TWI427281B

TWI427281B - 組織檢體的預處理方法

Info

Publication number: TWI427281B
Application number: TW100109879A
Authority: TW
Inventors: Yen Chuan Ou; Chi Rei Yang; John Wang; Ming Shung Tsai
Original assignee: Taichung Veterans General Hospital
Priority date: 2011-03-23
Filing date: 2011-03-23
Publication date: 2014-02-21
Also published as: TW201239332A

Description

組織檢體的預處理方法

本發明是有關於一種組織檢體的預處理方法，特別是指一種能減低收集樣品之材料使用量並能節省組織切片製作費用的組織檢體的預處理方法。

攝護腺癌是男性最常見的惡性腫瘤之一，在台灣，國人攝護線癌的發生率與死亡率均呈現逐年增加的情形，如經肛門指診(DRE)及量測血液中的攝護腺特異抗原(prostate specific antigen，簡稱為PSA)懷疑有攝護腺癌，須作經直腸超音波攝護腺切片檢查(Trans-Rectal Ultrasound-Guided Biopsy)，以確定病理診斷。

經直腸超音波攝護腺切片檢查的進行時是先使患者採取屈膝左側側臥或平躺架腳的姿勢，在經直腸超音波的導引下，將切片穿刺針經由直腸插入攝護腺取組織檢體來作詳細的病理化驗分析，通常是作系統性的八部位至十二部位的切片(即該攝護腺的左右二側共取樣至少8~12針)，自攝護腺依序取出的組織檢體則先保存裝有福馬林溶液的標本瓶中，並於標本瓶上標示對應的取樣部位，以便將來病理分析發現有問題時能較精確地定位出病灶位置。

其中，為了區別出取自攝護腺不同部位的組織檢體，每一標本瓶中只能放置一個組織檢體。製作病理組織切片時，也是針對每一標本瓶中的組織檢體製作一個對應的組織切片。因此，如果取樣部位為十二個不同部位時，為辨別區別，通常需提供十二個分別與不同取樣部位對應的標本瓶及使用十二片載玻片來製作十二片組織切片，導致現有的攝護腺切片檢查需要耗用大量的標本瓶與玻片等材料成本，而化驗人員做十二次的化驗消耗大量的人工成本，而仍有可改善的空間，且其判斷可能性，也只有十二個位置，因此在成本上與病變位置判斷的精準度上仍有改善的空間。

此外，因應國內現行健保給付制度，針對經直腸超音波攝護腺切片檢查的健保給付為每個標本瓶1741元台幣，超過四個標本瓶的部分就不再給付，如果取樣部位仍為十二部位時，且患者無法自費負擔超過的標本瓶費用時，醫師將採取在每個標本瓶中保存三個組織檢體的作法，若其中一個組織檢體於病理分析時發現有問題，由於放置在一個標本瓶中的組織檢體數量為多個，代表該等組織檢體所對應的取樣部位都有可能是病灶部位。因此，此種方法具有無法精確診斷出每個標本瓶中各取樣檢體來源部位的缺失，對於需保留性神經之攝護腺根除手術，無法提供正確的術前資訊，如果不再作進一步的確認，易產生因為手術而造成性功能障礙的風險，或易導致手術無法完全切除腫瘤，有損患者的治療權益。如果要作進一步確認，需針對該等取樣部位再分別進行取樣與作病理分析，反而會增加時間成本且有延後較佳治療時間的風險。

因此，本發明的目的，是在提供一種既能在一個標本瓶中保留多個組織檢體，又能精確定義同一標本瓶中每個組織檢體的取樣部位，而有助於提供正確的術前資訊與減少手術風險的組織檢體的預處理方法。

於是，本發明組織檢體的預處理方法，包含下列步驟：

一、準備至少一基材片，將多數個組織檢體依序且相間隔地排放在該基材片上，使每個基材上的組織檢體的數量≧2；

二、準備不同顏色的染料，並使每一基材片上的各個組織檢體分別染上不同顏色的染料；及

三、將該基材片連同附著其上且已完成染色的該等組織檢體保存在裝有福馬林溶液的標本瓶，使每個標本瓶內容置1片附著有多個組織檢體的基材片，而完成該等組織檢體的預處理。

本發明的有益效果在於：透過提供基材片有助於將多個來自不同部位的組織檢體排放並方便進行該等組織檢體的染色，再藉由使同一基材片的該等組織檢體分別染上不同顏色的染料，即使將其保存在同一個標本瓶內，仍然能夠利用顏色辨識不同組織檢體的來源部位，藉此，使本發明的預處理方法有助於獲得正確的術前資訊及精確定位出病變位置，並能節省標本瓶的用量以減少原物料成本。

有關本發明之前述及其他技術內容、特點與功效，在以下配合參考圖式之一個較佳實施例的詳細說明中，將可清楚的呈現。

參閱圖1、圖3與圖5，本發明組織檢體的預處理方法的較佳實施例，可適用於各種需進行取樣的特定生物組織或器官，作為對所取出的組織檢體的預處理程序，以供後續進行病理分析時，仍可清楚辨識該組織檢體的來源部位，在本實施例，是以在經直腸超音波攝護腺切片技術中自攝護腺不同部位所取得的攝護腺組織檢體為例進行說明，但該預處理方法的應用不以此為限，該預處理方法的較佳實施例包含下列步驟：

步驟101是準備四片基材片21、22、23、24，將多數個取自攝護腺的組織檢體依序且相間隔地排放在該等基材片21、22、23、24上，使每個基材片21、22、23、24上的組織檢體的數量≧2。

在本實施例中，是自一攝護腺3的左右二側分別選擇六個不同部位抽取組織檢體，分別為右側靠外的上、中、下部位311、312、313、右側靠內的上、中、下部位314、315、316、左側靠外的上、中、下部位321、322、323，以及左側靠內的上、中、下部位324、325、326，共針對前述十二個部位分別取出十二個組織檢體41、42、43、44、45、46、51、52、53、54、55、56，並依序排放在該等基材片21、22、23、24上，即在該基材片21上由左而右依序相間隔放置三個組織檢體41、42、43，在該基材片22上由左而右依序相間隔放置三個組織檢體44、45、46，在該基材片23上由左而右依序相間隔放置三個組織檢體51、52、53，以及在該基材片24上由左而右依序相間隔放置三個組織檢體54、55、56。

參閱圖2、圖4與圖5，在經直腸超音波攝護腺切片檢查的過程中，取得該等組織檢體41~46、51~56的方法為先使一患者60屈膝左側臥，並使其膝蓋彎曲至胸前，以方便將一超音波探頭8插入其直腸7，在該探頭8的一側設有一個細長的針管80，當抵達取樣部位時，使該針管80穿過直腸壁進入該攝護腺3內取下一小塊組織檢體41~46、51~56(圖4是以取出組織檢體41為例說明，其他組織檢體42~46、51~56的取樣情形與圖4所示者相同)。利用附設在該超音波探頭8旁的針管80進行組織檢體41~46、51~56的採樣為現有技術，在此不再詳述。

其中，該等組織檢體41~46、51~56是呈條狀，並具有反向的一外端411~461、511~561及一內端412~462、512~562。該等外端411~461、511~561是對應該攝護腺3的外表面的一端，該等內端412~462、512~562則是對應該攝護腺3內部的一端。

此外，在本實施例所用的該等基材片21~24為離型紙，且該等組織檢體41~46、51~56是分別放置於該等基材片21~24具有容易離型性質的一光滑面210~240上，以便後續製作病理組織切片，能較順利地將該等組織檢體41~46、51~56自該等基材片21~24上取下。

步驟102是準備不同顏色的染料，並使每一基材片21~24上的各個組織檢體41~46、51~56分別染上不同顏色的染料，該等染料的顏色不受限，只要能使該等組織檢體41~46、51~56染上顏色且呈現方便區別之不同顏色的染料皆能使用。在本實施例中，是選用黑色、綠色與黃色三種顏色的染料91、92、93對該等組織檢體41~46、51~56染色，實際進行時，則是針對每一基材片21~24上的組織檢體41~46、51~56按照由左而右的排列順序，分別染上黑色染料91、綠色染料92與黃色染料93。此外，為了能區別每一組織檢體41~46、51~56的外端411~461、511~561與內端412~462、512~562，在此，是統一將該等染料91~93皆塗在該等外端411~461、511~561，但是也可以將該等染料91~93皆塗在該等內端412~462、512~562，仍然能夠達到相同的標示定位效果。藉此，除了能利用該等染料91~93的顏色區別出該等組織檢體41~46、51~56是分別取自上、中、下部位的其中一部位外，還能透過只在該等組織檢體41~46、51~56其中一端上色的方式，區別出該等組織檢體41~46、51~56的外、內端411~461、511~561、412~462、512~562，在進行後續的病理組織切片分析時，有助於更精確地判斷出病灶的位置。

值得說明的是，在步驟101所用的基材片21~24分別具有二個相間隔且未貫穿該等基材片21~24的分割裂口211、212、221、222、231、232、241、242，及由該分割裂口211、212、221、222、231、232、241、242界定形成且保持連接狀態的三個容置區213、214、215、223、224、225、233、234、235、243、244、245，該等組織檢體41~46、51~56是以一對一的方式分別放置在該等容置區213、214、215、223、224、225、233、234、235、243、244、245，以使相鄰的組織檢體41~46、51~56被該等分割裂口211、212、221、222、231、232、241、242區隔開，藉此，在本步驟對該等組織檢體41~46、51~56進行染色時，就能利用該等分割裂口211、212、221、222、231、232、241、242，防止不同顏色的染料暈染到相鄰的組織檢體41~46、51~56上，導致無法正確辨識出顏色的不良後果。在本實施例中，配合每個基材片21~24分別放置三個組織檢體41~46、51~56，而在每片基材片21~24分別形成二個相間隔的分割裂口211~242，但不應以此限制該等分割裂口211~242與該等容置區213~245的設置數量，當規畫每片基材片21~24只放置二個組織檢體時，只要在每個基材片21~24分別形成一個分割裂口，並使組織檢體以該分割裂口隔開，就能達到防止顏色暈染到相鄰組織檢體的效果。

參閱圖5與圖6，步驟103是將該等基材片21~24連同分別附著其上且已完成染色的該等組織檢體41~46、51~56分別保存在裝有福馬林溶液90的4個標本瓶901~904中，使每個標本瓶901~904內分別容置1片附著有多個組織檢體41~46、51~56的基材片21~24，而完成該等組織檢體41~46、51~56的預處理，每個標本瓶901~904外分別標示代表取樣次區域的代號以便辨別不同標本瓶中的組織檢體41~46、51~56來源，例如，標本瓶901內保存取自攝護腺3右側靠外的上、中下部位311、312、313的三個組織檢體41、42、43，則在瓶上標示”Rt Lat”，針對右側靠內、左側靠外及左側靠內等次區域組織檢體的標本瓶902~904，則依序標示”Rt Med”、”Lt Lat”及”Lt Med”等字樣。接著，再將保存在福馬林溶液中的該等組織檢體41~46、51~56製作成組織切片並進行病理組織切片檢查與分析，就能分別透過該等標本瓶901~904先區別出該等組織檢體41~46、51~56來源的次區域，再利用每個標本瓶901~904中染上不同顏色的組織檢體41~46、51~56，確認該等組織檢體41~46、51~56是取自該次區域的上、中或下部位，並進一步利用每一組織檢體41~46、51~56有染色的一端確認出外、內端411~461、511~561、412~462、512~562，當進行組織切片檢查時，就能利用預先染色標示的處理方式，精確定位出病灶位置，提供正確的術前資訊，更能順利進行後續手術與治療，且能獲致更佳的治療效果。例如，化驗人員驗出組織檢體42的內端422病變，即可正確的判斷位在攝護腺3右側靠外的中部位312，而且是在比較深的部位是病變位置，可以很快速的再針對這附近的部位再採驗，等於可以定出二十四個位置。

其中，由於組織檢體41~46、51~56原本就具有黏液，因此，排列放置於該等基材片21~24上時，自然會附著在該基材片21~24上，並不需再以黏膠或其他定位元件固定。

歸納上述，本發明組織檢體的預處理方法，可獲致下述的功效及優點，故能達到本發明的目的：

一、透過提供該等基材片21~24有助於將分別來自不同部位的該等組織檢體41~46、51~56排放在一起，並方便進行該等組織檢體41~46、51~56的染色，再藉由使同一基材片21~24的三片組織檢體41~46、51~56分別染上不同顏色的染料91~93以區別取樣部位的上、中、下，使同一基材片21~24的組織檢體41~46、51~56即使被保存在同一個標本瓶901~904內，仍然能夠利用顏色辨識出該等組織檢體41~46、51~56的來源部位，藉此，使本發明的預處理方法有助於獲得正確的術前資訊及精確定位出病變位置。

二、如上所述，利用本發明的預處理方法，能夠在同一標本瓶901~904中保存多個組織檢體41~46、51~56，且仍能辨別該等組織檢體41~46、51~56的取樣部位，當取樣數量較多時，可藉由此預處理方法節省福馬林與標本瓶的用量而減少原物料成本，也減少後端化驗次數，減低人工成本。

三、如上所述，利用本發明的預處理方法，除了藉由標本瓶901~904區別出取自不同次區域的組織檢體41~46、51~56，例如，攝護腺3的右側靠外、右側靠內、左側靠外與左側靠內等次區域，並將相同次區域中的組織檢體41~46、51~56收集在一起外，還能利用不同顏色標定每個次區域的組織檢體的41~46、51~56的取樣部位，製作組織切片時，也能夠將相同次區域中的組織檢體的41~46、51~56放在同一片載玻片上製成切片，而能節省載玻片的用量，同樣有助於減少原物料成本。

四、因應現行的健保制度，由於健保給付時有標本瓶數量的限制，且組織切片時也是依切片的數量計費，透過本發明的預處理方法，能在健保給付數量的限制條件下，針對較多點部位進行取樣與分析，既能符合健保給付規定，又有助於獲得較完整而精確的分析資訊，使後續治療能順利完成，更能保障患者的權益。

惟以上所述者，僅為本發明之較佳實施例而已，當不能以此限定本發明實施之範圍，即大凡依本發明申請專利範圍及發明說明內容所作之簡單的等效變化與修飾，皆仍屬本發明專利涵蓋之範圍內。

21~24．．．基材片

210~240．．．光滑面

211~212．．．分割裂口

221~222．．．分割裂口

231~232．．．分割裂口

241~242．．．分割裂口

213~215．．．容置區

223~225．．．容置區

233~235．．．容置區

243~245．．．容置區

3．．．攝護腺

41~46．．．組織檢體

411~461．．．內端

412~462．．．外端

51~56．．．組織檢體

511~561．．．內端

512~562．．．外端

60．．．患者

7．．．直腸

8．．．超音波探頭

80．．．針管

90．．．福馬林溶液

901~904．．．標本瓶

91．．．黑色染料

92．．．綠色染料

93．．．黃色染料

101~103．．．步驟

圖1是說明本發明組織檢體的預處理方法的一較佳實施例的一流程圖；

圖2是一示意圖，說明將一超音波探頭伸至一攝護腺所在位置的情形；

圖3是一局部剖視示意圖，說明在該攝護腺規畫出十二個組織檢體的採樣部位的情形；

圖4是一局部剖視示意圖，說明將附在該超音波探頭一側的一針管伸入該攝護腺採取一組織檢體的情形；

圖5是一示意圖，說明將取得的十二個組織檢體分別排列放置在4片基材片的情形；及。

圖6是一示意圖，說明該等已染色的組織檢體分別放入裝有福馬林溶液的4個標本瓶內的情形。

101~103．．．步驟

Claims

一種組織檢體的預處理方法，包含下列步驟：一、準備至少一基材片，將多數個組織檢體依序且相間隔地排放在該基材片上，使每個基材上的組織檢體的數量≧2，所用基材片為離型紙，且該等組織檢體是分別取自同一組織的不同部位並放置於該基材片具有容易離型性質的一光滑面上，每個基材片具有至少一個相間隔且未貫穿該基材片的分割裂口，及由該分割裂口界定形成且保持連接狀態的多數個容置區，該等組織檢體是以一對一的方式分別放置於該該等容置區，以使相鄰的組織檢體被該分割裂口區隔開；二、準備不同顏色的染料，並使每一基材片上的各個組織檢體分別染上不同顏色的染料，以藉由該等染料的顏色區別各組織檢體的組織部位；及三、將該基材片連同附著其上且已完成染色的該等組織檢體保存在裝有福馬林溶液的標本瓶，使每個標本瓶內容置一片附著有多個組織檢體的基材片，而完成該等組織檢體的預處理。
依據申請專利範圍第1項所述的組織檢體的預處理方法，其中，在步驟一中的每一基材片上的該等組織檢體是呈條狀，並具有反向的一對應組織的外表面的外端及一對應組織內部的內端，步驟二中的染料是染在每一組織檢體的外端。
依據申請專利範圍第1項所述的組織檢體的預處理方法，其中，在步驟一中的每一基材片上的該等組織檢體是呈條狀，並具有反向的一對應組織的外表面的外端及一對應組織內部的內端，步驟二中的染料是染在每一組織檢體的內端。
依據申請專利範圍第2項或第3項所述的組織檢體的預處理方法，其中，在步驟一中的該等組織檢體是分別取自攝護腺的不同部位。
依據申請專利範圍第4項所述的組織檢體的預處理方法，其中，步驟一中是準備四片基材片，且每一片基材片上放置取自三個不同部位的組織檢體，每片基材片的每個組織檢體分別對應不同的取樣部位，共獲得來自十二個不同部位的十二個組織檢體。
依據申請專利範圍第5項所述的組織檢體的預處理方法，其中，在步驟二中，是使每一基材片上的組織檢體分別染上黑色、綠色及黃色的染料。