A7 B7 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 五、發明説明 ( 1 ) 1 本 發 明 偽 關 於 一 種 以 棺 物 組 織 原 料 作 為 培 養 基 1 將 擔 1 1 子 菌 類 (B as id i 〇 id y c e t e S g e n u s) 液體培養所得之培養液 1 [ 及 菌 絲 體 的 混 合 物 萃 取 Λ 分 離 及 精 製 所 得 之 新 穎 多 _ 類 以 产—Ν 請 1 1 及 其 m 造 方 法 此 多 賄 類 傜 由 線 型 a (1 4) 鍵 合 D- 萄 糖 kj 閱 1 I ή 1 1 單 元 所 構 成 其 2 , 3- 位 羥 基 之 約 30% 被 乙 化 » 且 具 有 分 背 面 I 之 1 子 量 50 0〜1 0 0 00 之多酷體，、 注 意 I 近 年 在 癌 症 之 疫 治 療 法 上 已 被 應 用 一 種 所 謂 之 生 事 項 1 I 再 1 化 反 應 改 質 劑 (簡稱B R Μ ) 之 概 念 〇 此 係 將 患 具 有 之 生 體 填 本 衮 防 衛 機 構 * 即 免 疫 力 ♦ 加 以 調 節 以 期 對 種 種 疫 病 産 生 治 療 頁 1 I 效 果 之 物 質 之 總 稱 〇 此 物 質 之 已 被 人 所 知 者 有 例 如 BCG 1 1 (B a c i 1 lu S Ca 1 m e t t e -G u e r i η) 及Ρ i c i b an ί 1 (如 pi c i ban i 1 , 1 f 0K -4 3 2 ) 等 細 菌 由 來 物 質 ， 香 菇 (1 e η t i n a η) 及裂濶_ 訂 素 (s c h i z 〇 P h y 11 an ) 等 真 由 來 物 質 > 以 及 Dtfc 喃 共 聚 物 及 1 左 旋 四 眯 唑 等 合 成 物 質 此 等 BRM 之 代 表 例 為 經 高 度 純 化 1 I 具 有 物 理 化 學 待 徵 之 香 菇 m 香 菇 m 係 由 香 菇 (L e η t i n u S 1 | e d 〇 d e s ) 之 子 實 體 萃 取 精 製 所 得 之 物 質 此 物 質 為 分 子 量 1 4 0 〇 , 0 0 0 〜800 ,〇 00 1 其 基 本 上 偽 由 β -D -葡萄糖單元之鍵 ·, 1 ♦ 以 5 : 2 之 bb 例 分 別 互 相 結 合 於 3 - 及 6- 位 置 所 構 成 之 聚 m 1 I 糖 (g lu c a η) 〇. 此 物 質 在 生 物 學 上 對 生 ρ 防 衛 極 關 重 要 之 細 1 1 胞 之 成 熟 > 分 化 及 增 殖 具 有 促 進 功 能 > 是 為 習 知 Γ. 亦 即 ， 1 I 對 癌 及 感 染 症 賦 予 抵 抗 力 » 故 對 %-χ- ΙΜ 疾 病 具 有 功 效 !> 1 1 除 了 上 述 香 姑 xtfc m 之 外 > 很 多 抗 腫 瘍 5 疫 增 強 之 化 合 1 1 物 > 諸 如 裂 濶 菌 素 和 奇 果 菌 素 等 其 大 部 份 為 較 高 分 子 量 β - 1 I 1- 3- 聚 m 糖 ， ί% 由 屬 於 擔 子 菌 屬 之 徹 生 物 分 離 而 得 〇 1 I 4- 1 1 1 1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21 OX 297公釐） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明（2 ) 鑑於原料之品質和增加收率，本發明之目的為自液體 培養擔子菌所得之培養物萃取和分離具有更強力的免疫增 強活性之新穎多_類。 本發明者曽經申請一種有關生物活性半纖雒素之製備 方法，其中棺物組織原料在一種絲狀真菌之培養基‘内同化 作用（日本特開平1 - 1 5 3 ? 0 1 )。 為了分離與生理活性物質的本質有關連的物質，經進 一步研究結果成功地由擔子_靨徹生物在棺物組織原料之 存在下培養之培養基，分離和純化一種具有生理活性之新 穎多_類（g卩活性多_類，下文有時簡稱” A P S ”從而完 成本發明。 因此，本發明提供： 1) 一種具有下式所示a. ( 1 — 4 )鍵合-D -葡萄糖單元 所構成之新穎多_類U P S): (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁，) 訂A7 B7 Printed by the Consumer Cooperatives of the Central Bureau of Standards of the Ministry of Economic Affairs 5. Description of the invention (1) 1 The present invention is about a coffin tissue material as a culture medium 1 B as id i 〇id ycete S genus ) Culture liquid 1 obtained from liquid culture [Extracted from the mixture of mycelium, Λ The novel and multi-class product obtained by separation and purification—N Please 1 1 and its production method This multi-brid type is composed of linear a (1 4) Bonded D-glucose kj See 1 I val 1 1 unit constitutes about 30% of its 2, 3-position hydroxyl group is ethylated »and has 1 sub-part I of the back surface 50 0 ~ 1 0 0 00 as cool Attention I In recent years, in the treatment of cancer epidemics, a so-called biological matter has been applied. The concept of I 1 re-modification reaction modifier (BR) is used to fill the body with the disease. This defense mechanism * means immunity. A generic term for substances that are adjusted to produce a therapeutic effect on various diseases. Page 1 I Known substances such as BCG 1 1 (B aci 1 lu S Ca 1 mette- G ueri η) and P icib an ί 1 (such as pi ci ban i 1, 1 f 0K -4 3 2) and other bacterial origin substances, shiitake mushrooms (1 e η tina η) and schizophrenia (schiz 〇P hy 11 an) and other genuine origins > and Dtfc ran copolymers and 1 levodotetrazol and other synthetic substances. The representative examples of these BRMs are highly purified 1 I Lentinus m with physical and chemical signs m Lentinus m is made of mushrooms (L e η tinu S 1 | ed 〇des) The substance obtained by extraction and purification of the fruiting body. This substance has a molecular weight of 1 4 0, 0 0 0 to 800, 0 00 1 which is basically pseudo-linked by β-D-glucose units. 1 ♦ Take the bb example of 5: 2 and combine them with 3-and 6-Poly m 1 I sugar (g lu ca η) formed by the position 〇. This substance is biologically important for the defense of ρ. 1 1 The maturation of cells > The promotion of differentiation and proliferation > Yes It is known Γ. That is, 1 I imparts resistance to cancer and infectious diseases »so it has efficacy against% -χ- ΙΜ disease! ≫ 1 1 In addition to the above-mentioned Xianggu xtfc m > Many anti-tumor 5 epidemic enhancement Compounds 1 1 > Most of them are higher molecular weight β-1 I 1- 3-polymose, such as schizophyllan and kiwiscin, ί% are isolated from the entire organism belonging to the genus Basidiomycete 〇1 I 4- 1 1 1 1 This paper size applies to Chinese National Standard (CNS) A4 (21 OX 297 mm) Printed by A7 B7 of the Consumer Cooperatives of the Central Standards Bureau of the Ministry of Economic Affairs 5. Description of the invention (2) Quality and increased yield, the purpose of the present invention is to extract and isolate a culture obtained from liquid culture of Basidiomycetes with a stronger immune Novel and strong class of strong activity. The present inventor has applied for a method for preparing bioactive hemicellulose, in which the raw material of the coffin tissue is assimilated in the culture medium of a filamentous fungus (Japanese Patent Application Laid-Open No. 1-1 3 5-0 1). In order to isolate substances related to the nature of physiologically active substances, further research results have successfully succeeded in isolating and purifying a novel and physiologically active species from the culture medium of Basilisk _ 靥 生物 biological in the presence of coffin tissue raw materials ( There are many types of g-activity, hereinafter sometimes abbreviated as "APS" to complete the present invention. Therefore, the present invention provides: 1) a type consisting of a-(1-4) bonded -D-glucose unit represented by the following formula: Novelty_Type UPS): (Please read the notes on the back before filling this page,) Order
其中R為氫原子或乙醯基，且其2 , 3 -位羥基之約3 0 % 被乙醯化，具有下列理化性質： (1)性狀：白色無定形粉末，無味無臭； (2 )溶解性：不溶於酒精、丙酮、乙烷、笨、乙酸乙 酷、四氛甲烷、氛份及乙醚，可溶於水、甲醛和二甲基亞 碾； 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X29"/公釐） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明（3 ) (3 )水溶液之p Η :中性； (4 )構成糖：僅為葡萄糖； (5 )分子量：5 0 0 至 1 0 , 0 0 0 ; (6 )比旋光度：[a } D ( 2 4 3C ) = + 1 1 2 ° 至 + 1 1 6 ° (在水 中）； (7)呈色反應：對Μ酮-硫酸反應，酚-硫酸反應和變 色酸-硫酸反應為陽性，對雙縮脲反應，Lowry-FQlin反 應，E 1 s ο η - Μ 〇 r g a η反應和碘反應為陰性； (8 )熔點：無明確的熔點； (9 ) I R光譜：對乙醯基有持別的吸收； (10) 13C-NMR光譜：對α-1,4-聚葡糖及乙醇基顯示 有待擻的光譜； 2 )及上迷A P S之製造方法。 本發明之A P S不像傳統的香菇_及裂擱_素，係單純 由ot ( 1 4 4 )鍵合-D - Μ萄糖單元構成，其2 , 3 -羥基之約3 0 %被乙醯化。此多»類由凝_過濾管柱層析法測定，具有 分子量5 0 0至1 0 , 0 0 0 ,宜為1 , 0 0 0至7 , 0 0 0 r此多醣類偽 以棺物組織原料作為培養基，將擔子菌類液體培養所得之 培養液及菌絲體之混合物萃取及純化而製得者。 爰將本發明詳細說明於下。 可使用於本發明之擔子_屬撒生物包括，例如，香菇 (Lentinus edodes),洋結（Agaricus biaporus),舞$5( Grifola frondosa)，真珠涵（Pholiota nameko )，蠔涵 (Pleurotus ostreatus) , (Flaramulina velutipes), -6 ~ I--------1 装----i —訂 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明 ( 4 ) 1 赤 芝 (G an 〇 d e r m a 1 u C id u m )， 木耳（ Au r i C U 1 a r i a a u r i C U la), 1 1 有 柄 樹 舌 (G an o d e r m a a PP 1 a n a t U m ) » -JPK 芝 (C or i ο lu S 1 I v e r s i c ο 1 or )， 豬芩（ Gr if ο 1 a U TR be 11 at a ) 裂 褶 菇 ( 1 I 請 1 Sc h i Z 0 P hy 1 lu m C 0 m m υ η e ) » 草 姑 (V 0 1 v a r X el la V 〇 1 v a c e a e) 先 閱 1 | I 1 等 ο 它 們 可 以 早 獨 使 用 或 合 併 使 用 0 背 1¾ 1 I 之 1 擔 子 菌 徹 生 物 主 要 地 可 用 傳 統 培 養 徹 生 物 之 方 法 培 養 注 意 I 〇 然 而 由 於 擔 子 菌 為 好 氣 性 有 利 為 利 用 液 體 培 養 基 和 事 項 1 I 再 1 在 溫 和 的 條 件 下 , 以 m 拌 與 通 氣 予 以 培 養 Λ 本 装 培 養 基 之 原 料 包 括 棺 物 纖 維 y 諸 如 9 麩 ♦ 稻 草 粗 糠 頁 •s_^· 1 1 (穀殼） > 蒸 渣 ， 鋸 木 屑 和 大 豆 渣 η 尤 其 是 » 一 種 或 更 多 的 1 1 棺 物 纖 維 用 熱 水 之 萃 取 液 更 為 有 利 地 被 使 用 〇 1 [ 關 於 碳 源 可 以 使 用 任 何 之 Si 萄 糖 ’ 蔗 糖 » 麥 芽 糖 ♦ 1 訂 甘 蒸 糖 > 白 糖 黑 糖 玉 米 稈 浸 出 液 廢 玉 米 稈 浸 出 液 * 1 麥 芽 莘 取 液 等 〇 1 | 關 於 氮 源 ， 肉 萃 取 液 蛋 白 胱 m 蛋 白 大 豆 粉 » 乾 1 I 燥 酵 母 ί 酵 母 萃 取 液 9 酸 銨 » 酒 石 酸 銨 尿 素 等 5]* 以 使 1 用 〇 假 使 需 要 時 亦 可 以 在 培 養 基 添 加 各 種 添 加 物 9 諸 如 .’’T 丫 無 機 鹽 類 > 諸 如 磷 酸 鹽 » 食 鹽 (N a C 1) » i美 鹽 類 錳 鹽 類 1 | 鈣 鹽 類 9 鐵 鹽 類 等 和 維 (kttT 生 素 ， 諸 如 肌 醇 ·> 雒 生 素 1 1 鹽 酸 鹽 ♦ L-天 門 冬 醯 胺 ， 生 物 素 等 1 | 上 述 擔 子 菌 微 生 物 之 培 養 條 件 可 援 用 — 般 中 溫 ii 之 培 1 I 養 條 件 例 如 可 在 10 cc 至 45 宜 為 15 °c 至 3 0 9 在 pH 1 1 2 至 6 培 養 4 至 2 0 天， 較佳為6 至1 2 天 〇 1 I 於 所 得 之 培 養 物 與 菌 絲 體 之 混 合 物 中 加 入 諸 如 纖 雒 素 1 I 7- 1 1 1 1 本紙張尺度適用中國國家標準（CMS ) A4規格（210X 297公釐） A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明 ( 5 ) 1 解 酶 t 澱 粉 酶 > 蛋 白 質 分 解 酶 9 果 m 分 解 酶 幾 丁 質 分解 1 I 酶 等 酵 素 (1 3 ) D 然 後 在 對 浸 軟 菌 絲 體 之 最 佳 溫 度 條 件 下反 1 I 應 2 至 2 0 天， 而後加熱使酵素失活。 1 1 請 I 如 此 處 理 過 的 培 養 物 藉 離 心 等 分 離 法 移 除 菌 絲 體 殘留 先 閲 1 I 如' 1 1 物 〇 妖 後 上 澄 液 以 己 烷 乙 醚 或 氣 份 萃 取 或 利 用 管 柱層 背 I 析 法 ， 使 用 δ者 如 十 八 烷 基 甲 矽 烷 [0 DS (C 18) 等 ], 聚苯乙 之 注 1 意 I 烯 系 聚 合 物 [Μ CI 凝膠C Η Ρ - 1 0P (三 S .薆化學）]及羥丙基葡聚 事 項 1 I 再 1 糖 樹 脂 [S e p ha d e X LH -2 0 ( Ph a r m a c i a )]等逆相糸載體以水 導 縮 後 用適 本 装 溶 離 而 去 除 脂 質 水 溶 離 之 部 分 (f r a C t i 〇 η) 綷 濃 頁 1 量 的 水 溶 解 9 繼 之 加 人 溶 液 中 水 量 之 3 至 5 倍 之 乙 醇 ,即 1 1 可 得 到 白 色 沉 澱 物 沉 澱 物 經 離 心 法 收 集 後 » 甩 離 子 交換 1 1 樹 脂 等 處 理 去 除 鹽 類 蛋 白 質 等 * 即 可 得 到 一 種 中 性 多醣 1 訂 類 部 分 C 然 後 藉 使 用 聚 丙 烯 基 醯 胺 樹 脂 [Β i 〇 -g e 1 P -2 1 (BIO R A D) 等 ], 葡聚糖樹脂[s e p h ad ex G -1 5 (P h a r m a c i a ) 1 I 等 ], 纖維素条載體[ Ce 11 u 1 〇 f in e (生化學工業）或 1 I To y 〇 P e a r 1 HW -4 OF (Toso)等] 之 m 膠 過 濾 層 析 法 或 使 用一 1 種 超 過 濾 薄 膜 將 多 _ 類 部 分 純 化 η 本 發 明 多 m 類 顯 示 性 質 1 適 合 作 生 化 反 應 改 質 劑 ( 1 1 BRM) » 可 作 為 疫 增 強 劑 或 免 疫 活 化 劑 η 1 1 以 下 > 依 實 例 説 明 本 發 明 〇 1 | [製造例] 1 | 1 . 培養 1 1 在直徑9 0 &T 米 玻 璃 培 養 皿 中 之 固 體 培 養 基 (196 麥芽 1 I 据 i 0 . 2%蛋白腺， 0 .2% 酒 石 酸 銨 和 1 . 5%洋菜） 褢 培 養香 1 I ~ 8 ~ 1 1 1 1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐〉 A7 _B7五、發明説明（6 )薛（Lentinus edodes),然後將香菇顔接種於10公升培養 8 之 内 瓶Wherein R is a hydrogen atom or an ethyl group, and about 30% of the hydroxyl groups at the 2, 3-position are acetylated and have the following physical and chemical properties: (1) Properties: white amorphous powder, odorless and odorless; (2) dissolved Properties: Do not dissolve in alcohol, acetone, ethane, benzyl acetate, tetramethane, atmosphere and ether, soluble in water, formaldehyde and dimethylimine; this paper size applies Chinese National Standard (CNS) Α4 Specification (210X29 " / mm) A7 B7 printed by the Consumer Cooperatives of the Central Standards Bureau of the Ministry of Economic Affairs 5. Description of the invention (3) (3) p of the aqueous solution Η: neutral; (4) constituting sugar: only glucose; (5 ) Molecular weight: 50 0 to 10, 0 0 0; (6) Specific optical rotation: [a} D (2 4 3C) = + 1 1 2 ° to + 1 1 6 ° (in water); (7) Color reaction: Positive for ketone-sulfuric acid reaction, phenol-sulfuric acid reaction and chromotropic acid-sulfuric acid reaction, positive for biuret reaction, Lowry-FQlin reaction, E 1 s η-Μrga η reaction and iodine reaction are Negative; (8) Melting point: no clear melting point; (9) IR spectrum: Different absorption to acetofluorenyl; (10) 13C-NMR spectrum: To α-1,4-polyglucose and beta Spectra to be displayed shake-yl; and 2) and the manufacturing method of the above-A P S. The APS of the present invention is different from the traditional shiitake mushroom and cleavage element, and is simply composed of ot (1 4 4) -D-Μ glucose unit, and about 30% of its 2, 3-hydroxy group is acetamidine Into. The polysaccharides are determined by coagulation-filtration column chromatography, and have a molecular weight of 500 to 10, 0 0, preferably 1, 0 to 7, 0 0 0 r. This polysaccharide is pseudo-coffin. The tissue material is used as a culture medium, and the mixture obtained by extracting and purifying the mixture of the culture liquid and the mycelium obtained from the liquid culture of basidiomycetes is obtained.爰 The present invention is explained in detail below. Basidiomycetes that can be used in the present invention include, for example, Lentinus edodes, Agaricus biaporus, Grifola frondosa, Pholota nameko, Pleurotus ostreatus, ( Flaramulina velutipes), -6 ~ I -------- 1 Pack ---- i —Order (Please read the precautions on the back before filling this page) This paper size applies to China National Standard (CNS) A4 specifications (210X297 mm) A7 B7 Printed by the Consumer Cooperative of the Central Standards Bureau of the Ministry of Economic Affairs 5. Description of the invention (4) 1 Chi an derma (u an der 1 u C id um), fungus (Au ri CU 1 ariaauri CU la), 1 1 shank tree tongue (G an odermaa PP 1 anat U m) »-JPK (C or i ο lu S 1 I versic ο 1 or), pig 芩 (Gr if ο 1 a U TR be 11 at a) crack Pleurotus ostreatus (1 I Please 1 Sc hi Z 0 P hy 1 lu m C 0 mm υ η e) »Grass Gu (V 0 1 var X el la V 〇1 vaceae) Read 1 | I 1 etc. ο they can be as early as possible Use alone or in combination 0 Back 1¾ 1 I 1 Basidiomycetes can mainly be cultivated by the traditional method of culture. Attention I 〇 However, because Basidiomycetes are aerobic, it is advantageous to use liquid culture medium and matters 1 I 1 1 Under mild conditions, take m Cultivate with aeration Λ The raw materials of this medium include coffin fiber y such as 9 bran ♦ straw coarse bran sheet • s_ ^ · 1 1 (hull) > steamed residue, sawdust and soybean residue η especially »one or More 1 1 The hot water extract of the coffin fiber is more favorably used. 〇 [Can be used for any carbon source Si sugar, sucrose »maltose ♦ 1 order sugar steaming sugar> white sugar brown sugar corn stalk extract Waste corn stalk leaching solution * 1 malt extract, etc. 1 | About the nitrogen source, meat extract protein cystm protein soy flour »dry 1 I dry yeast ί yeast extract 9 ammonium acid» ammonium tartrate urea etc. 5] * so that 1 can be used 〇 various kinds can be added to the medium if necessary Additives 9 such as `` T ^ Inorganic salts > such as phosphate »common salt (N a C 1)» i-salts manganese salts 1 | calcium salts 9 iron salts and so on (kttT biotin, Such as myo-inositol · > Biotin 1 1 hydrochloride ♦ L-asparagine, biotin, etc. 1 | The culture conditions of the above Basidiomycete microorganisms can be used-general medium temperature ii culture 1 I 10 cc to 45 preferably 15 ° c to 3 0 9 incubation at pH 1 12 to 6 for 4 to 20 days, preferably 6 to 12 days. 0 1 I in the resulting mixture of culture and mycelium Adding cellulose such as cellulose 1 I 7- 1 1 1 1 Standard (CMS) A4 specification (210X 297 mm) A7 B7 Printed by the Consumer Cooperative of the Central Standards Bureau of the Ministry of Economic Affairs 5. Description of the invention (5) 1 Enzyme t amylase > Proteolytic enzyme 9 Fruit m Decomposing enzyme Chitin Decompose enzymes such as 1 I enzyme (1 3) D and then react with 1 I under the optimal temperature conditions for macerated mycelia for 2 to 20 days, and then heat to inactivate the enzyme. 1 1 Please remove the mycelium residues from the cultures treated in this way by centrifugation or other separation methods. Read 1 I as' 1 1 〇 After the demon, the upper solution is extracted with hexane ether or gas or the back of the column layer is used. I analysis method, using δ such as octadecylsilane [0 DS (C 18), etc.], Note 1 polystyrene polymers [Μ CI gel C Ρ Ρ-1 0P (三 S . 薆 Chemicals]] and hydroxypropyl glucoside matters 1 I and 1 sugar resins [Sep ha de X LH-2 0 (Ph armacia)] and other reversed-phase carriers are shrunk with water and removed with a suitable solution. Lipid water dissociated part (fra C ti 〇η) 綷 concentrated page 1 amount of water to dissolve 9 and then add 3 to 5 times the amount of ethanol in the solution, that is, 1 1 to obtain a white precipitate. The precipitate is collected by centrifugation Post »Removal of salt proteins by ion exchange 1 1 resin treatment Wait * to get a neutral polysaccharide 1 and order part C. Then use polypropylene based amine resin [B i 〇-ge 1 P -2 1 (BIO RAD), etc.], dextran resin [seph ad ex G -1 5 (P harmacia) 1 I etc.], m of cellulose strip carrier [Ce 11 u 1 〇f in e (Biochemical Industry) or 1 I To y Pear 1 HW -4 OF (Toso) etc.] Gel filtration chromatography or use of an ultrafiltration membrane to purify multiple types of fractions η The multiple m types of the present invention show properties 1 Suitable as a biochemical reaction modifier (1 1 BRM) »Can be used as an epidemic enhancer or immune activator η 1 1 below > The present invention will be described by way of example. 〇 [Production Example] 1 | 1. Culture 1 1 solid medium (196 malt 1 I according to i 0. 2% protein gland, 0.2% ammonium tartrate and 1.5% agar)） culture incense 1 I ~ 8 ~ 1 1 1 1 This paper size applies the Chinese National Standard (CNS) A4 specification (210X297 mm> A7 _B7 V. Description of the invention (6) Lentinus edodes, and then inoculate the shiitake mushroom in a 10-liter culture bottle
5 1Α 熱 加 V 在蛋 ,克 水 5 升 2 毫， ο 糖 80芽 及麥 糠克 米 ο 克λι 50加 (1後 基濾 養過 培， 體鐘 液分 升 公 在 於 <131— 種 ),接 ο液 4養 ΡΗ培 ，此 水之 的 升 量公 當 8 適將 及 ， 銨之 酸繼 石 „ 酒天 克 7 ο 養 2培 和氣 腺通 白下 Ρ 氣 通 及 Ρ 3 2 在 C 基 養 培 體 C 液天 之 9 成養 組培 £ ?7 上奮 於拌 同權 相之 有 和 具緩 之合 IT JL FR i 公下 化 純 和 離 分 取 萃 P 9 將 至 - 溫後 加時 物小 合 3 混 應 之反 體經 絲 ， 菌 } 皂 e 租 S 基la 養 ί 培(a 之酶 得粉 所澱 養克 培 8 述加 上添 將之 繼 1Ϊ於 及物 酶合 解混 分應 素反 維將 _ C 克時 5 1 ρ ο 力 1 添應 再反 ,V P55 60在 至而 却酶 冷解 物分 合 質 混白 應蛋 反克 渣 殘 體 絲 菌 除 去sg 分 C 心 活離 失物 素理 酵處 使養 ,培 鐘之 分得 ο 所 pii 熱上 加li P將 得CH 0si , 凝 縮 I 濃MC 下以 壓 -減法 在析 則層 液柱 澄管 上藉 物體 取載 萃為 此作 ο Λ1/ 物學 取化 萃菱 斤三 νΛ ( SS Ρ 濃公 分 6 RM IV 咅 入 之加 離並 溶水 將子 後離 然脱 , 之 析升 層公 行 5 進1. 劑於 離解 溶 溶 為再 作物 水縮 子濃 離此 脱將 以 。 及縮 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 装 訂 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 ο 醇物 液乙澱 澄的沉 上積得 除體所 去倍 c 離 4 次 分入兩 心加複 離並重 藉水驟 後子步 然離此 c 脱 c 物於液 澱解澄 沉溶上 色物除 白澱去 得沉離 獲將分 .，心 醇地離 乙樣藉 升同後 501法 exds析 owca層 (D附柱 脂吸管 樹被藉 換不分 交 ，部 子理此 離處 C 陽} 縮 以製濃 以 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 型 司被 公 則 學份 化部 Η 之 D 離 I, 溶 丨水 被 而 A7 B7 經濟部中央標準局—工消費合作社印製 五、發明説明 ( 7 ) 1 製 ) 作 為 載 體 實 行 層 析 9 並 收集 以 空 隙 體 積溶 出 之 溶 離 部 1 1 分 ? 在 減 壓 下 蒸 發 乾 燥 * 獲 得60 0 克 之 巨 的多 醏 類 〇 1 I 所 得 産 物 之 物 理 化 學 性 質如 下 述 ; 1 1 請 I (1) 性 狀 ： 白 色 無 定 形 粉末 1 -far 雛 味 無 臭； 先 閲 1 1 讀 1 1 (2 ) 溶 解 性 1 不 溶 於 酒 精、 丙 酮 % 己 烷、 苯 Λ 乙 酸 乙 背 I 四 氯 甲 院 .、 氯 仿 和 乙 醚 ,可 溶 於 水 、 甲醛 和 __► 甲 基 亞 之 注 1 意 I 硼 事 項 1 I 再 1 (3 ) 水 溶 液 之 PH * 中 性 > 填 本 衮 (4 ) 構 成 糖 於 本 物 質 之1 %水溶液中加入硫酸至濃 頁 1 度 1N 硫酸， 將生成溶液在1 0 0 °c 加 熱 3 小 時進 行 水 解 r, 反 1 1 應 混 合 物 用 碩 酸 親 中 和 後 離 心分 離 〇 對 於 上澄 液 9 使 用 下 1 I 列 四 種 展 開 溶 劑 進 行 薄 層 色 層分 析 π 結 果 除了 萄 糖 之 外 1 1 訂 ， 皆 無 他 種 糖 點 (s ug a r S P 0 t)被檢出， 顯示此物質為- 1 種 僅 由 S 萄 糖 構 成 之 多 m 0 1 | ( ) 乙酸乙酯： 甲醇：乙酸： 水= 65:1 5 ： 10 :1 0 1 I (ii ) 乙酸乙酯： 異丙醇： 水= 65 :2 3:12 1 (lii ) 正丁醇： 乙酸： 水= 2 : 1 ; 1 (iv ) 正丁醇： 呲啶： 水: 6 : 4 : 3 1 (5) 分 子 量 ; 1 1 以 具 有 已 知 分 子 量 之 葡 聚糖 當 作 標 準 物質 * 藉 凝 m 過 1 | 濾 管 柱 層 析 儀 (£ e E > h a d e X G- 25及 Se P h a c e X G-5 0 , P h a r η ]a c i a 1 I 製 ) 對 試 樣 實 施 層 析 由 其 獲得 之 溶 離 曲 線推 定 分 子 量 為 1 500 至 1C ,〇 00 〇 1 I (6 ) 比 旋 光 度 ； [c X ] D ( 2 4 °C )= =+ 11 2 至+ 1 1 6 : 1 1 | 一 1 0- 1 1 1 1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） A7 B7 五、發明説明（8 ) (7 )呈色反應：本物質之完全水解産物對於Μ酮-硫 酸反'應，酚-硫酸反應和變色酸-硫酸反應均為陽性，但是 對雙縮脲反應，Lowry-Folin反應，Elscn-Morgan反應和 碘反應均為陰性； (8 )熔點：無明確的熔點； (9 ) I R光譜：在1 7 4 Q c nr 1附近有歸因於乙醯基之吸收 (10) 13C-NMR 光譜：172， 100-104, 76-78, 72-74, 70, 68, 61, 18ppm; • 主要訊號為在a - 1 , 4 -聚葡糖及乙醯基顯示具特歡之 光譜。再者，C - 1 , C - 3及C - 4位之訊號則顯示C - 2 , C - 3 位之部份（約3 Q % )乙_化為因之化學移位。因此確認此 物質偽由下式a ( 1 — 4 )鍵合D -葡萄糖單元所構成： - !-- » - - -- m n n^i - 1-- - m、CSJ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)5 1Α Heat plus V in eggs, 5 liters of water, 2 liters, ο sugar 80 sprouts and wheat bran gram ο gram λι 50 plus (1 post-base filtration and culture, body clock fluid deciliters in <131—species ), Then ο liquid 4 to raise physalis, the amount of water in the water is reasonable 8 suitable, ammonium acid following stone „Jiutian grams 7 ο raise 2 cultures and qi gland to pass under the white qi qi and ρ 3 2 in C-based culture medium C Liquid-day culture 9 Cultured tissue culture £ 7 7 I am striving to mix the right phase with the moderate phase IT JL FR i Public purification and separation to extract P 9 will be-temperature After the addition of the time Xiaohe 3 mixed anti-reverse warp threads, bacteria} soap e rent S base la raise cultivate (a enzyme obtained from the powder to raise cultivating cultivars 8) plus the addition of the follower 1 to the enzyme Combined and unmixed components should be reversed to remove _ C grams 5 1 ρ ο Force 1 added again, V P55 60 is at the same time, but enzyme Pyrolysate is separated and mixed and mixed with white eggs should be removed and slag residues can be removed. sg, C, heart, vital substance, phytoenzyme, and cultivating the bell. The pii is heated by adding li P to get CH 0si. Condensation I. Concentrated MC. This is done by borrowing objects from the Chengguan tube. Λ1 / Physics and chemical extraction of jin three νΛ (SS Ρ concentrated centimeter 6 RM IV) Public Bank 5 into 1. The agent dissolves and dissolves in the dissociation to re-concentrate the condensate of the crop. The shrinkage (please read the precautions on the back before filling out this page). Staple printed by the Central Consumers Bureau of the Ministry of Economic Affairs. ο Alcohol solution is deposited on the sediment of the crystalline solution, which is removed by removing the c. 4 times, divided into two hearts and re-isolated, and re-borrowed with water. The sub-step is separated from the c. In addition to the white lake, the color matter is so clear that it will score points. The heart is separated from the sample and the 501 method exds analysis of the owca layer. C Yang} Condensed to make the thicker to apply the Chinese National Standard (CNS) A4 size (210X297 mm) to the paper size. The company is approved by the Ministry of Education, the Ministry of Education and the Ministry of Economic Affairs. Bureau-Industrial and Consumer Cooperatives Printing V. Description of Invention (7) 1 system) Carry out chromatography 9 for the carrier and collect the eluted fractions that dissolve in the void volume 1 1 points? Evaporate to dryness under reduced pressure * to obtain 60 0Og of the large polyisocyanate 01 I The physical and chemical properties of the product obtained are as follows; 1 1 Please I (1) Properties: White amorphous powder 1 -far Flavourless odor; Read first 1 1 Read 1 1 (2) Solubility 1 Insoluble in alcohol, acetone% hexane, benzene Λ ethyl acetate I tetrachloromethane compound. , Chloroform and diethyl ether, soluble in water, formaldehyde and __► Methyl Methyl Note 1 meaning I boron matters 1 I then 1 (3) pH of the aqueous solution * neutral > fill in this (4) constitute sugar in this Sulfuric acid was added to a 1% aqueous solution of the substance to a concentration of 1 degree 1N sulfuric acid, and the resulting solution was heated at 100 ° C for 3 hours to hydrolyze. After centrifugation, the thin layer chromatographic analysis was performed on the upper clear solution 9 using the four developing solvents in the lower 1 I column. The results were 1 except for glucose, and no sugar point (sug ar SP 0 t) was detected. It shows that this substance is-1 type consisting of only S glucose m 0 1 | () ethyl acetate: methanol: acetic acid: water = 65: 1 5: 10: 1 0 1 I (ii) ethyl acetate : Isopropanol: water = 65: 2 3:12 1 (lii) n-butanol: acetic acid: water = 2: 1; 1 (iv) n-butanol: pyridine: water: 6: 4: 3 1 (5 ) Molecular weight; 1 1 Dextran with known molecular weight is used as standard material * Born m through 1 | Filter column chromatography (£ e E > hade X G-25 and Se P hace X G-5 0, P har η] acia 1 I) Chromatography of the sample from the dissociation curve obtained from the estimated molecular weight of 1,500 to 1C, 0000 〇1 I (6) specific optical rotation; [c X ] D (2 4 ° C) = = + 11 2 to + 1 1 6: 1 1 | -1 1 0- 1 1 1 1 This paper size applies to Chinese National Standard (CNS) A4 specification (210X297 mm) A7 B7 5 Explanation of the invention (8) (7) Color reaction: The complete hydrolyzate of this substance reacts to M ketone-sulfuric acid. Both the phenol-sulfuric acid reaction and the color-changing acid-sulfuric acid reaction are positive, but the biuret reaction, Lowry -Folin reaction, Elscn-Morgan reaction and iodine reaction are all negative; (8) Melting point: no clear melting point; (9) IR spectrum: absorption due to acetamyl group near 1 7 4 Q c nr 1 ( 10) 13C-NMR spectrum: 172, 100-104, 76-78, 72-74, 70, 68, 61, 18 ppm; • The main signal is displayed on a-1, 4-polyglucose and acetamyl. Huan spectrum. In addition, the signals of C-1, C-3 and C-4 digits show the chemical shift of C-2, C-3 digits (about 3 Q%). Therefore, it is confirmed that this substance is pseudo-composed of the following formula a (1-4) bonded D-glucose unit:-!-»---Mnn ^ i-1---m, CSJ (Please read the note on the back first (Fill in this page again)
經濟部中央標準局員工消費合作社印製 其中R代表氫原子或乙醯基，且其2 -及3 -位之羥基之 約30%被乙醯化，並具有分子量為500至10, 000之一種 新穎多酷類。 [試驗例]. 下列試驗為意圖用來試驗本發明之新穎多_類是否具 有一種免疫增強劑[生化反應改質劑（Β 1? Μ )]之性質，-, _中性白血球聚集作用 .呑噬細胞，諸如_中性白血球和巨噬細胞在生物體之 -11- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS > Α4規格（210Χ297公釐） 經濟部中央標準局員工消費合作社印袋 A7 B7五、發明説明（9 ) 體内平衡雒持上，扮演重要角色。它們涵蓋廣範圍的功能 ，包括抗癌或抗微生物功效，消炎，和抗體生成以及呑噬 作用。呑噬細胞有移向和聚集在雜質存在的地方之性質。 換言之，生物體有外來物質存在時將引起呑噬細胞之聚集 。免疫增強劑[生化反應改質劑（Μ )]為其典例子；它可 將支持生體防衛機構之呑噬細胞誘導及聚積於攝取之局部 呑噬細胞數目之增加導致天生防衛之增強。即可將呑噬細 胞誘導至局部之物質，具有類似於免疫增強劑之性質。利 用此現象，進行試驗，以檢視新穎多_類（A P S )是否增強 生體防衛機構.. 具體而言，於小白鼠之腹腔接種檢體，經6小後，檢 視嚙中性白血球之聚稽結果如表1所示，在對照組以生 理食鹽水接種者，腹腔細胞僅有數％或更少量之_中性白 血球。與此對比，臨床上作為抗癌劑之香菇_ (其為一種 BRM)引起強烈的渗透，以致噻中性白血球佔腹腔細胞之 6 3 %。本發明奮例所得之A P S物質具有比習知B R Μ更強烈 的嗜中性白血球聚積活性（7 5 % ) Λ ^n. <! i—· -I --1-! ·-1--1 « - i I.........^I ----- - 1-- I- ...... 、一-SJ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 表 1 檢 體 投與量 瞎中性白血球聚積率 生理食鹽水 1毫升/小白鼠 2¾ 香菇糖 1毫升/小白鼠 6 3% A P S物質 1毫升/小白鼠 lb% 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（210X297公釐）Printed by the Consumer Cooperatives of the Central Standards Bureau of the Ministry of Economic Affairs where R represents a hydrogen atom or an ethyl group, and about 30% of its 2- and 3-position hydroxyl groups are acetylated, and has a molecular weight of 500 to 10,000 Novel and cool. [Test Example]. The following test is intended to test whether the novel poly-class of the present invention has the properties of an immune enhancer [Biochemical Modifier (B 1? Μ)],-, _ neutral leukocyte aggregation effect. Phagocytic cells, such as _ neutrophils and macrophages in living organisms -11- This paper size applies to Chinese national standards (CNS > A4 size (210 × 297 mm) Central Government Bureau of Ministry of Economic Affairs Consumer Cooperatives Printing Bag A7 B7 V. Description of the invention (9) They play an important role in homeostasis. They cover a wide range of functions, including anticancer or antimicrobial efficacy, anti-inflammatory, and antibody production, and phagocytosis. Phagocytic cells have migration and The nature of accumulation in the place where impurities exist. In other words, the presence of foreign substances in the organism will cause the accumulation of phagocytes. The immune enhancer [biochemical reaction modifier (M)] is a typical example; it can support living organisms The increase in the number of local phagocytic cells induced and accumulated in the ingestion of the defense mechanism leads to the enhancement of natural defenses. The phagocytic cells can be induced to the local material, which is similar to Properties of enhancers. Using this phenomenon, experiments are conducted to examine whether the novel multi-class (APS) enhances the body defense mechanism. Specifically, the specimens are inoculated in the abdominal cavity of mice, and after 6 hours, the rodents are examined. The results of aggregation of sexual white blood cells are shown in Table 1. In the control group inoculated with physiological saline, only a few% or less of peritoneal cells were _neutrophil white blood cells. In contrast, lentinus as an anticancer agent clinically _ ( It is a kind of BRM) which causes a strong infiltration, so that the thioneutrophil accounts for 63% of the cells in the abdominal cavity. The APS substance obtained in the present invention has a stronger neutrophil accumulation activity (75%) than the conventional BRM. ) Λ ^ n. ≪! i-- · -I --1-! · -1--1 «-i I ......... ^ I ------1-- I- ..., I-SJ (Please read the precautions on the back before filling out this page) Table 1 Specimen administration volume Neutral leukocyte accumulation rate Physiological saline 1ml / Mouse 2¾ Lentinose 1ml / White mouse 6 3% APS substance 1ml / white mouse lb% This paper size applies to Chinese National Standard (CNS) A4 specification (210X297 mm)