TW202337902A - 特異性結合ｐｓｍａ和ｃｄ３的抗原結合分子及其醫藥用途 - Google Patents
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Abstract
本揭露關於特異性結合PSMA和CD3的抗原結合分子及其醫藥用途。該抗原結合分子可用於治療腫瘤相關疾病。
Description
本申請要求2022年02月07日提交的中國專利申請202210116684.6的優先權。
本揭露屬生物技術領域，更具體地，本揭露關於抗原結合分子及其應用。
這裡的陳述僅提供與本揭露有關的背景信息，而不必然地構成現有技術。
PSMA屬谷胺酸羧肽酶II(Glutamate carboxypeptidase II，GCPII)，由750個胺基酸組成，胞內19個，跨膜24個，胞外707個。PSMA的胞外部分由3個結構域組成：protease-like、apical和C-terminal。三個結構域都參與受質的結合，protease-like和apical直接與受質結合，C-terminal使PSMA形成二聚體發揮作用。前列腺癌患者中PSMA在腫瘤組織上的表達水平相較於正常前列腺提高了100-1000倍。PSMA也表達於子宮內膜癌細胞表面、胃癌(66.4%)和結
直腸癌(84.6%)的新生血管、非小細胞肺癌的新生血管及部分腫瘤細胞上。因此PSMA不僅能作為前列腺癌開發靶點，也可能適用於其他腫瘤類型。
CD3是一種表達於T細胞上的同種型或異型二聚體抗原。功能性CD3由四條不同鏈：ε、ζ、δ及γ中的兩者進行二聚體結合來形成。CD3二聚體排列包括γ/ε、δ/ε及ζ/ζ。CD3與T細胞受體複合物(TCR)結合且為T細胞活化所需。因此，已提議活化T細胞的抗CD3抗體用於達成治療目的。然而，抗CD3抗體的給藥可能會觸發T細胞活化和相關的細胞因子釋放。過度的細胞因子釋放導致重度細胞因子釋放綜合症(CRS)，其是抗CD3抗體在臨床用藥中的重要挑戰。
因此，提供具有高活性及低細胞因子釋放的PSMA/CD3雙特異性抗體是尚未滿足的需要。
本揭露提供了一種特異性結合PSMA和CD3的抗原結合分子和特異性結合PSMA的抗體。
在一個方面，本揭露提供了一種抗原結合分子，其包含至少一個特異性結合PSMA的抗原結合模塊和至少一個特異性結合CD3的抗原結合模塊，該特異性結合PSMA的抗原結合模塊包含重鏈可變區(PSMA-VH)和輕鏈可變區(PSMA-VL)，該特異性結合CD3的抗原結合模塊包含重鏈可變區(CD3-VH)和輕鏈可變區(CD3-VL)。
在一些實施方案中，如前所述的抗原結合分子，其中
(i)該PSMA-VH中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3分別包含SEQ ID NO：77中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3的胺基酸序列，和該PSMA-VL中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3分別包含SEQ ID NO：78中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3的胺基酸序列，或
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PSMA-LCDR3分別包含SEQ ID NO：90中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3的胺基酸序列，或
(x)該PSMA-VH中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3分別包含SEQ ID NO：91中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3的胺基酸序列，和該PSMA-VL中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3分別包含SEQ ID NO：92或152中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3的胺基酸序列，或
(xi)該PSMA-VH中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3分別包含SEQ ID NO：93中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3的胺基酸序列，和該PSMA-VL中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3分別包含SEQ ID NO：94中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3的胺基酸序列，或
(xii)該PSMA-VH中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3分別包含SEQ ID NO：95中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3的胺基酸序列，和該PSMA-VL中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3分別包含SEQ ID NO：96中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3的胺基酸序列。
在一些實施方案中，該PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2、PSMA-HCDR3、PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3根據Kabat、IMGT、Chothia、AbM或Contact編號規則定義。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中
(i)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：13的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：14的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ ID NO：15的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：17的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：18的胺基酸序列的PSMA-LCDR3，或
(ii)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：1的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：2的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ ID NO：3的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID NO：4的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：5的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：6的胺基酸序列的PSMA-LCDR3，或
(iii)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：7的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：8的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ ID NO：9的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID NO：10的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：11的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：12的胺基酸序列的PSMA-LCDR3，或
(iv)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：19的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ ID NO：21的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID NO：22的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：23的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：24的胺基酸序列的PSMA-LCDR3，或
(v)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：25的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：26的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ
ID NO：27的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID NO：28的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：29的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：30的胺基酸序列的PSMA-LCDR3，或
(vi)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：31的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：32的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ ID NO：33的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID NO：34的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：35的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：36的胺基酸序列的PSMA-LCDR3，或
(vii)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：37的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：38的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ ID NO：39的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID NO：40的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：41的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：42的胺基酸序列的PSMA-LCDR3，或
(viii)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：43的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：44的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ ID NO：45的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID NO：46的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：47的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：48的胺基酸序列的PSMA-LCDR3，或
(ix)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：49的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：50的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ ID NO：51的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID
NO：52的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：53的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：54的胺基酸序列的PSMA-LCDR3，或
(x)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：55的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：56的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ ID NO：57的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID NO：58或159的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：59的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：60的胺基酸序列的PSMA-LCDR3，或
(xi)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：61的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：62的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ ID NO：63的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID NO：64的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：65的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：66的胺基酸序列的PSMA-LCDR3，或
(xii)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：67的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：68的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ ID NO：69的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID NO：70的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：71的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：72的胺基酸序列的PSMA-LCDR3。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，該PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2、PSMA-HCDR3、PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3是根據Kabat編號規則定義的。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其在25℃條件下以小於1×10-7M、5×10-8M、1×10-8M的KD結合人PSMA，該KD是藉由表面電漿共振法測量的。
在一些具體的實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其在25℃條件下，以小於9×10-9M、8×10-9M、7×10-9M、6×10-9M、5×10-9M、4×10-9M、3×10-9M、2.9×10-9M、2.8×10-9M、2.7×10-9M、2.6×10-9M、2.5×10-9M、2.4×10-9M、2.3×10-9M、2.2×10-9M、2.1×10-9M、2.0×10-9M、1.9×10-9M、1.8×10-9M、1.7×10-9M、1.6×10-9M、1.5×10-9M、1.4×10-9M的KD結合人PSMA，該KD是藉由表面電漿共振法測量的。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中，
(i)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：77、107、108、109、110、111或112的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：78、113、114或115的胺基酸序列，或
(ii)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：73或99的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：74或100的胺基酸序列，或
(iii)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：75、101、102或103的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：76、104、105或106的胺基酸序列，或
(iv)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：79、116或117的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：80、118或119的胺基酸序列，或
(v)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：81或120的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：82、121、122、123、124、125或126的胺基酸序列，或
(vi)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：83或127的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：84、128、129或130的胺基酸序列，或
(vii)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：85、131或132的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：86、133、134或135的胺基酸序列，或
(viii)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：87、136、137或138的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：88、139或140的胺基酸序列，或
(ix)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：89、141、142、143或144的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：90、145、146或147的胺基酸序列，或
(x)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：91、148或149的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：92、150、151或152的胺基酸序列，或
(xi)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：93、153、154、155或156的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：94、157或158的胺基酸序列，或
(xii)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：95、277、278或279的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：96、280、281、282或283的胺基酸序列。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中
(i)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：112的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：115的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：110的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：114的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：77的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：78的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：107的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：113的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：108的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：113的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：109的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：113的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：110的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：113的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：111的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：113的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：107的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：114的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：108的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：114的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：109的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：114的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：111的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：114的胺基酸序列，或
(ii)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：73的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：74的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：99的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：100的胺基酸序列，或
(iii)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：75的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：76的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：101的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：104的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：102的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：104的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：103的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：104的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：101的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：105的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：102的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：105的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：103的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：105的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：101的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：106的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：102的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：106的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：103的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：106的胺基酸序列，或
(iv)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：79胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：80的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：116的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：118的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：117的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：118的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：116的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：119的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：117的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：119的胺基酸序列，或
(v)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：81的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：82的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：120的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：121的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：120的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：122的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：120的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：123的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：120的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：124的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：120的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：125的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：120的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：126的胺基酸序列，或
(vi)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：83的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：84的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：127的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：128的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：127的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：129的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：127的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：130的胺基酸序列，或
(vii)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：85的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：86的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：131的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：133的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：131的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：134的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：131的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：135的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：132的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：133的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：132的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：134的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：132的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：135的胺基酸序列，或
(viii)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：87的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：88的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：136的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：139的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：137的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：139的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：138的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：139的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：138的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：140的胺基酸序列，或
(ix)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：89的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：90的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：141的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：145的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：142的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：145的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：143的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：145的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：144的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：145的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：141的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：146的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：142的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：146的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：143的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：146的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：144的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：146的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：141的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：147的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：142的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：147的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：143的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：147的胺基酸序列，或
(x)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：91的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：92的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：148的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：150的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：149的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：150的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：148的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：151的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：149的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：151的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：148的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：152的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：149的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：152的胺基酸序列，或
(xi)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：93的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：94的胺基酸序列；或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：153的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：157的胺基酸序列；或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：154的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：157的胺基酸序列；或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：155的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：157的胺基酸序列；或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：156的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：157的胺基酸序列；或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：153的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：158的胺基酸序列；或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：154的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：158的胺基酸序列；或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：155的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：158的胺基酸序列；或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：156的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：158的胺基酸序列；或
(xii)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：95的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：96的胺基酸序列。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中
(i)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：112的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：115的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：110的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：114的胺基酸序列，或
(vi)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：127的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：128的胺基酸序列。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含Fc區(包括IgG Fc區或IgG1Fc區)。在一些實施方案中，該Fc區相比野生型Fc區，包含一個或多個胺基酸取代，該胺基酸取代能夠減少與Fc受體的結合，特別是與Fcγ受體的結合。在一些實施方案中，該Fc區是人IgG1Fc區，並且在234和235位置的胺基酸殘基為A，編號依據為EU索引。在一些實施方案中，該Fc區包含SEQ ID NO：175的胺基酸序列。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中該抗原結合分子還包含Fc區，該Fc區包含能夠相互締合的第一亞基(Fc1)和第二亞基(Fc2)，該Fc1和Fc2各自獨立地具有一個或多個減少Fc區同源二聚化的胺基酸取代。
本揭露中的序數詞“第一”、“第二”、“第三”、“1”、“2”、“3”等(如“第一亞基”、“Fc2”、“第三鏈”、“連接子2”)僅用於區分不同的特徵、要素、組件或步驟，不意圖限制數量、順序、水平。
在一些實施方案中，該Fc1和Fc2各自獨立地具有一個或多個根據杵臼技術的胺基酸取代。在一些實施方案中，該Fc1具有根據杵臼技術的凸起結構，和該Fc2具有根據杵臼技術的孔結構。反之亦然。
在一些實施方案中，該Fc1在366位置的胺基酸殘基為W；和該Fc2在366位置的胺基酸殘基為S、在368位置的胺基酸殘基為A、和在407位置的胺基酸殘基為V，編號依據為EU索引。反之亦然。
在一些實施方案中，該Fc1在354位置的胺基酸殘基為C；和該Fc2在349位置的胺基酸殘基為C，編號依據為EU索引。反之亦然。
在一些實施方案中，該Fc1具有SEQ ID NO：169的胺基酸序列，和該Fc2具有SEQ ID NO：170的胺基酸序列。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含一個特異性結合PSMA的抗原結合模塊和一個特異性結合CD3的抗原結合模塊。在一些實施方案中，該特異性結合PSMA的抗原結合模塊和特異性結合CD3的抗原結合模塊是scFv。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，該抗原結合分子包含一條具有式(a)所示結構的第一鏈和一條具有式(b)所示結構的第二鏈，
式(a)[PSMA-VH]-[連接子1]-[PSMA-VL]-[連接子2]-[CD3-VH]-[連接子3]-[CD3-VL]-[連接子4]-[Fc2]，
式(b)[Fc1]，
式(a)和式(b)所示的結構是從N端至C端排列的，該連接子1、連接子2、連接子3和連接子4是相同或不同的肽連接子(作為非限制性示例，如圖1E所示結構)。應當理解，此處的Fc1和Fc2作用在於形成二聚體，因此可互換。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中
該抗原結合分子具有：一條包含SEQ ID NO：191的胺基酸序列的第一鏈和一條包含SEQ ID NO：169的胺基酸序列的第二鏈；或
該抗原結合分子具有：一條包含SEQ ID NO：192的胺基酸序列的第一鏈和一條包含SEQ ID NO：169的胺基酸序列的第二鏈；或
該抗原結合分子具有：一條包含SEQ ID NO：198的胺基酸序列的第一鏈和一條包含SEQ ID NO：169的胺基酸序列的第二鏈。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中該特異性結合PSMA的抗原結合模塊或該特異性結合CD3的抗原結合模塊包含(能夠形成二聚體的)Titin鏈和Obscurin鏈。
在一些實施方案中，該Titin鏈包含選自由SEQ ID NO：210至SEQ ID NO：228組成的組的胺基酸序列，該Obscurin鏈包含選自由SEQ ID NO：
229至SEQ ID NO：269組成的組的胺基酸序列。在一些實施方案中，該Titin鏈包含SEQ ID NO：226的胺基酸序列，該Obscurin鏈包含SEQ ID NO：264的胺基酸序列。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含一個特異性結合PSMA的抗原結合模塊和一個特異性結合CD3的抗原結合模塊。在一些實施方案中，該特異性結合PSMA的抗原結合模塊是Fab；該特異性結合CD3的抗原結合模塊是經替換的Fab，其包含(能夠形成二聚體的)Titin鏈和Obscurin鏈。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，該抗原結合分子包含一條具有式(c)所示結構的第一鏈、一條具有式(d)所示結構的第二鏈、一條具有式(e)所示結構的第三鏈和一條具有式(f)所示結構的第四鏈，
式(c)[PSMA-VH]-[CH1]-[Fc1]，
式(d)[PSMA-VL]-[CL]，
式(e)[CD3-VH]-[連接子5]-[Obscurin鏈]-[Fc2]，
式(f)[CD3-VL]-[連接子6]-[Titin鏈]，
式(c)、(d)、(e)和(f)所示的結構是從N端至C端排列的，該連接子5和該連接子6是相同或不同的肽連接子(作為非限制性示例，如圖1A所示結構)。應當理解，此處的Fc1和Fc2作用在於形成二聚體，因此可互換。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中
該抗原結合分子具有：一條包含SEQ ID NO：193的胺基酸序列的第一鏈、一條包含SEQ ID NO：194的胺基酸序列的第二鏈、一條包含SEQ
ID NO：171的胺基酸序列的第三鏈和一條包含SEQ ID NO：172的胺基酸序列的第四鏈，或，
該抗原結合分子具有：一條包含SEQ ID NO：201的胺基酸序列的第一鏈、一條包含SEQ ID NO：202的胺基酸序列的第二鏈、一條包含SEQ ID NO：171的胺基酸序列的第三鏈和一條包含SEQ ID NO：172的胺基酸序列的第四鏈，或
該抗原結合分子具有：一條包含SEQ ID NO：206的胺基酸序列的第一鏈、一條包含SEQ ID NO：207的胺基酸序列的第二鏈、一條包含SEQ ID NO：171的胺基酸序列的第三鏈和一條包含SEQ ID NO：172的胺基酸序列的第四鏈，或
該抗原結合分子具有：一條包含SEQ ID NO：284的胺基酸序列的第一鏈、一條包含SEQ ID NO：285的胺基酸序列的第二鏈、一條包含SEQ ID NO：171的胺基酸序列的第三鏈和一條包含SEQ ID NO：172的胺基酸序列的第四鏈。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含兩個特異性結合PSMA的抗原結合模塊和一個特異性結合CD3的抗原結合模塊。在一些實施方案中，該特異性結合PSMA的抗原結合模塊是Fab；該特異性結合CD3的抗原結合模塊是經替換的Fab，其包含(能夠形成二聚體的)Titin鏈和Obscurin鏈。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含一條具有式(c)所示結構的第一鏈、兩條具有式(d)所示結構
的第二鏈、一條具有式(g)所示結構的第三鏈和一條具有式(h)所示結構的第四鏈，
式(c)[PSMA-VH]-[CH1]-[Fc1]，
式(d)[PSMA-VL]-[CL]，
式(g)[PSMA-VH]-[CH1]-[CD3-VH]-[連接子7]-[Titin鏈]-[Fc2]，
式(h)[CD3-VL]-[連接子8]-[Obscurin鏈]，
式(c)、(d)、(g)和(h)所示的結構是從N端至C端排列的，該連接子7和該連接子8是相同或不同的肽連接子。(作為非限制性示例，如圖1B所示結構)。應當理解，此處的Fc1和Fc2作用在於形成二聚體，因此可互換。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中
該抗原結合分子具有：一條包含SEQ ID NO：180的胺基酸序列的第一鏈、兩條包含SEQ ID NO：181的胺基酸序列的第二鏈、一條包含SEQ ID NO：182的胺基酸序列的第三鏈和一條包含SEQ ID NO：174的胺基酸序列的第四鏈，或
該抗原結合分子具有：一條包含SEQ ID NO：187的胺基酸序列的第一鏈、兩條包含SEQ ID NO：188的胺基酸序列的第二鏈、一條包含SEQ ID NO：189的胺基酸序列的第三鏈和一條包含SEQ ID NO：174的胺基酸序列的第四鏈，或
該抗原結合分子具有：一條包含SEQ ID NO：193的胺基酸序列的第一鏈、兩條包含SEQ ID NO：194的胺基酸序列的第二鏈、一條包含SEQ
ID NO：195的胺基酸序列的第三鏈和一條包含SEQ ID NO：174的胺基酸序列的第四鏈，或
該抗原結合分子具有：一條包含SEQ ID NO：206的胺基酸序列的第一鏈、兩條包含SEQ ID NO：207的胺基酸序列的第二鏈、一條包含SEQ ID NO：208的胺基酸序列的第三鏈和一條包含SEQ ID NO：174的胺基酸序列的第四鏈。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含兩個特異性結合PSMA的抗原結合模塊和兩個特異性結合CD3的抗原結合模塊。在一些實施方案中，該特異性結合PSMA的抗原結合模塊是Fab；該特異性結合CD3的抗原結合模塊是經替換的Fab，其包含(能夠形成二聚體的)Titin鏈和Obscurin鏈。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中述抗原結合分子包含兩條具有式(j)所示結構的第一鏈、兩條具有式(d)所示結構的第二鏈和兩條具有式(h)所示結構的第三鏈，
式(j)[PSMA-VH]-[CH1]-[CD3-VH]-[連接子9]-[Titin鏈]-[Fc的一個亞基]，
式(d)[PSMA-VL]-[CL]，
式(h)[CD3-VL]-[連接子8]-[Obscurin鏈]，
式(j)、(d)和(h)所示的結構是從N端至C端排列的，該連接子8和該連接子9是相同或不同的肽連接子。(作為非限制性示例，如圖1C所示結構)。應當理解，此處的Fc1和Fc2作用在於形成二聚體，因此可互換。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中
該抗原結合分子具有：兩條包含SEQ ID NO：183的胺基酸序列的第一鏈、兩條包含SEQ ID NO：181的胺基酸序列的第二鏈和兩條包含SEQ ID NO：174的胺基酸序列的第三鏈，或
該抗原結合分子具有：兩條包含SEQ ID NO：185的胺基酸序列的第一鏈、兩條包含SEQ ID NO：186的胺基酸序列的第二鏈和兩條包含SEQ ID NO：174的胺基酸序列的第三鏈，或
該抗原結合分子具有：兩條包含SEQ ID NO：196的胺基酸序列的第一鏈、兩條包含SEQ ID NO：194的胺基酸序列的第二鏈和兩條包含SEQ ID NO：174的胺基酸序列的第三鏈，或
該抗原結合分子具有：兩條包含SEQ ID NO：203的胺基酸序列的第一鏈、兩條包含SEQ ID NO：204的胺基酸序列的第二鏈和兩條包含SEQ ID NO：174的胺基酸序列的第三鏈，或
該抗原結合分子具有：兩條包含SEQ ID NO：286的胺基酸序列的第一鏈、兩條包含SEQ ID NO：285的胺基酸序列的第二鏈和兩條包含SEQ ID NO：174的胺基酸序列的第三鏈。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含兩個特異性結合PSMA的抗原結合模塊、兩個特異性結合CD3的抗原結合模塊。在一些實施方案中，該特異性結合PSMA的抗原結合模塊是Fab，該特異性結合CD3的抗原結合模塊是scFv。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含兩條具有式(k)所示結構的第一鏈和兩條具有式(d)所示結構的第二鏈，
式(k)[PSMA-VH]-[CH1]-[CD3-VH]-[連接子9]-[CD3-VL]-[連接子10]-[Fc的一個亞基]，
式(d)[PSMA-VL]-[CL]，
式(k)和式(d)所示的結構是從N端至C端排列的，該連接子9和該連接子10是相同或不同的肽連接子。(作為非限制性示例，如圖1D所示結構)。應當理解，此處的Fc1和Fc2作用在於形成二聚體，因此可互換。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中
該抗原結合分子具有：兩條包含SEQ ID NO：184的胺基酸序列的第一鏈和兩條包含SEQ ID NO：181的胺基酸序列的第二鏈，或
該抗原結合分子具有：兩條包含SEQ ID NO：190的胺基酸序列的第一鏈和兩條包含SEQ ID NO：188的胺基酸序列的第二鏈，或
該抗原結合分子具有：兩條包含SEQ ID NO：197的胺基酸序列的第一鏈和兩條包含SEQ ID NO：194的胺基酸序列的第二鏈，或
該抗原結合分子具有：兩條包含SEQ ID NO：199的胺基酸序列的第一鏈和兩條包含SEQ ID NO：200的胺基酸序列的第二鏈，或
該抗原結合分子具有：兩條包含SEQ ID NO：205的胺基酸序列的第一鏈和兩條包含SEQ ID NO：204的胺基酸序列的第二鏈，或
該抗原結合分子具有：兩條包含SEQ ID NO：209的胺基酸序列的第一鏈和兩條包含SEQ ID NO：207的胺基酸序列的第二鏈。
在另一個方面，本揭露還提供一種分離的抗體，其能夠特異性結合PSMA，該抗體包含重鏈可變區PSMA-VH和輕鏈可變區PSMA-VL，其中
(i)該PSMA-VH中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3分別包含SEQ ID NO：77中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3的胺基酸序列，和該PSMA-VL中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3分別包含SEQ ID NO：78中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3的胺基酸序列，或
(ii)該PSMA-VH中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3分別包含SEQ ID NO：73中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3的胺基酸序列，和該PSMA-VL中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3分別包含SEQ ID NO：74中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3的胺基酸序列，或
(iii)該PSMA-VH中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3分別包含SEQ ID NO：75中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3的胺基酸序列，和該PSMA-VL中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3分別包含SEQ ID NO：76中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3的胺基酸序列，或
(iv)該PSMA-VH中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3分別包含SEQ ID NO：79中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3的胺基酸序列，和該PSMA-VL中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3分別包含SEQ ID NO：80中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3的胺基酸序列，或
(v)該PSMA-VH中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3分別包含SEQ ID NO：81中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-
HCDR3的胺基酸序列，和該PSMA-VL中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3分別包含SEQ ID NO：82中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3的胺基酸序列，或
(vi)該PSMA-VH中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3分別包含SEQ ID NO：83中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3的胺基酸序列，和該PSMA-VL中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3分別包含SEQ ID NO：84中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3的胺基酸序列，或
(vii)該PSMA-VH中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3分別包含SEQ ID NO：85中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3的胺基酸序列，和該PSMA-VL中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3分別包含SEQ ID NO：86中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3的胺基酸序列，或
(viii)該PSMA-VH中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3分別包含SEQ ID NO：87中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3的胺基酸序列，和該PSMA-VL中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3分別包含SEQ ID NO：88中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3的胺基酸序列，或
(ix)該PSMA-VH中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3分別包含SEQ ID NO：89中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3的胺基酸序列，和該PSMA-VL中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和
PSMA-LCDR3分別包含SEQ ID NO：90中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3的胺基酸序列，或
(x)該PSMA-VH中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3分別包含SEQ ID NO：91中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3的胺基酸序列，和該PSMA-VL中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3分別包含SEQ ID NO：92或152中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3的胺基酸序列，或
(xi)該PSMA-VH中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3分別包含SEQ ID NO：93中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3的胺基酸序列，和該PSMA-VL中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3分別包含SEQ ID NO：94中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3的胺基酸序列，或
(xii)該PSMA-VH中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3分別包含SEQ ID NO：95中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3的胺基酸序列，和該PSMA-VL中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3分別包含SEQ ID NO：96中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3的胺基酸序列。
在一些實施方案中，該PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2、PSMA-HCDR3、PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3根據Kabat、IMGT、Chothia、AbM或Contact編號規則定義。
在一些實施方案中，如前所述的分離的抗體，其中
(i)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：13的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：14的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ ID NO：15的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：17的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：18的胺基酸序列的PSMA-LCDR3，或
(ii)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：1的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：2的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ ID NO：3的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID NO：4的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：5的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：6的胺基酸序列的PSMA-LCDR3，或
(iii)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：7的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：8的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ ID NO：9的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID NO：10的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：11的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：12的胺基酸序列的PSMA-LCDR3，或
(iv)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：19的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ ID NO：21的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID NO：22的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：23的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：24的胺基酸序列的PSMA-LCDR3，或
(v)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：25的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：26的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ
ID NO：27的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID NO：28的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：29的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：30的胺基酸序列的PSMA-LCDR3，或
(vi)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：31的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：32的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ ID NO：33的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID NO：34的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：35的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：36的胺基酸序列的PSMA-LCDR3，或
(vii)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：37的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：38的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ ID NO：39的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID NO：40的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：41的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：42的胺基酸序列的PSMA-LCDR3，或
(viii)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：43的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：44的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ ID NO：45的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID NO：46的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：47的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：48的胺基酸序列的PSMA-LCDR3，或
(ix)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：49的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：50的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ ID NO：51的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID
NO：52的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：53的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：54的胺基酸序列的PSMA-LCDR3，或
(x)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：55的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：56的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ ID NO：57的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID NO：58或159的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：59的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：60的胺基酸序列的PSMA-LCDR3，或
(xi)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：61的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：62的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ ID NO：63的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID NO：64的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：65的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：66的胺基酸序列的PSMA-LCDR3，或
(xii)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：67的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：68的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ ID NO：69的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID NO：70的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：71的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：72的胺基酸序列的PSMA-LCDR3。
在一些實施方案中，該PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2、PSMA-HCDR3、PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3是根據Kabat編號規則定義的。
在一些實施方案中，該抗體以小於10μg/mL、1.5μg/mL、1.3μg/mL、1.1μg/mL、1μg/mL、0.7μg/mL、0.6μg/mL、0.5μg/mL、0.4μg/mL、0.3μg/mL、0.2μg/mL、0.1μg/mL、0.09μg/mL、0.08μg/mL、0.07μg/mL、0.06μg/mL、0.05μg/mL、0.04μg/mL、0.03μg/mL的EC50結合PSMA，該EC50是藉由ELISA測量的。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗體，其中
(i)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：77、107、108、109、110、111或112的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：78、113、114或115的胺基酸序列，或
(ii)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：73或99的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：74或100的胺基酸序列，或
(iii)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：75、101、102或103的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：76、104、105或106的胺基酸序列，或
(iv)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：79、116或117的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：80、118或119的胺基酸序列，或
(v)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：81或120的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：82、121、122、123、124、125或126的胺基酸序列，或
(vi)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：83或127的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：84、128、129或130的胺基酸序列，或
(vii)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：85、131或132的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：86、133、134或135的胺基酸序列，或
(viii)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：87、136、137或138的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：88、139或140的胺基酸序列，或
(ix)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：89、141、142、143或144的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：90、145、146或147的胺基酸序列，或
(x)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：91、148或149的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：92、150、151或152的胺基酸序列，或
(xi)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：93、153、154、155或156的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：94、157或158的胺基酸序列；或
(xii)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：95、277、278或279的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：96、280、281、282或283的胺基酸序列。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗體，其中
(i)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：112的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：115的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：110的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：114的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：77的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：78的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：107的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：113的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：108的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：113的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：109的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：113的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：110的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：113的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：111的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：113的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：107的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：114的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：108的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：114的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：109的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：114的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：111的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：114的胺基酸序列，或
(ii)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：73的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：74的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：99的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：100的胺基酸序列，或
(iii)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：75的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：76的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：101的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：104的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：102的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：104的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：103的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：104的胺基酸序列，或
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(x)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：91的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：92的胺基酸序列，或
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(xi)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：93的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：94的胺基酸序列；或
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(xii)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：95的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：96的胺基酸序列。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗體，
(i)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：112的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：115的胺基酸序列，或
該PSMA-VH包含SEQ ID NO：110的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：114的胺基酸序列，或
(vi)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：127的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：128的胺基酸序列。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗體，其中該抗體是雙特異性抗體。在一些實施方案中，該雙特異性抗體特異性結合PSMA和CD3。
在另一個方面，本揭露提供了一種醫藥組成物，其含有：治療有效量的前述任一項所述的抗原結合分子或前述任一項所述的抗體，以及一種或更多種藥學上可接受的載體、稀釋劑、緩衝劑或賦形劑。在一些實施方案中，該醫藥組成物中還包含至少一種第二治療劑。在一些實施方案中，該第二治療劑是能夠特異性結合CD28的抗體或能夠特異性結合PSMA和CD28的抗體。
在另一個方面，本揭露還提供分離的核酸，其編碼前述任一項所述的抗原結合分子或前述任一項所述的抗體。
在另一個方面，本揭露還提供一種宿主細胞，其包含前述的核酸。宿主細胞不能發育成植株或動物。
在另一個方面，本揭露還提供一種治療疾病的方法，該方法包括向受試者施用治療有效量的前述任一項所述的抗原結合分子或前述任一項所述的抗體或其組成物。
在另一個方面，本揭露還提供前述任一項所述的抗原結合分子或前述任一項所述的抗體或其組成物在製備治療或預防疾病的藥物中的用途。
在另一個方面，本揭露還提供用作藥物的前述任一項所述的抗原結合分子或前述任一項所述的抗體或其組成物。在一些實施方案中，該藥物用於治療疾病。
在一些實施方案中，如前任一項所述的疾病是增殖性疾病、腫瘤或免疫疾病。在一些實施方案中，如前任一項所述的疾病選自以下任一項：前列腺癌、肺癌、子宮內膜癌、腎癌、膀胱癌、結直腸癌(包括結腸癌和直腸癌)及胃癌。在一些實施方案中，該疾病是前列腺癌。在一些實施方案中，該疾病是去勢抗性前列腺癌。
在一些實施方案中，前述的疾病為與PSMA相關的疾病。在一些實施方案中，前述的疾病為PSMA表達異常的疾病。
本揭露提供的抗原結合分子，具有治療活性、安全性、藥物代謝動力學特性和成藥性(如穩定性)好的特點。
圖1A為Format1的結構示意圖。
圖1B為Format2的結構示意圖。
圖1C為Format3的結構示意圖。
圖1D為Format4的結構示意圖。
圖1E為Format5的結構示意圖。
術語
本文所用的術語只是為了描述實施方案的目的，並非旨在進行限制。除非另外定義，本文所用的全部技術術語和科學術語具有與本揭露所屬技術領域具有通常知識者通常所理解的相同意義。
除非上下文另外清楚要求，否則在整個說明書和申請專利範圍中，應將詞語“包含”、“具有”、“包括”等理解為具有包含意義，而不是排他性或窮舉性意義；也即，“包括但不僅限於”的意義。除非另有說明，“包含”包括了“由......組成”。例如，對於包含SEQ ID NO：1的胺基酸序列的PSMA-HCDR1，其明確的涵蓋胺基酸序列如SEQ ID NO：1所示的PSMA-HCDR1。
本揭露所用胺基酸三字母代碼和單字母代碼如J.biol.chem，243，p3558(1968)中所述。
術語“和/或”，例如“X和/或Y”應當理解為意指“X和Y”或“X或Y”並且應當被用來提供對兩種含義或任一含義的明確支持。
術語“胺基酸”是指天然存在的和合成的胺基酸，以及以與天然存在的胺基酸類似的方式起作用的胺基酸類似物和胺基酸模擬物。天然存在的胺基酸是由遺傳密碼編碼的那些胺基酸，以及後來修飾的那些胺基酸，例如羥脯胺酸、γ-羧基谷胺酸和O-磷酸絲胺酸。胺基酸類似物是指與天然存在的胺基酸具有相同基本化學結構(即與氫、羧基、胺基和R基團結合的α碳)的化合物，例
如高絲胺酸、正亮胺酸、甲硫胺酸亞碸、甲硫胺酸甲基鋶。此類類似物具有修飾的R基團(例如，正亮胺酸)或修飾的肽骨架，但保留與天然存在的胺基酸相同的基本化學結構。胺基酸模擬物是指具有與胺基酸的一般化學結構不同的結構，但是以與天然存在的胺基酸類似的方式起作用的化學化合物。
術語“胺基酸突變”包括胺基酸取代，缺失，插入和修飾。可以進行取代、缺失、插入和修飾的任意組合來實現最終構建體，只要最終構建體擁有期望的特性，例如降低或對Fc受體的結合。胺基酸序列缺失和插入包括在多肽鏈的胺基端和/或羧基端的缺失和插入。具體的胺基酸突變可以是胺基酸取代。在一個實施方案中，胺基酸突變是非保守性的胺基酸取代，即將一個胺基酸用具有不同結構和/或化學特性的另一種胺基酸替換。胺基酸取代包括由非天然存在的胺基酸或由20種天然胺基酸的衍生物(例如4-羥脯胺酸、3-甲基組胺酸、鳥胺酸、高絲胺酸、5-羥賴胺酸)替換。可以使用本領域中公知的遺傳或化學方法生成胺基酸突變。遺傳方法可以包括定點誘變、PCR，基因合成等。預計基因工程以外的改變胺基酸側鏈基團的方法，如化學修飾也是可用的。本文中可使用各種名稱來指示同一胺基酸突變。本文中，可採用位置+胺基酸殘基的方式表示特定位點的胺基酸殘基，例如366W，則表示在366位點上的胺基酸殘基為W。T366W則表示第366位點上的胺基酸殘基由原來的T突變為了W。
術語“抗原結合分子”以最廣義使用，涵蓋各種特異性結合抗原的分子，包括但不限於抗體、其他具有抗原結合活性的多肽以及兩者融合而成的抗體融合蛋白，只要它們展現出期望的抗原結合活性。本文的抗原結合分子包含可變區(VH)和可變區(VL)，其共同構成抗原結合域。示例性的，本文中的抗原結合分子是雙特異性抗原結合分子(例如：雙特異性抗體)。
術語“抗體”以最廣義使用，並且涵蓋各種抗體結構，包括但不限於單株抗體，多株抗體；單特異性抗體，多特異性抗體(例如雙特異性抗體)，全長抗體和抗體片段(或抗原結合片段，或抗原結合部分)，只要它們展現出期望的抗原結合活性。例如，天然IgG抗體是約150,000道爾頓的異四聚蛋白，由二硫鍵結合的兩條輕鏈和兩條重鏈構成。從N至C端，每條重鏈具有一個可變區(VH)，又稱作可變重域、重鏈可變區，接著是三個恆定域(CH1、CH2和CH3)。類似地，從N至C端，每條輕鏈具有一個可變區(VL)，又稱作可變輕域，或輕鏈可變域，接著是一個恆定輕域(輕鏈恆定區、CL)。
術語“雙特異性抗體”指能夠對兩個不同抗原或同一抗原的至少兩個不同抗原表位特異性結合的抗體(包括抗體或其抗原結合片段，如單鏈抗體)。現有技術已公開了各種結構的雙特異性抗體。根據IgG分子的完整性可分為IgG樣雙特異性抗體和抗體片段型雙特異性抗體。根據抗原結合區域的數量可分為二價、三價、四價或更多價的雙特異性抗體。根據結構是否對稱可分為對稱結構雙特異性抗體和不對稱結構雙特異性抗體。其中，抗體片段型雙特異性抗體，例如缺乏Fc片段的Fab片段，其藉由將2個或多個Fab片段結合在一個分子中形成雙特異性抗體，其具有較低的免疫原性，且分子量小，具有較高的腫瘤組織滲透性；該類型的典型的抗體結構如F(ab)2、scFv-Fab、(scFv)2-Fab。IgG樣雙特異性抗體(例如具有Fc片段)，這類抗體相對分子量較大，Fc片段有助於抗體的純化，並提高其溶解性、穩定性，Fc部分還可能會與受體FcRn結合，增加抗體血清半衰期，典型的雙特異性抗體結構模型如KiH、CrossMAb、Triomab quadroma、Fc△Adp、ART-Ig、BiMAb、Biclonics、BEAT、DuoBody、Azymetric、XmAb、2：1 TCBs、1Fab-IgG TDB、FynomAb、two-in-one/DAF、scFv-Fab-IgG、
DART-Fc、LP-DART、CODV-Fab-TL、HLE-BiTE、F(ab)2-CrossMAb、IgG-(scFv)2、Bs4Ab、DVD-Ig、Tetravalent-DART-Fc、(scFv)4-Fc、CODV-Ig、mAb2、F(ab)4-CrossMAb等(參見Aran F.Labrijn等，Nature Reviews Drug Discovery volume 18，pages585-608(2019)；Chen S1等，J Immunol Res.2019 Feb 11；2019：4516041)。
術語“可變區”或“可變域”指抗原結合分子中結合抗原的域。本文中，特異性結合PSMA的抗原結合模塊中的重鏈可變區標示為PSMA-VH，輕鏈可變區標示為PSMA-VL。特異性結合CD3的抗原結合模塊中的重鏈可變區標示為CD3-VH，輕鏈可變區標示為CD3-VL。VH和VL各包含四個保守的框架區(FR)和三個互補決定區(CDR)。其中，術語“互補決定區”或“CDR”指可變結構域內主要促成與抗原結合的區域；“框架”或“FR”是指除CDR殘基之外的可變結構域殘基。VH包含3個CDR區：HCDR1、HCDR2和HCDR3；VL包含3個CDR區：LCDR1、LCDR2和LCDR3。本文中，PSMA-VH中的3個CDR區分別標示為PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3；PSMA-VL中的3個CDR區分別標示為PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3；CD3-VH中的3個CDR區分別標示為CD3-HCDR1、CD3-HCDR2和CD3-HCDR3；CD3-VL中的3個CDR區分別標示為CD3-LCDR1、CD3-LCDR2和CD3-LCDR3。每個VH和VL從N端到C端依次為：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。單個VH或VL可能足以賦予抗原結合特異性。
可以藉由各種公知方案來確定CDR的胺基酸序列邊界，例如：“Kabat”編號規則(參見Kabat等(1991)，“Sequences of Proteins of Immunological Interest”，第5版，Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，
MD)、“Chothia”編號規則、“ABM”編號規則、“contact”編號規則(參見Martin,ACR.Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains[J].2001)和ImMunoGenTics(IMGT)編號規則(Lefranc，M.P.等，Dev.Comp.Immunol.，27，55-77(2003)；Front Immunol.2018 Oct 16；9：2278)等；各種編號系統之間的對應關係是本領域技術人員所屬技術領域具有通常知識者熟知的。本揭露的編號規則如下表1中所示。
表1. CDR編號系統之間的關係
除非另有說明，本揭露實施例中的可變區和CDR序列均適用“Kabat”編號規則。儘管在具體的實施方案中，採用了一種編號系統(如Kabat)來限定胺基酸殘基，但是其他編號系統所的對應技術方案將視為等同技術方案。
術語“抗體片段”指不同於完整抗體的分子，其包含完整抗體的部分，該部分保留了完整抗體的抗原結合能力。抗體片段的實例包括但不限於Fv、Fab、Fab’、Fab’-SH、F(ab')2、單域抗體、單鏈Fab(scFab)、雙抗體、線性抗體、單鏈抗體分子(例如scFv)；以及由抗體片段形成的多特異性抗體。
術語“Fc區”或“片段可結晶區”用於定義抗體重鏈的C末端區域，包括天然Fc區和改造的Fc區。在一些實施方案中，Fc區包含了相同或不同的兩個亞基。在一些實施方案中，人IgG重鏈的Fc區定義為從Cys226位置處的胺基酸殘基或從Pro230延伸至其羧基末端。用於本文該抗體的合適天然序列Fc區包括人IgG1。除非另有說明，Fc區的編號規則為EU索引。
術語“Titin鏈”是指Titin蛋白中一段長度為78-118個胺基酸的包含Titin Ig-樣152結構域的肽段或其功能變體。該Titin鏈能夠與Obscurin鏈結合形成二聚化複合物。
術語“Obscurin鏈”是指Obscurin蛋白上一段長度為87-117個胺基酸的包含Obscurin Ig-樣1結構域的肽段或其功能變體，或Obscurin-樣1蛋白上一段長度為78-118個胺基酸的包含Obscurin-樣Ig-樣1結構域的肽段或其功能變體。該Obscurin鏈能夠與Titin鏈結合形成二聚化複合物。
本揭露的Titin鏈與Obscurin鏈可用於替換Fab中的CH1和CL，形成經替換的Fab(Fab-S)，該替換不影響抗原結合分子與抗原或其表位的結合。
術語“嵌合”抗體指這樣的一種抗體，其中重和/或輕鏈的一部分源自特定的來源或物種，而重和/或輕鏈的剩餘部分源自不同來源或物種。
術語“人源化”抗體是保留非人抗體的反應性，同時在人中具有較低免疫原性的抗體。例如，可以藉由保留非人CDR區並用人對應物(即，恆定區以及可變區的框架區部分)替換抗體的其餘部分來實現人源化。
術語“親和力”是指分子(例如，抗體)的單個結合部位與其結合配體(例如，抗原)之間非共價相互作用的強度。除非另外指明，如本文所用，
“結合親和力”是指內部結合親和力，其反映出結合對(例如，抗體與抗原)的成員之間1：1相互作用。分子X對其配體Y的親和力通常可以由平衡解離常數(KD)表示。親和力可以藉由本領域已知的常規方法(包括本文所述的那些)測量。術語“kassoc”或“ka”指特定抗體-抗原相互作用的締合速率，而如本文所使用的術語“kdis”或“kd”意在是指特定抗體-抗原相互作用的解離速率。如本文所使用的，術語“KD”指平衡解離常數，其獲得自kd與ka的比率(即kd/ka)並且表示為莫耳濃度(M)。可以使用本領域已知的方法測定抗體的KD值，例如表面電漿共振法、ELISA或溶液平衡滴定法(SET)。
術語“單株抗體”指基本上均質的抗體的群或其成員，即在該群中包含的抗體分子的胺基酸序列是相同的，除了可能少量存在的天然突變以外。相比之下，“多株抗體”通常包含在其可變結構域具有不同胺基酸序列的多種不同抗體，其通常特異性針對不同表位。“單株”表示從基本上均質的抗體群體獲得的抗體的特徵，並且不應解釋為要求藉由任何特定方法來生產抗體。在一些實施方案中，本揭露提供的抗體是單株抗體。
術語“抗原”是指能夠由抗原結合分子(例如抗體)的所選擇性識別或結合的分子或分子部分。抗原可具有一個或多個能夠與不同的抗原結合分子(例如抗體)相互作用的表位。
術語“表位”指能夠與抗體或其抗原結合片段特異性結合的抗原上的區域(area或region)。表位可以由連續胺基酸(線性表位)形成；或包含非連續胺基酸(構象表位)，例如因抗原的折疊(即藉由蛋白質性質的抗原的三級折疊)而使得非連續的胺基酸在空間上得以接近。構象表位和線性表位的差別在於：在變性溶劑的存在下，抗體對構象表位的結合喪失。表位包含處於獨特空間
構象的至少3，至少4，至少5，至少6，至少7，或8-10個胺基酸。篩選結合特定表位的抗體(即那些結合相同表位的)可以使用本領域例行方法來進行，例如但不限於丙胺酸掃描，肽印跡(見Meth.Mol.Biol.248(2004)443-463)，肽切割分析，表位切除，表位提取，抗原的化學修飾(見Prot.Sci.9(2000)487-496)，和交叉阻斷(見“Antibodies”，Harlow and Lane(Cold Spring Harbor Press,Cold Spring Harb.,NY))。
術語“能夠特異性結合”、“特異性結合”或“結合”是指相比其他抗原或表位，抗體能夠以更高的親和力結合至某個抗原或表位。通常，抗體以約1×10-7M或更小(例如約1×10-8M或更小)的平衡解離常數(KD)結合抗原或表位。在一些實施方案中，抗體與抗原結合的KD為該抗體結合至非特異性抗原(例如BSA、酪蛋白)的KD的10%或更低(例如1%)。可使用已知的方法來測量KD，例如藉由FACS或表面電漿共振測定法所測量的。然而，特異性結合至抗原或其表位的抗體不排除對其它相關的抗原具有交叉反應性，例如，對來自其它物種(同源)(諸如人或猴，例如食蟹獼猴(Macaca fascicularis)(cynomolgus，cyno)、黑猩猩(Pan troglodytes)(chimpanzee，chimp))或狨猴(Callithrix jacchus)(commonmarmoset，marmoset)的相應抗原具有交叉反應性。
術語“不結合”是指抗體不能夠以上述特異性結合的方式結合至某個抗原或其表位。例如，當抗體以約1×10-6M或更大的平衡解離常數(KD)結合抗原或其表位。
術語“抗原結合模塊”指特異性結合目標抗原或其表位的多肽分子。具體的抗原結合模塊包括抗體的抗原結合域，例如包含重鏈可變區和輕鏈可變區。術語“特異性結合PSMA的抗原結合模塊”是指能夠以足夠的親和力結合
PSMA或其表位的模塊，使得含有該模塊的分子可用作靶向PSMA的診斷劑和/或治療劑。例如，特異性結合PSMA的抗原結合模塊具有以下的平衡解離常數(KD)：<約1×10-8M或更小，其是藉由表面電漿共振測定法測量的。抗原結合模塊包括如本文定義的抗體片段，例如Fab，經替換的Fab或scFv。
術語“連接子”指連接兩個多肽片段的連接單元。在本文中，同一結構式中出現的連接子可以是相同或不同的。連接子可以是肽連接子，其包含一個或多個胺基酸，典型的約1-30個、2-24個或3-15個胺基酸。應用於本文的連接子可以是相同或不同的。當“-”出現在結構式中，其表示兩側的單元直接藉由共價鍵連接。
“Tm”是溶解變性溫度(內源螢光)。當蛋白質變性(加熱或變性劑作用)時，三級結構打開，芳香族胺基酸微環境發生變化，導致發射螢光光譜改變。本揭露中，Tm1是指螢光變化到最大值的一半時的溫度。
“Tonset”是變性起始溫度。意指蛋白質開始變性時的溫度，即螢光值開始變化時的溫度。
“Tagg”是聚集起始溫度。藉由靜態光散射，在266nm和473nm兩個波長下檢測聚集體，監測到樣品開始聚集時的溫度。Tagg 266指的是266nm下監測到聚集起始溫度。
術語“核酸”在本文中可與術語“多核苷酸”互換使用，並且是指呈單鏈或雙鏈形式的脫氧核糖核苷酸或核糖核苷酸及其聚合物。該術語涵蓋含有已知核苷酸類似物或修飾的骨架殘基或連接的核酸，該核酸是合成的、天然存在的和非天然存在的，具有與參考核酸相似的結合特性，並且以類似於參考核苷酸的方式代謝。此類類似物的實例包括但不限於硫代磷酸酯、胺基磷酸酯、甲基膦
酸酯、手性-甲基膦酸酯、2-O-甲基核糖核苷酸、肽-核酸(PNA)。“分離的”核酸指已經與其天然環境的組分分開的核酸分子。編碼該抗原結合分子的分離的核酸指編碼抗體重鏈和輕鏈(或其片段)的一個或更多個核酸分子，包括在單一載體或分開的載體中的這樣的一個或更多個核酸分子，和存在於宿主細胞中一個或更多個位置的這樣的一個或更多個核酸分子。除非另有說明，否則特定的核酸序列還隱含地涵蓋其保守修飾的變體(例如，簡併密碼子取代)和互補序列以及明確指明的序列。具體地，如下詳述，簡併密碼子取代可以藉由產生如下序列而獲得，在這些序列中，一個或多個所選的(或全部)密碼子的第三位被簡併鹼基和/或脫氧肌苷殘基取代。
術語“多肽”和“蛋白質”在本文中可互換使用，指胺基酸殘基的聚合物。該術語適用於胺基酸聚合物，其中一個或多個胺基酸殘基是天然存在的胺基酸相應的人工化學模擬物，以及適用於天然存在的胺基酸聚合物和非天然存在的胺基酸聚合物。除非另外說明，否則特定的多肽序列還隱含地涵蓋其保守修飾的變體。
術語序列“同一性”指，當對兩條序列進行最佳比對時，兩條序列的胺基酸/核酸在等價位置相同的程度(百分比)。在比對過程中，必要時可允許引入間隙以獲取最大序列同一性百分比，但任何保守性取代不視為構成序列同一性的一部分。為測定序列同一性百分比，比對可以藉由本領域技術已知的技術來實現，例如使用公開可得到的計算機軟體，諸如BLAST、BLAST-2、ALIGN、ALIGN-2或Megalign(DNASTAR)軟體。所屬技術領域具有通常知識者可確定適用於測量比對的參數，包括在所比較的序列全長上達成最大比對所需的任何算法。
術語“融合”或“連接”是指部件(例如抗原結合模塊和Fc結構域)直接地或經由連接子共價連接。
術語“載體”意指能夠轉運與其連接的另一多核苷酸的多核苷酸分子。一種類型的載體是“質粒”，其是指環狀雙鏈DNA環，其中可以連接附加的DNA區段。另一種類型的載體是病毒載體，例如腺相關病毒載體(AAV或AAV2)，其中另外的DNA區段可以連接到病毒基因組中。某些載體能夠在引入它們的宿主細胞中自主複製(例如，具有細菌複製起點的細菌載體和附加型哺乳動物載體)。其他載體(例如，非附加型哺乳動物載體)可以在引入宿主細胞中後整合到宿主細胞的基因組中，從而與宿主基因組一起複製。術語“表達載體”或“表達構建體”是指適用於對宿主細胞進行轉化且含有指導和/或控制(連同宿主細胞一起)與其可操作地連接的一個或多個異源編碼區的表達的核酸序列的載體。表達構建體可以包括但不限於影響或控制轉錄、轉譯且在存在內含子時影響與其可操作地連接的編碼區的RNA剪接的序列。
術語“宿主細胞”、“宿主細胞系”和“宿主細胞培養物”可互換使用，並且指已經導入外源核酸的細胞，包括此類細胞的後代。宿主細胞包括“轉化體”和“經轉化的細胞”，其包括原代的經轉化的細胞及自其衍生的後代，而不考慮傳代的次數。後代在核酸內容物上可以與親本細胞不完全相同，而是可以含有突變。本文中，該術語包括突變體後代，其與在原代轉化細胞中篩選或選擇的細胞具有相同的功能或生物學活性。宿主細胞包括原核和真核宿主細胞，其中真核宿主細胞包括但不限於哺乳動物細胞、昆蟲細胞系植物細胞和真菌細胞。哺乳動物宿主細胞包括人、小鼠、大鼠、犬、猴、豬、山羊、牛、馬和倉鼠細胞，包括但不限於中國倉鼠卵巢(CHO)細胞、NSO、SP2細胞、HeLa細胞、幼倉鼠腎(BHK)
細胞、猴腎細胞(COS)、人肝細胞癌細胞(例如，Hep G2)、A549細胞、3T3細胞和HEK-293細胞。真菌細胞包括酵母和絲狀真菌細胞，包括例如巴氏畢赤酵母(Pichiapastoris)、芬蘭畢赤酵母(Pichia finlandica)、海藻畢赤酵母(Pichia trehalophila)、科克拉馬畢赤酵母(Pichia koclamae)、膜狀畢赤酵母(Pichia membranaefaciens)、小畢赤酵母(Pichia minuta)(Ogataea minuta、Pichia lindneri)、仙人掌畢赤酵母(Pichiaopuntiae)、耐熱畢赤酵母(Pichia thermotolerans)、柳畢赤酵母(Pichia salictaria)、Pichia guercuum、皮傑普畢赤酵母(Pichia pijperi)、具柄畢赤酵母(Pichia stiptis)、甲醇畢赤酵母(Pichia methanolica)、畢赤酵母屬、釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、釀酒酵母屬、多形漢遜酵母(Hansenula polymorpha)、克魯維酵母屬、乳酸克魯維酵母(Kluyveromyces lactis)、白色念珠菌(Candida albicans)、構巢麯黴(Aspergillus nidulans)、黑麯黴(Aspergillus niger)、米麯黴(Aspergillus oryzae)、裡氏木黴(Trichoderma reesei)、勒克氏菌(Chrysosporium lucknowense)、鐮刀菌屬(Fusarium sp.)、禾穀鐮刀菌(Fusarium gramineum)、菜鐮刀菌(Fusarium venenatum)、小立碗蘚(Physcomitrella patens)和粗糙脈孢菌(Neurospora crassa)。畢赤酵母屬、任何釀酒酵母屬、多形漢遜酵母(Hansenula polymorpha)、任何克魯維酵母屬、白色念珠菌(Candida albicans)、任何麯黴屬、裡氏木黴(Trichoderma reesei)、勒克黴菌(Chrysosporium lucknowense)、任何鐮刀菌屬、解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)和粗糙脈孢菌(Neurospora crassa)。本專利的宿主細胞不包括在專利法中不授權的客體。
“視需要”或“視需要地”意味著隨後所描述地事件或環境可以但不必發生，該說明包括該事件或環境發生或不發生的場合。
術語“醫藥組成物”表示含有一種或多種本文所述的抗原結合分子或抗體與其他化學組分的混合物，該其他組分例如生理學/可藥用的載體和賦形劑。
術語“藥學上可接受的載體、稀釋劑、緩衝劑或賦形劑”指藥物製劑中與活性成分不同的，且對受試者無毒的成分。藥學上可接受的載體、稀釋劑、緩衝劑或賦形劑包括但不限於緩衝劑、賦形劑、穩定劑或防腐劑。
術語“受試者”或“個體”包括人類和非人類動物。非人動物包括所有脊椎動物(例如哺乳動物和非哺乳動物)例如非人靈長類(例如，食蟹猴)、綿羊、狗、牛、雞、兩棲動物和爬行動物。除非明確指出，否則該術語“患者”或“受試者”在本文中可互換地使用。如本文所使用的，術語“食蟹猴(cyno)”或“食蟹猴(cynomolgus)”是指食蟹猴(Macaca fascicularis)。在某些實施方案中，個體或受試者是人。
“施用”或“給予”，當其應用於動物、人、實驗受試者、細胞、組織、器官或生物流體時，是指外源性藥物、治療劑、診斷劑或組成物與動物、人、受試者、細胞、組織、器官或生物流體的接觸。
術語“樣本”是指從受試者分離的採集物(如流體、細胞、或組織)，以及存在於受試者體內的流體、細胞或組織。示例性樣本為生物流體，諸如血液、血清和漿膜液、血漿、淋巴液、尿液、唾液、囊液、淚液、排泄物、痰、分泌組織或器官的黏膜分泌物、陰道分泌物、腹水、胸膜、心包、腹膜、腹腔和其它體腔的流體、由支氣管灌洗液收集的流體、滑液、與受試者或生物來源接觸的液體溶液，例如培養基(包括條件培養基)、灌洗液等，組織活檢樣本、細針穿刺、手術切除的組織、器官培養物或細胞培養物。
“治療(treatment或treat)”和“處理”(及其語法變型)指試圖施加至所治療個體的臨床干預，並且可以為了預防目的、或者在臨床病理學的過程期間進行實施。治療的期望效果包括但不限於預防疾病的發生或復發，減輕症狀，減輕/減少疾病的任何直接或間接病理後果，預防轉移，降低疾病進展速率，改善或減輕疾病狀態，和消退或改善的預後。在一些實施方案中，使用本揭露的分子來延遲疾病的形成或減緩疾病的進展。
“有效量”一般是足以降低症狀的嚴重程度和/或頻率、消除這些症狀和/或潛在病因、預防症狀和/或其潛在病因出現和/或改良或改善由疾病狀態引起或與其相關的損傷的量。在一些實施例中，有效量是治療有效量或預防有效量。
“治療有效量”是足以治療疾病狀態或症狀、尤其與該疾病狀態相關的狀態或症狀，或者以其他方式預防、阻礙、延遲或逆轉該疾病狀態或以任何方式與該疾病相關的任何其他不理想症狀的進展的量。
“預防有效量”是當給予受試者時將具有預定預防效應，例如預防或延遲該疾病狀態的發作(或復發)，或者降低該疾病狀態或相關症狀的發作(或復發)可能性的量。完全治療或預防效未必在給予一個劑量之後便發生，可能在給予一系列劑量之後發生。因而，治療或預防有效量可以一次或多次給予的方式給予。“治療有效量”和“預防有效量”可取決於多種因素變化：諸如個體的疾病狀態、年齡、性別和體重，以及治療劑或治療劑組合在個體中引發期望的應答的能力。有效治療劑或治療劑組合的示例性指標包括例如患者改善的健康狀況。
靶分子
“PSMA”應作廣泛的理解，旨在涵蓋PSMA在哺乳動物體內各階段中的各種形式的分子，例如但不限於PSMA基因在擴增、複製、轉錄、剪接、
加工、翻譯、修飾過程中所產生的分子(例如前體PSMA、成熟PSMA、膜表達的PSMA、PSMA剪接變體、修飾的PSMA、或其片段)；該術語也涵蓋人工製備的或體外表達的PSMA。
“CD3”應作廣泛的理解，旨在涵蓋CD3在哺乳動物體內各階段中的各種形式的分子，例如但不限於BCMA基因在擴增、複製、轉錄、剪接、加工、轉譯、修飾過程中所產生的分子(例如前體CD3、成熟CD3、膜表達的CD3、CD3剪接變體、修飾的CD3、或其片段)；該術語也涵蓋人工製備的或體外表達的CD3。
本揭露的抗原結合分子
本揭露提供了抗原結合分子，其具有諸多有利的特性，例如對PSMA和表達PSMA的細胞的高親和力、體外殺傷活性、治療活性、安全性、藥物代謝動力學特性和成藥性(如產率、純度和穩定性等)。
示例性的抗原結合分子
本揭露的抗原結合分子，包括特異性結合PSMA和CD3的雙特異性抗原結合分子(例如雙特異性抗體)和抗PSMA抗體。特別的，本揭露的抗原結合分子具有以下的一種或多種：
a．抗體針對PSMA的高親和力。在一些實施方案中，該抗體以小於10μg/mL、1.5μg/mL、1.3μg/mL、1.1μg/mL、1μg/mL、0.7μg/mL、0.6μg/mL、0.5μg/mL、0.4μg/mL、0.3μg/mL、0.2μg/mL、0.1μg/mL、0.09μg/mL、0.08μg/mL、0.07μg/mL、0.06μg/mL、0.05μg/mL、0.04μg/mL、0.03μg/mL的EC50結合PSMA，該EC50是藉由ELISA測量的。
b.抗原結合分子(如雙特異性抗體)針對PSMA的高親和力。在一些實施方案中，該抗原結合分子在25℃條件下以小於1×10-7M、1×10-8M、9×10-9M、8×10-9M、7×10-9M、6×10-9M、5×10-9M、4×10-9M、3×10-9M、2.9×10-9M、2.8×10-9M、2.7×10-9M、2.6×10-9M、2.5×10-9M、2.4×10-9M、2.3×10-9M、2.2×10-9M、2.1×10-9M、2.0×10-9M、1.9×10-9M、1.8×10-9M、1.7×10-9M、1.6×10-9M、1.5×10-9M、1.4×10-9M的KD結合人PSMA，該KD是藉由表面電漿共振法測量的。
c．針對細胞表面PSMA的高親和力。該抗體以小於10μg/mL、2μg/mL、1.5μg/mL、1.3μg/mL、1.2μg/mL、1.1μg/mL、1μg/mL、0.1μg/mL、0.09μg/mL、0.08μg/mL、0.07μg/mL、0.06μg/mL、0.05μg/mL、0.04μg/mL的EC50結合細胞表面PSMA，該EC50是藉由ELISA測量的。該細胞是過表達人PSMA的CHO。
d．針對表達PSMA細胞的體外特異性殺傷活性。
e．誘導低水平的細胞因子(IL6和IFNγ)釋放。
f．更強的體內治療活性。
本揭露提供了一種抗原結合分子，其包含至少一個特異性結合PSMA的抗原結合模塊和至少一個特異性結合CD3的抗原結合模塊，該特異性結合PSMA的抗原結合模塊包含PSMA-VH和PSMA-VL，該特異性結合CD3的抗原結合模塊包含CD3-VH和CD3-VL。
本揭露還提供了一種分離的抗體，其能夠特異性結合PSMA，該抗體包含PSMA-VH和PSMA-VL。具體地，本文的實施例披露了抗體系列2、13、15、19、27、31、41、43、46、50、71和73。以下以抗體15為例描述本文的抗體。
特異性結合PSMA和CD3的抗原結合分子抗原結合分子或抗PSMA抗體的該PSMA-VH具有：胺基酸序列如SEQ ID NO：13所示的PSMA-HCDR1、胺基酸序列如SEQ ID NO：14所示的PSMA-HCDR2和胺基酸序列如SEQ ID NO：15所示的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：胺基酸序列如SEQ ID NO：16所示的PSMA-LCDR1、胺基酸序列如SEQ ID NO：17所示的PSMA-LCDR2和胺基酸序列如SEQ ID NO：18所示的PSMA-LCDR3。
在一些實施方案中，如前所述的抗原結合分子或抗體，該PSMA-VH和/或該PSMA-VL是鼠源的或人源化的。在一些實施方案中，該PSMA-VH和/或該PSMA-VL是人源化的。在一些實施方案中，該人源化的PSMA-VH的FR1、FR2和FR3與SEQ ID NO：77的FR1、FR2和FR3具有至少60%、70%或80%的序列同一性，該人源化的PSMA-VH的FR4與SEQ ID NO：77的FR4具有至少80%或90%的序列同一性，該人源化的PSMA-VL的FR1、FR2和FR3與SEQ ID NO：78的FR1、FR2和FR3具有至少60%、70%或80%的序列同一性和/或該人源化的PSMA-VL的FR4與SEQ ID NO：78的FR4具有至少80%或90%的序列同一性。在一些實施方案中，該PSMA-VH具有來源於IGHV1-3*01的FR1、FR2、FR3和來源於IGHJ1*01的FR4，並且其是未被取代的或具有選自1E、2F、28S、44C、48I、67A、69L、71V、73Q和76T組成的組中的一個或多個胺基酸取代；和/或該PSMA-VL具有來源於IGKV1-27*01的FR1、FR2、FR3和來源於IGKJ2*01的FR4，並且其是未被取代的或具有選自43S、60D、100C組成的組中的一個或多個胺基酸取代。在一些實施方案中，44C和100C是同時存在的。在一些實施方案中，上述可變區和CDR是根據Kabat編號規則定義的。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子或抗體，其中該PSMA-VH的胺基酸序列與SEQ ID NO：77、107、108、109、110、111或112具有至少90%、95%、96%、97%、98%或99%的序列同一性，和該PSMA-VL的胺基酸序列與SEQ ID NO：78、113、114或115具有至少90%、95%、96%、97%、98%或99%的序列同一性。在一些實施方案中，該PSMA-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：77、107、108、109、110、111或112所示，和該PSMA-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：78、113、114或115所示。在一些實施方案中，該PSMA-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：107、108、109、110、111或112所示，和該PSMA-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：113、114或115所示。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子或抗體，其中
該PSMA-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：112所示，和該PSMA-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：115所示，或
該PSMA-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：110所示，和該PSMA-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：114所示，或
該PSMA-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：77所示，和該PSMA-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：78所示，或
該PSMA-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：107所示，和該PSMA-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：113所示，或
該PSMA-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：108所示，和該PSMA-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：113所示，或
該PSMA-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：109所示，和該PSMA-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：113所示，或
該PSMA-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：110所示，和該PSMA-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：113所示，或
該PSMA-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：111所示，和該PSMA-VL的胺基酸序列SEQ ID NO：113所示，或
該PSMA-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：107所示，和該PSMA-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：114所示，或
該PSMA-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：108所示，和該PSMA-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：114所示，或
該PSMA-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：109所示，和該PSMA-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：114所示，或
該PSMA-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：111所示，和該PSMA-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：114的胺基酸序列。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子或抗體，其中該PSMA-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：112所示，和該PSMA-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：115所示，或
該PSMA-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：110所示，和該PSMA-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：114所示。
在一些實施方案中，如前所述的抗原結合分子，該CD3-VH具有：胺基酸序列如SEQ ID NO：160所示的CD3-HCDR1，胺基酸序列如SEQ ID NO：161所示的CD3-HCDR2，和胺基酸序列如SEQ ID NO：162所示的CD3-HCDR3；
並且該CD3-VL具有：胺基酸序列如SEQ ID NO：163所示的CD3-LCDR1，胺基酸序列如SEQ ID NO：164所示的CD3-LCDR2，和胺基酸序列如SEQ ID NO：165所示的CD3-LCDR3。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，該CD3-VH和/或該CD3-VL是鼠源的或人源化的。在一些實施方案中，該CD3-VH和/或該CD3-VL是人源化的。在一些實施方案中，該CD3-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：166所示，和該CD3-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：167所示。在一些實施方案中，上述可變區和CDR是根據Kabat編號規則定義的。
根據本文實施例所披露的抗體系列2、13、19、27、31、41、43、46、50、71和73的技術方案，這些抗體與以上所描述的抗體15具有類似的技術方案範圍。
抗原結合分子的結構
本揭露的雙特異性抗原結合分子並不受限於特定的分子結構，只要其具有所期望的抗原結合功能。例如，本文的雙特異性抗原結合分子可以是雙價(1+1)的、三價(2+1)的或4價(2+2)的。抗原結合分子中的抗原結合模塊可以是任意的具有抗原結合活性的抗體片段，其藉由肽連接子融合。本揭露的肽連接子(例如連接子1至11)可以是任意適宜的肽鏈，只要抗原結合分子能夠展現出期望的抗原結合活性。例如，肽連接子可以是1-50、或3-20個胺基酸殘基的柔性肽。在一些實施方案中，該肽連接子各自獨立地具有L1-(GGGGS)n-L2的結構，其中，L1是鍵、A、GS、GGS、GGGS(SEQ ID NO：276)、SGGGGS(SEQ ID NO：178)、GGGTKLTVLGGG(SEQ ID NO：177)，n是0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，L2是鍵、G、GG、GGG或GGGG(SEQ ID NO：
179)，並且該肽連接子不是鍵。在一些實施方案中，該肽連接子的長度為3-15個胺基酸殘基。在一些實施方案中，該肽連接子各自獨立地具有(GGGGS)n的結構，其中n是1、2或3。在一些實施方案中，該肽連接子是GGGGS(SEQ ID NO：173)、GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：176)、GGGTKLTVLGGG(SEQ ID NO：177)、SGGGGS(SEQ ID NO：178)或GGG。在一些實施方案中，該連接子1、連接子3和連接子10的胺基酸序列如SEQ ID NO：176所示；該連接子2的胺基酸序列如SEQ ID NO：178所示；該連接子4和連接子11的胺基酸序列是GGG；該連接子5、連接子6、連接子7、連接子8和連接子9的胺基酸序列如SEQ ID NO：173所示。
示例性的，本揭露的該抗原結合分子包含一條具有式(a-i)所示結構的第一鏈和一條具有式(b)所示結構的第二鏈，
式(a-i)
[PSMA-VH]-[GGGGSGGGGSGGGGS]-[PSMA-VL]-[SGGGGS]-[CD3-VH]-[GGGGSGGGGSGGGGS]-[CD3-VL]-[GGG]-[Fc2]，
式(b)[Fc1]，
式(a-i)和(b)所示的結構是從N端至C端排列的。
示例性的雙價抗原結合分子具有：
該抗原結合分子具有：一條胺基酸序列如SEQ ID NO：192所示的第一鏈和一條胺基酸序列如SEQ ID NO：169所示的第二鏈；或
該抗原結合分子具有：一條胺基酸序列如SEQ ID NO：191所示的第一鏈和一條胺基酸序列如SEQ ID NO：169所示的第二鏈。
抗原結合分子的變體
在某些實施方案中，涵蓋本文中提供的抗原結合分子的胺基酸序列變體。例如，可以期望改善抗體的結合親和力和/或其它生物學特性。可以藉由將合適的修飾引入編碼抗體的核苷酸序列中，或者藉由肽合成來製備抗體的胺基酸序列變體。此類修飾包括例如對抗原結合分子的胺基酸序列內的殘基的刪除、和/或插入、和/或取代。可以進行刪除、插入、和取代的任何組合以得到最終的構建體，只要最終的構建體擁有期望的特徵，例如抗原結合特性。
取代、插入、和刪除變體
在某些實施方案中，提供了具有一處或多處胺基酸取代的抗原結合分子變體。可以在CDR和FR進行取代。保守取代在表2中在“較佳的取代”的標題下顯示。更實質的變化在表2中在“示例性取代”的標題下提供，並且如下文參照胺基酸側鏈類別進一步描述的。可以將胺基酸取代引入感興趣的抗體中，並且對產物篩選期望的活性，例如保留/改善的抗原結合，降低的免疫原性，或改善的ADCC或CDC。
表2. 胺基酸的取代
依照常見的側鏈特性，胺基酸可以如下分組：
(1)疏水性的：正亮胺酸，Met，Ala，Val，Leu，Ile；
(2)中性，親水性的：Cys，Ser，Thr，Asn，Gln；
(3)酸性的：Asp，Glu；
(4)鹼性的：His，Lys，Arg；
(5)影響鏈取向的殘基：Gly，Pro；
(6)芳香族的：Trp，Tyr，Phe。
非保守取代會是指用一個類別的成員替換另一個類別的成員。
一類取代變體涉及取代親本抗體(例如人源化或人抗體)的一個或多個CDR殘基。一般地，經選擇用於進一步研究的所得變體相對於親本抗體會具有某些生物學特性(例如升高的親和力，降低的免疫原性)的改變(例如改善)，和/或會基本上保留親本抗體的某些生物學特性。一種例示性的取代變體是親和力成熟的抗體，可以例如使用基於噬菌體展示的親和力成熟技術(如本文
所述的那些技術)，便利地產生該抗體。簡言之，將一個或多個CDR殘基突變，並將變體抗體在噬菌體上展示，並對其篩選特定的生物學活性(例如結合親和力)。可以對CDR做出改變(例如取代)，例如以改善抗體親和力。可以對CDR“熱點”，即在體細胞成熟過程期間以高頻率經歷突變的密碼子所編碼的殘基，和/或接觸抗原的殘基做出此類改變，同時對所得的變體VH或VL測試結合親和力。在親和力成熟的一些實施方案中，藉由多種方法(例如易錯PCR、鏈改組、或寡核苷酸指導的誘變)的任一種，將多樣性引入所選擇用於成熟的可變基因中。然後，創建次級文庫。然後，篩選文庫以鑑定具有期望的親和力的任何抗體變體。另一種引入多樣性的方法涉及CDR定向的方法，其中將幾個CDR殘基(例如一次4-6個殘基)隨機化。可以例如使用丙胺酸掃描誘變或建模來特異性鑑定涉及抗原結合的CDR殘基。
在某些實施方案中，取代、插入或缺失可以在一個或多個CDR內發生，只要此類變化不實質性降低抗體結合抗原的能力。例如，可以對CDR做出保守變化(例如保守取代，如本文中提供的)，其不實質性降低結合親和力。在上文提供的變體VH和VL序列的某些實施方案中，每個CDR是未改變的，或者含有不超過1、2或3處胺基酸取代。
一種可用於鑑定抗體中可以作為誘變靶位的殘基或區域的方法稱作“丙胺酸掃描誘變”。在這種方法中，鑑定一個殘基或殘基組(例如帶電荷的殘基，諸如Arg、Asp、His、Lys和Glu)，並且替換為中性或帶負電荷的胺基酸(例如，Ala或聚丙胺酸)，以確定該抗體與抗原的相互作用是否受影響。可以在對初始取代顯示功能敏感性的胺基酸位置引入進一步的取代。此外，可藉由研究抗原-抗體複合物的晶體結構來鑑定抗體與抗原間的接觸點。這些接觸殘基及
鄰近殘基可以作為取代候選物被打靶或消除。可以篩選變體以確定它們是否含有期望的特性。
胺基酸序列插入包括：在胺基和/或羧基端融合1個殘基或長度為100或更多個殘基的多肽；和單個或多個胺基酸殘基的序列內插入。在末端插入的例子包括具有N端甲硫胺醯基殘基的抗體。抗體分子的其它插入變體包括，在抗體的N或C端融合有酶(或延長抗體的血清半衰期的多肽)的融合物。
Fab的改造
在一個方面，本揭露的抗原結合分子中，該特異性結合PSMA的抗原結合模塊和該特異性結合CD3的抗原結合模塊兩者之一是經替換的Fab，該經替換的Fab包含重鏈可變區、輕鏈可變區、Titin鏈和Obscurin鏈。在經替換的Fab中，Fab原有的CH1和CL被Titin鏈和Obscurin鏈所替換。示例性的，Titin鏈和Obscurin鏈的序列如表3-1和表3-2所示。
表3-1. Titin鏈的胺基酸序列
表3-2. Obscurin鏈的胺基酸序列
Fc區的改造
在一個方面，本揭露的抗原結合分子的Fc區包含一個或多個胺基酸取代，該一個或多個胺基酸取代減少其與Fc受體的結合，例如其與Fcγ受體的結合，並且降低或消除效應子功能。天然IgG Fc區，具體地是IgG1 Fc區或IgG4 Fc區，可能導致本揭露的抗原結合分子靶向表達Fc受體的細胞，而不是表達抗原的細胞。本揭露改造的Fc區表現出降低的對Fc受體的結合親和力和/或降低的效應子功能。在一些實施方案中，改造的Fc區與天然Fc區相比，對Fc
受體的結合親和力下降50%、80%、90%或95%以上。在一些實施方案中，該Fc受體是Fcγ受體。在一些實施方案中，該Fc受體是人Fcγ受體，例如FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIB、FcγRIIIa。在一些實施方案中，改造的Fc區與天然Fc區相比，對補體(如C1q)的結合親和力降低。在一些實施方案中，改造的Fc區與天然Fc區相比，對新生兒Fc受體(FcRn)的結合親和力不降低。在一些實施例中，改造的Fc區具有降低的效應子功能，該降低的效應子功能可以包括但不限於以下中的一個或多個：降低的補體依賴性細胞毒性(CDC)、降低的抗體依賴性細胞介導的細胞毒性(ADCC)、降低的抗體依賴性細胞吞噬(ADCP)、減少的細胞因子分泌、減少的免疫複合物介導的抗原呈遞細胞的抗原攝取、減少的與NK細胞的結合、減少的與巨噬細胞的結合、減少的與單核細胞的結合、減少的與多形核細胞的結合、減少的直接信號傳導誘導性細胞凋亡、降低的樹突細胞成熟或減少的T細胞引發。
對於IgG1 Fc區，在238、265、269、270、297、327和329等位置的胺基酸殘基取代可降低的效應子功能。在一些實施方案中，該Fc區是人IgG1 Fc區，並且在234和235位置的胺基酸殘基為A，編號依據為EU索引。對於IgG4 Fc區，在228等位置的胺基酸殘基取代可降低的效應子功能。
抗原結合分子還可包含二硫鍵改造，例如第一亞基的354C和第二亞基的349C。為增加抗原結合分子的血清半衰期，可以引入252Y、254T和256E的突變。
當抗原結合分子包含與Fc區的兩個亞基融合的不同結合模塊時，可能導致不期望的同源二聚化。為了提高產率和純度，因此在本揭露的抗原結合分子的Fc區中引入促進異源二聚化的修飾將是有利的。在一些實施方案中，本
揭露的Fc區包含根據杵臼(knob-into-hole，KIH)技術的改造，該方法涉及在第一亞基的界面處引入凸起結構(knob)以及在第二亞基的界面處引入孔結構(hole)。使得該凸起結構可以定位在孔結構中，促進異源二聚體的形成並抑制同源二聚體的產生。凸起結構是藉由用較大側鏈(例如酪胺酸或色胺酸)取代來自第一亞基的界面的小胺基酸側鏈而構建的。而孔結構是藉由用較小的胺基酸側鏈(例如丙胺酸或蘇胺酸)取代大胺基酸側鏈而在第二亞基的界面中創建的。凸起結構和孔結構藉由改變編碼多肽的核酸來製備，可選的胺基酸取代如下表所示：
表4. KIH突變組合
除了杵臼技術外，用於修飾重鏈的CH3結構域以實現異源二聚化的其他技術也是本領域中已知的，例如WO96/27011、WO98/050431、EP1870459、WO2007/110205、WO 007/147901、WO2009/089004、WO2010/129304、WO2011/90754、WO2011/143545、WO2012/058768、WO2013/157954和WO 013/096291。
Fc區的C末端可以是以胺基酸殘基PGK結束的完整C末端；也可以是截短的C末端，例如在該截短的C末端中去除了一個或兩個C末端胺基酸殘基。在一個較佳的方面中，重鏈的C末端是以PG結束的縮短的C末端。因
此，在一些實施方案中，完整抗體的組成物可以包括去除了所有K447殘基和/或G446+K447殘基的抗體群體。在一些實施方案中，完整抗體的組成物可以包括沒有去除K447殘基和/或G446+K447殘基的抗體群體。在一些實施方案中，完整抗體的組成物具有帶有和不帶有K447殘基和/或G446+K447殘基的抗體混合物的抗體群體。
重組方法
抗原結合分子可以使用重組方法來產生。對於這些方法，提供編碼抗原結合分子的一個或更多個分離的核酸。
在天然抗體、天然抗體片段或具有同源二聚體重鏈的雙特異性抗體的情況下，需要兩個核酸，一個用於輕鏈或其片段，一個用於重鏈或其片段。此類核酸編碼包含抗體VL的胺基酸序列和/或包含抗體VH的胺基酸序列(例如抗體的輕鏈和/或重鏈)。這些核酸可以在相同的表達載體上或在不同的表達載體上。
在具有異二聚體重鏈的雙特異性抗體的情況下，需要例如四個核酸，一個用於第一輕鏈，一個用於包含第一異源單體Fc區多肽的第一重鏈，一個用於第二輕鏈，並且一個用於包含第二異源單體Fc區多肽的第二重鏈。這四個核酸可包含在一個或更多個核酸分子或表達載體中，通常這些核酸位於兩個或三個表達載體上，即一個載體可包含這些核酸中的多於一個。
在一個實施方案中，本揭露提供了編碼如前所述的抗體的分離的核酸。此類核酸可以獨立地編碼前述的任一多肽鏈。在另一方面中，本揭露提供了包含此類核酸的一種或多種載體(例如表達載體)。在另一方面中，本揭露提供了包含此類核酸的宿主細胞。在一個實施方案中，提供製備抗原結合分子的方
法，其中該方法包括，在適合抗體表達的條件下，培養包含編碼該抗體的核酸的宿主細胞，如上文所提供的，和視需要地從宿主細胞(或宿主細胞培養基)回收該抗體。
為了重組產生抗原結合分子，將編碼蛋白的核酸分離並插入一個或更多個載體中，用於在宿主細胞中進一步選殖和/或表達。此類核酸可以使用常規程序容易地分離和測序(例如藉由使用能夠與編碼抗體重鏈和輕鏈的基因特異性結合的寡核苷酸探針)，或者藉由重組方法產生或藉由化學合成獲得。
用於選殖或表達編碼抗體的載體的適當宿主細胞包括本文描述的原核或真核細胞。例如，抗體可在細菌中產生，特別是當抗體不需要糖基化和Fc效應子功能時。在表達後，抗體可以在可溶級分中從細菌細胞糊狀物分離，並且可進一步純化。
除了原核生物以外，真核微生物諸如絲狀真菌或酵母也是用於編碼抗體的載體的合適的選殖或表達宿主，包括真菌和酵母菌株，其糖基化途徑已經“人源化”，導致產生具有部分或完全人糖基化模式的抗體。適於表達(糖基化)抗體的合適的宿主細胞也可源自多細胞生物體(無脊椎動物和脊椎動物)；無脊椎動物細胞的例子包括植物和昆蟲細胞。已經鑑定了許多杆狀病毒株，其可與昆蟲細胞聯合使用，特別是用於草地貪夜蛾(Spodoptera frugiperda)細胞的轉染；還可利用植物細胞培養物作為宿主，例如US5959177、US 6040498、US6420548、US 7125978和US6417429；也可將脊椎動物細胞用作宿主，例如適應於在懸浮液中生長的哺乳動物細胞系。適宜的哺乳動物宿主細胞系的其它例子是經SV40轉化的猴腎CV1系(COS-7)；人胚腎系(293或293T細胞)；幼倉鼠腎細胞(BHK)；小鼠塞托利(sertoli)細胞(TM4細胞)；猴腎細胞(CV1)；非洲
綠猴腎細胞(VERO-76)；人宮頸癌細胞(HELA)；犬腎細胞(MDCK)；水牛鼠(buffalo rat)肝細胞(BRL3A)；人肺細胞(W138)；人肝細胞(Hep G2)；小鼠乳房腫瘤(MMT 060562)；TRI細胞；MRC 5細胞；和FS4細胞。其它適宜的哺乳動物宿主細胞系包括中國倉鼠卵巢(CHO)細胞，包括DHFR-CHO細胞；以及骨髓瘤細胞系，如Y0、NS0和Sp2/0。關於適合產生抗體的某些哺乳動物宿主細胞系的綜述參見例如Yazaki，P.和Wu，A.M.，Methods in Molecular Biology，Vol.248，Lo，B.K.C.(編)，Humana Press，Totowa，NJ(2004)，第255-268頁。
診斷與治療組成物
在某些實施方案中，本揭露提供的抗原結合分子可用於檢測生物學樣品中PSMA和/或CD3的存在。在用於本文時，術語“檢測”涵蓋定量或定性檢測。在某些實施方案中，生物學樣品包含細胞或組織，諸如腫瘤組織。
在一個實施方案中，提供了在診斷或檢測方法中使用的抗原結合分子。在又一方面，提供了檢測生物學樣品中PSMA和/或CD3的存在的方法。在某些實施方案中，該方法包括在適宜條件下使生物學樣品與抗原結合分子接觸，並檢測是否在檢測試劑與抗原之間形成複合物。此類方法可以是體外或體內方法。在一個實施方案中，使用抗原結合分子來選擇適合治療的受試者，例如PSMA和/或CD3是用於選擇患者的生物標誌物。
可使用本揭露的抗原結合分子來診斷的例示性病症，例如腫瘤或癌症。
在某些實施方案中，提供了經標記的抗原結合分子。標記物包括但不限於直接檢測的標記物或模塊(諸如螢光、發色、電子緻密、化學發光、和
放射性標記物)，和間接檢測的模塊(例如，經由酶反應或分子相互作用間接檢測的模塊，諸如酶或配體)。
在另外的方面，提供包含該抗原結合分子的醫藥組成物，例如，用於以下任何治療方法。在一個方面，醫藥組成物包含本文提供的任何抗原結合分子和藥學上可接受的載體。在另一個方面，醫藥組成物包含本文提供的任何抗原結合分子和至少一種另外的治療劑。
本揭露所述的抗原結合分子的醫藥組成物藉由以下製備：將具有所需純度的此類抗原結合分子與一種或更多種視需要的藥學上可接受的載體混合，該醫藥組成物為凍乾組成物或水溶液的形式。用於體內施用的製劑一般是無菌的。無菌性可容易地實現，例如藉由穿過無菌濾膜過濾。
治療方法與施用途徑
本文提供的任何抗原結合分子可用於治療方法。
在又一個方面，本揭露提供抗原結合分子在藥物的製造或製備中的用途。在一個實施方案中，該藥物用於治療腫瘤或癌症。並且該藥物是以對上述疾病的有效量的形式存在的。在一些實施方案中，該有效量是單位日劑量或單位週劑量。在一個此類實施方案中，該用途進一步包括向受試者施用有效量的至少一種另外的治療劑(例如一種、兩種、三種、四種、五種或六種另外的治療劑)。根據任意以上實施方案的“受試者”可以是人。
在又一個的方面，提供包含該抗原結合分子的醫藥組成物，例如，其用於以上任何製藥用途或治療方法。在另一個實施方案中，醫藥組成物還包含至少一種另外的治療劑。
本揭露的抗原結合分子可單獨使用或與其他試劑聯合用於治療。例如，本揭露的抗原結合分子可與至少一種另外的治療劑共同施用。
本揭露的抗原結合分子(和任何另外的治療劑)可藉由任何合適的手段施用，包括腸胃外、肺內和鼻內，並且如果需要局部治療，則病灶內施用。腸胃外輸注包括肌肉內、靜脈內、動脈內、腹膜內或皮下施用。給藥可以藉由任何適當的途徑，例如，藉由注射，諸如靜脈內或皮下注射，這部分取決於施用是短期的還是長期的。本文考慮多種給藥時間方案，包括但不限於，單次或在多個時間點多次施用，推注施用和脈衝輸注。
本揭露的抗原結合分子將以符合GOOD MEDICAL PRACTICE的方式配製、給藥和施用。在此背景下考慮的因素包括所治療的具體病症、所治療的具體哺乳動物、個體患者的臨床狀況、病症的起因、試劑的遞送部位、施用方法、施用時間安排以及醫學從業者已知的其他因素。抗原結合分子視需要地與目前用於預防或治療該病症的一種或更多種試劑一起配製。此類其它試劑的有效量取決於醫藥組成物中存在的抗原結合分子的量、病症或治療的類型以及上文討論的其它因素。這些通常以與本文所述相同的劑量和施用路徑使用，或以本文所述劑量的約1至99%使用，或以任何劑量使用，並藉由經驗/臨床確定為合適的任何途徑使用。
為了預防或治療疾病，本揭露的抗原結合分子(當單獨使用或與一種或更多種其他另外的治療劑組合使用時)的適當的劑量將取決於待治療的疾病的類型，治療分子的類型，疾病的嚴重性和病程，是為預防還是治療目的施用，之前的治療，患者的臨床病史和對治療分子的響應，和主治醫師的判斷。治療分子恰當地以一次或經過一系列治療施用於患者。取決於疾病的類型和嚴重
性，約1μg/kg至15mg/kg的抗原結合分子可以是用於施用至患者的初始候選劑量，不管例如是藉由一次或更多次分開的施用還是藉由連續輸注。一種典型的每日劑量可能在約1μg/kg至100mg/kg或更多的範圍內，這取決於上文提及的因素。相應的，以50kg體重為例，示例性的單位日劑量為50μg-5g。
製品
在本揭露的另一方面中，提供一種製品，該製品包含可用於治療、預防和/或診斷上述病症的材料。該製品包含容器和在容器上或與容器聯合的標簽或包裝插頁(package insert)。合適的容器包括，例如，瓶子、管形瓶、注射器、IV溶液袋等。容器可以自各種材料諸如玻璃或塑料形成。容器裝有單獨或與另一種組成物組合有效治療，預防和/或診斷疾患的組成物，並且可具有無菌的存取口(例如，容器可以是具有由皮下注射針可刺穿的塞子的靜脈內溶液袋或管形瓶)。組成物中的至少一種活性試劑是本揭露的抗原結合分子。標簽或包裝插頁指示使用該組成物是來治療選擇的病況。此外，製品可以包含：(a)其中裝有組成物的第一容器，其中該組成物包含本揭露的抗原結合分子；和(b)其中裝有組成物的第二容器，其中該組成物包含另外的細胞毒性劑或其他方面的治療劑。本揭露的該實施方案中的製品可進一步包含包裝插頁，該包裝插頁指示該組成物可以用於治療特定病況。備選地，或另外地，製品可進一步包含第二(或第三)容器，該第二(或第三)容器包含藥學上可接受的緩衝液。從商業和用戶立場，它可進一步包括所需的其他材料，包括其他緩衝劑、稀釋劑、濾器、針頭和注射器。
作為一個示例，製品製備成藥盒(kit)的形式。
實施例與測試例
以下結合實施例和測試例進一步描述本揭露，但這些實施例和測試例並非限制著本揭露的範圍。本揭露實施例和測試例中未註明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件，如冷泉港的抗體技術實驗手冊，分子選殖手冊；或按照原料或商品製造廠商所建議的條件。未註明具體來源的試劑，為市場購買的常規試劑。
實施例1. 含有Titin鏈/Obscurin鏈的抗原結合分子
本揭露的Titin鏈/Obscurin鏈可以來源於任意適宜的多肽，包括來源於WO2021139758A1(藉由援引完整收入本文)和CN202110527339.7及將其作為優先權文件的專利(藉由援引完整收入本文)中的多肽。構建雙特異性抗體，其中CL為WO2021139758A1中的kappa輕鏈恆定區，Titin鏈和Obscurin鏈的胺基酸序列見表3-1和表3-2，連接子序列包括GGGGS(SEQ ID NO：173)、ASTKG(SEQ ID NO：270)或RTVAS(SEQ ID NO：271)，本實施例中的Fc1、Fc2、CH1的胺基酸序列如下所示。
>Fc1(knob，SEQ ID NO：272)
>Fc2(hole，SEQ ID NO：273)
>CH1(SEQ ID NO：168)。
1.1 DI雙特異性抗體
參照WO2021139758A1的實施例5，構建抗hNGF和hRANKL的DI雙特異性抗體：DI-2至DI-20，其包含如下所述的第一重鏈、第二重鏈、第一輕鏈和第二輕鏈：
第一重鏈：從N端到C端依次為：[VH1-I]-[連接子1]-[Obscurin鏈]-[Fc2]，
第一輕鏈：從N端到C端依次為：[VL1-I]-[連接子2]-[Titin鏈]，
第二重鏈：從N端到C端依次為：[VH2-D]-[CH1]-[Fc1]，和
第二輕鏈：從N端到C端依次為：[VL2-D]-[CL]；
其中，VH1-I和VL1-I分別為WO2021139758A1中I0的重鏈可變區和輕鏈可變區，VH2-D和VL2-D分別為WO2021139758A1中D0的重鏈可變區和輕鏈可變區。本實施例中DI雙特異性抗體中Obscurin鏈、Titin鏈、連接子1、連接子2結構見下表。
表5. DI雙特異性抗體中Obscurin鏈/Titin鏈和連接子對應表
採用WO2021139758A1的測試例4中的方法檢測DI-2至DI-20雙特異性抗體與其抗原的結合活性。對抗體進行熱穩定性研究。研究方法：用PBS將抗體的濃度稀釋至5mg/mL，採用高通量微分掃描螢光儀(UNCHAINED，規格型號：Unit)測定其熱穩定性。實驗結果表明，改造後的雙特異性抗體對抗原的結合活性沒有顯著變化；並且，與DI-2相比，DI-4至DI-8、DI-10至DI-16、DI-20的Tm1(℃)、Tonset(℃)有明顯的提升，雙特異性抗體的熱穩定性更優。
表6. DI雙特異性抗體的結合活性檢測
表7. DI雙特異性抗體的熱穩定性實驗結果
採用10mM乙酸，pH5.5，9%蔗糖的緩衝液配製含DI雙特異性抗體的溶液，將溶液置於40℃恆溫箱中孵育四週，結束後將抗體濃度濃縮至孵育開始時濃度，觀察溶液沉澱情況。實驗結果表明，DI-2雙特異性抗體組溶液出現沉澱，DI-3至DI-7相比DI-2具有更好的穩定性。
表8. DI雙特異性抗體的沉澱
1.2 PL雙特異性抗體
構建抗hPDL1和hCTLA4的PL雙特異性抗體：PL-1至PL-19，其包含如下所述的第一重鏈、第二重鏈、第一輕鏈和第二輕鏈：
第一重鏈：從N端到C端依次為：[VH1-P]-[連接子1]-[Obscurin鏈]-[Fc1]，
第一輕鏈：從N端到C端依次為：[VL1-P]-[連接子2]-[Titin鏈]，
第二重鏈：從N端到C端依次為：[VH2-L]-[CH1]-[Fc2]，和
第二輕鏈：從N端到C端依次為：[VL2-L]-[CL]；
其中，VH1-P和VL1-P分別為WO2020177733A1中h1831K抗體的重鏈可變區和輕鏈可變區，VH2-L和VL2-L的胺基酸序列如下所示。
>VH2-L(SEQ ID NO：274)
>VL2-L(SEQ ID NO：275)
本實施例中PL雙特異性抗體中Obscurin鏈、Titin鏈、連接子1、連接子2結構見下表。
表9. PL雙特異性抗體中Obscurin鏈/Titin鏈和連接子對應表
參照WO2021139758A1中測試例4中的ELISA方法檢測PL雙特異性抗體的結合活性，其中hPDL1、hCTLA4抗原購自：Sino biology。對抗體進行熱穩定性研究。方法：用PBS將抗體的濃度稀釋至1.4-3mg/mL，採用高通量微分掃描螢光儀(UNCHAINED，規格型號：Unit)測定其熱穩定性。實驗結果表明，PL雙特異性抗體對抗原仍具有良好的結合活性；並且，與PL-1相比，PL-2至PL-19的Tm1(℃)、Tagg 266(℃)、Tonset(℃)有明顯的提升，雙特異性抗體的熱穩定性更優。
表10. PL雙特異性抗體的結合活性檢測
表11. PL雙特異性抗體的熱穩定性實驗結果
1.3 HJ雙特異性抗體
構建抗hIL5和hTSLP的HJ雙特異性抗體：HJ-3至HJ11，其包含如下所述的第一重鏈、第二重鏈、第一輕鏈和第二輕鏈：
第一重鏈：從N端到C端依次為：[VH1-H]-[連接子1]-[Titin鏈]-[Fc1]，
第一輕鏈：從N端到C端依次為：[VL1-H]-[連接子2]-[Obscurin鏈]，
第二重鏈：從N端到C端依次為：[VH2-J]-[CH1]-[Fc2]，和
第二輕鏈：從N端到C端依次為：[VL2-J]-[CL]；
其中，VH1-H和VL1-H分別為WO2021139758A1中H0的重鏈可變區和輕鏈可變區，VH2-J和VL2-J分別為WO2021139758A1中J1的重鏈可變區和輕鏈可變區。本實施例中HJ雙特異性抗體中Obscurin鏈、Titin鏈、連接子1、連接子2結構見下表。
表12. HJ雙特異性抗體中Obscurin鏈/Titin鏈和連接子對應表
參照WO2021139758A1中測試例4中的方法檢測HJ雙特異性抗體的抗原結合活性。對抗體的熱穩定性進行研究，方法：用10mM乙酸pH5.5、9%蔗糖的緩衝液配製HJ雙特異性抗體稀釋溶液，然後藉由超濾濃縮的方法將雙特異性抗體濃縮，獲得不同濃度的HJ雙特異性抗體溶液(HJ雙特異性抗體的濃度見表13-2)，然後將濃縮溶液置於40℃恆溫箱中孵育，第0天(也即40℃孵育開始前，D0)，第7天(40℃孵育第7天，D7)，第14天(40℃孵育第14天，D14)，第21天(40℃孵育第21天，D21)和第28天(40℃孵育第28天，
D28)檢測樣品的SEC純度，40℃孵育28天後，馬上取樣檢測樣品CE-SDS純度。實驗結果表明，本揭露構建的HJ雙特異性抗體對抗原的結合活性沒有顯著變化；並且，與HJ-3相比，HJ-5至HJ-11雙特異性抗體的熱穩定性更優。
表13-1. HJ雙特異性抗體的結合活性檢測
表13-2. HJ雙特異性抗體加速穩定性實驗結果
實施例2. 抗人PSMA融合瘤抗體的篩選和鑑定
本揭露藉由融合瘤技術製備了針對人PSMA的單株抗體。所得抗體與人PSMA以較高的親和力特異性結合，並且可以與食蟹猴PSMA發生交叉反應；所得抗體與細胞表面的人PSMA和食蟹猴PSMA有較好的結合活性。
將人PSMA-ECD-his、LnCap細胞或ChoK1-人PSMA細胞作為免疫試劑，或者將人PSMA-ECD-his和LnCap細胞作為交叉免疫試劑，TiterMax® Gold Adjuvant(Sigma Cat No.T2684)與Thermo Imject® Alum(Thermo Cat No.77161)作為佐劑交叉免疫小鼠。經過初次免疫和7次加強免疫後選擇血清中抗體滴度高的小鼠1-1，1-2，2-1，2-5，3-3，3-4，3-5及4-2#(滴度>307.2K)進行脾細胞融合。融合後根據融合瘤細胞生長密度，對融合瘤培養上清進行檢測，並篩選特異性結合細胞表面PSMA的抗體。篩選得到活性好的單株融合瘤細胞株。分別收集對數生長期融合瘤細胞，用NucleoZol(MN)提取RNA(按照試劑盒說明書步驟)，並進行反轉錄(PrimeScriptTM Reverse Transcriptase，Takara,cat # 2680A)。將反轉錄得到的cDNA採用mouse Ig-Primer Set(Novagen，TB326 Rev.B 0503)進行PCR擴增後測序。篩選的單株融合瘤細胞株的CDR和可變區的胺基酸序列如下：
表14. PSMA抗體CDR
>2鼠源重鏈可變區(SEQ ID NO：73)
>2鼠源輕鏈可變區(SEQ ID NO：74)
>13鼠源重鏈可變區(SEQ ID NO：75)
>13鼠源輕鏈可變區(SEQ ID NO：76)DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLQSGVPSRFSGSGSGTDYSLSISNLEQEDIATYFCQQGDTLPYTFGGGTKLEI
>15鼠源重鏈可變區(SEQ ID NO：77)
>15鼠源輕鏈可變區(SEQ ID NO：78)
>19鼠源重鏈可變區(SEQ ID NO：79)
>19鼠源輕鏈可變區(SEQ ID NO：80)DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSSLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNRLPRTFGGGTKLEIK
>27鼠源重鏈可變區(SEQ ID NO：81)
>27鼠源輕鏈可變區(SEQ ID NO：82)
>31鼠源重鏈可變區(SEQ ID NO：83)
>31鼠源輕鏈可變區(SEQ ID NO：84)
>41鼠源重鏈可變區(SEQ ID NO：85)
>41鼠源輕鏈可變區(SEQ ID NO：86)DIQMTQSPSSLSASLGERVSLTCRASQDIGSSLNWLQQQPDGTIKRLIYATSSLDSGVPTRFSGSRSGSDYSLTISSLESEDFVDYYCLQYASSPYTFGGGTKLEIK
>43鼠源重鏈可變區(SEQ ID NO：87)
>43鼠源輕鏈可變區(SEQ ID NO：88)
>46鼠源重鏈可變區(SEQ ID NO：89)
>46鼠源輕鏈可變區(SEQ ID NO：90)
>50鼠源重鏈可變區(SEQ ID NO：91)
>50鼠源輕鏈可變區(SEQ ID NO：92)
>71鼠源重鏈可變區(SEQ ID NO：93)
>71鼠源輕鏈可變區(SEQ ID NO：94)
>73鼠源重鏈可變區(SEQ ID NO：95)
>73鼠源輕鏈可變區(SEQ ID NO：96)DIQMTQPTSSLSASLGDRVTISCSTSQDIYNNLSWFQQKPDGTVRLLIYYTSSLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEPEDIATYYCQQYNNLPFTFGGGTNLEIR；
註：下劃線標記區為根據Kabat編號規則獲得的CDR區。
鼠源抗PSMA抗體的可變區序列與SEQ ID NO：97和SEQ ID NO：98所示的恆定區組合獲得嵌合抗體。示例性的，Chi13表示包含13鼠源重鏈可變區、輕鏈可可變區和該恆定區的嵌合抗體。
>hIgG1：CH1-Fc(SEQ ID NO：97)
>CL(SEQ ID NO：98)
實施例3.抗人PSMA單株抗體的人源化設計
鼠源單株抗體人源化根據本領域許多文獻公示的方法進行。簡言之，在所獲得的鼠源抗體VH/VL CDR典型結構的基礎上，從人源germline數據庫中搜索輕鏈可變區(VL)和重鏈可變區(VH)的同源序列，將鼠源抗體的CDR區移植到人源模板上，並對VL和VH的部分殘基進行突變，將鼠源抗體的恆定區替換為人恆定區，得到最終的人源化分子。
3-1.抗體2的人源化
鼠源抗體2的人源化抗體選擇IGHV3-7*01的FR1、FR2、FR3，和IGHJ6*01的FR4作為重鏈框架區模板；選擇IGKV6-21*02的FR1、FR2、FR3和IGKJ2*01的FR4作為輕鏈框架區模板。視需要地，對人源化抗體的輕鏈可變區上第49位的胺基酸殘基進行取代，具體地，該突變為K49Y(依照Kabat編號系統，將49位K突變為Y)。抗體可變區的序列如下：
>hu2H1(SEQ ID NO：99)
>hu2L1(SEQ ID NO：100)EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCSASSSVSHMYWYQQKPDQSPKLLIYRTSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQYHSYPLMFGQGTKLEIK。
3-2.抗體13的人源化
鼠源抗體13的人源化抗體選擇IGHV2-26*01的FR1、FR2、FR3，和IGHJ6*01的FR4作為重鏈框架區模板；選擇IGKV1-39*01的FR1、FR2、FR3和IGKJ4*01的FR4作為輕鏈框架區模板。視需要地，對人源化抗體的重鏈可變區上第1、30、44、49、73和/或89位的胺基酸殘基進行取代；和/或對人源化抗體的輕鏈可變區上第41、42、43、44和/或71位的胺基酸殘基進行取代。
表15-1.人源化抗體13的突變
抗體可變區的序列如下：
>hu13H1(SEQ ID NO：101)
>hu13H2(SEQ ID NO：102)
>hu13H3(SEQ ID NO：103)
>hu13L1(SEQ ID NO：104)DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGDTLPYTFGGGTKVEIK
>hu13L2(SEQ ID NO：105)
>hu13L3(SEQ ID NO：106)
3-3.抗體15的人源化
鼠源抗體15的人源化抗體選擇IGHV1-3*01的FR1、FR2、FR3，和IGHJ1*01的FR4作為重鏈框架區模板；選擇IGKV1-27*01的FR1、FR2、FR3和IGKJ2*01的FR4作為輕鏈框架區模板。視需要地，對人源化抗體的重鏈可變區上第1、2、28、44、48、67、69、71、73和/或76位的胺基酸殘基進行取代；和/或對人源化抗體的輕鏈可變區上第43、60和/或100位的胺基酸殘基進行取代。
表15-2.人源化抗體15的突變
抗體可變區的序列如下：
>hu15H1(SEQ ID NO：107)
>hu15H2(SEQ ID NO：108)
>hu15H3(SEQ ID NO：109)
>hu15H4(SEQ ID NO：110)
>hu15H5(SEQ ID NO：111)
>hu15H6(SEQ ID NO：112)
>hu15L1(SEQ ID NO：113)
>hu15L2(SEQ ID NO：114)
>hu15L3(SEQ ID NO：115)
3-4.抗體19的人源化
鼠源抗體19的人源化抗體選擇IGHV3-7*01的FR1、FR2、FR3，和IGHJ6*01的FR4作為重鏈框架區模板；選擇IGKV1-39*01的FR1、FR2、FR3和IGKJ4*01的FR4作為輕鏈框架區模板。視需要地，對人源化抗體的重鏈可變區上第3位的胺基酸殘基進行取代；和/或對人源化抗體的輕鏈可變區上第71位的胺基酸殘基進行取代。
表15-3.人源化抗體19的突變
抗體可變區的序列如下：
>hu19H1(SEQ ID NO：116)
>hu19H2(SEQ ID NO：117)
>hu19L1(SEQ ID NO：118)DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISKYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSSLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGNRLPRTFGGGTKVEIK
>hu19L2(SEQ ID NO：119)
3-5.抗體27的人源化
鼠源抗體27的人源化抗體選擇IGHV3-7*01的FR1、FR2、FR3，和IGHJ6*01的FR4作為重鏈框架區模板；選擇IGKV6-21*02的FR1、FR2、FR3和IGKJ2*01的FR4作為輕鏈框架區模板。視需要地，對人源化抗體的輕鏈可變區上第1、22、46、47、49和/或71位的胺基酸殘基進行取代。
表15-4.人源化抗體27的突變
抗體可變區的序列如下：
>hu27H1(SEQ ID NO：120)
>hu27L1(SEQ ID NO：121)EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCSASSSVSYMYWYQQKPDQSPKPWIYRTSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQYHSYPLTFGQGTKLEIK
>hu27L2(SEQ ID NO：122)EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCSASSSVSYMYWYQQKPDQSPKPWIYRTSNLASGVPSRFSGSGSGTDYTLTINSLEAEDAATYYCQQYHSYPLTFGQGTKLEIK
>hu27L3(SEQ ID NO：123)
QIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCSASSSVSYMYWYQQKPDQSPKPWIYRTSNLASGVPSRFSGSGSGTDYTLTINSLEAEDAATYYCQQYHSYPLTFGQGTKLEIK
>hu27L4(SEQ ID NO：124)EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTIQCSASSSVSYMYWYQQKPDQSPKPWIYRTSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQYHSYPLTFGQGTKLEIK
>hu27L5(SEQ ID NO：125)EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTIQCSASSSVSYMYWYQQKPDQSPKPWIYRTSNLASGVPSRFSGSGSGTDYTLTINSLEAEDAATYYCQQYHSYPLTFGQGTKLEIK
>hu27L6(SEQ ID NO：126)QIVLTQSPDFQSVTPKEKVTIQCSASSSVSYMYWYQQKPDQSPKPWIYRTSNLASGVPSRFSGSGSGTDYTLTINSLEAEDAATYYCQQYHSYPLTFGQGTKLEIK。
3-6.抗體31的人源化
鼠源抗體31的人源化抗體選擇IGHV3-7*01的FR1、FR2、FR3，和IGHJ1*01的FR4作為重鏈框架區模板；選擇IGKV1-39*01的FR1、FR2、FR3和IGKJ4*01的FR4作為輕鏈框架區模板。視需要地，對人源化抗體的重鏈可變區上第94位的胺基酸殘基進行取代；和/或對人源化抗體的輕鏈可變區上第43、45、48和/或70位的胺基酸殘基進行取代。
表15-5.人源化抗體31的突變
抗體可變區的序列如下：
>hu31H1(SEQ ID NO：127)
>hu31L1(SEQ ID NO：128)
>hu31L2(SEQ ID NO：129)
>hu31L3(SEQ ID NO：130)
3-7.抗體41的人源化
鼠源抗體41的人源化抗體選擇IGHV1-18*01的FR1、FR2、FR3，和IGHJ6*01的FR4作為重鏈框架區模板；選擇IGKV1-39*01的FR1、FR2、FR3和IGKJ4*01的FR4作為輕鏈框架區模板。視需要地，對人源化抗體的重鏈可變區上第1、69、71和/或73位的胺基酸殘基進行取代；和/或對人源化抗體的輕鏈可變區上第36、42、44、46、66、69和/或71位的胺基酸殘基進行取代。
表15-6.人源化抗體41的突變
抗體可變區的序列如下：
>hu41H1(SEQ ID NO：131)
>hu41H2(SEQ ID NO：132)
>hu41L1(SEQ ID NO：133)DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIGSSLNWLQQKPGKAPKRLIYATSSLDSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLQYASSPYTFGGGTKVEIK
>hu41L2(SEQ ID NO：134)DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIGSSLNWLQQKPGKAIKRLIYATSSLDSGVPSRFSGSRSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCLQYASSPYTFGGGTKVEIK
>hu41L3(SEQ ID NO：135)DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIGSSLNWLQQKPGGAIKRLIYATSSLDSGVPSRFSGSRSGSDYTLTISSLQPEDFATYYCLQYASSPYTFGGGTKVEIK。
3-8.抗體43的人源化
鼠源抗體43的人源化抗體選擇IGHV3-7*01的FR1、FR2、FR3，和IGHJ6*01的FR4作為重鏈框架區模板；選擇IGKV1-12*01或IGKV1-27*01的FR1、FR2、FR3和IGKJ2*01的FR4作為輕鏈框架區模板。視需要地，對人源化抗體的重鏈可變區上第4、37、72、73、78、93和/或94位的胺基酸殘基進行取代；和/或對人源化抗體的輕鏈可變區上第43位的胺基酸殘基進行取代。
表15-7.人源化抗體43的突變
抗體可變區的序列如下：
>hu43H1(SEQ ID NO：136)
>hu43H2(SEQ ID NO：137)
>hu43H3(SEQ ID NO：138)
>hu43L1(SEQ ID NO：139)
>hu43L2(SEQ ID NO：140)
3-9.抗體46的人源化
鼠源抗體46的人源化抗體選擇IGHV3-21*01的FR1、FR2、FR3，和IGHJ1*01的FR4作為重鏈框架區模板；選擇IGKV1-39*01的FR1、FR2、FR3和IGKJ4*01的FR4作為輕鏈框架區模板。視需要地，對人源化抗體的重鏈可變區上第45、46、49和/或93位的胺基酸殘基進行取代；和/或對人源化抗體的輕鏈可變區上第60、85和/或87位的胺基酸殘基進行取代。
表15-8.人源化抗體46的突變
>hu46H1(SEQ ID NO：141)
>hu46H2(SEQ ID NO：142)
>hu46H3(SEQ ID NO：143)
>hu46H4(SEQ ID NO：144)
>hu46L1(SEQ ID NO：145)
>hu46L2(SEQ ID NO：146)
>hu46L3(SEQ ID NO：147)
3-10.抗體50的人源化
鼠源抗體50的人源化抗體選擇IGHV1-18*01的FR1、FR2、FR3，和IGHJ1*01的FR4作為重鏈框架區模板；選擇IGKV2-28*01的FR1、FR2、FR3和IGKJ2*01的FR4作為輕鏈框架區模板。視需要地，對人源化抗體的重鏈可變區上第1、27、69、71、73和/或85位的胺基酸殘基進行取代；和/或對人源化抗體的輕鏈可變區上第2、3和/或28位的胺基酸殘基進行取代。
表15-9.人源化抗體50的突變
>hu50H1(SEQ ID NO：148)
>hu50H2(SEQ ID NO：149)
>hu50L1(SEQ ID NO：150)
>hu50L2(SEQ ID NO：151)
>hu50L3(SEQ ID NO：152)
>hu50L3 LCDR1 RSSQSILHSYGNTYLE(SEQ ID NO：159)。
3-11.抗體71的人源化
鼠源抗體71的人源化抗體選擇IGHV3-30*09的FR1、FR2、FR3，和IGHJ1*01的FR4作為重鏈框架區模板；選擇IGKV2-40*01的FR1、FR2、
FR3和IGKJ4*01的FR4作為輕鏈框架區模板。視需要地，對人源化抗體的重鏈可變區上第1、24、37、44、72、73、76和/或93位的胺基酸殘基進行取代；和/或對人源化抗體的輕鏈可變區上第2和/或4位的胺基酸殘基進行取代。
表15-10.人源化抗體71的突變
>hu71H1(SEQ ID NO：153)
>hu71H2(SEQ ID NO：154)
>hu71H3(SEQ ID NO：155)
>hu71H4(SEQ ID NO：156)
>hu71L1(SEQ ID NO：157)
>hu71L2(SEQ ID NO：158)
上述各組的重鏈可變區和輕鏈可變區與SEQ ID NO：97和SEQ ID NO：98所示的恆定區組合獲得完整的人源化抗體。hu2H1L1表示採用抗體2的人源化重鏈可變區H1(hu2H1)與恆定區SEQ ID NO：97組合，人源化輕鏈可變區L1(hu2L1)與恆定區SEQ ID NO：98組合構建的人源化抗體，以此類推。
3-12.抗體73的人源化
鼠源抗體73的人源化抗體選擇IGHV1-69*02的FR1、FR2、FR3，和IGHJ6*01的FR4作為重鏈框架區模板；選擇IGKV1-27*01的FR1、FR2、
FR3和IGKJ4*01的FR4作為輕鏈框架區模板。視需要地，對人源化抗體的重鏈可變區上第27、28、39、43、69和/或93位的胺基酸殘基進行取代；和/或對人源化抗體的輕鏈可變區上第36、41、42、43、44、45和/或71位的胺基酸殘基進行取代。
表15-11.人源化抗體73的突變
>hu73H1(SEQ ID NO：277)
>hu73H2(SEQ ID NO：278)
>hu73H3(SEQ ID NO：279)
>hu73L1(SEQ ID NO：280)DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSTSQDIYNNLSWFQQKPGKVPKLLIYYTSSLHSGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDVATYYCQQYNNLPFTFGGGTKVEIK
>hu73L2(SEQ ID NO：281)DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSTSQDIYNNLSWFQQKPGKVVRLLIYYTSSLHSGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDVATYYCQQYNNLPFTFGGGTKVEIK
>hu73L3(SEQ ID NO：282)DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSTSQDIYNNLSWFQQKPDGVVRLLIYYTSSLHSGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDVATYYCQQYNNLPFTFGGGTKVEIK
>hu73L4(SEQ ID NO：283)DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSTSQDIYNNLSWFQQKPDGTVRLLIYYTSSLHSGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDVATYYCQQYNNLPFTFGGGTKVEIK。
實施例4.抗PSMA-CD3雙特異性抗體的製備
本揭露的CD3結合分子可以來源於任意適宜的抗體。具體的，本揭露的實施例採用的是S107E。
表16.S107E的CDR
S107E可變區序列如下：
>S107E-VH(SEQ ID NO：166)
>S107E-VL(SEQ ID NO：167)
本揭露包括以下分子結構。
Format 1為非對稱結構分子，包含
鏈1：VH(anti-PSMA)-IgG1(CH1)-IgG1Fc(Knob,L234A/L235A/S354C/T366W)；
鏈2：VL(anti-PSMA)-CL；
鏈3(Ob-hole)：VH(S107E)-連接子a-Obscurin-IgG1Fc(Hole,L234A/L235A/Y349C/T366S/L368A/Y407V)；和
鏈4(VL-Titin)：VL(S107E)-連接子a-Titin。
其示意圖如圖1A所示(Ob代表Obscurin，下同)。
>IgG1(CH1)(SEQ ID NO：168)ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC
>CL(SEQ ID NO：98)
>IgG1Fc(Knob,L234A/L235A/S354C/T366W)(SEQ ID NO：169)
>IgG1Fc(Hole,L234A/L235A/Y349C/T366S/L368A/Y407V)(SEQ ID NO：170)
>Ob-hole(SEQ ID NO：171)
>VL-Titin：VL(S107E)-連接子a-Titin(SEQ ID NO：172)
>連接子a(SEQ ID NO：173)GGGGS
註：單下劃線標記區為根據Kabat編號規則獲得的CD3結合結構域的CDR區，雙下劃線標記區為Titin或Obscurin序列，斜體為恆定區。下同。
Format 2為非對稱結構分子，包含
鏈1：VH(anti-PSMA)-IgG1(CH1)-IgG1Fc(Knob,L234A/L235A/S354C/T366W)；
鏈2(兩條)：VL(anti-PSMA)-CL；
鏈3：VH(anti-PSMA)-IgG1(CH1)-VH(S107E)-連接子a-Titin-IgG1Fc(Hole,L234A/L235A/Y349C/T366S/L368A/Y407V)；
鏈4(VL-Ob)：VL(S107E)-連接子a-Ob。其示意圖如圖1B所示。
>VL-Ob：VL(S107E)-連接子a-Ob(SEQ ID NO：174)
Format3為對稱結構分子，包含
鏈1(兩條)：VH(anti-PSMA)-IgG1(CH1)-VH(S107E)-連接子a-Titin-IgG1(AA)Fc；
鏈2(兩條)：VL(anti-PSMA)-CL；和
鏈4(兩條)為VL-Ob：VL(S107E)-連接子a-Ob。其示意圖如圖1C所示。
>IgG1(AA)Fc(SEQ ID NO：175)
Format4為對稱結構分子，包含兩條相同的重鏈(鏈1)和兩條相同的輕鏈(鏈2)。重鏈為：VH(anti-PSMA)-IgG1(CH1)-VH(S107E)-連
接子b-VL(S107E)-連接子c-IgG1(AA)Fc；輕鏈為VL(anti-PSMA)-CL，其示意圖如圖1D所示。
>連接子b(SEQ ID NO：176)GGGGSGGGGSGGGGS
>連接子cGGG。
Format5為非對稱結構分子，包含
鏈1：VH(anti-PSMA)-連接子b-VL(anti-PSMA)-連接子d-VH(S107E)-連接子b-VL(S107E)-連接子c-IgG1Fc(Hole,L234A/L235A/Y349C/T366S/L368A/Y407V)；和
鏈3(Fc(Knob))：IgG1Fc(Knob,L234A/L235A/S354C/T366W)，其示意圖如圖1E所示。
>IgG1Fc(Hole,Y349C/T366S/L368A/Y407V)(SEQ ID NO：170)
>IgG1Fc(Knob,L234A/L235A/S354C/T366W)(SEQ ID NO：169)
>連接子d(SEQ ID NO：178)SGGGGS
>連接子c：GGG。
基於2、13、15、19、27、31、43、46、73及人源化抗體胺基酸序列，分別構建了如下所示的雙特異性抗體。
表17.本揭露的雙特異性抗體
其中，2-F2表示該分子採用抗體2及其人源化抗體的可變區作為PSMA結合域，採用Format2作為分子結構。hu2H1-F2-1表示該鏈採用hu2H1作為重鏈可變區，採用Format2作為分子結構，以此類推。具體胺基酸序列如下：
>hu2H1-F2-1(SEQ ID NO：180)
>hu2L1-CL(SEQ ID NO：181)
>hu2H1-F2-3(SEQ ID NO：182)
>hu2H1-F3-1(SEQ ID NO：183)
>hu2H1-F4-1(SEQ ID NO：184)
>hu13H1-F3-1(SEQ ID NO：185)
>hu13L1-CL(SEQ ID NO：186)
>hu15H4-F2-1(SEQ ID NO：187)
>hu15L2-CL(SEQ ID NO：188)
>hu15H4-F2-3(SEQ ID NO：189)
>hu15H4-F4-1(SEQ ID NO：190)
>hu15H4L2-F5-1(SEQ ID NO：191)
>hu15H6L3-F5-1(SEQ ID NO：192)
>hu19H2-F1-1也作hu19H2-F2-1(SEQ ID NO：193)
>hu19L2-CL(SEQ ID NO：194)
>hu19H2-F2-3(SEQ ID NO：195)
>hu19H2-F3-1(SEQ ID NO：196)
>hu19H2-F4-1(SEQ ID NO：197)
>hu19H2L2-F5-1(SEQ ID NO：198)
>hu27H1-F4-1(SEQ ID NO：199)
>hu27L6-CL(SEQ ID NO：200)
>hu31H1-F1-1(SEQ ID NO：201)
>hu31L1-CL(SEQ ID NO：202)
>hu43H3-F3-1(SEQ ID NO：203)
>hu43L2-CL(SEQ ID NO：204)
>hu43H3-F4-1(SEQ ID NO：205)
>hu46H2-F1-1也作hu46H2-F2-1(SEQ ID NO：206)
>hu46L2-CL(SEQ ID NO：207)
>hu46H2-F2-3(SEQ ID NO：208)
>hu46H2-F4-1(SEQ ID NO：209)
>73VH-F1-1(SEQ ID NO：284)
>73VL-CL(SEQ ID NO：285)
>73VH-F3-1(SEQ ID NO：286)
本揭露所用的陽性對照分子為Aca-Mab，其胺基酸序列如WO2017134158A1中的SEQ ID NO：382所示。
測試例
藉由之前其他專利該方法獲得Cho-人PSMA和Cho-猴PSMA過表達細胞株，倉鼠卵巢細胞Cho-K1，人前列腺癌細胞Lncap(ATCC)，人前列腺癌細胞22RV1(ATCC)及人前列腺癌細胞PC-3(中科院細胞庫)購買獲得。
測試例1.抗PSMA抗體對PSMA的結合活性
為測試本揭露PSMA靶向性人源化抗體結合PSMA抗原的能力，本測試例用ELISA法檢測PSMA靶向性人源化抗體與人PSMA抗原(購自R&D SYSTEM，4234-ZN-010)的結合。具體如下：將PSMA抗原並按照1μg/孔包被於96孔板，放置於4℃過夜。棄去上清後用5%脫脂牛奶封閉2h。用1%BSA配置不同濃度的各人源化抗體，起始濃度為10μg/mL，4倍稀釋12個濃度。將封閉後的96孔板洗兩次後加入配置的PSMA抗原，4℃孵育1h，洗四次後用Strepidation-HRP二抗(1：10000)在4℃孵育1h，用TMB顯色後用0.1M硫酸終止反應。ELISA結果如下表所示。
表18.人源化抗體與PSMA抗原的ELISA結合作用
結果顯示，本揭露所篩選的PSMA人源化抗體及嵌合抗體與PSMA抗原具有良好結合作用。
測試例2.抗體對PSMA的結合活性
本測試例用流式細胞術方法檢測了抗體與過表達人PSMA的穩轉細胞株Cho-hPSMA的結合活性。將編碼人PSMA全長基因選殖到哺乳動物細胞表達載體pCDH上，用pVSV-G、pCMV-dR8.91和pCDH-human PSMA三種質粒共同轉染HEK293T細胞(ATCC® CRL-11268)來包裝病毒，轉染48小時後，收集病毒感染CHO-K1細胞，藉由加壓篩選兩週後，進行細胞亞選殖，經過FACS檢測獲得高表達PSMA的細胞株Cho-hPSMA。
實驗一：採用10% FBS的F12培養基培養Cho-hPSMA。接種了細胞的培養基放置於37℃，5% CO2培養箱中培養2天，按每孔細胞數1×105個將細胞加至細胞板中，離心洗滌。梯度稀釋抗體，將抗體溶液按100μL/孔加入細胞板中，4℃孵育1小時後洗滌。向細胞板中加入100μL/孔的AF488-Goat Anti-human IgG Fc螢光二抗稀釋液(1：400)，4℃孵育1個小時後洗滌。向細胞板中加入100μL/孔的PBS後讀板。抗體的細胞結合活性如下表所示。
表19-1.人源化抗體及嵌合抗體與Cho-hPSMA的結合活性
實驗二：採用與實驗一相同的方法培養細胞並將其接種至細胞板中。然後梯度稀釋抗體，將抗體溶液按100μL/孔加入細胞板中，4℃孵育1小時後洗滌。向細胞板中加入100μL/孔的HRP-Goat Anti-human IgG(H+L)二抗稀釋液(1：8000)，4℃孵育1個小時後離心洗滌。用TMB顯色後用0.1M硫酸終止反應，並檢測OD450值。抗體的細胞結合活性如下表所示。
表19-2.人源化抗體及嵌合抗體與Cho-hPSMA的結合活性(EC50，μg/mL)
實驗三：採用實驗一的方法檢測雙特異性抗體的結合活性。抗體在各濃度條件下與細胞的結合活性如下表所示。
表19-3.雙特異性抗體與Cho-hPSMA的結合活性(螢光強度)
實驗四：採用實驗二的方法檢測雙特異性抗體的結合活性。抗體在各濃度條件下與細胞的結合活性如下表所示。
表19-4.雙特異性抗體與Cho-hPSMA的結合活性(吸光度)
實驗五：用Protein A生物傳感芯片親和捕獲抗體，然後於芯片表面流經人PSMA，用Biacore T200儀器在25℃條件下實時檢測反應信號獲得結合和解離曲線。在每個實驗循環解離完成後，用Glycine 1.5將生物傳感芯片洗淨再生。數據擬合模型採用1：1 Model。其中人PSMA抗原購於Acro(貨號為PSA-H52H3；Lys44-Ala750)；hCD3D&CD3E複合物抗原購於Sino Biological(貨號為CT038-H2508H)。各抗體結合及解離情況如下表。
表19-5.採用表面電漿共振法檢測雙特異性抗體對人PSMA的結合活性
結果顯示，本揭露的抗PSMA抗體和雙特異性抗體與PSMA具有良好結合作用，強於Aca-mab。
測試例3.本揭露的雙特異性抗體的體外細胞毒性
本測試例研究了本揭露的雙特異性抗體作為T細胞銜接分子對腫瘤細胞的殺傷活性。用表達PSMA的細胞系Lncap(人前列腺癌細胞，轉移型)作為靶細胞來檢測本揭露的雙特異性抗體的靶點特異性細胞毒活性。新鮮PBMC(購自軒峰生物公司)300g離心10min，棄去上清，用無酚紅1640+4%FBS重新懸浮，再次離心後重新懸浮、計數，調整細胞數為1.5×106個/mL，每孔加入50μL。收集靶細胞，1000rpm離心3min，重新懸浮、計數，調整細胞數為3×105個/mL，每孔加入25μL，E：T Ratio為10：1。抗體用無酚紅完全培養基稀釋，起始濃度為400nM(4×終濃度)，8倍稀釋10個梯度，每孔加入25μL。然後將細胞放在37℃，5% CO2的培養箱培養48h。檢測前，在只有靶細胞的其中兩個孔中吸出10μL培養基，然後加入10μL Lysis Solution(10×)，裂解45min後取出培養板，1000rpm離心3min，吸取50μL上清於新的96孔板(#3590)中，按1：1的比例加入溶解好的50μL CytoTox 96® Reagent，室溫孵育0.5h後加入50μL終止液，用FlexStation 3(Molecular Devices)檢測吸光值(490nm)。
表20.雙特異性抗體對Lncap的細胞毒活性
結果顯示，本揭露的雙特異性抗體對表達PSMA的Lncap細胞有較強腫瘤殺傷作用，EC50值遠低於對照抗體Aca-Mab。
測試例4.本揭露的雙特異性抗體的細胞因子釋放水平
CD3 T細胞銜接分子會引起細胞因子風暴。因此開發CD3 T細胞銜接分子時，需要能將細胞因子，尤其是和藥效無關但會引起副作用的因子IL6，保持在較低水平。
本測試例研究了本揭露的雙特異性抗體在殺傷表達PSMA的細胞系Lncap時的細胞因子IFNγ和IL6釋放水平。新鮮PBMC(購自軒峰生物公司)300g離心10min，棄去上清，用無酚紅1640+4%FBS重新懸浮，再次離心後重新懸浮、計數，調整細胞數為1.5×106個/mL，每孔加入50μL。收集靶細胞，1000rpm離心3min，重新懸浮、計數，調整細胞數為3×105個/mL，每孔加入25μL，E：T Ratio為10：1。抗體用無酚紅完全培養基稀釋，起始濃度為400nM(4×終濃度)，8倍稀釋10個梯度，每孔加入25μL。然後將細胞放在37℃，5% CO2的培養箱培養48h。
IL6的檢測採用ELISA方法。將上述細胞樣品1000rpm離心3min，收集50μL的細胞上清用標本通用稀釋液稀釋6倍，IL6標準品亦稀釋6倍，在
檢測板中加入稀釋好的樣品或者不同濃度標準品(100μL/孔)，用封板膠紙封住反應孔，37℃孵育90min後洗板5次，加入生物素化抗體工作液(100μL/孔)，用新封板膠紙封住反應孔，37℃孵育60分鐘後洗板5次，加入酶結合物工作液(100μL/孔)，用新封板膠紙封住反應孔，37℃孵育30分鐘後洗板5次，加入顯色受質(TMB)100μL/孔，避光37℃孵育8分鐘，加入反應終止液100μL/孔，混勻後即刻測量OD450值(3分鐘內)。
IFNγ的檢測採用HTRF方法。將上述細胞樣品1000rpm離心3min，收集50μL的細胞上清，平衡檢測試劑盒至常溫，使用檢測緩衝液稀釋試劑盒中的兩個檢測抗體(20倍稀釋)。取16μL 20倍稀釋的樣本以及IFNγ標準品於384孔板中，加入4μL稀釋好的相對應的檢測抗體；貼上密封材料，震盪混勻，1000rpm離心1分鐘，常溫孵育過夜後，1000rpm離心1分鐘，取掉密封材料，使用PHERAstar多功能酶標儀讀取665nm和620nm的吸收值，使用Graphpad Prism 5對數據進行處理分析。
表21-1.Lncap細胞毒活性實驗中的IFN-γ釋放
表21-2.Lncap細胞毒活性實驗中的IL-6釋放
結果顯示，本揭露的雙特異性抗體釋放IL6和IFNγ的水平低於Aca-Mab，提示本揭露的雙特異性抗體具有更好的安全性。
體內活性生物學評價
測試例5.本揭露的雙特異性抗體在22RV1皮下移植瘤模型中的藥效
本揭露使用人前列腺癌22RV1細胞人PBMC NCG小鼠異種移植瘤模型，對PSMA-CD3雙抗的抗腫瘤活性進行評價。
NCG小鼠，雄性，4-5週齡，購自江蘇集萃藥康生物科技股份有限公司。
人前列腺癌22RV1細胞，購於ATCC。
將22RV1細胞加入含10% FBS的RPMI-1640培養基，並於在5% CO2 37℃的飽和濕度培養箱中培養。收集對數生長期22RV1細胞，重新懸浮於含50% Matrigel的RPMI-1640培養基中，調整細胞濃度至2×107/mL。在無菌條件下，接種0.1mL細胞懸液至小鼠右側背部皮下，接種濃度為2×106/0.1mL/鼠。腫瘤細胞接種後1天，在無菌條件下，腹腔注射0.1mL人PBMC懸液至小鼠體內，注射濃度為8×106/0.1mL/鼠。在平均腫瘤體積達到100mm3左右時，將動物按腫瘤體積隨機分組，使各組腫瘤體積差異小於均值的10%。分組當日記為Day 0，並按照動物體重開始給藥。分組後立即給藥，每週兩次腹腔給藥，連續給藥6次(IP，BIW×3)。
抑瘤率(%)=(1-(Ti-T0)/(Ci-C0))×100%，其中Ti、Ci為實驗結束時治療組和對照組的腫瘤體積；T0、C0為實驗開始時的腫瘤體積。
表22.雙特異性抗體在22RV1皮下移植瘤模型中的藥效
實驗結果顯示，本揭露的雙特異性抗體31-F1及43-F4在受試劑量條件下表現出良好藥效。實驗期間未觀測到藥物相關動物死亡及其他明顯藥物相關毒副反應。
測試例6.本揭露的雙特異性抗體在C4-2皮下移植瘤模型中的藥效
本揭露使用人前列腺癌C4-2細胞人PBMC NCG小鼠異種移植瘤模型，對PSMA-CD3雙特異性抗體的抗腫瘤活性進行評價。
NCG小鼠，雄性，7-8週齡，購自江蘇集萃藥康生物科技股份有限公司。
人前列腺癌C4-2細胞，購於ATCC。
C4-2細胞在含10%胎牛血清的DMEM/Ham's F12K(4：1)培養液中，並於在5% CO2 37℃的飽和濕度培養箱中培養。收集對數生長期C4-2細胞，重新懸浮於含50% Matrigel的RPMI-1640培養基中，調整細胞濃度至2×107/mL。
在無菌條件下，接種0.1mL細胞懸液至小鼠右側背部皮下，接種濃度為2×106/0.1mL/鼠。腫瘤細胞接種後第3天，在無菌條件下，腹腔注射0.1mL人PBMC懸液至小鼠體內，注射濃度為1×107/0.1mL/鼠。在腫瘤細胞接種後第12天(平均腫瘤體積達到51.60mm3左右)，將動物按腫瘤體積隨機分組，使各組腫瘤體積差異小於均值的10%，並按照動物體重開始給藥。分組後立即給藥，每週兩次腹腔給藥，連續給藥4次(IP，BIW×2)。
表23.雙特異性抗體在C4-2皮下移植瘤模型中的藥效(給藥後第10天)
實驗結果顯示，雙特異性抗體15-F5-1和15-F5-2在C4-2模型上的腫瘤抑制作用強於Aca-Mab；即使是低劑量的雙特異性抗體，也能取得顯著強於高劑量Aca-Mab的腫瘤抑制作用。
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Claims (18)
- 一種抗原結合分子，其特異性結合PSMA和CD3；其包含：至少一個特異性結合PSMA的抗原結合模塊、和至少一個特異性結合CD3的抗原結合模塊；該特異性結合PSMA的抗原結合模塊包含重鏈可變區PSMA-VH和輕鏈可變區PSMA-VL，該特異性結合CD3的抗原結合模塊包含重鏈可變區CD3-VH和輕鏈可變區CD3-VL；其中(i)該PSMA-VH中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3分別包含SEQ ID NO：77中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3的胺基酸序列，和該PSMA-VL中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3分別包含SEQ ID NO：78中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3的胺基酸序列，或(ii)該PSMA-VH中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3分別包含SEQ ID NO：73中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3的胺基酸序列，和該PSMA-VL中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3分別包含SEQ ID NO：74中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3的胺基酸序列，或(iii)該PSMA-VH中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3分別包含SEQ ID NO：75中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3的胺基酸序列，和該PSMA-VL中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3分別包含SEQ ID NO：76中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3的胺基酸序列，或(iv)該PSMA-VH中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3分別包含SEQ ID NO：79中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3的胺基酸序列，和該PSMA-VL中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3分別包含SEQ ID NO：80中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3的胺基酸序列，或(v)該PSMA-VH中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3分別包含SEQ ID NO：81中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3的胺基酸序列，和該PSMA-VL中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3分別包含SEQ ID NO：82中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3的胺基酸序列，或(vi)該PSMA-VH中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3分別包含SEQ ID NO：83中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3的胺基酸序列，和該PSMA-VL中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3分別包含SEQ ID NO：84中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3的胺基酸序列，或(vii)該PSMA-VH中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3分別包含SEQ ID NO：85中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3的胺基酸序列，和該PSMA-VL中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3分別包含SEQ ID NO：86中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3的胺基酸序列，或(viii)該PSMA-VH中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3分別包含SEQ ID NO：87中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3的胺基酸序列，和該PSMA-VL中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3分別包含SEQ ID NO：88中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3的胺基酸序列，或(ix)該PSMA-VH中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3分別包含SEQ ID NO：89中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3的胺基酸序列，和該PSMA-VL中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3分別包含SEQ ID NO：90中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3的胺基酸序列，或(x)該PSMA-VH中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3分別包含SEQ ID NO：91中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3的胺基酸序列，和該PSMA-VL中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3分別包含SEQ ID NO：92或152中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3的胺基酸序列，或(xi)該PSMA-VH中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3分別包含SEQ ID NO：93中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3的胺基酸序列，和該PSMA-VL中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3分別包含SEQ ID NO：94中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3的胺基酸序列，或(xii)該PSMA-VH中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3分別包含SEQ ID NO：95中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3的胺基酸序列，和該PSMA-VL中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3分別包含SEQ ID NO：96中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3的胺基酸序列；較佳地，(i)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：13的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：14的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ ID NO：15的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：17的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：18的胺基酸序列的PSMA-LCDR3，或(ii)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：1的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：2的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ ID NO：3的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID NO：4的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：5的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：6的胺基酸序列的PSMA-LCDR3，或(iii)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：7的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：8的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ ID NO：9的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID NO：10的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：11的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：12的胺基酸序列的PSMA-LCDR3，或(iv)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：19的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ ID NO：21的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID NO：22的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：23的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：24的胺基酸序列的PSMA-LCDR3，或(v)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：25的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：26的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ ID NO：27的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID NO：28的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：29的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：30的胺基酸序列的PSMA-LCDR3，或(vi)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：31的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：32的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ ID NO：33的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID NO：34的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：35的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：36的胺基酸序列的PSMA-LCDR3，或(vii)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：37的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：38的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ ID NO：39的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID NO：40的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：41的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：42的胺基酸序列的PSMA-LCDR3，或(viii)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：43的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：44的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ ID NO：45的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID NO：46的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：47的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：48的胺基酸序列的PSMA-LCDR3，或(ix)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：49的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：50的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ ID NO：51的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID NO：52的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：53的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：54的胺基酸序列的PSMA-LCDR3，或(x)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：55的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：56的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ ID NO：57的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID NO：58或159的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：59的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：60的胺基酸序列的PSMA-LCDR3，或(xi)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：61的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：62的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ ID NO：63的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID NO：64的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：65的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：66的胺基酸序列的PSMA-LCDR3，或(xii)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：67的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：68的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ ID NO：69的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID NO：70的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：71的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：72的胺基酸序列的PSMA-LCDR3；更佳地，該抗原結合分子在25℃條件下以小於1×10-8M的KD結合人PSMA，該KD是藉由表面電漿共振法測量的。
- 如請求項1所述的抗原結合分子，其中，(i)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：112、110、77、107、108、109或111的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：115、114、78或113的胺基酸序列，或(ii)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：73或99的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：74或100的胺基酸序列，或(iii)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：75、101、102或103的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：76、104、105或106的胺基酸序列，或(iv)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：79、116或117的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：80、118或119的胺基酸序列，或(v)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：81或120的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：82、121、122、123、124、125或126的胺基酸序列，或(vi)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：127或83的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：128、84、129或130的胺基酸序列，或(vii)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：85、131或132的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：86、133、134或135的胺基酸序列，或(viii)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：87、136、137或138的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：88、139或140的胺基酸序列，或(ix)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：89、141、142、143或144的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：90、145、146或147的胺基酸序列，或(x)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：91、148或149的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：92、150、151或152的胺基酸序列，或(xi)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：93、153、154、155或156的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：94、157或158的胺基酸序列；或(xii)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：95、277、278或279的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：96、280、281、282或283的胺基酸序列；較佳地，(i)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：112的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：115的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：110的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：114的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：77的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：78的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：107的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：113的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：108的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：113的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：109的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：113的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：110的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：113的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：111的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：113的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：107的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：114的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：108的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：114的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：109的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：114的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：111的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：114的胺基酸序列，或(ii)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：73的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：74的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：99的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：100的胺基酸序列，或(iii)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：75的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：76的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：101的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：104的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：102的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：104的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：103的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：104的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：101的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：105的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：102的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：105的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：103的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：105的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：101的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：106的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：102的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：106的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：103的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：106的胺基酸序列，或(iv)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：79胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：80的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：116的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：118的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：117的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：118的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：116的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：119的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：117的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：119的胺基酸序列，或(v)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：81的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：82的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：120的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：121的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：120的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：122的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：120的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：123的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：120的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：124的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：120的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：125的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：120的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：126的胺基酸序列，或(vi)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：83的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：84的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：127的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：128的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：127的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：129的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：127的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：130的胺基酸序列，或(vii)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：85的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：86的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：131的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：133的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：131的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：134的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：131的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：135的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：132的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：133的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：132的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：134的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：132的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：135的胺基酸序列，或(viii)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：87的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：88的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：136的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：139的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：137的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：139的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：138的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：139的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：138的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：140的胺基酸序列，或(ix)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：89的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：90的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：141的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：145的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：142的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：145的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：143的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：145的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：144的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：145的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：141的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：146的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：142的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：146的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：143的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：146的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：144的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：146的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：141的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：147的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：142的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：147的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：143的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：147的胺基酸序列，或(x)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：91的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：92的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：148的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：150的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：149的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：150的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：148的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：151的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：149的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：151的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：148的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：152的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：149的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：152的胺基酸序列，或(xi)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：93的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：94的胺基酸序列；或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：153的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：157的胺基酸序列；或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：154的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：157的胺基酸序列；或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：155的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：157的胺基酸序列；或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：156的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：157的胺基酸序列；或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：153的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：158的胺基酸序列；或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：154的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：158的胺基酸序列；或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：155的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：158的胺基酸序列；或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：156的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：158的胺基酸序列；或(xii)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：95的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：96的胺基酸序列；更佳地，(i)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：112的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：115的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：110的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：114的胺基酸序列，或(vi)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：127的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：128的胺基酸序列。
- 如請求項1或2所述的抗原結合分子，其中該特異性結合CD3的抗原結合模塊包含重鏈可變區CD3-VH和輕鏈可變區CD3-VL，該CD3-VH中的CD3-HCDR1、CD3-HCDR2和CD3-HCDR3分別包含SEQ ID NO：166中的CD3-HCDR1、CD3-HCDR2和CD3-HCDR3的胺基酸序列；和該CD3-VL中的CD3-LCDR1、CD3-LCDR2和CD3-LCDR3分別包含SEQ ID NO：167中的CD3-LCDR1、CD3-LCDR2和CD3-LCDR3的胺基酸序列；較佳地，該CD3-VH具有：包含SEQ ID NO：160的胺基酸序列的CD3-HCDR1，包含SEQ ID NO：161的胺基酸序列的CD3-HCDR2，和包含SEQ ID NO：162的胺基酸序列的CD3-HCDR3；並且該CD3-VL具有：包含SEQ ID NO：163的胺基酸序列的CD3-LCDR1，包含SEQ ID NO：164的胺基酸序列的CD3-LCDR2，和包含SEQ ID NO：165的胺基酸序列的CD3-LCDR3；更佳地，該CD3-VH包含SEQ ID NO：166的胺基酸序列，和該CD3-VL包含SEQ ID NO：167的胺基酸序列。
- 如請求項1至3中任一項所述的抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含Fc區，該Fc區較佳為IgG Fc區，更佳為IgG1 Fc區；較佳地，該Fc區包含一個或多個能夠減少Fc區與Fcγ受體結合的胺基酸取代；更佳地，該Fc區是人IgG1 Fc區，並且在234和235位置的胺基酸殘基為A，編號依據為EU索引。
- 如請求項1至4中任一項所述的抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含Fc區，該Fc區包含能夠相互締合的第一亞基Fc1和第二亞基Fc2，該Fc1和Fc2各自獨立地具有一個或多個減少Fc區同源二聚化的胺基酸取代；較佳地，該Fc1具有根據杵臼技術的凸起結構，和該Fc2具有根據杵臼技術的孔結構；或該Fc2具有根據杵臼技術的凸起結構，和該Fc1具有根據杵臼技術的孔結構；更佳地，1)該Fc1在366位置的胺基酸殘基為W；和該Fc2在366位置的胺基酸殘基為S、在368位置的胺基酸殘基為A、和在407位置的胺基酸殘基為V，編號依據為EU索引；或者2)該Fc2在366位置的胺基酸殘基為W；和該Fc1在366位置的胺基酸殘基為S、在368位置的胺基酸殘基為A、和在407位置的胺基酸殘基為V，編號依據為EU索引。
- 如請求項5所述的抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含：一個特異性結合PSMA的抗原結合模塊、和一個特異性結合CD3的抗原結合模塊；該特異性結合PSMA的抗原結合模塊和特異性結合CD3的抗原結合模塊是scFv；較佳地，該抗原結合分子包含：一條具有式(a)所示結構的第一鏈、和一條具有式(b)所示結構的第二鏈；式(a)[PSMA-VH]-[連接子1]-[PSMA-VL]-[連接子2]-[CD3-VH]-[連接子3]-[CD3-VL]-[連接子4]-[Fc2]，式(b)[Fc1]，式(a)和式(b)所示的結構是從N端至C端排列的，該連接子1、連接子2、連接子3和連接子4是相同或不同的肽連接子；更佳地，該抗原結合分子具有：一條包含SEQ ID NO：192的胺基酸序列的第一鏈和一條包含SEQ ID NO：169的胺基酸序列的第二鏈；或該抗原結合分子具有：一條包含SEQ ID NO：191的胺基酸序列的第一鏈和一條包含SEQ ID NO：169的胺基酸序列的第二鏈；或該抗原結合分子具有：一條包含SEQ ID NO：198的胺基酸序列的第一鏈和一條包含SEQ ID NO：169的胺基酸序列的第二鏈。
- 如請求項1至5中任一項所述的抗原結合分子，其中該特異性結合PSMA的抗原結合模塊或該特異性結合CD3的抗原結合模塊各自獨立地包含Titin鏈和Obscurin鏈；較佳地，該Titin鏈包含選自由SEQ ID NO：210至SEQ ID NO：228組成的組的胺基酸序列，該Obscurin鏈包含選自由SEQ ID NO：229至SEQ ID NO：269組成的組的胺基酸序列；更佳地，該Titin鏈包含SEQ ID NO：226的胺基酸序列，該Obscurin鏈包含SEQ ID NO：264的胺基酸序列。
- 如請求項7所述的抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含一個特異性結合PSMA的抗原結合模塊和一個特異性結合CD3的抗原結合模塊，該特異性結合PSMA的抗原結合模塊是Fab；該特異性結合CD3的抗原結合模塊是經替換的Fab，其包含Titin鏈和Obscurin鏈；較佳地，該抗原結合分子包含一條具有式(c)所示結構的第一鏈、一條具有式(d)所示結構的第二鏈、一條具有式(e)所示結構的第三鏈和一條具有式(f)所示結構的第四鏈，式(c)[PSMA-VH]-[CH1]-[Fc1]，式(d)[PSMA-VL]-[CL]，式(e)[CD3-VH]-[連接子5]-[Obscurin鏈]-[Fc2]，式(f)[CD3-VL]-[連接子6]-[Titin鏈]，式(c)、(d)、(e)和(f)所示的結構是從N端至C端排列的，該連接子5和該連接子6是相同或不同的肽連接子；更佳地，該抗原結合分子具有：一條包含SEQ ID NO：201的胺基酸序列的第一鏈、一條包含SEQ ID NO：202的胺基酸序列的第二鏈、一條包含SEQ ID NO：171的胺基酸序列的第三鏈和一條包含SEQ ID NO：172的胺基酸序列的第四鏈，或該抗原結合分子具有：一條包含SEQ ID NO：193的胺基酸序列的第一鏈、一條包含SEQ ID NO：194的胺基酸序列的第二鏈、一條包含SEQ ID NO：171的胺基酸序列的第三鏈和一條包含SEQ ID NO：172的胺基酸序列的第四鏈，或該抗原結合分子具有：一條包含SEQ ID NO：206的胺基酸序列的第一鏈、一條包含SEQ ID NO：207的胺基酸序列的第二鏈、一條包含SEQ ID NO：171的胺基酸序列的第三鏈和一條包含SEQ ID NO：172的胺基酸序列的第四鏈，或該抗原結合分子具有：一條包含SEQ ID NO：284的胺基酸序列的第一鏈、一條包含SEQ ID NO：285的胺基酸序列的第二鏈、一條包含SEQ ID NO：171的胺基酸序列的第三鏈和一條包含SEQ ID NO：172的胺基酸序列的第四鏈。
- 如請求項7所述的抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含兩個特異性結合PSMA的抗原結合模塊和一個特異性結合CD3的抗原結合模塊，該特異性結合PSMA的抗原結合模塊是Fab；該特異性結合CD3的抗原結合模塊是經替換的Fab，其包含Titin鏈和Obscurin鏈；較佳地，該抗原結合分子包含一條具有式(c)所示結構的第一鏈、兩條具有式(d)所示結構的第二鏈、一條具有式(g)所示結構的第三鏈和一條具有式(h)所示結構的第四鏈，式(c)[PSMA-VH]-[CH1]-[Fc1]，式(d)[PSMA-VL]-[CL]，式(g)[PSMA-VH]-[CH1]-[CD3-VH]-[連接子7]-[Titin鏈]-[Fc2]，式(h)[CD3-VL]-[連接子8]-[Obscurin鏈]，式(c)、(d)、(g)和(h)所示的結構是從N端至C端排列的，該連接子7和該連接子8是相同或不同的肽連接子；更佳地，該抗原結合分子具有：一條包含SEQ ID NO：180的胺基酸序列的第一鏈、兩條包含SEQ ID NO：181的胺基酸序列的第二鏈、一條包含SEQ ID NO：182的胺基酸序列的第三鏈和一條包含SEQ ID NO：174的胺基酸序列的第四鏈，或該抗原結合分子具有：一條包含SEQ ID NO：187的胺基酸序列的第一鏈、兩條包含SEQ ID NO：188的胺基酸序列的第二鏈、一條包含SEQ ID NO：189的胺基酸序列的第三鏈和一條包含SEQ ID NO：174的胺基酸序列的第四鏈，或該抗原結合分子具有：一條包含SEQ ID NO：193的胺基酸序列的第一鏈、兩條包含SEQ ID NO：194的胺基酸序列的第二鏈、一條包含SEQ ID NO：195的胺基酸序列的第三鏈和一條包含SEQ ID NO：174的胺基酸序列的第四鏈，或該抗原結合分子具有：一條包含SEQ ID NO：206的胺基酸序列的第一鏈、兩條包含SEQ ID NO：207的胺基酸序列的第二鏈、一條包含SEQ ID NO：208的胺基酸序列的第三鏈和一條包含SEQ ID NO：174的胺基酸序列的第四鏈。
- 如請求項7所述的抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含兩個特異性結合PSMA的抗原結合模塊和兩個特異性結合CD3的抗原結合模塊，該特異性結合PSMA的抗原結合模塊是Fab；該特異性結合CD3的抗原結合模塊是經替換的Fab，其包含Titin鏈和Obscurin鏈；較佳地，該抗原結合分子包含兩條具有式(j)所示結構的第一鏈、兩條具有式(d)所示結構的第二鏈和兩條具有式(h)所示結構的第三鏈，式(j)[PSMA-VH]-[CH1]-[CD3-VH]-[連接子9]-[Titin鏈]-[Fc的一個亞基]，式(d)[PSMA-VL]-[CL]，式(h)[CD3-VL]-[連接子8]-[Obscurin鏈]，式(j)、(d)和(h)所示的結構是從N端至C端排列的，該連接子8和該連接子9是相同或不同的肽連接子；更佳地，該抗原結合分子具有：兩條包含SEQ ID NO：183的胺基酸序列的第一鏈、兩條包含SEQ ID NO：181的胺基酸序列的第二鏈和兩條包含SEQ ID NO：174的胺基酸序列的第三鏈，或該抗原結合分子具有：兩條包含SEQ ID NO：185的胺基酸序列的第一鏈、兩條包含SEQ ID NO：186的胺基酸序列的第二鏈和兩條包含SEQ ID NO：174的胺基酸序列的第三鏈，或該抗原結合分子具有：兩條包含SEQ ID NO：196的胺基酸序列的第一鏈、兩條包含SEQ ID NO：194的胺基酸序列的第二鏈和兩條包含SEQ ID NO：174的胺基酸序列的第三鏈，或該抗原結合分子具有：兩條包含SEQ ID NO：203的胺基酸序列的第一鏈、兩條包含SEQ ID NO：204的胺基酸序列的第二鏈和兩條包含SEQ ID NO：174的胺基酸序列的第三鏈，或該抗原結合分子具有：兩條包含SEQ ID NO：286的胺基酸序列的第一鏈、兩條包含SEQ ID NO：285的胺基酸序列的第二鏈和兩條包含SEQ ID NO：174的胺基酸序列的第三鏈。
- 如請求項1至4中任一項所述的抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含兩個特異性結合PSMA的抗原結合模塊和兩個特異性結合CD3的抗原結合模塊，該特異性結合PSMA的抗原結合模塊是Fab，該特異性結合CD3的抗原結合模塊是scFv；較佳地，該抗原結合分子包含兩條具有式(k)所示結構的第一鏈和兩條具有式(d)所示結構的第二鏈，式(k)[PSMA-VH]-[CH1]-[CD3-VH]-[連接子10]-[CD3-VL]-[連接子11]-[Fc的一個亞基]，式(d)[PSMA-VL]-[CL]，式(k)和式(d)所示的結構是從N端至C端排列的，該連接子10和該連接子11是相同或不同的肽連接子；更佳地，該抗原結合分子具有：兩條包含SEQ ID NO：184的胺基酸序列的第一鏈和兩條包含SEQ ID NO：181的胺基酸序列的第二鏈，或該抗原結合分子具有：兩條包含SEQ ID NO：190的胺基酸序列的第一鏈和兩條包含SEQ ID NO：188的胺基酸序列的第二鏈，或該抗原結合分子具有：兩條包含SEQ ID NO：197的胺基酸序列的第一鏈和兩條包含SEQ ID NO：194的胺基酸序列的第二鏈，或該抗原結合分子具有：兩條包含SEQ ID NO：199的胺基酸序列的第一鏈和兩條包含SEQ ID NO：200的胺基酸序列的第二鏈，或該抗原結合分子具有：兩條包含SEQ ID NO：205的胺基酸序列的第一鏈和兩條包含SEQ ID NO：204的胺基酸序列的第二鏈，或該抗原結合分子具有：兩條包含SEQ ID NO：209的胺基酸序列的第一鏈和兩條包含SEQ ID NO：207的胺基酸序列的第二鏈。
- 一種分離的抗體，其能夠特異性結合PSMA，該抗體包含重鏈可變區PSMA-VH和輕鏈可變區PSMA-VL，其中(i)該PSMA-VH中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3分別包含SEQ ID NO：77中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3的胺基酸序列，和該PSMA-VL中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3分別包含SEQ ID NO：78中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3的胺基酸序列，或(ii)該PSMA-VH中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3分別包含SEQ ID NO：73中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3的胺基酸序列，和該PSMA-VL中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA- LCDR3分別包含SEQ ID NO：74中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3的胺基酸序列，或(iii)該PSMA-VH中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3分別包含SEQ ID NO：75中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3的胺基酸序列，和該PSMA-VL中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3分別包含SEQ ID NO：76中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3的胺基酸序列，或(iv)該PSMA-VH中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3分別包含SEQ ID NO：79中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3的胺基酸序列，和該PSMA-VL中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3分別包含SEQ ID NO：80中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3的胺基酸序列，或(v)該PSMA-VH中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3分別包含SEQ ID NO：81中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3的胺基酸序列，和該PSMA-VL中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3分別包含SEQ ID NO：82中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3的胺基酸序列，或(vi)該PSMA-VH中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3分別包含SEQ ID NO：83中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3的胺基酸序列，和該PSMA-VL中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3分別包含SEQ ID NO：84中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3的胺基酸序列，或(vii)該PSMA-VH中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3分別包含SEQ ID NO：85中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3的胺基酸序列，和該PSMA-VL中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3分別包含SEQ ID NO：86中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3的胺基酸序列，或(viii)該PSMA-VH中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3分別包含SEQ ID NO：87中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3的胺基酸序列，和該PSMA-VL中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3分別包含SEQ ID NO：88中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3的胺基酸序列，或(ix)該PSMA-VH中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3分別包含SEQ ID NO：89中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3的胺基酸序列，和該PSMA-VL中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3分別包含SEQ ID NO：90中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3的胺基酸序列，或(x)該PSMA-VH中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3分別包含SEQ ID NO：91中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3的胺基酸序列，和該PSMA-VL中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3分別包含SEQ ID NO：92或152中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3的胺基酸序列，或(xi)該PSMA-VH中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3分別包含SEQ ID NO：93中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3 的胺基酸序列，和該PSMA-VL中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3分別包含SEQ ID NO：94中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3的胺基酸序列，或(xii)該PSMA-VH中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3分別包含SEQ ID NO：95中的PSMA-HCDR1、PSMA-HCDR2和PSMA-HCDR3的胺基酸序列，和該PSMA-VL中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3分別包含SEQ ID NO：96中的PSMA-LCDR1、PSMA-LCDR2和PSMA-LCDR3的胺基酸序列；較佳地，(i)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：13的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：14的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ ID NO：15的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：17的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：18的胺基酸序列的PSMA-LCDR3，或(ii)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：1的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：2的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ ID NO：3的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID NO：4的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：5的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：6的胺基酸序列的PSMA-LCDR3，或(iii)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：7的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：8的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ ID NO：9的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID NO： 10的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：11的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：12的胺基酸序列的PSMA-LCDR3，或(iv)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：19的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ ID NO：21的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID NO：22的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：23的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：24的胺基酸序列的PSMA-LCDR3，或(v)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：25的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：26的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ ID NO：27的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID NO：28的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：29的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：30的胺基酸序列的PSMA-LCDR3，或(vi)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：31的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：32的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ ID NO：33的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID NO：34的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：35的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：36的胺基酸序列的PSMA-LCDR3，或(vii)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：37的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：38的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ ID NO：39的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID NO：40的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：41的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：42的胺基酸序列的PSMA-LCDR3，或(viii)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：43的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：44的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ ID NO：45的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID NO：46的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：47的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：48的胺基酸序列的PSMA-LCDR3，或(ix)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：49的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：50的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ ID NO：51的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID NO：52的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：53的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：54的胺基酸序列的PSMA-LCDR3，或(x)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：55的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：56的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ ID NO：57的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID NO：58或159的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：59的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：60的胺基酸序列的PSMA-LCDR3，或(xi)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：61的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：62的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ ID NO：63的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID NO：64的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：65的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：66的胺基酸序列的PSMA-LCDR3，或(xii)該PSMA-VH具有：包含SEQ ID NO：67的胺基酸序列的PSMA-HCDR1、包含SEQ ID NO：68的胺基酸序列的PSMA-HCDR2和包含SEQ ID NO：69的胺基酸序列的PSMA-HCDR3，和該PSMA-VL具有：包含SEQ ID NO：70的胺基酸序列的PSMA-LCDR1、包含SEQ ID NO：71的胺基酸序列的PSMA-LCDR2和包含SEQ ID NO：72的胺基酸序列的PSMA-LCDR3；更佳地，該抗體在25℃條件下以小於1×10-8M的KD結合人PSMA，該KD是藉由表面電漿共振法測量的。
- 如請求項12所述的分離的抗體，其中(i)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：112、110、77、107、108、109或111的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：115、114、78或113的胺基酸序列，或(ii)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：73或99的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：74或100的胺基酸序列，或(iii)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：75、101、102或103的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：76、104、105或106的胺基酸序列，或(iv)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：79、116或117的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：80、118或119的胺基酸序列，或(v)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：81或120的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：82、121、122、123、124、125或126的胺基酸序列，或(vi)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：127或83的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：128、84、129或130的胺基酸序列，或(vii)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：85、131或132的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：86、133、134或135的胺基酸序列，或(viii)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：87、136、137或138的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：88、139或140的胺基酸序列，或(ix)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：89、141、142、143或144的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：90、145、146或147的胺基酸序列，或(x)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：91、148或149的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：92、150、151或152的胺基酸序列，或(xi)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：93、153、154、155或156的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：94、157或158的胺基酸序列，或(xii)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：95、277、278或279的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：96、280、281、282或283的胺基酸序列；較佳地，(i)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：112的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：115的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：110的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：114的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：77的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：78的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：107的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：113的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：108的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：113的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：109的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：113的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：110的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：113的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：111的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：113的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：107的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：114的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：108的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：114的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：109的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：114的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：111的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：114的胺基酸序列，或(ii)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：73的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：74的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：99的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：100的胺基酸序列，或(iii)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：75的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：76的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：101的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：104的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：102的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：104的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：103的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：104的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：101的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：105的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：102的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：105的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：103的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：105的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：101的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：106的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：102的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：106的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：103的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：106的胺基酸序列，或(iv)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：79胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：80的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：116的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：118的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：117的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：118的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：116的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：119的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：117的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：119的胺基酸序列，或(v)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：81的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：82的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：120的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：121的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：120的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：122的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：120的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：123的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：120的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：124的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：120的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：125的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：120的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：126的胺基酸序列，或(vi)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：83的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：84的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：127的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：128的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：127的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：129的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：127的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：130的胺基酸序列，或(vii)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：85的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：86的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：131的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：133的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：131的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：134的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：131的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：135的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：132的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：133的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：132的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：134的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：132的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：135的胺基酸序列，或(viii)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：87的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：88的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：136的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：139的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：137的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：139的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：138的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：139的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：138的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：140的胺基酸序列，或(ix)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：89的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：90的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：141的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：145的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：142的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：145的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：143的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：145的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：144的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：145的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：141的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：146的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：142的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：146的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：143的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：146的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：144的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：146的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：141的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：147的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：142的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID 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NO：158的胺基酸序列；或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：156的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：158的胺基酸序列；或(xii)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：95的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：96的胺基酸序列；更佳地，(i)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：112的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：115的胺基酸序列，或該PSMA-VH包含SEQ ID NO：110的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：114的胺基酸序列，或(vi)該PSMA-VH包含SEQ ID NO：127的胺基酸序列，和該PSMA-VL包含SEQ ID NO：128的胺基酸序列。
- 如請求項12或13所述的分離的抗體，其中該抗體是雙特異性抗體；較佳地，該雙特異性抗體特異性結合PSMA和CD3。
- 一種醫藥組成物，其含有：治療有效量的如請求項1至11中任一項所述的抗原結合分子或如請求項12至14中任一項所述的分離的抗體，以及一種或更多種藥學上可接受的載體、稀釋劑、緩衝劑或賦形劑；較佳地，該醫藥組成物還包含至少一種第二治療劑；更佳地，該第二治療劑是能夠特異性結合CD28的抗體。
- 一種分離的核酸，其編碼如請求項1至11中任一項所述的抗原結合分子或如請求項12至14中任一項所述的分離的抗體。
- 一種宿主細胞，其包含如請求項16所述的分離的核酸。
- 一種治療疾病的方法，該方法包括：向受試者施用治療有效量的如請求項1至11中任一項所述的抗原結合分子、或如請求項12至14中任一項所述的分離的抗體、或如請求項15所述的醫藥組成物的步驟；該疾病是增殖性疾病、腫瘤或免疫疾病；較佳地，該疾病選自以下任一項：前列腺癌、肺癌、子宮內膜癌、腎癌、膀胱癌、結直腸癌及胃癌。
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