TWI405582B - 用於傳遞物質之載體複合物及其應用 - Google Patents

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Description

用於傳遞物質之載體複合物及其應用
本發明係有關於一種用於傳遞物質之載體複合物，詳言之，係有關於一種用於傳遞物質且具有陰電性之載體複合物。
將所欲傳遞物質，例如去氧核醣核酸(DNA)、蛋白質、藥物、化學合成物等物質有效地運送至細胞內，對於細胞生物學、分子生物學或基因學上的研究具有應用的價值。因此，有許多研究係利用不同的傳遞方法將所欲傳遞物質轉殖至細胞內，以更了解該傳遞物質與細胞之間的相互作用。舉例言之，利用轉殖載體將基因傳遞至細胞內之基因傳遞系統，臨床上可應用於基因治療、基因工程或轉殖動物的建構等範疇。然而，為達到使轉殖載體能將基因或所欲傳遞物質運送至細胞之目的，該轉殖載體必須能夠克服細胞膜及細胞核膜，且能安全又有效地將所欲傳遞物質傳遞至細胞中。
已知的基因傳遞系統可分成病毒型之轉殖載體(例如逆轉錄病毒、腺病毒、腺病毒相關病毒、單純皰疹病毒等)和非病毒型之轉殖載體(例如裸露的DNA、陽離子聚合物、微脂粒等)兩類。然而使用病毒型之轉殖載體雖然有其一定的成效，但是卻可能發生基因突變、致癌、基因表現短暫等缺點。至於非病毒型之轉殖載體，由於具有低毒性、低免疫原性且較易製備之優點，因此，已有越來越多研究係致力於發展非病毒型之轉殖載體的傳遞系統。
關於非病毒型之轉殖載體的傳遞系統，已有研究將陰離子包覆技術應用於轉殖載體上，且成功證明具有應用價值。Trubetskoy等人首先應用具有電解質之電性特徵將陽離子包覆上一層陰離子，並且發現所得之轉殖載體的效率與毒性隨著使用之陰離子的含量及種類而改變(Trubetskoy VS,Loomis A,Hagstrom JE,Budker VG,Budker VG,Wolff JA. Layer-by-layer deposition of oppositely charged polyelectrolytes on the surface of condensed DNA particles. Nucleic Acid Res 1999 Aug 1;27(15):3090-3095)。進一步地，該電性包覆特性亦已被應用到多層包覆型載體(Trubetskoy VS,Wong SC,Subbotin V,Budker VG,Loomis A,Hagstrom JE,et al. Recharging cationic DNA complexes with highly charged polyanions for in vitro and in vivo gene delivery,Gene Ther 2003 Feb;10(3):261-271)。然而，被陰離子型聚電解質包覆後的載體雖然能獲得極低的細胞毒性，但是載體的轉殖效率卻受到明顯的抑制。
近年來，Kurosaki等人發現使用聚(γ-麩胺酸)(poly(γ-polyglutamic acid))包覆陽離子型載體後，能使該載體同時具有低毒性及轉殖效率，並指出此乃由於具有陰離子之載體能被細胞辨識，故仍然具有轉殖效率。
因此，本發明結合利用陰離子轉殖載體之特性，使用電性包覆技術將單股寡核苷酸包覆上陽離子型載體，得到具有高轉殖效率之載體複合物，能安全且有效地將該待傳遞物轉殖至細胞內。
為達成上揭及其他目的，本發明提供一種用於傳遞物質之載體複合物，包括具有待傳遞物之陽離子型載體，以及包覆該陽離子型載體之單股核酸。該載體複合物係利用單股核酸包覆陽離子載體形成複合物，並使該載體複合物表面呈現陰電性，除了有效提高該載體複合物之細胞穿透性，且細胞毒性低，適合應用於基因轉殖、藥物投遞、或用於製造標靶藥物。
以下係藉由特定的具體實施例說明本發明之實施方式，熟習此技藝之人士可由本說明書所揭示之內容輕易地瞭解本發明之優點及功效。本發明亦可藉由其它不同之實施方式加以施行或應用，本說明書中的各項細節亦可基於不同觀點與應用，在不悖離本發明所揭示之精神下賦予不同之修飾與變更。
本發明用於傳遞物質之載體複合物，包括具有待傳遞物之陽離子型載體，以及包覆該陽離子型載體之單股核酸，利用單股核酸包覆陽離子載體形成複合物，使該載體複合物表面呈現陰電性，在低細胞毒性之件下，提高該載體複合物之細胞穿透性。
於一具體實例中，使用陽離子型聚電解質作為該載體複合物之陽離子型載體。該陽離子型聚電解質包括，但不限於聚胺，例如聚乙烯亞胺(polyethylene imine，PEI)、聚丙烯胺(polyallylamine，PAA)、或其他經修飾之陽離子型聚電解質，例如，經修飾與胺基酸、生物素、葉酸、碳水化合物、胜肽或抗體等共價鍵結之陽離子型聚電解質。於一具體實施例中，係使用聚丙烯胺(PAA)以共價鍵結修飾組胺酸形成組胺酸共軛聚丙烯胺(histidine conjugated polyallylamine，PAA-HIS)作為陽離子型聚電解質載體。使用該種組胺酸共軛聚丙烯胺作為陽離子型聚電解質形成載體複合物後，更容易被細胞吞噬而脫離細胞液泡，應用於基因轉殖，可以提高轉殖效率。
本發明之載體複合物中，可利用包覆該陽離子型載體之單股核酸，例如人工合成之聚寡核苷酸，調整該載體複合物之表面電性，使該載體複合物表面陰電性。一般而言，用以包覆該陽離子型載體之單股核酸係具有15至80個核苷酸，較佳係具有30至60個核苷酸。該單股核酸之核鹼基係選自胞嘧啶(C)、腺嘌呤(A)、以及胸腺嘧啶(T)所組成之組群；較佳係選自胞嘧啶或腺嘌呤；其實例包括選自C10 A20 、C10 A40 、C10 A50 、C5 A10 C5 A10 、C2 A5 C3 A5 C3 A5 C2 A5 以及C10 T20 所組成群組之一種。
本發明之載體複合物中，可根據所使用之單股核酸與陽離子型載體之種類，視需要調整該單股核酸與該陽離子型載體之比例，使該載體複合物表面達到特定陰電性或具有特定粒徑。一般而言，該單股核酸與該陽離子型載體之莫耳比係介於1：1至3.5：1之範圍，較佳係介於1.5：1至3.0：1之範圍。另一方面，藉由調整該單股核酸與該陽離子型載體之比例，可使該載體複合物之表面具有電荷低於-20 mV，較佳低於-25 mV，又更佳低於-30 mV之陰電性，以提昇轉殖效率。再者，根據使用需求，調整該單股核酸與該陽離子型載體之比例，亦可使該載體複合物具有小於250 nm，較佳係小於200 nm，更佳係小於100 nm之粒徑。
本發明之載體複合物，可應用於基因轉殖、藥物投遞、或用於製造標靶藥物。該待傳遞物之實例包括，但不限於待轉殖之核酸物質、醫藥活性物質、治療劑、維生素、抗發炎藥物、類固醇類藥物、蛋白質或合成化合物等。
於本發明之一具體實施例中，調配組胺酸共軛聚丙烯胺(PAA-HIS)與DNA以形成陽離子型載體，其中，用於轉殖之質體DNA可為綠螢光蛋白質體基因(EGFP plasmid)或冷光蛋白質體基因(Luciferase plasmid)。
進一步地，本發明係將互補單股去氧核醣核酸運用核酸配對機制再包覆上第二層去氧核醣核酸，使得原本具有轉殖功能之陰電性陽離子載體僅具有互補單股寡核苷酸所攜帶之標定基功能。是以，本發明教示使用去氧核醣核酸包覆陽離子型聚電解質，所得之陽離子型載體同時具有陰電性載體特徵及保有轉殖效率，且若用為特殊標定用途則可進一步修飾標定基使得該載體僅具有標定基而不受到單股去氧核醣核酸影響。
較佳地，將陽離子型聚電解質與待傳遞物(例如DNA)，以適當比例混合而形成陽離子型載體，其中，該混合比例與混合方式為發明所屬領域具有通常知識者可決定，且通常係與所欲傳遞之去氧核醣核酸(DNA)大小有關。於本發明之一具體實施例中，選擇使用10微克(μg)的組胺酸共軛聚丙烯胺(PAA-HIS)與2微克(μg)的質體DNA以形成具有穩定結構之陽離子型載體，其中，用於轉殖之質體DNA可為綠螢光蛋白質體基因或冷光蛋白質體基因。
本發明之方法中，包括將單股寡核苷酸包覆該具有待傳遞物之陽離子型載體，以形成載體複合物，其中，該單股寡核苷酸係選自C10 A20 、C10 A40 、C10 A50 、C5 A10 C5 A10 、C2 A5 C3 A5 C3 A5 C2 A5 以及C10 T20 所組成之群組。於一具體實施例，係使用C10 A20 與陽離子型載體(PAA-HIS/DNA)以適當比例混合，較佳係以0.2：1至3.0：1莫耳濃度比的比例互相混合，且更佳係以0.5至3.0莫耳濃度比的比例互相混合，以達到較佳傳遞效率。一般而言，該混合方式可使用所屬領域中具有通常知識者之任何習知方法來進行。
本發明之方法中，包括將該載體複合物轉殖至標的細胞，以使該待傳遞物傳遞至該標的細胞中，其中，該標的細胞可為任何哺乳動物之細胞。於一較佳具體實施例中，該細胞為源自人類之胎腎細胞株(embryonic kidney，HEK-293)、肝腫瘤細胞株(hepatoma，HepG2)或正常纖維母細胞(normal fibroblast，Hs68)。於具體應用中，該標的細胞係選自人類子宮頸癌細胞(HeLa cells)。
於本發明之一具體實施例中，使用冷光蛋白質體基因的質體作為欲傳遞之去氧核醣核酸(DNA)，並利用陽離子型聚電解質為載體，經簡單混合後，以形成陽離子型載體。接著，再將該陽離子載體與單股核酸C10 A20 混合並靜置20分鐘，以形成本發明之載體複合物。之後，將該載體複合物與源自人類之子宮頸癌細胞株(HeLa cells)於培養液培養，透過市售量化轉殖效率之試劑(luciferase assay kit(Promega,USA))，以冷光儀可觀察到冷光酶的活性於細胞中表現。因此，利用本發明之載體複合物可將去氧核醣核酸傳遞至細胞中，具有轉殖效率。
另外，在細胞毒性測試之實施例中，結果顯示細胞存活率可高達90%。是以，證實本發明之載體複合物無毒性不會對細胞造成傷害，可安全且有效地將該載體複合物經細胞吞噬作用而轉殖至標的細胞內，藉此將待傳遞物(例如DNA)傳送至該標的細胞，可應用於研究及治療領域。
以下係藉由特定之具體實施例進一步說明本發明之特點與功效，但非用於限制本發明之範疇。
實施例 製備例1－具有待傳遞物之陽離子型載體之配製
根據表1所示，將2微克/毫升之質體DNA溶液與10微克/毫升之陽離子型聚電解質在超純水中(Mill-Q water)混合並靜置20分鐘，獲得具有待傳遞物質之陽離子型載體樣品。
PAA-HIS：組胺酸共軛聚丙烯胺(購自Sigma-aldrich公司，商品名稱Polyallylamine)
PEI：聚乙烯亞胺(購自Fermentas公司，商品名稱ExGen 500)
實施例1－載體複合物的配製
根據表2所示比例，將溶解於100μM超純水(Mill-Q water)之5’-C10 A20 -3’單股核酸(Bio Basic Inc.,Canada)，加入製備例1所獲得具有質體DNA之陽離子型聚電解質樣品A，靜置20分鐘，獲得載體複合物樣品。利用表面電位及粒徑大小分佈分析儀(Malvern Zetasizer 3000HS)(Malvern Instruments)檢測該載體複合物樣品之粒徑大小與表面電荷，結果如第1圖所示。
結果顯示，沒有核酸包覆之對照樣品的表面呈現正電荷，隨著單股核酸的比例增加，載體複合物之表面電荷趨近0，當單股核酸與陽離子型載體之莫耳濃度比為0.5時出現反轉訊號，且所形成之載體複合物具有最大粒徑。當單股核酸與陽離子型載體之莫耳濃度比超過1.0時，載體複合物的表面電荷降低至-20 mV以下，粒徑減少至200 nm。當單股核酸與陽離子型載體之莫耳濃度比超過1.5時，載體複合物的表面電荷降低至約-30 mV，粒徑減少至約100 nm，且逐漸呈現穩定狀態。
測試例1 A.以綠螢光蛋白質(EGFP)為報導基因
重覆實施例1，使用5’-C10 A20 -3’單股核酸(Bio Basic Inc.,Canada)，加入製備例1所獲得具有質體DNA之陽離子型聚電解質樣品B，靜置20分鐘，獲得載體複合物樣品7、8、9、10。所使用之核酸與陽離子型聚電解質之莫耳比如表3所列。
將子宮頸癌細胞株(HeLa cells)培養於12孔盤(12-well plates)，每孔細胞數量105 。培養24小時後，移除培養液(DMEM medium，Biological Industries,Israel)，並在OPTI-MEM培養液中，使該細胞分別與複合物樣品7、8、9、10繼續培養，並使用ExGEN 500作為控制組(混合20微克/毫升DNA溶液與1.45微克/毫升ExGEN500溶液)。培養24小時後，利用螢光顯微鏡(IX71,Olympus,Japan)觀察EGFP的表現，結果如第2(a)至2(f)圖所示。其中，第2(a)、2(b)、2(c)、2(d)、及2(e)圖分別顯示使用對照樣品2、複合物樣品7、8、9、10之試驗結果，第2(f)圖則顯示使用ExGEN 500控制組之試驗結果。
B.以冷光素酶(Luciferase)為報導基因
重覆實施例1，使用5’-C10 A20 -3’單股核酸(Bio Basic Inc.,Canada)，加入製備例1所獲得具有質體DNA之陽離子型聚電解質樣品C，靜置20分鐘，獲得載體複合物樣品11。所使用之核酸與陽離子型聚電解質之莫耳比如表4所列。
使用子宮頸癌細胞株(HeLa cells)與對照樣品3及複合物樣品11進行轉殖後，進行冷光活性試驗。該細胞以細胞裂解劑(Promega,USA)溶解20分鐘，於4℃，12,000 rpm條件下離心30分鐘。分別使用冷光分析儀(chemiluminometer,Monolight Luminometer 2010,Becton-Dickinson,San Jose,CA)及Bio-Rad蛋白質分析偵測冷光放射值與蛋白質總量。結果如第3圖所示，本發明之載體複合物具有較高的轉殖效率。
測試例2
重覆實施例1，分別使用單股核酸5’-C10 T20 -3’，加入製備例1所獲得具有質體DNA之陽離子型聚電解質樣品A，靜置20分鐘，獲得載體複合物樣品12。所使用之核酸與陽離子型聚電解質之莫耳比為3.0：1.0。使用複合物樣品6與複合物樣品12，重複測試例1之步驟進行試驗，結果如第4圖所示。
測試例3
重覆實施例1，分別使用5’-C10 A20 -3’、5’-C10 A40 -3’、5’-C10 A50 -3’單股核酸，加入製備例1所獲得具有質體DNA之陽離子型聚電解質樣品A，靜置20分鐘，獲得載體複合物樣品。所使用之核酸與陽離子型聚電解質之莫耳比如表5所列。重複測試例1之步驟進行試驗，結果如第5圖所示。
測試例4
重覆實施例1，分別使用5’-C5 A10 -C5 A10 -3’及、5’-C2 A5 -C3 A5 -C3 A5 -C2 A5 -3’單股核酸，加入製備例1所獲得具有質體DNA之陽離子型聚電解質樣品A，靜置20分鐘，獲得載體複合物樣品21、22。所使用之核酸與陽離子型聚電解質之莫耳比為3.0：1.0。重複測試例1之步驟進行試驗，結果如第6圖所示。
對照例1－細胞轉殖效率測試
重覆實施例1，分別改以聚苯乙烯(polystyrene sulfonate，PSS)與(polya聚丙烯酸(polyacrylic acid，PAAc)作為對照陰離子，加入製備例1所獲得具有質體DNA之陽離子型聚電解質樣品A，靜置20分鐘，獲得對照樣品1、2。所使用之對照陰離子與陽離子型聚電解質之莫耳比如表6所列。重複測試例1之步驟進行試驗，並使用ExGEN 500作為控制組，結果如第7、8圖所示。
根據第7、8圖結果顯示，使用非核酸之陰離子與陽離子型聚電解質所形成之載體複合物，細胞轉殖效率極低。
測試例5
分別使用對照樣品1與載體複合物樣品6，重複測試例1之步驟進行試驗，將子宮頸癌細胞株(HeLa cells)改為人類之胎腎細胞株(HEK-293)、肝腫瘤細胞株(HepG2)及正常纖維母細胞(Hs68)，結果如第9圖所示。
試驗結果顯示，本發明之載體複合物對HeLa細胞具有優異的轉殖效果，對例如HEK-293細胞、HepG2細胞及Hs68細胞等不同細胞，同樣也可有效地將去氧核醣核酸轉殖至標的細胞內。
測試例6－細胞吞噬之測試
使用對照樣品1以及載體複合物樣品1、2、3、5與子宮頸癌細胞株(HeLa細胞)進行試驗，於OPTI-MEM培養液中培養4小時，然後將FM4-64FX染劑(Invitrogen Co.,USA)在25℃之條件下加入該HeLa細胞30分鐘。透過共軛焦螢光顯微鏡(Leica TCS SP5)觀察。結果如第10(a)至10(e)圖所示，第10(a)、10(b)、10(c)、10(d)、及10(e)圖分別顯示對照樣品1及載體複合物樣品1、2、3、5之試驗結果。
為確認本發明之載體複合物在經細胞吞噬前，是否為穩定之載體複合物，混合寡核酸5’-C10 A20 -3’與1%之Nulight(537)5’-C10 T20 -3’(ThermoFisher,Germany)以標定寡核酸分布。使用共軛焦螢光顯微鏡(Leica TCS SP5)觀察。結果如第11(a)至11(d)圖所示，第11(a)圖顯示亮視野影像，第11(b)圖顯示標記綠螢光DNA，第11(c)圖顯示標記紅螢光之Nulight 5’-C10 T20 -3’，以及第11(d)圖顯示合併影像。
試驗結果顯示，本發明之載體複合物可完整的被細胞吞噬而進入細胞內，不會在細胞質中裂解，可有效地將去氧核醣核酸傳遞至細胞內。
測試例7－抗血球凝集之測試
取複合物樣品6、對照樣品1、及ExGEN 500/DNA複合物控制組與紅血球液(2%)在室溫條件下，以等體積之比例混合10分鐘後，取10微升滴在玻離片上，以光學顯微鏡觀察血球聚集狀況，結果如第12(a)至12(c)圖所示。第12(a)、12(b)、12(c)圖分別顯示複合物樣品6、取對照樣品1、及ExGEN 500/DNA複合物控制組之試驗結果。試驗結果顯示，本發明之載體複合物可降低紅血球的聚集，可安全地應用於基因轉殖應用領域。
測試例8－血清蛋白吸附抑制之測試
取複合物樣品6、對照樣品1與子宮頸癌細胞株(HeLa cells)分別在含有10%胎牛血清(FBS)之OPTI-MEM培養液以及不含10%胎牛血清(FBS)之OPTI-MEM培養液中培養24小時。重複測試例1之方法，進行細胞轉殖效率之測試，結果顯示如第13圖。試驗結果顯示，本發明之載體複合物可防止轉殖至細胞之血清抑制，適合應用於活體內之基因轉殖。
測試例9－細胞毒性之測試
將子宮頸癌細胞株(HeLa cells)以105 細胞/孔(cells/well)培養於12孔盤。培養24小時後，移除培養液(DMEM medium，Biological Industries,Israel)並在OPTI-MEM培養液中，使該細胞分別與複合物樣品7、8、9、10繼續培養，並使用ExGEN 500作為控制組(混合20微克/毫升DNA溶液與1.45微克/毫升ExGEN500溶液)。培養24小時後，加入200微升含MTT溶液(5毫克/毫升)，在37℃培養3小時。接著，吸除MTT溶液，溶解於DMSO中並輕輕搖晃20分鐘。以ELISA免疫酵素判讀儀(SpectraMax M2e，Molecular Probe)在570 nm波長下測量吸光值，以未經處理之細胞存活率為100%之百分比顯示結果，結果如第14圖所示。試驗結果顯示，發明之載體複合物毒性低且不會引起免疫反應。
根據上述測試結果顯示，本發明之載體複合物具有低毒性及高轉殖率之特徵，適合用於將待傳遞物質轉殖至細胞內。
上述實施例僅例示性說明本發明之原理及其功效，而非用於限制本發明。任何熟習此項技藝之人士均可在不違背本發明之精神及範疇下，對上述實施例進行修飾與改變。因此，舉凡所屬技術領域中具有通常知識者在未脫離本發明所揭示之精神與技術思想下所完成之一切等效修飾或改變，仍應由後述之申請專利範圍所涵蓋。
第1圖顯示本發明之載體複合物的物化特性之曲線圖；
第2(a)至2(f)圖顯示混合不同莫耳比之核酸與陽離子型載體所製得之載體複合物對HeLa細胞的轉殖效果；
第3圖顯示對照樣品3及複合物樣品11對HeLa細胞的轉殖效果；
第4圖顯示複合物樣品6與複合物樣品12對HeLa細胞的轉殖效果；
第5圖顯示不同莫耳比之核酸與陽離子型載體所製得之載體複合物對HeLa細胞的轉殖效果；
第6圖顯示載體複合物樣品21、22對HeLa細胞的轉殖效果；
第7圖顯示使用對照陰離子所形成之載體複合物對HeLa細胞的轉殖效果；
第8圖顯示使用對照陰離子所形成之載體複合物對HeLa細胞的轉殖效果；
第9圖顯示本發明之載體複合物對HEK-293、HepG2和Hs68細胞的轉殖效果；
第10(a)至10(e)圖顯示對照樣品1以及載體複合物樣品1、2、3、5與子宮頸癌細胞株(HeLa細胞)進行細胞吞噬試驗之結果；
第11(a)至11(d)圖顯示本發明載體複合物之細胞吞噬測試結果；
第12(a)至12(c)圖顯示本發明載體複合物之抗血球寧集測試結果；
第13圖顯示血清蛋白吸附抑制之測試結果；以及
第14圖顯示本發明載體複合物對HeLa細胞之毒性測試結果。

Claims (18)

  1. 一種用於傳遞物質之載體複合物，包括：具有待傳遞物之陽離子型載體；以及包覆該陽離子型載體之單股核酸，其中，該陽離子型載體係陽離子型聚電解質載體，該單股核酸係具有15至80個核苷酸。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之載體複合物，其中，該陽離子型聚電解質載體係選自組胺酸共軛聚丙烯胺或聚乙烯亞胺。
  3. 如申請專利範圍第1項所述之載體複合物，其中，該待傳遞物係去氧核醣核酸。
  4. 如申請專利範圍第1項所述之載體複合物，其中，該單股核酸係具有30至60個核苷酸。
  5. 如申請專利範圍第1項所述之載體複合物，其中，該單股核酸係聚寡核苷酸。
  6. 如申請專利範圍第1項所述之載體複合物，其中，該單股核酸之核鹼基係選自胞嘧啶、腺嘌呤、以及胸腺嘧啶所組成之組群之一種。
  7. 如申請專利範圍第1項所述之載體複合物，其中，該單股核酸之核鹼基係胞嘧啶或腺嘌呤。
  8. 如申請專利範圍第1項所述之載體複合物，其中，該單股核酸係選自C10 A20 、C10 A40 、C10 A50 、C5 A10 C5 A10 、C2 A5 C3 A5 C3 A5 C2 A5 、以及C10 T20 所組成之群組之一種。
  9. 如申請專利範圍第1項所述之載體複合物，其中，該單 股核酸與該陽離子型載體之莫耳比係介於1：1至3.5：1。
  10. 如申請專利範圍第1項所述之載體複合物，其中，該單股核酸與該陽離子型載體之莫耳比係介於1.5：1至3.0：1。
  11. 如申請專利範圍第1項所述之載體複合物，其中，該載體複合物之表面電荷係低於-20 mV。
  12. 如申請專利範圍第1項所述之載體複合物，其中，該載體複合物之表面電荷係低於-25 mV。
  13. 如申請專利範圍第1項所述之載體複合物，其中，該載體複合物之直徑係小於250 nm。
  14. 如申請專利範圍第1項所述之載體複合物，其中，該載體複合物之直徑係小於200 nm。
  15. 如申請專利範圍第1項所述之載體複合物，其中，該載體複合物之直徑係小於100 nm。
  16. 如申請專利範圍第1項所述之載體複合物，其係應用於轉殖基因。
  17. 如申請專利範圍第1項所述之載體複合物，其係應用於製造藥物。
  18. 如申請專利範圍第1項所述之載體複合物，其係應用於藥物投遞。
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