖維素醋酸酯琥珀酸酯、聚醋酸乙烯鄰苯二甲酸酯、蟲膠、和/或乙基纖維素為基質的包衣。此外，該製劑可另外包括時間延遲材料，例如，單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。

在一些實施態樣中，延遲釋放製劑包括腸溶包衣，該腸溶包衣包含有助於活性劑在胃腸道的近端或遠端區域中釋放的一種或多種聚合物。在此使用的術語「腸溶聚合物包衣」是指包含具有pH依賴型或者非pH依賴型釋放曲線的一種或多種聚合物的包衣。通常情況下，包衣係抵抗在胃的酸性介質中的溶解，但在胃腸道的更遠端的區域，如小腸或結腸中會溶解或侵蝕。腸溶聚合物包衣通常係抵抗活性劑釋放，直到在給藥之後約3至4小時的胃排空延遲期間之後的時段才釋放活性劑。

pH依賴型的腸溶包衣包括一種或多種pH依賴型或對pH值敏感的聚合物，其能在較低pH值的條件下(如在胃部)保持它們的結構完整，而在胃腸道更遠端的區域(如小腸)的較高pH值的環境下溶解，從而釋放出藥物內容物。對於本發明的目的，「pH依賴型」被定義為具有根據環境pH值而變化的特性(例如，溶解)。例示性的pH依賴型的聚合物包括但不限於，甲基丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯共聚物(如德國Rohm公司的EUDRAGIT^® L100(A型)、EUDRAGIT^® S100(B型))；甲基丙烯酸-丙烯酸乙酯共聚物(如德國Rohm公司的EUDRAGIT^® L100-55(C型)和EUDRAGIT^®L30D-55共聚物分散體)；甲基丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯和甲基丙烯酸甲酯的共聚物(EUDRAGIT^® FS)；甲基丙烯酸、甲基丙烯酸酯和丙烯酸乙酯 的三元共聚物；醋酸鄰苯二甲酸纖維素(CAP)；羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯(HPMCP)(例如，日本信越化學的HP-55、HP-50、HP-55S)；聚醋酸乙烯鄰苯二甲酸酯(PVAP)(例如，COATERIC^®、OPADRY^®腸道白(enteric white)OY-P-7171)；醋酸纖維素琥珀酸酯(CAS)；羥丙基甲基纖維素醋酸酯琥珀酸酯(HPMCAS)，例如，HPMCAS LF級、MF級、HF級，包括AQOAT^® LF和AQOAT^® MF(日本信越化學)；日本信越化學)；蟲膠(例如，Marcoat^TM 125和Marcoat^TM 125N)；羧甲基乙基纖維素(CMEC，Freund公司，日本)、醋酸鄰苯二甲酸纖維素(CAP)(例如，AQUATERIC^®)；醋酸-1,2,4-苯三酸纖維素(CAT)；以及重量比在約2：1至約5：1的其兩種或多種的混合物，例如，重量比為約3：1至約2：1的EUDRAGIT^® L 100-55和EUDRAGIT^® S 100的混合物，或重量比為約3：1至約5：1的EUDRAGIT^® L 30 D-55和EUDRAGIT^® FS的混合物。

pH依賴型的聚合物通常顯示出對於溶解的最優的特徵pH值。在一些實施態樣中，pH依賴型聚合物顯示出約5.0和5.5之間、約5.5和6.0之間、約6.0和6.5之間或約6.5和7.0之間的最優pH值。在另一些的實施態樣中，pH依賴型的聚合物顯示出5.0、5.5、6.0、6.5或7.0的最優pH值。

在另一些實施態樣中，腸溶包衣可包含一種或多種pH依賴型的聚合物。這些聚合物提供了不依賴於pH值的一定時間之後的藥物釋放。對於本發明的目的而言，「非pH依賴型」被定義為具有實質上不受pH值影響的特性(例如，溶解)。非pH依賴型的聚合物通常是指「時間控制型」或「時間依賴型」的釋放曲線的情況。

非pH依賴型的聚合物可以是水不溶性或水溶性的。例示性的水不溶性的非pH依賴型的聚合物包括但不限於，具有小部分氯化甲基丙烯酸三甲基銨基乙酯(trimethylammonioethyl methacrylate chloride)的中性的甲基丙烯酸酯(例如，EUDRAGIT^® RS和EUDRAGIT^® RL；無任何官能基團的中性酯分散體(例如，EUDRAGIT^® NE30D和EUDRAGIT^® NE30)；纖維質聚合物，如乙基纖維素、羥乙基纖維素、醋酸纖維素或混合物；以及其他非pH依賴型的包衣產品。例示性的水溶性的非pH依賴型的聚合物的例子包括OPADRY^®amb。

在一些實施態樣中，非pH依賴型的聚合物包含一種或多種多糖，其能夠抵抗胃和腸道的侵蝕。這種聚合物只能在包含了大量的微生物的結腸中降解，該微生物含有可生物降解酶破壞例如多糖包衣，從而以可控的時間依賴方式釋放藥物內容物。

在一些實施態樣中，包衣方法採用一種或多種pH依賴型和一種或多種非pH依賴型的聚合物的摻合。一旦可溶性聚合物到達了溶解的最優pH值，pH依賴型和非pH依賴型聚合物的摻合可以減少活性成分的釋放速率。

在一些實施態樣中，「時間控制型」或「時間依賴型」釋放曲線可以使用包含一種或多種活性劑的水不溶性的膠囊體獲得，其中，該膠囊體在其一端以不可溶、但可滲透且可膨脹的水凝膠塞封閉。當與消化道液體或溶解介質接觸時，該塞膨脹，將其自身推出膠囊，並在預定的延遲時間(該時間可透過，例如，塞的位置和尺寸控制)之後釋放藥物。該膠囊體可以進一步由外部的pH依賴型的腸溶包衣包覆，從而保持膠囊完整，直到其到達小腸。合適的塞的材料包括，例如， 聚甲基丙烯酸酯類、侵蝕壓縮聚合物(例如，HPMC，聚乙烯醇)、凝結的熔融聚合物(如甘油單油酸酯)和酶控制的侵蝕聚合物(例如，多醣，如直鏈澱粉、阿拉伯半乳聚糖、幾丁聚糖(chitosan)、硫酸軟骨素、環糊精、葡聚糖、瓜爾豆膠、果膠和木聚糖)。

在另一些的實施態樣中，膠囊或雙層錠劑可配製為包括含有藥物的核心，其由膨脹層以及外部不溶但可半滲透的聚合物包衣或膜覆蓋。在破裂前的延遲時間可透過聚合物包衣的滲透和機械性質，以及膨脹層的膨脹行為所控制。通常，膨脹層包括一種或多種膨脹劑，如膨脹且保留水分在其結構中的可膨脹的親水性聚合物。

例示性的可吸水膨脹材料包括但不限於，聚環氧乙烷(具有例如1,000,000至7,000,000的平均分子量，如POLYOX^®)、甲基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素；重量平均分子量為100,000至6,000,000的聚環氧烷，包括但不限於聚亞甲基氧化物(polymethylene oxide)、聚環氧丁烷；分子量為25,000至5,000,000的聚(甲基丙烯酸羥烷基酯)；與乙二醛、甲醛或戊二醛交聯，聚合度為200至30,000，且具有較低縮醛殘基的聚乙烯醇；甲基纖維素、交聯瓊脂和羧甲基纖維素的混合物；形成水凝膠的共聚物，其透過以下方式製備：馬來酸酐與苯乙烯、乙烯、丙烯、丁烯或異丁烯共聚且在該共聚物中以每莫耳馬來酸酐0.001至0.5莫耳的飽和交聯劑交聯以形成極細的共聚物的分散體；分子量為450,000至4,000,000的CARBOPOL^®酸性羧基聚合物；CYANAMER^®聚丙烯醯胺；交聯的可吸水膨脹的茚馬來酸酐聚合物；分子量為80,000至200,000的GOODRITE^®聚丙烯酸；澱粉接枝共聚物；由縮合葡萄糖單元(如二酯交聯的聚葡聚糖 (polyglucan))組成的AQUA-KEEPS^®丙烯酸酯聚合物多醣；0.5%至1%重量/體積水溶液下黏度為3,000至60,000毫帕的卡波姆(carbomer)；纖維素醚，如25℃，1%重量/體積水溶液下黏度約1,000至7,000毫帕的羥丙基纖維素；2%重量/體積水溶液下黏度為約1000以上、較佳2,500以上、最高至25,000毫帕的羥丙基甲基纖維素；在20℃，10%重量/體積水溶液下黏度為約300至700毫帕的聚乙烯吡咯啶酮；以及它們的混合物。

腸溶層可進一步包括抗黏著劑，如滑石粉或甘油單硬脂酸酯和/或增塑劑等。腸溶層可進一步包括一種或多種增塑劑，該增塑劑包括但不僅限於，檸檬酸三乙酯、乙醯基檸檬酸三乙酯、乙醯基檸檬酸三丁酯、聚乙二醇乙醯化單甘油酯、甘油、三醋酸甘油酯、丙二醇、鄰苯二甲酸酯(如鄰苯二甲酸二乙酯、鄰苯二甲酸二丁酯)、二氧化鈦、氧化鐵、蓖麻油、山梨醇和癸二酸二丁酯。

在另一個實施態樣中，延遲釋放製劑採用了透水但不溶的薄膜包衣以包裹活性成分及滲透劑以實現包裹。隨著水從腸道穿過薄膜慢慢擴散進入核心，核心膨脹直到膜破裂，從而釋放出活性成分。可以調整膜包衣，以容許不同的水滲透速率或釋放時間。

或者，藥物的釋放時間可透過崩解延遲時間控制，該崩解延遲時間係取決於水不溶性聚合物膜(如乙基纖維素，EC)的耐受性和厚度之間的平衡，該水不溶性聚合物膜包含在主體底部的預設的微孔，以及一定量的可膨脹賦形劑，如低取代的羥丙基纖維素(L-HPC)和乙醇酸鈉。口服給藥後，胃腸液滲透通過微孔，造成可膨脹賦形劑的膨脹，從而產生使膠囊部分解體的內部壓力，該膠囊部分包括含有可膨 脹材料的第一膠囊體、含有藥物的第二膠囊體和附著在第一膠囊體上的外蓋。

在另一些實施態樣中，藥物可以透過滲透機制釋放。例如，膠囊可配製成單滲透單元，或者其可併含2、3、4、5或6個封裝在硬明膠膠囊內的推拉單元，藉此，每個雙層推拉單元包含滲透推動層和藥物層，且兩者都被半透膜圍繞。在與藥物層相鄰的膜上鑽通一個或多個孔。這層膜可另外被pH依賴型的腸溶包衣覆蓋，以防止釋放，直到胃排空後。該明膠膠囊在攝入後立即溶解。隨著推拉單元進入小腸，腸溶包衣分解，然後其使流體流動以通過半透膜，使滲透推動隔室膨脹，從而迫使藥物以一定速率通過小孔，該速率由水輸送穿過半透膜的速率而精確控制。藥物的釋放可以以恆定速率進行長達24小時以上。

滲透推動層包括一種或多種產生用於使水穿過半透膜進入遞送載體的核心的驅動力的滲透劑。一類滲透劑包括可吸膨脹的親水性聚合物，也被稱為「滲透聚合物(osmopolymers)」和「水凝膠」，其包括但不限於，親水性乙烯基和丙烯酸聚合物、如海藻酸鈣的多醣、聚環氧乙烷(PEO)、聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇(PPG)、聚(甲基丙烯酸-2-羥乙酯)、聚(丙烯酸)、聚(甲基丙烯酸)、聚乙烯吡咯啶酮(PVP)、交聯PVP、聚乙烯醇(PVA)、PVA/PVP共聚物、具有如甲基丙烯酸甲酯和醋酸乙烯酯的疏水單體的PVA/PVP共聚物、含有大PEO嵌段的親水性聚胺甲酸酯、交聯甲羧纖維素鈉、鹿角菜膠(carrageenan)、羥乙基纖維素(HEC)、羥丙基纖維素(HPC)、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、羧甲基纖維素(CMC)和羧乙基纖維素 (CEC)、海藻酸鈉、聚卡波非(polycarbophil)、明膠、三仙膠和澱粉乙醇酸鈉(sodium starch glycolate)。

另一類滲透劑包括酶原，其能夠吸取水分以實現穿過半透膜的滲透壓梯度。例示性酶原包括但不限於，無機鹽，如硫酸鎂、氯化鎂、氯化鈣、氯化鈉、氯化鋰、硫酸鉀、磷酸鉀、碳酸鈉、亞硫酸鈉、硫酸鋰、氯化鉀和硫酸鈉；糖，如右旋糖(dextrose)、果糖、葡萄糖、肌醇、乳糖、麥芽糖、甘露醇、棉子糖、山梨醇、蔗糖、海藻糖和木糖醇；有機酸，如抗壞血酸、苯甲酸、富馬酸、檸檬酸、馬來酸、癸二酸、山梨酸、己二酸、乙二胺四乙酸、麩胺酸、對甲苯磺酸、琥珀酸和酒石酸；尿素；以及它們的混合物。

有用於形成半透膜的材料包括不同級別的丙烯酸樹脂、乙烯樹脂、醚類樹脂、聚醯胺類樹脂、聚酯類樹脂和纖維素質衍生物，這些材料在生理相關的pH值下透水且為水不溶性，或者，這些材料易於透過化學改變，例如交聯而呈現水不溶性。

在另一個實施態樣中，延遲釋放製劑採用了不透水的錠劑包衣，藉此，水穿過受控制的孔隙進入包衣，直到核心破裂。當錠劑破裂時，藥物內容物立即釋放，或者經過較長的時間釋放。可修改這些和其他技術，以在藥物開始釋放前允許形成預定的延遲期間。

不同的包衣技術可應用於含有活性劑的顆粒、珠、粉末或丸劑、錠劑、膠囊或其組合，以產生不同的和區別的釋放曲線。在一些實施態樣中，醫藥組合物是包含單包衣層的錠劑或膠囊的形式。在另一些實施態樣中，醫藥組合物是包含多包衣層的錠劑或膠囊的形式。

在一些實施態樣中，醫藥組合物包括多種活性成分。在另一個實施態樣中，醫藥組合物包括兩種配製為大約在同時延遲釋放的活性成分(例如，兩種鎮痛劑，或一種鎮痛劑和一種抗毒蕈劑)。在另一個實施態樣中，醫藥組合物包括兩種活性成分，一種配製為立即釋放組分且另一種配製為延遲釋放組分。在另一個實施態樣中，醫藥組合物包括兩種配製為兩種延遲釋放組分的活性成分，其各自提供不同的延遲釋放曲線。例如，第一種延遲釋放組分在第一時間點釋放出第一活性成分，且第二種延遲釋放組分在第二時間點釋放出第二活性成分。

在此使用的術語「立即釋放」是指不含有溶出速率控制材料的藥物製劑。在施用立即釋放的製劑之後，活性劑的釋放實質上沒有延遲。立即釋放的包衣可包括施用後立即溶解從而釋放其中的藥物內容物的合適的材料。例示性立即釋放的包衣材料包括明膠、聚乙烯醇聚乙二醇(PVA-PEG)共聚物(如KOLLICOAT^®)和本領域技術人員公知的各種其他材料。

立即釋放的組合物可包括在單次單位劑量中施用的給定的活性劑的總劑量的100%。或者，立即釋放組分可以在聯合的釋放曲線製劑中作為一個組分而包含於其中，該聯合的釋放曲線製劑可以提供將要透過藥物製劑遞送的活性劑的總劑量的約1%至約50%。例如，立即釋放組分可以提供將要透過製劑遞送的活性劑的總劑量的至少約5%、或者約10%至約30%，或者約45%至約50%。其餘的活性劑可以在延遲釋放製劑中遞送。在另一些實施態樣中，立即釋放組分提供將要透過製劑遞送的活性劑的總劑量的約10、15、20、25、30、35、 40、45或50%。延遲釋放組分提供將要透過製劑遞送的活性劑的總劑量的約90、85、80、75、70、65、60、55或50%。

在一些實施態樣中，立即釋放或延遲釋放製劑包括活性核心，該活性核心包含一種或多種惰性粒子，各自以珠、丸劑、藥丸、顆粒粒子、微膠囊、微球、微顆粒、奈米膠囊或奈米球的形式，在其表面由藥物以例如包含藥物的成膜組合物的形式使用例如流化床技術或本領域的技術人員公知的其他方法包覆。該惰性粒子可以是不同大小的，只要其足以保持不易溶解的尺寸即可。或者，活性核心可以透過含有藥物物質的聚合物組合物的造粒和碾磨和/或透過擠出和滾圓來製備。

在核心中的藥物量係取決於所需要的劑量，且通常從約5至90重量%變化。通常，基於包衣粒子的重量，根據所需的延遲時間和釋放曲線的類型和/或所選擇的聚合物和包衣溶劑，在活性核心上的聚合物包衣為1至50%。本領域的技術人員能夠選擇合適量的藥物用以包衣，或者併入核心以實現所需的劑量。在一個實施態樣中，無活性的核心可以是糖球或緩衝晶體或封裝的緩衝晶體，如碳酸鈣、碳酸氫鈉、富馬酸、酒石酸等，它們改變藥物的微環境以促進其釋放。

在一些實施態樣中，延遲釋放製劑是透過以水不溶性的聚合物和腸溶聚合物的混合物包覆水溶性/可分散的含藥物的粒子(如珠)而形成，其中，水不溶性的聚合物和腸溶聚合物可以4：1至1：1的重量比存在，且基於包覆的珠的總重量，包衣的總重量為10至60重量%。藥物分層的珠可視需要地包括控制內溶出速率的乙基纖維素膜。優化了外層的組合物，以及聚合物膜的內層和外層的個別的重量，以對於 給定的活性實現理想的晝夜節律釋放曲線，這基於體外/體內的相關性而預計得到。

在另一些實施態樣中，該製劑包括含有立即釋放藥物的粒子和延遲釋放珠的混合物從而提供雙脈衝釋放曲線，其中，該含有立即釋放藥物的粒子不具有控制溶出速率的聚合物膜，該延遲釋放珠顯示出例如在口服施藥之後2至4小時的延遲時間。在另一些實施態樣中，該製劑包括兩種類型的延遲釋放珠的混合物：顯示出1至3小時延遲時間的第一種類型和顯示出4至6小時延遲時間的第二種類型。

在一些實施態樣中，活性核心由一種或多種控制溶出速率的聚合物層包覆，從而獲得所欲的釋放曲線(有或沒有延遲時間)。內層膜可以在吸收水或體液進入核心後大程度地控制藥物釋放速率，而外層膜可以提供所欲的延遲時間(在吸收水或體液進入核心後沒有或很少的藥物釋放的時期)。內層膜可包括水不溶性聚合物，或水不溶性和水溶性聚合物的混合物。

如上所述，大程度地控制延遲時間最長達6小時的適合於外膜的聚合物包括腸溶聚合物，以及10至50重量%的水不溶性聚合物。水不溶性聚合物與腸溶聚合物的比可從4：1至1：2變化，較佳為該聚合物以約1：1的比例存在。通常使用的水不溶性聚合物為乙基纖維素。

例示性的水不溶性聚合物包括乙基纖維素、聚醋酸乙烯酯(來自BASF的Kollicoat SR#0D)、以丙烯酸乙酯和甲基丙烯酸甲酯為基質的中性共聚物、具有四級銨基團的丙烯酸和甲基丙烯酸酯的共聚物(如EUDRAGIT^® NE、RS和RS30D、RL或RL30D等)。例示性的水溶性聚合物包括低分子量的HPMC、HPC、甲基纖維素、聚乙二醇 (分子量>3000的PEG)，根據在水和溶劑中的活性溶解度，或者所使用的以乳液懸浮液為基質的包衣製劑，其範圍從1重量%至最高達10重量%。水不溶性聚合物對水溶性聚合物通常從95：5至60：40，較佳從80：20至65：35變化。

較佳地，製劑設計為這樣的釋放曲線：能夠限制其對安靜睡眠的干擾，其中，該製劑在個體通常被尿急驚醒時釋放藥物。例如，考慮到通常在晚上11點開始睡眠且在淩晨12：30、淩晨3：00和清晨6：00被尿急驚醒的個體。延遲釋放載體能夠在淩晨12：15遞送藥物，藉此延遲尿意約2至3小時。

醫藥組合物可每日施用或根據需求使用。在一些實施態樣中，該醫藥組合物在就寢前施用於個體。在一些實施態樣中，該醫藥組合物在即將就寢前施用於。在一些實施態樣中，醫藥組合物在就寢前約兩個小時內，較佳在就寢前約一小時內施用。在另一個實施態樣中，該醫藥組合物在就寢前約兩小時施用。在另一個實施態樣中，該醫藥組合物在就寢前至少兩小時施用。在另一個實施態樣中，該醫藥組合物在就寢前約一小時施用。在另一個實施態樣中，該醫藥組合物在就寢前至少一小時施用。在另一個實施態樣中，該醫藥組合物在就寢前不到一小時施用。在另一個實施態樣中，該醫藥組合物在即將就寢前施用。較佳地，該醫藥組合物口服施用。

在立即釋放組分或延遲釋放組分中的活性劑的合適的劑量(「治療有效量」)，將取決於例如病情的嚴重程度和進程、施藥方式、特別試劑的生物可利用性、病人的年齡和體重、病人的臨床病史和對活性劑的反應、醫囑，等等。

通常建議，在立即釋放組分或延遲釋放組分中的活性劑的治療有效量為：透過一次或多次施用，約1奈克/公斤體重/劑量至約100毫克/公斤體重/劑量。在特別的實施態樣中，各活性劑使用的範圍為約1奈克/公斤體重/劑量至約1奈克/公斤體重/劑量、1奈克/公斤體重/劑量至約100奈克/公斤體重/劑量、1奈克/公斤體重/劑量至約10奈克/公斤體重/劑量、10奈克/公斤體重/劑量至約1微克/公斤體重/劑量、10奈克/公斤體重/劑量至約100奈克/公斤體重/劑量、100奈克/公斤體重/劑量至約1微克/公斤體重/劑量、100奈克/公斤體重/劑量至約10微克/公斤體重/劑量、1微克/公斤體重/劑量至約10微克/公斤體重/劑量、1微克/公斤體重/劑量至約100微克/公斤體重/劑量、10微克/公斤體重/劑量至約100微克/公斤體重/劑量、10微克/公斤體重/劑量至約1毫克/公斤體重/劑量、10微克/公斤體重/劑量至約10毫克/公斤體重/劑量、100微克/公斤體重/劑量至約10毫克/公斤體重/劑量、100微克/公斤體重/劑量至約1毫克/公斤體重/劑量、約500微克/公斤體重/劑量至約50毫克/公斤體重/劑量、約500微克/公斤體重/劑量至約5毫克/公斤體重/劑量、1毫克/公斤體重/劑量至約100毫克/公斤體重/劑量、1毫克/公斤體重/劑量至約50毫克/公斤體重/劑量、1毫克/公斤體重/劑量至約10毫克/公斤體重/劑量、5毫克/公斤體重/劑量至約50毫克/公斤體重/劑量、以及10毫克/公斤體重/劑量至約100毫克/公斤體重/劑量。

在此所述的活性劑可包括在用於每日以單活性劑量或聯合活性劑量口服施用的立即釋放的組分或延遲釋放組分中，所述的劑量範圍為1奈克至100奈克、1奈克至10奈克、10奈克至100奈克、0.1 微克至5毫克、0.1微克至1毫克、0.1微克至100微克、0.1微克至10微克、0.1微克至1微克、1微克至5毫克、1微克至1毫克、1微克至100微克、1微克至10微克、10微克至25毫克、10微克至5毫克、10微克至1毫克、10微克至100微克、50微克至5毫克、50微克至1毫克、0.1毫克至5毫克、0.1毫克至1毫克、1毫克至10毫克、1毫克至5毫克、5毫克至100毫克、10毫克至100毫克、50毫克至1000毫克、500毫克至5000毫克、200毫克至2000毫克、或400毫克至1000毫克、或500毫克至5000毫克。在另一些實施態樣中，各個試劑以約0.0006毫克/劑量、0.001毫克/劑量、0.003毫克/劑量、0.006毫克/劑量、0.01毫克/劑量、0.03毫克/劑量、0.06毫克/劑量、0.1毫克/劑量、0.3毫克/劑量、0.6毫克/劑量、1毫克/劑量、3毫克/劑量、6毫克/劑量、10毫克/劑量、30毫克/劑量、60毫克/劑量、100毫克/劑量、300毫克/劑量、600毫克/劑量、1000毫克/劑量、2000毫克/劑量、5000毫克/劑量、或者10,000毫克/劑量施用。正如所料，該劑量將取決於患者的病情、尺寸、年齡和病情。

在一些實施態樣中，該醫藥組合物包括單一鎮痛劑。在一個實施態樣中，該單一鎮痛劑是阿司匹靈。在另一個實施態樣中，該單一鎮痛劑是布洛芬。在另一個實施態樣中，該單一鎮痛劑是萘普生鈉。在另一個實施態樣中，該單一鎮痛劑是吲哚美辛。在另一個實施態樣中，該單一鎮痛劑是萘丁美酮。在另一個實施態樣中，該單一鎮痛劑是對乙醯胺基酚。

在一些實施態樣中，該單一鎮痛劑以每日劑量0.1微克至1000毫克施用。在某些實施態樣中，醫藥組合物包括乙醯水楊酸 (acetylsalicylic acid)、布洛芬、吲哚美辛、萘普生鈉、萘丁美酮或對乙醯胺基酚作為單一鎮痛劑，且該鎮痛劑以每日口服劑量0.1微克至50毫克、0.1微克至5毫克、1微克至1毫克、1微克至10毫克、1至100奈克、0.1至10微克、0.1至100微克、1至100微克、0.05至5毫克、0.1至10毫克、0.1至0.5毫克、0.5至2.5毫克、2.5至10毫克、10至50毫克、50至250毫克或250至1000毫克的範圍內給藥。

在另一些實施態樣中，該醫藥組合物包括一對鎮痛劑。這種配對的鎮痛劑的例子包括但不限於，阿司匹靈和布洛芬、阿司匹靈和萘普生鈉、阿司匹靈和萘丁美酮、阿司匹靈和對乙醯胺基酚、阿司匹靈和吲哚美辛、布洛芬和萘普生鈉、布洛芬和萘丁美酮、布洛芬和對乙醯胺基酚、布洛芬和吲哚美辛、萘普生鈉和萘丁美酮、萘普生鈉和對乙醯胺基酚、萘普生鈉和吲哚美辛、萘丁美酮和對乙醯胺基酚、萘丁美酮和吲哚美辛、以及對乙醯胺基酚和吲哚美辛。該配對的鎮痛劑以0.3：1至3：1的重量比混合，且聯合每日口服劑量為1至100奈克、0.1至10微克、0.1至100微克、0.1微克至5毫克、1微克至1毫克、1至100微克、0.05至5毫克、0.1至10毫克、0.1至0.5毫克、0.5至2.5毫克、2.5至10毫克、10至50毫克、50至250毫克的範圍內。在一個實施態樣中，該配對的鎮痛劑以1：1的重量比混合。

在另一些的實施態樣中，本申請的該醫藥組合物進一步包括一種或多種抗毒蕈劑。該抗毒蕈劑的例子包括但不限於奧昔布甯、索非那、達非那新、非索羅定(fesoterodine)、托特羅定(tolterodine)、曲司氯銨(trospium)和阿托品。在某些實施態樣中，醫藥組合物包括選 自乙醯水楊酸、布洛芬、萘普生鈉、萘丁美酮、對乙醯胺基酚和吲哚美辛中的鎮痛劑，以及選自奧昔布甯、索非那、達非那新和阿托品中的抗毒蕈堿劑。鎮痛劑的聯合每日劑量在1奈克至1000毫克、0.1微克至50毫克、0.1微克至5毫克、1微克至1毫克、1至100奈克、0.1至10微克、0.1至100微克、1至100微克、0.05至5毫克、0.1至10毫克、0.1至0.5毫克、0.5至2.5毫克、2.5至10毫克、10至50毫克、50至250毫克、250至1000毫克、0.1至1毫克、1至10毫克、10至100毫克或100至1000毫克的範圍內。在某些實施態樣中，上述劑量是每日口服劑量。抗毒蕈劑的聯合每日劑量在0.01至25毫克、0.01至0.05毫克、0.05至0.25毫克、0.25至1毫克、1至5毫克、5至25毫克、0.01至0.1毫克、0.1至1毫克、1至10毫克和10至25毫克。

本申請的另一方面涉及通過向需要的人施用配製為立即釋放製劑的醫藥組合物，從而減少排尿頻率的方法。在一些實施態樣中，該醫藥組合物包括一種或多種鎮痛劑，以及一種或多種抗毒蕈劑。在另一些實施態樣中，該醫藥組合物包括一種或多種鎮痛劑，以及一種或多種抗利尿劑。在另一些實施態樣中，該醫藥組合物包括一種或多種鎮痛劑，一種或多種抗毒蕈劑，以及一種或多種抗利尿劑。

在一些實施態樣中，該醫藥組合物包括兩種或多種鎮痛劑。在另一些實施態樣中，該醫藥組合物包括一種或多種鎮痛劑和一種或多種抗毒蕈劑和/或抗利尿劑。該醫藥組合物可配製成錠劑、膠囊、糖衣錠、粉末、顆粒、液體、凝膠或乳液形式。該液體、凝膠或乳液可由個體以直接形式或者包含在膠囊中的形式攝入。

在一些實施態樣中，該鎮痛劑選自以下物質：對乙醯胺基酚、水楊酸鹽、阿司匹靈、水楊酸、水楊酸甲酯、二氟尼柳、雙水楊酯、奧沙拉嗪、柳氮磺吡啶、對胺基苯酚的衍生物、乙醯苯胺、非那西汀、芬那酸酯、甲芬那酸、甲氯芬那酸酯、甲氯芬那酸鈉、雜芳基醋酸衍生物、托美丁、酮咯酸、雙氯芬酸、丙酸衍生物、布洛芬、萘普生鈉、萘普生、非諾洛芬、酮洛芬、氟比洛芬、奧沙普嗪、烯醇酸、昔康(苯噻嗪類)衍生物、吡羅昔康、美洛昔康、替諾昔康、安吡昔康、屈噁昔康、匹伏昔康、吡唑酮衍生物、保泰松、羥基保泰松、安替吡啉、胺基吡啉、安乃近、考昔類藥物、塞來考昔、羅非考昔、萘丁美酮、阿札丙宗、尼美舒利、吲哚美辛、舒林達酸、依託度酸和異丁基苯基丙酸。該抗毒蕈劑選自奧昔布甯、索非那、達非那新和阿托品。

在一些實施態樣中，該醫藥組合物包括單一鎮痛劑和單一抗毒蕈劑。在一個實施態樣中，該單一鎮痛劑是阿司匹靈。在另一個實施態樣中，該單一鎮痛劑是布洛芬。在另一個實施態樣中，該單一鎮痛劑是萘普生鈉。在另一個實施態樣中，該單一鎮痛劑是吲哚美辛。在另一個實施態樣中，該單一鎮痛劑是萘丁美酮。在另一個實施態樣中，該單一鎮痛劑是對乙醯胺基酚。該鎮痛劑和抗毒蕈劑可以以上述範圍內的劑量給藥。

本申請的另一方面涉及一種透過向有需求的個體施用(1)一種或多種鎮痛劑和(2)一種或多種抗利尿劑而治療夜尿症的方法。在某些實施態樣中，該抗利尿劑用於：(1)增加血管加壓素的分泌；(2)增加血管加壓素受體啟動；(3)減少心房利鈉肽(atrial natriuretic peptide，ANP)或C型利鈉肽(CNP)的分泌；或(4)減少ANP和/或CNP的受體啟動。

例示性的抗利尿劑包括但不限於，抗利尿激素(antidiuretic hormone，ADH)、血管收縮素Ⅱ、醛固酮、血管加壓素、血管加壓素類似物(例如，去胺加壓素(desmopressin)、精胺加壓素(argipressin)、離胺加壓素(lypressin)、苯賴加壓素(felypressin)、鳥胺加壓素(ornipressin)、特利加壓素(terlipressin))；血管加壓素受體拮抗劑、心房利鈉肽(ANP)和C型利鈉肽(CNP)受體(即，NPR1、NPR2、NPR3)拮抗劑(例如，HS-142-1、靛紅(isatin)、[Asu7,23']b-ANP-(7-28)]、安南汀(anantin)、來自天藍色鏈黴菌(Streptomyces coerulescens)的環肽，以及3G12單株抗體)；生長素抑制素2型受體拮抗劑(如，生長素抑制素)及其醫藥上可接受的衍生物、類似物、鹽、水合物和溶劑合物。

在一些實施態樣中，該一種或多種鎮痛劑和一種或多種抗利尿劑係配製為延遲釋放型。

本申請的另一個方面涉及一種透過向需要的人施用包含利尿劑的第一醫藥組合物，然後施用包含一種或多種鎮痛劑的第二醫藥組合物以治療夜尿症的方法。第一醫藥組合物的劑量和配方設置為在施用6小時以內具有利尿效果，且在就寢前至少8小時施用。該第二醫藥組合物在就寢前2小時內施用。

利尿劑的例子包括但不限於，致酸鹽，如氯化鈣和氯化銨；精胺酸加壓素受體2拮抗劑，如兩性黴素B和檸檬酸鋰；促排尿藥(aquaretics)，如黃花(Goldenrod)和杜松(Junipe)；Na-H交換拮 抗劑，如多巴胺；碳酸酐酶抑制劑，如乙醯唑胺(acetazolamide)和多佐胺(dorzolamide)；高效能利尿劑(loop diuretics)，如布美他尼(bumetanide)、依他尼酸(ethacrynic acid)、呋塞米(furosemide)和托塞米(torsemide)；滲壓性利尿劑，如葡萄糖和甘露醇；保鉀利尿劑，如阿米洛利(amiloride)、螺旋內酯固醇(spironolactone)、三胺蝶素(triamterene)、烯睾丙酸鉀(potassium canrenoate)；噻嗪類(thiazides)，如苄氟噻嗪(bendroflumethiazide)和氫氯噻嗪(hydrochlorothiazide)；以及黃嘌呤，如咖啡因、茶鹼和可可鹼。

在一些實施態樣中，該第二醫藥組合物進一步包括一種或多種抗毒蕈劑。該抗毒蕈劑的例子包括但不限於奧昔布甯、索非那、達非那新、非索羅定、托特羅定、曲司氯銨和阿托品。該第二醫藥組合物可以配製為立即釋放製劑或延遲釋放製劑。在一個實施態樣中，該第一醫藥組合物配製為立即釋放，且該第二醫藥組合物配製為延遲釋放。

在一些實施態樣中，該第二醫藥組合物進一步包括一種或多種抗利尿劑。

本申請的另一個方面涉及一種醫藥組合物，其包含多種活性成分和醫藥上可接受的載體。在一些實施態樣中，該多種活性成分包括兩種或多種鎮痛劑。在另一些實施態樣中，該多種活性成分包括一種或多種鎮痛劑和一種或多種抗毒蕈劑。在另一些實施態樣中，該多種活性成分包括一種或多種鎮痛劑和一種或多種抗利尿劑。在另一些實施態樣中，該多種活性成分包括一種或多種鎮痛劑，一種或多種抗利尿劑，以及一種或多種抗毒蕈劑。在另一些實施態樣中，至少一種該多種活性成分被配製為延遲釋放。

在一些實施態樣中，該醫藥組合物包括二種鎮痛劑，選自以下群組：乙醯水楊酸、布洛芬、萘普生鈉、萘丁美酮、對乙醯胺基酚和吲哚美辛。在另一些實施態樣中，該醫藥組合物包括一種或多種鎮痛劑，選自以下群組：乙醯水楊酸、布洛芬、萘普生鈉、萘丁美酮、對乙醯胺基酚和吲哚美辛；以及選自以下群組的抗毒蕈劑：奧昔布甯、索非那、達非那新和阿托品。

在此使用的「醫藥上可接受的載體」包括所有的、任意的溶劑、分散介質、包衣、抗菌和抗真菌劑、等滲和吸收延緩劑、甜味劑等。該醫藥上可接受的載體可由較寬範圍的材料製備，包括但不限於，調味劑、甜味劑和其他材料(miscellaneous materials)，如可能為了製備特別的治療組合物的緩衝液和吸收劑。這種具有醫藥活性物質的介質和試劑的使用是本領域公知的。除了與活性成分不相容的慣用介質或試劑以外，使用其他在治療組合物中所包括的物質都在考慮範圍內。

本申請的另一方面涉及一種通過向需要的個體可交替地施用兩種或多種鎮痛劑來防止發生耐藥性以減少排尿頻率的方法。在一個實施態樣中，該方法包括施用第一種鎮痛劑持續第一時間段，然後施用第二種鎮痛劑持續第二時間段。在另一個實施態樣中，該方法進一步包括施用第三種鎮痛劑持續第三時間段。該第一、第二和第三鎮痛劑彼此不同，且可以是選自以下群組的物質：對乙醯胺基酚、水楊酸鹽、阿司匹靈、水楊酸、水楊酸甲酯、二氟尼柳、雙水楊酯、奧沙拉嗪、柳氮磺吡啶、對胺基苯酚的衍生物、乙醯苯胺、非那西汀、芬那酸酯、甲芬那酸、甲氯芬那酸酯、甲氯芬那酸鈉、雜芳基醋酸衍生物、托美丁、酮咯酸、雙氯芬酸、丙酸衍生物、布洛芬、萘普生鈉、萘普生、 非諾洛芬、酮洛芬、氟比洛芬、奧沙普嗪、烯醇酸、昔康(苯並噻嗪類)衍生物、吡羅昔康、美洛昔康、替諾昔康、安吡昔康、屈噁昔康、匹伏昔康、吡唑酮衍生物、保泰松、羥基保泰松、安替吡啉、胺基吡啉、安乃近、考昔類藥物、塞來考昔、羅非考昔、萘丁美酮、阿札丙宗、尼美舒利、吲哚美辛、舒林達酸、依託度酸和異丁基苯基丙酸。

在一個實施態樣中，該第一鎮痛劑是對乙醯胺基酚，該第二鎮痛劑是布洛芬且該第三鎮痛劑是萘普生鈉。各個時間段的長度取決於個體對的各個鎮痛劑的反應可能會有所不同。在一些實施態樣中，每個時間段持續時間從三天至三周。在另一個實施態樣中，一種或多種第一、第二和第三鎮痛劑被配製為延遲釋放的。

本發明將透過以下的非限制性實施例進一步說明。在本申請中引用的所有文獻、專利和公開的專利申請的內容都併入本申請以供參考。

實施例1：排尿衝動的抑制

招收男女都參加的20名志願受試者，他們各自都經歷過過早尿急或排尿需求，這干擾了他們足以感到充分休息的長時間睡眠的能力。每個受試者在就寢前以單劑量攝入400至800毫克的布洛芬。至少有14個受試者報告說，因為沒有被頻繁的尿急驚醒，他們能夠更好地休息。

有幾名受試者報告說，在夜間使用布洛芬幾個星期以後，不再能實現減少尿急的裨益。然而，所有這些受試者都進一步報告說，在停止服用藥劑幾天以後，又獲得了這樣的裨益。

實施例2：鎮痛劑、肉毒桿菌神經毒素和抗毒蕈劑對發炎和非發炎性刺激的巨噬細胞反應的影響

實驗設計

本研究旨在確定鎮痛劑和抗毒蕈劑在控制對由COX-2和前列腺素(PGE、PGH等)調控的發炎和非發炎性刺激的巨噬細胞反應中的劑量和體外功效。它建立了對膀胱細胞中發炎和非發炎性效應物的基準(劑量和動力學)的反應。簡言之，在不存在或存在各種效應物的情況下，將培養細胞暴露於鎮痛劑和/或抗毒蕈劑藥物。

該效應物包括：脂多糖(LPS)、發炎劑和COX2誘導物，作為發炎性刺激物；碳醯膽鹼或乙醯膽鹼、平滑肌收縮刺激物，作為非發炎性刺激物；肉毒桿菌神經毒素A，一種已知的乙醯膽鹼的釋放抑制劑，作為陽性對照；花生四烯酸(AA)、γ-次亞麻油酸(DGLA)或二十碳五烯酸(EPA)，作為前列腺素的前體，他們是透過環氧合酶(COX1和COX-2)和終端前列腺素合成酶在細胞內依次氧化AA、DGLA或EPA製備的。

該鎮痛劑包括：水楊酸鹽，如阿司匹靈；異丁基丙酚醛酸衍生物(布洛芬)，如Advil、Motrin、Nuprin和Medipren；萘普生鈉，如Aleve、Anaprox、Antalgin、Feminax Ultra、Flanax、Inza、Midol Extended Relief、Nalgesin、Naposin、Naprelan、Naprogesic、Naprosyn、Naprosyn懸浮液、EC-Naprosyn、Narocin、Proxen、Synflex和Xenobid；醋酸衍生物，如吲哚美辛(Indocin)；1-萘醋酸衍生物，如萘丁美酮或瑞力芬(relafen)；N-乙醯基對胺基苯酚(APAP)衍生物，如對乙醯胺基酚或撲熱息痛(paracetamol)(泰諾，Tylenol)和塞來考昔。

該抗毒蕈劑包含：奧昔布甯、索非那、達非那新和阿托品。

巨噬細胞係受到以下物質的短期(1至2小時)或長期(24至48小時)刺激：

(1)不同劑量的各種單獨的鎮痛劑。

(2)在LPS存在的情況下不同劑量的各種鎮痛劑。

(3)在碳醯膽鹼或乙醯膽鹼存在的情況下不同劑量的各種鎮痛劑。

(4)在AA、DGLA或EPA存在的情況下不同劑量的各種鎮痛劑。

(5)不同劑量的單獨的肉毒桿菌神經毒素A。

(6)在LPS存在的情況下不同劑量的肉毒桿菌神經毒素A。

(7)在碳醯膽鹼或乙醯膽鹼存在的情況下不同劑量的肉毒桿菌神經毒素A。

(8)在AA、DGLA或EPA存在的情況下不同劑量的肉毒桿菌神經毒素A。

(9)不同劑量的單獨的各種抗毒蕈劑。

(10)在LPS存在的情況下不同劑量的各種抗毒蕈劑。

(11)在碳醯膽鹼或乙醯膽鹼存在的情況下不同劑量的各種抗毒蕈劑。

(12)在AA、DGLA或EPA存在的情況下不同劑量的各種抗毒蕈劑。

然後分析細胞以表徵PGH₂、PGE、PGE₂、前列腺環素、血栓素(Thromboxane)、IL-1β、IL-6、TNF-α的釋放，COX2活性，cAMP和cGMP的產生，IL-1β、IL-6、TNF-α和COX2 mRNA的產生，以及CD80、CD86和MHC II類分子的表面表現。

材料和方法

巨噬細胞

在此研究中使用小鼠RAW264.7或J774巨噬細胞(由ATCC獲得)。將細胞保持在含有RPMI 1640的培養基中，並補充有10%胎牛血清(FBS)、15mM HEPES、2mM左旋麩胺酸、100單位/毫升青黴素和100微克/毫升的鏈黴素。將細胞在37℃，5%的CO₂氛圍下培養，且每星期分盤(繼代)一次。

巨噬細胞以NSAIDs(非類固醇抗發炎藥物)或對乙醯胺基酚的體外處理

將RAW264.7巨噬細胞以1.5x10⁵個細胞/孔(100微升培養基)的密度接種在96孔板中。將細胞用以下物質處理：(1)不同濃度的鎮痛劑(對乙醯胺基酚、阿司匹靈、布洛芬或萘普生)，(2)不同濃度的脂多糖(LPS)，它是對巨噬細胞的發炎性刺激的效應物，(3)不同濃度的碳醯膽鹼或乙醯膽鹼，它是非發炎性刺激的效應物，(4)NSAID或對乙醯胺基酚和LPS或(5)NSAID或對乙醯胺基酚和碳醯膽鹼或乙醯膽鹼。簡言之，將NSAIDs或對乙醯胺基酚溶解在無FBS的培養基中(即，RPMI 1640，補充有15mM HEPES、2mM左旋麩胺酸、100單位/毫升青黴素和100微克/毫升的鏈黴素)，並透過用相同培養基連續稀釋到所需濃度。對於在沒有LPS存在的情況下以NSAID或對乙醯胺基酚處理的細胞，向每個孔中加入50微升的NSAID或對乙醯胺基酚溶液和50微升的無FBS的培養基。對於在有LPS存在的情況下以NSAID或對乙醯胺基酚處理的細胞，向每個孔中加入50微升的NSAID或對乙醯胺基酚溶液和50微升在無FBS的培養基中的LPS(來自鼠傷寒沙門氏菌)。所有的條件重複測試兩次。

在培養24或48小時後，收集150微升的培養上清液，在4℃，8,000rpm下旋轉2分鐘以除去細胞和碎片，並在-70℃儲存以用於透過ELISA分析細胞激素(cytokine)的反應。收集細胞並透過在500微升的磷酸鹽緩衝液(PBS)中離心(在4℃，1,500rpm下5分鐘)洗滌。然後將一半的細胞在液態氮中快速凍結，並在-70℃下儲存。將剩餘的細胞用螢光單株抗體染色並通過流式細胞儀分析。

輔刺激分子表現的流式細胞儀分析

流式細胞儀分析，將巨噬細胞在100微升的FACS緩衝液(具有2%的牛血清白蛋白(BSA)和0.01% NaN₃的磷酸鹽緩衝液(PBS))中稀釋，並透過添加FITC-結合的抗CD40、PE-結合的抗CD80、PE-結合的抗-CD86抗體、抗MHC II類(I-A^d)PE(BD生物科學)而在4℃下染色30分鐘。然後將細胞透過在300微升的FACS緩衝液中離心(在4℃，1,500rpm下5分鐘)清洗。在第二次洗滌後，細胞重新懸浮在200微升的FACS緩衝液中，且透過Accuri C6流式細胞儀(BD生物科學)的說明分析表現給定標記(單陽性)或者標記的組合(雙陽性)的細胞的百分比。

透過ELISA分析細胞激素的反應

將培養上清液用細胞激素專一性ELISA處理，以確定在用NSAID或對乙醯胺基酚、LPS單獨處理或者LPS和NSAID組合處理的巨噬細胞的培養基中的IL-1β，IL-6和TNF-α反應。這些測定是在0.1M的碳酸氫鈉緩衝液(pH 9.5)中由100微升的抗鼠IL-6、TNF-α mAbs(BD生物科學)或IL-1β mAb(R&D系統)塗覆過夜的Nunc MaxiSorp免疫分析板(Nunc)上進行的。在用PBS(每孔200微升)清洗兩 次以後，向每個孔(塊)中添加200微升的PBS 3% BSA，且在室溫下培育板2小時。透過每孔添加200微升，再次清洗板兩次，重複添加100微升的細胞激素的標準和培養上清液的連續稀釋，並將該板在4℃下培育過夜。最後，將該板清洗兩次，並用100微升的二級生物素化的抗鼠IL-6、TNFα mAbs(BD生物科學)或IL-1β(R&D系統)，隨後用過氧化物酶標記的羊抗生物素mAb(Vector實驗室)培育。比色反應是透過添加2,2’-偶氮-雙(3-乙基苯並噻唑啉)-6-磺酸(ABTS)基質和H₂O₂(Sigma)而進行的，且吸光度使用Victor^® V多標記微孔板檢測儀(PerkinElmer)在415奈米處測量。

COX2的活性測定和cAMP和cGMP的生成

在培養的巨噬細胞中COX2的活性透過COX2的活性試驗確定。cAMP和cGMP的生成透過cAMP試驗和cGMP試驗確定。這些試驗在本領域中是通常進行的。

結果

表1總結了由Raw 264巨噬細胞株進行的實驗，並主要發現NSAIDs或對乙醯胺基酚對輔刺激分子CD40和CD80的細胞表面表現方面的影響。這些分子的表現是透過COX2和發炎信號刺激，且因此評估這些分子的表現以確定抑制COX2的功能性後果。

如表2所示，對乙醯胺基酚、阿司匹靈、布洛芬和萘普生在所有的測試劑量(即，5x10⁵nM、5x10⁴nM、5x10³nM、5x10²nM、50nM和5nM)下透過巨噬細胞抑制輔刺激分子CD40和CD80的基本表現(basal expression)，除了最高劑量(即，5x10⁶nM)以外，其表現出增強，而不是抑制輔刺激分子的表現。如第1A圖和第1B圖所示， NSAID或對乙醯胺基酚劑量在低至0.05nM(即，0.00005μM)時觀察到在CD40和CD50表現上的這樣的抑制效果。這一發現支持了這樣的觀點：小劑量的NSAID或對乙醯胺基酚的控制釋放比大劑量的急性遞送更佳。實驗還表明，對乙醯胺基酚、阿司匹靈、布洛芬和萘普生對於LPS誘導的CD40和CD80的表現具有類似的抑制效果。

表3總結了一些研究結果，這些研究測量了成人在口服藥劑後的NSAID或對乙醯胺基酚的血清濃度。如表3中所示，在口服藥劑後NSAID或對乙醯胺基酚的最大血清濃度在10⁴至10⁵nM範圍內。因此，在表2中的體外測試的NSAID或對乙醯胺基酚劑量涵蓋了人體內可實現的濃度範圍。

實施例3：鎮痛劑、肉毒桿菌神經毒素和抗毒蕈劑對發炎和非發炎性刺激的膀胱平滑肌細胞反應的影響

實驗設計

本研究旨在說明在實施例2中確定的NSAID或對乙醯胺基酚的最優劑量如何在細胞培養或組織培養中影響膀胱平滑肌細胞，並論述不同類的NSAIDs或對乙醯胺基酚是否能夠協同以更有效地抑制COX2和PGE2反應。

在實施例2中描述了效應物、鎮痛劑和抗毒蕈劑。

小鼠膀胱平滑肌細胞的初代培養受到以下物質的短期(1至2小時)或長期(24至48小時)刺激：

(1)不同劑量的各種單獨的鎮痛劑。

(2)在LPS存在的情況下不同劑量的各種鎮痛劑。

(3)在碳醯膽鹼或乙醯膽鹼存在的情況下不同劑量的各種鎮痛劑。

(4)在AA、DGLA或EPA存在的情況下不同劑量的各種鎮痛劑。

(5)不同劑量的單獨的肉毒桿菌神經毒素A。

(6)在LPS存在的情況下不同劑量的肉毒桿菌神經毒素A。

(7)在碳醯膽鹼或乙醯膽鹼存在的情況下不同劑量的肉毒桿菌神經毒素A。

(8)在AA、DGLA或EPA存在的不同劑量的肉毒桿菌神經毒素A。

(9)不同劑量的單獨的各種抗毒蕈劑。

(10)在LPS存在的情況下不同劑量的各種抗毒蕈劑。

(11)在碳醯膽鹼或乙醯膽鹼存在的情況下不同劑量的各種抗毒蕈劑。

(12)在AA、DGLA或EPA存在的情況下不同劑量的各種抗毒蕈劑。

然後分析細胞以表徵PGH₂、PGE、PGE₂、前列腺環素、血栓素、IL-1β、IL-6、TNF-α的釋放，COX2活性，cAMP和cGMP的產生，IL-1β、IL-6、TNF-α和COX2 mRNA的產生，以及CD80、CD86和MHC II類分子的表面表現。

材料和方法

小鼠膀胱細胞的分離和純化

從被安樂死的動物C57BL/6小鼠(8至12周齡)取出膀胱細胞，且將細胞透過酶消化分離，隨後用Percoll梯度純化。簡言之，將從10隻小鼠得到的膀胱用剪刀切碎為在10毫升的消化緩衝液(RPMI 1640、2%胎牛血清、0.5毫克/毫升膠原酶、30微克/毫升的DNA酶(DNase))中的細漿液。將膀胱漿液在37℃下酶消化30分鐘。將未消化的碎片透過細胞過濾網(cell-trainer)進一步分散。將細胞懸浮液沉澱(pelleted)，並加入到不連續的20%、40%和75%Percoll梯度以純化單核細胞。每個實驗使用50至60個膀胱。

在用RPMI 1640清洗後，將膀胱細胞再懸浮到補充有10%胎牛血清、15mM HEPES、2mM左旋麩胺酸、100單位/毫升青黴素和100微克/毫升的鏈黴素的RPMI 1640中，並以3x10⁴個細胞/孔(100微升)的細胞密度接種到澄清底部的黑色96孔細胞培養微培養板中。將細胞在37℃，5%的CO₂氛圍下培養。

細胞以NSAIDs或對乙醯胺基酚的體外處理

將膀胱細胞用NSAID或對乙醯胺基酚溶液(50微升/孔)單獨或者與碳醯膽鹼(10莫耳，50微升/孔)共同處理作為非發炎性刺激物的例子，或者用鼠傷寒沙門氏菌的脂多糖(LPS)(1微克/毫升，50微升/孔)處理作為非發炎性刺激物的例子。當沒有其他的效應物加入細胞中時，向孔中加入50微升的無胎牛血清的RPMI 1640以調整最終體積為200微升。

在培養24小時後，收集150微升的培養上清液，在4℃，8,000rpm下旋轉2分鐘以除去細胞和碎片，並在-70℃儲存以用於透過ELISA分析前列腺素E2(PGE₂)的反應。將細胞固定、透化(permeabilzed)並阻斷以使用螢光基質檢測環氧合酶-2(COX-2)。在選定的實驗中，細胞在體外刺激12小時以用於COX2反應的分析。

COX2反應分析

COX2反應透過以細胞為基質的ELISA使用人/鼠全COX2免疫測定法(R & D系統)分析，該分析根據製造商的說明書進行。簡言之，在細胞固定和透化以後，向澄清底部的黑色96孔細胞培養微培養板的孔中加入小鼠抗全COX2和兔抗全GAPDH。經過培育和清洗後，向孔中加入HRP-結合的抗鼠IgG和AP-結合的抗兔IgG。在另一個培育和清洗後，加入HRP-和AP-螢光基質。最後，使用Victor^®V多標記微孔板檢測儀(PerkinElmer)讀取在600奈米(COX2螢光)和450奈米(GAPDH螢光)處發出的螢光。結果表示為總COX2的相對濃度，其透過相對螢光單位(RFUs)確定，並標準化為管家蛋白(housekeeping protein)GAPDH。

PGE2反應分析

前列腺素E2的反應透過順序競爭性(sequential competitive)ELISA(R & D系統)分析。具體而言，向由羊抗鼠多株抗體包覆的96孔聚苯乙烯微孔板的孔中加入培養上清液或PGE2標準液。在微孔板振盪器上培育一小時後，加入HRP結合的PGE2，並將板在室溫下額外培育兩小時。然後清洗板，並向每個孔中加入HRP基質溶液。容許顯色30分鐘，並透過在450奈米(在570奈米處校正波長)處讀取板之前加入硫酸以停止反應。結果表示為PGE2平均皮克/毫升(pg/ml)。

其他試驗

PGH₂、PGE、前列腺環素、血栓素、IL-1β、IL-6和TNF-α的釋放，cAMP和cGMP的產生，IL-1β、IL-6、TNF-α和COX2 mRNA的產生，以及CD80、CD86和MHC II類分子的表面表現採用如實施例2中所述的方法確定。

NSAIDs及對乙醯胺基酚抑制小鼠膀胱細胞對發炎性刺激的COX2反應

對幾種鎮痛劑(對乙醯胺基酚、阿司匹靈、布洛芬和萘普生)在5μM或50μM的濃度下對小鼠膀胱細胞進行測試，以確定NSAIDs或對乙醯胺基酚是否能誘發COX2反應。24小時培養的分析表明，沒有測試的NSAIDs或對乙醯胺基酚在體外小鼠膀胱細胞中顯示出誘導COX2反應。

還測試了這些NSAIDs對體外的小鼠膀胱細胞對碳醯膽鹼或LPS刺激的反應。如表1所示，測試的碳醯膽鹼的劑量對於小鼠膀胱細胞中的COX-2濃度沒有顯著影響。另一方面，LPS顯著增加總COX2濃度。值得注意的是，對乙醯胺基酚、阿司匹靈、布洛芬和萘普生均能抑制LPS對COX-2濃度的影響。當這些藥物在5μM或50μM(表4)測試時，可以看出NSAID或對乙醯胺基酚的抑制效果。

NSAIDs及對乙醯胺基酚抑制小鼠膀胱細胞對發炎性刺激的PGE2反應

測量在小鼠膀胱細胞培養上清液中的PGE2的分泌量，以確定因NSAIDs或對乙醯胺基酚的小鼠膀胱細胞COX2濃度改變的生物學意義。如表5所示，在未刺激的膀胱細胞或在碳醯膽鹼的存在下培養的膀胱細胞的培養上清液中未檢測到PGE2。與上述的COX2反應相一致的，LPS對小鼠膀胱細胞的刺激誘導了PGE2的高濃度分泌。NSAIDs和對乙醯胺基酚的添加抑制了LPS對PGE2分泌的影響，且在5或50μM劑量的NSAID或對乙醯胺基酚處理的細胞反應之間並未觀察到區別。

總之，這些資料表明僅用NSAIDs或對乙醯胺基酚在5μM或50μM下不會誘導小鼠膀胱細胞中的COX2和PGE2反應。然而，在5μM 或50μM下，NSAIDs或對乙醯胺基酚顯著抑制體外由LPS(1微克/毫升)刺激的小鼠膀胱細胞的COX2和PGE2反應。未觀察到NSAIDs或對乙醯胺基酚對由碳醯膽鹼(1mM)刺激的小鼠膀胱細胞的COX2和PGE2反應的顯著影響。

實施例4：鎮痛劑、肉毒桿菌神經毒素和抗毒蕈劑對膀胱平滑肌細胞收縮的影響

實驗設計

將培養的小鼠或大鼠膀胱平滑肌細胞和小鼠或大鼠的膀胱平滑肌組織在不同濃度的鎮痛劑和/或抗毒蕈劑的存在下暴露於發炎性刺激物和非發炎性刺激物。測量刺激誘導的肌肉收縮以評估鎮痛劑和/或抗毒蕈劑的抑制效果。

在實施例2中描述了效應物、鎮痛劑和抗毒蕈劑。

小鼠膀胱平滑肌細胞的初代培養受到以下物質的短期(1至2小時)或長期(24至48小時)刺激：

(1)不同劑量的各種單獨的鎮痛劑。

(2)在LPS存在的情況下不同劑量的各種鎮痛劑。

(3)在碳醯膽鹼或乙醯膽鹼存在的情況下不同劑量的各種鎮痛劑。

(4)在AA、DGLA或EPA存在的情況下不同劑量的各種鎮痛劑。

(5)不同劑量的單獨的肉毒桿菌神經毒素A。

(6)在LPS存在的情況下不同劑量的肉毒桿菌神經毒素A。

(7)在碳醯膽鹼或乙醯膽鹼存在的情況下不同劑量的肉毒桿菌神經毒素A。

(8)在AA、DGLA或EPA存在的情況下不同劑量的肉毒桿菌神經毒素A。

(9)不同劑量的單獨的各種抗毒蕈劑。

(10)在LPS存在的情況下不同劑量的各種抗毒蕈劑。

(11)在碳醯膽鹼或乙醯膽鹼存在的情況下不同劑量的各種抗毒蕈劑。

(12)在AA、DGLA或EPA存在的情況下不同劑量的各種抗毒蕈劑。

材料和方法

如實施例3所述分離初代小鼠膀胱細胞。在選定的實驗中，使用膀胱組織培養。使用Grass多道記錄儀(美國Quincy Mass)記錄膀胱平滑肌細胞收縮。

實施例5：口服鎮痛劑和抗毒蕈劑對膀胱平滑肌細胞對COX2和PGE2反應的影響。

實驗設計：

對正常小鼠和膀胱過動症的小鼠給予口服劑量的阿司匹靈、萘普生鈉、布洛芬、吲哚美辛、萘丁美酮、泰諾、塞來考昔、奧昔布甯、索非那、達非那新、阿托品及其組合。對照組包括未處理的正常小鼠和未處理的無膀胱過動症的OAB小鼠。最後劑量30分鐘後，收集膀胱並用碳醯膽鹼或乙醯膽鹼離體刺激。在選定的實驗中，膀胱在用碳醯膽鹼刺激之前用肉毒桿菌神經毒素A處理。將動物保留在代謝籠中，並評估排尿頻率(和體積)。通過監測水攝取和籠內墊料重量(cage litter weight)確定膀胱排出量。透過ELISA測定血清PGH₂、PGE、 PGE₂、前列腺環素、血栓素、IL-1β、IL-6、TNF-α、cAMP和cGMP濃度。在全血細胞中的CD80、CD86、MHC II類的表現透過流式細胞儀檢測。

在實驗結束後，將動物安樂死並用Grass多道記錄儀記錄離體膀胱收縮。將膀胱部分固定在福馬林中，且透過免疫組織化學分析COX2反應。

實施例6：鎮痛劑、肉毒桿菌神經毒素和抗毒蕈劑對發炎和非發炎性刺激的人膀胱平滑肌細胞反應的影響

實驗設計

設計本研究以表徵在實施例1至5中確定的NSAID或對乙醯胺基酚的最優劑量如何在細胞培養或組織培養中影響人膀胱平滑肌細胞，並論述不同類的NSAIDs或對乙醯胺基酚是否能夠協同以更有效地抑制COX2和PGE2反應。

在實施例2中描述了效應物、鎮痛劑和抗毒蕈劑。

人膀胱平滑肌細胞受到以下物質的短期(1至2小時)或長期(24至48小時)刺激：

(1)不同劑量的各種單獨的鎮痛劑。

(2)在LPS存在的情況下不同劑量的各種鎮痛劑。

(3)在碳醯膽鹼或乙醯膽鹼存在的情況下不同劑量的各種鎮痛劑。

(4)在AA、DGLA或EPA存在的情況下不同劑量的各種鎮痛劑。

(5)不同劑量的單獨的肉毒桿菌神經毒素A。

(6)在LPS存在的情況下不同劑量的肉毒桿菌神經毒素A。

(7)在碳醯膽鹼或乙醯膽鹼存在的情況下不同劑量的肉毒桿菌神經毒素A。

(8)在AA、DGLA或EPA存在的情況下不同劑量的肉毒桿菌神經毒素A。

(9)不同劑量的單獨的各種抗毒蕈劑。

(10)在LPS存在的情況下不同劑量的各種抗毒蕈劑。

(11)在碳醯膽鹼或乙醯膽鹼存在的情況下不同劑量的各種抗毒蕈劑。

(12)在AA、DGLA或EPA存在的情況下不同劑量的各種抗毒蕈劑。

然後分析細胞以表徵PGH₂、PGE、PGE₂、前列腺環素、血栓素、IL-1β、IL-6、TNF-α的釋放，COX2活性，cAMP和cGMP的產生，IL-Iβ、IL-6、TNF-α和COX2 mRNA的產生，以及CD80、CD86和MHC II類分子的表面表現。

實施例7：鎮痛劑、肉毒桿菌神經毒素和抗毒蕈劑對人膀胱平滑肌細胞收縮的影響

實驗設計

將培養的人膀胱平滑肌細胞在不同濃度的鎮痛劑和/或抗毒蕈劑的存在下暴露於發炎性刺激物和非發炎性刺激物。測量刺激誘導的肌肉收縮以評估鎮痛劑和/或抗毒蕈劑的抑制效果。

在實施例2中描述了效應物、鎮痛劑和抗毒蕈劑。

人膀胱平滑肌細胞受到以下物質的短期(1至2小時)或長期(24至48小時)刺激：

(1)不同劑量的各種單獨的鎮痛劑。

(2)在LPS存在的情況下不同劑量的各種鎮痛劑。

(3)在碳醯膽鹼或乙醯膽鹼存在的情況下不同劑量的各種鎮痛劑。

(4)在AA、DGLA或EPA存在的情況下不同劑量的各種鎮痛劑。

(5)不同劑量的單獨的肉毒桿菌神經毒素A。

(6)在LPS存在的情況下不同劑量的肉毒桿菌神經毒素A。

(7)在碳醯膽鹼或乙醯膽鹼存在的情況下不同劑量的肉毒桿菌神經毒素A。

(8)在AA、DGLA或EPA存在的情況下不同劑量的肉毒桿菌神經毒素A。

(9)不同劑量的單獨的各種抗毒蕈劑。

(10)在LPS存在的情況下不同劑量的各種抗毒蕈劑。

(11)在碳醯膽鹼或乙醯膽鹼存在的情況下不同劑量的各種抗毒蕈劑。

(12)在AA、DGLA或EPA存在的情況下不同劑量的各種抗毒蕈劑。

使用Grass多道記錄儀(美國Quincy Mass)記錄膀胱平滑肌細胞收縮。

實施例8：鎮痛劑對發炎和非發炎性信號的正常人膀胱平滑肌細胞反應的影響

實驗設計：

正常的人膀胱平滑肌細胞的培養

將正常的人膀胱平滑肌細胞透過酶消化從人膀胱的巨觀正常部分分離。將細胞在體外透過在37℃下在5% CO₂的氛圍中在補充有10%胎牛血清、15mM HEPES、2mM左旋麩胺酸、100單位/毫升青黴素和100微克/毫升的鏈黴素的RPMI 1640中培養而耗盡，並透過用胰蛋白酶處理以分離細胞每星期傳代一次，隨後在新的培養瓶中再接種。培養第一星期，培養基補充有0.5奈克/毫升表皮生長因子、2奈克/毫升成纖維細胞生長因子和5微克/毫升胰島素。

體外正常的人膀胱平滑肌細胞的NSAIDs或對乙醯胺基酚處理

將受胰蛋白酶作用的，並在微培養板中以3x10⁴個細胞/孔(100微升)的細胞密度接種的膀胱平滑肌細胞用NSAID或對乙醯胺基酚溶液(50微升/孔)單獨或者與碳醯膽鹼(10莫耳，50微升/孔)共同處理，以作為非發炎性刺激物的例子，或者用鼠傷寒沙門氏菌的脂多糖(LPS)(1微克/毫升，50微升/孔)處理，以作為非發炎性刺激物的例子。當沒有其他的效應物加入細胞中時，向孔中加入50微升的無胎牛血清的RPMI 1640以調整最終體積為200微升。

在培養24小時後，收集150微升的培養上清液，在4℃，8,000rpm下旋轉2分鐘以除去細胞和碎片，並在-70℃儲存以用於透過ELISA分析前列腺素E2(PGE₂)的反應。將細胞固定、透化並阻斷)以使用螢光基質檢測COX-2。在選定的實驗中，細胞在體外刺激12小時以用於COX2、PGE2和細胞激素反應的分析。

COX2、PGE2和細胞激素反應分析

如在實施例3中所述，分析COX2和PGE2反應。如在實施例2中所述，分析細胞激素反應。

結果

NSAIDs及對乙醯胺基酚抑制正常的人膀胱平滑肌細胞對發炎性和非發炎性刺激物的COX2反應-在培養24小時以後，細胞和培養上清液的分析表明，在正常的人膀胱平滑肌細胞中，並無測試的NSAIDs或對乙醯胺基酚單獨誘導COX2反應。然而，如表6所總結的，碳醯膽鹼對正常的人膀胱平滑肌細胞中誘導較低的，但是顯著的COX-2反應。另一方面，LPS處理導致在正常的人膀胱平滑肌細胞中較高濃度的COX2反應。對乙醯胺基酚、阿司匹靈、布洛芬和萘普生均能抑制碳醯膽鹼和LPS對COX-2濃度的影響。當這些藥物在5μM或50μM測試時，可以看出鎮痛劑對LPS誘導的反應的抑制效果。

NSAIDs及對乙醯胺基酚抑制正常的人膀胱平滑肌細胞對發炎性和非發炎性刺激物的PGE2反應-與上述的對COX2反應的誘導相一致，碳醯膽鹼和LPS透過正常的人膀胱平滑肌細胞誘導PGE2的產生。還發現對乙醯胺基酚、阿司匹靈、布洛芬和萘普生也在5μM或50μM下抑制LPS誘導的PGE2反應(表7)。

NSAIDs及對乙醯胺基酚抑制正常的人膀胱細胞對發炎性刺激物的細胞激素反應-在培養24小時以後，細胞和培養上清液的分析表 明，在正常的人膀胱平滑肌細胞中，並無測試的NSAIDs或對乙醯胺基酚單獨誘導IL-6或TNFα的分泌。如表8和9中所示，測試的碳醯膽鹼的劑量對正常的人膀胱平滑肌細胞中誘導較低的，但是顯著的TNFα和IL-6反應。另一方面，LPS處理導致這些促發炎反應細胞激素的大量誘導。對乙醯胺基酚、阿司匹靈、布洛芬和萘普生均能抑制碳醯膽鹼和LPS對TNFα和IL-6反應的影響。當這些藥物在5μM或50μM測試時，可以看出NSAID或對乙醯胺基酚對LPS誘導的反應的抑制效果。

分離初代的正常的人膀胱平滑肌細胞，在非發炎性(碳醯膽鹼)和發炎性(LPS)刺激物的存在下培養和評估其對NSAIDs或對乙醯胺基酚的反應。此研究的目的是確定正常的人膀胱平滑肌細胞是否能重現前述由小鼠膀胱細胞得到的現象。

以延遲釋放或延長釋放製劑、或者延遲且延長釋放製劑中的鎮痛劑和/或抗毒蕈劑重複上述實驗。

上述說明是用於教導本領域的普通技術人員如何實踐本發明目的，其並不意欲詳細描述對於本領域的普通技術人員來說閱讀了說明 以後能顯而易見的那些明顯的修改和變化。但是，意欲將所有的明顯的修改和變化包括在本發明的範圍內，這將透過以下申請專利範圍定義。除非文中有明確的相反指示，該等申請專利範圍意圖覆蓋以任何順序的能夠有效實現其所需目的的所要求的組分和步驟。

第1A圖和第1B圖是顯示NSAIDs和對乙醯胺基酚在無LPS(第1A圖)或有LPS(第1B圖)的情況下透過Raw 264巨噬細胞調節輔刺激分子的表現的圖。細胞在NASIA和對乙醯胺基酚單獨存在或與鼠傷寒沙門氏菌脂多糖(LPS)(0.05微克/毫升)同時存在的情況下培養24小時。結果是CD40+CD80+細胞的平均相對百分比。

Claims (21)

1. 一種對乙醯胺基酚(acetaminophen)在製備用於減少意識性排尿頻率的醫藥組合物的用途，其中該醫藥組合物配製為延遲釋放製劑，且其中該對乙醯胺基酚以每日50毫克至1000毫克的劑量口服施用。
2. 根據請求項1所述的用途，其中該延遲釋放製劑包括一腸溶包衣。
3. 根據請求項1所述的用途，其中該對乙醯胺基酚以每日50毫克至250毫克的劑量口服施用。
4. 根據請求項1所述的用途，其中該對乙醯胺基酚以每日250毫克至1000毫克的劑量口服施用。
5. 根據請求項1所述的用途，其中該醫藥組合物進一步包括：一鎮痛劑，其係選自以下所組成之群組：阿司匹靈(aspirin)、布洛芬(ibuprofen)、吲哚美辛(indomethacin)、萘丁美酮(nabumetone)、萘普生鈉(naproxen sodium)、和萘普生(naproxen)，其中該鎮痛劑以每日50毫克至1000毫克的劑量口服施用。
6. 根據請求項5所述的用途，其中該鎮痛劑以每日50毫克至250毫克的劑量口服施用。
7. 根據請求項5所述的用途，其中該鎮痛劑以每日250毫克至1000毫克的劑量口服施用。
8. 根據請求項1所述的用途，其中該醫藥組合物進一步包括一抗毒蕈劑(antimuscarinic agent)，該抗毒蕈劑係選自以下所組成之群 組：奧昔布甯(oxybutynin)、索非那(solifenacin)、達非那新(darifenacin)和阿托品(atropine)。
9. 根據請求項1所述的用途，其中該醫藥組合物係與一利尿劑併用，其中，該利尿劑在就寢前至少8小時施用，且其中該醫藥組合物在就寢前2小時內施用。
10. 根據請求項1所述的用途，其中該醫藥組合物進一步包括一種或多種抗利尿劑。
11. 一種多種活性成分在製備用於減少意識性排尿頻率的醫藥組合物的用途，其中，該多種活性成分包括：(1)對乙醯胺基酚和(2)一種或多種抗毒蕈劑，其中該對乙醯胺基酚以每日50毫克至1000毫克的劑量施用。
12. 根據請求項11所述的用途，其中該醫藥組合物配製為使該多種活性成分的立即釋放。
13. 根據請求項11所述的用途，其中該醫藥組合物包括兩種活性成分：對乙醯胺基酚及抗毒蕈劑，一種活性成分係配製為立即釋放，而另一種活性成分係配製為延遲釋放。
14. 根據請求項11所述的用途，其中該醫藥組合物包括兩種活性成分：對乙醯胺基酚及抗毒蕈劑，一種活性成分係配製為在第一時間點延遲釋放，而另一種活性成分係配製為在第二時間點延遲釋放。
15. 根據請求項11所述的用途，其中該一種或多種抗毒蕈劑係選自以下所組成之群組：奧昔布甯、索非那、達非那新和阿托品。
16. 根據請求項11所述的用途，其中該多種活性成分進一步包含選 自阿司匹靈、布洛芬、吲哚美辛、萘丁美酮、萘普生鈉、和萘普生所組成之群組的至少一種鎮痛劑。
17. 根據請求項11所述的用途，其中該多種活性成分進一步包括一抗利尿劑。
18. 根據請求項11所述的用途，其中該一種或多種抗毒蕈劑以每日0.01毫克至25毫克的聯合劑量施用。
19. 一種醫藥組合物，其包括：對乙醯胺基酚；一抗利尿劑；以及一醫藥上可接受的載體，其中，該對乙醯胺基酚配製為延遲釋放。
20. 根據請求項19所述的醫藥組合物，其進一步包括一種或多種抗毒蕈劑。
21. 根據請求項20所述的醫藥組合物，其中該一種或多種抗毒蕈劑係選自以下所組成之群組：奧昔布甯、索非那、達非那新和阿托品。