TWI531374B - 適於口服之ｇｃ－ｃ受體激動劑多肽之穩定固態調配物 - Google Patents

Description

適於口服之GC-C受體激動劑多肽之穩定固態調配物

本公開涉及適合於口服施用的鳥苷酸環化酶-C受體激動劑多肽的固體調配物和製備這種調配物的方法。

許多治療多肽以水溶液配製，因為在這種形式下它們最具活性。然而，大多數多肽在水溶液中不是特別穩定，以致其調配物經常具有較短的半衰期，並需要冷凍。儘管多肽的水溶液可通過冷凍乾燥、噴霧乾燥或其他方法來乾燥，但這種乾燥的調配物也可能是不穩定的，並且相對於多肽的水溶液，其活性降低。出現在水溶液和乾燥調配物中的典型分解機制包括聚集作用和氧化降解或水解降解。因此，大部分治療多肽因為它們有限的穩定性，不論是在水溶液中或是乾燥的，都在冷凍條件下儲存。

利那洛肽(linaclotide)是具有胺基酸序列Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr的肽，其活化鳥苷酸環化酶-C(GC-C)受體。利那洛肽可以口服施用，其用於治療胃腸病症和疾患，包括腸道激躁症(IBS)和慢性便秘(CC)。含有利那洛肽的調配物需要被冷凍，以防止其隨著時間而降解。然而，對藥物的商業分佈以及患者儲存而言，冷凍是不方便的。因此，需要具有在室溫下穩定至少12個月的固體利那洛肽調配物。

本文描述了適合於口服施用的利那洛肽的固體穩定調配物以及製備這種調配物的方法。本文描述的調配物含有由胺基酸序列Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr組成的多肽(「那洛肽」)或其藥學上可接受的鹽。

本文描述的利那洛肽調配物是穩定的，並具有足夠的貯存期限以便生產、儲存和分佈藥物。例如，預期本文描述的調配物在室溫儲存條件(例如25℃/60%相對濕度(RH))下具有至少12個月的貯存期限。在進一步的實施方案中，預期本文描述的調配物在室溫儲存條件(例如25℃/60% RH)下具有至少18個月或至少24個月的貯存期限。

在一些實施方案中，描述了此調配物，其中當以基於高效液相色譜(HPLC)測定的相對比利那洛肽參考標準的重量/重量的測定來評價時，當包裝的樣品在加速條件(40℃/75% RH)下儲存三個月後，組合物中殘留的初始量的利那洛肽。在進一步的實施方案中，當包裝的樣品在加速條件(40℃/75% RH)下儲存至少6個月後，組合物中殘留的初始量的利那洛肽。在其他的實施方案中，描述了此調配物，其中當包裝的樣品在加速條件(40℃/75% RH)下儲存了至少三個月的時程後，如HPLC的面積百分比所確定的利那洛肽的色譜純度仍然是。在進一步的實施方案中，當包裝的樣品在加速條件(40℃/75% RH)下儲存了至少6個月的時程後，如通過HPLC的面積百分比所確定的利那洛肽的色譜純度仍然是。因此，例如，不超過約10%的利那洛肽經受降解，成為其他產物，諸如利那洛肽的氧化產物、利那洛肽的水解產物或甲醛介導的利那洛肽的亞胺產物(「甲醛亞胺產物」)。

在一個實施方案中，本發明包括含有利那洛肽的藥物組合物，其中在含有乾燥劑的密封容器中的藥物組合物在25℃、60%相對濕度下儲存18個月或24個月後，利那洛肽的色譜純度降低小於10%。在一個進一步的實施方案中，在含有乾燥劑的密封容器中的藥物組合物在25℃、60%相對濕度下儲存18個月或24個月後，利那洛肽的色譜純度降低小於9%、8%、7%、6%、5%、4%或2%。在另一個實施方案中，本發明包括含有利那洛肽的藥物組合物，其中在含有乾燥劑的密封容器中的藥物組合物在40℃、75%相對濕度下儲存3個月或6個月後，利那洛肽的色譜純度降低小於10%。在一個進一步的實施方案中，在含有乾燥劑的密封容器中的藥物組合物在40℃、75%相對濕度下儲存3個月或6個月後，利那洛肽的色譜純度降低小於9%、8%、7%、6%、5%、4%或2%。

在一個實施方案中，本發明包括含有利那洛肽的藥物組合物的單位劑型，其中在含有乾燥劑的密封容器中的單位劑型在25℃、60%相對濕度下儲存18個月或24個月後，利那洛肽的色譜純度降低小於10%。在一個進一步的實施方案中，在含有乾燥劑的密封容器中的單位劑型在25℃、60%相對濕度下儲存18個月或24個月後，利那洛肽的色譜純度降低小於9%、8%、7%、6%、5%、4%或2%。在另一個實施方案中，本發明包括含有利那洛肽的藥物組合物的單位劑型，其中在含有乾燥劑的密封容器中的單位劑型在40℃、75%相對濕度下儲存3個月或6個月後，利那洛肽的色譜純度降低小於10%。在一個進一步的實施方案中，在含有乾燥劑的密封容器中的單位劑型在40℃、75%相對濕度下儲存3個月或6個月後，利那洛肽的色譜純度降低小於9%、8%、7%、6%、5%、4%或2%。

在一個實施方案中，本發明包括密封容器，其包含多個含有利那洛肽的藥物組合物的單位劑型，其中含有乾燥劑的密封容器在25℃、60%相對濕度下儲存18個月或24個月後，利那洛肽的色譜純度降低小於10%。在一個進一步的實施方案中，含有乾燥劑的密封容器在25℃、60%相對濕度下儲存18個月或24個月後，利那洛肽的色譜純度降低小於9%、8%、7%、6%、5%、4%或2%。在另一個實施方案中，本發明包括密封容器，其包含多個含有利那洛肽的藥物組合物的單位劑型，其中含有乾燥劑的密封容器在40℃、75%相對濕度下儲存3個月或6個月後，利那洛肽的色譜純度降低小於10%。在一個進一步的實施方案中，含有乾燥劑的密封容器在40℃、75%相對濕度下儲存3個月或6個月後，利那洛肽的色譜純度降低小於9%、8%、7%、6%、5%、4%或2%。

在一個實施方案中，本發明包括含有利那洛肽的藥物組合物，其中在含有乾燥劑的密封容器中的藥物組合物在25℃、60%相對濕度下儲存18個月或24個月後，以重量/重量為基礎確定的利那洛肽的測定值降低小於10%。在一個進一步的實施方案中，在含有乾燥劑的密封容器中的藥物組合物在25℃、60%相對濕度下儲存18個月或24個月後，以重量/重量為基礎確定的利那洛肽的測定值降低小於9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%或1%。在另一個實施方案中，本發明包括含有利那洛肽的藥物組合物，其中在含有乾燥劑的密封容器中的藥物組合物在40℃、75%相對濕度下儲存3個月或6個月後，以重量/重量為基礎確定的利那洛肽的測定值降低小於10%。在一個進一步的實施方案中，在含有乾燥劑的密封容器中的藥物組合物在40℃、75%相對濕度下儲存3個月或6個月後，利那洛肽的色譜純度降低小於9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%或1%。

在一個實施方案中，本發明包括含有利那洛肽的藥物組合物的單位劑型，其中在含有乾燥劑的密封容器中的單位劑型在25℃、60%相對濕度下儲存18個月或24個月後，以重量/重量為基礎確定的利那洛肽的測定值降低小於10%。在一個進一步的實施方案中，在含有乾燥劑的密封容器中的單位劑型在25℃、60%相對濕度下儲存18個月或24個月後，以重量/重量為基礎確定的利那洛肽的測定值降低小於9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%或1%。在另一個實施方案中，本發明包括含有利那洛肽的藥物組合物的單位劑型，其中在含有乾燥劑的密封容器中的單位劑型在40℃、75%相對濕度下儲存3個月或6個月後，以重量/重量為基礎確定的利那洛肽的測定值降低小於10%。在一個進一步的實施方案中，在含有乾燥劑的密封容器中的單位劑型在40℃、75%相對濕度下儲存3個月或6個月後，以重量/重量為基礎確定的利那洛肽的測定值降低小於9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%或1%。

在一個實施方案中，本發明包括密封容器，其包含多個含有利那洛肽的藥物組合物的單位劑型，其中在含有乾燥劑的密封容器中的密封容器在25℃、60%相對濕度下儲存18個月或24個月後，以重量/重量為基礎確定的利那洛肽的測定值降低小於10%。在一個進一步的實施方案中，含有乾燥劑的密封容器在25℃、60%相對濕度下儲存18個月或24個月後，以重量/重量為基礎確定的利那洛肽的測定值降低小於9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%或1%。在另一個實施方案中，本發明包括密封容器，其包含多個含有利那洛肽的藥物組合物的單位劑型，其中含有乾燥劑的密封容器在40℃、75%相對濕度下儲存3個月或6個月後，以重量/重量為基礎確定的利那洛肽的測定值降低小於10%。在一個進一步的實施方案中，含有乾燥劑的密封容器在40℃、75%相對濕度下儲存3個月或6個月後，以重量/重量為基礎確定的利那洛肽的測定值降低小於9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%或1%。

在一些實施方案中，提供了含有利那洛肽和水解產物的藥物組合物，所述水解產物包括：

在一些實施方案中，該水解產物佔組合物重量的小於約15%，組合物的重量的小於約10%，組合物的重量的小於約7%或組合物的重量的小於約5%。在其他的實施方案中，該水解產物佔組合物的重量的約0.01%至約15%，組合物的重量的約0.05%至約10%，組合物的重量的約0.05%至約7%，或組合物的重量的約0.05%至約5%。在進一步的實施方案中，提供了治療需要其的患者的胃腸病症的方法，其包括施用含有利那洛肽和水解產物的藥物組合物。

在一些實施方案中，提供了含有利那洛肽和甲醛亞胺產物的藥物組合物，所述甲醛亞胺產物包括：

在一些實施方案中，該甲醛亞胺產物佔組合物的重量的小於約15%，組合物的重量的小於約10%，組合物的重量的小於約7%或組合物的重量的小於約5%。在其他的實施方案中，該甲醛亞胺產物佔組合物的重量的約0.01%至約15%，組合物的重量的約0.05%至約10%，組合物的重量的約0.05%至約7%，或組合物的重量的約0.05%至約5%。在進一步的實施方案中，提供了治療需要其的患者的胃腸病症的方法，其包括施用含有利那洛肽和甲醛亞胺產物的藥物組合物。

在一些實施方案中，提供了含有利那洛肽和利那洛肽氧化產物的藥物組合物。在一個實施方案中，利那洛肽氧化產物具有1542.8的分子量，其最可能在單個氧原子添加到利那洛肽中的六個半胱氨醯硫之一時而形成。產物的一個潛在結構描述如下，儘管本領域技術人員將瞭解，氧原子可連接於其他五個硫中的任何一個：

在另一個實施方案中，可以向利那洛肽添加多於一個氧原子，每添加一個氧原子，其分子量將增加16AU。

在一些實施方案中，該利那洛肽氧化產物佔組合物的重量的小於約15%，組合物的重量的小於約10%，組合物的重量的小於約7%或組合物的重量的小於約5%。在其他的示例性實施方案中，該利那洛肽氧化產物佔組合物的重量的約0.01%至約15%，組合物的重量的約0.05%至約10%，組合物的重量的約0.05%至約7%，或組合物的重量的約0.05%至約5%。在進一步的實施方案中，提供了治療需要其的患者的胃腸病症的方法，其包括施用含有利那洛肽和利那洛肽氧化產物的藥物組合物。

可通過對比樣品中利那洛肽的量和利那洛肽參考標準(例如通過HPLC)來確定以重量/重量為基礎的測定值(「重量/重量測定」)。如本文所用，將在室溫或加速條件下儲存後的特定時間點處(例如在加速條件[40℃/75% RH]下儲存三或六個月，或在室溫條件[25℃/60% RH]下儲存12、18或24個月)的組合物中的利那洛肽的重量與起始時間(例如，臨床或患者使用時釋放藥物組合物的時間(「釋放日期」))的組合物中的利那洛肽的重量對比，以提供重量/重量測定值。例如，組合物中的利那洛肽的重量在加速條件(40℃/75% RH)下儲存特定時間後測量，並與釋放日期存在於樣品中的利那洛肽的重量對比。在另一個實例中，組合物中的利那洛肽的重量在室溫條件(25℃/60% RH)下儲存特定時間後測量，並與釋放日期存在於樣品中的利那洛肽的重量對比。因此，短句「包裝的樣品在加速條件(40℃/75% RH)下儲存至少6個月後，組合物中殘留的初始量的利那洛肽」指在加速條件下儲存至少6個月後，如通過HPLC所確定的在測定中測量的以重量/重量為基礎的利那洛肽的重量是起始時間(例如利那洛肽組合物的釋放日期)存在於組合物中的利那洛肽的量的。

可通過在本文描述的條件下進行HPLC，評價利那洛肽的色譜純度。測量利那洛肽的峰面積，並與除溶劑峰和任何非多肽相關峰(即與在安慰劑中可能觀察到的賦形劑相關的峰)之外的所有的峰的總面積對比。如本文所用，在室溫或加速條件下儲存後的特定時間點處(例如在加速條件[40℃/75% RH]下儲存三或六個月，或在室溫條件[25℃/60% RH]下儲存12、18或24個月)的組合物中的利那洛肽的色譜純度與起始時間(例如，臨床或患者使用時釋放藥物組合物的時間(「釋放日期」))的組合物中的利那洛肽的色譜純度對比，以提供色譜純度值。例如，組合物中的利那洛肽的色譜純度在加速條件(40℃/75% RH)下儲存特定時間後測量，並與釋放日期組合物中的利那洛肽的色譜純度對比。在另一個實例中，組合物中的利那洛肽的色譜純度在室溫條件(25℃/60% RH)下儲存特定時間後測量，並與釋放日期組合物中的利那洛肽的色譜純度對比。

本公開特徵為製備含有利那洛肽或其藥學上可接受的鹽的藥物組合物的方法，該方法包括：(a)提供溶液，例如水溶液(「包衣溶液」)，其包括：(i)利那洛肽或其藥學上可接受的鹽；(ii)選自Mg²⁺、Ca²⁺、Zn²⁺、Mn²⁺、K⁺、Na⁺或Al³⁺的陽離子和/或立體阻礙伯胺(例如白胺酸)以及，任選地(iii)藥學上可接受的粘合劑；以及(b)將包衣溶液應用於藥學上可接受的填充劑以產生多肽包衣的填充劑(例如通過用包衣溶液噴灑、混合或包衣藥學上可接受的填充劑)。該方法可任選地包括以下步驟中的一個或多個：(i)將多肽包衣的填充劑與藥學上可接受的滑動劑(glidant)、藥學上可接受的潤滑劑或起滑動劑和潤滑劑兩者作用的藥學上可接受的添加劑混合；(ii)將多肽包衣的填充劑與沒有多肽包衣的填充劑混合，(iii)將多肽包衣的填充劑與其他的添加劑混合；(iii)將藥學上可接受的包衣添加劑應用于多肽包衣的填充劑。最終的藥物組合物可被裝入膠囊(例如明膠膠囊)或用於形成片劑。

已發現，選自Mg²⁺、Ca²⁺、Zn²⁺、Mn²⁺、K⁺、Na⁺或Al³⁺的陽離子在儲存期間對抑制利那洛肽的氧化產物的形成是有用的。還發現，立體阻礙伯胺，例如白胺酸，在儲存期間對抑制利那洛肽的甲醛亞胺加合物(「甲醛亞胺產物」)的形成是有用的。因此，含有選自Mg²⁺、Ca²⁺、Zn²⁺、Mn²⁺、K⁺、Na⁺或Al³⁺的陽離子(例如選自Zn²⁺、Mg²⁺或Ca²⁺的二價陽離子)和/或立體阻礙伯胺(諸如胺基酸)的利那洛肽調配物具有足夠的貯存期限(如通過色譜純度和/或通過重量/重量測定所測量)用於生產、儲存和分佈藥物。此外，儘管僅存在位元阻胺可在儲存期間增加利那洛肽的水解產物的形成，但立體阻礙伯胺和陽離子的組合(例如白胺酸和Ca²⁺的組合)在儲存期間抑制利那洛肽的水解產物以及利那洛肽的氧化產物的形成，產生甚至更好的總穩定性，其如通過重量/重量測定和/或通過色譜純度所測量。

在一些實施方案中，提供了含有藥學上可接受的載體、利那洛肽和一種或多種選自Mg²⁺、Ca²⁺、Zn²⁺、Mn²⁺、K⁺、Na⁺或Al³⁺和立體阻礙伯胺的劑的藥物組合物，其中所述劑相對沒有所述劑的藥物組合物，改善了組合物的至少一個特性。在進一步的實施方案中，該劑是Mg²⁺、Ca²⁺或Zn²⁺。在一個進一步的實施方案中，該藥劑是Ca²⁺。在一些實施方案中，將陽離子提供為，但不限於，醋酸鎂、氯化鎂、磷酸鎂、硫酸鎂、醋酸鈣、氯化鈣、磷酸鈣、硫酸鈣、醋酸鋅、氯化鋅、磷酸鋅、硫酸鋅、醋酸錳、氯化錳、磷酸錳、硫酸錳、醋酸鉀、氯化鉀、磷酸鉀、硫酸鉀、醋酸鈉、氯化鈉、磷酸鈉、硫酸鈉、醋酸鋁、氯化鋁、磷酸鋁或硫酸鋁。在進一步的實施方案中，將陽離子提供為氯化鎂、氯化鈣、磷酸鈣、硫酸鈣、醋酸鋅、氯化錳、氯化鉀、氯化鈉或氯化鋁。在其他的實施方案中，將陽離子提供為氯化鈣、氯化鎂或醋酸鋅。

在另一個實施方案中，該劑是立體阻礙伯胺。在一個進一步的實施方案中，該立體阻礙伯胺是胺基酸。在再一個進一步的實施方案中，該胺基酸是天然存在的胺基酸。在又一個進一步的實施方案中，該天然存在的胺基酸選自由組胺酸、丙胺酸苯丙胺酸、丙胺酸、麩胺酸、天冬胺酸、麩醯胺酸、白胺酸、甲硫胺酸、天門冬醯胺酸、酪胺酸、蘇胺酸、異白胺酸白胺酸、色胺酸、甲硫胺酸和纈胺酸組成的組；再進一步，該天然存在的胺基酸是白胺酸、異白胺酸白胺酸、丙胺酸或甲硫胺酸；在另一個實施方案中，該天然存在的胺基酸是白胺酸或甲硫胺酸；又進一步，該天然存在的胺基酸是白胺酸。在另一個實施方案中，立體阻礙伯胺是非天然存在的胺基酸或胺基酸衍生物(例如1-氨基環己烷羧酸、羊毛硫胺酸或茶胺酸)。在一個進一步的實施方案中，該立體阻礙伯胺是環己胺、2-甲基丁胺或聚葡萄胺糖。

在其他的實施方案中，提供了含有藥學上可接受的載體、利那洛肽、選自Mg²⁺、Ca²⁺、Zn²⁺、Mn²⁺、K⁺、Na⁺或Al³⁺的陽離子(例如選自Zn²⁺、Mg²⁺或Ca²⁺的二價陽離子)和立體阻礙伯胺的藥物組合物。在一個實施方案中，該陽離子是Ca²⁺。在另一個實施方案中，該陽離子是Mg²⁺、Ca²⁺、Zn²⁺、Mn²⁺、K⁺、Na⁺或Al³⁺中的兩個或三個的混合物(例如Zn²⁺、Mg²⁺或Ca²⁺中的兩個或三個的混合物)。在一個進一步的實施方案中，該藥物組合物進一步包括藥學上可接受的粘合劑，和/或藥學上可接受的滑動劑、潤滑劑或起滑動劑和潤滑劑兩者作用的添加劑，和/或抗氧化劑。在一個進一步的實施方案中，該立體阻礙伯胺是胺基酸。在再一個進一步的實施方案中，該胺基酸是天然存在的胺基酸。在又一個進一步的實施方案中，該天然存在的胺基酸選自由組胺酸、丙胺酸苯丙胺酸、丙胺酸、麩胺酸、天冬胺酸、麩醯胺酸、白胺酸、甲硫胺酸、天門冬醯胺酸、酪胺酸、蘇胺酸、異白胺酸白胺酸、色胺酸、甲硫胺酸和纈胺酸組成的組；再進一步，該天然存在的胺基酸是白胺酸、異白胺酸白胺酸、丙胺酸或甲硫胺酸；在另一個實施方案中，該天然存在的胺基酸是白胺酸或甲硫胺酸；又進一步，該天然存在的胺基酸是白胺酸。在另一個實施方案中，該立體阻礙伯胺可以是多於一個立體阻礙伯胺的混合物。例如，該立體阻礙伯胺可以是兩個或更多個立體阻礙伯胺的混合物，例如兩個或更多個胺基酸的混合物。

在一些情況下，應用於載體的水溶液中的陽離子：立體阻礙伯胺：利那洛肽(例如Ca²⁺：白胺酸：利那洛肽)的莫耳比是5-100:5-50:1。可預期陽離子：立體阻礙伯胺(例如Ca²⁺：白胺酸)的莫耳比等於或大於2:1(例如在5:1和2:1之間)。因此，在一些情況下，應用於載體的陽離子：立體阻礙伯胺：利那洛肽(例如Ca²⁺：白胺酸：利那洛肽)的莫耳比是100:50:1、100:30:1、80:40:1、80:30:1、80:20:1、60:30:1、60:20:1、50:30:1、50:20:1、40:20:1、20:20:1、10:10:1、10:5:1或5:10:1。當粘合劑(例如甲基纖維素)存在于應用於載體的利那洛肽溶液中時，其可以按重量計0.5%-2.5%(例如0.7%-1.7%或0.7%-1%或1.5%或0.7%)存在。

應用於給定重量的填充劑(例如微晶纖維素)的利那洛肽的重量可從約0.02:100到約2.67:100變化。因此，約0.05mg至約6.0mg的利那洛肽可應用於225mg的填充劑。在一個進一步的實施方案中，應用於給定重量的填充劑的利那洛肽的重量是約0.05mg至約2.0mg的利那洛肽(例如，對於225mg的填充劑，0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7mg肽)。

在不同的實施方案中：立體阻礙伯胺是胺基酸(例如天然存在的胺基酸或選自組胺酸、丙胺酸苯丙胺酸、丙胺酸、麩胺酸、天冬胺酸、麩醯胺酸、甲硫胺酸、天門冬醯胺酸、酪胺酸、蘇胺酸、白胺酸、異白胺酸白胺酸、色胺酸或纈胺酸的天然存在的胺基酸)。在其他的情況下，該位元阻伯胺是非天然存在的胺基酸或胺基酸衍生物(例如羊毛硫胺酸、茶胺酸或1-氨基環己烷)。在其他的情況下，位元阻伯胺是氨基糖(例如聚葡萄胺糖或葡糖胺)。

在一些情況下，位元阻伯胺具有式：，其中R₁、R₂和R₃獨立地選自：H、C(O)OH、C1-C6烷基、C1-C6烷基醚、C1-C6烷基硫醚、C1-C6烷基羧酸、C1-C6烷基羧基醯胺和烷基芳基，其中任何基團可單個或多個鹵素或氨基取代，且條件是R₁、R₂和R₃中不多於2個是H。在一個進一步的實施方案中，R₁、R₂和R₃中不多於1個是H。

在不同的情況下：抗氧化劑選自BHA(丁基化羥基苯甲醚)、BHT(丁化羥基甲苯)、維生素E、沒食子酸丙酯、抗壞血酸及其鹽或酯、生育酚及其酯、α-硫辛酸、β-胡蘿蔔素；藥學上可接受的粘合劑是聚乙烯醇或聚乙烯吡咯烷酮；藥學上可接受的粘合劑選自：澱粉(例如玉米澱粉、預糊化馬鈴薯澱粉、米澱粉、小麥澱粉和澱粉乙醇酸鈉)、麥芽糖糊精或纖維素醚(例如甲基纖維素、乙基纖維素、羧甲基纖維素、羥乙基纖維素、羥乙基甲基纖維素、羥丙基纖維素和羥丙基甲基纖維素)；藥學上可接受的填充劑是纖維素(例如微細纖維素(microfine cellulose)或微晶纖維素，諸如Celphere CP-305或Avicel)；藥學上可接受的填充劑是糖或糖醇(例如甘露醇、異麥芽酮糖醇(isomalt)、山梨醇、右旋糖、木糖醇、蔗糖和乳糖)；該填充劑包括具有50μm到1000μm之間的平均直徑的顆粒；潤滑劑和/或滑動劑選自：滑石、白胺酸、硬脂酸鎂、硬脂酸和聚乙烯醇；並且潤滑劑和/或滑動劑選自：硬脂酸鈣、礦物油、植物油、聚乙二醇(PEG；例如在室溫下是液體或固體的PEG)、苯甲酸鈉和十二烷基硫酸鈉。

在一些情況下，在製備該調配物的方法中使用的利那洛肽溶液具有低於7的pH(例如1和3之間的pH，或約1.5和約2.5之間的pH)。pH可用，例如磷酸調節。在一些情況下，緩衝該溶液。可使用不同的藥學上可接受的緩衝液(例如磷酸鹽緩衝液)。

在一些情況下，在製備該調配物的方法中使用的利那洛肽溶液包含陽離子(例如CaCl₂)和立體阻礙伯胺(例如白胺酸)。

在一些情況下，該利那洛肽溶液包含CaCl₂和白胺酸；粘合劑是甲基纖維素；填充劑是微晶纖維素；滑動劑和/或潤滑劑包括滑石或白胺酸。

還提供通過本文描述的方法中的任何一個製備的藥物組合物。

另一方面，公開了含有藥學上可接受的載體、利那洛肽和選自(i)選自Mg²⁺、Ca²⁺、Zn²⁺、Mn²⁺、K⁺、Na⁺或Al³⁺的陽離子，或(ii)立體阻礙伯胺的一個或多個劑的藥物組合物。在一些實施方案中，藥物組合物含有至少一種陽離子和至少一種立體阻礙伯胺。

還描述了使用藥物組合物治療各種胃腸病症的方法。

含有利那洛肽的口服組合物可用於治療各種胃腸病症。在不同的實施方案中，患者患有胃腸病症；患者患有選自由以下病症組成的組的病症：胃腸動力障礙、慢性腸道假性阻塞、結腸假性梗阻、克隆氏症、十二指腸胃反流、消化不良、功能性消化不良、非潰瘍性消化不良、功能性胃腸障礙、功能性胃灼熱、胃食管反流病(GERD)、胃輕癱、腸道激躁症、術後腸梗阻、潰瘍性結腸炎、慢性便秘、便秘、與便秘相關的疼痛、以及與便秘相關的病症和疾患(例如與使用鴉片止痛藥相關的便秘、外科手術後的便秘、與精神病相關的便秘，以及本文描述的其他疾患和病症)；患者患有胃腸動力障礙、慢性腸道假性阻塞、結腸假性梗阻、克隆氏症、十二指腸胃反流、消化不良、功能性消化不良、非潰瘍性消化不良、功能性胃腸障礙、功能性胃灼熱、胃食管反流病(GERD)、胃輕癱、炎性腸病、腸道激躁症(例如腹瀉型腸道激躁症(d-IBS)、便秘型腸道激躁症(c-IBS)和/或交替型腸道激躁症(a-IBS))、術後腸梗阻、潰瘍性結腸炎、慢性便秘、便秘、與便秘相關的疼痛、以及與便秘相關的病症和疾患(例如與使用鴉片止痛藥相關的便秘、外科手術後的便秘、與精神病相關的便秘，以及本文描述的其他疾患和病症)；根據羅馬準則(例如Rome II)，患者已被診斷為功能性胃腸障礙；根據羅馬準則(例如Rome II)，患者已被診斷為腸道激躁症(例如腹瀉型腸道激躁症、便秘型腸道激躁症和/或交替型腸道激躁症)。

用於成人的利那洛肽的口服劑量範圍一般每天25μg至6mg。在一個進一步的實施方案中，口服劑量範圍是每天25μg至2mg。在一些實施方案中，用於成人的口服劑量範圍是每天50μg至1mg(例如50μg、67.5μg、100μg、133μg、150μg、200μg、250μg、266μg、300μg、350μg、400μg、450μg、500μg、550μg、600μg、650μg、700μg、750μg、800μg、850μg、900μg、950μg或1mg)。在進一步的實施方案中，口服劑量範圍是每天100μg至600μg。在其他的實施方案中，利那洛肽的口服劑量是每天50μg、67.5μg、100μg、133μg、150μg、200μg、266μg、300μg、400μg、500μg或600μg。在一個實施方案中，將利那洛肽組合物提供為分離的單位、單位劑型(例如片劑、膠囊、小藥囊(sachet))，其在這種劑量或多個這種劑量下是有效的。在某些實施方案中，單位劑型和日常劑量是相等的。在不同的實施方案中，單位劑型在一天的任何時間伴隨食物施用，在一天的任何時間不伴隨食物施用，在過夜禁食後伴隨食物(例如伴隨早餐)施用。在不同的實施方案中，單位劑型一天施用1次、一天2次或一天3次。單位劑型可任選地包括其他的添加劑。在一些實施方案中，一個、兩個或三個單位劑型將含有日常口服劑量的利那洛肽。施用於患者的化合物的精確量將由巡診醫生負責。然而，所用的劑量將依賴於許多因素，包括患者的年齡和性別、所治療的具體病症及其嚴重性。

在一個實施方案中，提供了治療需要其的成年患者的便秘型腸道激躁症(IBS-c)的方法，其包括每日一次向患者施用有效量的本文描述的藥物組合物。在不同的實施方案中，該藥物組合物包括每天每單位劑量133μg或266μg利那洛肽。在其他的實施方案中，施用藥物組合物至少一天、兩天、三天、四天、五天、六天、一星期、二星期、三星期、四星期或更長的一段時期。在一些實施方案中，用利那洛肽組合物治療改善了選自以下的至少一種症狀：緩解的腹痛、一星期內完全自發性排便(CSBM)次數的增加、一星期內自發性排便(SBM)次數的增加、改善的糞便稠度(stool consistency)、緩解的排便費力(straining)、緩解的腹部不適、緩解的胃氣脹或緩解的IBS-c症狀的嚴重性。

在一個實施方案中，提供了治療需要其的成年患者的慢性便秘的方法，其包括每日一次向患者施用有效量的本文描述的藥物組合物。在不同的實施方案中，該藥物組合物包括每天每單位劑量133μg或266μg利那洛肽。在其他的實施方案中，施用藥物組合物至少一天、兩天、三天、四天、五天、六天、一星期、二星期、三星期、四星期或更長的一段時期。在一些實施方案中，用利那洛肽組合物治療改善了選自以下的至少一種症狀：一星期內完全自發性排便(CSBM)次數的增加、一星期內自發性排便(SBM)次數的增加、改善的糞便稠度、緩解的排便費力、緩解的腹部不適、緩解的胃氣脹或緩解的便秘的嚴重性。

每次BM的糞便稠度可通過7分Bristol糞便量表(BSFS)(1=硬塊，2=多塊香腸狀、3=破裂的香腸狀、4=平滑的香腸狀，5=軟塊，6=糊狀，7=水樣)監測。排便費力可通過7分通過容易量表(Ease of Passage Scale)(1=需要人工嵌塞解除/灌腸，2=嚴重的排便費力，3=中度的排便費力，4=輕微的排便費力，5=無排便費力，6=急迫(urgency)，7=失禁)來監測。CSBM可通過SBM後完全排空的感覺測量(是/否)。腹部不適、胃氣脹和便秘的嚴重性可使用，例如5分順序量表(1=無，2=輕微，3=中度，4=嚴重，5=非常嚴重)測量。

本發明的陽離子可提供為藥學上可接受的鹽，即具有合適的反離子的陽離子。可用於本發明的藥學上可接受的鹽的實例包括，但不限於醋酸鎂、氯化鎂、磷酸鎂、硫酸鎂、醋酸鈣、氯化鈣、磷酸鈣、硫酸鈣、醋酸鋅、氯化鋅、磷酸鋅、硫酸鋅、醋酸錳、氯化錳、磷酸錳、硫酸錳、醋酸鉀、氯化鉀、磷酸鉀、硫酸鉀、醋酸鈉、氯化鈉、磷酸鈉、硫酸鈉、醋酸鋁、氯化鋁、磷酸鋁或硫酸鋁。在一些實施方案中，藥學上可接受的鹽包括氯化鈣、碳酸鈣、醋酸鈣、氯化鎂、醋酸鎂、醋酸鋅和氯化鋅。在進一步的實施方案中，可使用的藥學上可接受的鹽是氯化鈣、氯化鎂和醋酸鋅。

如本文所用，術語「粘合劑」指可用於本發明的實踐的任何藥學上可接受的粘合劑。藥學上可接受的粘合劑的實例包括但不限於澱粉(例如玉米澱粉、馬鈴薯澱粉和預糊化澱粉(例如Colorcon,Ltd.出售的STARCH 1500和STARCH 1500 LM)以及其他澱粉)、麥芽糖糊精、明膠、天然和合成樹膠(諸如阿拉伯樹膠)、粉狀黃蓍膠、瓜爾膠、纖維素及其衍生物(例如甲基纖維素、羥乙基纖維素、羥乙基甲基纖維素、羥丙基纖維素和羥丙基甲基纖維素(羥丙甲纖維素)、乙基纖維素、醋酸纖維素、羧甲基纖維素鈣、羧甲基纖維素鈉、羧甲基纖維素、微晶纖維素(例如FMC Corporation,Marcus Hook,PA,USA出售的AVICEL^TM，諸如AVICEL-PH-101^TM、-103^TM和-105^TM))、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮(例如聚乙烯吡咯烷酮K30)及其混合物。

如本文所用，術語「填充劑」指可用於本發明的實踐的任何藥學上可接受的填充劑。藥學上可接受的粘合劑的實例包括但不限於滑石、碳酸鈣(例如顆粒或粉末)、磷酸氫鈣、磷酸三鈣、硫酸鈣(例如顆粒或粉末)、微晶纖維素(例如Avicel PH101或Celphere CP-305)、粉狀纖維素、葡萄糖結合劑、高嶺土、甘露醇、矽酸、山梨醇、澱粉(例如Starch 1500)、預糊化澱粉、乳糖、葡萄糖、果糖、半乳糖、海藻糖、蔗糖、麥芽糖、異麥芽酮糖醇、棉子糖、麥芽糖醇、松三糖、水蘇糖、乳糖醇、直輝中基性岩(palatinite)、木糖醇、肌醇及其混合物。

可特別用於用利那洛肽包衣的藥學上可接受的填充劑的實例包括但不限於滑石、微晶纖維素(例如Avicel PH101或Celphere CP-305)、粉狀纖維素、葡萄糖結合劑、高嶺土、甘露醇、矽酸、山梨醇、澱粉、預糊化澱粉、乳糖、葡萄糖、果糖、半乳糖、海藻糖、蔗糖、麥芽糖、異麥芽酮糖醇、磷酸氫鈣、棉子糖、麥芽糖醇、松三糖、水蘇糖、乳糖醇、直輝中基性岩、木糖醇、甘露醇、肌醇及其混合物。

如本文所用，術語「添加劑」指任何藥學上可接受的添加劑。藥學上可接受的添加劑，包括但不限於崩解劑、分散添加劑、潤滑劑、滑動劑、抗氧化劑、包衣添加劑、稀釋劑、表面活性劑、調味添加劑、濕潤劑、吸收促進添加劑、控釋添加劑、抗結塊添加劑、抗微生物劑(例如防腐劑)、著色劑、乾燥劑、增塑劑和染料。

如本文所用，「賦形劑」是任何藥學上可接受的添加劑、填充劑、粘合劑或劑。

如本文所用，「純化的利那洛肽」是純度超過或等於90%或純度超過或等於95%的利那洛肽或其藥學上可接受的鹽。在一些實施方案中，如在本文描述的方法和組合物中使用的利那洛肽是純化的。利那洛肽純度，例如可使用實施例21中所描述的反相HPLC通過利那洛肽的色譜純度來測量。利那洛肽測定[w/w]，例如可通過使用具有經用實施例21所描述的參考標準外部校準定量的反相HPLC來確定。

一方面，藥物組合物可通過將包括利那洛肽或其藥學上可接受的鹽的溶液噴灑到藥學上可接受的填充劑上以產生利那洛肽包衣的填充劑來製備。在一個實施方案中，該方法包括：(a)提供溶液，例如水溶液(「包衣溶液」)，其包括：(i)利那洛肽或其藥學上可接受的鹽；(ii)選自Mg²⁺、Ca²⁺、Zn²⁺、Mn²⁺、K⁺、Na⁺或Al³⁺的陽離子和/或立體阻礙伯胺(例如白胺酸)以及，任選地(iii)藥學上可接受的粘合劑；以及(b)將包衣溶液應用於藥學上可接受的填充劑以產生多肽包衣的填充劑(例如通過用包衣溶液噴灑、混合或包衣藥學上可接受的填充劑)。該方法可任選地包括以下步驟中的一個或多個：(i)將多肽包衣的填充劑與藥學上可接受的滑動劑、藥學上可接受的潤滑劑或起滑動劑和潤滑劑兩者作用的藥學上可接受的添加劑混合；(ii)將多肽包衣的填充劑與沒有多肽包衣的填充劑混合，(iii)將多肽包衣的填充劑與其他的添加劑混合；以及(iv)將藥學上可接受的包衣添加劑應用於多肽包衣的填充劑。最終的藥物組合物可被裝入膠囊(例如明膠膠囊)或用於形成片劑。

在另一個實施方案中，藥物組合物通過噴霧乾燥製備，噴霧乾燥是用於製備藥物微粒(例如微膠囊或微球)的技術。噴霧乾燥的肽當溶解時，一般保留它們的生物活性，並且可具有有用的物理特性，包括均勻的顆粒大小和球形。此外，由噴霧乾燥製備的微粒通常是自由流動的，其有助於藥物生產過程，例如形成片劑和填充膠囊。噴霧乾燥過程也是有用的，因為它們可以容易地按比例增加，以便臨床和商業生產。

因此，本公開特徵為製備含有利那洛肽或其藥學上可接受的鹽的藥物組合物的方法，該方法包括：(a)提供溶液，例如水溶液或有機溶液(「包衣溶液」)，其包括：(i)利那洛肽或其藥學上可接受的鹽；以及(ii)選自Mg²⁺、Ca²⁺、Zn²⁺、Mn²⁺、K⁺、Na⁺或Al³⁺的陽離子和/或立體阻礙伯胺(例如白胺酸)，以及(b)將含有利那洛肽的溶液噴霧乾燥以產生微粒。含有利那洛肽的溶液可任選地包括聚合物(諸如本文描述的粘合劑中的一個或多個)、脂質或磷脂，和/或填充劑，諸如甘露醇。該方法可任選地包括以下的一個或多個額外步驟：(i)將利那洛肽微粒與藥學上可接受的滑動劑、藥學上可接受的潤滑劑或起滑動劑和潤滑劑兩者作用的藥學上可接受的添加劑混合；(ii)將微粒與填充劑混合，和/或(iii)將微粒與其他的添加劑混合。最終的藥物組合物可被裝入膠囊(例如明膠膠囊)或用於形成片劑。

在其他的實施方案中，藥物組合物通過溶液(例如水溶液或有機溶液)的噴霧冷凍乾燥、超臨界流體加工或凍乾來製備，所述溶液包含：(i)利那洛肽或其藥學上可接受的鹽；以及(ii)選自Mg²⁺、Ca²⁺、Zn²⁺、Mn²⁺、K⁺、Na⁺或Al³⁺的陽離子和/或立體阻礙伯胺(例如白胺酸)。

在一些實施方案中，提供用於口服施用的固體形式的利那洛肽組合物。這種形式的實例包括但不限於片劑、小藥囊、丸劑、膠囊劑或粉劑。在一些實施方案中，組合物可用於產生單位劑型，例如片劑、膠囊劑、小藥囊或丸劑。口服施用的組合物可包括，例如粘合劑、潤滑劑、惰性稀釋劑、潤滑、表面活性或分散添加劑、調味添加劑和濕潤劑。口服施用的調配物(諸如片劑)可任選地被包衣或刻痕，並可以被配製以提供其中利那洛肽的緩釋、延遲釋放或控釋。利那洛肽可與其他的藥物共同施用或共同配製。在一個實施方案中，利那洛肽可與用於治療胃腸病症的其他藥物共同施用。利那洛肽組合物還可用於治療胃腸道外的病症，諸如充血性心力衰竭和良性前列腺肥大。

組合物可包括，例如不同的其他溶劑、分散劑、包衣物質、吸收促進添加劑、控釋添加劑以及一種或多種惰性添加劑(其包括，例如澱粉、多元醇、粒化添加劑、微晶纖維素、稀釋劑、潤滑劑、粘合劑、崩解添加劑以及類似的添加劑)等等。必要時，公開的組合物的片劑劑型可通過標注含水技術或無水技術包衣。組合物還可包括，例如抗結塊添加劑、防腐劑、增甜添加劑、著色劑、調味劑、乾燥劑、增塑劑、染料以及類似物質。

合適的崩解劑包括，例如瓊脂-瓊脂、碳酸鈣、微晶纖維素、交聯羧甲基纖維素鈉、交聯聚維酮、聚維酮、波拉克林鉀、澱粉乙醇酸鈉、馬鈴薯或木薯澱粉、其他的澱粉、預糊化澱粉、粘土、其他的褐藻膠、其他的纖維素、樹膠及其混合物。

合適的潤滑劑包括，例如硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、礦物油、輕礦物油、甘油、山梨醇、甘露醇、聚乙二醇、其他的二醇、硬脂酸、十二烷基硫酸鈉、滑石、氫化植物油(例如花生油、棉籽油、葵花油、麻油、橄欖油、玉米油和豆油)、硬脂酸鋅、油酸乙酯、月桂酸乙酯、瓊脂、syloid矽膠(AEROSIL 200,W.R. Grace Co.,Baltimore,MD USA)、合成二氧化矽的凝固氣溶膠(Evonik Degussa Co.,Plano,TX USA)、火成二氧化矽(CAB-O-SIL,Cabot Co.,Boston,MA USA)及其混合物。

合適的滑動劑包括，例如白胺酸、膠態二氧化矽、三矽酸鎂、粉狀纖維素、澱粉、滑石和磷酸三鈣。

合適的抗結塊添加劑包括，例如矽酸鈣、矽酸鎂、二氧化矽、膠態二氧化矽、滑石及其混合物。

例如可用作利那洛肽組合物的防腐劑的合適的抗微生物添加劑包括，例如苯紮氯銨、苄索氯銨、苯甲酸、苄醇、對羥基苯甲酸丁酯、西吡氯銨、甲酚、氯丁醇、脫氫醋酸、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸甲酯、苯酚、苯乙醇、苯氧乙醇、乙酸苯汞、硝酸苯汞、山梨酸鉀、對羥基苯甲酸丙酯、苯甲酸鈉、脫氫醋酸鈉、丙酸鈉、山梨酸、硫柳汞(thimersol)、thymo及其混合物。

合適的包衣添加劑包括，例如羧甲基纖維素鈉、醋酸鄰苯二甲酸纖維素、乙基纖維素、明膠、藥用釉料(pharmaceutical glaze)、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、鄰苯二甲酸羥丙基甲基纖維素、甲基纖維素、聚乙二醇、聚醋酸乙烯鄰苯二甲酸酯、紫膠、蔗糖、二氧化鈦、巴西棕櫚蠟、微晶蠟及其混合物。合適的保護性包衣包括Aquacoat(例如Aquacoat乙基纖維素水性分散液，15% w/w,FMC Biopolymer,ECD-30)、Eudragit(例如Eudragit E PO PE-EL,Roehm Pharma Polymers)和Opadry(例如Opadry AMB dispersion,20% w/w,Colorcon)。

在某些實施方案，利那洛肽組合物的合適添加劑包括蔗糖、滑石、硬脂酸鎂、交聯聚維酮或BHA中的一個或多個。

在某些實施方案，術語「95%」可以是95.0%，術語「90%」可以是90.0%，術語「10%」可以是10.0%，術語「9%」可以是9.0%，術語「8%」可以是8.0%，術語「7%」可以是7.0%，術語「6%」可以是6.0%，術語「5%」可以是5.0%，術語「4%」可以是4.0%，術語「3%」可以是3.0%，術語「2%」可以是2.0%，術語「1%」可以是1.0%。

在某些實施方案中，提供單位劑型的利那洛肽組合物。在一些實施方案中，單位劑型是膠囊劑、片劑、小藥囊、丸劑或粉劑。在一個這種實施方案中，單位劑型是膠囊劑或片劑。這種單位劑型可裝入容器中，諸如但不限於，紙盒或硬紙盒，玻璃或塑膠瓶或罐、可重複密封的包(例如，以容納「再次填充」的片劑以便裝入不同的容器)或具有個體劑量的泡包裝以根據治療方案壓到包裝外。在單一包裝中可一起使用多於一個容器以提供單一劑型是可行的。例如，片劑或膠囊劑可裝於瓶中，其轉而裝入盒中。在一些實施方案中，單位劑型提供在進一步含有乾燥劑的容器中。在一個進一步的實施方案中，在含有乾燥劑的容器(例如瓶、罐或可重複密封的包)中提供單位劑型，例如一些片劑或膠囊劑。在一個進一步的實施方案中，含有單位劑型的容器和施用或劑量說明書一起包裝。在某些實施方案中，在試劑盒中提供利那洛肽組合物。本文描述的利那洛肽組合物以及組合治療劑可包裝為試劑盒，其包括單一或多劑量的兩種或多種藥劑，它們每個單獨包裝或配製，或單一或多劑量的兩種或多種藥劑組合包裝或配製。因此，利那洛肽組合物可存在於第一容器中，且試劑盒可任選地包括在第二容器中的一個或多個藥劑。將一個或多個容器裝入包裝中，並且該包裝可任選地包括施用或劑量說明書。

以下的實施例僅示例本發明，並且不應該理解為以任何方式限制本發明的範圍，因為當閱讀本公開後，本發明包含的許多變化方案和等同方案對本領域技術人員將是顯然的。

可使用本領域已知的標準技術製備和純化利那洛肽或其藥學上可接受的鹽，所述技術例如化學合成或重組表達，並隨後使用標準技術純化。

配製方案A

包衣溶液的製備：將約32g至42g淨化水與鹽酸混合以製備具有1.5到2.0之間的pH的溶液。如果使用，將陽離子定量加入溶液中以提供所需的濃度，並將溶液混合足夠的時間以產生澄清的溶液。如果使用，將立體阻礙伯胺定量加入溶液中以提供所需的濃度，並將溶液混合足夠的時間以產生澄清的溶液。如果需要，則加入其他的添加劑，諸如抗氧化劑。測定溶液的pH，並且必要時加入鹽酸以產生具有1.5到2.0之間的pH的溶液。然後，將粘合劑加入到溶液中，然後將混合物攪拌足夠的時間以產生澄清溶液。將所需量的利那洛肽加入到溶液中，並混合30-100分鐘以提供包衣溶液。

活性小珠的製備：將約30-36g的乾燥微晶纖維素小珠加入到微型柱流化床包衣機(Mini Column Fluid Bed Coater)。在塗層(layering)前使微晶纖維素小珠流化並加熱。然後，用包衣溶液對小珠塗層。通過控制入口溫度、噴霧速率、霧化壓力和空氣體積，將噴霧溫度控制在24℃和55℃之間。在全部的包衣溶液對小珠塗層後，乾燥小珠。這一過程的產物稱為活性小珠。

具有保護性包衣的活性小珠的製備：將約35g的活性小珠加入到微型柱流化床包衣機。在用Aquacoat(例如Aquacoat乙基纖維素水性分散液(Aquaeous Dispersion)，15% w/w,FMC Biopolymer,ECD-30)、Eudragit(例如Eudragit E PO PE-EL,Roehm Pharma Polymers)或Opadry(例如Opadry AMB分散體，20% w/w,Colorcon)包衣前將活性小珠流化並加熱。隨後，用包衣溶液對小珠塗層。通過控制入口溫度、噴霧速率、霧化壓力和空氣體積，將噴霧溫度控制在24℃和55℃之間。在全部的包衣溶液對小珠塗層後，乾燥小珠。

配製方案B

包衣溶液的製備：將約8.3kg淨化水與鹽酸混合以製備具有1.5到2.0之間的pH的溶液。如果使用，將陽離子定量加入溶液中以提供所需的濃度，並將溶液混合足夠的時間以產生澄清的溶液。如果使用，將立體阻礙伯胺定量加入溶液中以提供所需的濃度，並將溶液混合足夠的時間以產生澄清的溶液。然後必要時，加入其他的添加劑，諸如抗氧化劑。然後，將粘合劑加入到溶液中，然後將溶液混合足夠的時間以產生澄清溶液。測定溶液的pH，並且必要時加入鹽酸以產生具有1.5到2.0之間的pH的溶液。這是溶液1。將約8.3kg淨化水與鹽酸混合以製備具有1.5到2.0之間的pH的溶液。將所需量的利那洛肽加入到溶液中，並混合10至30分鐘。測定溶液的pH，並且必要時加入鹽酸以產生具有1.5到2.0之間的pH的溶液。這是溶液2。然後將溶液1和溶液2混合到一起。測定溶液的pH，並且必要時加入鹽酸以產生具有1.5到2.0之間的pH的溶液。這是包衣溶液。

活性小珠的製備：將約24.19kg的微晶纖維素小珠加入到Glatt GPCG-30流化床的Wurster柱。將微晶纖維素小珠流化，並加熱至45-47℃的產物溫度。然後用包衣溶液對小珠塗層。隨後，用包衣溶液對小珠塗層。通過控制入口溫度、噴霧速率、霧化壓力和空氣體積，將產物噴霧溫度控制在37℃和47℃之間。在全部的包衣溶液對小珠塗層後，用37℃到47℃的產物乾燥溫度乾燥小珠。這一過程的產物稱為活性小珠。

實施例1-15：利那洛肽調配物的製備

實施例1-15的利那洛肽調配物主要按照配製方案A所描述地來製備，其中表1提供陽離子、立體阻礙伯胺、粘合劑、利那洛肽和小珠的量，而表2提供小珠的包衣條件：

*「陽離子」指本實施例中使用的鹽中含有的二價陽離子，「胺」指立體阻礙伯胺，[]指陽離子和/或胺與利那洛肽的莫耳比。

**在本實施例和所有以下的實施例中的利那洛肽的量根據肽含量和色譜純度所確定，如為每個生產批次的利那洛肽活性藥物成分(API)所提供的分析證明書上所列的。

實 施例16：利那洛肽調配物的製備

實施例16的利那洛肽調配物主要按照配製方案B所描述地來製備，其中表3提供陽離子、立體阻礙伯胺、粘合劑、利那洛肽和小珠的量，而表4提供小珠的包衣條件：

實 施例17：利那洛肽調配物的製備

實施例17的利那洛肽調配物主要按照配製方案A所描述地來製備，除了調配物含有22.96mg丁化羥基苯甲醚(BHA)，其中表5提供陽離子、立體阻礙伯胺、粘合劑、利那洛肽和小珠的量，而表6提供小珠的包衣條件：

實 施例18：含有利那洛肽調配物的膠囊的製備

活性小珠中的利那洛肽含量可按照實施例21所描述地或通過其他相當的方法測量。

為了形成適合於口服施用的膠囊，活性小珠的合適的量用於填充明膠膠囊(例如尺寸2明膠膠囊)。活性小珠的合適的量可以每個膠囊含50μg至2mg的利那洛肽，且範圍±5%。在一些實施方案中，活性小珠的利那洛肽的合適的量可以是50μg、67.5μg、100μg、133μg、150μg、200μg、266μg、300μg、400μg、500μg、600μg、700μg、800μg、900μg、1mg、2mg、4mg或6mg。在一個特別的實施方案中，活性小珠的利那洛肽的合適的量是67.5μg、100μg、133μg、150μg、200μg、266μg、300μg、400μg、500μg、600μg。在一個更加特別的實施方案中，活性小珠的利那洛肽的合適的量是每個膠囊67.5μg、133μg、150μg、266μg或300μg。

在另一個實施方案中，將填充所需數量的明膠膠囊的合適量的活性小珠裝入容器中。如果需要，可將一種或多種藥學上可接受的填充劑或其他的藥學上可接受的添加劑加入到容器中。在一些實施方案中，填充劑或添加劑是滑石、白胺酸、微晶纖維素或甘露醇。將容器的內含物混合，並將混合物用於與含有利那洛肽的合適量的活性小珠一起填充明膠膠囊(例如每個膠囊50μg至2mg利那洛肽，且範圍±5%)。

在一個可選的實施方案中，合適量的活性小珠用於填充明膠膠囊，並將一種或多種藥學上可接受的填充劑或其他的藥學上可接受的添加劑添加到明膠膠囊中。

實施例19：含有利那洛肽調配物的膠囊的製備

包衣溶液的製備：首先，將41.98g淨化水與1.13g鹽酸混合，從而產生具有1.5到2.0之間的pH的溶液。然後，將7.49g的氯化鈣二水合物和6.68g的白胺酸加入到溶液中，然後將其混合30分鐘，從而產生澄清的溶液。測定pH，並加入1.70g鹽酸以產生具有1.5到2.0之間的pH的溶液。然後，將13.27g的羥丙甲纖維素(羥丙基甲基纖維素；Dow Chemical Company；Midland,MI)加入到溶液中，並將混合物攪拌60分鐘以獲得澄清溶液。然後，將4.39g的利那洛肽加入到溶液中，並混合90分鐘。溶液的pH是1.73。這是包衣溶液。

活性小珠的製備：將674.5g微晶纖維素小珠(Celphere CP-305；Ashai Kasei Corporation(Tokyo;Japan))加入到Glatt GPCG-2流化床的Wurster柱。使微晶纖維素小珠流化，並在60℃的產物溫度下加熱30分鐘。然後，用包衣溶液對小珠塗層。通過80℃的入口溫度、5.0-11g/min的噴霧速率、2.0巴的霧化壓力和40至50m³h的空氣體積，將產物溫度控制在45℃和49℃之間。在全部的包衣溶液對小珠塗層後，用46.9℃至50.9℃的產物溫度將小珠乾燥10分鐘。這一過程的產物稱為活性小珠。

從按照上文描述製備的調配物提取的利那洛肽的反相液相色譜證明，提取的利那洛肽和利那洛肽參考標準展現出相同的保留時間，且配製過程的結果是純度沒有顯著變化。

為了形成膠囊，將49.50g的活性小珠加入到透明的包中。然後將0.25g通過60目篩子篩選的白胺酸加入該包。系住該包，並混合125輪，從而混合所有的材料。然後將0.25g通過60目篩子篩選的滑石加入該包。系住該包，並混合125輪，以混合所有的材料。一旦混合所有的材料，則混合物用於以227mg/膠囊(範圍±5%)的目標重量填充尺寸2的明膠膠囊。

實施例20：含有利那洛肽調配物的膠囊的製備

根據實施例16製備活性小珠。測定活性小珠的利那洛肽含量。根據活性小珠的測定，使用MG2 Futura包封機，將合適量的活性小珠(96mg-123mg)填充於尺寸2的明膠硬膠囊，以獲得300μg的利那洛肽濃度。

根據實施例15製備活性小珠。測定活性小珠的利那洛肽含量。根據活性小珠的測定，使用MG2 Futura包封機，將合適量的活性小珠(48mg-62mg)填充於尺寸2的明膠硬膠囊，以獲得150μg的利那洛肽濃度。

實施21：利那洛肽含量和純度的測量

利那洛肽含量和純度，以及利那洛肽相關物質的測量，可通過反相梯度液相色譜，使用帶有Chemstation Rev A.09.03軟體的Agilent Series 1100 LC系統或同等的系統來確定。使用YMC Pro^TM C18柱(尺寸：3.0×150mm,3.5um,120；Waters Corp.,Milford,MA)或相當的柱，並將其維持在40℃。流動相A(MPA)由含有0.1%三氟乙酸的水組成，而流動相B(MPB)由95%乙腈：5%含有0.1%三氟乙酸的水組成。用以下梯度完成利那洛肽及其相關物質的洗脫：28分鐘內從0%到47% MPB，隨後4分鐘內等速升至100% MPB，隨後在100% MPB下保持5分鐘以洗滌該柱。通過在1分鐘內回到0%的MPB，隨後在100% MPA下保持10分鐘，進行該柱的再平衡。流速0.6mL/min，且通過220nm UV完成檢測。

通過將利那洛肽膠囊的內含物加入到0.1N HCl以獲得20μg利那洛肽/mL的目標濃度，來製備用於分析的樣品。將100μL這一溶液注入柱。

通過確定製備的樣品中利那洛肽濃度，根據相似製備的利那洛肽外標，測量利那洛肽的含量。

通過HPLC分析利那洛肽的一個實例顯示於圖1，其中「氧化」指利那洛肽氧化產物，「甲醛亞胺」指利那洛肽甲醛亞胺產物，且「水解」指利那洛肽水解產物：

實施例22：利那洛肽調配物穩定性測試

對於實施例1-15和17的調配物，用約225mg的活性小珠填充明膠膠囊。將五個填充的膠囊裝入塑膠瓶中。該瓶含有1g至2g的乾燥劑，並且感應密封。將該瓶在40℃/75% RH下儲存六個月。

利那洛肽含量和純度，以及利那洛肽相關物質的量主要按照實施例21所描述或通過相當的方法來測量。結果在表7中提供。

對於實施例16的調配物，用約113mg的總小珠填充明膠膠囊。將35個填充的膠囊裝入塑膠瓶中。該瓶含有2g的乾燥劑，並且感應密封。將該瓶在40℃/75% RH下儲存一個月。

利那洛肽含量和純度，以及利那洛肽相關物質的量可主要按照實施例21所描述或通過相當的方法來測量。結果在表8中顯示。

實 施例23：利那洛肽水解產物的分離和製備

利那洛肽水解產物出現是由於7位的Asn轉化為Asp(利那洛肽的編號從N-末端Cys以1開始)。其結構描述如下：

使用標準固相肽合成技術，已經獨立地合成利那洛肽水解產物，用於確認身份。利那洛肽水解產物還可通過本領域已知的其他方法製備，例如通過使用色譜技術從利那洛肽製劑分離，或通過重組表達編碼利那洛肽水解產物(Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asp Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr)的核酸，任選地，隨後將半胱氨酸殘基氧化以形成二硫鍵。

實施例24：利那洛肽甲醛亞胺產物的分離和製備

甲醛亞胺產物在亞胺添加到N-末端Cys(Cys1)時經由甲醛介導的反應產生。一個提出的產物結構描述如下：

通過將利那洛肽與甲醛(1:5莫耳比)在室溫下，無水乙醇中反應4天，已經獨立地合成利那洛肽甲醛亞胺產物，用於確認身份。甲醛亞胺產物還可通過本領域已知的其他方法製備，例如通過使用色譜技術從利那洛肽製劑分離，或通過肽的化學合成或重組表達編碼利那洛肽的核酸，隨後如本文描述地甲醯化，或通過本領域已知的其他方法，任選地隨後將半胱氨酸殘基氧化以形成二硫鍵。

實施例25：利那洛肽氧化產物的分離和製備

利那洛肽氧化產物具有1542.8的分子量。氧化產物最可能在單個氧原子添加到利那洛肽的六個半胱氨醯硫中的一個時形成。一個潛在的產物結構描述如下，儘管本領域技術人員將瞭解，氧原子可連接於其他五個硫中的任何一個：

為支持這一判斷，已通過將利那洛肽與過氧化氫(3%水溶液)在室溫或40℃下反應至多24小時，來製備利那洛肽氧化產物。產生的產物被富集了1-10%的氧化產物。利那洛肽氧化產物還可通過本領域已知的其他方法來製備，例如通過使用色譜技術從利那洛肽製劑分離，或通過肽的化學合成或重組表達編碼利那洛肽的核酸，隨後將半胱氨酸殘基氧化以形成二硫鍵，隨後通過將利那洛肽與過氧化氫或相似的氧化試劑反應以形成利那洛肽氧化產物。

實施例26：利那洛肽片劑的形成 流化床制粒

將利那洛肽、CaCl₂、白胺酸和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)K30溶解於0.0001N HCl以形成包衣溶液(參見表9)。將異麥芽酮糖醇裝入流化床的投料缽(bowl)。隨著流化異麥芽酮糖醇粉末，藥物溶液以~10g/min速度，在~40℃的產物溫度下，頂部噴霧以用包衣溶液對粉末包衣。當噴霧完成時，將利那洛肽顆粒乾燥30分鐘，並取出產品。

磷酸二鈣或Avicel也用作流化床制粒的填充劑。

濕法制粒

秤取利那洛肽，並在攪拌下將其溶解於250g 0.1N HCl(pH 1.7)以形成溶液1(參見表10)。秤取CaCl₂和白胺酸，並在攪拌下將其溶解於100g 0.1N HCl以形成溶液2。攪拌下，將溶液1和溶液2混合到一起以形成包衣溶液。將Avicel加入到高剪切制粒機的投料缽。以500rpm混合下，將包衣溶液加入到Avicel。當添加溶液完成時，將顆粒混合，並切削1分鐘。將獲得的濕顆粒裝入流化床的投料缽，並乾燥15分鐘，然後取出利那洛肽顆粒。

在濕法制粒的方案中，CaCl₂和白胺酸與利那洛肽的莫耳比分別在60至100和30至50的範圍內調節。另外，在一個實施例中加入蔗糖。參見表11。

片劑配製

將利那洛肽顆粒與以下的賦形劑混合(參見表12)，並壓制成具有~4kp硬度的片劑

根據以上方案，異麥芽酮糖醇、澱粉1500或磷酸二鈣也用作片劑填充劑(參見表13)。

在40℃和75%相對濕度下儲存2星期後，表13中描述的所有片劑顯示出，利那洛肽的測定值超過90%。

實 施例27-53：利那洛肽調配物的製備

實施例27-53的利那洛肽調配物主要按照配製方案A和實施例1-15中所描述地來製備。利那洛肽包衣溶液含有0.7%粘合劑(w/v)，且包衣溶液按照實施例1-15中所描述地噴霧到Celphere CP-305小珠上。表14提供了陽離子、胺和/或其他賦形劑的類型，連同它們相對於利那洛肽的莫耳比，以及所用的粘合劑的類型，而表15提供小珠的包衣條件：

*「陽離子」指實施例使用的鹽中含有的陽離子，「胺」指立體阻礙伯胺，「莫耳比」指陽離子：胺：利那洛肽：添加劑(若適用)的莫耳比。

對於實施例32(藻酸鈣)、34(硬脂酸鈣)和43(CaCl₂：維生素E)，在小珠上噴霧期間出現加工問題。因此，將包衣溶液與Celphere小珠混合，並將小珠在託盤上乾燥。

實施例54：利那洛肽調配物穩定性測試

對於實施例27-53的調配物，用約225mg的活性小珠填充明膠膠囊(600μg利那洛肽/膠囊)。將五個填充的膠囊裝入塑膠瓶中。該瓶含有1g的乾燥劑，並且感應密封。將該瓶在40℃/75% RH下儲存三個月或六個月。

利那洛肽含量(μg/mg)和百分比色譜純度(%CP)主要按照實施例21所描述或通過相當的方法來測量。結果在表16A(三個月的穩定性)或表16B(六個月的穩定性)中提供。

*測定值[w/w初始%]的變化性反映小規模生產的這些膠囊批次的含量均一性失控。

認為，加工期間遇到的困難以及導致的對施例32、34和43改良的加工過程(參見上文)可解釋在這些樣品中觀察到的低穩定性。

實施例27-53在6個月的時間點處的色譜純度值表現出異常地低，特別相對於在這些樣品的三個月時間點處。穩定或去穩定效應的相對趨勢可通過對比作為內部參考實驗的實施例27和實施例31來建立，對它們而言，色譜純度值比已進行的其他研究(參見例如實施例2和9)中始終觀察到的值低約6-8%。在表16A中提供的相同調配物的三個月的資料顯示出更加典型的色譜純度值。因此，六個月時的低色譜純度值可能由於對這些特別的儲存條件六個月時的乾燥能力不足。這一假設由觀察到的並指示暴露於潮濕的雜質峰支持。

實施例55：25℃/60%RH下，24個月的利那洛肽調配物穩定性測試

對於實施例8-15和17的調配物，用約225mg的活性小珠填充明膠膠囊。將五個填充的膠囊裝入塑膠瓶中。該瓶含有1g的乾燥劑，並且感應密封。將該瓶在25℃/60% RH下儲存24個月。

利那洛肽含量和純度，以及利那洛肽相關物質的量主要按照實施例21所描述或通過相當的方法來測量。結果在表17中提供。

¹⁾對於實施例10，用額外的保護性包衣Aquacoat(Aquacoat乙基纖維素水性分散液，15% w/w,FMC Biopolymer,ECD-30)。

²⁾對於實施例10，用額外的保護性包衣Opadry(Opadry AMB分散體，20% w/w,Colorcon)。

³⁾對於實施例10，用額外的保護性包衣Eudragit(Eudragit EPO,Degussa,Roehm Pharma Polymers;SLS，硬脂酸)。

實施例56：利那洛肽片劑配製和穩定性測試

通過流化床制粒，主要按照實施例26所描述地，使用表18中描述的試劑製備活性利那洛肽顆粒。利那洛肽顆粒與表19中描述的賦形劑混合，並壓制成具有~4kp硬度的片劑。

將35個片劑包裝於具有5克乾燥劑的60cc的瓶中，並在40℃/75% RH下儲存至多3個月或在30℃/65% RH下儲存至多3個月。

利那洛肽含量和純度，以及利那洛肽相關物質的量主要按照實施例21所描述或通過相當的方法來測量。結果在表20中提供。

實 施例57：利那洛肽膠囊配製

實施例57的利那洛肽調配物主要按照實施例16所描述地來製備。表21提供完全利那洛肽小珠藥物塗層溶液的包衣溶液成分，和它們的理論重量(mg/g)和(kg/批)。表22提供製備利那洛肽活性小珠的成分和理論重量(mg/g)和(kg/批)。利那洛肽調配物包封於硬明膠膠囊，尺寸2(重量61mg)中，主要按照實施例20所描述。150μg利那洛肽膠囊含有56mg利那洛肽小珠(600μg利那洛肽/225mg小珠)，而300μg利那洛肽膠囊含有113mg利那洛肽小珠(600μg利那洛肽/225mg小珠)。

圖1為利那洛肽之HPLC分析實例。

(無元件符號說明)

Claims (35)

1. 一種固體藥物組合物，其包含藥學上可接受的黏合劑、利那洛肽(linaclotide)、選自Mg²⁺、Ca²⁺、Zn²⁺、Mn²⁺、K⁺、Na⁺或Al³⁺之陽離子及天然存在之胺基酸，其中該藥學上可接受的黏合劑選自聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮(聚維酮)、澱粉、麥芽糊精或纖維素醚。
2. 如請求項1之藥物組合物，其中該Mg²⁺、Ca²⁺、Zn²⁺、Mn²⁺、K⁺、Na⁺或Al³⁺以氯化鎂、氯化鈣、磷酸鈣、硫酸鈣、醋酸鋅、氯化錳、氯化鉀、氯化鈉或氯化鋁之形式提供。
3. 如請求項1或2之藥物組合物，其中該陽離子為Ca²⁺並且以氯化鈣之形式提供。
4. 如請求項1之藥物組合物，其中該天然存在之胺基酸係選自由組胺酸、苯丙胺酸、丙胺酸、麩胺酸、天冬胺酸、麩醯胺酸、白胺酸、甲硫胺酸、天門冬醯胺酸、酪胺酸、蘇胺酸、異白胺酸、色胺酸及纈胺酸組成之群。
5. 如請求項4之藥物組合物，其中該天然存在之胺基酸為白胺酸。
6. 如請求項1、2、4及5中任一項之藥物組合物，其進一步包含藥學上可接受的滑動劑、潤滑劑或作為滑動劑及潤滑劑之添加劑。
7. 如請求項1、2、4及5中任一項之藥物組合物，其進一步包含抗氧化劑或藥學上可接受的填充劑中之一或多者。
8. 如請求項1之藥物組合物，其中該藥學上可接受的黏合 劑為選自甲基纖維素、乙基纖維素、羧甲基纖維素、羥乙基纖維素、羥乙基甲基纖維素、羥丙基纖維素及羥丙基甲基纖維素之纖維素醚。
9. 如請求項7之藥物組合物，其中該藥學上可接受的填充劑為纖維素、異麥芽酮糖醇(isomalt)、甘露醇或磷酸氫鈣。
10. 如請求項9之藥物組合物，其中該纖維素選自微細纖維素及微晶纖維素。
11. 如請求項1、2、4、5及8中任一項之藥物組合物，其中該天然存在之胺基酸為白胺酸且白胺酸與利那洛肽之莫耳比為至少10：1。
12. 如請求項1、2、4、5及8中任一項之藥物組合物，其中該陽離子為Ca²⁺，該天然存在之胺基酸為白胺酸，且Ca²⁺與白胺酸之莫耳比為至少1：1。
13. 如請求項1、2、4、5及8中任一項之藥物組合物，其中該陽離子：天然存在之胺基酸：利那洛肽之莫耳比為40至100：20至50：1。
14. 如請求項1、2、4、5及8中任一項之藥物組合物，其中該陽離子為Ca²⁺，該天然存在之胺基酸為白胺酸，且Ca²⁺：白胺酸：利那洛肽之莫耳比為60：30：1。
15. 如請求項1、2、4、5及8中任一項之藥物組合物，其進一步包括(i)具有以下結構之水解產物 ，其佔該利那洛肽之重量之小於2重量%；或(ii)具有1542.8之分子量的利那洛肽氧化產物，其佔該利那洛肽之重量之小於2重量%。
16. 一種製備包含利那洛肽或其鹽之藥物組合物的方法，該方法包含：(a)提供水溶液，其包含：(i)利那洛肽或其藥學上可接受的鹽；(ii)選自Mg²⁺、Ca²⁺、Zn²⁺、Mn²⁺、K⁺、Na⁺或Al³⁺之陽離子或天然存在之胺基酸中之一或多者；以及(iii)視情況選用之藥學上可接受的黏合劑，其係選自聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮(聚維酮)、澱粉、麥芽糊精或纖維素醚；及(b)將該水溶液施加於藥學上可接受的填充劑以產生利那洛肽包衣之填充劑。
17. 如請求項16之方法，其中該水溶液係藉由噴霧乾燥而施加於該填充劑上。
18. 如請求項1、2、4、5及8中任一項之藥物組合物，其係用於治療選自於腸動力損傷、腸道激躁症、便秘、與便秘相關之疼痛、消化不良、胃輕癱、慢性腸道假性阻塞、克隆氏症(Crohn's disease)、潰瘍性結腸炎或炎性腸病的胃腸病症。
19. 如請求項18之藥物組合物，其中該腸道激躁症為便秘型 腸道激躁症或交替型腸道激躁症。
20. 如請求項18之藥物組合物，其中該腸道激躁症為便秘型腸道激躁症。
21. 如請求項18之藥物組合物，其中該便秘為慢性便秘、原發性便秘、術後腸梗阻或使用鴉片製劑引起的便秘。
22. 如請求項21之藥物組合物，其中該便秘為慢性便秘。
23. 如請求項18之藥物組合物，其包含50μg至1mg利那洛肽。
24. 如請求項23之藥物組合物，其包含67.5μg、133μg、150μg、266μg或300μg利那洛肽。
25. 如請求項18之藥物組合物，其係每天施用一次或每天施用兩次。
26. 如請求項18之藥物組合物，其係以一個或兩個片劑或膠囊之形式每天施用一次。
27. 如請求項18之藥物組合物，其包含266μg利那洛肽。
28. 如請求項18之藥物組合物，其包含133μg利那洛肽。
29. 如請求項18之藥物組合物，其中該治療持續至少4星期之時間。
30. 如請求項18之藥物組合物，其中該治療改善選自以下之至少一種症狀：緩解的腹痛、一星期內完全自發性排便(CSBM)次數的增加、一星期內自發性排便(SBM)次數的增加、改善的糞便稠度、緩解的排便費力、緩解的腹部不適、緩解的胃氣脹或緩解的IBS-c症狀的嚴重性。
31. 一種藥物組合物，其包含： 利那洛肽；Ca²⁺；白胺酸；及羥丙基甲基纖維素，其中Ca²⁺：白胺酸：利那洛肽之莫耳比在5至100：5至50：1之間。
32. 如請求項31之藥物組合物，其中該Ca²⁺以CaCl₂之形式提供。
33. 如請求項1、2、4、5、8、31及32中任一項之藥物組合物，其包含經包覆之小珠，其中該等小珠係經包含利那洛肽之包衣溶液包覆。
34. 如請求項33之藥物組合物，其中該包衣溶液包含：利那洛肽；Ca²⁺；白胺酸；及羥丙基甲基纖維素，其中Ca²⁺：白胺酸：利那洛肽之莫耳比在5至100：5至50：1之間。
35. 如請求項34之藥物組合物，其中該等小珠包含微晶纖維素。