TW202237077A

TW202237077A - 低分級腫瘤之代謝靶向

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Publication number: TW202237077A
Application number: TW110144351A
Authority: TW
Inventors: 史都華Ｌ馬克斯
Original assignee: 美商搜娜拉先斯公司
Priority date: 2020-11-30
Filing date: 2021-11-29
Publication date: 2022-10-01
Also published as: EP4252001A4; JP2023553837A; WO2022115695A1; CN116981475A; AU2021385582A1; US20220184234A1; CA3200226A1; KR20230141758A; EP4252001A1

Abstract

本揭示闡述檢測及治療個體之低分級惡性組織之方法，其包含向該個體投與5-胺基乙醯丙酸或其醫藥上可接受之鹽或酯及量測該組織之螢光。

Description

低分級腫瘤之代謝靶向

本文提供之揭示內容概言之係關於醫學診斷及治療。更具體而言，本揭示內容係關於使用超音波(ultrasound)及超音波敏化劑之醫學治療。

1942年闡述血紫質及其衍生物優先在腫瘤細胞中累積(H. Auler等人， Z. Krebsforsch. (1942) 53:65-68)。該化合物之螢光性質用於標記腫瘤組織，作為手術輔助及診斷(R. Vansevičiūtė等人， Medicina(2014) 50:137-43；J. Zhang等人， Acta Pharm Sinica B(2018) 8:137-46)。在1972年，證明血紫質可在氧之存在下用於選擇性地使腫瘤細胞對光敏感(「光動力效應」)，從而導致腫瘤大小減小，一種現在稱為光動力療法之程序(I. Diamond等人， Lancet(1972) 2:1175-77)。大多數生物體中之血紫質轉化為血基質及相關分子。據信，血紫質由於缺乏鐵或代謝酶之功能障礙而在某些腫瘤組織中累積(W. Song等人， Anticancer Res(2011) 31:39-46；C.J. Gomer等人， Cancer Res(1979) 39:146-51)。此允許使用光選擇性破壞腫瘤細胞，而使附近健康組織相對不受影響。亦發現，當投與外源性5-胺基乙醯丙酸(「5-ALA」)(血基質路徑中之第一關鍵分子)時，光敏卟啉原紫質-IX累積並使組織在幾小時內光敏化(C. Perotti等人， Br J Cancer(2004) 90:1660-65)。然而，光動力療法受組織不透明性之限制：有效治療自體表或管腔無法觸及之腫瘤可需要手術進入腫瘤位點。

聲動力療法(「SDT」)係在利用聲敏劑進行敏化後使用聚焦式超音波(FUS)破壞細胞之方法。作用機制尚未最終確定，但據信係由於熱效應及/或空蝕作用產生之單重態氧所致。超音波能穿透組織到達較光更遠之距離，此使得非侵入式治療可達身體之更多部分。令人驚訝地，已發現，原紫質-IX亦係有效聲敏劑(N. Yumita等人， Jpn J Cancer Res(1989) 80(3):219-22)，其能夠在原本將無效之條件下藉由超音波破壞細胞。再次，作用機制尚不清楚，但已猜測係單重態氧形成之結果。

迄今為止，有許多報導之活體外及活體內實驗，但沒有臨床試驗結果(H. Hirschberg等人， Ther Deliv(2017) 8:331-42)。舉例而言，N. Yumita等人，上文文獻在活體外使用血紫質(10、25或50 µg/mL)及超音波(1.92 MHz)以1.27、2.21或3.18 W/cm ²之強度達15、30或60秒之持續時間研究了SDT對小鼠肉瘤180或大鼠腹水肝細胞瘤130細胞之效應。在超音波施加之前15、30或60秒將血紫質施加至細胞。Yumita報告單獨60秒超音波便損傷大量細胞(對於肉瘤180及腹水肝細胞瘤分別為16%及17%)，如藉由台盼藍(trypan blue)染料排除法所測定。更多數量之細胞在更高強度下被損傷(2.21 W/cm ²：71%及75%；3.18 W/cm ²：79%及86%)。當添加血紫質(50 µg/mL)時，實質上更多肉瘤細胞在暴露於1.27或3.18 W/cm ²後受到損傷(67%及98%)，而更多AH細胞在2.21及3.18 W/cm ²下受到損傷(95%及96%)。使用25 µg/mL之血紫質及3.18 W/cm2之超音波強度亦報告統計上顯著之細胞損傷(98%及96%)，其相當於使用50 µg/mL之細胞破壞。

儘管此項技術中已知檢測及分類腫瘤(例如低分級惡性腫瘤)之方法，但確定及治療已變為侵襲性、進行性或復發性之低分級惡性病一直具有挑戰性。

本文提供檢測及治療低分級惡性組織之方法。

一個態樣係檢測及治療受試者之低分級惡性組織之方法，該方法包含：(a) 向該受試者提供有效量之5-胺基乙醯丙酸(5-ALA)或其醫藥上可接受之鹽或酯；(b) 量測該受試者中組織之螢光；及(c)治療該低分級惡性組織；其中該低分級惡性組織中之螢光高於毗鄰組織中之螢光。

另一態樣係用於檢測受試者中低分級惡性組織之套組，該套組包含有效量之5-胺基乙醯丙酸(5-ALA)或其醫藥上可接受之鹽或酯及使用說明書。

另一態樣係用於檢測受試者中低分級惡性組織之系統，該系統包含：(a) 有效量之5-胺基乙醯丙酸(5-ALA)或其醫藥上可接受之鹽或酯；及(b) 螢光檢測裝置。

一個態樣係檢測及治療受試者之低分級惡性組織之方法，該方法包含：(a) 向該受試者提供有效量之5-胺基乙醯丙酸(5-ALA)或其醫藥上可接受之鹽或酯；(b) 量測該受試者中組織之螢光；及(c)治療該低分級惡性組織；其中該低分級惡性組織中之螢光高於毗鄰組織中之螢光。儘管此項技術中已知之技術按諸如世界衛生組織(World Health Organization, WHO)腫瘤分級等分類對惡性組織進行分期，但可難以確定並治療已變成更具侵襲性之腫瘤之低分級腫瘤(例如WHO I級或II級腫瘤)。當前揭示之方法藉由確定低分級惡性組織何時發生生物化學變化以吸收及/或累積5-ALA、由此在生物化學層面上表現得如同高分級腫瘤一般來滿足該等及其他需要。

5-ALA之有效量可藉由標準方法測定。一般而言，有效量將為足以實質上染色欲治療之惡性組織、而不會實質上染色正常組織或引起不可接受位準之毒性之量。不受任何特定理論約束，據信對組織進行超音波治療(sonicating)導致空蝕作用及微氣泡生成，該等之坍塌在組織內生成波長介於約300 nm與700 nm之間之光子，且該等光子活化原紫質-IX，導致組織破壞。

在本文提供值之範圍之情形中，應理解，該範圍之上限與下限之間之每一居間值(除非上下文另有明確指示，否則精確至下限單位之十分之一)及所述範圍中之任何其他規定或居間值涵蓋於揭示內容內。該等較小範圍之上限及下限可獨立地包括在該較小範圍中，且亦涵蓋於本揭示內容中，受所述範圍中任何特定排除之限制。在所述範圍包括限值中之一或二者之情形中，本揭示內容中亦包括排除彼等所包括限值中之任一或二者之範圍。

本文所揭示之所有範圍亦涵蓋任一及所有可能子範圍及其子範圍之組合。任何所列示範圍均可視為充分闡述並能夠將相同範圍分解為至少相等的一半、三分之一、四分之一、五分之一、十分之一等。作為非限制性實例，本文所討論之每一範圍可容易地分解為下三分之一、中三分之一及上三分之一，等等。如熟習此項技術者亦應瞭解，諸如「至多」、「至少」、「大於」、「小於」及諸如此類之所有語言包括所列舉之數字且係指可如上所述隨後分解為子範圍之範圍。最後，如熟習此項技術者應瞭解，範圍包括每一個別成員。因此，舉例而言，具有1-3個物件之群係指具有1、2或3個物件之群。類似地，具有1-5個物件之群係指具有1、2、3、4或5個物件之群，等等。

應瞭解，為清晰起見在單獨實施例之上下文中所闡述之本揭示內容之某些特徵亦可在單一實施例中組合提供。相反，為簡便起見在單一實施例之上下文中闡述之本揭示內容之各種特徵亦可單獨或以任何適宜子組合提供。與本揭示內容有關之實施例的所有組合均特定包含在本揭示內容中並揭示於本文中，如同每一及每個組合均個別且明確地揭示一樣。另外，各個實施例及其要素之所有子組合亦特定包含在本揭示內容中並揭示於本文中，如同每一及每個該子組合均個別且明確地揭示一般。 惡性組織

惡性組織通常係腫瘤性或癌性的，但通常可係能吸收5-ALA並累積原紫質-IX之任何類型之組織，例如良性腫瘤或其他不期望之生長。惡性組織可為低分級惡性組織，亦即世界衛生組織(WHO) I及或II級腫瘤。 - WHO I 級：具有低增殖潛力之病變，通常具有離散性質，且有單獨手術切除後治癒之可能性。 - WHO II 級：病變顯示非典型細胞，該等細胞儘管有絲分裂活性低，但通常具有浸潤性，且該等病變在局部療法後較I級惡性腫瘤更經常復發。一些腫瘤類型傾向於進展至更高分級之惡性病。 - WHO III 級：具有惡性病組織學證據之病變，包括核異型性/間變性及增加之有絲分裂活性；該等病變具有間變性組織學及浸潤能力；其通常利用侵襲性佐劑放射療法及/或化學療法進行治療。 - WHO IV 級：有絲分裂活躍、壞死傾向之病變，且通常與周圍組織之新生血管形成及浸潤相關，有顱脊髓播散之傾向及快速手術後進展及致命結果；病變通常利用侵襲性輔助療法、通常Stupp協定與化學放射療法組合。

其他惡性組織包括(但不限於)贅生物、癌、肉瘤及諸如此類。其他腫瘤包括(但不限於)兒童期實體腫瘤，例如腦瘤、神經胚細胞瘤、視網膜母細胞瘤、威爾姆氏瘤(Wilms’ Tumor)、骨腫瘤及軟組織肉瘤；成人之常見實體腫瘤，例如頭頸癌(例如浸潤或轉移鱗狀細胞癌、唾液腺腫瘤、鼻咽癌、口腔、喉及食道腫瘤)；生殖泌尿道癌(例如尿道、輸尿管、腎細胞、膀胱癌及膀胱原位癌、局部晚期或轉移性前列腺癌、膀胱癌、腎癌、卵巢癌、睪丸癌、子宮癌、子宮頸癌和及子宮癌)、直腸及結腸癌；肺癌(包括間皮瘤、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、鱗狀細胞肺癌)；乳癌；胃、食道及結腸癌、膽道癌、肝癌及胰臟腺癌；黑色素瘤、浸潤性基底細胞癌及其他皮膚癌；胃癌、腦癌、肝癌及甲狀腺癌。舉例而言，低分級惡性組織可為腦、乳房、結腸、腎、肝、卵巢、胰臟、前列腺、直腸、胃或子宮之組織。

本揭示內容之方法可用於檢測及治療為顱內腫瘤之低分級惡性組織之類型，例如多形性神經膠母細胞瘤(包括低分級神經膠母細胞瘤)、視路神經膠質瘤、瀰漫型內因性橋腦神經膠細胞瘤、星細胞瘤、室管膜瘤、髓母細胞瘤、寡樹突神經膠細胞瘤、血管母細胞瘤、橫紋肌樣瘤、來自其他癌症之腦轉移(包括，例如但不限於乳房腺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、鱗狀細胞肺癌、轉移惡性黑色素瘤及前列腺癌)、腦脊髓膜瘤、原發性腦垂腺惡性病、惡性神經鞘瘤及神經纖維瘤。在某些情形中，低分級惡性組織係神經膠質瘤。舉例而言，低分級惡性組織可為寡樹突神經膠細胞瘤、瀰漫性星細胞瘤、視路神經膠質瘤、毛狀星細胞瘤、室管膜下巨細胞星狀瘤，或多形性黃色星細胞瘤。 5- 胺基乙醯丙酸

5-ALA可提供於任何醫藥上可接受之調配物中，且可作為游離酸、醫藥上可接受之鹽或醫藥上可接受之酯提供。調配物Gliolan®係市售購得。

活性劑之鹽、酯、醯胺、前藥及其他衍生物可使用熟習合成有機化合物之技術者已知之標準程序製備且例如由March (1992) Advanced Organic Chemistry ；Reactions, Mechanisms and Structure, 第4版 N.Y. Wiley-Interscience闡述。醫藥上可接受之鹽係保留母體化合物之生物學有效性及性質且不為生物學上或其他方面不期望之鹽。5-ALA能借助存在之胺基及/或羧基形成酸及/或鹼鹽。許多該等鹽為業內已知，例如，如WO 87/05297中所闡述。醫藥上可接受之酸加成鹽可利用無機酸及有機酸形成。可自其衍生鹽之無機酸包括(例如)鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸及諸如此類。可自其衍生鹽之有機酸包括(例如)乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、馬來酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、對甲苯磺酸、柳酸及諸如此類。醫藥上可接受之鹼加成鹽可利用無機及有機鹼形成。可自其衍生鹽之無機鹼包括(例如)鈉、鉀、鋰、銨、鈣、鎂、鐵、鋅、銅、錳、鋁及諸如此類。可自其衍生鹽之有機鹼包括(例如)一級、二級及三級胺、包括天然存在之經取代胺之經取代胺、環狀胺、鹼離子交換樹脂及諸如此類，例如異丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺及乙醇胺。醫藥上可接受之酯包括藉由用烷基替代酸性基團上之氫所獲得之彼等，例如藉由使酸基團與醇或鹵代烷基反應。酯之實例包括(但不限於)其中-C(O)OH基團上之氫經烷基替代以形成-C(O)O-烷基之彼等。

在一些實施例中，5-ALA係藉由γ輻照殺菌(參見US 6335465，其以引用的方式完全併入)。5-ALA調配物可經口、靜脈內、鞘內或腫瘤內投與。在一些實施例中，5-ALA係藉由靜脈內投與來投與。在一些實施例中，γ輻照之5-ALA係藉由靜脈內投與來投與。 檢測方法

一種檢測本文所述低分級惡性組織之方法包含投與有效量之5-ALA及在攝取或累積原紫質-IX及/或5-ALA之後檢測組織之螢光。與毗鄰組織中較低之螢光相比，較高之螢光將指示存在低分級惡性組織。在一些實施例中，5-ALA係以至少約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、96、97、98、99、100、120、125、150、175、200、300、400、500、600、750或至少約1000 mg/kg之劑量投與。在一些實施例中，5-ALA係以不多於約1000、900、800、700、600、500、400、300、250、200、180、175、160、150、140、130、120、110、100、90、80、70、60、50、45、40、35、30、25或20 mg/kg之劑量投與。在一些實施例中，5-ALA係以約0.5至約250 mg/kg之劑量投與。在一些實施例中，5-ALA係以1至100 mg/kg之劑量投與。在一些實施例中，5-ALA係以5至90 mg/kg之劑量投與。在一些實施例中，5-ALA係以10至75 mg/kg之劑量投與。

量測螢光之方法在此項技術中已知許多技術，例如流式細胞測量術、共焦顯微鏡術、手術顯微鏡術及定量原紫質-IX顯微鏡術。在一些實施例中，量測可包含經改良用於螢光成像之手術顯微鏡，其允許對低分級惡性組織目視檢測。參見Valdes等人，J. Neurosurg. 2015, 123(3), 771-780；Claus等人，Neurosurg. Focus 2015, 38(1), E6。 治療方法

在一些實施例中，本揭示之方法包含檢測低分級惡性組織及隨後治療經檢測之組織。舉例而言，該方法可包含：(a) 向個體投與有效量之5-胺基乙醯丙酸(5-ALA)或其醫藥上可接受之鹽或酯；(b) 量測該個體中組織之螢光；及(c)治療該低分級惡性組織；其中該低分級惡性組織中之螢光高於毗鄰組織中之螢光。

治療低分級惡性組織可藉由此項技術中已知之許多方法實施，例如手術、輻射或聲動力療法。在一些實施例中，該方法包含手術。在一些實施例中，該方法包含輻射。在一些實施例中，該方法包含聲動力療法。

聲敏化之方法為業內已知。舉例而言，聲動力療法已闡述於PCT/US20/34944中，其整體以引用的方式併入本文中。在一些實施例中，聲動力療法包含投與5-ALA及超音波治療惡性組織。所需5-ALA之有效量可藉由熟習此項技術者已知之標準方法確定。舉例而言，如PCT/US20/34944之實例1中所述，可將腫瘤組織植入小鼠或其他實驗室模型受試者，並利用不同量之5-ALA及FUS治療受試者。小鼠可利用20 mg/kg之5-ALA治療，然後利用6.9 W/cm ²、13.8 W/cm ²、27.6 W/cm ²或55.2 W/cm ²超音波治療20分鐘。結果顯示，在13.8 W/cm ²下之超音波治療使腫瘤溫度升高約2℃，至32℃。在27.6 W/cm ²下之超音波治療使腫瘤溫度升高至約37℃。在55.2 W/cm ²下進行超音波治療之大鼠遭受組織損傷。未經治療之對照展現32 ± 10 mm ³之正規化腫瘤體積，而僅5-ALA及僅FUS群組展現24 ± 6 mm ³之正規化腫瘤體積。所有試驗群組與對照動物相比均展現受抑制之腫瘤生長及經改良存活。在腫瘤內在多個點處進行超音波治療之群組(MP群組)展現存活之最大增加，其中50%受試者存活超過60天。在一些實施例中，5-ALA之有效量介於1 mg/kg與1,000 mg/kg之間。在一些實施例中，5-ALA之有效量介於5 mg/kg與750 mg/kg之間。在一些實施例中，5-ALA之有效量介於10 mg/kg與750 mg/kg之間。在一些實施例中，5-ALA之有效量介於20 mg/kg與500 mg/kg之間。在一些實施例中，5-ALA之有效量介於40 mg/kg與500 mg/kg之間。在一些實施例中，5-ALA之有效量介於10 mg/kg與40 mg/kg之間。在一些實施例中，5-ALA之有效量介於10 mg/kg與20 mg/kg之間。

在一些實施例中，在投與5-ALA與超音波治療惡性組織之間包括潛伏期，以允許5-ALA有足夠時間被惡性組織吸收並轉化為原紫質-IX。在一些實施例中，潛伏期為至少約30分鐘、至少約1小時、至少約2小時、至少約3小時、至少約4小時、至少約5小時、至少約6小時、至少約7小時、至少約8小時、至少約9小時、至少約10小時、至少約11小時、至少約12小時、至少約13小時、至少約14小時、至少約15小時、至少約16小時、至少約18小時、至少約20小時或至少約24小時。在一些實施例中，潛伏期為72小時、少於約72小時、少於約60小時、少於約48小時、少於約36小時、少於約24小時、少於約22小時、少於約20小時、少於約18小時、少於約16小時、少於約15小時、少於約14小時、少於約13小時、少於約12小時、少於約11小時、少於約10小時、少於約9小時、少於約8小時、少於約7小時、少於約6小時、少於約5小時、少於約4小時或少於約3小時。在一些實施例中，潛伏期在1至72小時之間。在一些實施例中，潛伏期在2與48小時之間。在一些實施例中，潛伏期在3與36小時之間。在一些實施例中，潛伏期在4與24小時之間。在一些實施例中，潛伏期在4與18小時之間。在一些實施例中，潛伏期在4與24小時之間。在一些實施例中，潛伏期在4與18小時之間。在一些實施例中，潛伏期為約6小時。增效劑

在一些實施例中，方法進一步包含投與增效劑，該增效劑係例如藉由促進或增加原紫質-IX及/或5-ALA之攝取或累積、降低原紫質-IX及/或5-ALA代謝之速率及諸如此類增強5-ALA之治療效應。因此，增效劑可減少獲得既定效應所需5-ALA之量，或可增加自既定量之5-ALA獲得之效應或期望效應與量之間之任何組合。適宜增效劑包括例如(但不限於)胺甲喋呤(methotrexate)、去氧羥四環素(doxycycline)、米諾四環素(minocycline)、維生素D ₃及其衍生物。參見例如D.-F. Yang等人， J Formos Med Assoc(2014) 113(2):88-93；M.-J. Lee等人， PLoS ONE(2017) 12(5):e0178493；及E.V. Maytin等人， Isr J Chem(2012) 52(8-9):767-75。在一些實施例中，增效劑選自由以下組成之群：胺甲喋呤、去氧羥四環素、米諾四環素、維生素D ₃及其衍生物。在一些實施例中，增效劑係胺甲喋呤。在一些實施例中，增效劑係去氧羥四環素。在一些實施例中，增效劑係米諾四環素。在一些實施例中，增效劑係維生素D ₃。在一些實施例中，使用兩種或以上增效劑之組合。在一些實施例中，使用胺甲喋呤、去氧羥四環素、米諾四環素及維生素D ₃中兩者或以上之組合。

增效劑可與5-ALA同時或在超音波治療之前之任何其他時間投與。投與增效劑之最佳時間可隨增效劑之選擇或藥劑之組合而變。在一些實施例中，增效劑係與5-ALA同時投與。在一些實施例中，增效劑係與5-ALA在同一調配物中投與。在一些實施例中，增效劑係在不同時間投與。在一些實施例中，增效劑係在5-ALA投與之前投與。在一些實施例中，增效劑係在首次超音波治療之前至少約30分鐘、至少約1小時、至少約2小時、至少約3小時、至少約4小時、至少約5小時、至少約6小時、至少約7小時、至少約8小時、至少約9小時、至少約10小時、至少約11小時、至少約12小時、至少約13小時、至少約14小時、至少約15小時、至少約16小時、至少約18小時、至少約20小時、至少約24小時、至少約36小時、至少約48小時、至少約3天、至少約4天、至少約5天或至少約6天投與。在一些實施例中，增效劑係在首次超音波治療之前8天、7天、6天、5天、4天、84小時、72小時、少於約72小時、少於約60小時、少於約48小時、少於約36小時、少於約24小時、少於約22小時、少於約20小時、少於約18小時、少於約16小時、少於約15小時、少於約14小時、少於約13小時、少於約12小時、少於約11小時、少於約10小時、少於約9小時、少於約8小時、少於約7小時、少於約6小時、少於約5小時、少於約4小時或少於約3小時投與。在一些實施例中，增效劑投與期係在超音波治療之前1與72小時之間。在一些實施例中，增效劑投與期係在超音波治療之前2小時與5天之間。在一些實施例中，增效劑投與期係在超音波治療之前18小時與4天之間。在一些實施例中，增效劑投與期係在超音波治療之前24小時與4天之間。在一些實施例中，增效劑投與期係在超音波治療之前24與48小時之間。在一些實施例中，增效劑投與期係在超音波治療之前48與96小時之間。在一些實施例中，增效劑投與期係在超音波治療之前4與18小時之間。

所投與增效劑之量可由熟習此項技術者確定，且通常將取決於所選增效劑或藥劑及欲獲得之增效效應之程度。適宜方法包括例如(但不限於)細胞培養分析及/或利用模型動物或移植組織之活體內試驗，以確定使用不同量之5-ALA及/或增效劑、利用超音波治療或光動力治療之細胞殺死之程度。參見例如D.-F. Yang等人， J Formos Med Assoc(2014) 113(2):88-93；M.-J. Lee等人， PLoS ONE(2017) 12(5):e0178493；及E.V. Maytin等人， Isr J Chem(2012) 52(8-9):767-75。

所用增效劑之量將小於經歷不可接受毒性之量，且將足夠大以降低所需5-ALA之量以獲得增效效應。舉例而言，可確定使用一定量之5-ALA殺死之惡性組織或細胞之量或數量作為基線用於比較，且然後確定使用相同量之5-ALA與不同濃度或量之增效劑組合所殺死惡性組織或細胞之量或數量。或者，可確定在不同濃度或量之增效劑之存在下產生相同殺死位準所需5-ALA之量。所殺死惡性組織或細胞之量或數量可藉由細胞計數、腫瘤體積之量測、活體染料排除及其他常用於醫學研究之技術確定。利用增效劑所獲得之效應將係自基線量測至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、96、97、98或99%之效應增加或5-ALA劑量之降低。在一些實施例中，利用增效劑所獲得之效應係自殺死程度之基線量測效應增加至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、96、97、98、99、100、120、125、150、175、200、300、400或500%。在一些實施例中，利用增效劑所獲得之效應係獲得基線殺死率所需5-ALA之量降低至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、96、97、98或99%。

增效劑之量可大於、等於或小於正常或典型地單獨使用增效劑所開具之量。上限係單獨或與5-ALA組合經歷不可接受毒性之量。下限係獲得可量測增效效應所需之量，且可為典型劑量之1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、96、97、98、99、100、120、125、150、175或200%。例如但不限於，胺甲喋呤可在超音波治療之前24小時與72小時之間以約7.5 mg至10 mg之單一經口劑量投與；去氧羥四環素可以100 mg之劑量BID投與，以200 mg初始負載劑量開始，在超音波治療前2至4天開始；米諾四環素可以50至100 mg之劑量BID投與，在超音波治療前2至4天開始；且維生素D ₃可作為膽鈣化醇以10,000至100,000 IU/天之劑量在超音波治療之前投與2至4天。微氣泡

微氣泡(亦稱為微球體)係直徑約1至5 µm之充滿氣體之球體。其有時在醫學超音波檢查中用作對比劑，因為其迴聲性質有助於將充滿液體之血管與周圍組織區分開。參見例如P.A. Dijkmans等人， Eur J Cardiology(2004) 5:245-56。氣體通常係空氣、氮氣、六氟化硫或全氟碳，例如八氟丙烷。微氣泡之殼通常係白蛋白、半乳糖、脂質或聚合物。在超音波聲場中，微氣泡在低功率下進行線性振盪，且在較高功率下進行非線性振盪，此導致在高功率下破裂。微氣泡共振之頻率主要由核心中氣體之選擇及殼之機械性質決定。可使用兩種或以上不同類型微氣泡之混合物。在本揭示內容方法之實踐中，可使用微氣泡以較以其他方式獲得之聲功率低之聲功率引起空蝕作用(且因此靶細胞死亡)。在一些實施例中，將有效量之微氣泡提供給惡性組織。

有效量之微氣泡係足以使5-ALA及FUS對惡性組織之直接細胞毒性效應自殺死程度之基線量測增加至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、96、97、98、99、100、120、125、150、175、200、300、400或500%之數量。或者，有效量之微氣泡可表示為足以使5-ALA劑量及/或FUS劑量自基線量測降低至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、96、97、98或99%之數量。

微氣泡可藉由此項技術中已知之方法製備或可自商業來源獲得。適宜微氣泡包括(但不限於)增強之對比超音波微氣泡，例如Definity® perflutren脂質微氣泡(Lantheus Medical Imaging, N. Billerica, MA)、Levovist®脂質/半乳糖微球體(Schering)、Optison®微氣泡(GE Healthcare)及Lumason®微氣泡(Bracco Imaging (Monroe Township, NJ)。在一些實施例中，微氣泡係增強之對比超音波微氣泡。在一些實施例中，微氣泡包含六氟化硫或全氟碳。在一些實施例中，全氟碳係八氟丙烷或全氟己烷。在一些實施例中，微氣泡包含空氣或氮氣。在一些實施例中，微氣泡殼包含白蛋白。在一些實施例中，微氣泡係Definity® perflutren脂質微氣泡、Levovist®脂質/半乳糖微球體、Optison®微氣泡或Lumason®微氣泡。

微氣泡可與5-ALA及/或增效劑一起投與，此取決於微氣泡在受試者系統中之半衰期。一般而言，許多微氣泡劑在人類循環中具有極短半衰期，且因此通常在超音波治療之前不久投與。所投與之數量及投與模式類似於熟習此項技術者在投與微氣泡用於對比增強之超音波檢查之目的時所使用之數量及模式。所投與之數量將為用作或建議用作對比增強之超音波檢查劑之數量的至少5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、120、140、150、160、180、200、250、300、350或400%。所投與之數量將不大於用作或建議用作對比增強之超音波檢查劑之數量的500、450、400、350、300、250、200、150、100、90、80、75、70、60、50、45、40、35、30、25或20%。聚焦式超音波(FUS)

使用聚焦式超音波(FUS)裝置將惡性組織暴露於聚焦式超音波能量(「超音波治療」)。適宜裝置包括Exablate® 4000型號2型系統(Insightec, Dallas, TX)及諸如此類。2型具有專用1000-元件轉換器，其可在超音波模式(即，聚焦式超音波壓力波遞送模式)下操作，該超音波模式使用低持續時間負載循環以在低功率下產生「突發超音波」。當與微氣泡結合使用時，此突發超音波模式使裝置能夠在遠低於超音波誘導之空蝕作用之能量位準下誘導穩定空蝕作用。微氣泡之振盪引起有針對性的、暫時且可逆、但穩定的血腦屏障破壞。Exablate®裝置之標誌性特徵係能夠即時監測聲反饋，以確保安全且有效的BBB破壞。Exablate®裝置係磁共振引導之聚焦式超音波(MRgFUS)裝置，因此，其利用即時MR成像來評價及監測手術之安全性。

超音波頻率為至少約0.1 MHz、至少約0.2 MHz、至少約0.25 MHz、至少約0.3 MHz、至少約0.4 MHz、至少約0.45 MHz、至少約0.5 MHz、至少約0.55 MHz、至少約0.6 MHz、至少約0.65 MHz、至少約0.7 MHz、至少約0.75 MHz、至少約0.8 MHz、至少約0.85 MHz、至少約0.9 MHz、至少約0.95 MHz、至少約1 MHz、至少約1.1 MHz、至少約1.5 MHz、至少約2.0 MHz、至少約2.1 MHz、至少約2.2 MHz、至少約2.3 MHz、至少約2.4 MHz、至少約2.5 MHz、至少約2.75 MHz、至少約3.0 MHz、至少約3.5 MHz、至少約4.0 MHz、至少約4.5 MHz、至少約5.0 MHz、至少約6.0 MHz、至少約7.0 MHz、至少約8.0 MHz、至少約9.0 MHz或至少約10.0 MHz。超音波頻率不多於約20 MHz、不多於約15 MHz、不多於約10 MHz、不多於約9.0 MHz、不多於約8.0 MHz、不多於約7.0 MHz、不多於約6.0 MHz、不多於約5.0 MHz、不多於約4.0 MHz、不多於約3.0 MHz、不多於約2.8 MHz、不多於約2.6 MHz、不多於約2.5 MHz、不多於約2.4 MHz、不多於約2.3 MHz、不多於約2.2 MHz、不多於約2.1 MHz或不多於約2.0 MHz。

在超音波束聚焦處之聚焦式超音波強度為至少約1 W/cm ²、至少約1.5 W/cm ²、至少約2.0 W/cm ²、至少約2.5 W/cm ²、至少約3.0 W/cm ²、至少約3.5 W/cm ²、至少約4.0 W/cm ²、至少約4.5 W/cm ²、至少約5.0 W/cm ²、至少約6.0 W/cm ²、至少約7.0 W/cm ²、至少約8.0 W/cm ²、至少約9.0 W/cm ²、至少約10.0 W/cm ²、至少約15 W/cm ²、至少約20 W/cm ²、至少約25 W/cm ²、至少約30 W/cm ²、至少約35 W/cm ²、至少約40 W/cm ²、至少約45 W/cm ²、至少約50 W/cm ²、至少約60 W/cm ²、至少約70 W/cm ²、至少約75 W/cm ²、至少約80 W/cm ²、至少約90 W/cm ²、至少約100 W/cm ²、至少約120 W/cm ²、至少約125 W/cm ²、至少約130 W/cm ²、至少約140 W/cm ²、至少約145 W/cm ²、至少約150 W/cm ²、或至少約200 W/cm ²。在超音波束聚焦處之聚焦式超音波強度小於約200 W/cm ²、小於約150 W/cm ²、小於約125 W/cm ²、小於約100 W/cm ²、小於約98 W/cm ²、小於約95 W/cm ²、小於約92 W/cm ²、小於約90 W/cm ²、小於約89 W/cm ²、小於約88 W/cm ²、小於約87 W/cm ²、小於約86 W/cm ²、小於約85 W/cm ²、小於約84 W/cm ²、小於約83 W/cm ²、小於約82 W/cm ²、小於約81 W/cm ²、小於約80 W/cm ²、小於約75 W/cm ²、小於約70 W/cm ²、小於約68 W/cm ²、小於約67 W/cm ²、小於約65 W/cm ²、小於約66 W/cm ²、小於約64 W/cm ²、小於約63 W/cm ²、小於約62 W/cm ²、小於約61 W/cm ²、小於約60 W/cm ²、小於約58 W/cm ²、小於約55 W/cm ²、小於約54 W/cm ²、小於約53 W/cm ²、小於約52 W/cm ²、小於約51 W/cm ²、小於約50 W/cm ²、小於約45 W/cm ²、小於約40 W/cm ²、小於約35 W/cm ²或小於約30 W/cm ²。在一些實施例中，聚焦式超音波強度為空間峰值-時間平均強度(I _SPTA)。

在聲動力治療期間所施加之FUS能量通常小於使用FUS切除組織時之能量，且當在超音波治療之前投與微氣泡時可進一步減少。在一些實施例中，所施加之FUS能量為至少10、20、30、40、50、60、70、75、80、90、100、125、150、175、200、225、250、275、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、900、1000、1200、1400、1600、1800或2000焦耳(Joule)。在一些實施例中，所施加之FUS能量不大於5000、4000、3000、2500、2250、2000、1900、1800、1700、1600、1500、1400、1300、1250、1200、1150、1100、1050、1000、950、900、850、800、750、700、650、600、550、500、450、400、350、300或250 J。在一些實施例中，所施加之FUS能量介於10 J與2000 J之間。在一些實施例中，所施加之FUS能量介於20 J與1500 J之間。在一些實施例中，所施加之FUS能量介於50 J與1250 J之間。在一些實施例中，所施加之FUS能量介於100 J與1250 J之間。在一些實施例中，所施加之FUS能量介於250 J與1250 J之間。在一些實施例中，所施加之FUS能量介於500 J與1250 J之間。

超音波治療之持續時間可取決於個體、惡性組織之特定類型及階段、惡性組織之位置及量，及惡性組織吸收5-ALA及累積原紫質-IX之程度。在一些實施例中，惡性組織係在多個點，例如在腫瘤內之多個點，進行超音波治療。如本文所用，「點」係指FUS焦點及受FUS影響之點周圍之組織。藉由對分佈在整個惡性組織中之點進行超音波治療，可在整個腫瘤體積中達成更均勻及恆定之效應。此亦容許使用較低功率，其減少可能之溫度升高(溫度升高為對周圍正常組織之可能風險)。在一些實施例中，對惡性組織之個別點進行超音波治療，該等個別點一起將所有惡性組織暴露於FUS。在一些實施例中，該等點重疊。該等點可同時、個別地或分組進行超音波治療。舉例而言，在包括靶向16個點之治療中，所有16個點可同時進行超音波治療，或該等點可依序、或以隨機順序或分組(例如成對，或三聯，或其他大小之群組)進行超音波治療。在對群組進行超音波治療之情況下，該等群組可以物理分組，或分佈於非毗鄰區域。在一些實施例中，惡性組織係在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、15、20、25或30個個別點或在1至30個之任一值進行超音波治療。在一些實施例中，惡性組織係在不多於30、25、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11或10個個別點進行超音波治療。

在一些實施例中，超音波治療持續時間為至少約20秒、至少約30秒、至少約45秒、至少約1分鐘、至少約2分鐘、至少約3分鐘、至少約4分鐘、至少約5分鐘、至少約6分鐘、至少約7分鐘、至少約8分鐘、至少約9分鐘、至少約10分鐘、至少約15分鐘、至少約20分鐘、至少約30分鐘、至少約45分鐘、至少約60分鐘、至少約75分鐘、至少約90分鐘、至少約105分鐘、至少約120分鐘、至少約135分鐘、至少約150分鐘、至少約165分鐘、至少約180分鐘、至少約195分鐘、至少約210分鐘、至少約230分鐘、至少約245分鐘、至少約260分鐘、至少約275分鐘、至少約300分鐘、至少約330分鐘或至少約360分鐘。在一些實施例中，超音波持續時間少於約360分鐘、少於約330分鐘、少於約300分鐘、少於約290分鐘、少於約280分鐘、少於約270分鐘、少於約260分鐘、少於約250分鐘、少於約240分鐘、少於約230分鐘、少於約220分鐘、少於約210分鐘、少於約200分鐘、少於約195分鐘、少於約190分鐘、少於約185分鐘、少於約180分鐘、少於約170分鐘、少於約160分鐘、少於約150分鐘、少於約140分鐘、少於約130分鐘、少於約120分鐘、少於約110分鐘、少於約100分鐘、少於約90分鐘、少於約80分鐘、少於約70分鐘、少於約60分鐘、少於約50分鐘、少於約40分鐘、少於約30分鐘、少於約20分鐘或少於約10分鐘。

超音波治療可為連續或循環的。在循環超音波治療中，暴露於聚焦式超音波之時期(「超音波治療期」)與無超音波治療之休息期交叉。在一些實施例中，超音波治療包括至少一個休息期。在實施例中，超音波治療期及休息期各自獨立地為至少約5秒、至少約10秒、至少約15秒、至少約20秒、至少約25秒、至少約30秒、至少約35秒、至少約40秒、至少約45秒、至少約50秒、至少約55秒、至少約60秒、至少約65秒、至少約70秒、至少約75秒、至少約80秒、至少約85秒、至少約90秒、至少約95秒、至少約100秒、至少約105秒、至少約110秒、至少約115秒、至少約120秒、至少約125秒、至少約130秒、至少約140秒、至少約150秒、至少約160秒、至少約165秒、至少約170秒、至少約175秒或至少約180秒。在實施例中，超音波治療期及休息期各自獨立地少於約600秒、少於約500秒、少於約400秒、少於約300秒、少於約250秒、少於約240秒、少於約220秒、少於約200秒、少於約180秒、少於約170秒、少於約160秒、少於約150秒、少於約140秒、少於約130秒、少於約120秒、少於約110秒、少於約100秒、少於約95秒、少於約90秒、少於約85秒、少於約80秒、少於約75秒、少於約70秒、少於約65秒、少於約60秒、少於約55秒或少於約50秒。

在本揭示內容之方法中，惡性組織選擇性地受到破壞而不影響超音波焦點處存在之非惡性組織。在一些實施例中，少於約25%、少於約20%、少於約15%、少於約10%、少於約5%、少於約4%、少於約3%、少於約2%、少於約1%之超音波焦點處存在之非惡性組織受到損傷。在一些實施例中，約1%、約2%、約3%、約4%、約5%、約10%、約15%、約20%或約25%之超音波焦點處存在之非惡性組織受到損傷。組織損傷之量可使用熟習此項技術者已知之方法、例如使用MRI測定。在一些實施例中，惡性組織之溫度升高不多於15℃、不多於14℃、不多於13℃、不多於12℃、不多於11℃、不多於10℃、不多於9℃、不多於8℃、不多於7℃、不多於6℃、不多於5℃、不多於4℃、不多於3℃、不多於2℃或不多於1℃。

超音波可聚焦於惡性組織上，或可聚焦於包括惡性組織之較廣泛體積上。利用5-ALA治療使得惡性組織對FUS更敏感，使其可能破壞惡性組織而不會過度損傷焦點體積中所包括之非惡性組織。舉例而言，腫瘤及其周圍之體積可經超音波治療。另外，可超音波治療大腦之完整解剖區域，例如但不限於顳葉、頂葉、額葉、枕葉、丘腦、腦垂腺、腦橋、胼胝體、基底神經節、腦幹、整個腦半球、小腦幕上區域、小腦幕下區域及諸如此類。另外，可超音波治療一部分或整個大腦FLAIR區域(流體衰減反轉回復 – 經設計以去除來自大腦中之液體之信號的MRI技術)。本揭示內容之方法亦可與腫瘤之手術切除聯合，以例如治療所產生腫瘤腔以消除藉由切除術未去除之任何惡性細胞。

在一些實施例中，腫瘤之位置係使用磁共振成像(MRI)定位。在一些實施例中，腫瘤係使用X-射線成像定位。在一些實施例中，腫瘤經超音波治療。在一些實施例中，腫瘤及腫瘤周圍之體積經超音波治療。在一些實施例中，腫瘤及自腫瘤表面延伸0.2、0.5、1、2、3、4、5、6、7或8 cm之邊際經超音波治療。在一些實施例中，大腦之完整解剖區域經歷超音波治療。在一些實施例中，顳葉、頂葉、額葉、枕葉、丘腦、腦垂腺、腦橋、胼胝體、基底神經節、腦幹、整個腦半球、小腦幕上區域或小腦幕下區域經超音波治療。在一些實施例中，大腦FLAIR區域經超音波治療。在一些實施例中，兩個或以上解剖區域經超音波治療。在一些實施例中，腫瘤經切除，且腫瘤腔經超音波治療以消除殘餘惡性組織或細胞。在一些實施例中，腫瘤腔經超音波治療至0.2、0.5、1、2、3、4、5、6、7或8 cm之深度。

在一些實施例中，本揭示之方法(包括投與5-ALA及超音波治療惡性組織)係以以下治療間隔重複：至少約1天、至少約2天、至少約3天、至少約4天、至少約5天、至少約6天、至少約7天、至少約8天、至少約9天、至少約10天、至少約12天、至少約14天、至少約15天、至少約16天、至少約18天、至少約20天、至少約21天、至少約24天、至少約25天、至少約26天、至少約28天、至少約30天、至少約35天、至少約40天、至少約45天、至少約50天、至少約55天、至少約60天、至少約65天、至少約70天、至少約75天、至少約80天、至少約85天或至少約90天。在一些實施例中，治療重複間隔少於約120天、少於約110天、少於約100天、少於約90天、少於約80天、少於約70天、少於約60天、少於約50天、少於約40天、少於約30天、少於約20天、少於約14天、少於約10天、少於約7天、少於約6天、少於約5天、少於約4天、少於約3天或少於約2天。

本揭示內容之受試者係哺乳動物，其可為人類或非人類哺乳動物，例如伴侶動物(例如狗、貓、大鼠或諸如此類)或農場動物(例如，馬、驢、騾、山羊、綿羊、豬、或牛及諸如此類)。在一些實施例中，受試者係人類。

另一態樣係在受試者之惡性組織內選擇性誘導細胞凋亡之方法，其藉由以下實施：提供有效量之5-胺基乙醯丙酸至惡性組織，及使用聚焦式超音波裝置以約0.1 MHz至約3 MHz之頻率在約3 W/cm ²至約100 W/cm ²之超音波束聚焦強度下使用上文所闡釋之方法及參數對該組織進行超音波治療。劑型及系統

可發生由不為治療醫師者實施超音波治療之情形。為最小化風險並確保適當地實施治療，一個態樣係針對欲治療受試者安排聚焦式超音波裝置操作之劑型。在一些實施例中，5-ALA調配物提供於包含機器可讀標識符之容器中，其中標識符鑑別容器之內容物、調配物之來源、調配物之量、欲投與調配物之受試者、為該受試者開具之聚焦式超音波治療(例如，指定超音波頻率、功率、能量、持續時間或其組合)、鑑別碼或序列號或其組合。機器可讀標識符可經加密，以保存機密的患者資訊。在一些實施例中，容器足以含有有效量之5-胺基乙醯丙酸、有效量之增效劑及/或有效量之微氣泡。在一些實施例中，機器可讀標識符係條碼、QR碼或RFID裝置。在一些實施例中，聚焦式超音波裝置包括用於讀取機器可讀標識符之裝置。在一些實施例中，機器可讀標識符經加密。在一些實施例中，FUS裝置在不存在適當機器可讀標識符之情況下被鎖定。在一些實施例中，FUS裝置治療參數係經由機器可讀標識符程式化。特定實施例

在一些實施例中，提供檢測及治療受試者之低分級惡性組織之方法，該方法包含：a) 向該受試者投與有效量之5-胺基乙醯丙酸(5-ALA)或其醫藥上可接受之鹽或酯；b) 量測該受試者中組織之螢光；及c) 治療該低分級惡性組織；其中該低分級惡性組織中之螢光高於毗鄰組織中之螢光。

在一些實施例中，低分級惡性組織先前已分類為WHO I級或II級腫瘤。在一些實施例中，低分級惡性組織已變為侵襲性、進行性或復發性的。在一些實施例中，低分級惡性組織係腦、乳房、結腸、腎、肝、卵巢、胰臟、前列腺、直腸、胃或子宮之組織。在一些實施例中，低分級惡性組織係神經膠質瘤。在一些實施例中，神經膠質瘤包含寡樹突神經膠細胞瘤、瀰漫性星細胞瘤、視路神經膠質瘤、毛狀星細胞瘤、室管膜下巨細胞星狀瘤，或多形性黃色星細胞瘤。

在一些實施例中，量測包含經改良用於螢光成像之手術顯微鏡。在一些實施例中，量測包含量測在約610 nm至約720 nm下之螢光發射。

在一些實施例中，治療低分級惡性組織包含聲動力療法。

在一些實施例中，治療低分級惡性組織包含手術。

在一些實施例中，治療低分級惡性組織包含輻射。

在一些實施例中，5-胺基乙醯丙酸係藉由向受試者經口投與經口調配物或靜脈內投與靜脈內調配物提供至低分級惡性組織。在一些實施例中，5-胺基乙醯丙酸係藉由靜脈內投與提供。

在一些實施例中，受試者係人類。

在一些實施例中，5-ALA之有效量介於約1 mg/kg體重與100 mg/kg體重之間。在一些實施例中，5-ALA之有效量介於約10 mg/kg體重與75 mg/kg體重之間。

在一些實施例中，提供用於檢測受試者中低分級惡性組織之套組，套組包含有效量之5-胺基乙醯丙酸(5-ALA)或其醫藥上可接受之鹽或酯及使用說明書。

在一些實施例中，提供用於檢測受試者中低分級惡性組織之系統，該系統包含：a)有效量之5-胺基乙醯丙酸(5-ALA)或其醫藥上可接受之鹽或酯；及b) 螢光檢測裝置。在一些實施例中，低分級惡性組織先前已分類為WHO I級或II級腫瘤。在一些實施例中，低分級惡性組織已變為侵襲性、進行性或復發性的。在一些實施例中，螢光檢測裝置包含經改良用於螢光成像之手術顯微鏡。實例

給出以下製劑及實例以使熟習此項技術者更清楚地理解及實踐本發明。不應將其視為限制本發明範圍，而僅用於說明及代表本發明。實例1：WHO I級神經膠質瘤之檢測

圖1顯示在視路神經膠質瘤(毛狀星細胞瘤(WHO I級腫瘤))之手術切除期間獲得之螢光影像，該視路神經膠質瘤已進展且需要在一年內進行第二次切除。無需使用專門成像裝置便可看到粉紅色腫瘤螢光。

本文所給出一般方法之討論僅意欲用於說明目的。在閱讀本揭示內容後，其他替代方法及替代選擇對於熟習此項技術者將係顯而易見的，且將包括在本揭示內容之精神及範圍內。

在整個說明書中，引用各種專利、專利申請案及其他類型之出版物(例如，期刊文章、電子資料庫條目等)。本文引用之所有專利、專利申請案及其他出版物之揭示內容以整體引用的方式併入本文，其併入程度如同每一個別出版物或專利申請特定且個別地指示以引用方式併入一般。

不承認本文引用之任何參考文獻構成先前技術。對參考文獻之論述陳述其作者之主張，且發明人保留質疑所引用文件之準確性及相關性之權利。應清楚地理解，儘管本文提及許多資訊來源，包括科學期刊文章、專利文件及教科書；但此參考並不構成承認該等文件中之任一者形成此項技術中公知常識之一部分。

Claims

一種檢測及治療個體之低分級惡性組織之方法，該方法包含： a) 向該個體投與有效量之5-胺基乙醯丙酸(5-ALA)或其醫藥上可接受之鹽或酯； b) 量測該個體中組織之螢光；及 c) 治療該低分級惡性組織；其中該低分級惡性組織中之螢光高於毗鄰組織中之螢光。
如請求項 1之方法，其中該低分級惡性組織先前已分類為WHO I級或II級腫瘤。
如請求項 1至 2中任一項之方法，其中該低分級惡性組織已變為侵襲性、進行性或復發性的。
如請求項 1至 3中任一項之方法，其中該量測包含經改良用於螢光成像之手術顯微鏡。
如請求項 1至 4中任一項之方法，其中該量測包含量測在約610 nm至約720 nm之螢光發射。
如請求項 1至 5中任一項之方法，其中該低分級惡性組織係腦、乳房、結腸、腎、肝、卵巢、胰臟、前列腺、直腸、胃或子宮之組織。
如請求項 1至 5中任一項之方法，其中該低分級惡性組織係神經膠質瘤。
如請求項 7之方法，其中該神經膠質瘤包含寡樹突神經膠細胞瘤、瀰漫性星細胞瘤、視路神經膠質瘤、毛狀星細胞瘤、室管膜下巨細胞星狀瘤，或多形性黃色星細胞瘤。
如請求項 1至 8中任一項之方法，其中該治療該低分級惡性組織包含聲動力(sonodynamic)療法。
如請求項 1至 8中任一項之方法，其中該治療該低分級惡性組織包含手術。
如請求項 1至 8中任一項之方法，其中該治療該低分級惡性組織包含輻射。
如請求項 1至 11中任一項之方法，其中該5-胺基乙醯丙酸係藉由向該個體經口投與經口調配物或靜脈內投與靜脈內調配物提供至該低分級惡性組織。
如請求項 1至 12中任一項之方法，其中該5-胺基乙醯丙酸係藉由靜脈內投與提供。
如請求項 1至 13中任一項之方法，其中該個體係人類。
如請求項 1至 14中任一項之方法，其中該5-ALA之有效量係介於約1 mg/kg體重與100 mg/kg體重之間。
如請求項 1至 15中任一項之方法，其中該5-ALA之有效量係介於約10 mg/kg體重與75 mg/kg體重之間。
一種用於檢測個體中低分級惡性組織之套組，該套組包含有效量之5-胺基乙醯丙酸(5-ALA)或其醫藥上可接受之鹽或酯及使用說明書。
一種用於檢測個體中低分級惡性組織之系統，該系統包含： a) 有效量之5-胺基乙醯丙酸(5-ALA)或其醫藥上可接受之鹽或酯；及 b) 螢光檢測裝置。
如請求項 18之系統，其中該低分級惡性組織先前已分類為WHO I級或II級腫瘤。
如請求項 18或 19之系統，其中該低分級惡性組織已變為侵襲性、進行性或復發性的。
如請求項 18至2 0中任一項之系統，其中該螢光檢測裝置包含經改良用於螢光成像之手術顯微鏡。