TWI555844B

TWI555844B - 降解含氯有機污染物之厭氧性菌株及其用途

Info

Publication number: TWI555844B
Application number: TW104105718A
Authority: TW
Inventors: 林漢福; 陳藝勻; 簡華逸
Original assignee: 台灣氯乙烯工業股份有限公司
Priority date: 2015-02-17
Filing date: 2015-02-17
Publication date: 2016-11-01
Also published as: TW201631145A

Description

降解含氯有機污染物之厭氧性菌株及其用途

本發明係關於一種降解含氯有機污染物之厭氧性菌株及其用途，特別是關於一種篩選馴化自台灣本土高雄林園工業區之降解含氯有機污染物之厭氧性菌株及其用途。

氯乙烯，又名乙烯基氯(vinyl chloride，VC)，是一種重要的有機單體，可由乙烯及二氯乙烷(ethylene dichloride，EDC)加以合成，並可用於合成各種高分子聚合物，也就是塑膠。由於氯乙烯及二氯乙烷之溶解度低、密度大於水，屬於重質非水相液體(dense non-aqueous-phase liquids,DNAPLs)，當氯乙烯或二氯乙烷經由工廠廢水排放或儲槽、管線的意外洩漏而存在於土壤或地下水時，容易增加土壤污染之深度及範圍，因此氯乙烯或二氯乙烷為氯乙烯化工廠或最終處置場中常見的有機污染物。

現有含氯有機污染物(例如氯乙烯或二氯乙烷等)之地下水或廢水的整治處理方式有物理抽除、化學氧化、生物復育等方法，其中物理抽除法必需將含氯有機污染物抽出，再移置到另外的地點進行污染物處理，如廢水處理、活性碳吸附、離子交換等，因此設備運作時間長且須額外場地。再者，化學氧化法加入的氧化劑需要與含氯有機污染物接觸才有作用，若氧化劑在地下水中反應過快，或滲透較差的區域，氧化劑與污染物的化學反應作用將減少。另外，生物復育法(bioremediation)則使用微生物，其中微生物以含氯有機污染物為碳源進行，經異化(氧化)、同化(還原)或共代謝作用，可將污染物生物降解成無毒的物質，例如分解或轉化成較簡單的有機物或是二氧化碳及水等。相較之下，生物復育法之優點為生產菌種的成本較少，且將菌種投入地下水中自行繁殖影響範圍較大、時效長，且使用微生物對環境較友善、無明顯衝擊，因此生物復育法相對係整治受污染之地下水較環保、較符合經濟效益的方法。

現地(in-situ)生物復育工作主要為提供適當的環境因子，以提高現地微生物族群的數量，促進現地微生物族群代謝污染物之活性，使其得以有效分解污染物。目前已發展之處理技術大致可分為下列幾項：(1)、生物活化法(biostimulation)：添加生物可分解之界面活性劑或營養鹽於污染場址，活化場址內既有的微生物族群；(2)、生物添加法(bioaugmentation)：直接添加對污染物具有分解能力的特殊菌種於污染場址，或利用基因工程技術，發展具特定污染物分解能力之基因重組微生物。由於基因重組微生物添加至自然生態環境中，必需考量其毒性及對生態系之影響，因此必須經過嚴密而謹慎的審查後才可實施；(3)、生物處理法(biological treatment)：將污染物經通氣或土壤洗滌後送至特殊生物反應器或是生物濾床、生物洗滌塔去除污染物，或是採用地耕法、堆肥處理。

舉例來說，中華民國公告第295575號發明專利揭示一種處理含可吸附有機鹵化合物廢水的方法，其使用多種格蘭陽性、陰性細菌進行生物化學或生物處理來自生產多元醇、氯乙烯和/或聚氯乙烯的廢水。然而，該菌未經馴化篩選，也非來自台灣本土，因此若欲進口輸入用於台灣本土，必需耗時評估是否影響本土之土壤微生物相生態，且其實際應用在台灣本土之適應性及生物降解整治的效果可能受限。

再者，中華民國公告第I434811號發明專利揭示一種廢水處理方法，其揭示廢水處理廠使用固持於支撐表面上之梭菌屬細菌(Clostridium sp.)經曝氣、沈降、再循環等步驟來處理廢水及污泥，但該菌未經馴化篩選，也未特別以生物整治製劑之型式用於處理受氯乙烯或二氯乙烷污染之場址。

另外，中華民國公告第I240703號發明專利揭示一種微生物污水處理法，其係在廢水經過固液分離後，將特定之微生物製劑投入污水中並加以攪拌，令污水經由嫌氣發酵及曝氣分解後，經過沉澱處理即可逕行放流，而達到污水處理目的，其中微生物製劑係由數十種菌種組合而成，當中包含梭菌屬細菌(Clostridium thermocellum)。然而，該菌同樣未經馴化篩選，也未特別以生物整治製劑之型式用於處理受氯乙烯或二氯乙烷污染之場址。

相似的，美國公告第8,105,808號及第8,673,614號發明專利揭示一種厭氧微生物組成物及其使用方法，其揭示使用多種菌之混合，其中包括Clostridium sp.，藉由混菌來處理含氯乙烷、氯乙烯類污染物，但其具特定混合方式，且該梭菌未經馴化篩選，也非取自台灣本土。美國公開第2010/276363號發明專利揭示一種廢水處理程序及工廠，其揭示廢水處理廠使用固持於支撐表面上之梭菌屬細菌(Clostridium sp.)經曝氣、沈降、再循環等步驟來處理廢水及污泥，但該菌未經馴化篩選，也未特別應用做為生物整治製劑之型式。美國公開第2012/0178147號發明專利揭示一種微生物培養物及厭氧性生物整治，其使用多種菌之混合，並可額外包含梭菌屬細菌(Clostridium sp.)來處理含氯乙烷、氯乙烯類污染物，但其具特定混合方式，且該梭菌未經馴化篩選，也非取自台灣本土。由於該些美國專利揭示的菌株非篩選來自台灣本土，因此若欲進口輸入用於台灣本土，需耗時評估是否影響本土之土壤微生物相生態，且其實際應用在台灣本土之適應性及生物降解整治的效果可能受限。

值得注意的是，上述提及之菌株皆非篩選自台灣本土受氯乙烯或二氯乙烷污染之特定場址(如高雄林園工業區)，且未針對上述特定本土場址之適應性及實際降解效果進行評估。再者，本領域技術人員皆可理解，即使是同菌種，其不同品系(strain)之細胞株，在生理特性及降解效能仍存在有相當大的差異。因此，對於長期受含氯有機物污染的不同場址而言，尚存在許多不同的環境因素(如季節溫度變化、鹽度、土壤組成、含氯有機污染物濃物、地下水量及深度、其他有機/無機污染物等…)影響著各種菌株之存活率及降解能力，且後續篩選方式不同也會影響最後篩選出之菌株生理特性產生差異性。因此，當由某一特定污染場址篩選出之某菌種的篩選菌株使用在同一特定污染場址表現出良好的適應性、耐受性、存活、繁殖狀況及降解效能時，並不代表由不同污染場址(特別是無鄰接之不同國家/地區)取得或篩選出之同一菌種中其他原生或篩選菌株使用在該同一特定污染場址後就一定會有相同程度之生理特性及降解效能，事實上，異地同菌種之原生或篩選菌株應用在非原生地域時通常不適應該地環境且耐受性差，無法持續存活及繁殖，因而降低應用在非原生地進行含氯有機污染物生物現地整治之實際成效。

故，有必要提供一種降解含氯有機污染物之菌株及其用途，以解決習用技術所存在的問題。

本發明之主要目的在於提供一種降解含氯有機污染物之厭氧性菌株及其用途，其係由台灣本土之含氯有機物污染場址(高雄林園工業區台灣氯乙烯公司氯乙烯廠)現地篩選馴化出多種特定厭氧性菌株，包含酪酸梭菌26_0731_1127-09(BCRC 910658)、拜氏梭菌41-2_0905-19(BCRC 910657)、梭菌屬DMHC 10 41-3_0502-4(BCRC 910659)、梭菌屬BCRC 910660(Clostridium sp.T2(2008)BCRC 910660)及酪丁酸梭菌屬BCRC 910661(Clostridium tyrobutyricum BCRC 910661)，其不但長期接觸該地環境中的氯乙烯及二氯乙烷，且經氯乙烯(或二氯乙烷)篩選馴化，因此確認具有較高之相關降解酵素表現量，故不但可以高效率的將氯乙烯(或二氯乙烷)等含氯有機物還原成二氧化碳及氯離子並由環境或大氣加以稀釋，也可以適用於對台灣本土鄰近海岸之含氯有機物污染場址進行現地生物整治。同時，該厭氧性菌株之篩選、培養迅速，製劑成本低廉、脫氯所需時間短，及移除成效顯著。

本發明之次要目的在於提供一種降解含氯有機污染物之厭氧性菌株及其用途，其係由台灣本土鄰近海岸之含氯有機物污染場址現地篩選出上述多種特定厭氧性菌株，該些特定厭氧性菌株皆為本土菌株且未經基因改造，因此在現地使用上不會有破壞或干擾本土之水體或含水土壤中微生物菌相生態之疑慮，且該厭氧性菌株也可在整治現場繼續繁殖，持續移除含氯污染物。

本發明之另一目的在於提供一種降解含氯有機污染物之厭氧性菌株及其用途，其係由台灣本土鄰近海岸之含氯有機物污染場址現地篩選出上述多種特定厭氧性菌株，並能選擇複合多種厭氧性菌株使用於含氯污染物場址現地進行整治，複合使用多種厭氧性菌株有利於確保菌株存活及適應該現地環境，並可在整治現場繼續繁殖，持續移除兩種含氯污染物(氯乙烯及二氯乙烷)，以相對提高整治成效及降低整治次數。

為達上述之目的，本發明提供一種降解含氯有機污染物之厭氧性菌株，其選自酪酸梭菌BCRC 910658(Clostridium butyricum BCRC 910658)、拜氏梭菌BCRC 910657(Clostridium beijerinckii BCRC 910657)、梭菌屬BCRC 910659(Clostridium sp.DMHC 10 BCRC 910659)、梭菌屬BCRC 910660(Clostridium sp.T2(2008)BCRC 910660)、酪丁酸梭菌屬BCRC 910661(Clostridium tyrobutyricum BCRC 910661)或其任意組合，該些厭氧性菌株用以降解含氯有機污染物，並依序以寄存編號BCRC 910658、910657、910659、910660及910661寄存於食品工業發展研究所的生物資源保存及研究中心(BCRC of FIRDI)。

在本發明之一實施例中，該厭氧性菌株係篩選自高雄林園工業區台灣氯乙烯公司氯乙烯廠。

在本發明之一實施例中，該酪酸梭菌BCRC 910658係用以現地降解氯乙烯。

在本發明之一實施例中，該拜氏梭菌BCRC 910657、梭菌屬BCRC 910659、梭菌屬BCRC 910660或其組合係用以現地降解二氯乙烷。

另一方面，本發明提供一種降解含氯有機污染物之厭氧性菌株的用途，其係將至少一種如上所述之厭氧性菌株或其任意組合施加於台灣本土之一含氯有機物污染場址，以進行現地生物整治降解含氯有機污染物。

在本發明之一實施例中，同時使用至少一種降解氯乙烯之厭氧性菌株及至少一種降解二氯乙烷之厭氧性菌株以進行現地生物整治。

在本發明之一實施例中，該降解氯乙烯之厭氧性菌株選自酪酸梭菌BCRC 910658。

在本發明之一實施例中，該降解二氯乙烷之厭氧性菌株選自拜氏梭菌BCRC 910657、梭菌屬BCRC 910659、梭菌屬BCRC 910660或其組合。

在本發明之一實施例中，該厭氧性菌株係施加於該含氯有機物污染場址之廢水、土壤、地下水或污泥中。

在本發明之一實施例中，該厭氧性菌株用以做為一有效成份，以製備一降解含氯有機污染物之生物整治用製劑。

在本發明之一實施例中，該生物整治用製劑之型式為培養液、懸浮液、粉狀、膠囊或濃漿。

在本發明之一實施例中，該含氯有機物污染場址係一鄰海之含氯有機物污染場址。

在本發明之一實施例中，該鄰海之含氯有機物污染場址係高雄林園工業區。

在本發明之一實施例中，該鄰海之含氯有機物污染場址係高雄林園工業區之台灣氯乙烯公司氯乙烯廠。

為了讓本發明之上述及其他目的、特徵、優點能更明顯易懂，下文將特舉本發明較佳實施例，作詳細說明如下。

如先前技術所述，梭菌屬細菌具有潛力可做為降解氯乙烯及/或二氯乙烷之厭氧性菌株。因此，本發明下文即將重點放在台灣本土梭菌屬細菌(Clostridium sp.)之馴化與篩選。

在本發明一實施例中，本發明將提供一種降解含氯有機污染物之厭氧性菌株，該厭氧性菌株係藉由下述篩選方法篩選自高雄林園工業區台灣氯乙烯公司氯乙烯廠(高雄市林園區工業一路1號)，以期篩選出：(1)降解氯乙烯之厭氧性菌株及/或(2)降解二氯乙烷之厭氧性菌株，特別是指梭菌屬細菌(Clostridium sp.)。在篩選出多種厭氧性菌株後，本發明可以選擇單獨使用一種厭氧性菌株或任意組合2種或以上的厭氧性菌株，將這些厭氧性菌株用以做為一有效成份，以製備一降解含氯有機污染物之生物整治用製劑，其中該製劑之型式可為培養液、懸浮液、粉狀、膠囊或濃漿等，該製劑可被施加(注入)到含氯有機物污染場址之地下水、土壤、污泥或廢水中，以進行現地(in-situ)整治。該含氯有機物污染場址例如為一鄰海之含氯有機物污染場址，較佳係為高雄林園工業區，特別是指林園工業區的台灣氯乙烯公司氯乙烯廠(即原取樣之場址，該場址距離高屏溪河床最近約150~200公尺，及距離高屏溪河口最近約2000公尺)。

上述台灣氯乙烯公司之林園氯乙烯廠主要係由乙烯及二氯乙烷(ethylene dichloride，EDC)來合成氯乙烯(vinyl chloride，VC)，當氯乙烯或二氯乙烷經由工廠廢水排放或儲槽、管線的意外洩漏而存在於工廠之廢水、土壤或地下水中時，容易增加土壤污染之深度及範圍，因此必需加以進行整治。該林園氯乙烯廠自1992年開始營運至今已22年，因此該場址地下水中的原生微生物在長期接觸該地環境中的氯乙烯(及/或二氯乙烷)之下，原本即具有較佳之氯乙烯或二氯乙烷降解效率，同時也因鄰近河口，故該地的原生微生物也較能適應鄰海河口土壤的環境因素(如季節溫度變化、鹽度、土壤組成、含氯有機污染物濃物、地下水量及深度、其他有機/無機污染物等…)。

請參照下文所示，其揭示本發明一實施例之降解含氯有機污染物(氯乙烯或二氯乙烷)之厭氧性菌株的篩選方法，其篩選步驟如下：首先，由高雄林園工業區台灣氯乙烯工業股份有限公司之氯乙烯廠內之高濃度含氯有機物廢水池中採得一含氯有機化合物之厭氧活性污泥，將其取回實驗室。

接著，進行定期馴化：將100mL厭氧活性污泥移入125mL 血清瓶內，一組添加20ppm氯乙烯(VC)，另一組添加20ppm二氯乙烷(EDC)，以血清塞與鋁蓋密封培養於30℃厭氧培養箱內，1個月後分別定期取出塗盤、更換培養基(額外添加50mL液態基礎培養基+0.2g/L酵母萃取物+1.8g/L葡萄糖，該基礎培養基係如下表1所示)後，再於二組培養基塗盤上分別添加20ppm VC及20ppm EDC，塗盤上長出的菌落即以下述聚合酶連鎖反應(PCR)篩選菌種。

在以PCT篩選菌種時，本發明先取樣固態培養基培養出的多個細菌菌落，再利用如下表2之一對引子來偵測是否有梭菌屬16S rDNA的存在，以確定是否為梭菌屬的菌落。

在篩選出數株梭菌屬之候選菌種後，接著以microcosm方式先進行實驗室內的氯乙烯(VC)或二氯乙烷(EDC)降解測試，其中該microcosm方式係指在厭氧操作台內以125或200mL血清瓶進行內容物(如下表3所述)填裝，並以血清塞及鋁蓋密封，以在維持厭氧狀態下進行模擬厭氧環境的VD或EDC降解測試。

在完成microcosm厭氧降解測試後，進一步利用氣相層析儀 (GC)分析各候選菌種對於氯乙烯(VC)或二氯乙烷(EDC)之降解效力(如下表4所示)。由表4可知，候選菌種代號BCRC 910658具最高之VC降解效率(98%)，而候選菌種代號BCRC 910657、BCRC 910659及BCRC 910660具較高之EDC降解效率(分別為99、100%及94%)。另外，本發明同時發現在候選菌種中亦有候選菌種BCRC 910661對於三氯乙烯(TCE)具有降解作用，其降解效率(83%)相對較低一些，但亦具潛力可用於降解三氯乙烯等含氯有機污染物。

上述候選菌種代號BCRC 910658、BCRC 910657、BCRC 910659、BCRC 910660及BCRC 910661先前在利用表1之引子進行PCR會複製出16S rDNA片段，將其加以定序，定序完成後得到的16S rDNA基因序列如下(SEQ ID NO：3~7)；隨後，如下表5所示，由NCBI網站比對後的結果可知，候選菌種代號BCRC 910658、BCRC 910657、BCRC 910659、BCRC 910660及BCRC 910661這5種分離株的16 S rDNA序列分別與酪酸梭菌(Clostridium butyricum)、拜氏梭菌(Clostridium beijerinckii)、梭菌屬(Clostridium sp.DMHC 10)、梭菌屬(Clostridium sp.T2(2008))及酪丁酸梭菌(Clostridium tyrobutyricum)的16S rDNA序列相似，相似度皆為99%。

上述分離株之完整16S rDNA序列係如下所示：候選菌種代號BCRC 910658 16S rDNA(SEQ ID NO：3)：

候選菌種代號BCRC 910657 16S rDNA(SEQ ID NO：4)：

候選菌種代號BCRC 910659 16S rDNA(SEQ ID NO：5)：

候選菌種代號BCRC 910660 16S rDNA(SEQ ID NO：6)：

候選菌種代號BCRC 910661 16S rDNA(SEQ ID NO：7)：

在確認菌種之種類後，必要時可選擇定期進行培養馴化，其中(1)、具有氯乙烯(VC)降解效果的分離株BCRC 910658，其液態培養基添加20ppmVC進行培養，以便馴化並維持其降解能力；(2)、具有降解二氯乙烷(EDC)的分離株BCRC 910657、BCRC 910659，其液態培養基添加20ppm EDC培養，以便馴化並維持其降解能力。上述培養馴化可以定期(如每隔1個月)進行一次。

在篩選出上述3種厭氧性菌株(並經定期馴化)後，本發明可以選擇單獨使用一種厭氧性菌株或任意組合2種或以上的厭氧性菌株，將這些厭氧性菌株用以做為一有效成份，以製備一降解含氯有機污染物(VC及EDC)之生物整治用製劑，其中該製劑之型式可為培養液、懸浮液、粉狀、膠囊或濃漿等，該製劑可被施加(注入)到含氯有機物污染場址之地下水、土壤、污泥或廢水中，以進行現地(in-situ)整治。

例如，請參照下表6所示，本發明進行一現地降解效果測試，其係將具有氯乙烯(VC)降解效果的1種分離株BCRC 910658及具有降解二氯乙烷(EDC)的2種分離株BCRC 910657、BCRC 910659以混菌方式將3種梭菌混合後投菌至一現地污染場址I(高雄市林園區工業一路1號高雄林園工業區台灣氯乙烯公司氯乙烯廠內之第1處廢水池)，約2-3週投菌1次，1次10L，其中每10公升混合菌液中含有4ml之分離株BCRC 910658液態培養液、6ml之分離株BCRC 910657液態培養液、6ml之分離株BCRC 910659液態培養液。如表6之實驗結果可知，在降解近120天之後，氯乙烯(VC)從最高濃度3802ppb降至50ppb以下，而二氯乙烷(EDC)從最高濃度19680ppb降至未測得(ND)，降解效果顯著。

表6、使用三種厭氧性菌株混菌在污染場址I進行現地投菌

相似的，如下表7所示，本發明亦進行另一現地降解效果測試，其同樣將具有氯乙烯(VC)降解效果的1種分離株BCRC 910658及具有降解二氯乙烷(EDC)的2種分離株BCRC 910657、BCRC 910659以混菌方式將3種梭菌混合後投菌至另一現地污染場址II(高雄林園工業區台灣氯乙烯公司氯乙烯廠內之第2處廢水池)，約2-3週投菌1次，1次10L，其混合菌液配製方式同上述表6之實驗說明。如表7之實驗結果可知，在降解近43天之後，氯乙烯(VC)從最高濃度483ppb降至未測得(ND)，而二氯乙烷(EDC)從最高濃度10168ppb降至未測得(ND)，降解效果同樣顯著。

另一方面，當本發明選擇將上述3種厭氧性菌株做為一有效成份，以製備一降解含氯有機污染物(VC及EDC)之生物整治用粉末狀製劑時，粉末狀製劑的製作及配比如下：(1)調配含3種分離株之混合培養菌液約500mL，其包含100ml之分離株BCRC 910658液態培養液、200ml之分離株BCRC 910657液態培養液、200ml之分離株BCRC 910659液態培養液，並培養該500mL含3種分離株之混合培養菌液約2天(溫度30℃及壓力1atm，厭氧狀態下)；(2)取上述混合培養菌液與純液態培養液(如表1所示)加上酵母萃取物0.2g/L及葡萄糖1.8g/L以1：20比例混合為4公升接種菌液，將接種菌液置入一4L的發酵槽中，培養約3天(溫度30℃及壓力1atm、厭氧狀態下)；(3)取步驟(2)之接種菌液與純液態培養液(如表1所示)加上酵母萃取物0.2g/L及葡萄糖1.8g/L以1：20比例混合為2公升之新接種菌液，將此接種菌液置入一2L的血清瓶中，再培養約2天(溫度30℃與厭氧狀態下)；(4)取出步驟(3)的2L接種菌液並對其進行離心(轉速10000rpm)，離心後去除上層液體，留下試管底部的菌體層；另取適量50%甘油液(甘油：水=1：1)均勻滴定分布於菌體層上；及(5)利用液態氮吹氣瞬間讓菌體層在冷凍乾燥的試管底部凝固，並放入冷凍乾燥機使其維持真空高壓狀態，抽乾水分，此時即初步獲得粉末狀的菌粉製劑。

請參照下表8所示，接著取上述步驟(5)製得之菌粉製劑(0.6 公克)置入一血清瓶中，並將100mL的受污染地下水，以進行混菌降解測試約30天(溫度30℃及厭氧狀態下)。

如上所述，本發明由高雄林園工業區台灣氯乙烯公司氯乙烯廠篩選出：(1)降解氯乙烯之厭氧性菌株；及/或(2)降解二氯乙烷之厭氧性菌株，其中該降解氯乙烯之厭氧性菌株選自酪酸梭菌BCRC 910658(Clostridium butyricum BCRC 910658)；該降解二氯乙烷之厭氧性菌株則選自拜氏梭菌BCRC 910657(Clostridium beijerinckii BCRC 910657)、梭菌屬BCRC 910659(Clostridium sp.DMHC 10 BCRC 910659)、梭菌屬BCRC 910660(Clostridium sp.T2(2008)BCRC 910660)或其任意組合；另外，酪丁酸梭菌屬BCRC 910661(Clostridium tyrobutyricum BCRC 910661)對於三氯乙烯(TCE)等含氯有機污染物亦具有降解作用；上述5種厭氧性菌株依序以寄存編號BCRC 910658、910657、910659、910660、910661寄存於食品工業發展研究所的生物資源保存及研究中心(BCRC of FIRDI)。上述厭氧性菌株之用途例如係可選擇將至少一種如上所述之厭氧性菌株或其任意組合施加於台灣本土之一含氯有機物污染場址，以進行現地生物整治。在本發明一實施例中，較佳同時使用至少一種降解氯乙烯之厭氧性菌株及至少一種降解二氯乙烷之厭氧性菌株以進行現地生物整治，該厭氧性菌株係可選擇施加於該含氯有機物污染場址之廢水、土壤、地下水或污泥中。在本發明另一實施例中，該厭氧性菌株較佳係可施加於一鄰海之含氯有機物污染場址，例如高雄林園工業區，特別是高雄林園工業區內之台灣氯乙烯公司氯乙烯廠。

由於本發明之降解含氯有機污染物之厭氧性菌株，其係由台灣本土之含氯有機物污染場址(高雄林園工業區台灣氯乙烯公司氯乙烯廠)現地篩選馴化出上述5種特定厭氧性菌株，其長期接觸該地環境中的氯乙烯(及/或二氯乙烷)，且經氯乙烯(或二氯乙烷)篩選馴化，在篩選後經實驗證實具有較高之相關降解酵素表現量，故不但可以高效率的將氯乙烯(或二氯乙烷)等含氯有機物還原成二氧化碳及氯離子並由環境或大氣加以稀釋，也可以適用於對台灣本土該地(林園台氯廠)或其他鄰近海岸之含氯有機物污染場址進行現地生物整治。同時，該厭氧性菌株之篩選、培養迅速，製劑成本低廉、脫氯所需時間短，及移除成效顯著。

再者，由於本發明是由台灣本土鄰近海岸之含氯有機物污染場址現地篩選出特定厭氧性菌株，該些特定厭氧性菌株皆為本土菌株且未經基因改造，因此在現地使用上不會有破壞或干擾本土之水體或含水土壤中微生物菌相生態之疑慮，且該厭氧性菌株也可在整治現場繼續繁殖，持續移除含氯污染物。另外，本發明並能選擇複合多種厭氧性菌株使用於含氯污染物場址現地進行整治，複合使用多種厭氧性菌株有利於確保菌株存活及適應該現地環境，並可在整治現場繼續繁殖，持續移除兩種含氯污染物(氯乙烯及二氯乙烷)，以相對提高整治成效及降低整治次數。

雖然本發明已以較佳實施例揭露，然其並非用以限制本發明，任何熟習此項技藝之人士，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可作各種更動與修飾，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。

【生物材料寄存】

國內寄存資訊【請依寄存機構、日期、號碼順序註記】

食品工業發展研究所、2014-11-12、BCRC910658

食品工業發展研究所、2014-11-12、BCRC910657

食品工業發展研究所、2014-11-12、BCRC910659

食品工業發展研究所、2014-11-12、BCRC910660

食品工業發展研究所、2014-11-12、BCRC910661

SEQUENCE LISTING

<110> 台灣乙烯工業股份有限公司

<120> 降解含有機污染物之厭氧性菌株及其用途

<130> TP140705-TW

<160> 7

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 22

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Clostridium sp 16S rDNA primer(梭菌屬16S rDNA引子)

<400> 1

<210> 2

<211> 21

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Clostridium sp 16S rDNA primer(梭菌屬16S rDNA引子)

<400> 2

<210> 3

<211> 2986

<212> DNA

<213> Clostridium butyricum(酪酸梭菌)

<400> 3

<210> 4

<211> 1967

<212> DNA

<213> Clostridium beijerinckii(拜氏梭菌)

<400> 4

<210> 5

<211> 1975

<212> DNA

<213> Clostridium sp.DMHC 10(梭菌屬)

<400> 5

<210> 6

<211> 2007

<212> DNA

<213> Clostridium sp.T2(2008)(梭菌屬)

<400> 6

<210> 7

<211> 1970

<212> DNA

<213> Clostridium tyrobutyricum(酪丁酸梭菌)

<400> 7

Claims

一種降解含氯有機污染物之厭氧性菌株，該厭氧性菌株是拜氏梭菌BCRC 910657(Clostridium beijerinckii BCRC 910657)，該厭氧性菌株用以降解含氯有機污染物，並以寄存編號910657寄存於食品工業發展研究所的生物資源保存及研究中心(BCRC of FIRDI)。
如申請專利範圍第1項所述之降解含氯有機污染物之厭氧性菌株，其中該厭氧性菌株係篩選自高雄林園工業區台灣氯乙烯公司氯乙烯廠。
如申請專利範圍第1項所述之降解含氯有機污染物之厭氧性菌株，其中該厭氧性菌株另包含選自酪酸梭菌BCRC 910658(Clostridium butyricum BCRC 910658)、梭菌屬BCRC 910659(Clostridium sp.DMHC 10 BCRC 910659)、梭菌屬BCRC 910660(Clostridium sp.T2(2008)BCRC 910660)、酪丁酸梭菌屬BCRC 910661(Clostridium tyrobutyricum BCRC 910661)或其任意組合，該些厭氧性菌株用以降解含氯有機污染物，並依序以寄存編號BCRC 910658、910659、910660及910661寄存於食品工業發展研究所的生物資源保存及研究中心(BCRC of FIRDI)。
如申請專利範圍第3項所述之降解含氯有機污染物之厭氧性菌株，其中該酪酸梭菌BCRC 910658係用以現地降解氯乙烯。
如申請專利範圍第3項所述之降解含氯有機污染物之厭氧性菌株，其中該拜氏梭菌BCRC 910657、梭菌屬BCRC 910659或其組合係用以現地降解二氯乙烷。
一種降解含氯有機污染物之厭氧性菌株的用途，其係將至少一種如申請專利範圍第3項所述之降解含氯有機污染物之厭氧性菌株施加於台灣本土之一含氯有機物污染場址，且同時使用一降解氯乙烯之厭氧性菌株及至少一種降解二氯乙烷之厭氧性菌株以進行現地生物整治，該降解氯乙烯之厭氧性菌株是酪酸梭菌BCRC 910658，該降解二氯乙烷之厭氧性菌株選自拜氏梭菌BCRC 910657、梭菌屬BCRC 910659或其組合，以進行現地生物整治降解含氯有機污染物，其中該含氯有機物污染場址係鄰海之高雄林園工業區之台灣氯乙烯公司氯乙烯廠。
如申請專利範圍第6項所述之降解含氯有機污染物之厭氧性菌株的用途，其中該厭氧性菌株係施加於該含氯有機物污染場址之廢水、土壤、地下水或污泥中。
如申請專利範圍第6項所述之降解含氯有機污染物之厭氧性菌株的用途，其中該厭氧性菌株用以做為一有效成份，以製備一降解含氯有機污染物之生物整治用製劑。
如申請專利範圍第8項所述之降解含氯有機污染物之厭氧性菌株的用途，其中該生物整治用製劑之型式為培養液、懸浮液、粉狀、膠囊或濃漿。