TW491895B - An aglucone isoflavone enriched vegetable protein whey, whey protein and process for producing - Google Patents

Description

發明說明

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本發明有關富有葡糖苷非糖部異黄酮的乳清及乳清蛋 〃係‘由以一或更多々糖苷酶或酸雨植物蛋白反應 將實質全部的葡糖替糖部異黄，可轉換成葡糖芬非糖部 糖部異黄_而得。並爲19 忖/、馬i993年10月12日提出之美國專利 申請編號08/13 5,1 96的部份延續申請。 ajLSi 兴黄酮存在於多種豆科植物中，其中包含黄豆之類的 植物蛋白質材料。這些化合物包含黄豆苷（daiazin)、6，,_〇Ac 黄豆苷、6〃-〇Mal黄豆苷、黄豆苷原、染料木苷（genistin)、 大豆蛋白（glychhi)、6、〇Ac大豆蛋白、6、OMai大豆蛋白 (glycitm)、大豆蛋白原（glycitein)、生物卡因（bi〇chanin)A、 7- -4 -甲氧異黄嗣（f〇rm〇n〇netin)、及柯默斯醇 (coumestrol)。這些化合物典型地與本有苦味的黄豆聯想在 起’並在化學產品中（如離析物及濃縮物），焦點爲將葡糖 苷糖部異黄酮字這些材料上去除。例如，在利用鹼性水溶 液媒介來萃取大且片以生產大豆蛋白離析物之習用方法 中，許多異黄酮在萃取液中係可溶性的，可藉去除上清液 而被去除。留在酸沉澱蛋白質離析物中的殘餘異黄酮通常 以清洗異黄酮之方法來除去。 最近吾人已獲知植物蛋白質（如大豆）内所含的異黄 酮，能夠抑制人體癌細胞之生長，例如下列文獻所述之胸 部癌細胞以及衰竭癌細胞（prostrate cancer cell) ·· 1 99 1年8 月 3 1 日彼得生（Peterson)及伯涅（Barnes)表於 Biochemical

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 χ 297公釐） 4 PU-039-0002-p4 p24 491895 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 ' B7 _______ 五、發明説明（> ) and Biophysical Research, Communications 卷 179，第 1 號’ 第 661-667 頁之 ’’Genistein Inhibition of the Growth of Human Breast Cancer Cells, Independence from Estrogen Receptors and the Multi-Drug Resistance Gene” ；彼得生及 伯涅於1 993年在The Prostate第22卷，第335-345頁所發 表之丨’Genistein and Biochanin A Inhibit the Growth of Human Prostate Cancer Cells but not Epidermal Growth Factor Receptor Tyrosine Autophosphorylation丨’；伯淫等人於 1990 年在 Mutagen sand Carcinagens in the Diet ，第 239-235 頁 發表的 ’’Soybeans Inhibit Mammary Tumors in Models of Breast Cancer”。 上述的異黃酮，數種以附著有葡萄糖分子之糖苷或葡糖 苷糖部之形式存在。數種葡糖苷糖部（如6”-0Ac染料木夺） 含有附著在葡萄糖分子第六位置上的乙酸酯族。雖然皆是異 黃酮（包含在醫學上最有研究價值之糖苷），最受注意的^ 不附著葡萄糖分子的葡糖苷非糖部異黃酮，此異黃酮的水溶 性不及葡糖苷糖部異黃酮及異黃酮糖苷。此異黃酮可分為或 黃豆原（daidzein)、染料木因（genistein)及大豆蛋白原 (glycitein)。這些葡糖苷非糖部有下列之通式：

黄豆荅原（daidzein) : R, =〇H 、 R2 = H 、 R3 = H 及 Ra = 〇H ； 染料木 IS(genistein): RfOH 、 、 R! = 〇H 及 R4 = 〇H ； 大 ΐ 蛋白原（glycitein) : Ri = 〇H ' R2 = 〇CH3、R3 = H 及 R4 = OH ; 本紙張尺度適用中國國家標率(CMS ) A4規格（210X297公釐）厂 (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) 裝·

、1T 491895 • A7 ________B7 五、發明説明（彡） 其中Rl、R2、R3及R4可選自h，〇H，0CH3所組成 之群。因此本發明係揭示一種葡糖苷非糖部異黃酮及一種富 有這類材料的植物蛋白質乳清或富含這些材質之乳清蛋白 質。 本項技術者已知轉換葡糖苷糖部異黃酮成葡糖苷非糖 部異黃_之方法，例如歐巴塔等人之曰本專利申請第258669 號。這類加工僅取得中等範圍之轉換，因此在大量的商業操 作上係吾人不欲的。此外，已知之加工（如第，6 6 9號申請所 述）揭不從蛋白質取出異黃酮之方法，但未描述如何製備富 有葡糖苷非糖部異黃酮的蛋白質乳清。因此，對於將至少一 主要的且較佳地實質地全部的異黃酮轉換成葡糖苷非糖部 異汽酮的加工而言，存有需求；亦有一需求以生產富有葡糖 非糖部的乳清蛋白質。 因此’本發明一標的係提供富有葡糖苷非糖基異黃酮之 乳清、乳清蛋白質，以及其製造方法。這些，以及其他之標 的’可以具体從下文所述之本發明之詳細描述獲得。 發明概述 本發明提供富有葡糖苷非糖部異黃酮的植物性蛋白質 乳清，以及其生產法。生產這類乳清之方法包括：以pH值 高過植物蛋白質材料之等電點的萃取液提出以葡糖苷糖部 異汽酮組成之植物蛋白質，以足夠將至少主要之萃取物内的 葡糖苷糖部異黃_轉換成富有葡糖苷非糖部異黃_之抽出 物的時間、溫度、pH值，利用一或更多之冷一糖苷酶使葡 糖苷糠部異黃_發生反應。本發明亦提供生產這類乳清之方 法，其藉一或更多酸處理來完成。本發明進一步提供取得富 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公楚）/ ' ： (請先閲讀背面之注意事項一 裝—— π寫本頁) 訂 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 491895 A7 B7 五、發明説明（令） 有葡糖苷非糖基異黃酮之植物蛋白質乳清及乳清產品。在 外，本發明提供以較高之比例，自植物 M材枓回收乳清 内以及乳清蛋白質内的異黃酮之方法。 較佳實施例之描诚 雖然本發明以大豆乳清之相關内容來描述，且本方法 :適合從大豆乳清生產富有葡糖普非糖部異黃_之乳清，伸 是本發明方法一般亦能應用於從含有異黃_之植物蛋白質 來源來生產蛋白質乳清’這類來源的一個例子為黃豆材料之 植物蛋白質，，黃豆材料，，在本文中係指黃豆或任何黃豆衍 生物。 依照較佳的實施例，起始材料為已藉溶劑萃取去除油脂 之黃豆片。黃豆片以pH值高過蛋白質材料之等電點的^ 劑水溶液萃取，其中pH值較佳地約6〇-1〇1〇，且最佳地約 6.7-9.7。如果想提高萃取劑水溶液之pH值，可以使用氫氧 化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣之類的鹼性反應劑。吾人所欲之 異黃酮化合物在萃取物水溶液中係可溶解的。為了在萃取物 水溶液中最大化這些化合物之回收，亦值得控制黃豆片對萃 取物之重量比至某水準，以儘可能地溶解蛋白質材料内本有 的異黃_。 蛋白質及異黃_之萃取可由多種方式來進行，其中包含 以8:1-16:1之抽出劑水溶液對黃豆片的重量比來逆流萃I 黃豆片，其中最初之萃取劑被用來萃取黃豆片，並產生蛋白 質及異黃酮之萃取物水溶液。可替換地，可使用二個步驟之 萃取法，其中萃取劑對大豆片之重量比在初始步驟約為 10:1，然後在萃取劑對大豆片之重量比約為6:1或更低下 請 先 閱 讀 背 意 寫 本 頁 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

491895 經濟部中央標準局貝工消費合作社印裝 A7 B7 五、發明説明（,） — "" 用新鮮之萃取劑第二次萃取大豆片，因此，二步驟中抽出劑 對大立片之結合重量比不會超過約16:1之抽出劑對大豆片 的總重量比。成品蛋白質抽出物及穩定化的異黃酮的pH值 被調整至蛋白質之等電點以沈澱蛋白質。pH值可藉食用酸 (如醋酸）、硫酸、磷酸、氫氣酸或任何合適之反應劑來調 整至蛋白質之等電點。大豆蛋白質之等電點大約為4扣 4.6。蛋白質材料被沈澱成可從水溶液萃取物中分離的快狀 物。起始材料的殘餘水溶液萃取物係指任何被使用成起始材 料之植物蛋白質來源的’乳’凊。由於大部分之異黃酮玎溶 於乳清中，且為了加大乳清内異黃，之回收，額外地清洗沈 澱之蛋白質係吾人所欲地，以確保異黃_之完全回收。 藉酶或酸反應，使乳清中葡糖苷糖部異黃酮變成葡糠 普非糖基異黃，。轉換所用之酶如下文所述。乳清内葡㈣ 糖部異黃_在反應加工中，與足夠使至少主要的且較佳地實 質全部葡糖*糖基異黃酮轉換成葡糖*非糖基異黃酮形式 的-或更多的…酶來反應乳清的葡糠；糖基異黃酮1 可能天然地存於黃豆材料中’或微生物滋長出來， ，、在本文中係指，，殘留酶，也可能係添加至蛋白質抽出物 的。添加的酶在本文中係指〃補充〃 ^ ^ . 就一般而言，如果 貫立材料或抽出物内殘留酶之濃度不足以 在承皙祕入加a、 將大口P为（較佳地 係K吳也王口 [5的）的葡糖苷糖部形式 ^ ^ Θ綱轉換成非糖部 的形式，則需添加補充酶。足以完成異黃 係取決於多種因子，1_ 、之轉換的酶數量 #包含酶之種類、酶之濃度分佈、系统 之P值、酶之活性。一但具有足夠之 ，、、， 醢、補*醢十/辰度（無淪是殘留 ______ 芏夕大部分（且較佳 本紙張尺度適家標準210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項 寫本頁) •装- 訂 491895 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 A7 ______B7_ 五、發明説明（厶） 地實質地全部的）溶解於乳清之葡糖苷糖基異黃酮以石一糖 苷酶在一定時間' 溫度、pH值下，轉換成葡糖苷糖基異黃 酮形式。 較佳的補充点一糖夺酶包含Biopectinase 100L及300L (商名）、Biopectinase OK 70L (商名）、Lactase F 及 Lactozyme (商名）。Lactase F購自維吉尼亞州特洛依市 郵政信箱1 000號之亞馬諾國際酶公司（Ainan〇 Internati〇Iial

Enzyme Co.) ’其最佳pH值範圍約4_6 ; Lact0Zyme係購自 丹麥巴格斯維德市（BagSVaerd)，瓦工業公司（Novo Industries)的支部，其最佳pH值範圍約7 。Biopectinase 100L 、Biopectinase 300L 、BiopectinaseOK70L 係購自 佛羅里達州撒拉索它（Sarassta)市的克斯特國際公司。以足 以使至少主要且較佳地實質地全部的葡糖苷糖部異黃酮轉 換成葡糖普非糖基異黃酮的量來添加補充酶。例如，當必須 添加補充酶時’酶之添加量約乳清乾重之〇 .5_5 %。 其他合適的酶為酯酶。這些酶一般被認為非常適合本文 所述之較佳加工實施例，因它們將異黃酮接合物上的乙酸酯 及丙二酸酯除去，而將乙酸酯及丙二酸酯接合物轉換成葡糖 苷糖部異黃酮。在最佳之實施例中，沒一糖苷酶及酯酶均被 使用。 較佳的加工實施例係單步驟加工，並在短時間内，很簡 早而經濟的取得非常高程度異黃酮（由糖部變成非糖部）轉 變程度。在本文中夕單步驟,，反應加工係指某加工參數值在 反應加工期間均被維持的反應加工。這些加工參數包人Η 及溫度。 ^ Ρ 本纸張尺度賴2似297公^---——- (請先閱讀背面之注意事項\^寫本頁) •裝·

、1T 五、發明説明（ 非常高程度的轉換為至少主要的（絲佳地係實質地全 部的）匍糖苷糖基異黃酮形式被轉換成葡糖苷非糠基異黃酮 形式。主要的係指葡糖苷糖部異黃酮轉換成葡糖苷非糖 邛…汽酮的圍至少為5 〇 %。"實質地全部的係指葡糖 苷糖邛異貫酮轉換成葡糖苷非糖部異黃酮之範圍約至少80 %，且最佳地至少約90 %。 雖然不希望被任何理論所限，一般咸信在本文中所述加 工之令人驚評地高度的轉換係起因於單步驟反應加工期間 加工參數之結合。反應系統之pH值被維持係較佳的，其值 大約4-8 ，且最佳的為酶在單步驟反應加工期間，與異黃 綱接合物反應前最活躍的值。乳清的pH值典型地被調整至 某酶在反應前其最活躍之pH值。反應系統之溫度在加工期 間被維持於40 °C -60 °C之間係較佳的，且最佳地係60。(：。 就一般而言，所需以藉由本文所述之單步驟加工來轉換實質 地全部的葡糖苷糖部異黃酮成葡糖苷非糖基異黃酮的時間 約2-24小時。在某些例子中，時間值得大於24小時（如48 小時）。 因本發明為了將葡糖苷糖部異黃酮轉換成葡糖苷非糖 部異黃酮之緣故，另一可替換的加工係在足以將至少主要的 且實質地全部的葡糖苷糖部異黃酮轉換成葡糖苷非糖部異 黃酮的pH值、時間溫度下，以或更多的食用酸與乳清反 應，而使蛋白質能從殘餘乳清中分離。此過程的較佳pH範 圍係約1.0-2.0 ，典型之溫度約80-90 °C 或更高，典型之時 間約3 0- 1 80分或更長。葡糖菩擴部異黃酮亦可在pH值較高 時被轉換成葡糖苷非糖部異黃酮。可在pH值高如4.5時達 (請先閲讀背面之注意事 •裝-- I寫本頁)

、1T 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（〇阳）八4規格（210'/297公釐）广 491895 A7

成有效之反應，但反應非常慢而需要很長之時間。例如， PH值广5而溫度5〇t之下，時間必須為24小時。 葡糖苷糖部異黃酮被轉換成葡糖苷非糖部異黃酮之 後，可在不乾燥或不除去蛋白質的情況下使用乳清，或者可 替換地，由於非糖部蛋白質比糖部蛋白質較不溶於水，故可 回收乳清蛋白質以濃縮蛋白質内的葡糖苷非糖部異黃酮。回 收富有非糖部異黃酮的乳清蛋白質可藉由習用加工來完 成，如脫水、熱凝結與超吸過濾。成品乳清蛋白質能由習用 裝置來去水及乾燥，以提供乾燥的富含葡糖苷非糖部異黃酮 的蛋白質乳清。一較佳的富有葡糖夺非糖部異黃_的乳清蛋 白質之實施例具有2.6-8.7mg/g的乾染料木因成分以及約 2.5-6.0mg/g的乾黃豆苷成分。 本發明亦提供從植物蛋白質材料（如大豆材料）回收非 常高比例之異黃酮的方法。本文所述加工所取得之回收程度 係典型地至少5 0 %、較佳地6 5 %、最佳地8 〇 % (係以起 始植物蛋白質材料内所有形式異黃_之總重為基準）。雖不 欲被某理論所局限，但一般咸信本文所述之轉換反應所得的 高回收率係伴隨著多種加工操作。藉由在某加工條件下轉換 較溶性的葡糖糖部異黃酮接合物成較不溶性的葡糖苷# 糖基異黃酮形式’在成品中可能自銀入材料中回收高比例的 異黃酮。 下列例子描述本發明具體而非限制的實施例。 實驗 喷霧乾燥的1 6 %乳清水懸浮液之樣本係在〇. 〇 2 N _酸 緩衝液（pH7)中製造，在添加或不添加酶下，以45 °C培養〇、 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) Α4規格（210Χ 297公釐） (請先閲讀背面之注意事ΐ —裝-- i寫本頁) 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 491895 A7 B7 五、發明説明（，） 3 、及24小時。接受補充 之樣本係接受0.4wt%之 Biopectinase 1 00L。所有之樣本均分析異黃酮成分。實驗中 表 於 述 被 比 分 百 布 分 之 酮 黃 異 現 發 所 (請先閲讀背面之注意事項寫本頁) 裝· 訂 線_ 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準 ( CNS ) Λ4規格（210Χ 297公釐）丨> 491895 A7 B7 五、發明説明（/〇 ) t=0 13 仁00 19

Biocoon Biopectinase 100L 1>靜1^1^ t=o t=3 0/0 46 51 5払 % 私0 36 300 12 0 0 0 0 5 14 70 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 >1 '/ ^ron >0, 6-.OMa.6sOAC-°56Mal-# OW2KH2 OWZKH2 0m^sHW2 0>5N2 D>SN2 a>SN2 a>3Nm^ GL1K:CITI>GL-<CITI ^ GL-<CITEIN % % % % 47 厶00 5払 έ 15 % 38 私3 15 6 6 12 66 私οο 50 60 55 55 (請先閲讀背面之注意事填寫本頁) •裝. 、1Τ 0/0 0/0 % 300 32 33 33 21 13 2各 % Μ /8 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210 X 297公釐）| $ 線 491895 A7

五、發明説明（丨丨 未添加酶之樣本的葡糖普非糖部異黃_濃度纟24小時 培養後，相、當低，如染料木因1〇%、黃豆普原6%、大豆蛋 白原8%補充酶之添加的有益功效可從明顯地較高染料木 因及黃豆苷原濃一度上顯示出纟，如&濃度分別為7〇 %及6〇 /6本文所述之每種異黃鲷的濃度係以各種異黃酮的總量 為基準。 於另一實驗中，乳清被調整至pIi = 7。樣本在45 t下培 養。24小時之培養後，在一半的樣本内添加足夠量的補充 冷一糖苷酶Biopectinase 100L。所有之樣本均置45 t下， 培養22小時，取出次樣本，並分析之。分析所有樣本之異 黃酮.成分。本實驗所發現之每一異黃酮百分比被示於表2 A 及2B中。表2A係未添加補充酶之樣本的異黃酮成分之神、 結。表2B係在無任何補充酶下培養24小時後，再接受足量 Biopectinase 100L培養之樣本的異黃酮分佈。因此，表2β 所示之時間係有關於酶被添加至樣本之時間。例如，表 中t = 0的樣本實際上在無酶之情況下培養24小時。t：=22係 指未添加酶之前培養24小時，再加上添加酶之後再培養的 22小時。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 準 I標 I家 國 -國 I中 用 一適

S N I釐 公 491895 A7 B7 五、發明説明（l>) t=0 h-Ts 122 hrs 11 0 500 0 % % 、whey, pH7, 45 oc l^l^Biopectinase 100L'¥^t".100^lutp2g β 0 0 0/0 31 100 % 9 0 % 59 0 % 0 0 % 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 32 100 0 0 66 14 3厶 007 % % % %

y GENIST1N GENISTIN GENISTIN GENISTEIN DAIDZIN DAIDZIN DAIDZ2 DAIDZEIN GLYCITM/vi GLYCITIA/ GLYCITEIN 6"丨OMal_6" OAC— 6"丨 OMa,2A? 6,0Mal- 10 tN5 hrs t=24hrs t=46 lirs 11 11 owhey,PH7,45o° 1>靜皆si % 70 67 500 4^8 0 0 0 0 19 27 31 仁5 9 9 71 69 59 50 0 0 0 0 19 27 32 6 27 0 0 0 63 72 66 57 s 29 私3 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐）| f % % % % % % % % % % >2 A 6,OMa,6" 0>? 6,OMa.6" 0>? 6"-OMal- β U>5N2 a>SN2 0>3N2 a>SNm2 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) •裝· 、11 k 491895 A7 B7五、發明説明（丨）） 表2A的資料指出具有邊際充足殘留酶濃度之樣本，因 為24及46小時後，染料木因、黃豆苷原及大豆蛋白原之濃 度均小於50%。表2B圖示添加補充酶之優點，因為酶被添 加後，染料木因與黃豆苷原之轉換率為100%，而大豆蛋白 原為87 %。 於另一系列之實驗中，乳清樣本的pH值被調整為4 · 5 並與補充酶Lactase F —起培養。Lactase F之濃度為100 克乳清0.02克。在52 °C培養期間，於t = 0、1.5、5、17小 時，取樣。表3顯示本實驗的異黃酮改變和分布。 (請先閲讀背面之注意事項 寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐）义 491895

A

7 B

Is3 /\ 明説 明 發五 t=0 t=1.5 hrs t=5ohrs t=17hrs 11·6 9.9 6·5 90 68.00 64.1 74.1 47·8 % % lcf - PK4.5, 52o° ^^Lactse F (Amano) at : #1001^-11 砵 P2g Ο Ο Ο ο % 19_6 260 19.4 43 ·2 % 19.5 70 7.7 7.3 % 71.2 68·2 63.8 52.4 % Ο Ο Ο ο % 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 19.3 24.8 28·5 4Ρ3 15.1 Ο Ο Ο 75.2 57.3 530 42.5 9.7 42J 470 57.5 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ 297公釐 νο-/0 % % %

>3 6:OMa.6"oA? 6,OMal-6"oAC- 6,0Mal-^ GENISTIN GENISTIN GENISTIN GENISTE2 DAIDZIN DAIDZ2 DA3zm DAIDZEIN GLYCITItGLYCITIA/GLYCITEIN (請先閲讀背面之注意事項*|填寫本頁) 491895 A7 __ _____——一 五、發明説明（β) 表3之資料指出17小時後，大豆蛋白原明顯地轉換° 於另一實驗中，乳清樣本以高壓滅菌來破壞殘留酶及冷 染之微生物，pH值調整至4.5 ，樣本分成二組，並依下述 添加酶。在第一組樣本中，樣本内每100g之主要乳清添0·1 克之補充酶。在第二樣本中，每100克乳清添加0.001克的 補充酶（1:100來稀釋本次使用之酶）。在40 °c及60 °c下， 培養樣本23小時。於t=l、2、3、4、6及23時，取出 次樣本。補充酶 Biopectinase 300L 係由 Questlnternational 公司提供。所有之樣本均分析異黃酮成分。本次實驗所發現 之異黃酮分佈述於表4。在100克乳清使用0.1克酶下， Biopectinase 3 00L將異黃酮接合物轉換成90 %染料木因、 86%黃豆 原、60%大豆蛋白原（ρη = 4·5，60。(：，培養 23小時）。以Biopectinase 3 0 0L，60 °C下，僅要1小時即 明顯地發生轉換，如：70 %染料木因、62 %黃豆普原、44 %大豆蛋白原。在40 °C及60艺下，每100克乳清克酶 之用量以及轉換速率均有效。補充酶用量比被稀釋1〇〇户 (每100克乳清0.001克）並未變緩1〇〇倍。 (請先閱讀背面之注意事項\^%寫本頁) 裝·

、1T 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（ 210X 297公釐）l? 491895 Α7 Β7 五、發明説明（％) 3SL 40 oc t=0 hrs 45 t=l hrs 41 t:=2 hrs 40 ti hrs 35 t=6 hrs 31 S3 hrs 14 0.01 g Biopectinase 300L 600° tno hrs 45 t=I hrs 34 t=2 hrs M-TP t=4 hrs 24 t=6 hrs 24 S3 hrs 31 oblg Biopectinase t=0 hrs 45 tl hrs 23 t=2hrs 14 t=4 hrs 8 t=6 hrs 6 t=23 hrs 払 plg Biopectinase ^oor δ on t=0 hrs 45 t=l hrs 7 t=2 hrs 5 t=4 hrs 5 t=6 hrs 5 t=23 hrsoo

β^GESSTIN % plg Biopectinse 300L40OC 一 b〇 to K) to K) K) 〇 〇〇 K) b〇 K) K) K) to ―L〇 < ON q oo ^ * ΪΟ ^sj (〇 W 一 a 〇 私 oo ―w tsj to to v〇 to π ON OO ο ο ο ο ο ο o o o o o o o o o o o o 〇〇〇〇〇◦ Κ) '-J Os Κ) Os Ο -0 ON UJ U) U) to ^ 〇〇 to 00 00 to 〇 UJ 〇 O Ό --4 ON K) O -P^* O 1 U) K) to K) U) 〇 UJ OO to U) U) to OO U) 〇〇 〇 M OO Os ^ ^ ^ ^ ^ ^ 5; to K> to K) N) L〇 一 私 On < < Νί K) N) to N) bJ K) ^ A 一一 K) K) to K) _ K) to K) K) K) 一 私 OS -J Ln 〇s 〇\ 〇\ 〇\ 〇\ U\ 〇\ cs Os Os OS ο ο K) U) Os 〇 U) Os Ln LO 〇 ON O K) OS LO K) KJ K) to 一 私 v〇 < K) OO -<| K) ON < LO OO K> to oo on as to v〇 〇〇 ^. ON to >仁 6d-OMal—6SAC- 6s-OMa,6。OAC-GENISTIN GENISTIN GENISTEIN DA1DZI2:DAIDZ3 DAIDZ3 DAIDZEIN % %· % % % % % (請先閲讀背面之注意事項^^寫本頁) 裝·

、?T 線

經濟部中央標準局員工消費合作社印$L

4^-PxLk)L0^4^ 4^.L0^4^Lk)4^ ^t,U)U)U)Lk)4^ LOU)LOU)L〇4^ <10^000 — O 一 Ό 一 〇σΝ〇 — OtOAtOO K) K) K) K) to U) 一 私 ON OS 00 LO LO UJ U) Lk) O 00 < ON LO U) ο r 弋^ η 彐 M K> K> to to to O OS '-J v〇 oo Η— K) K) K> K) to K) LO -^3 oo LO LO UJ UJ L»J UJ Ό u> u> u> ^ ^ ^ 〇 L»J 一 私 U) ^ LO L*J L^J K) O 00 6/〇Mal- Gr^CITI// GrYCITEIN % % 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐）/7 樹895 五、發明説明（ 表4中的資料顯示本發明加工可取得报明顯地轉換。 —於另一系列之實驗中，乳清樣本之pH被調至7及8 , 每5克主要乳清添加〇 〇5克乙“““ F 〇r(在主 要礼清中被估為2%固体之5wt%酶）。樣本在4〇艺及6〇 t 下培養。依下文所述來製備酶。控制組係未添加酶的樣本。 所有之樣本均分析異黃_之成分。與Lactase ρ或Lact0Zyme 一起培養24小時後，乳清内異黃酿1之分布改變百分比係述 於表5。樣本添加琢之前並未殺菌，並未以任何方式抑制微 生物之生長。 (請先閱讀背面之注意事項 寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作杜印製 本紙張尺度適用中國國家標準 ( CNS ) A4規格（2丨0'〆297公釐）>〇 491895

A

7 B 0¾ /^\ 明説 明發五 no added cnzymo rcoctpsc P Lactozyme 2 9 0 β>GENISTIN %10 s PH71P40 oc 124 hrs no added 10 onzymc rpctpsc P 5 Laaozyme 8 plffi7lo,60lo°tH24 hrs no added 払 onzyi Lactase F 11 Laaozymeu) PH8lp40oct"24 hrs no added 9 enzyi rpctpsop Ί Lactozyme 9 PH81P6Q PC 124 hrs 22 7 % 63 46 36 52 18 2仁 17 48 β 49 ο ο ο ο ο ο 0 0 % 0 0/0 27 60 5 700 65 79 δ 51 6 90 69 93

6"-OMal·^OAc 丨 GENISTIN GENISTIN GENISTEIN (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝- 二 3 14 > DAIDZ2 % 10 10 % 66 51 払3 27 200 30 26 53 δ 5各 20 200 Μ ο ο ο ο Ο ο Ο Ο %

6"6Ma,6^AC-DAIDZIN DAIDZIN % 23 39 50 35 66 56 69 39 44 38 76 61 84 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 9 Ο Ο Ο 9 Ο Ο Ο % 9 。/0 50 β 31 100 20 17 25 10 私2二 19 7 % 払一 52 69 56 002 71 s 67 90 500 009 73 93

6,0Mal- DASZEm GLYCITII GLYCITII GLYCITEIN 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐）> 1 491895 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

A7 _ B7 ———_ __——-— —— -五、發明説明（丨了） 參考表5，在PH = 7，培養24小時之下，溫度由4〇 ^ 增至60 °C，使染料木因之轉換由40 %增至79 %。相似地， 可藉由pH增加（如7至8 )來完成較大之轉換。關於染料 木因，於60 °C、24小時下，改變pH值可將轉換率從79 % 增加至93 %。 於另一系列之實驗中，檢測從黃豆抽出之乳清蛋白質内 染料木因及黃豆 原之回收百分比。回收百分比係以乳清蛋 白質内染料木因（或黃豆苷原）的量來決定的，並以大及 始材料内各種染料木因（或黃豆苷原）之總量為基準的百 比來表示。在32 °C下’以1000克的水萃取1〇〇克脫脂大、 八足 粉15分鐘。淤漿之pH值為6.7。此提供萃取劑對粉末 〜t匕 為1 〇: 1。將淤漿離心5分鐘以除去用後之粉末。以6〇0 3 2 °C的水再萃取用後的粉末5分鐘。此提供6:丨之萃 %削 對粉末比。亦離心5分鐘，以分離用後粉末及第二萃取物。 將第一及第二萃取物水溶液結合。將結合的提出物pH值= 遇調 整至4·5 (添加HC1 )，以沈澱大豆乳清之蛋白質。以嘴霧 乾燥大豆乳清，然後以2 0 %固体比例再懸浮於水中。乳支 於裝之PH被調整至4.5 ’溫度維持為5〇t。添加I”％之^ Θ糖著酶活性之Lactase F ’在50 t下反應2〇小時，以確 保所有之葡糖苷糖部異黃_完成轉換成葡糖苷非糖基異黃 酮。反應後，將乳清淤漿加熱至95 t !分鐘，以不溶化乳 清蛋白質。包含不溶之乳清蛋白質的葡糖普非糖部異黃酮乳 清藉離心來回收。乳清蛋白質内回收的染料木因量為起始大 豆材料（脫脂大豆粉）内各種染料木普及染料木因總量的 81 %。相似地乳清蛋白質内黃豆苷原回收量為㈧％。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公H 克

(請先閲讀背面之注意事項㊉填寫本頁J ，、|叮 線· 491895 A7 B7 五、發明説明（w) 異黃酮成分依下述量化。混合〇·75克樣本（喷霧乾燥 或精研磨的私末）及50ml 80/20甲醇/水溶劑，從大豆產 品萃取異黃酮。以執道型搖晃機在室溫下搖晃混合物2小 時。2小時後’殘留的未溶材料藉Whatman 24號濾紙遽 除。以4ml的水以及lml甲醇稀釋5inl之濾液。 利用含Beckman C18反相管柱的HPLC (高性能液相 色層分析儀）來分離所萃取之異黃酮。異黃酮被注入管柱 内，先用自88%曱醇、1〇%水、2〇/〇冰醋酸至98%曱醇和 2 °/〇冰醋酸梯度淘析。在〇 · 4 m 1 / m i η之成速下，所有之異黃 _ :染料木苷、6-0-乙醯染料木苷、丙二醯染料木誓、染料 木因黃酮、黃豆苷、6-0-乙醯黃豆苷、6-0-丙二醯黃豆菩、 黃豆苷原、大豆蛋白及其衍生物及大豆蛋白原，均被完全解 析。波峰偵測是利用2 6 2 m m的U V。波峰再藉質譜儀來鑑 別。 經濟部中夬標隼局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 利用紐澤西州薩摩維爾市之印多芬化學公司（Ind〇fine Chemical Company)所售的純標準品（染料木苷、染料木黃 嗣及黃豆苷）之積分面積與濃度比（反應因子），以定量未 知樣本。就無標準品的共輛形式而言，反應因子被假設為親 本分子的反應因子，但以分子量差校正。大豆球蛋白之反應 因子被假設為已校正分子量差的染料木黃酮反應因子。 本方法提供每一個体異黃酮的數量。為了方便起見，總 染料木因、總黃豆苷原、總大豆蛋白原均被計算，並代表這 些化合物之總合重（假設所有之接合物形式均轉換成其各自 未接合的形式）。這些總量亦能夠以酸水解來轉換成接合物 形式的方法測量。 本紙張尺度適用中關家標準（CNS ) M規格（mx297公幻〇 491895 A7 B7 五、發明說明 2f 年月 應瞭解前述僅是本發明較佳之實施例，並且不離開後 文申請專利範圍所述之精神及較廣泛範圍下可以形成多之 改變及替換，其中該範圍係依照專利法原則（包含均等論） 來解釋的。 (請先H讀背面之注意事項再本頁) 裝 訂· -線_ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 24 PU-039-0002-P4 ρ24

Claims (1)

1. 491895 你，論_如_·-------I, „| , | _ //τ < 年 g 日D A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 I 一種葡糖發非糖部異黃酮含量豐富的植物蛋白質乳清之 生產方法，包括： (a) 以pH值高過植物蛋白質材料之等電點的萃取劑水 溶液萃取葡糖替糖部異黃酮組成之植物蛋白質乳清； (b) 在足以將至少主要的該乳清內該葡糖奋糖部異黃酮 轉換成葡糖砝非糖部異黃酮的時間、溫度、pH值 之下，以足量之至少一種的β糖笞豳及酯_該葡 糖砮糖部異黃酮反應，因而產生富有葡糖每非糖部 異黃酮之乳清，該實施的pH值為4-8 ，該反應時 間為2至48小時，該溫度為40至60°C。 2、 如申請專利範圍第1項的方法，其中時間為24小時。 3、 如申請專利範圍第1項的方法，其中溫度為60°C。 4、 如申請專利範圍第1項的方法，其中pH值為4.5。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) --------訂-------- 5、 如申請專利範圍第1項的方法，其中時間為24小時、溫 度為60°C，pH值為4.5。 經濟部智慧財產局員Η消費合作社印製 6、 如申請專利範圍第1項的方法，進一步包括： (c)從該乳清回收蛋白質材料以提供富有葡糖苷非糖部 異黃酮之乳清蛋白質。 7、 如申請專利範圍第6項的方法，其中乳清蛋白質係由 大豆乳清組成。 8、 如申請專利範圍第6項的方法，其中乳清蛋白質藉至 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 491895 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 少一種之超過濾、熱凝結或除水而回收。 9、 如申請專利範圍第6項的方法，其中乳清蛋白質藉著 在足以不溶化該乳清之pH值、時間、溫度下加熱乳清 並將不溶的蛋白質與乳清分離而得。 10、 如申請專利範圍第9項的方法，其中該pH值為1-2。 11、 如申請專利範圍第9項的方法，其中該溫度在至少30 分鐘下至少為8(TC。 12、 如申請專利範圍第9項的方法，其中係藉由離心來分離 乳清及不溶性蛋白質。 13、 如申請專利範圍第9項的方法，其中該不溶蛋白質被 脫水。 14、 如申請專利範圍第1項的方法，其中實質地全部的葡糖 苕糖部異黃酮被轉換成葡糖智非糖部異黃酮。 15、 一種葡糖轸非糖部異黃酮含量豐富的植物蛋白質乳清之 生產方法，包括： (a) 取得葡糖普糖部異黃酮組成之植物蛋白質乳清； (b) 在足以將至少主要的該乳清內該葡糖爸糖部異黃酮 轉換成葡糖智非糖部異黃酮的時間、溫度、pH值之 下，以足量之酸與該葡糖皆糖部異黃酮反應，因而 產生富有葡糖#非糖基異黃酮之乳清。 (c) 在(b)中之反應溫度為80-90°C，反應時間為30-180 分，反應pH值為1-2。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 先 閱 讀 背 之 注 意 事 項邋 焉I· ί裝 頁 I I 訂 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 491895 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 16、如申請專利範圍第15項的方法，其中pH值為4.5。 17、 如申請專利範圍第16項的方法，其中時間為24小時。 18、 如申請專利範圍第16項的方法，其中時溫度為50°C。 19、 一種依申請專利範圍第15項之方法所生產的乳清蛋白 質，具有2.6-8.7mg/g之乾染料木因成分以及 2.5-6.0mg/g的乾黃豆昝原成分。 20、 如申請專利範圍第1項的方法，其中該pH值係該_與 該葡糖替糖部異黃酮反應前最活躍之值。 21、 一種從植物蛋白質材料回收至少50%異黃酮的乳清蛋白 質的方法，包括： (a)取得葡糖替糖部異黃酮組成之植物蛋白質乳清； (b)在足以將至少主要的該乳清內該葡糖#糖部異黃酮 轉換成葡糖笤非糖部異黃酮的時間、溫度、pH值之 下，以足量之至少一種的β糖砮酶及酯蝻與該葡糖 砮糖部異黃酮反應，因而產生富有葡糖I非糖部異 黃酮之乳清； 請 先 閱 讀 背 面 之 注 意 事 項， 再<重裳 頁 I 訂 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (c)從該乳清回收蛋白質材料以提供含有至少50%之 植物蛋白內異黃酮的乳清蛋白質。 22、如申請專利範圍第21項的方法，其中該植物蛋白材料包 括大豆材料。 23、如申請專利範圍第21項的方法，其中礆係擇自β糖苦_ 及酯_所組成之群。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）