TW202206463A - Ｉｌｔ結合劑及其使用方法 - Google Patents
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Abstract
本揭示案提供特異性結合ILT2、ILT4或ILT2及ILT4二者之結合劑，例如抗體，以及包含該等結合劑之組合物，及其使用方法。本揭示案亦提供編碼該等結合劑之相關多核苷酸及載體以及包含該等結合劑之細胞。
Description
本揭示案概言之係關於結合免疫球蛋白樣轉錄物(ILT)蛋白之劑，具體而言結合至人類ILT2、人類ILT4以及人類ILT2及人類ILT4二者之抗體，以及包含ILT結合劑之組合物及使用結合劑及組合物之方法。
免疫療法之基礎係免疫系統(包括先天性免疫反應及適應性免疫反應二者)之操縱及/或調節。免疫療法之一般目的係藉由控制對「外源劑」(例如病原體或腫瘤細胞)之免疫反應來治療疾病。然而，在一些情況下，免疫療法用於治療自體免疫疾病，該等自體免疫疾病可由對通常存在於體內之蛋白質、分子及/或組織之異常免疫反應引起。免疫療法可包括誘導或增強特定免疫反應或者抑制或減少特定免疫反應之方法。
免疫系統係由眾多種細胞類型構成之高度複雜之系統，包括(但不限於) T細胞、T細胞亞組、B細胞、自然殺手細胞、抗原呈遞細胞、樹突細胞、單核球及巨噬細胞。該等細胞具有用於控制其相互作用及反應之複雜且精細之系統。細胞利用活化及抑制機制以及反饋迴路來約束反應且不允許不受控之免疫反應(例如自體免疫疾病或細胞介素風暴)之負面結果。
免疫系統之一些抑制機制使用來自白血球Ig樣受體(LILR)家族之蛋白質。白血球Ig樣受體子家族B (LILRB)係具有細胞外Ig樣結構域及細胞質基於酪胺酸之免疫受體抑制基元(ITIM)之一組I型跨膜糖蛋白。此組含有ITIM之受體包括5個成員：LILRB1 (亦稱為CD85J、LIR1、ILT2)、LILRB2 (亦稱為CD85D、LIR2、ILT4)、LILRB3 (亦稱為CD85A、LIR3、ILT5)、LILRB4 (亦稱為CD85K、LIR5、ILT3)及LILRB5 (亦稱為CD85C、LIR8)。該等LILRB (ILT)中之許多之生物功能及臨床意義仍在研究中。亦存在LILR子家族A (LILRA)，其係具有細胞外Ig樣結構域及細胞質基於酪胺酸之免疫受體活化基元(ITAM)之一組I型跨膜糖蛋白。此組含有ITAM之受體包括6個成員：LILRA1 (亦稱為CD85I、LIR6)、LILRA2 (亦稱為CD85H、LIR7、ILT1)、LILRA3 (亦稱為CD85E、LIR4、ILT6、單核球抑制受體HM43/31)、LILRA4 (亦稱為CD85G、ILT7)、LILRA5 (亦稱為CD85F、LIR9、ILT11)及LILRA6 (亦稱為ILT8)。LILR家族之抑制及活化蛋白似乎協同起調節免疫穩態之作用。
癌症免疫監督之概念係基於以下理論：免疫系統可識別腫瘤細胞，發動免疫反應，並阻抑腫瘤之發育及/或生長。然而，應清楚，許多癌性細胞/腫瘤細胞已形成機制及/或劫持正常的抑制機制來逃避免疫系統，此可允許腫瘤細胞不受抑制地生長。癌症/腫瘤免疫療法(腫瘤免疫劑)集中於開發新及新穎的劑，該等劑可活化及/或加強免疫系統以達成對癌細胞/腫瘤細胞之更有效攻擊，從而增加癌細胞/腫瘤細胞之殺傷及/或對癌症/腫瘤生長之抑制。
本揭示案提供結合免疫球蛋白樣轉錄物2 (ILT2)及/或免疫球蛋白樣轉錄物4 (ILT4)之劑。儘管在出版物中以諸多名稱提及LILRB家族成員，但在本文中將使用術語「ILT2」 (LILRB1)及「ILT4」 (LILRB2)。劑包括(但不限於)多肽，例如特異性結合ILT2、ILT4或ILT2及ILT4二者之抗體。通常，劑(在本文中稱為「ILT結合劑」)涵蓋ILT2結合劑、ILT4結合劑及結合至ILT2及ILT4二者之劑(稱為「ILT2/ILT4結合劑」)。在一些實施例中，ILT結合劑抑制ILT2及/或ILT4活性。在一些實施例中，ILT結合劑增強免疫反應。在一些實施例中，ILT結合劑逆轉免疫細胞活性之阻抑。本揭示案提供使用ILT結合劑例如來治療癌症(例如晚期實體腫瘤)之方法。在一些實施例中，ILT結合劑用於組合療法中例如來治療癌症。在一些實施例中，ILT結合劑係與至少一種其他治療劑組合使用例如來治療癌症。
在一些情況下，本文所述之ILT結合劑具有呈任一組合或排列之以下性質中之一或多者(例如1者、2者、3者、4者、5者、6者、7者、8者、9者、10者、11者或更多者)：
(1) 結合人類ILT2；
(2) 結合人類ILT4；
(3) 結合恆河猴ILT2；
(4) 結合食蟹猴ILT2；
(5) 不結合ILT3、ILT5及LILRB5；
(6) 不結合LILRA2、LILRA4、LILRA5及LILRA6；
(7) 係ILT2拮抗劑；
(8) 係ILT4拮抗劑，
(9) 抑制ILT2活性；
(10) 抑制ILT4活性；
(11) 抑制表現ILT2之細胞中之ILT2信號傳導；
(12) 抑制表現ILT4之細胞中之ILT4信號傳導；
(13) 抑制ILT2與MHC I分子之結合；
(14) 抑制ILT4與MHC I分子之結合；
(15) 抑制ILT2誘導之骨髓細胞阻抑；
(16) 抑制ILT4誘導之骨髓細胞阻抑；
(17) 抑制ILT2誘導之骨髓細胞活性阻抑；
(18) 抑制ILT4誘導之骨髓細胞活性阻抑；
(19) 恢復骨髓細胞中之FcR活化；
(20) 增強NK細胞活性；
(21) 增強細胞毒性T淋巴球(CTL)活性；
(22) 增強巨噬細胞吞噬作用；及
(23) 抑制MDSC介導之免疫細胞阻抑。
本揭示案亦提供組合物，其包含本文所述之ILT結合劑。在一些實施例中，本揭示案提供醫藥組合物，其包含ILT結合劑及醫藥學上可接受之載劑。提供編碼ILT結合劑之多核苷酸及/或載體。亦提供包含本文所述之多核苷酸及/或載體之細胞。提供包含或產生本文所述之ILT結合劑之細胞。亦提供製造本文所述之ILT結合劑之方法。
在一個態樣中，本揭示案提供結合ILT2之ILT結合劑。在一些實施例中，ILT結合劑結合人類ILT2。在一些實施例中，ILT結合劑結合恆河猴(「恆河猴(rhesus)」) ILT2。在一些實施例中，ILT結合劑結合食蟹猴(「食蟹猴(cyno)」) ILT2。在一些實施例中，ILT結合劑結合人類ILT2及恆河猴ILT2。在一些實施例中，ILT結合劑結合人類ILT2及食蟹猴ILT2。在一些實施例中，ILT結合劑結合人類ILT2、恆河猴ILT2及食蟹猴ILT2。在一些實施例中，ILT結合劑結合SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6及/或SEQ ID NO:7。在一些實施例中，ILT結合劑結合SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20及/或SEQ ID NO:21。在一些實施例中，ILT結合劑結合SEQ ID NO:166、SEQ ID NO:167、SEQ ID NO:168、SEQ ID NO:169、SEQ ID NO:170、SEQ ID NO:171及/或SEQ ID NO:172。在一些實施例中，ILT結合劑係抗體。在一些實施例中，ILT結合劑係抗體片段。
在一些實施例中，ILT結合劑在ILT2之細胞外結構域內結合。在一些實施例中，ILT結合劑結合SEQ ID NO:3。在一些實施例中，ILT結合劑在SEQ ID NO:1之胺基酸24-461內結合。在一些實施例中，ILT結合劑在SEQ ID NO:1之胺基酸27-115內結合。在一些實施例中，ILT結合劑在SEQ ID NO:1之胺基酸116-221內結合。在一些實施例中，ILT結合劑在SEQ ID NO:1之胺基酸222-312內結合。在一些實施例中，ILT結合劑在SEQ ID NO:1之胺基酸313-409內結合。在一些實施例中，ILT結合劑在SEQ ID NO:1之胺基酸27-221內結合。在一些實施例中，ILT結合劑在SEQ ID NO:1之胺基酸116-312內結合。在一些實施例中，ILT結合劑在SEQ ID NO:1之胺基酸222-409內結合。在一些實施例中，ILT結合劑結合ILT2之細胞外結構域內之構象抗原決定基。在一些實施例中，ILT結合劑結合ILT2之一個Ig樣C2型結構域(例如D1、D2、D3或D4)內之構象抗原決定基。在一些實施例中，ILT結合劑結合ILT2之兩個或更多個Ig樣C2型結構域(D1、D2、D3及/或D4)內之構象抗原決定基。在一些實施例中，ILT結合劑結合ILT2之D4-幹區內之構象抗原決定基。
在另一態樣中，本揭示案提供結合ILT4之ILT結合劑。在一些實施例中，ILT結合劑結合人類ILT4。在一些實施例中，ILT結合劑結合SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13及/或SEQ ID NO:14。在一些實施例中，ILT結合劑係抗體。在一些實施例中，ILT結合劑係抗體片段。
在一些實施例中，ILT結合劑在ILT4之細胞外結構域內結合。在一些實施例中，劑結合SEQ ID NO:10。在一些實施例中，ILT結合劑在SEQ ID NO:8之胺基酸22-461內結合。在一些實施例中，ILT結合劑在SEQ ID NO:8之胺基酸27-110內結合。在一些實施例中，ILT結合劑在SEQ ID NO:8之胺基酸111-229內結合。在一些實施例中，ILT結合劑在SEQ ID NO:8之胺基酸230-318內結合。在一些實施例中，ILT結合劑在SEQ ID NO:8之胺基酸330-419內結合。在一些實施例中，ILT結合劑在SEQ ID NO:8之胺基酸27-229內結合。在一些實施例中，ILT結合劑在SEQ ID NO:8之胺基酸111-318內結合。在一些實施例中，ILT結合劑在SEQ ID NO:8之胺基酸230-419內結合。在一些實施例中，ILT結合劑結合ILT4之細胞外結構域內之構象抗原決定基。在一些實施例中，ILT結合劑結合ILT4之一個Ig樣C2型結構域(例如D1、D2、D3或D4)內之構象抗原決定基。在一些實施例中，ILT結合劑結合ILT4之兩個或更多個Ig樣C2型結構域(D1、D2、D3及/或D4)內之構象抗原決定基。在一些實施例中，ILT結合劑結合ILT4之D4-幹區內之構象抗原決定基。
在一個態樣中，本揭示案提供ILT結合劑，其結合人類ILT2、人類ILT4或人類ILT2及ILT4二者且具有以下性質中之至少一或多者(例如1者、2者、3者、4者、5者、6者、7者、8者、9者、10者、11者、12者、13者、14者、15者、16者、17者、18者或19者)：(1)結合恆河猴ILT2；(2)結合食蟹猴ILT2；(3)不結合ILT3、ILT5及LILRB5；(4)不結合LILRA2、LILRA4、LILRA5及LILRA6；(5)係ILT2拮抗劑；(6)係ILT4拮抗劑，(7)抑制ILT2活性；(8)抑制ILT4活性；(9)抑制表現ILT2之細胞中之ILT2信號傳導；(10)抑制表現ILT4之細胞中之ILT4信號傳導；(11)抑制ILT2與一或多個MHC I分子之結合；(12)抑制ILT4與一或多個MHC I分子之結合；(13)抑制ILT2誘導之骨髓細胞阻抑；(14)抑制ILT4誘導之骨髓細胞阻抑；(15)抑制ILT2誘導之骨髓細胞活性阻抑；(16)抑制ILT4誘導之骨髓細胞活性阻抑；(17)恢復骨髓細胞中之FcR活化；(18)增強NK細胞活性；及/或(19)增強CTL活性。在一些實施例中，骨髓細胞係單核球。在一些實施例中，骨髓細胞係巨噬細胞。在一些實施例中，骨髓細胞係樹突細胞。在一些實施例中，骨髓細胞係耐受原性樹突細胞。在一些實施例中，骨髓細胞係抗原呈遞細胞(APC)。在一些實施例中，MHC I分子係HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-E及/或HLA-G。
在一個態樣中，本揭示案提供特異性結合人類ILT2之劑。在一些實施例中，本揭示案提供ILT2結合劑，其中結合劑包含：(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GFSLTNYGVS (SEQ ID NO:22)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列IIWGDGSTNYHSALIS (SEQ ID NO:23)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列PNWDTYAMDF (SEQ ID NO:24)之重鏈可變區CDR3，及/或(b)輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASQDISNFLN (SEQ ID NO:25)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列CTSKLHS (SEQ ID NO:26)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQGNTLPPT (SEQ ID NO:27)之輕鏈可變區CDR3。本揭示案亦提供ILT2結合劑，其包含表1中所提供之任一CDR定義之六個CDR。
在一些實施例中，ILT2結合劑包含：(a)與SEQ ID NO:125具有至少80%序列一致性之重鏈可變區；及/或(b)與SEQ ID NO:126具有至少80%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2結合劑包含與SEQ ID NO:125具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之重鏈可變區，及/或與SEQ ID NO:126具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2結合劑包含SEQ ID NO:125之重鏈可變區及/或SEQ ID NO:126之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2結合劑包含SEQ ID NO:125之重鏈可變區及SEQ ID NO:126之輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT2結合劑包含來自SEQ ID NO:125之胺基酸序列之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及來自SEQ ID NO:126之胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT2結合劑包含重鏈可變區，其包含來自SEQ ID NO:125之胺基酸序列之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3；及輕鏈可變區，其包含來自SEQ ID NO:126之胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在一些實施例中，ILT4結合劑包含(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYSFTGYYMH (SEQ ID NO:38)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列RVYPNNGDTSYNQKFKV (SEQ ID NO:39)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列GATVVESLFAY (SEQ ID NO:40)之重鏈可變區CDR3，及/或(b)輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDNYGNNFLH (SEQ ID NO:41)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列RTSNLES (SEQ ID NO:42)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQSNEDPYT (SEQ ID NO:43)之輕鏈可變區CDR3。本揭示案亦提供ILT2結合劑，其包含表2中所提供之任一CDR定義之六個CDR。
在一些實施例中，ILT4結合劑包含：(a)與SEQ ID NO:127具有至少80%一致性之重鏈可變區及/或(b)與SEQ ID NO:128具有至少80%一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:127具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之重鏈可變區，及/或與SEQ ID NO:128具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT4結合劑包含SEQ ID NO:127之重鏈可變區及/或SEQ ID NO:128之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT4結合劑包含SEQ ID NO:127之重鏈可變區及SEQ ID NO:128之輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT4結合劑包含來自SEQ ID NO:127之胺基酸序列之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3及/或來自SEQ ID NO:128之胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT4結合劑包含重鏈可變區，其包含來自SEQ ID NO:127之胺基酸序列之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3；及/或輕鏈可變區，其包含來自SEQ ID NO:128之胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在一些實施例中，ILT4結合劑包含(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYTFTNYGMN (SEQ ID NO:54)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列WINTYIGEPIYADDFKG (SEQ ID NO:55)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列RSDYDGYAMDY (SEQ ID NO:56)之重鏈可變區CDR3，及/或(b)輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列KSSQSLLYSGNQKNYLA (SEQ ID NO:57)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列WASTRES (SEQ ID NO:58)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQHDSYPT (SEQ ID NO:59)之輕鏈可變區CDR3。本揭示案亦提供ILT2結合劑，其包含表3中所提供之任一CDR定義之六個CDR。
在一些實施例中，ILT4結合劑包含：(a)與SEQ ID NO:129具有至少80%一致性之重鏈可變區及/或(b)與SEQ ID NO:130具有至少80%一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:129具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之重鏈可變區，及/或與SEQ ID NO:130具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT4結合劑包含SEQ ID NO:129之重鏈可變區及/或SEQ ID NO:130之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT4結合劑包含SEQ ID NO:129之重鏈可變區及SEQ ID NO:130之輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT4結合劑包含來自SEQ ID NO:129之胺基酸序列之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3及/或來自SEQ ID NO:130之胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT4結合劑包含重鏈可變區，其包含來自SEQ ID NO:129之胺基酸序列之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3；及/或輕鏈可變區，其包含來自SEQ ID NO:130之胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYTFTDYYMN (SEQ ID NO:70)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列DFNPNNGGTTYNQKFEG (SEQ ID NO:71)或DFNPNNAGTTYNQKFEG (SEQ ID NO:118)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列GRFYYGSLYSFDY (SEQ ID NO:72)之重鏈可變區CDR3，及/或(b)輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASGNIHNYLA (SEQ ID NO:73)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NAKTLAD (SEQ ID NO:74)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QHFWTSIT (SEQ ID NO:75)之輕鏈可變區CDR3。本揭示案亦提供ILT2/ILT4結合劑，其包含表4A及表4B中所提供之任一CDR定義之六個CDR。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含：(a)與SEQ ID NO:131具有至少80%一致性之重鏈可變區及/或(b)與SEQ ID NO:132具有至少80%一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:131具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之重鏈可變區，及/或與SEQ ID NO:132具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含SEQ ID NO:131之重鏈可變區及/或SEQ ID NO:132之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含SEQ ID NO:131之重鏈可變區及SEQ ID NO:132之輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含：(a)與SEQ ID NO:133具有至少80%一致性之重鏈可變區及/或(b)與SEQ ID NO:134具有至少80%一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:133具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之重鏈可變區，及/或與SEQ ID NO:134具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含SEQ ID NO:133之重鏈可變區及/或SEQ ID NO:134之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含SEQ ID NO:133之重鏈可變區及SEQ ID NO:134之輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含來自SEQ ID NO:131之胺基酸序列之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3及/或來自SEQ ID NO:132之胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含重鏈可變區，其包含來自SEQ ID NO:131之胺基酸序列之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3；及/或輕鏈可變區，其包含來自SEQ ID NO:132之胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含來自SEQ ID NO:133之胺基酸序列之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3及/或來自SEQ ID NO:134之胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含重鏈可變區，其包含來自SEQ ID NO:133之胺基酸序列之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3；及/或輕鏈可變區，其包含來自SEQ ID NO:134之胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GFTFNTYAMH (SEQ ID NO:86)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列RIRSKSSNYATYYADSVKD (SEQ ID NO:87)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列DGIYYYGTMYYYAMDY (SEQ ID NO:88)之重鏈可變區CDR3，及/或(b)輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3。本揭示案亦提供ILT2/ILT4結合劑，其包含表5中所提供之任一CDR定義之六個CDR。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含：(a)與SEQ ID NO:135具有至少80%一致性之重鏈可變區及/或(b)與SEQ ID NO:136具有至少80%一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:135具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之重鏈可變區，及/或與SEQ ID NO:136具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含SEQ ID NO:135之重鏈可變區及/或SEQ ID NO:136之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含SEQ ID NO:135之重鏈可變區及SEQ ID NO:136之輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含來自SEQ ID NO:135之胺基酸序列之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3及/或來自SEQ ID NO:136之胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含重鏈可變區，其包含來自SEQ ID NO:135之胺基酸序列之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3；及/或輕鏈可變區，其包含來自SEQ ID NO:136之胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GFTFNTYAMH (SEQ ID NO:86)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列RIRSKSSNYATYYADSVKD (SEQ ID NO:87)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列DGIYYYDTMYYYAMDY (SEQ ID NO:102)之重鏈可變區CDR3，及/或(b)輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFIY (SEQ ID NO:103)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3。本揭示案亦提供ILT2/ILT4結合劑，其包含表6A及表6B中所提供之任一CDR定義之六個CDR。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含：(a)與SEQ ID NO:137具有至少80%一致性之重鏈可變區及/或(b)與SEQ ID NO:138具有至少80%一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:137具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之重鏈可變區，及/或與SEQ ID NO:138具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含SEQ ID NO:137之重鏈可變區及/或SEQ ID NO:138之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含SEQ ID NO:137之重鏈可變區及SEQ ID NO:138之輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含：(a)與SEQ ID NO:139具有至少80%一致性之重鏈可變區及/或(b)與SEQ ID NO:140具有至少80%一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:139具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之重鏈可變區，及/或與SEQ ID NO:140具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含SEQ ID NO:139之重鏈可變區及/或SEQ ID NO:140之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含SEQ ID NO:139之重鏈可變區及SEQ ID NO:140之輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含來自SEQ ID NO:137之胺基酸序列之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3及/或來自SEQ ID NO:138之胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含重鏈可變區，其包含來自SEQ ID NO:137之胺基酸序列之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3；及/或輕鏈可變區，其包含來自SEQ ID NO:138之胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含來自SEQ ID NO:139之胺基酸序列之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3及/或來自SEQ ID NO:140之胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含重鏈可變區，其包含來自SEQ ID NO:139之胺基酸序列之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3；及/或輕鏈可變區，其包含來自SEQ ID NO:140之胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYTFTDYYMN (SEQ ID NO:70)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NVNPNNGGTSYNQKFKG (SEQ ID NO:106)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列REIYFYGTIYYYAMDY (SEQ ID NO:107)之重鏈可變區CDR3，及/或(b)輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3。本揭示案亦提供ILT2/ILT4結合劑，其包含表7中所提供之任一CDR定義之六個CDR。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含：(a)與SEQ ID NO:141具有至少80%一致性之重鏈可變區及/或(b)與SEQ ID NO:142具有至少80%一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:141具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之重鏈可變區，及/或與SEQ ID NO:142具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含SEQ ID NO:141之重鏈可變區及/或SEQ ID NO:142之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含SEQ ID NO:141之重鏈可變區及SEQ ID NO:142之輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含來自SEQ ID NO:141之胺基酸序列之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3及/或來自SEQ ID NO:142之胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含重鏈可變區，其包含來自SEQ ID NO:141之胺基酸序列之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3；及/或輕鏈可變區，其包含來自SEQ ID NO:142之胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYTFTDYYIN (SEQ ID NO:111)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NVNPNDGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO:112)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列REIYFYGTIYYYAMDY (SEQ ID NO:107)之重鏈可變區CDR3，及/或(b)輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3。本揭示案亦提供ILT2/ILT4結合劑，其包含表8A及表8B中所提供之任一CDR定義之六個CDR。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含：(a)與SEQ ID NO:143具有至少80%一致性之重鏈可變區及/或(b)與SEQ ID NO:142具有至少80%一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:143具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之重鏈可變區，及/或與SEQ ID NO:142具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含SEQ ID NO:143之重鏈可變區及/或SEQ ID NO:142之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含SEQ ID NO:143之重鏈可變區及SEQ ID NO:142之輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含：(a)與SEQ ID NO:144具有至少80%一致性之重鏈可變區及/或(b)與SEQ ID NO:145具有至少80%一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:144具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之重鏈可變區，及/或與SEQ ID NO:145具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含SEQ ID NO:144之重鏈可變區及/或SEQ ID NO:145之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含SEQ ID NO:144之重鏈可變區及SEQ ID NO:145之輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含來自SEQ ID NO:143之胺基酸序列之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3及/或來自SEQ ID NO:142之胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含重鏈可變區，其包含來自SEQ ID NO:143之胺基酸序列之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3；及/或輕鏈可變區，其包含來自SEQ ID NO:142之胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含來自SEQ ID NO:144之胺基酸序列之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3及/或來自SEQ ID NO:145之胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含重鏈可變區，其包含來自SEQ ID NO:144之胺基酸序列之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3；及/或輕鏈可變區，其包含來自SEQ ID NO:145之胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在本揭示案之另一態樣中，本文提供與本文所述之任一ILT結合劑競爭結合至ILT2、ILT4或ILT2/ILT4之劑。在一些實施例中，該劑與本文所述之任一ILT結合劑競爭結合至人類ILT2及人類ILT4二者。在一些實施例中，該劑與本文所述之任一ILT結合劑競爭結合至人類ILT2。在一些實施例中，該劑與本文所述之任一ILT結合劑競爭結合至人類ILT4。在一些實施例中，該劑係抗體。在一些實施例中，該劑係抗體片段。
在上述態樣及實施例以及本文所述之其他態樣及實施例中每一者之一些實施例中，ILT結合劑係抗體。在一些實施例中，抗體係重組抗體。在一些實施例中，抗體係人類化抗體。在一些實施例中，抗體係人類抗體。在一些實施例中，抗體係嵌合抗體。在一些實施例中，抗體係全抗體或完整抗體。在一些實施例中，抗體係雙特異性抗體或多特異性抗體。在一些實施例中，抗體係包含至少一個抗原結合位點之抗體片段。在一些實施例中，抗體係Fab、Fab′、F(ab′)2
、Fv、scFv、(scFv)2
、單鏈抗體、雙可變區抗體、單可變區抗體、線性抗體、雙體抗體(diabody)、奈米抗體或V區抗體。在一些實施例中，抗體係IgG抗體。在一些實施例中，抗體係IgG1抗體、IgG2抗體、IgG3抗體或IgG4抗體。在一些實施例中，抗體各自包含κ輕鏈。在一些實施例中，抗體各自包含λ輕鏈。在一些情況下，抗體各自包含人類IgG1恆定區。在一些情況下，抗體各自包含人類κ輕鏈恆定區。在一些情況下，抗體各自包含人類IgG1恆定區及人類κ輕鏈恆定區。在某些情況下，人類IgG1恆定區包含一或多個降低或消除Fc效應功能之突變。在某些情況下，人類IgG1恆定區包含降低效應功能之N297G突變。
在上述態樣及實施例以及本文所述之其他態樣及實施例中每一者之一些實施例中，ILT結合劑各自連接(直接或間接)至半衰期延長部分。
在上述態樣及實施例以及本文所述之其他態樣及實施例中每一者之一些實施例中，本文所述之ILT結合劑係ILT2之拮抗劑。在一些實施例中，ILT結合劑抑制ILT2活性。在一些實施例中，ILT結合劑係拮抗性抗體。在一些實施例中，ILT結合劑係抑制ILT2誘導之免疫細胞阻抑之抗體。在一些實施例中，ILT結合劑係抑制ILT2誘導之骨髓細胞阻抑之抗體。
在上述態樣及實施例以及本文所述之其他態樣及實施例中每一者之一些實施例中，本文所述之ILT結合劑係ILT4之拮抗劑。在一些實施例中，ILT結合劑抑制ILT4活性。在一些實施例中，ILT結合劑係拮抗性抗體。在一些實施例中，ILT結合劑係抑制ILT4誘導之免疫細胞阻抑之抗體。在一些實施例中，ILT結合劑係抑制ILT4誘導之骨髓細胞阻抑之抗體。
在上述態樣及實施例以及本文所述之其他態樣及實施例中每一者之一些實施例中，本文所述之ILT結合劑係人類ILT2及ILT4之拮抗劑。在一些實施例中，ILT結合劑抑制ILT2活性及ILT4活性。在一些實施例中，ILT結合劑係拮抗性抗體。在一些實施例中，ILT結合劑係抑制ILT2誘導及ILT4誘導之免疫細胞阻抑之抗體。在一些實施例中，ILT結合劑係抑制ILT2誘導及ILT4誘導之骨髓細胞阻抑之抗體。
在一些實施例中，ILT結合劑係再活化耐受原性樹突細胞之抗體。在一些實施例中，ILT結合劑係抑制骨髓源性阻抑細胞(MDSC)之活性之抗體。在一些實施例中，ILT結合劑係增強細胞溶解T細胞淋巴球(CTL)活性之抗體。在一些實施例中，ILT結合劑係增強CD8+ T細胞之細胞溶解活性之抗體。在一些實施例中，ILT結合劑係增強自然殺手(NK)細胞活性之抗體。在一些實施例中，ILT結合劑係增強巨噬細胞吞噬作用之抗體。在一些實施例中，ILT結合劑去阻抑或活化骨髓細胞中之Fc受體信號傳導。在一些實施例中，ILT結合劑與免疫檢查點抑制劑協同作用。
在另一態樣中，本揭示案提供包含本文所述之ILT結合劑之組合物。在一些實施例中，組合物包含本文所述之抗ILT抗體。在一些實施例中，組合物包含本文所述之重組抗ILT抗體。在一些實施例中，組合物包含抗ILT2抗體27F9。在一些實施例中，組合物包含抗ILT4抗體47C8或抗體48A5。在一些實施例中，組合物包含選自由以下組成之群之抗ILT2/ILT4抗體：47H6、Hz47H6.v2、51A1、64A12、Hz64A12、73C4、73D1及Hz73D1.v1。
在一些情況下，提供醫藥組合物，其包含(a)用於抑制ILT2及/或ILT4與I類MHC (例如在腫瘤細胞上)之間之相互作用之劑(means)；及(b)醫藥學上可接受之載劑。在一些實施例中，用於抑制ILT2及/或ILT4與I類MHC之間之相互作用之劑包含抗體，該抗體包含含有VH-CDR1、VH-CDR2及VH-CDR3之重鏈可變區以及含有VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3之輕鏈可變區，該等CDR來自27F9、47C8、48A5、47H6、Hz47H6.v2、51A1、64A12、Hz64A12、73C4、73D1及Hz73D1.v1中之任一者。
在上述態樣以及本文別處所述之其他態樣及/或實施例中每一者之一些實施例中，ILT結合劑係經分離的。在一些實施例中，ILT結合劑係實質上純的。
在另一態樣中，本揭示案提供多核苷酸，其包含編碼本文所述之ILT結合劑之多核苷酸。在一些實施例中，多核苷酸編碼本文所述之抗ILT2抗體。在一些實施例中，多核苷酸編碼本文所述之抗ILT4抗體。在一些實施例中，多核苷酸編碼本文所述之抗ILT2/ILT4抗體。在一些實施例中，多核苷酸係經分離的。在一些實施例中，載體包含編碼本文所述之ILT結合劑之多核苷酸。在一些實施例中，經分離細胞包含編碼本文所述之ILT結合劑之多核苷酸。在一些實施例中，經分離細胞包含含有編碼本文所述之ILT結合劑之多核苷酸之載體。在一些實施例中，細胞包含本文所述之ILT結合劑。在一些實施例中，細胞產生本文所述之ILT結合劑。在一些實施例中，細胞產生本文所述之抗ILT抗體。在一些實施例中，細胞係單株細胞株。在一些實施例中，細胞係雜交瘤。
在另一態樣中，本揭示案提供使用本文所述之ILT結合劑之方法。在一些實施例中，該等方法包括使用包含本文所述之ILT2結合劑之組合物。在一些實施例中，該等方法包括使用包含本文所述之ILT4結合劑之組合物。在一些實施例中，該等方法包括使用包含本文所述之ILT2/ILT4結合劑之組合物。在一些實施例中，該等方法包括使用包含本文所述之ILT2結合劑之醫藥組合物。在一些實施例中，該等方法包括使用包含本文所述之ILT4結合劑之醫藥組合物。在一些實施例中，該等方法包括使用包含本文所述之ILT2/ILT4結合劑之醫藥組合物。
在一些實施例中，提供破壞、抑制或阻斷ILT2及/或ILT4與配位體及/或結合伴侶之結合之方法。在一些實施例中，提供破壞、抑制或阻斷ILT2及/或ILT4與一或多個MHC I分子之結合之方法。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷細胞混合物中ILT2及/或ILT4與MHC I分子之結合之方法包括使細胞與本文所述之ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑接觸。
在一些實施例中，提供破壞、抑制或阻斷ILT2及/或ILT4活性之方法。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷細胞混合物中之ILT2活性之方法包括使細胞與本文所述之ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑接觸。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷細胞混合物中之ILT4活性之方法包括使細胞與本文所述之ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑接觸。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷細胞混合物中之ILT2及ILT4活性之方法包括使細胞與本文所述之ILT2/ILT4結合劑接觸。
在一些實施例中，提供破壞、抑制或阻斷MHC I誘導之ILT2及/或ILT4活性之方法。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷細胞混合物中MHC I誘導之ILT2活性之方法包括使細胞與本文所述之ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑接觸。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷細胞混合物中MHC I誘導之ILT4活性之方法包括使細胞與本文所述之ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑接觸。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷細胞混合物中MHC I誘導之ILT2及ILT4活性之方法包括使細胞與本文所述之ILT2/ILT4結合劑接觸。在一些實施例中，MHC I分子係HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-E及/或HLA-G。
在一些實施例中，提供破壞、抑制或阻斷ILT2誘導及/或ILT4誘導之骨髓細胞阻抑之方法。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷ILT2誘導及/或ILT4誘導之骨髓細胞阻抑之方法包括使骨髓細胞與本文所述之ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑接觸。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷ILT2誘導之骨髓細胞阻抑之方法包括使骨髓細胞與本文所述之ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑接觸。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷ILT4誘導之骨髓細胞阻抑之方法包括使骨髓細胞與本文所述之ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑接觸。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷ILT2誘導及ILT4誘導之骨髓細胞阻抑之方法包括使骨髓細胞與本文所述之ILT2/ILT4結合劑接觸。
在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷ILT2誘導及/或ILT4誘導之骨髓細胞活性阻抑之方法包括使骨髓細胞與本文所述之ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑接觸。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷ILT2誘導或ILT4誘導之骨髓細胞活性阻抑之方法包括使骨髓細胞與本文所述之ILT2/ILT4結合劑接觸。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷ILT2誘導及/或ILT4誘導之骨髓細胞活性阻抑之方法恢復骨髓細胞中之FcR活性。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷ILT2誘導及/或ILT4誘導之骨髓細胞活性阻抑之方法增強、增加或恢復骨髓細胞中之趨化介素/細胞介素產生。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷ILT2誘導及/或ILT4誘導之骨髓細胞活性阻抑之方法增強、增加或恢復骨髓細胞增殖活性。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷ILT2誘導及/或ILT4誘導之骨髓細胞活性阻抑之方法增強、增加或恢復骨髓細胞之吞噬活性。在一些實施例中，骨髓細胞係單核球。在一些實施例中，骨髓細胞係巨噬細胞。在一些實施例中，骨髓細胞係樹突細胞。在一些實施例中，骨髓細胞係耐受原性樹突細胞。在一些實施例中，骨髓細胞係APC。
在一些實施例中，提供增強或增加NK細胞活性之方法。在一些實施例中，增強或增加NK細胞活性之方法包括使NK細胞與本文所述之ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑接觸。在一些實施例中，增強或增加NK細胞活性之方法包括使NK細胞與本文所述之ILT2/ILT4結合劑接觸。
在一些實施例中，提供增強或增加細胞毒性T淋巴球(CTL)活性之方法。在一些實施例中，增強或增加CTL活性之方法包括使CTL與本文所述之ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑接觸。在一些實施例中，增強或增加CTL活性之方法包括使CTL與本文所述之ILT2/ILT4結合劑接觸。
在一些實施例中，提供增強或增加巨噬細胞吞噬作用之方法。在一些實施例中，增強或增加吞噬作用之方法包括使巨噬細胞與本文所述之ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑接觸。在一些實施例中，增強或增加吞噬作用之方法包括使巨噬細胞與本文所述之ILT2/ILT4結合劑接觸。
在一些實施例中，提供抑制骨髓源性阻抑細胞(MDSC)之活性之方法。在一些實施例中，抑制MDSC活性之方法包括使MDSC與本文所述之ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑接觸。在一些實施例中，抑制MDSC活性之方法包括使MDSC與本文所述之ILT2/ILT4結合劑接觸。
在上述態樣及實施例以及本文所述之其他態樣及實施例中每一者之一些實施例中，該等方法可為活體外、離體或活體內。
在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷個體中ILT2或ILT4與MHC I分子之結合之方法包括向個體投與有效量之本文所述之ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷個體中ILT2或ILT4與MHC I分子之結合之方法包括向個體投與有效量之本文所述之ILT2/ILT4結合劑。在本文所述方法之一些實施例中，MHC I分子係HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-E及/或HLA-G。
在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷個體中MHC I誘導之ILT2及/或ILT4活性之方法包括向個體投與有效量之ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷個體中MHC I誘導之ILT2活性之方法包括向個體投與有效量之本文所述之ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷個體中MHC I誘導之ILT4活性之方法包括向個體投與有效量之本文所述之ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷個體中MHC I誘導之ILT2及/或ILT4活性之方法包括向個體投與有效量之本文所述之ILT2/ILT4結合劑。在本文所述方法之一些實施例中，MHC I分子係HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-E及/或HLA-G。
在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷個體中ILT2誘導之骨髓細胞阻抑之方法包括向個體投與有效量之本文所述之ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷個體中ILT4誘導之骨髓細胞活性阻抑之方法包括向個體投與有效量之本文所述之ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑。
在一些實施例中，抑制或減小個體中之MDSC活性之方法包括向個體投與有效量之本文所述之ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑。
在一些實施例中，增強或增加個體中之NK細胞活性之方法包括向個體投與有效量之本文所述之ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑。在一些實施例中，增強或增加個體中之NK細胞活性之方法包括向個體投與有效量之本文所述之ILT2/ILT4結合劑。
在一些實施例中，增強或增加個體中之CTL活性之方法包括向個體投與有效量之本文所述之ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑。在一些實施例中，增強或增加個體中之CTL活性之方法包括向個體投與本文所述之ILT2/ILT4結合劑。
在一些實施例中，增強或增加個體中之巨噬細胞吞噬作用之方法包括向個體投與有效量之本文所述之ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑。在一些實施例中，增強或增加個體中之巨噬細胞吞噬作用之方法包括向個體投與本文所述之ILT2/ILT4結合劑。
在一些實施例中，治療個體之癌症之方法包括向個體投與治療有效量之本文所述之ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑。在一些實施例中，癌症係間皮瘤、神經膠質母細胞瘤、腎細胞癌(包括源自透明細胞類型及乳頭狀細胞類型之癌症)、非小細胞肺癌、黑色素瘤、胰管腺癌、胃癌、頭頸部鱗狀細胞癌、膽管癌、乳癌、卵巢癌、子宮頸癌、子宮頸內癌、結腸直腸癌或食管癌。在一些實施例中，癌症係晚期實體腫瘤。
在一些實施例中，癌症係胰臟癌、肺癌、頭頸癌、前列腺癌、皮膚癌、胃癌、腸癌、卵巢癌、子宮頸癌、子宮癌、子宮內膜癌、尿路膀胱癌、腦癌、肝癌、腎癌或睪丸癌。在一些實施例中，癌症係血液癌。在一些實施例中，癌症係骨髓性白血病。在一些實施例中，骨髓性癌症係急性骨髓性白血病(AML)。在一些實施例中，骨髓性癌症係慢性骨髓性白血病。在一些實施例中，癌症係骨髓發育不良症候群。骨髓發育不良症候群(MDS)係其中骨髓中之不成熟血球不會成熟且因此不會變成健康血球之一組癌症。在一些實施例中，骨髓發育不良症候群發展成AML。
在一些實施例中，抑制個體中之腫瘤生長之方法包括向個體投與治療有效量之本文所述之ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑。在一些實施例中，增加或增強個體對腫瘤或腫瘤細胞之免疫反應之方法包括向個體投與治療有效量之本文所述之ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑。在一些實施例中，活化或增強個體對腫瘤或腫瘤細胞之持久或長期免疫反應之方法包括向個體投與治療有效量之本文所述之ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑。在一些實施例中，抑制個體中之腫瘤復發或腫瘤再生長之方法包括向個體投與治療有效量之本文所述之ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑。在一些實施例中，誘導個體中之抑制腫瘤復發或腫瘤再生長之持久或長期免疫性之方法包括向個體投與治療有效量之本文所述之ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑。在一些實施例中，腫瘤係胰臟腫瘤、乳房腫瘤、肺腫瘤、非小細胞肺腫瘤、頭頸腫瘤、結腸直腸腫瘤、前列腺腫瘤、皮膚腫瘤、黑色素瘤、胃腫瘤、結腸直腸腫瘤、卵巢腫瘤、子宮頸腫瘤、子宮腫瘤、子宮內膜腫瘤、子宮頸內腫瘤、膀胱腫瘤、腦腫瘤、食管腫瘤、肝腫瘤、腎臟腫瘤、腎腫瘤、間皮瘤、神經膠質母細胞瘤、膽管腫瘤或睪丸腫瘤。
在一些實施例中，活化患有腫瘤之個體之腫瘤微環境中之骨髓細胞的方法包括向個體投與治療有效量之本文所述之ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑。在一些實施例中，骨髓細胞係原代樹突細胞或耐受原性樹突細胞。在一些實施例中，骨髓細胞係單核球或巨噬細胞。
在一些實施例中，再活化個體中之耐受原性樹突細胞之方法包括向個體投與治療有效量之本文所述之ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑。在一些實施例中，耐受原性樹突細胞發現於腫瘤微環境中。
在本文所述之所有方法之一些實施例中，ILT結合劑係作為組合療法之一部分投與個體。在一些實施例中，組合療法包含至少一種其他治療劑。在一些實施例中，組合療法包含免疫檢查點抑制劑，例如抗PD-1抗體或抗PD-L1抗體。在一些實施例中，抗PD-1抗體係派姆單抗(Pembrolizumab，MK-3475；KEYTRUDA)、匹利珠單抗(Pidilizumab，CT-011)、尼沃魯單抗(Nivolumab，OPDIVO)、德瓦魯單抗(Durvalumab，MEDI0680)、西米普利單抗(Cemiplimab，REGN2810)、替雷利珠單抗(Tislelizumab，BGB-A317)、司帕珠單抗(Spartalizumab，PDR-001)或STI-A1110。
亦揭示本文所述之ILT結合劑之用途，其用於製造用來治療癌症之藥物。在一些實施例中，本文所述之ILT結合劑用於治療癌症。在一些實施例中，本文所述之ILT結合劑用於抑制腫瘤生長。
在所有上述方法之一些實施例中，個體係人類。
當根據馬庫西群組(Markush group)或其他替代分組方案來闡述揭示案之態樣或實施例時，本揭示案不僅涵蓋作為整體列出之整個組，且亦涵蓋單獨地該組之每個成員及主要組之所有可能子組，以及不存在一或多個組成員之主要組。本揭示案亦設想在所主張揭示案中明確排除任一組成員中之一或多者。
相關申請案之交叉引用
本申請案主張於2020年5月1日提出申請之美國臨時申請案第63/019,068號；及於2020年12月8日提出申請之美國臨時申請案第63/122,848號的優先權益；該兩個美國臨時申請案之內容之全文皆以引用方式併入本文中。
序列表
本說明書係與[序列表]之電腦可讀形式(CRF)拷貝一起提出申請。CRF標題為47702-0094TW1_SL.txt，其創建於2021年4月26日且大小為178,820個位元組，其全文皆以引用方式併入本文中。
本揭示案提供結合免疫球蛋白樣轉錄物2 (ILT2)、免疫球蛋白樣轉錄物4 (ILT4)或ILT2及ILT4二者之新穎劑，包括(但不限於)多肽，例如抗體。如本文所用之術語「ILT結合劑」係指ILT2結合劑、ILT4結合劑及ILT2/ILT4結合劑。如本文所用之「ILT2/ILT4結合劑」係指結合ILT2及ILT4二者之劑，且亦可稱為ILT2/ILT4雙重結合劑。ILT結合劑包括(但不限於)多肽、抗體(包括其抗原結合片段)、支架蛋白及異二聚體分子。ILT結合劑包括(但不限於) ILT2及/或ILT4活性之拮抗劑、ILT2及/或ILT4活性之抑制劑及/或抑制ILT2及/或ILT4阻抑活性之劑。亦提供相關多肽、多核苷酸、載體、包含該等劑之組合物、包含相關多核苷酸或載體之細胞及製造該等劑之方法。亦提供使用新穎ILT結合劑之方法。
I. 定義
除非本文另有定義，否則本說明書中所用之技術及科學術語具有熟習此項技術者通常理解之含義。只要合適，以單數形式使用之術語亦將包括複數形式，且反之亦然。在所述術語之任何描述與以引用方式併入本文中之任何文件衝突之情況下，應以下文所述術語之描述為準。
如本文所用之術語「結合劑」係指結合特定抗原或靶(例如ILT2及/或ILT4)之分子。結合劑可包含蛋白質、肽、核酸、碳水化合物、脂質或小分子量化合物。在一些實施例中，結合劑包含全長抗體。在一些實施例中，結合劑係抗體之抗原結合片段。在一些實施例中，結合劑包含替代性蛋白質支架或人工支架(例如非免疫球蛋白骨架)。在一些實施例中，結合劑係包含抗原結合位點之融合蛋白。在一些實施例中，結合劑係包含至少一個抗原結合位點之雙特異性或多特異性分子。
術語「抗體」在本文中係以最廣泛含義使用且涵蓋多種抗體結構，包括(但不限於)經由至少一個抗原結合位點識別並結合靶之免疫球蛋白分子、多株抗體、重組抗體、單株抗體、嵌合抗體、人類化抗體、人類抗體、雙特異性抗體、多特異性抗體、雙體抗體、三體抗體、四體抗體、單鏈Fv (scFv)抗體及抗體片段，只要其展現期望抗原結合活性即可。
術語「完整抗體」或「全長抗體」係指具有實質上類似於天然抗體結構之結構之抗體。此包括例如包含以下之抗體：各自包含可變區及輕鏈恆定區(CL)之兩條輕鏈及各自包含可變區及至少重鏈恆定區CH1、CH2及CH3之兩條重鏈。通常，完整抗體包括CH1區與CH2區之間之鉸鏈區(或其一部分)。
如本文所用之術語一或多個「抗體片段」係指包含抗體之一部分且通常抗原結合位點之並非完整抗體之分子。抗體片段之實例包括(但不限於) Fab、Fab′、F(ab′)2、Fv、單鏈抗體分子(例如scFv)、sc(Fv)2
、二硫鍵連接之scFv (dsscFv)、雙體抗體、三體抗體、四體抗體、微小抗體、雙重可變結構域抗體(DVD)、單一可變結構域抗體(例如駱駝科抗體)及由抗體片段形成之多特異性抗體。
如本文所用之術語「單株抗體」係指參與單一抗原決定子或抗原決定基之高度特異性識別及結合之實質上同源之抗體群體。術語「單株抗體」涵蓋完整及全長單株抗體以及抗體片段(例如Fab、Fab′、F(ab′)2
、Fv)、單鏈抗體(例如scFv)、包含抗體片段之融合蛋白及包含至少一個抗原結合位點之任何其他經修飾免疫球蛋白分子。另外，「單株抗體」係指藉由多種技術製造之此類抗體，該等技術包括(但不限於)雜交瘤產生、噬菌體文庫展示、重組表現及基因轉殖動物。
術語「嵌合抗體」係指其中重鏈及/或輕鏈之一部分衍生自第一來源或物種、而重鏈及/或輕鏈之剩餘部分衍生自不同來源或物種之抗體。
如本文所用之術語「人類化抗體」係指包含人類重鏈可變區及輕鏈可變區之抗體，其中天然CDR胺基酸殘基經非人類抗體(例如小鼠、大鼠、兔或非人類靈長類動物)之相應CDR之殘基替代，其中非人類抗體具有期望特異性、親和力及/或活性。在一些實施例中，人類重鏈或輕鏈可變區之一或多個框架區胺基酸殘基經非人類抗體之相應殘基替代。另外，人類化抗體可包含未在人類抗體或非人類抗體中發現之胺基酸殘基。在一些實施例中，可進行該等修飾以進一步細化及/或最佳化抗體特徵。在一些實施例中，人類化抗體包含人類免疫球蛋白恆定區之至少一部分(例如CH1、CH2、CH3、Fc及/或鉸鏈區)。
如本文所用之術語「人類抗體」係指具有對應於由人類產生之抗體之胺基酸序列之抗體，及/或已使用熟習此項技術者已知用於製造人類抗體之任一技術製造之抗體。該等技術包括(但不限於)噬菌體展示文庫、酵母菌展示文庫、基因轉殖動物、重組蛋白產生及B細胞雜交瘤技術。
術語「抗原決定基」及「抗原決定子」在本文中可互換使用且係指抗原或靶之能夠由特定抗體識別並結合之部分。當抗原或靶係多肽時，抗原決定基可由藉由蛋白質之三級折疊並置之連續胺基酸及不連續胺基酸形成。由連續胺基酸形成之抗原決定基(亦稱為線性抗原決定基)通常在蛋白質變性後得以保留，而藉由三級折疊形成之抗原決定基(亦稱為構象抗原決定基)通常在蛋白質變性後丟失。在獨特空間構象中，抗原決定基通常包括至少3個、且更通常至少5個、6個、7個或8-10個胺基酸。抗原決定基可使用可在網際網路上獲得之眾多種軟體生物資訊學工具中之任一者來預測。可使用X射線結晶學藉由分析抗原/抗體複合物之胺基酸殘基相互作用來表徵靶蛋白上之抗原決定基。
如本文所用之術語「特異性結合」係指與替代性物質對特定抗原、抗原決定基、蛋白質或靶分子之相互作用相比，對特定抗原、抗原決定基、蛋白質或靶分子之相互作用更頻繁、更快速、具有更長持續時間、具有更大親和力或具有上述性質之一些組合的劑。特異性結合抗原之結合劑可例如藉由免疫分析、ELISA、表面電漿子共振(SPR)或熟習此項技術者已知之其他技術來鑑別。在一些實施例中，特異性結合抗原(例如人類ILT2)之劑可結合相關抗原(例如恆河猴ILT2及/或食蟹猴ILT2)。在一些實施例中，特異性結合抗原(例如人類ILT2)之劑可結合第二抗原(例如人類ILT4)且在本文中稱為「雙重結合劑」。在一些實施例中，特異性結合抗原之結合劑可以高於其對不同抗原之親和力之親和力結合靶抗原。不同抗原可為相關抗原。在一些實施例中，特異性結合抗原之結合劑可以為其對不同抗原之親和力至少20倍、至少30倍、至少40倍、至少50倍、至少60倍、至少70倍、至少80倍、至少90倍或至少100倍之親和力結合靶抗原。在一些實施例中，特異性結合特定抗原之結合劑以低親和力結合不同抗原，以致於無法使用本文所述之分析或此項技術中已知之其他分析來偵測結合。在一些實施例中，親和力係在如本文所述或如熟習此項技術者已知之Biacore系統中使用SPR技術來量測。
術語「多肽」及「肽」及「蛋白質」在本文中可互換使用且係指任一長度之胺基酸之聚合物。聚合物可為直鏈或具支鏈，其可包含經修飾胺基酸，且其可雜有非胺基酸。該等術語亦涵蓋經天然或間插修飾之胺基酸聚合物；例如，二硫鍵形成、糖基化、脂化、乙醯化、磷酸化或任何其他操縱或修飾。在該定義內亦包括例如含有胺基酸(包括但不限於非天然胺基酸)之一或多種類似物以及此項技術中已知之其他修飾之多肽。應理解，由於本揭示案之多肽可基於抗體，故術語「多肽」涵蓋呈單鏈形式之多肽及兩條或更多條相關鏈之多肽。
術語「多核苷酸」及「核酸」及「核酸分子」在本文中可互換使用且係指任一長度之核苷酸之聚合物，並包括DNA及RNA。核苷酸可為去氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、經修飾核苷酸或鹼基及/或其類似物或可藉由DNA或RNA聚合酶納入聚合物中之任何受質。
術語「一致的」或「一致性」%在兩個或更多個核酸或多肽之情況下係指，在比較並比對(若需要，引入空位)以獲得最大對應性時，兩個或更多個序列或子序列相同或具有指定百分比之相同核苷酸或胺基酸殘基，其中不將任何保守胺基酸取代視為序列一致性之一部分。一致性%可使用序列比較軟體或算法或藉由目視檢查來量測。可用於獲得胺基酸或核苷酸序列之比對之多種算法及軟體為此項技術中已知。該等算法及軟體包括(但不限於) BLAST、ALIGN、Megalign、BestFit、GCG Wisconsin包及其變化形式。在一些實施例中，本揭示案之兩個核酸或多肽係實質上一致的，意指在比較並比對以獲得最大對應性時，其具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%且在一些實施例中至少95%、96%、97%、98%、99%之核苷酸或胺基酸殘基一致性，如使用序列比較算法或藉由目視檢查所量測。在一些實施例中，一致性存在於長度為至少約10個、至少約20個、至少約20-40個、至少約40-60個、至少約60-80個核苷酸或胺基酸殘基或其間之任何整數值之序列區域內。在一些實施例中，一致性存在於長於60-80個核苷酸或胺基酸殘基(例如至少約80-100個核苷酸或胺基酸殘基)之區域內，且在一些實施例中，序列在所比較序列(例如(i)核苷酸序列之編碼區或(ii)胺基酸序列)之全長內係實質上一致的。
如本文所用之片語「保守胺基酸取代」係指其中一個胺基酸殘基經具有相似側鏈之另一胺基酸殘基替代之取代。此項技術中通常已定義具有相似側鏈之胺基酸殘基之家族，包括鹼性側鏈(例如離胺酸、精胺酸、組胺酸)、酸性側鏈(例如天冬胺酸、麩胺酸)、不帶電之極性側鏈(例如甘胺酸、天冬醯胺、麩醯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、半胱胺酸)、非極性側鏈(例如丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸、色胺酸)、β-分枝側鏈(例如蘇胺酸、纈胺酸、異白胺酸)及芳族側鏈(例如酪胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、組胺酸)。舉例而言，用丙胺酸取代纈胺酸視為保守取代。通常，多肽及/或抗體序列中之保守取代不會消除多肽或抗體與靶結合位點之結合。鑑別不會消除結合之核苷酸及胺基酸保守取代之方法為此項技術中所熟知。
如本文所用之術語「載體」意指能夠在宿主細胞中遞送、且通常表現一或多種所關注基因或序列之構築物。載體之實例包括(但不限於)病毒載體、裸DNA或RNA表現載體、質體、黏粒或噬菌體載體、與陽離子縮合劑相關之DNA或RNA表現載體及囊封於脂質體中之DNA或RNA表現載體。
如本文所用之術語「經分離」係指呈在自然界中未發現之形式之多肽、可溶性蛋白質、抗體、多核苷酸、載體、細胞或組合物。「經分離」抗體係實質上不含來自衍生出其之細胞來源之材料。在一些實施例中，經分離多肽、可溶性蛋白質、抗體、多核苷酸、載體、細胞或組合物係已純化至其不再呈在自然界中發現其之形式之程度的彼等多肽、可溶性蛋白質、抗體、多核苷酸、載體、細胞或組合物。在一些實施例中，經分離之多肽、可溶性蛋白質、抗體、多核苷酸、載體、細胞或組合物係實質上純的。多肽、可溶性蛋白質、抗體、多核苷酸、載體、細胞或組合物可自天然來源(例如組織)或自諸如經改造細胞株之來源分離。
如本文所用之術語「實質上純的」係指為至少50%純(即不含污染物)、至少90%純、至少95%純、至少98%純或至少99%純之材料。
術語「個體」係指任一動物(例如哺乳動物)，包括(但不限於)人類、非人類靈長類動物、犬、貓、兔、嚙齒類動物及諸如此類。
如本文所用之術語「醫藥學上可接受」係指已經管理機構批準或可經批準或列於美國藥典(U.S. Pharmacopoeia)、歐洲藥典或其他公認藥典中用於動物(包括人類)中之物質。
如本文所用之術語「醫藥學上可接受之賦形劑、載劑或佐劑」或「可接受之醫藥載劑」係指可與至少一種治療劑一起投與個體且通常係安全、無毒並對治療劑之藥理學活性無效應之賦形劑、載劑或佐劑。一般而言，熟習此項技術者及政府機構認為醫藥學上可接受之賦形劑、載劑或佐劑係任一調配物之無活性成分。
如本文所用之術語「醫藥調配物」或「醫藥組合物」係指呈允許劑之生物活性有效之形式之製劑。醫藥調配物或組合物通常包含其他組分，例如醫藥學上可接受之賦形劑、載劑、佐劑、緩衝劑等。
如本文所用之術語「有效量」或「治療有效量」係指足以減輕及/或改善(i)個體之疾病、病症或疾患及/或(ii)個體症狀之嚴重程度及/或持續時間的劑之量。該術語亦涵蓋(i)減輕或改善給定疾病、病症或疾患之推進或進展、(ii)減輕或改善給定疾病、病症或疾患之再發、發展或發作及/或(iii)改良或增強另一劑或療法(例如除本文所提供之結合劑外之劑)之預防或治療效應所需的劑之量。
如本文所用之術語「治療效應」係指劑減輕及/或改善(i)個體之疾病、病症或疾患及/或(ii)個體症狀之嚴重程度及/或持續時間的效應及/或能力。該術語亦涵蓋劑(i)減輕或改善給定疾病、病症或疾患之推進或進展、(ii)減輕或改善給定疾病、病症或疾患之再發、發展或發作及/或(iii)改良或增強另一劑或療法(例如除本文所提供之結合劑外之劑)之預防或治療效應的能力。
如本文所用之術語「治療(treat)」或「治療(treatment)」或「治療(treating)」或「治療(to treat)」或「緩和(alleviate)」或「緩和(alleviation)」或「緩和(alleviating)」或「緩和(to alleviate)」係指旨在減緩、減輕病理性疾患或病症之症狀及/或停止病理性疾患或病症之進展之治療措施。因此，需要治療之彼等包括已患有病症之彼等。
如本文所用之術語「預防(prevent)」或「預防(prevention)」或「預防(preventing)」係指部分或完全抑制個體之疾病、病症或疾患或其症狀之發展、再發、發作或擴散。
如本文所用之術語「免疫反應」包括來自先天性免疫系統及適應性免疫系統二者之反應。其包括細胞介導之免疫反應及/或體液性免疫反應二者。其包括T細胞反應及B細胞反應二者以及來自免疫系統之其他細胞(例如自然殺手(NK)細胞、單核球、巨噬細胞、樹突細胞等)之反應。
如本文所用，對「約」或「大約」值或參數之提及包括(且闡述)針對該值或參數之實施例。舉例而言，提及「約X」之描述包括「X」之描述。
除非上下文另有明確說明，否則如本揭示案及申請專利範圍中所用之單數形式「一(a)」、「一(an)」及「該(the)」包括複數形式。
應理解，每當本文用術語「包含」闡述實施例時，亦提供以「由……組成」及/或「基本上由……組成」闡述之其他類似實施例。亦應理解，每當本文用片語「基本上由……組成」闡述實施例時，亦提供以「由……組成」闡述之其他類似實施例。
如本文片語(例如「A及/或B」)中所用之術語「及/或」意欲包括A及B；A或B；A (單獨)；及B (單獨)。同樣，如片語(例如「A、B及/或C」)中所用之術語「及/或」意欲涵蓋以下實施例中之每一者：A、B及C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A及C；A及B；B及C；A (單獨)；B (單獨)；及C (單獨)。
II. ILT結合劑
人類ILT2 (UniProtKB編號Q8NHL6)、人類ILT4 (UniProtKB編號Q8N423)、恆河獼猴(「恆河猴(rhesus)」) ILT2 (NCBI Ref編號XP_028694980.1)及食蟹猴(「食蟹猴(cyno)」) ILT2 (內部序列與UniProtKB編號A0A2K5VN04具有98%一致性)之胺基酸(aa)序列在本文中分別提供為SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:15及SEQ ID NO:166。如本文所用，對ILT2或ILT4之胺基酸位置之提及係指包括信號序列之胺基酸序列之編號。
在猴基因體中發現人類ILT2之基因體直系同源物，然而，似乎不存在人類ILT4之基因體直系同源物。猴ILT2直系同源物之表現模式與人類ILT2及人類ILT4之組合表現模式相當。不受限於理論，認為猴中之ILT2直系同源物可具有等效於人類ILT2及人類ILT4之生物功能之組合的生物/功能能力。
ILT2係預測分子量大約為71 kDa之單次I型跨膜蛋白。ILT2 (人類、恆河猴及食蟹猴)之特徵在於包含四個Ig樣C2型結構域之細胞外結構域、跨膜結構域及含有4個ITIM結構域之長細胞質結構域(參見例如Borges等人，1997,J. Immunol.
, 159:5192-5196)。四個Ig樣C2型結構域在本文中可稱為結構域1 (D1)、結構域2 (D2)、結構域3 (D3)及結構域4 (D4)。D1位於蛋白質之N末端部分，其後為D2、D3，且D4位於最靠近跨膜區處。如在UniProtKB內所表徵，人類ILT2係650個胺基酸(aa)之蛋白質，信號序列係aa 1-23，細胞外結構域係aa 24-461，跨膜區係aa 462-482，且細胞質結構域係aa 483-650。在細胞外結構域內，D1係aa 27-115，D2係aa 116-221，D3係aa 222-312，D4係aa 313-409，且「幹區」係aa 410-461。在細胞質結構域內，ITIM係aa 531-536、560-565、612-617及642-647。恆河猴ILT2係639個胺基酸(aa)之蛋白質，與人類ILT2之結構表徵相比，信號序列係aa 1-23，細胞外結構域係aa 24-460，跨膜區係aa 461-481，且細胞質結構域係aa 482-639。在細胞外結構域內，D1係aa 27-114，D2係aa 115-220，D3係aa 221-311，D4係aa 312-408，且「幹區」係aa 409-460。在細胞質結構域內，ITIM係aa 530-535、559-564、601-606及631-636。食蟹猴ILT2係651個胺基酸(aa)之蛋白質，與人類ILT2之結構表徵相比，信號序列係aa 1-23，細胞外結構域係aa 24-461，跨膜區係aa 462-482，且細胞質結構域係aa 483-651。在細胞外結構域內，D1係aa 27-114，D2係aa 115-220，D3係aa 221-311，D4係aa 312-408，且「幹區」係aa 409-461。在細胞質結構域內，ITIM係aa 531-536、561-566、613-618及643-648。ILT2在自然殺手(NK)細胞、單核球、巨噬細胞、嗜酸性球、嗜鹼性球、樹突細胞(DC)、T細胞亞組及B細胞上表現(程度不同)。已知多種配位體與ILT2相互作用，包括I類HLA分子(例如HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-E、HLA-F及HLA-G)。ILT2與「非經典」 MHC I分子HLA-G之結合似乎更強於與經典HLA I類分子之結合。
ILT4具有極類似於ILT2之結構。其係預測分子量大約為65 kDa之單次I型跨膜蛋白。ILT4之特徵在於包含四個Ig樣C2型結構域之細胞外結構域、跨膜結構域及含有3個ITIM結構域之長細胞質結構域(參見例如Borges等人，1997,J. Immunol.
, 159:5192-5196)。如針對ILT2所述，四個Ig樣C2型結構域在本文中可稱為D1、D2、D3及D4。D1位於蛋白質N末端部分，其後為D2、D3，且D4位於最靠近跨膜區處。如在UniProtKB內所表徵，人類ILT4係598個胺基酸(aa)之蛋白質，信號序列係aa 1-21，細胞外結構域係aa 22-461，跨膜區係aa 462-482，且細胞質結構域係aa 483-598。在細胞外結構域內，D1係aa 27-110，D2係aa 111-229，D3係aa 230-318，D4係aa 330-419，且「幹區」係aa 420-461。在細胞質結構域內，ITIM係aa 531-536、560-565及590-595。ILT4在骨髓細胞(例如單核球、巨噬細胞、樹突細胞)上表現，但不在淋巴細胞上表現。已觀察到ILT4結合多種配位體，尤其HLA I類分子、ANGPTL蛋白、髓磷脂抑制劑及β-類澱粉蛋白。
應理解，ILT2或ILT4 (例如人類ILT2、恆河猴ILT2、食蟹猴ILT2或人類ILT4)之結構域可由熟習此項技術者不同地定義，因此任一ILT2或ILT4結構域或區域之N末端胺基酸及C末端胺基酸可相差1個、2個、3個、4個、5個或更多個胺基酸殘基。
本揭示案提供結合ILT2、ILT4或ILT2及ILT4之劑，即ILT結合劑。結合ILT2及ILT4二者之劑(ILT2/ILT4結合劑)在本文中可稱為「雙重結合劑」。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合ILT2或ILT2之片段。在一些實施例中，ILT2之片段包含ILT2之細胞外結構域。在一些實施例中，ILT2之片段包含Ig樣C2型結構域(例如D1、D2、D3及/或D4)中之一或多者。在一些實施例中，ILT2之片段包含D1及D2。在一些實施例中，ILT2之片段包含D2及D3。在一些實施例中，ILT2之片段包含D3及D4。在一些實施例中，ILT2之片段包含D1、D2及D3。在一些實施例中，ILT2之片段包含D2、D3及D4。在一些實施例中，ILT2之片段包含Ig樣C2型結構域中之一或多者及幹區。在一些實施例中，ILT2之片段包含D4-幹、D3-D4-幹或D2-D3-D4-幹。
在一些實施例中，人類ILT2之細胞外結構域包含SEQ ID NO:1之胺基酸24-461。在一些實施例中，人類ILT2之D1包含SEQ ID NO:1之胺基酸27-115。在一些實施例中，人類ILT2之D2包含SEQ ID NO:1之胺基酸116-221。在一些實施例中，人類ILT2之D3包含SEQ ID NO:1之胺基酸222-312。在一些實施例中，人類ILT2之D4包含SEQ ID NO:1之胺基酸313-409。在一些實施例中，人類ILT2之D1-D2包含SEQ ID NO:1之胺基酸27-221。在一些實施例中，人類ILT2之D2-D3包含SEQ ID NO:1之胺基酸116-312。在一些實施例中，人類ILT2之D3-D4包含SEQ ID NO:1之胺基酸222-409。在一些實施例中，人類ILT2之D1-D2-D3包含SEQ ID NO:1之胺基酸27-312。在一些實施例中，人類ILT2之D2-D3-D4包含SEQ ID NO:1之胺基酸116-409。在一些實施例中，人類ILT2之D4-幹包含SEQ ID NO:1之胺基酸313-461。在一些實施例中，人類ILT2之D3-D4-幹包含SEQ ID NO:1之胺基酸222-461。在一些實施例中，人類ILT2之D2-D3-D4-幹包含SEQ ID NO:1之胺基酸116-461。在一些實施例中，人類ILT2之片段包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列。在一些實施例中，人類ILT2之片段包含SEQ ID NO:4之胺基酸序列。在一些實施例中，人類ILT2之片段包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列。在一些實施例中，人類ILT2之片段包含SEQ ID NO:6之胺基酸序列。在一些實施例中，人類ILT2之片段包含SEQ ID NO:7之胺基酸序列。在一些實施例中，人類ILT2之片段包含SEQ ID NO:4及SEQ ID NO:5之胺基酸序列。在一些實施例中，人類ILT2之片段包含SEQ ID NO:5及SEQ ID NO:6之胺基酸序列。在一些實施例中，人類ILT2之片段包含SEQ ID NO:6及SEQ ID NO:7之胺基酸序列。在一些實施例中，人類ILT2之片段包含SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5及SEQ ID NO:6之胺基酸序列。在一些實施例中，人類ILT2之片段包含SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6及SEQ ID NO:7之胺基酸序列。
在一些實施例中，恆河猴ILT2之細胞外結構域包含SEQ ID NO:15之胺基酸24-460。在一些實施例中，恆河猴ILT2之D1包含SEQ ID NO:15之胺基酸27-114。在一些實施例中，恆河猴ILT2之D2包含SEQ ID NO:15之胺基酸115-220。在一些實施例中，恆河猴ILT2之D3包含SEQ ID NO:15之胺基酸221-311。在一些實施例中，恆河猴ILT2之D4包含SEQ ID NO:15之胺基酸312-408。在一些實施例中，恆河猴ILT2之D1-D2包含SEQ ID NO:15之胺基酸27-220。在一些實施例中，恆河猴ILT2之D2-D3包含SEQ ID NO:15之胺基酸115-311。在一些實施例中，恆河猴ILT2之D3-D4包含SEQ ID NO:15之胺基酸221-408。在一些實施例中，恆河猴ILT2之D1-D2-D3包含SEQ ID NO:15之胺基酸27-311。在一些實施例中，恆河猴ILT2之D2-D3-D4包含SEQ ID NO:15之胺基酸115-408。在一些實施例中，恆河猴ILT2之D4-幹包含SEQ ID NO:15之胺基酸312-460。在一些實施例中，恆河猴ILT2之D3-D4-幹包含SEQ ID NO:15之胺基酸221-460。在一些實施例中，恆河猴ILT2之D2-D3-D4-幹包含SEQ ID NO:15之胺基酸115-460。在一些實施例中，恆河猴ILT2之片段包含SEQ ID NO:17之胺基酸序列。在一些實施例中，恆河猴ILT2之片段包含SEQ ID NO:18之胺基酸序列。在一些實施例中，恆河猴ILT2之片段包含SEQ ID NO:19之胺基酸序列。在一些實施例中，恆河猴ILT2之片段包含SEQ ID NO:20之胺基酸序列。在一些實施例中，恆河猴ILT2之片段包含SEQ ID NO:21之胺基酸序列。在一些實施例中，恆河猴ILT2之片段包含SEQ ID NO:18及SEQ ID NO:19之胺基酸序列。在一些實施例中，人類ILT2之片段包含SEQ ID NO:19及SEQ ID NO:20之胺基酸序列。在一些實施例中，人類ILT2之片段包含SEQ ID NO:20及SEQ ID NO:21之胺基酸序列。在一些實施例中，人類ILT2之片段包含SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19及SEQ ID NO:20之胺基酸序列。在一些實施例中，人類ILT2之片段包含SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20及SEQ ID NO:21之胺基酸序列。
在一些實施例中，食蟹猴ILT2之細胞外結構域包含SEQ ID NO:166之胺基酸24-461。在一些實施例中，食蟹猴ILT2之D1包含SEQ ID NO:166之胺基酸27-114。在一些實施例中，食蟹猴ILT2之D2包含SEQ ID NO:166之胺基酸115-220。在一些實施例中，食蟹猴ILT2之D3包含SEQ ID NO:166之胺基酸221-311。在一些實施例中，食蟹猴ILT2之D4包含SEQ ID NO:166之胺基酸312-408。在一些實施例中，食蟹猴ILT2之D1-D2包含SEQ ID NO:166之胺基酸27-220。在一些實施例中，食蟹猴ILT2之D2-D3包含SEQ ID NO:166之胺基酸115-311。在一些實施例中，食蟹猴ILT2之D3-D4包含SEQ ID NO:166之胺基酸221-408。在一些實施例中，食蟹猴ILT2之D1-D2-D3包含SEQ ID NO:166之胺基酸27-311。在一些實施例中，食蟹猴ILT2之D2-D3-D4包含SEQ ID NO:166之胺基酸115-408。在一些實施例中，食蟹猴ILT2之D4-幹包含SEQ ID NO:166之胺基酸312-461。在一些實施例中，食蟹猴ILT2之D3-D4-幹包含SEQ ID NO:166之胺基酸221-461。在一些實施例中，食蟹猴ILT2之D2-D3-D4-幹包含SEQ ID NO:166之胺基酸115-461。在一些實施例中，食蟹猴ILT2之片段包含SEQ ID NO:168之胺基酸序列。在一些實施例中，食蟹猴ILT2之片段包含SEQ ID NO:169之胺基酸序列。在一些實施例中，食蟹猴ILT2之片段包含SEQ ID NO:170之胺基酸序列。在一些實施例中，食蟹猴ILT2之片段包含SEQ ID NO:171之胺基酸序列。在一些實施例中，食蟹猴ILT2之片段包含SEQ ID NO:172之胺基酸序列。在一些實施例中，食蟹猴ILT2之片段包含SEQ ID NO:169及SEQ ID NO:170之胺基酸序列。在一些實施例中，人類ILT2之片段包含SEQ ID NO:170及SEQ ID NO:171之胺基酸序列。在一些實施例中，人類ILT2之片段包含SEQ ID NO:171及SEQ ID NO:172之胺基酸序列。在一些實施例中，人類ILT2之片段包含SEQ ID NO:169、SEQ ID NO:170及SEQ ID NO:171之胺基酸序列。在一些實施例中，人類ILT2之片段包含SEQ ID NO:170、SEQ ID NO:171及SEQ ID NO:172之胺基酸序列。
在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合ILT2 (例如人類ILT2、恆河猴ILT2及/或食蟹猴ILT2)之片段。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑在ILT2之特定區域內結合。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑在ILT2之細胞外結構域內結合。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑在ILT2之D1結構域內結合。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑在ILT2之D2結構域內結合。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑在ILT2之D3結構域內結合。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑在ILT2之D4結構域內結合。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑在ILT2之D4-幹區內結合。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑在ILT2之D1-D2結構域內結合。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑在ILT2之D2-D3結構域內結合。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑在ILT2之D3-D4結構域內結合。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑在ILT2之D1-D2-D3結構域內結合。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑在ILT2之D2-D3-D4結構域內結合。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合ILT2上之抗原決定基。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合ILT2上之構象抗原決定基。在一些實施例中，ILT2結合劑不結合其他人類LILRB蛋白(例如ILT3、ILT4、ILT5或LILRB5)。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑不結合其他人類LILRB蛋白(例如ILT3、ILT5或LILRB5)。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑不結合人類LILRA蛋白(例如LILRA1、LILRA2、LILRA4、LILRA5或LILRA6)中之一或多者。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑不結合LILRA2、LILRA4、LILRA5或LILRA6。
在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合人類ILT2。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合食蟹猴ILT2及/或恆河猴ILT2。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合人類ILT2、食蟹猴ILT2及恆河猴ILT2。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合SEQ ID NO:1。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合SEQ ID NO:2。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合SEQ ID NO:3。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:1之胺基酸24-461之片段。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:1之胺基酸27-115之片段。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:1之胺基酸116-221之片段。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:1之胺基酸222-312之片段。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:1之胺基酸313-409之片段。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:1之胺基酸27-221之片段。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:1之胺基酸116-312之片段。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:1之胺基酸222-409之片段。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合SEQ ID NO:4。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合SEQ ID NO:5。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合SEQ ID NO:6。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合SEQ ID NO:7。
在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合SEQ ID NO:15。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合SEQ ID NO:16。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合SEQ ID NO:17。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:15之胺基酸24-460之片段。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:15之胺基酸27-114之片段。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:15之胺基酸115-220之片段。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:15之胺基酸221-311之片段。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:15之胺基酸312-408之片段。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:15之胺基酸27-220之片段。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:15之胺基酸115-311之片段。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:15之胺基酸221-408之片段。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合SEQ ID NO:18。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合SEQ ID NO:19。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合SEQ ID NO:20。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合SEQ ID NO:21。
在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合SEQ ID NO:166。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合SEQ ID NO:167。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合SEQ ID NO:168。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:166之胺基酸24-461之片段。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:166之胺基酸27-114之片段。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:166之胺基酸115-220之片段。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:166之胺基酸221-311之片段。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:166之胺基酸312-408之片段。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:166之胺基酸27-220之片段。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:166之胺基酸115-311之片段。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:166之胺基酸221-408之片段。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合SEQ ID NO:169。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合SEQ ID NO:170。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合SEQ ID NO:171。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合SEQ ID NO:172。
在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列之多肽。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列之多肽。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:4之胺基酸序列之多肽。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列之多肽。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:6之胺基酸序列之多肽。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:7之胺基酸序列之多肽。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:16之胺基酸序列之多肽。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:17之胺基酸序列之多肽。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:18之胺基酸序列之多肽。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:19之胺基酸序列之多肽。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:20之胺基酸序列之多肽。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:21之胺基酸序列之多肽。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:167之胺基酸序列之多肽。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:168之胺基酸序列之多肽。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:169之胺基酸序列之多肽。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:170之胺基酸序列之多肽。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:171之胺基酸序列之多肽。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:172之胺基酸序列之多肽。
在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:2內之胺基酸之抗原決定基。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:3內之胺基酸之抗原決定基。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:4內之胺基酸之抗原決定基。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:5內之胺基酸之抗原決定基。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:6內之胺基酸之抗原決定基。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:7內之胺基酸之抗原決定基。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:16內之胺基酸之抗原決定基。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:17內之胺基酸之抗原決定基。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:18內之胺基酸之抗原決定基。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:19內之胺基酸之抗原決定基。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:20內之胺基酸之抗原決定基。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:21內之胺基酸之抗原決定基。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:167內之胺基酸之抗原決定基。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:168內之胺基酸之抗原決定基。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:169內之胺基酸之抗原決定基。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:170內之胺基酸之抗原決定基。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:171內之胺基酸之抗原決定基。在一些實施例中，ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:172內之胺基酸之抗原決定基。
在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合ILT4或ILT4之片段。在一些實施例中，ILT4之片段包含ILT4之細胞外結構域。在一些實施例中，ILT4之片段包含Ig樣C2型結構域(例如D1、D2、D3及/或D4)中之一或多者。在一些實施例中，ILT4之片段包含D1及D2。在一些實施例中，ILT4之片段包含D2及D3。在一些實施例中，ILT4之片段包含D3及D4。在一些實施例中，ILT4之片段包含D1、D2及D3。在一些實施例中，ILT4之片段包含D2、D3及D4。在一些實施例中，ILT4之片段包含Ig樣C2型結構域中之一或多者及幹區。在一些實施例中，ILT4之片段包含D4-幹、D3-D4-幹或D2-D3-D4-幹。在一些實施例中，人類ILT4之細胞外結構域包含SEQ ID NO:8之胺基酸22-461。在一些實施例中，人類ILT4之D1包含SEQ ID NO:8之胺基酸27-110。在一些實施例中，人類ILT4之D2包含SEQ ID NO:8之胺基酸111-229。在一些實施例中，人類ILT4之D3包含SEQ ID NO:8之胺基酸230-318。在一些實施例中，人類ILT4之D4包含SEQ ID NO:8之胺基酸330-419。在一些實施例中，人類ILT4之D1-D2包含SEQ ID NO:8之胺基酸27-229。在一些實施例中，人類ILT4之D2-D3包含SEQ ID NO:8之胺基酸111-318。在一些實施例中，人類ILT4之D3-D4包含SEQ ID NO:8之胺基酸230-419。在一些實施例中，人類ILT4之D1-D2-D3包含SEQ ID NO:8之胺基酸27-318。在一些實施例中，人類ILT4之D2-D3-D4包含SEQ ID NO:8之胺基酸111-419。在一些實施例中，人類ILT4之D4-幹包含SEQ ID NO:8之胺基酸330-461。在一些實施例中，人類ILT4之D3-D4-幹包含SEQ ID NO:8之胺基酸230-461。在一些實施例中，人類ILT4之D2-D3-D4-幹包含SEQ ID NO:8之胺基酸111-461。
在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合ILT4之片段。在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑在ILT4之特定區域內結合。在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑在ILT4之細胞外結構域內結合。在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑在ILT4之D1結構域內結合。在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑在ILT4之D2結構域內結合。在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑在ILT4之D3結構域內結合。在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑在ILT4之D4結構域內結合。在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑在ILT4之D4-幹區內結合。在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑在ILT4之D1-D2結構域內結合。在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑在ILT4之D2-D3結構域內結合。在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑在ILT4之D3-D4結構域內結合。在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑在ILT4之D1-D2-D3結構域內結合。在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑在ILT4之D2-D3-D4結構域內結合。在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合ILT4上之抗原決定基。在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合ILT4上之構象抗原決定基。在一些實施例中，ILT4結合劑不結合其他人類LILRB蛋白(例如ILT2、ILT3、ILT5或LILRB5)。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑不結合其他人類LILRB蛋白(例如ILT3、ILT5或LILRB5)。在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑不結合人類LILRA蛋白(例如LILRA1、LILRA2、LILRA4、LILRA5或LILRA6)中之一或多者。在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑不結合LILRA2、LILRA4、LILRA5或LILRA6。
在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合人類ILT4。在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合SEQ ID NO:8。在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合SEQ ID NO:9。在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合SEQ ID NO:10。在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:8之胺基酸22-461之片段。在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:8之胺基酸27-110之片段。在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:8之胺基酸111-229之片段。在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:8之胺基酸230-318之片段。在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:8之胺基酸330-419之片段。在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:8之胺基酸27-229之片段。在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:8之胺基酸111-318之片段。在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:8之胺基酸230-419之片段。在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合SEQ ID NO:11。在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合SEQ ID NO:12。在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合SEQ ID NO:13。在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合SEQ ID NO:14。在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合SEQ ID NO:11及SEQ ID NO:12。在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合SEQ ID NO:12及SEQ ID NO:13。在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合SEQ ID NO:13及SEQ ID NO:14。在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12及SEQ ID NO:13。在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13及SEQ ID NO:14。
在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:9之胺基酸序列之多肽。在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列之多肽。在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:11之胺基酸序列之多肽。在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列之多肽。在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:13之胺基酸序列之多肽。在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:14之胺基酸序列之多肽。
在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:9內之胺基酸之抗原決定基。在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:10內之胺基酸之抗原決定基。在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:11內之胺基酸之抗原決定基。在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:12內之胺基酸之抗原決定基。在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:13內之胺基酸之抗原決定基。在一些實施例中，ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑結合包含SEQ ID NO:14內之胺基酸之抗原決定基。
在一些實施例中，ILT結合劑結合人類ILT2、人類ILT4或人類ILT2/ILT4二者，且具有以下性質中之至少一或多者：(i)結合恆河猴ILT2；(ii)結合食蟹猴ILT2；(iii)不結合ILT3、ILT5及LILRB5；(iv)不結合LILRA2、LILRA4、LILRA5及LILRA6；(v)係ILT2拮抗劑；(vi)係ILT4拮抗劑，(vii)抑制ILT2活性；(viii)抑制ILT4活性；(ix)抑制表現ILT2之細胞中之ILT2信號傳導；(x)抑制表現ILT4之細胞中之ILT4信號傳導；(xi)抑制ILT2與MHC I分子之結合；(xii)抑制ILT4與MHC I分子之結合；(xiii)抑制ILT2誘導之骨髓細胞阻抑；(xiv)抑制ILT4誘導之骨髓細胞阻抑；(xv)抑制ILT2誘導之骨髓細胞活性阻抑；(xvi)抑制ILT4誘導之骨髓細胞活性阻抑；(xvii)恢復骨髓細胞中之FcR活化；(xviii)增強NK細胞活性；(xix)增強CTL活性；及/或(xx)增強巨噬細胞吞噬作用。
在一些實施例中，ILT結合劑係抗體。在一些實施例中，ILT2結合劑係抗體。在一些實施例中，ILT4結合劑係抗體。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑係抗體。在一些實施例中，ILT結合劑係抗ILT2抗體。在一些實施例中，ILT結合劑係抗ILT4抗體。在一些實施例中，ILT結合劑係抗ILT2/ILT4抗體。在一些實施例中，抗體係重組抗體。在一些實施例中，抗體係單株抗體。在一些實施例中，抗體係嵌合抗體。在一些實施例中，抗體係人類化抗體。在一些實施例中，抗體係人類抗體。在一些實施例中，抗體係IgG抗體。在一些實施例中，抗體係IgG1抗體。在一些實施例中，抗體係IgG2抗體。在一些實施例中，抗體係IgG3抗體。在一些實施例中，抗體係IgG4抗體。在一些實施例中，抗體包含IgG重鏈。在一些實施例中，抗體包含IgG1重鏈。在一些實施例中，抗體包含IgG2重鏈。在一些實施例中，抗體包含IgG4重鏈。在一些實施例中，抗體包含人類IgG重鏈。在一些實施例中，抗體包含人類IgG1重鏈。在一些實施例中，抗體包含人類IgG2重鏈。在一些實施例中，抗體包含人類IgG4重鏈。在一些實施例中，抗體包含κ輕鏈。在一些實施例中，抗體包含κ輕鏈恆定區。在一些實施例中，抗體包含人類κ輕鏈恆定區。在一些實施例中，抗體包含λ輕鏈。在一些實施例中，抗體包含λ輕鏈恆定區。在一些實施例中，抗體包含人類λ輕鏈恆定區。在一些實施例中，抗體係包含至少一個抗原結合位點之抗體片段。在一些實施例中，抗體係scFv。在一些實施例中，抗體係二硫鍵連接之scFv。在一些實施例中，抗體係二硫鍵連接之sc(Fv)2
。在一些實施例中，抗體係Fab、Fab′或F(ab)2
抗體。在一些實施例中，抗體係雙體抗體。在一些實施例中，抗體係奈米抗體。在一些實施例中，抗體係單特異性抗體。在一些實施例中，抗體係雙特異性抗體。在一些實施例中，抗體係多特異性抗體。在一些實施例中，抗體係單價抗體。在一些實施例中，抗體係二價抗體。在一些實施例中，抗體係四價抗體。
在一些實施例中，抗體係經分離的。在一些實施例中，抗體係實質上純的。
在一些實施例中，ILT結合劑(例如ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑)係多株抗體。多株抗體可藉由熟習此項技術者已知之任一方法製備。在一些實施例中，多株抗體係藉由使用多次皮下或腹膜內注射用所關注抗原(例如經純化肽片段、重組蛋白或融合蛋白)免疫動物(例如兔、大鼠、小鼠、山羊、驢)來產生。在一些實施例中，抗原結合至載體，例如鑰孔帽貝血藍蛋白(KLH)、血清白蛋白、牛甲狀腺球蛋白或大豆胰蛋白酶抑制劑。將抗原(含或不含載體蛋白)稀釋於無菌鹽水中且通常與佐劑(例如完全或不完全弗氏佐劑(Complete or Incomplete Freund's Adjuvant))合併以形成穩定乳液。一段時間後，自經免疫動物(例如自血液或腹水)回收多株抗體。在一些實施例中，根據此項技術中之標準方法自血清或腹水純化多株抗體，該等標準方法包括(但不限於)親和層析、離子交換層析、凝膠電泳及/或透析。
在一些實施例中，ILT結合劑(例如ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑)係單株抗體。單株抗體可藉由熟習此項技術者已知之任一方法製備。在一些實施例中，單株抗體係使用熟習此項技術者已知之雜交瘤方法製備。舉例而言，使用雜交瘤方法，如上文所述免疫小鼠、大鼠、兔、倉鼠或其他適宜宿主動物。在一些實施例中，在活體外免疫淋巴球。在一些實施例中，免疫抗原係人類蛋白或其片段。在一些實施例中，免疫抗原係小鼠蛋白或其片段。在一些實施例中，免疫抗原係恆河猴蛋白或其片段。在一些實施例中，免疫抗原係食蟹猴蛋白或其片段。在一些實施例中，免疫抗原係兩種或更多種(例如2種、3種、4種)相關蛋白質或其片段之組合。
免疫後，將淋巴球分離且使用例如聚乙二醇與適宜骨髓瘤細胞株融合。使用如此項技術中已知之專門培養基選擇雜交瘤細胞，且未融合之淋巴球及骨髓瘤細胞無法在選擇過程中存活。產生針對所選抗原之單株抗體之雜交瘤可藉由多種方法來鑑別，包括(但不限於)免疫沈澱、免疫印跡及活體外結合分析(例如流式細胞術、FACS、ELISA、SPR (例如Biacore)及放射性免疫分析)。一旦鑑別出產生期望特異性、親和力及/或活性之抗體之雜交瘤細胞，便可立即藉由限制性稀釋技術對純系進行亞選殖。在一些實施例中，使用高通量方法將單細胞雜交瘤細胞分佈至板中。雜交瘤可使用標準方法在活體外培養物中繁殖或作為動物腹水腫瘤在活體內繁殖。可根據此項技術中之標準方法自培養基或腹水純化單株抗體，該等標準方法包括(但不限於)親和層析、離子交換層析、凝膠電泳及透析。
在一些實施例中，單株抗體係使用如熟習此項技術者已知之重組DNA技術製造。舉例而言，例如藉由RT-PCR使用特異性擴增編碼抗體重鏈及輕鏈之基因之寡核苷酸引子自成熟B細胞或雜交瘤細胞分離編碼抗體之多核苷酸，且使用標準技術測定其序列。然後將編碼重鏈及輕鏈之經分離多核苷酸選殖至適宜表現載體中，該等適宜表現載體在轉染至原本不產生免疫球蛋白之宿主細胞(例如大腸桿菌(E. coli
)、猿猴COS細胞、中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或骨髓瘤細胞)中時產生單株抗體。
在一些實施例中，自表現期望物種之可變結構域或CDR之噬菌體展示文庫分離重組單株抗體。篩選噬菌體文庫可藉由此項技術中已知之多種技術來完成。
在一些實施例中，藉由使用重組DNA技術修飾單株抗體以生成替代性抗體。在一些實施例中，用小鼠單株抗體之輕鏈及重鏈之恆定結構域取代人類抗體之恆定區以生成嵌合抗體。在一些實施例中，恆定區經截短或去除以生成單株抗體之期望抗體片段。在一些實施例中，使用可變區之定點誘變或高密度誘變來最佳化單株抗體之特異性及親和力。
在一些實施例中，ILT結合劑(例如ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑)係人類化抗體。多種生成人類化抗體之方法為此項技術中已知。在一些實施例中，人類化抗體包含一或多個胺基酸殘基，該一或多個胺基酸殘基從非人類來源引入其中。在一些實施例中，人類化係藉由用一或多個非人類CDR序列取代人類抗體之相應CDR序列來實施。在一些實施例中，人類化抗體係藉由用非人類抗體(例如小鼠抗體)之所有六個CDR取代人類抗體之相應CDR來構築。
用於生成人類化抗體之人類重鏈可變區及/或輕鏈可變區之選擇可基於多個因素且藉由此項技術中已知之多種方法來進行。在一些實施例中，使用「最佳擬合」方法，其中針對已知人類可變區序列之整個文庫篩選非人類(例如嚙齒類動物)抗體之可變區序列。選擇與非人類(例如嚙齒類動物)序列最相似之人類序列作為人類化抗體之人類可變區框架。在一些實施例中，選擇衍生自輕鏈或重鏈之特定子組之所有人類抗體之共有序列的特定可變區框架作為可變區框架。在一些實施例中，可變區框架序列衍生自最豐富的人類子類之共有序列。在一些實施例中，使用人類生殖系基因作為可變區框架序列之來源。
其他人類化方法包括(但不限於)闡述為CDR直接轉移至人類生殖系框架之稱為「超人類化」之方法、基於「抗體人類性」度量之稱為人類串含量(Human String Content，HSC)之方法、基於生成大人類化變異體文庫(包括噬菌體、核糖體及酵母菌展示文庫)之方法及基於框架區改組之方法。
在一些實施例中，ILT結合劑(例如ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑)係人類抗體。人類抗體可使用此項技術中已知之多種技術來製備。在一些實施例中，人類抗體係自活體外免疫之無限增殖之人類B淋巴球生成。在一些實施例中，人類抗體係自經免疫個體分離之淋巴球生成。在任一情形下，可生成並分離產生針對靶抗原之抗體之細胞。在一些實施例中，人類抗體係選自噬菌體文庫，其中該噬菌體文庫表現人類抗體。替代地，可使用噬菌體展示技術自未經免疫之人類供體之免疫球蛋白可變區基因譜在活體外產生人類抗體及抗體片段。用於生成及使用抗體噬菌體文庫之技術為此項技術中所熟知。一旦鑑別出抗體，便可立即採用此項技術中已知之親和突變策略(包括但不限於鏈改組及定點誘變)來生成更高親和力之人類抗體。在一些實施例中，人類抗體係在含有人類免疫球蛋白基因座之基因轉殖小鼠中產生。免疫後，該等小鼠能夠在不產生內源免疫球蛋白下產生全人類抗體譜。
在一些實施例中，ILT結合劑(例如ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑)係抗體片段。如本文所用之術語「抗體片段」係指包含抗體之一部分且通常至少一個抗原結合位點之並非完整抗體之分子。抗體片段之實例包括(但不限於) Fab、Fab′、F(ab′)2、Fv、單鏈抗體分子(例如scFv)、二硫鍵連接之scFv (dsscFv)、奈米抗體、雙體抗體、三體抗體、四體抗體、微小抗體、雙重可變結構域抗體(DVD)、單一可變結構域抗體(例如駱駝科抗體)及由抗體片段形成之多特異性抗體。
在一些實施例中，ILT結合劑係scFv抗體。在一些實施例中，scFv係二硫鍵連接之scFv (dsscFv)，其係包含scFv之輕鏈可變區與重鏈可變區之間之經改造二硫鍵之scFv。在一些實施例中，二硫鍵增加scFv分子之穩定性。在一些實施例中，二硫鍵增加scFv分子之熱穩定性。
在一些實施例中，ILT結合劑係Fv。在一些實施例中，ILT結合劑係Fab。在一些實施例中，ILT結合劑係F(ab′)2
。在一些實施例中，ILT結合劑係F(ab′)。
抗體片段可藉由多種技術來製造，包括(但不限於)完整抗體之蛋白水解消化。本文所述之抗體片段可使用此項技術中已知之重組技術(例如大腸桿菌或噬菌體表現)來產生。
在一些實施例中，ILT結合劑(例如ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑)係雙特異性抗體。雙特異性抗體能夠識別並結合至少兩種不同之抗原或抗原決定基。不同之抗原決定基可在同一分子內(例如ILT2上之兩個抗原決定基)或不同分子上(例如ILT2上之一個抗原決定基及不同靶上之第二抗原決定基)。在一些實施例中，雙特異性抗體與個別抗體或與一種以上抗體之組合相比具有增強的效力。在一些實施例中，雙特異性抗體與個別抗體或與一種以上抗體之組合相比具有降低的毒性。熟習此項技術者已知，任一治療劑可具有獨特的藥物動力學(PK) (例如循環半衰期)。在一些實施例中，雙特異性抗體具有同步化兩種活性結合劑之PK之能力，其中兩種個別結合劑具有不同的PK概況。在一些實施例中，雙特異性抗體具有使兩種劑之作用集中在個體之共同區域(例如組織)之能力。在一些實施例中，雙特異性抗體具有使兩種劑之作用集中於共同靶(例如特定細胞類型)之能力。在一些實施例中，雙特異性抗體具有使兩種劑之作用靶向一種以上之生物路徑或功能之能力。在一些實施例中，雙特異性抗體具有靶向兩種不同細胞且使其靠在一起之能力。
在一些實施例中，雙特異性抗體具有減小的毒性及/或副作用。在一些實施例中，雙特異性抗體與兩種個別抗體之混合物或呈單一劑之抗體相比具有減小的毒性及/或副作用。在一些實施例中，雙特異性抗體具有增加的治療指數。在一些實施例中，雙特異性抗體與兩種個別抗體之混合物或呈單一劑之抗體相比具有增加的治療指數。
許多製造雙特異性抗體之技術為熟習此項技術者已知。在一些實施例中，雙特異性抗體包含具有胺基酸修飾之重鏈恆定區，該等胺基酸係兩條重鏈之間之界面之一部分。進行該等修飾以增強異二聚體形成且通常降低或消除同二聚體形成。在一些實施例中，雙特異性抗體係使用旋鈕入孔(KIH)策略來生成。在一些實施例中，雙特異性抗體包含無法在相同重鏈之間形成二硫鍵之變異體鉸鏈區(例如減少同二聚體形成)。在一些實施例中，雙特異性抗體包含具有產生改變的靜電相互作用之胺基酸變化之重鏈。在一些實施例中，雙特異性抗體包含具有產生改變的疏水/親水相互作用之胺基酸變化之重鏈。
雙特異性抗體可為完整抗體或包含抗原結合位點之抗體片段。
在一些實施例中，ILT結合劑係結合ILT2之抗體。在一些實施例中，抗ILT抗體結合人類ILT2。在一些實施例中，抗ILT抗體結合食蟹猴ILT2。在一些實施例中，抗ILT抗體結合恆河猴ILT2。在一些實施例中，抗ILT抗體結合人類ILT2及食蟹猴ILT2。在一些實施例中，抗ILT抗體結合人類ILT2及恆河猴ILT2。在一些實施例中，抗ILT抗體結合人類ILT2、恆河猴ILT2及食蟹猴ILT2。在一些實施例中，抗ILT2抗體結合ILT2抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT2抗體結合人類ILT2之細胞外結構域內之ILT2抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT2抗體結合食蟹猴ILT2之細胞外結構域內之ILT2抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT2抗體結合恆河猴ILT2之細胞外結構域內之ILT2抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT2抗體結合包含SEQ ID NO:1之胺基酸24-461內之至少一個胺基酸(例如1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個)之抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT2抗體結合包含SEQ ID NO:1之胺基酸27-115內之至少一個胺基酸(例如1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個)之抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT2抗體結合包含SEQ ID NO:1之胺基酸116-221內之至少一個胺基酸(例如1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個)之抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT2抗體結合包含SEQ ID NO:1之胺基酸222-312內之至少一個胺基酸(例如1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個)之抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT2抗體結合包含SEQ ID NO:1之胺基酸313-409內之至少一個胺基酸(例如1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個)之抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT2抗體結合包含SEQ ID NO:3內之胺基酸之抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT2抗體結合包含SEQ ID NO:4內之胺基酸之抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT2抗體結合包含SEQ ID NO:5內之胺基酸之抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT2抗體結合包含SEQ ID NO:6內之胺基酸之抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT2抗體結合包含SEQ ID NO:7內之胺基酸之抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT2抗體結合包含SEQ ID NO:15之胺基酸24-460內之至少一個胺基酸(例如1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個)之抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT2抗體結合包含SEQ ID NO:15之胺基酸27-114內之至少一個胺基酸(例如1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個)之抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT2抗體結合包含SEQ ID NO:15之胺基酸115-220內之至少一個胺基酸(例如1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個)之抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT2抗體結合包含SEQ ID NO:15之胺基酸221-311內之至少一個胺基酸(例如1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個)之抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT2抗體結合包含SEQ ID NO:15之胺基酸312-408內之至少一個胺基酸(例如1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個)之抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT2抗體結合包含SEQ ID NO:17內之胺基酸之抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT2抗體結合包含SEQ ID NO:18內之胺基酸之抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT2抗體結合包含SEQ ID NO:19內之胺基酸之抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT2抗體結合包含SEQ ID NO:20內之胺基酸之抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT2抗體結合包含SEQ ID NO:21內之胺基酸之抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT2抗體結合包含SEQ ID NO:166之胺基酸24-461內之至少一個胺基酸(例如1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個)之抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT2抗體結合包含SEQ ID NO:166之胺基酸27-114內之至少一個胺基酸(例如1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個)之抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT2抗體結合包含SEQ ID NO:166之胺基酸115-220內之至少一個胺基酸(例如1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個)之抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT2抗體結合包含SEQ ID NO:166之胺基酸221-311內之至少一個胺基酸(例如1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個)之抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT2抗體結合包含SEQ ID NO:166之胺基酸312-408內之至少一個胺基酸(例如1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個)之抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT2抗體結合包含SEQ ID NO:168內之胺基酸之抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT2抗體結合包含SEQ ID NO:169內之胺基酸之抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT2抗體結合包含SEQ ID NO:170內之胺基酸之抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT2抗體結合包含SEQ ID NO:171內之胺基酸之抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT2抗體結合包含SEQ ID NO:172內之胺基酸之抗原決定基。在一些實施例中，抗原決定基係構象抗原決定基。在一些實施例中，抗原決定基係線性抗原決定基。
在一些實施例中，ILT結合劑係結合ILT4之抗體。在一些實施例中，抗ILT抗體結合人類ILT4。在一些實施例中，抗ILT4抗體結合ILT4抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT4抗體結合人類ILT4之細胞外結構域內之ILT4抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT4抗體結合包含SEQ ID NO:8之胺基酸22-461內之至少一個胺基酸(例如1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個)之抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT4抗體結合包含SEQ ID NO:8之胺基酸27-110內之至少一個胺基酸(例如1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個)之抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT4抗體結合包含SEQ ID NO:8之胺基酸111-229內之至少一個胺基酸(例如1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個)之抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT4抗體結合包含SEQ ID NO:8之胺基酸230-318內之至少一個胺基酸(例如1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個)之抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT4抗體結合包含SEQ ID NO:8之胺基酸330-419內之至少一個胺基酸(例如1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個)之抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT4抗體結合包含SEQ ID NO:9內之胺基酸之抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT4抗體結合包含SEQ ID NO:10內之胺基酸之抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT4抗體結合包含SEQ ID NO:11內之胺基酸之抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT4抗體結合包含SEQ ID NO:12內之胺基酸之抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT4抗體結合包含SEQ ID NO:13內之胺基酸之抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT4抗體結合包含SEQ ID NO:14內之胺基酸之抗原決定基。在一些實施例中，抗原決定基係構象抗原決定基。在一些實施例中，抗原決定基係線性抗原決定基。
在一些實施例中，ILT結合劑係結合ILT2及ILT4之抗體。熟習此項技術者應理解，結合ILT2及ILT4之抗體(闡述為雙重結合劑)包含至少一個結合ILT2及ILT4二者上之抗原決定基之抗原結合位點，與將包含結合ILT2上之抗原決定基之一個抗原結合位點及結合ILT4上之不同抗原決定基之第二抗原結合位點的雙特異性抗體不同。在一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體結合人類ILT2及人類ILT4。在一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體結合人類ILT2、人類ILT4、食蟹猴ILT2及恆河猴ILT2。在一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體結合ILT2抗原決定基及ILT4抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體結合人類ILT2之細胞外結構域內之抗原決定基及人類ILT4之細胞外結構域內之抗原決定基，其中ILT2抗原決定基及ILT4抗原決定基係相同或基本上相同的。在一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體結合人類ILT2之細胞外結構域內之ILT2抗原決定基、人類ILT4之細胞外結構域內之ILT4抗原決定基、食蟹猴ILT2之細胞外結構域內之ILT2抗原決定基及恆河猴ILT2之細胞外結構域內之ILT2抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體結合包含SEQ ID NO:1之胺基酸24-461內之至少一個胺基酸(例如1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個)之抗原決定基及SEQ ID NO:8之胺基酸22-461內之相同或基本上相同的抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體結合包含SEQ ID NO:1之胺基酸27-115內之至少一個胺基酸(例如1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個)之抗原決定基及SEQ ID NO:8之胺基酸27-110內之相同或基本上相同的抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體結合包含SEQ ID NO:1之胺基酸116-221內之至少一個胺基酸(例如1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個)之抗原決定基及SEQ ID NO:8之胺基酸111-229內之相同或基本上相同的抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體結合包含SEQ ID NO:1之胺基酸222-312內之至少一個胺基酸(例如1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個)之抗原決定基及SEQ ID NO:8之胺基酸230-318內之相同或基本上相同的抗原決定基。在一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體結合包含SEQ ID NO:1之胺基酸313-409內之至少一個胺基酸(例如1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個)之抗原決定基及SEQ ID NO:8之胺基酸330-419內之相同或基本上相同的抗原決定基。在一些實施例中，抗原決定基係構象抗原決定基。在一些實施例中，抗原決定基係線性抗原決定基。
在一些實施例中，ILT結合劑係本文所述之抗ILT2抗體、抗ILT4抗體或抗ILT2/ILT4抗體。在一些實施例中，ILT結合劑係本文所述之抗ILT2抗體、抗ILT4抗體或抗ILT2/ILT4抗體之變異體。在一些實施例中，抗ILT抗體之變異體包含1至30個胺基酸取代。在一些實施例中，抗ILT抗體之變異體包含1至25個胺基酸取代。在一些實施例中，抗ILT抗體之變異體包含1至20個胺基酸取代。在一些實施例中，抗ILT抗體之變異體包含1至15個胺基酸取代。在一些實施例中，抗ILT抗體之變異體包含1至10個胺基酸取代。在一些實施例中，抗ILT抗體之變異體包含1至5個胺基酸取代。在一些實施例中，抗ILT抗體之變異體包含1至3個胺基酸取代。在一些實施例中，胺基酸取代處於抗體之CDR中。在一些實施例中，胺基酸取代並非處於抗體之CDR中。在一些實施例中，胺基酸取代處於抗體之框架區中。在一些實施例中，胺基酸取代係保守胺基酸取代。
抗體之CDR係由熟習此項技術者使用多種方法/系統來定義。該等系統及/或定義已經過多年之發展及細化且包括Kabat、Chothia、IMGT、AbM及Contact。Kabat定義係基於序列可變性且係常用的。Chothia定義係基於結構環區之位置。IMGT系統係基於可變結構域之結構內之序列可變性及位置。AbM定義係Kabat與Chothia之間之折衷。Contact定義係基於可獲得抗體晶體結構之分析。例示性系統係Kabat及Chothia之組合。軟體程式(例如abYsis)可為熟習此項技術者獲得且已知用於分析抗體序列及測定CDR。
本文所定義之特定CDR序列通常係基於Kabat及Chothia定義之組合(例示性定義)。然而，應理解，對特定抗體之一或多個重鏈可變區CDR及/或一或多個輕鏈可變區CDR之提及將涵蓋如熟習此項技術者已知之所有CDR定義。
在一些實施例中，基於Kabat定義，本文所述之抗ILT抗體包含抗體27F9、47C8、48A5、47H6、Hz47H6.v2、51A1、64A12、Hz64A12、73C4、73D1或Hz73D1.v1之六個CDR。在一些實施例中，基於Chothia定義，本文所述之抗ILT抗體包含抗體27F9、47C8、48A5、47H6、Hz47H6.v2、51A1、64A12、Hz64A12、73C4、73D1或Hz73D1.v1之六個CDR。在一些實施例中，基於AbM定義，本文所述之抗ILT抗體包含抗體27F9、47C8、48A5、47H6、Hz47H6.v2、51A1、64A12、Hz64A12、73C4、73D1或Hz73D1.v1之六個CDR。在一些實施例中，基於IMGT定義，本文所述之抗ILT抗體包含抗體27F9、47C8、48A5、47H6、Hz47H6.v2、51A1、64A12、Hz64A12、73C4、73D1或Hz73D1.v1之六個CDR。在一些實施例中，基於Contact定義，本文所述之抗ILT抗體包含抗體27F9、47C8、48A5、47H6、Hz47H6.v2、51A1、64A12、Hz64A12、73C4、73D1或Hz73D1.v1之六個CDR。在一些實施例中，基於例示性定義，本文所述之抗ILT抗體包含抗體27F9、47C8、48A5、47H6、Hz47H6.v2、51A1、64A12、Hz64A12、73C4、73D1或Hz73D1.v1之六個CDR。
在一些實施例中，ILT結合劑係包含本文所述抗體中任一者之一個、兩個、三個、四個、五個及/或六個CDR之抗ILT抗體(例如抗ILT2抗體、抗ILT4抗體或抗ILT2/ILT4抗體)。在一些實施例中，抗ILT2抗體包含(i)含有一個、兩個及/或三個來自表1之重鏈可變區CDR之重鏈可變區，及/或(ii)含有一個、兩個及/或三個來自表1之輕鏈可變區CDR之輕鏈可變區。在一些實施例中，抗ILT4抗體包含(i)含有一個、兩個及/或三個來自表2之重鏈可變區CDR之重鏈可變區，及/或(ii)含有一個、兩個及/或三個來自表2之輕鏈可變區CDR之輕鏈可變區。在一些實施例中，抗ILT4抗體包含(i)含有一個、兩個及/或三個來自表3之重鏈可變區CDR之重鏈可變區，及/或(ii)含有一個、兩個及/或三個來自表3之輕鏈可變區CDR之輕鏈可變區。在一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體包含(i)含有一個、兩個及/或三個來自表4A或表4B之重鏈可變區CDR之重鏈可變區，及/或(ii)含有一個、兩個及/或三個來自表4A或表4B之輕鏈可變區CDR之輕鏈可變區。在一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體包含(i)含有一個、兩個及/或三個來自表5之重鏈可變區CDR之重鏈可變區，及/或(ii)含有一個、兩個及/或三個來自表5之輕鏈可變區CDR之輕鏈可變區。在一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體包含(i)含有一個、兩個及/或三個來自表6A或表6B之重鏈可變區CDR之重鏈可變區，及/或(ii)含有一個、兩個及/或三個來自表6A或表6B之輕鏈可變區CDR之輕鏈可變區。在一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體包含(i)含有一個、兩個及/或三個來自表7之重鏈可變區CDR之重鏈可變區，及/或(ii)含有一個、兩個及/或三個來自表7之輕鏈可變區CDR之輕鏈可變區。在一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體包含(i)含有一個、兩個及/或三個來自表8A或表8B之重鏈可變區CDR之重鏈可變區，及/或(ii)含有一個、兩個及/或三個來自表8A或表8B之輕鏈可變區CDR之輕鏈可變區。在一些實施例中，抗ILT2抗體包含(i)含有三個來自表1之重鏈可變區CDR之重鏈可變區，及(ii)含有三個來自表1之輕鏈可變區CDR之輕鏈可變區。在一些實施例中，抗ILT4抗體包含(i)含有三個來自表2之重鏈可變區CDR之重鏈可變區，及(ii)含有三個來自表2之輕鏈可變區CDR之輕鏈可變區。在一些實施例中，抗ILT4抗體包含(i)含有三個來自表3之重鏈可變區CDR之重鏈可變區，及(ii)含有三個來自表3之輕鏈可變區CDR之輕鏈可變區。在一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體包含(i)含有三個來自表4A之重鏈可變區CDR之重鏈可變區，及(ii)含有三個來自表4A之輕鏈可變區CDR之輕鏈可變區。在一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體包含(i)含有三個來自表4B之重鏈可變區CDR之重鏈可變區，及(ii)含有三個來自表4B之輕鏈可變區CDR之輕鏈可變區。在一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體包含(i)含有三個來自表5之重鏈可變區CDR之重鏈可變區，及(ii)含有三個來自表5之輕鏈可變區CDR之輕鏈可變區。在一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體包含(i)含有三個來自表6A之重鏈可變區CDR之重鏈可變區，及(ii)含有三個來自表6A之輕鏈可變區CDR之輕鏈可變區。在一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體包含(i)含有三個來自表6B之重鏈可變區CDR之重鏈可變區，及(ii)含有三個來自表6B之輕鏈可變區CDR之輕鏈可變區。在一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體包含(i)含有三個來自表7之重鏈可變區CDR之重鏈可變區，及(ii)含有三個來自表7之輕鏈可變區CDR之輕鏈可變區。在一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體包含(i)含有三個來自表8A之重鏈可變區CDR之重鏈可變區，及(ii)含有三個來自表8B之輕鏈可變區CDR之輕鏈可變區。在一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體包含(i)含有三個來自表8B之重鏈可變區CDR之重鏈可變區，及(ii)含有三個來自表8B之輕鏈可變區CDR之輕鏈可變區。
表1：抗ILT2抗體27F9序列
表2：抗ILT4抗體47C8序列
表3：抗ILT4抗體48A5序列
表4A：抗ILT2/ILT4抗體47H6序列
表4B：抗ILT2/ILT4抗體Hz47H6.v2序列
表5：抗ILT2/ILT4抗體51A1序列
表6A：抗ILT2/ILT4抗體64A12序列
表6B：抗ILT2/ILT4抗體Hz64A12序列
表7：抗ILT2/ILT4抗體73C4序列
表8A：抗ILT2/ILT4抗體73D1序列
表8B：抗ILT2/ILT4抗體Hz73D1.v1序列
| 例示性 | Chothia | AbM | Kabat | Contact | |
| 重鏈可變區CDR1 | GFSLTNYGVS (SEQ ID NO:22) | GFSLTNY (SEQ ID NO:28) | GFSLTNYGVS (SEQ ID NO:22) | NYGVS (SEQ ID NO:31) | TNYGVS (SEQ ID NO:32) |
| 重鏈可變區CDR2 | IIWGDGSTNYHSALIS (SEQ ID NO:23) | WGDGS (SEQ ID NO:29) | IIWGDGSTN (SEQ ID NO:30) | IIWGDGSTNYHSALIS (SEQ ID NO:23) | WLGIIWGDGSTN (SEQ ID NO:33) |
| 重鏈可變區 CDR3 | PNWDTYAMDF (SEQ ID NO:24) | PNWDTYAMDF (SEQ ID NO:24) | PNWDTYAMDF (SEQ ID NO:24) | PNWDTYAMDF (SEQ ID NO:24) | AKPNWDTYAMD (SEQ ID NO:34) |
| 輕鏈可變區 CDR1 | RASQDISNFLN (SEQ ID NO:25) | RASQDISNFLN (SEQ ID NO:25) | RASQDISNFLN (SEQ ID NO:25) | RASQDISNFLN (SEQ ID NO:25) | SNFLNWY (SEQ ID NO:35) |
| 輕鏈可變區CDR2 | CTSKLHS (SEQ ID NO:26) | CTSKLHS (SEQ ID NO:26) | CTSKLHS (SEQ ID NO:26) | CTSKLHS (SEQ ID NO:26) | LLIYCTSKLH (SEQ ID NO:36) |
| 輕鏈可變區CDR3 | QQGNTLPPT (SEQ ID NO:27) | QQGNTLPPT (SEQ ID NO:27) | QQGNTLPPT (SEQ ID NO:27) | QQGNTLPPT (SEQ ID NO:27) | QQGNTLPP (SEQ ID NO:37) |
| 27F9重鏈可變區(SEQ ID NO:125) QVQLKESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVSWVRQPPGKGLEWLGIIWGDGSTNYH SALISRLSISKDNSKSQVFLKLNSLQADDTATYYCAKPNWDTYAMDFWGQGTSVTVSS | |||||
| 27F9輕鏈可變區(SEQ ID NO:126) DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISNFLNWYQQKPDGTVKLLIYCTSKLHSGVPS RFSGSGSETDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPPTFGGGTKLEII |
| 例示性 | Chothia | AbM | Kabat | Contact | |
| 重鏈可變區CDR1 | GYSFTGYYMH (SEQ ID NO:38) | GYSFTGY (SEQ ID NO:44) | GYSFTGYYMH (SEQ ID NO:38) | GYYMH (SEQ ID NO:47) | TGYYMH (SEQ ID NO:48) |
| 重鏈可變區CDR2 | RVYPNNGDTSYNQKFKV (SEQ ID NO:39) | YPNNGD (SEQ ID NO:45) | RVYPNNGDTS (SEQ ID NO:46) | RVYPNNGDTSYNQKFKV (SEQ ID NO:39) | WIGRVYPNNGDTS (SEQ ID NO:49) |
| 重鏈可變區CDR3 | GATVVESLFAY (SEQ ID NO:40) | GATVVESLFAY (SEQ ID NO:40) | GATVVESLFAY (SEQ ID NO:40) | GATVVESLFAY (SEQ ID NO:40) | ARGATVVESLFA (SEQ ID NO:50) |
| 輕鏈可變區CDR1 | RASESVDNYGNNFLH (SEQ ID NO:41) | RASESVDNYGNNFLH (SEQ ID NO:41) | RASESVDNYGNNFLH (SEQ ID NO:41) | RASESVDNYGNNFLH (SEQ ID NO:41) | DNYGNNFLHWY (SEQ ID NO:51) |
| 輕鏈可變區 CDR2 | RTSNLES (SEQ ID NO:42) | RTSNLES (SEQ ID NO:42) | RTSNLES (SEQ ID NO:42) | RTSNLES (SEQ ID NO:42) | LLIYRTSNLE (SEQ ID NO:52) |
| 輕鏈可變區 CDR3 | QQSNEDPYT (SEQ ID NO:43) | QQSNEDPYT (SEQ ID NO:43) | QQSNEDPYT (SEQ ID NO:43) | QQSNEDPYT (SEQ ID NO:43) | QQSNEDPY (SEQ ID NO:53) |
| 47C8重鏈可變區(SEQ ID NO:127) EVQLQQSGPDLVKPGASVKISCKASGYSFTGYYMHWVKQSHGKSLEWIGRVYPNNGDTSY NQKFKVKAILTVDKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCARGATVVESLFAYWGQGTLVTVSA | |||||
| 47C8輕鏈可變區(SEQ ID NO:128) DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDNYGNNFLHWYQQKPGQPPKLLIYRTSNLES GIPARFSGSGSRTDFTLTINPVEADDVATYYCQQSNEDPYTFGGGTKLEIK |
| 例示性 | Chothia | AbM | Kabat | Contact | |
| 重鏈可變區CDR1 | GYTFTNYGMN (SEQ ID NO:54) | GYTFTNY (SEQ ID NO:60) | GYTFTNYGMN (SEQ ID NO:54) | NYGMN (SEQ ID NO:63) | TNYGMN (SEQ ID NO:64) |
| 重鏈可變區CDR2 | WINTYIGEPIYADDFKG (SEQ ID NO:55) | NTYIGE (SEQ ID NO:61) | WINTYIGEPI (SEQ ID NO:62) | WINTYIGEPIYADDFKG (SEQ ID NO:55) | WMGWINTYIGEPI (SEQ ID NO:65) |
| 重鏈可變區 CDR3 | RSDYDGYAMDY (SEQ ID NO:56) | RSDYDGYAMDY (SEQ ID NO:56) | RSDYDGYAMDY (SEQ ID NO:56) | RSDYDGYAMDY (SEQ ID NO:56) | ARRSDYDGYAMD (SEQ ID NO:66) |
| 輕鏈可變區 CDR1 | KSSQSLLYSGNQKNYLA (SEQ ID NO:57) | KSSQSLLYSGNQKNYLA (SEQ ID NO:57) | KSSQSLLYSGNQKNYLA (SEQ ID NO:57) | KSSQSLLYSGNQKNYLA (SEQ ID NO:57) | LYSGNQKNYLAWY (SEQ ID NO:67) |
| 輕鏈可變區 CDR2 | WASTRES (SEQ ID NO:58) | WASTRES (SEQ ID NO:58) | WASTRES (SEQ ID NO:58) | WASTRES (SEQ ID NO:58) | LLIYWASTRE (SEQ ID NO:68) |
| 輕鏈可變區 CDR3 | QQHDSYPT (SEQ ID NO:59) | QQHDSYPT (SEQ ID NO:59) | QQHDSYPT (SEQ ID NO:59) | QQHDSYPT (SEQ ID NO:59) | QQHDSYP (SEQ ID NO:69) |
| 48A5重鏈可變區(SEQ ID NO:129) QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTNYGMNWVKQAPGKGLKWMGWINTYIGEPIY ADDFKGRFAFSLETSASTAYLQINNLKNEDMATYFCARRSDYDGYAMDYWGQGTSVTVSS | |||||
| 48A5輕鏈可變區(SEQ ID NO:130) DIVMSQSPSSLAVSVGERVTMSCKSSQSLLYSGNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTR ESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVKAEDLAVYYCQQHDSYPTFGGGSRLEIK |
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| 重鏈可變區CDR1 | GYTFTDYYMN (SEQ ID NO:70) | GYTFTDY (SEQ ID NO:76) | GYTFTDYYMN (SEQ ID NO:70) | DYYMN (SEQ ID NO:79) | TDYYMN (SEQ ID NO:80) |
| 重鏈可變區CDR2 | DFNPNNGGTTYNQKFEG (SEQ ID NO:71) | NPNNGG (SEQ ID NO:77) | DFNPNNGGTT (SEQ ID NO:78) | DFNPNNGGTTYNQKFEG (SEQ ID NO:71) | WIGDFNPNNGGTT (SEQ ID NO:81) |
| 重鏈可變區CDR3 | GRFYYGSLYSFDY (SEQ ID NO:72) | GRFYYGSLYSFDY (SEQ ID NO:72) | GRFYYGSLYSFDY (SEQ ID NO:72) | GRFYYGSLYSFDY (SEQ ID NO:72) | ARGRFYYGSLYSFD (SEQ ID NO:82) |
| 輕鏈可變區CDR1 | RASGNIHNYLA (SEQ ID NO:73) | RASGNIHNYLA (SEQ ID NO:73) | RASGNIHNYLA (SEQ ID NO:73) | RASGNIHNYLA (SEQ ID NO:73) | HNYLAWY (SEQ ID NO:83) |
| 輕鏈可變區 CDR2 | NAKTLAD (SEQ ID NO:74) | NAKTLAD (SEQ ID NO:74) | NAKTLAD (SEQ ID NO:74) | NAKTLAD (SEQ ID NO:74) | LLVYNAKTLA (SEQ ID NO:84) |
| 輕鏈可變區 CDR3 | QHFWTSIT (SEQ ID NO:75) | QHFWTSIT (SEQ ID NO:75) | QHFWTSIT (SEQ ID NO:75) | QHFWTSIT (SEQ ID NO:75) | QHFWTSI (SEQ ID NO:85) |
| 47H6重鏈可變區(SEQ ID NO:131) EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYTFTDYYMNWVKQSHGKSLEWIGDFNPNNGGTTY NQKFEGKATLTVDKSSNTAYMDLRSLTSEDSAVYYCARGRFYYGSLYSFDYWGQGTTLTVSS | |||||
| 47H6輕鏈可變區(SEQ ID NO:132) DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASGNIHNYLAWYQQKQGKSPHLLVYNAKTLADGVPS RFSGSGSGTQYSLKINNLQPEDFGSYYCQHFWTSITFGAGTKLDLK |
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| 重鏈可變區CDR1 | GYTFTDYYMN (SEQ ID NO:70) | GYTFTDY (SEQ ID NO:76) | GYTFTDYYMN (SEQ ID NO:70) | DYYMN (SEQ ID NO:79) | TDYYMN (SEQ ID NO:80) |
| 重鏈可變區CDR2 | DFNPNNAGTTYNQKFEG (SEQ ID NO:118) | NPNNAG (SEQ ID NO:119) | DFNPNNAGTT (SEQ ID NO:120) | DFNPNNAGTTYNQKFEG (SEQ ID NO:118) | WIGDFNPNNAGTT (SEQ ID NO:121) |
| 重鏈可變區CDR3 | GRFYYGSLYSFDY (SEQ ID NO:72) | GRFYYGSLYSFDY (SEQ ID NO:72) | GRFYYGSLYSFDY (SEQ ID NO:72) | GRFYYGSLYSFDY (SEQ ID NO:72) | ARGRFYYGSLYSFD (SEQ ID NO:82) |
| 輕鏈可變區CDR1 | RASGNIHNYLA (SEQ ID NO:73) | RASGNIHNYLA (SEQ ID NO:73) | RASGNIHNYLA (SEQ ID NO:73) | RASGNIHNYLA (SEQ ID NO:73) | HNYLAWY (SEQ ID NO:83) |
| 輕鏈可變區 CDR2 | NAKTLAD (SEQ ID NO:74) | NAKTLAD (SEQ ID NO:74) | NAKTLAD (SEQ ID NO:74) | NAKTLAD (SEQ ID NO:74) | LLIYNAKTLA (SEQ ID NO:122) |
| 輕鏈可變區 CDR3 | QHFWTSIT (SEQ ID NO:75) | QHFWTSIT (SEQ ID NO:75) | QHFWTSIT (SEQ ID NO:75) | QHFWTSIT (SEQ ID NO:75) | QHFWTSI (SEQ ID NO:85) |
| Hz47H6.v2重鏈可變區(SEQ ID NO:133) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYMNWVRQAPGQRLEWIGDFNPNNAGTTYN QKFEGRVTITVDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGRFYYGSLYSFDYWGQGTLVTVSS | |||||
| Hz47H6.v2輕鏈可變區(SEQ ID NO:134) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASGNIHNYLAWYQQKPGKAPKLLIYNAKTLADGVPSR FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWTSITFGPGTKVDIK |
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| 重鏈可變區CDR1 | GFTFNTYAMH (SEQ ID NO:86) | GFTFNTY (SEQ ID NO:92) | GFTFNTYAMH (SEQ ID NO:86) | TYAMH (SEQ ID NO:95) | NTYAMH (SEQ ID NO:96) |
| 重鏈可變區CDR2 | RIRSKSSNYATYYADSVKD (SEQ ID NO:87) | RSKSSNYA (SEQ ID NO:93) | RIRSKSSNYATY (SEQ ID NO:94) | RIRSKSSNYATYYADSVKD (SEQ ID NO:87) | WVARIRSKSSNYATY (SEQ ID NO:97) |
| 重鏈可變區 CDR3 | DGIYYYGTMYYYAMDY (SEQ ID NO:88) | DGIYYYGTMYYYAMDY (SEQ ID NO:88) | DGIYYYGTMYYYAMDY (SEQ ID NO:88) | DGIYYYGTMYYYAMDY (SEQ ID NO:88) | VRDGIYYYGTMYYYAMD (SEQ ID NO:98) |
| 輕鏈可變區 CDR1 | RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89) | RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89) | RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89) | RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89) | DYYGNSFMYWY (SEQ ID NO:99) |
| 輕鏈可變區 CDR2 | FASNLES (SEQ ID NO:90) | FASNLES (SEQ ID NO:90) | FASNLES (SEQ ID NO:90) | FASNLES (SEQ ID NO:90) | LLIYFASNLE (SEQ ID NO:100) |
| 輕鏈可變區 CDR3 | QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91) | QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91) | QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91) | QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91) | QQNNEDPW (SEQ ID NO:101) |
| 51A1重鏈可變區(SEQ ID NO:135) EVQLVESGGGLVQPKGSLKLSCAASGFTFNTYAMHWVRQAPGKGLEWVARIRSKSSNYAT YYADSVKDRFTISRDDSQSMLYLQMNNLKTEDTAMYYCVRDGIYYYGTMYYYAMDYWGQGTSVTVSS | |||||
| 51A1輕鏈可變區(SEQ ID NO:136) NIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDYYGNSFMYWYQQKPGQPPKLLIYFASNLES GVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEAADAASYYCQQNNEDPWTFGGGTKLEIK |
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| 重鏈可變區CDR1 | GFTFNTYAMH (SEQ ID NO:86) | GFTFNTY (SEQ ID NO:92) | GFTFNTYAMH (SEQ ID NO:86) | TYAMH (SEQ ID NO:95) | NTYAMH (SEQ ID NO:96) |
| 重鏈可變區CDR2 | RIRSKSSNYATYYADSVKD (SEQ ID NO:87) | RSKSSNYA (SEQ ID NO:93) | RIRSKSSNYATY (SEQ ID NO:94) | RIRSKSSNYATYYADSVKD (SEQ ID NO:87) | WVARIRSKSSNYATY (SEQ ID NO:97) |
| 重鏈可變區 CDR3 | DGIYYYDTMYYYAMDY (SEQ ID NO:102) | DGIYYYDTMYYYAMDY (SEQ ID NO:102) | DGIYYYDTMYYYAMDY (SEQ ID NO:102) | DGIYYYDTMYYYAMDY (SEQ ID NO:102) | VRDGIYYYDTMYYYAMD (SEQ ID NO:104) |
| 輕鏈可變區 CDR1 | RASESVDYYGNSFIY (SEQ ID NO:103) | RASESVDYYGNSFIY (SEQ ID NO:103) | RASESVDYYGNSFIY (SEQ ID NO:103) | RASESVDYYGNSFIY (SEQ ID NO:103) | DYYGNSFIYWY (SEQ ID NO:105) |
| 輕鏈可變區 CDR2 | FASNLES (SEQ ID NO:90) | FASNLES (SEQ ID NO:90) | FASNLES (SEQ ID NO:90) | FASNLES (SEQ ID NO:90) | LLIYFASNLE (SEQ ID NO:100) |
| 輕鏈可變區 CDR3 | QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91) | QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91) | QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91) | QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91) | QQNNEDPW (SEQ ID NO:101) |
| 64A12重鏈可變區(SEQ ID NO:137) EVQLVESGGGLVQPKGSLKLSCAASGFTFNTYAMHWVRQAPGKGLEWVARIRSKSSNYAT YYADSVKDRFTISRDDSQSMLYLQMNNLKTEDTAMYYCVRDGIYYYDTMYYYAMDYWGQGTSVTVSS | |||||
| 64A12輕鏈可變區(SEQ ID NO:138) NIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDYYGNSFIYWYQQKPGQPPKLLIYFASNLES GVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEAADAASYYCQQNNEDPWTFGGGTKLEIK |
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| 重鏈可變區CDR1 | GFTFNTYAMH (SEQ ID NO:86) | GFTFNTY (SEQ ID NO:92) | GFTFNTYAMH (SEQ ID NO:86) | TYAMH (SEQ ID NO:95) | NTYAMH (SEQ ID NO:96) |
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| 重鏈可變區 CDR3 | DGIYYYDTMYYYAMDY (SEQ ID NO:102) | DGIYYYDTMYYYAMDY (SEQ ID NO:102) | DGIYYYDTMYYYAMDY (SEQ ID NO:102) | DGIYYYDTMYYYAMDY (SEQ ID NO:102) | ARDGIYYYDTMYYYAMD (SEQ ID NO:123) |
| 輕鏈可變區 CDR1 | RASESVDYYGNSFIY (SEQ ID NO:103) | RASESVDYYGNSFIY (SEQ ID NO:103) | RASESVDYYGNSFIY (SEQ ID NO:103) | RASESVDYYGNSFIY (SEQ ID NO:103) | DYYGNSFIYWY (SEQ ID NO:105) |
| 輕鏈可變區 CDR2 | FASNLES (SEQ ID NO:90) | FASNLES (SEQ ID NO:90) | FASNLES (SEQ ID NO:90) | FASNLES (SEQ ID NO:90) | LLIYFASNLE (SEQ ID NO:100) |
| 輕鏈可變區 CDR3 | QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91) | QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91) | QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91) | QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91) | QQNNEDPW (SEQ ID NO:101) |
| Hz64A12重鏈可變區(SEQ ID NO:139) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNTYAMHWVRQAPGKGLEWVARIRSKSSNYAT YYADSVKDRFTISRDDAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGIYYYDTMYYYAMDYWGQGTLVTVSS | |||||
| Hz64A12輕鏈可變區(SEQ ID NO:140) NIVLTQSPDSLAVSLGERATINCRASESVDYYGNSFIYWYQQKPGQPPKLLIYFASNLES GVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQNNEDPWTFGGGTKVEIK |
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| 重鏈可變區CDR1 | GYTFTDYYMN (SEQ ID NO:70) | GYTFTDY (SEQ ID NO:76) | GYTFTDYYMN (SEQ ID NO:70) | DYYMN (SEQ ID NO:79) | TDYYMN (SEQ ID NO:80) |
| 重鏈可變區CDR2 | NVNPNNGGTSYNQKFKG (SEQ ID NO:106) | NPNNGG (SEQ ID NO:77) | NVNPNNGGTS (SEQ ID NO:108) | NVNPNNGGTSYNQKFKG (SEQ ID NO:106) | WIGNVNPNNGGTS (SEQ ID NO:109) |
| 重鏈可變區 CDR3 | REIYFYGTIYYYAMDY (SEQ ID NO:107) | REIYFYGTIYYYAMDY (SEQ ID NO:107) | REIYFYGTIYYYAMDY (SEQ ID NO:107) | REIYFYGTIYYYAMDY (SEQ ID NO:107) | ARREIYFYGTIYYYAMD (SEQ ID NO:110) |
| 輕鏈可變區 CDR1 | RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89) | RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89) | RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89) | RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89) | DYYGNSFMYWY (SEQ ID NO:99) |
| 輕鏈可變區 CDR2 | FASNLES (SEQ ID NO:90) | FASNLES (SEQ ID NO:90) | FASNLES (SEQ ID NO:90) | FASNLES (SEQ ID NO:90) | LLIYFASNLE (SEQ ID NO:100) |
| 輕鏈可變區 CDR3 | QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91) | QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91) | QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91) | QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91) | QQNNEDPW (SEQ ID NO:101) |
| 73C4重鏈可變區(SEQ ID NO:141) AVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYTFTDYYMNWVKQSHGKSLEWIGNVNPNNGGTSY NQKFKGKATLTVDKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCARREIYFYGTIYYYAMDYWGQGTSVTVSS | |||||
| 73C4輕鏈可變區(SEQ ID NO:142) DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDYYGNSFMYWYQQKPGRPPNLLIYFASNLES GVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEADDAATYYCQQNNEDPWTFGGGTKLEIK |
| 例示性 | Chothia | AbM | Kabat | Contact | |
| 重鏈可變區CDR1 | GYTFTDYYIN (SEQ ID NO:111) | GYTFTDY (SEQ ID NO:76) | GYTFTDYYIN (SEQ ID NO:111) | DYYIN (SEQ ID NO:115) | TDYYIN (SEQ ID NO:116) |
| 重鏈可變區CDR2 | NVNPNDGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO:112) | NPNDGG (SEQ ID NO:113) | NVNPNDGGTT (SEQ ID NO:114) | NVNPNDGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO:112) | WIGNVNPNDGGTT (SEQ ID NO:117) |
| 重鏈可變區CDR3 | REIYFYGTIYYYAMDY (SEQ ID NO:107) | REIYFYGTIYYYAMDY (SEQ ID NO:107) | REIYFYGTIYYYAMDY (SEQ ID NO:107) | REIYFYGTIYYYAMDY (SEQ ID NO:107) | ARREIYFYGTIYYYAMD (SEQ ID NO:110) |
| 輕鏈可變區CDR1 | RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89) | RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89) | RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89) | RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89) | DYYGNSFMYWY (SEQ ID NO:99) |
| 輕鏈可變區 CDR2 | FASNLES (SEQ ID NO:90) | FASNLES (SEQ ID NO:90) | FASNLES (SEQ ID NO:90) | FASNLES (SEQ ID NO:90) | LLIYFASNLE (SEQ ID NO:100) |
| 輕鏈可變區 CDR3 | QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91) | QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91) | QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91) | QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91) | QQNNEDPW (SEQ ID NO:101) |
| 73D1重鏈可變區(SEQ ID NO:143) AVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYTFTDYYINWVKQSHGKSLQWIGNVNPNDGGTTY NQKFKGKATLTVDKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCARREIYFYGTIYYYAMDYWGQGTSVTVSS | |||||
| 73D1輕鏈可變區(SEQ ID NO:142) DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDYYGNSFMYWYQQKPGRPPNLLIYFASNLES GVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEADDAATYYCQQNNEDPWTFGGGTKLEIK |
| 例示性 | Chothia | AbM | Kabat | Contact | |
| 重鏈可變區CDR1 | GYTFTDYYIN (SEQ ID NO:111) | GYTFTDY (SEQ ID NO:76) | GYTFTDYYIN (SEQ ID NO:111) | DYYIN (SEQ ID NO:115) | TDYYIN (SEQ ID NO:116) |
| 重鏈可變區CDR2 | NVNPNDGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO:112) | NPNDGG (SEQ ID NO:113) | NVNPNDGGTT (SEQ ID NO:114) | NVNPNDGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO:112) | WMGNVNPNDGGTT (SEQ ID NO:124) |
| 重鏈可變區CDR3 | REIYFYGTIYYYAMDY (SEQ ID NO:107) | REIYFYGTIYYYAMDY (SEQ ID NO:107) | REIYFYGTIYYYAMDY (SEQ ID NO:107) | REIYFYGTIYYYAMDY (SEQ ID NO:107) | ARREIYFYGTIYYYAMD (SEQ ID NO:110) |
| 輕鏈可變區CDR1 | RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89) | RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89) | RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89) | RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89) | DYYGNSFMYWY (SEQ ID NO:99) |
| 輕鏈可變區 CDR2 | FASNLES (SEQ ID NO:90) | FASNLES (SEQ ID NO:90) | FASNLES (SEQ ID NO:90) | FASNLES (SEQ ID NO:90) | LLIYFASNLE (SEQ ID NO:100) |
| 輕鏈可變區 CDR3 | QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91) | QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91) | QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91) | QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91) | QQNNEDPW (SEQ ID NO:101) |
| Hz73D1.v1重鏈可變區(SEQ ID NO:144) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYINWVRQAPGQGLEWMGNVNPNDGGTTY NQKFKGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARREIYFYGTIYYYAMDYWGQGTLVTVSS | |||||
| Hz73D1.v1輕鏈可變區(SEQ ID NO:145) DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCRASESVDYYGNSFMYWYQQKPGKAPKLLIYFASNLES GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQNNEDPWTFGGGTKVEIK |
在一些實施例中，ILT結合劑(例如ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑)包含來自本文所述抗體之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3及/或輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT結合劑包含來自本文所述抗體之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT結合劑包含：(a)重鏈可變區，其包含重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3；及(b)輕鏈可變區，其包含輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3，該等CDR來自本文所述抗體。
在一些實施例中，ILT結合劑(例如抗ILT2抗體、抗ILT4抗體或抗ILT2/ILT4抗體)包含本文所述抗體之CDR中之一或多個(例如1個、2個、3個、4個等)胺基酸取代。在一些實施例中，胺基酸取代係保守取代。在一些實施例中，CDR包含一個胺基酸取代。在一些實施例中，CDR包含兩個胺基酸取代。在一些實施例中，CDR包含三個胺基酸取代。在一些實施例中，CDR包含四個胺基酸取代。在一些實施例中，CDR係重鏈可變區CDR1。在一些實施例中，CDR係重鏈可變區CDR2。在一些實施例中，CDR係重鏈可變區CDR3。在一些實施例中，CDR係輕鏈可變區CDR1。在一些實施例中，CDR係輕鏈可變區CDR2。在一些實施例中，CDR係輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，取代係作為人類化過程之一部分來進行。在一些實施例中，取代係作為生殖系人類化過程之一部分來進行。在一些實施例中，取代係作為親和突變過程之一部分來進行。在一些實施例中，取代係作為最佳化過程之一部分來進行。
在一些實施例中，ILT結合劑(例如ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑)包含一或多個已經修飾以減少CDR序列內之去醯胺化之重鏈可變區CDR或輕鏈可變區CDR。去醯胺化係其中胺基酸天冬醯胺(Asn或N)或麩醯胺酸(Gln或Q)側鏈中之醯胺官能基經去除或轉化成另一官能基之化學反應。通常，天冬醯胺轉化成天冬胺酸或異天冬胺酸且麩醯胺酸轉化成麩胺酸或聚麩胺酸。在一些情況下，去醯胺化可改變多肽之結構、功能及/或穩定性，此可能降低生物活性。在一些實施例中，本文所述抗體之重鏈可變區CDR1、CDR2及/或CDR3經修飾以減少去醯胺化。在一些實施例中，本文所述抗體之輕鏈可變區CDR1、CDR2及/或CDR3經修飾以減少去醯胺化。
在一些實施例中，ILT結合劑(例如ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑)包含一或多個已經修飾以減少異構化之重鏈可變區CDR或輕鏈可變區CDR。異構化係化學過程，化合物藉由該化學過程轉型成其異構物形式(即具有相同化學組成但具有不同結構或構形且可能具有不同物理及化學性質之形式)中之任一者。研究已顯示，CDR內之天冬醯胺(Asp或D)異構化可影響抗體結合及/或穩定性。在一些實施例中，本文所述抗體之重鏈可變區CDR1、CDR2及/或CDR3經修飾以減少異構化。在一些實施例中，輕鏈可變區CDR1、CDR2及/或CDR3經修飾以減少異構化。
在一些實施例中，ILT結合劑(例如ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑)包含一或多個已經修飾以減少氧化之重鏈可變區CDR或輕鏈可變區CDR。氧化係化學過程，氧藉由該化學過程添加至原子，例如甲硫胺酸藉由將氧添加至硫原子轉化成甲硫胺酸亞砜。一或多個胺基酸之氧化可潛在地影響蛋白質之物理及化學性質。研究已顯示，氧化CDR內之甲硫胺酸(Met或M)具有影響抗體結合及/或穩定性之潛能。在一些實施例中，本文所述抗體之重鏈可變區CDR1、CDR2及/或CDR3經修飾以減少氧化(例如甲硫胺酸氧化)。在一些實施例中，本文所述抗體之輕鏈可變區CDR1、CDR2及/或CDR3經修飾以減少氧化(例如甲硫胺酸氧化)。
在一些實施例中，ILT2結合劑包含來自抗體27F9、其人類化形式或其變異體之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3及/或輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT2結合劑包含重鏈可變區，其包含來自抗體27F9之重鏈可變區CDR1、重鏈可變區CDR2及重鏈可變區CDR3。在其他實施例中，ILT2結合劑包含輕鏈可變區，其包含來自抗體27F9之輕鏈可變區CDR1、輕鏈可變區CDR2及輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT2結合劑包含：(a)重鏈可變區，其包含重鏈可變區CDR1、重鏈可變區CDR2、重鏈可變區CDR3；及(b)輕鏈可變區，其包含輕鏈可變區CDR1、輕鏈可變區CDR2及輕鏈可變區CDR3，該等CDR來自抗體27F9。在一些實施例中，ILT2結合劑係抗體27F9之人類化形式。在一些實施例中，ILT2結合劑係抗體27F9或人類化27F9之變異體。
在一些實施例中，ILT2結合劑包含：(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GFSLTNYGVS (SEQ ID NO:22)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列IIWGDGSTNYHSALIS (SEQ ID NO:23)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列PNWDTYAMDF (SEQ ID NO:24)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASQDISNFLN (SEQ ID NO:25)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列CTSKLHS (SEQ ID NO:26)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQGNTLPPT (SEQ ID NO:27)之輕鏈可變區CDR3；(b)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GFSLTNY (SEQ ID NO:28)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列WGDGS (SEQ ID NO:29)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列PNWDTYAMDF (SEQ ID NO:24)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASQDISNFLN (SEQ ID NO:25)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列CTSKLHS (SEQ ID NO:26)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQGNTLPPT (SEQ ID NO:27)之輕鏈可變區CDR3；(c)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GFSLTNYGVS (SEQ ID NO:22)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列IIWGDGSTN (SEQ ID NO:30)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列PNWDTYAMDF (SEQ ID NO:24)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASQDISNFLN (SEQ ID NO:25)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列CTSKLHS (SEQ ID NO:26)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQGNTLPPT (SEQ ID NO:27)之輕鏈可變區CDR3；(d)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列NYGVS (SEQ ID NO:31)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列IIWGDGSTNYHSALIS (SEQ ID NO:23)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列PNWDTYAMDF (SEQ ID NO:24)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASQDISNFLN (SEQ ID NO:25)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列CTSKLHS (SEQ ID NO:26)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQGNTLPPT (SEQ ID NO:27)之輕鏈可變區CDR3；或(e)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列TNYGVS (SEQ ID NO:32)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列WLGIIWGDGSTN (SEQ ID NO:33)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列AKPNWDTYAMD (SEQ ID NO:34)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列SNFLNWY (SEQ ID NO:35)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LLIYCTSKLH (SEQ ID NO:36)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQGNTLPP (SEQ ID NO:37)之輕鏈可變區CDR3。
在一些實施例中，ILT2結合劑包含：(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GFSLTNYGVS (SEQ ID NO:22)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列IIWGDGSTNYHSALIS (SEQ ID NO:23)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列PNWDTYAMDF (SEQ ID NO:24)之重鏈可變區CDR3，及/或(b)輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASQDISNFLN (SEQ ID NO:25)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列CTSKLHS (SEQ ID NO:26)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQGNTLPPT (SEQ ID NO:27)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT2結合劑包含重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GFSLTNYGVS (SEQ ID NO:22)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列IIWGDGSTNYHSALIS (SEQ ID NO:23)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列PNWDTYAMDF (SEQ ID NO:24)之重鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT2結合劑包含輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASQDISNFLN (SEQ ID NO:25)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列CTSKLHS (SEQ ID NO:26)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQGNTLPPT (SEQ ID NO:27)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT2結合劑包含：(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GFSLTNYGVS (SEQ ID NO:22)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列IIWGDGSTNYHSALIS (SEQ ID NO:23)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列PNWDTYAMDF (SEQ ID NO:24)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASQDISNFLN (SEQ ID NO:25)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列CTSKLHS (SEQ ID NO:26)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQGNTLPPT (SEQ ID NO:27)之輕鏈可變區CDR3。
在一些實施例中，抗ILT2結合劑包含重鏈可變區，其包含抗體27F9之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列且與SEQ ID NO:125之序列具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致性；及輕鏈可變區，其包含抗體27F9之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列且與SEQ ID NO:126之序列具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致性。
在一些實施例中，ILT2結合劑包含與SEQ ID NO:125之序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%一致性之重鏈可變區。在一些實施例中，ILT2結合劑包含與SEQ ID NO:126之序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2結合劑包含含有SEQ ID NO:125之胺基酸序列之重鏈可變區。在一些實施例中，ILT2結合劑包含含有SEQ ID NO:126之胺基酸序列之輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT2結合劑包含與SEQ ID NO:125具有至少80%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:126具有至少80%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2結合劑包含與SEQ ID NO:125具有至少90%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:126具有至少90%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2結合劑包含與SEQ ID NO:125具有至少95%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:126具有至少95%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2結合劑包含含有SEQ ID NO:125之胺基酸序列之重鏈可變區及含有SEQ ID NO:126之胺基酸序列之輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT4結合劑包含來自抗體47C8、其人類化形式或其變異體之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3及/或輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT4結合劑包含重鏈可變區，其包含來自抗體47C8之重鏈可變區CDR1、重鏈可變區CDR2及重鏈可變區CDR3。在其他實施例中，ILT4結合劑包含輕鏈可變區，其包含來自抗體47C8之輕鏈可變區CDR1、輕鏈可變區CDR2及輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT4結合劑包含：(a)重鏈可變區，其包含重鏈可變區CDR1、重鏈可變區CDR2、重鏈可變區CDR3；及(b)輕鏈可變區，其包含輕鏈可變區CDR1、輕鏈可變區CDR2及輕鏈可變區CDR3，該等CDR來自抗體47C8。在一些實施例中，ILT4結合劑係抗體47C8之人類化形式。在一些實施例中，ILT4結合劑係抗體47C8或人類化47C8之變異體。
在一些實施例中，ILT4結合劑包含：(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYSFTGYYMH (SEQ ID NO:38)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列RVYPNNGDTSYNQKFKV (SEQ ID NO:39)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列GATVVESLFAY (SEQ ID NO:40)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDNYGNNFLH (SEQ ID NO:41)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列RTSNLES (SEQ ID NO:42)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQSNEDPYT (SEQ ID NO:43)之輕鏈可變區CDR3；(b)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYSFTGY (SEQ ID NO:44)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列YPNNGD (SEQ ID NO:45)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列GATVVESLFAY (SEQ ID NO:40)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDNYGNNFLH (SEQ ID NO:41)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列RTSNLES (SEQ ID NO:42)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQSNEDPYT (SEQ ID NO:43)之輕鏈可變區CDR3；(c)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYSFTGYYMH (SEQ ID NO:38)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列RVYPNNGDTS (SEQ ID NO:46)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列GATVVESLFAY (SEQ ID NO:40)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDNYGNNFLH (SEQ ID NO:41)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列RTSNLES (SEQ ID NO:42)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQSNEDPYT (SEQ ID NO:43)之輕鏈可變區CDR3；(d)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYYMH (SEQ ID NO:47)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列RVYPNNGDTSYNQKFKV (SEQ ID NO:39)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列GATVVESLFAY (SEQ ID NO:40)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDNYGNNFLH (SEQ ID NO:41)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列RTSNLES (SEQ ID NO:42)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQSNEDPYT (SEQ ID NO:43)之輕鏈可變區CDR3；或(e)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列TGYYMH (SEQ ID NO:48)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列WIGRVYPNNGDTS (SEQ ID NO:49)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列ARGATVVESLFA (SEQ ID NO:50)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列DNYGNNFLHWY (SEQ ID NO:51)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LLIYRTSNLE (SEQ ID NO:52)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQSNEDPY (SEQ ID NO:53)之輕鏈可變區CDR3。
在一些實施例中，ILT4結合劑包含：(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYSFTGYYMH (SEQ ID NO:38)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列RVYPNNGDTSYNQKFKV (SEQ ID NO:39)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列GATVVESLFAY (SEQ ID NO:40)之重鏈可變區CDR3，及/或(b)輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDNYGNNFLH (SEQ ID NO:41)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列RTSNLES (SEQ ID NO:42)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQSNEDPYT (SEQ ID NO:43)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT4結合劑包含重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYSFTGYYMH (SEQ ID NO:38)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列RVYPNNGDTSYNQKFKV (SEQ ID NO:39)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列GATVVESLFAY (SEQ ID NO:40)之重鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT4結合劑包含輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDNYGNNFLH (SEQ ID NO:41)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列RTSNLES (SEQ ID NO:42)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQSNEDPYT (SEQ ID NO:43)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT4結合劑包含：(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYSFTGYYMH (SEQ ID NO:38)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列RVYPNNGDTSYNQKFKV (SEQ ID NO:39)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列GATVVESLFAY (SEQ ID NO:40)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDNYGNNFLH (SEQ ID NO:41)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列RTSNLES (SEQ ID NO:42)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQSNEDPYT (SEQ ID NO:43)之輕鏈可變區CDR3。
在一些實施例中，抗ILT4結合劑包含重鏈可變區，其包含抗體47C8之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列且與SEQ ID NO:127之序列具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致性；及輕鏈可變區，其包含抗體47C8之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列且與SEQ ID NO:128之序列具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致性。
在一些實施例中，ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:127之序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%一致性之重鏈可變區。在一些實施例中，ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:128之序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT4結合劑包含含有SEQ ID NO:127之胺基酸序列之重鏈可變區。在一些實施例中，ILT4結合劑包含含有SEQ ID NO:128之胺基酸序列之輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:127具有至少80%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:128具有至少80%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:127具有至少90%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:128具有至少90%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:127具有至少95%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:128具有至少95%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT4結合劑包含含有SEQ ID NO:127之胺基酸序列之重鏈可變區及含有SEQ ID NO:128之胺基酸序列之輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT4結合劑包含來自抗體48A5、其人類化形式或其變異體之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3及/或輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT4結合劑包含重鏈可變區，其包含來自抗體48A5之重鏈可變區CDR1、重鏈可變區CDR2及重鏈可變區CDR3。在其他實施例中，ILT4結合劑包含輕鏈可變區，其包含來自抗體48A5之輕鏈可變區CDR1、輕鏈可變區CDR2及輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT4結合劑包含：(a)重鏈可變區，其包含重鏈可變區CDR1、重鏈可變區CDR2、重鏈可變區CDR3；及(b)輕鏈可變區，其包含輕鏈可變區CDR1、輕鏈可變區CDR2及輕鏈可變區CDR3，該等CDR來自抗體48A5。在一些實施例中，ILT4結合劑係抗體48A5之人類化形式。在一些實施例中，ILT4結合劑係抗體48A5或人類化48A5之變異體。
在一些實施例中，ILT4結合劑包含：(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYTFTNYGMN (SEQ ID NO:54)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列WINTYIGEPIYADDFKG (SEQ ID NO:55)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列RSDYDGYAMDY (SEQ ID NO:56)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列KSSQSLLYSGNQKNYLA (SEQ ID NO:57)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列WASTRES (SEQ ID NO:58)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQHDSYPT (SEQ ID NO:59)之輕鏈可變區CDR3；(b)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYTFTNY (SEQ ID NO:60)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NTYIGE (SEQ ID NO:61)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列RSDYDGYAMDY (SEQ ID NO:56)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列KSSQSLLYSGNQKNYLA (SEQ ID NO:57)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列WASTRES (SEQ ID NO:58)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQHDSYPT (SEQ ID NO:59)之輕鏈可變區CDR3；(c)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYTFTNYGMN (SEQ ID NO:54)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列WINTYIGEPI (SEQ ID NO:62)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列RSDYDGYAMDY (SEQ ID NO:56)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列KSSQSLLYSGNQKNYLA (SEQ ID NO:57)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列WASTRES (SEQ ID NO:58)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQHDSYPT (SEQ ID NO:59)之輕鏈可變區CDR3；(d)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列NYGMN (SEQ ID NO:63)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列WINTYIGEPIYADDFKG (SEQ ID NO:55)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列RSDYDGYAMDY (SEQ ID NO:56)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列KSSQSLLYSGNQKNYLA (SEQ ID NO:57)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列WASTRES (SEQ ID NO:58)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQHDSYPT (SEQ ID NO:59)之輕鏈可變區CDR3；或(e)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列TNYGMN (SEQ ID NO:64)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列WMGWINTYIGEPI (SEQ ID NO:65)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列ARRSDYDGYAMD (SEQ ID NO:66)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列LYSGNQKNYLAWY (SEQ ID NO:67)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LLIYWASTRE (SEQ ID NO:68)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQHDSYP (SEQ ID NO:69)之輕鏈可變區CDR3。
在一些實施例中，ILT4結合劑包含：(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYTFTNYGMN (SEQ ID NO:54)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列WINTYIGEPIYADDFKG (SEQ ID NO:55)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列RSDYDGYAMDY (SEQ ID NO:56)之重鏈可變區CDR3，及/或(b)輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列KSSQSLLYSGNQKNYLA (SEQ ID NO:57)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列WASTRES (SEQ ID NO:58)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQHDSYPT (SEQ ID NO:59)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT4結合劑包含重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYTFTNYGMN (SEQ ID NO:54)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列WINTYIGEPIYADDFKG (SEQ ID NO:55)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列RSDYDGYAMDY (SEQ ID NO:56)之重鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT4結合劑包含輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列KSSQSLLYSGNQKNYLA (SEQ ID NO:57)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列WASTRES (SEQ ID NO:58)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQHDSYPT (SEQ ID NO:59)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT4結合劑包含：(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYTFTNYGMN (SEQ ID NO:54)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列WINTYIGEPIYADDFKG (SEQ ID NO:55)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列RSDYDGYAMDY (SEQ ID NO:56)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列KSSQSLLYSGNQKNYLA (SEQ ID NO:57)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列WASTRES (SEQ ID NO:58)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQHDSYPT (SEQ ID NO:59)之輕鏈可變區CDR3。
在一些實施例中，抗ILT4結合劑包含重鏈可變區，其包含抗體48A5之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列且與SEQ ID NO:129之序列具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致性；及輕鏈可變區，其包含抗體48A5之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列且與SEQ ID NO:130之序列具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致性。
在一些實施例中，ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:129之序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%一致性之重鏈可變區。在一些實施例中，ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:130之序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT4結合劑包含含有SEQ ID NO:129之胺基酸序列之重鏈可變區。在一些實施例中，ILT4結合劑包含含有SEQ ID NO:130之胺基酸序列之輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:129具有至少80%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:130具有至少80%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:129具有至少90%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:130具有至少90%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:129具有至少95%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:130具有至少95%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT4結合劑包含含有SEQ ID NO:129之胺基酸序列之重鏈可變區及含有SEQ ID NO:130之胺基酸序列之輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑(例如雙重結合劑)包含來自抗體47H6、其人類化形式(例如Hz47H6.v2)或其變異體之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3及/或輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含重鏈可變區，其包含來自抗體47H6或抗體Hz47H6.v2之重鏈可變區CDR1、重鏈可變區CDR2及重鏈可變區CDR3。在其他實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含輕鏈可變區，其包含來自抗體47H6或抗體Hz47H6.v2之輕鏈可變區CDR1、輕鏈可變區CDR2及輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含：(a)重鏈可變區，其包含重鏈可變區CDR1、重鏈可變區CDR2、重鏈可變區CDR3；及(b)輕鏈可變區，其包含輕鏈可變區CDR1、輕鏈可變區CDR2及輕鏈可變區CDR3，該等CDR來自抗體47H6。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含：(a)重鏈可變區，其包含重鏈可變區CDR1、重鏈可變區CDR2、重鏈可變區CDR3；及(b)輕鏈可變區，其包含輕鏈可變區CDR1、輕鏈可變區CDR2及輕鏈可變區CDR3，該等CDR來自抗體Hz47H6.v2。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑係抗體47H6之人類化形式。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑係抗體47H6之變異體。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑係抗體Hz47H6.v2之變異體。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含：(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYTFTDYYMN (SEQ ID NO:70)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列DFNPNNGGTTYNQKFEG (SEQ ID NO:71)或DFNPNNAGTTYNQKFEG (SEQ ID NO:118)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列GRFYYGSLYSFDY (SEQ ID NO:72)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASGNIHNYLA (SEQ ID NO:73)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NAKTLAD (SEQ ID NO:74)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QHFWTSIT (SEQ ID NO:75)之輕鏈可變區CDR3；(b)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYTFTDY (SEQ ID NO:76)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NPNNGG (SEQ ID NO:77)或胺基酸序列NPNNAG (SEQ ID NO:119)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列GRFYYGSLYSFDY (SEQ ID NO:72)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASGNIHNYLA (SEQ ID NO:73)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NAKTLAD (SEQ ID NO:74)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QHFWTSIT (SEQ ID NO:75)之輕鏈可變區CDR3；(c)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYTFTDYYMN (SEQ ID NO:70)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列DFNPNNGGTT (SEQ ID NO:78)或胺基酸序列DFNPNNAGTT (SEQ ID NO:120)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列GRFYYGSLYSFDY (SEQ ID NO:72)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASGNIHNYLA (SEQ ID NO:73)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NAKTLAD (SEQ ID NO:74)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QHFWTSIT (SEQ ID NO:75)之輕鏈可變區CDR3；(d)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列DYYMN (SEQ ID NO:79)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列DFNPNNGGTTYNQKFEG (SEQ ID NO:71)或DFNPNNAGTTYNQKFEG (SEQ ID NO:118)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列GRFYYGSLYSFDY (SEQ ID NO:72)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASGNIHNYLA (SEQ ID NO:73)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NAKTLAD (SEQ ID NO:74)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QHFWTSIT (SEQ ID NO:75)之輕鏈可變區CDR3；或(e)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列TDYYMN (SEQ ID NO:80)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列WIGDFNPNNGGTT (SEQ ID NO:81)或胺基酸序列WIGDFNPNNAGTT (SEQ ID NO:121)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列ARGRFYYGSLYSFD (SEQ ID NO:82)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列HNYLAWY (SEQ ID NO:83)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LLVYNAKTLA (SEQ ID NO:84)或胺基酸序列LLIYNAKTLA (SEQ ID NO:122)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QHFWTSI (SEQ ID NO:85)之輕鏈可變區CDR3。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含：(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYTFTDYYMN (SEQ ID NO:70)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列DFNPNNGGTTYNQKFEG (SEQ ID NO:71)或DFNPNNAGTTYNQKFEG (SEQ ID NO:118)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列GRFYYGSLYSFDY (SEQ ID NO:72)之重鏈可變區CDR3，及/或(b)輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASGNIHNYLA (SEQ ID NO:73)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NAKTLAD (SEQ ID NO:74)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QHFWTSIT (SEQ ID NO:75)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYTFTDYYMN (SEQ ID NO:70)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列DFNPNNGGTTYNQKFEG (SEQ ID NO:71)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列GRFYYGSLYSFDY (SEQ ID NO:72)之重鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYTFTDYYMN (SEQ ID NO:70)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列DFNPNNAGTTYNQKFEG (SEQ ID NO:118)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列GRFYYGSLYSFDY (SEQ ID NO:72)之重鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASGNIHNYLA (SEQ ID NO:73)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NAKTLAD (SEQ ID NO:74)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QHFWTSIT (SEQ ID NO:75)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含：(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYTFTDYYMN (SEQ ID NO:70)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列DFNPNNGGTTYNQKFEG (SEQ ID NO:71)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列GRFYYGSLYSFDY (SEQ ID NO:72)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASGNIHNYLA (SEQ ID NO:73)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NAKTLAD (SEQ ID NO:74)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QHFWTSIT (SEQ ID NO:75)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含：(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYTFTDYYMN (SEQ ID NO:70)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列DFNPNNAGTTYNQKFEG (SEQ ID NO:118)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列GRFYYGSLYSFDY (SEQ ID NO:72)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASGNIHNYLA (SEQ ID NO:73)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NAKTLAD (SEQ ID NO:74)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QHFWTSIT (SEQ ID NO:75)之輕鏈可變區CDR3。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含重鏈可變區，其包含抗體47H6之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列且與SEQ ID NO:131之序列具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致性；及輕鏈可變區，其包含抗體47H6之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列且與SEQ ID NO:132之序列具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致性。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:131之序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%一致性之重鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:132之序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含含有SEQ ID NO:131之胺基酸序列之重鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含含有SEQ ID NO:132之胺基酸序列之輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:131具有至少80%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:132具有至少80%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:131具有至少90%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:132具有至少90%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:131具有至少95%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:132具有至少95%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含含有SEQ ID NO:131之胺基酸序列之重鏈可變區及含有SEQ ID NO:132之胺基酸序列之輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含重鏈可變區，其包含抗體Hz47H6.v2之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列且與SEQ ID NO:133之序列具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致性；及輕鏈可變區，其包含抗體Hz47H6.v2之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列且與SEQ ID NO:134之序列具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致性。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:133之序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%一致性之重鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:134之序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含含有SEQ ID NO:133之胺基酸序列之重鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含含有SEQ ID NO:134之胺基酸序列之輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:133具有至少80%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:134具有至少80%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:133具有至少90%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:134具有至少90%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:133具有至少95%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:134具有至少95%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含含有SEQ ID NO:133之胺基酸序列之重鏈可變區及含有SEQ ID NO:134之胺基酸序列之輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含重鏈，其包含含有GYTFTDYYMN (SEQ ID NO:70)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列DFNPNNGGTTYNQKFEG (SEQ ID NO:71)或DFNPNNAGTTYNQKFEG (SEQ ID NO:118)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列GRFYYGSLYSFDY (SEQ ID NO:72)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈，其包含含有胺基酸序列RASGNIHNYLA (SEQ ID NO:73)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NAKTLAD (SEQ ID NO:74)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QHFWTSIT (SEQ ID NO:75)之輕鏈可變區CDR3，其中重鏈包含與SEQ ID NO:148之序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%、至少98%、至少99%或100%之一致性，且其中輕鏈包含與SEQ ID NO:149之序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%、至少98%、至少99%或100%之一致性。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含重鏈，其包含含有GYTFTDYYMN (SEQ ID NO:70)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列DFNPNNGGTTYNQKFEG (SEQ ID NO:71)或DFNPNNAGTTYNQKFEG (SEQ ID NO:118)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列GRFYYGSLYSFDY (SEQ ID NO:72)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈，其包含含有胺基酸序列RASGNIHNYLA (SEQ ID NO:73)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NAKTLAD (SEQ ID NO:74)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QHFWTSIT (SEQ ID NO:75)之輕鏈可變區CDR3，其中重鏈包含與SEQ ID NO:148之序列至少95%之一致性，且其中輕鏈包含與SEQ ID NO:149之序列至少95%之一致性。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含(a)重鏈，其包含SEQ ID NO:148之胺基酸，及(b)輕鏈，其包含含有RASGNIHNYLA (SEQ ID NO:73)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NAKTLAD (SEQ ID NO:74)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QHFWTSIT (SEQ ID NO:75)之輕鏈可變區CDR3，其中輕鏈包含與SEQ ID NO:149之序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%、至少98%、至少99%或100%之一致性。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含(a)重鏈，其包含SEQ ID NO:148之胺基酸，及(b)輕鏈，其包含含有RASGNIHNYLA (SEQ ID NO:73)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NAKTLAD (SEQ ID NO:74)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QHFWTSIT (SEQ ID NO:75)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含(a)重鏈，其包含含有GYTFTDYYMN (SEQ ID NO:70)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列DFNPNNGGTTYNQKFEG (SEQ ID NO:71)或DFNPNNAGTTYNQKFEG (SEQ ID NO:118)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列GRFYYGSLYSFDY (SEQ ID NO:72)之重鏈可變區CDR3，其中重鏈包含與SEQ ID NO:148之序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%、至少98%、至少99%或100%之一致性，及(b)輕鏈，其包含SEQ ID NO:149之胺基酸序列。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含(a)重鏈，其包含含有GYTFTDYYMN (SEQ ID NO:70)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列DFNPNNGGTTYNQKFEG (SEQ ID NO:71)或DFNPNNAGTTYNQKFEG (SEQ ID NO:118)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列GRFYYGSLYSFDY (SEQ ID NO:72)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈，其包含SEQ ID NO:149之胺基酸序列。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑係包含含有SEQ ID NO:148之胺基酸序列之重鏈及含有SEQ ID NO:149之胺基酸序列之輕鏈的抗體。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:148之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%或至少95%一致性之重鏈。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:149之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%或至少95%一致性之輕鏈。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:148之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%或至少95%一致性之重鏈及與SEQ ID NO:149之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%或至少95%一致性之輕鏈。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:148之胺基酸序列具有至少90%一致性之重鏈。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:149之胺基酸序列具有至少90%一致性之輕鏈。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:148之胺基酸序列具有至少90%一致性之重鏈及與SEQ ID NO:149之胺基酸序列具有至少90%一致性之輕鏈。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含含有SEQ ID NO:148之胺基酸序列之重鏈。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含含有SEQ ID NO:149之胺基酸序列之輕鏈。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含含有SEQ ID NO:148之胺基酸序列之重鏈及含有SEQ ID NO:149之胺基酸序列之輕鏈。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑係包含SEQ ID NO:148之重鏈及/或SEQ ID NO:149之輕鏈之抗體。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑係包含SEQ ID NO:148之重鏈之抗體。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑係包含SEQ ID NO:149之輕鏈之抗體。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑係包含SEQ ID NO:148之重鏈及SEQ ID NO:149之輕鏈之抗體。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑(例如雙重結合劑)包含來自抗體51A1、其人類化形式或其變異體之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3及/或輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含重鏈可變區，其包含來自抗體51A1之重鏈可變區CDR1、重鏈可變區CDR2及重鏈可變區CDR3。在其他實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含輕鏈可變區，其包含來自抗體51A1之輕鏈可變區CDR1、輕鏈可變區CDR2及輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含：(a)重鏈可變區，其包含重鏈可變區CDR1、重鏈可變區CDR2、重鏈可變區CDR3；及(b)輕鏈可變區，其包含輕鏈可變區CDR1、輕鏈可變區CDR2及輕鏈可變區CDR3，該等CDR來自抗體51A1。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑係抗體51A1之人類化形式。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑係抗體51A1或人類化51A1之變異體。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含：(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GFTFNTYAMH (SEQ ID NO:86)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列RIRSKSSNYATYYADSVKD (SEQ ID NO:87)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列DGIYYYGTMYYYAMDY (SEQ ID NO:88)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3；(b)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GFTFNTY (SEQ ID NO:92)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列RSKSSNYA (SEQ ID NO:93)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列DGIYYYGTMYYYAMDY (SEQ ID NO:88)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3；(c)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GFTFNTYAMH (SEQ ID NO:86)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列RIRSKSSNYATY (SEQ ID NO:94)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列DGIYYYGTMYYYAMDY (SEQ ID NO:88)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3；(d)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列TYAMH (SEQ ID NO:95)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列RIRSKSSNYATYYADSVKD (SEQ ID NO:87)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列DGIYYYGTMYYYAMDY (SEQ ID NO:88)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3；或(e)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列NTYAMH (SEQ ID NO:96)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列WVARIRSKSSNYATY (SEQ ID NO:97)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列VRDGIYYYGTMYYYAMD (SEQ ID NO:98)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列DYYGNSFMYWY (SEQ ID NO:99)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LLIYFASNLE (SEQ ID NO:100)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPW (SEQ ID NO:101)之輕鏈可變區CDR3。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含：(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GFTFNTYAMH (SEQ ID NO:86)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列RIRSKSSNYATYYADSVKD (SEQ ID NO:87)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列DGIYYYGTMYYYAMDY (SEQ ID NO:88)之重鏈可變區CDR3，及/或(b)輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GFTFNTYAMH (SEQ ID NO:86)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列RIRSKSSNYATYYADSVKD (SEQ ID NO:87)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列DGIYYYGTMYYYAMDY (SEQ ID NO:88)之重鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含：(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GFTFNTYAMH (SEQ ID NO:86)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列RIRSKSSNYATYYADSVKD (SEQ ID NO:87)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列DGIYYYGTMYYYAMDY (SEQ ID NO:88)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含重鏈可變區，其包含抗體51A1之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列且與SEQ ID NO:135之序列具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致性；及輕鏈可變區，其包含抗體51A1之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列且與SEQ ID NO:136之序列具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致性。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:135之序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%一致性之重鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:136之序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含含有SEQ ID NO:135之胺基酸序列之重鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含含有SEQ ID NO:136之胺基酸序列之輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:135具有至少80%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:136具有至少80%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:135具有至少90%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:136具有至少90%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:135具有至少95%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:136具有至少95%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含含有SEQ ID NO:135之胺基酸序列之重鏈可變區及含有SEQ ID NO:136之胺基酸序列之輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑(例如雙重結合劑)包含來自抗體64A12、其人類化形式(例如Hz64A12)或其變異體之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3及/或輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含重鏈可變區，其包含來自抗體64A12或Hz64A12之重鏈可變區CDR1、重鏈可變區CDR2及重鏈可變區CDR3。在其他實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含輕鏈可變區，其包含來自抗體64A12或Hz64A12之輕鏈可變區CDR1、輕鏈可變區CDR2及輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含：(a)重鏈可變區，其包含重鏈可變區CDR1、重鏈可變區CDR2、重鏈可變區CDR3；及(b)輕鏈可變區，其包含輕鏈可變區CDR1、輕鏈可變區CDR2及輕鏈可變區CDR3，該等CDR來自抗體64A12或Hz64A12。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑係抗體64A12之人類化形式。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑係抗體64A12之變異體。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑係抗體Hz64A12之變異體。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含：(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GFTFNTYAMH (SEQ ID NO:86)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列RIRSKSSNYATYYADSVKD (SEQ ID NO:87)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列DGIYYYDTMYYYAMDY (SEQ ID NO:102)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFIY (SEQ ID NO:103)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3；(b)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GFTFNTY (SEQ ID NO:92)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列RSKSSNYA (SEQ ID NO:93)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列DGIYYYDTMYYYAMDY (SEQ ID NO:102)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFIY (SEQ ID NO:103)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3；(c)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GFTFNTYAMH (SEQ ID NO:86)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列RIRSKSSNYATY (SEQ ID NO:94)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列DGIYYYDTMYYYAMDY (SEQ ID NO:102)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFIY (SEQ ID NO:103)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3；(d)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列TYAMH (SEQ ID NO:95)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列RIRSKSSNYATYYADSVKD (SEQ ID NO:87)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列DGIYYYDTMYYYAMDY (SEQ ID NO:102)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFIY (SEQ ID NO:103)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3；或(e)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列NTYAMH (SEQ ID NO:96)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列WVARIRSKSSNYATY (SEQ ID NO:97)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列VRDGIYYYDTMYYYAMD (SEQ ID NO:104)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列DYYGNSFIYWY (SEQ ID NO:105)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LLIYFASNLE (SEQ ID NO:100)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPW (SEQ ID NO:101)之輕鏈可變區CDR3。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含：(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GFTFNTYAMH (SEQ ID NO:86)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列RIRSKSSNYATYYADSVKD (SEQ ID NO:87)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列DGIYYYDTMYYYAMDY (SEQ ID NO:102)之重鏈可變區CDR3，及/或(b)輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFIY (SEQ ID NO:103)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GFTFNTYAMH (SEQ ID NO:86)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列RIRSKSSNYATYYADSVKD (SEQ ID NO:87)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列DGIYYYDTMYYYAMDY (SEQ ID NO:102)之重鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFIY (SEQ ID NO:103)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含：(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GFTFNTYAMH (SEQ ID NO:86)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列RIRSKSSNYATYYADSVKD (SEQ ID NO:87)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列DGIYYYDTMYYYAMDY (SEQ ID NO:102)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFIY (SEQ ID NO:103)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含重鏈可變區，其包含抗體64A12之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列且與SEQ ID NO:137之序列具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致性；及輕鏈可變區，其包含抗體64A12之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列且與SEQ ID NO:138之序列具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致性。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:137之序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%一致性之重鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:138之序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含含有SEQ ID NO:137之胺基酸序列之重鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含含有SEQ ID NO:138之胺基酸序列之輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:137具有至少80%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:138具有至少80%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:137具有至少90%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:138具有至少90%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:137具有至少95%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:138具有至少95%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含含有SEQ ID NO:137之胺基酸序列之重鏈可變區及含有SEQ ID NO:138之胺基酸序列之輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含重鏈可變區，其包含抗體Hz64A12之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列且與SEQ ID NO:139之序列具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致性；及輕鏈可變區，其包含抗體Hz64A12之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列且與SEQ ID NO:140之序列具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致性。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:139之序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%一致性之重鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:140之序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含含有SEQ ID NO:139之胺基酸序列之重鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含含有SEQ ID NO:140之胺基酸序列之輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:139具有至少80%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:140具有至少80%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:139具有至少90%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:140具有至少90%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:139具有至少95%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:140具有至少95%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含含有SEQ ID NO:139之胺基酸序列之重鏈可變區及含有SEQ ID NO:140之胺基酸序列之輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含重鏈，其包含含有胺基酸序列GFTFNTYAMH (SEQ ID NO:86)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列RIRSKSSNYATYYADSVKD (SEQ ID NO:87)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列DGIYYYDTMYYYAMDY (SEQ ID NO:102)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈，其包含含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFIY (SEQ ID NO:103)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3，其中重鏈包含與SEQ ID NO:152之序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%、至少98%、至少99%或100%之一致性，且其中輕鏈包含與SEQ ID NO:153之序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%、至少98%、至少99%或100%之一致性。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含重鏈，其包含含有胺基酸序列GFTFNTYAMH (SEQ ID NO:86)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列RIRSKSSNYATYYADSVKD (SEQ ID NO:87)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列DGIYYYDTMYYYAMDY (SEQ ID NO:102)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈，其包含含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFIY (SEQ ID NO:103)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3，其中重鏈包含與SEQ ID NO:152之序列至少95%之一致性，且其中輕鏈包含與SEQ ID NO:153之序列至少95%之一致性。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含(a)重鏈，其包含SEQ ID NO:152之胺基酸，及(b)輕鏈，其包含含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFIY (SEQ ID NO:103)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3，其中輕鏈包含與SEQ ID NO:153之序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%、至少98%、至少99%或100%之一致性。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含(a)重鏈，其包含SEQ ID NO:152之胺基酸，及(b)輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFIY (SEQ ID NO:103)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含(a)重鏈，其包含含有胺基酸序列GFTFNTYAMH (SEQ ID NO:86)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列RIRSKSSNYATYYADSVKD (SEQ ID NO:87)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列DGIYYYDTMYYYAMDY (SEQ ID NO:102)之重鏈可變區CDR3，其中重鏈包含與SEQ ID NO:152之序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%、至少98%、至少99%或100%之一致性，及(b)輕鏈，其包含SEQ ID NO:153之胺基酸序列。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GFTFNTYAMH (SEQ ID NO:86)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列RIRSKSSNYATYYADSVKD (SEQ ID NO:87)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列DGIYYYDTMYYYAMDY (SEQ ID NO:102)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈，其包含SEQ ID NO:153之胺基酸序列。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑係包含含有SEQ ID NO:152之胺基酸序列之重鏈及含有SEQ ID NO:153之胺基酸序列之輕鏈的抗體。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:152之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%或至少95%一致性之重鏈。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:153之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%或至少95%一致性之輕鏈。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:152之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%或至少95%一致性之重鏈及與SEQ ID NO:153之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%或至少95%一致性之輕鏈。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:152之胺基酸序列具有至少90%一致性之重鏈。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:153之胺基酸序列具有至少90%一致性之輕鏈。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:152之胺基酸序列具有至少90%一致性之重鏈及與SEQ ID NO:153之胺基酸序列具有至少90%一致性之輕鏈。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含含有SEQ ID NO:152之胺基酸序列之重鏈。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含含有SEQ ID NO:153之胺基酸序列之輕鏈。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含含有SEQ ID NO:152之胺基酸序列之重鏈及含有SEQ ID NO:153之胺基酸序列之輕鏈。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑係包含SEQ ID NO:152之重鏈及/或SEQ ID NO:153之輕鏈之抗體。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑係包含SEQ ID NO:152之重鏈之抗體。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑係包含SEQ ID NO:153之輕鏈之抗體。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑係包含SEQ ID NO:152之重鏈及SEQ ID NO:153之輕鏈之抗體。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑(例如雙重結合劑)包含來自抗體73C4、其人類化形式或其變異體之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3及/或輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含重鏈可變區，其包含來自抗體73C4之重鏈可變區CDR1、重鏈可變區CDR2及重鏈可變區CDR3。在其他實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含輕鏈可變區，其包含來自抗體73C4之輕鏈可變區CDR1、輕鏈可變區CDR2及輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含：(a)重鏈可變區，其包含重鏈可變區CDR1、重鏈可變區CDR2、重鏈可變區CDR3；及(b)輕鏈可變區，其包含輕鏈可變區CDR1、輕鏈可變區CDR2及輕鏈可變區CDR3，該等CDR來自抗體73C4。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑係抗體73C4之人類化形式。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑係抗體73C4或人類化73C4之變異體。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含：(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYTFTDYYMN (SEQ ID NO:70)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NVNPNNGGTSYNQKFKG (SEQ ID NO:106)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列REIYFYGTIYYYAMDY (SEQ ID NO:107)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3；(b)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYTFTDY (SEQ ID NO:76)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NPNNGG (SEQ ID NO:77)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列REIYFYGTIYYYAMDY (SEQ ID NO:107)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3；(c)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYTFTDYYMN (SEQ ID NO:70)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NVNPNNGGTS (SEQ ID NO:108)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列REIYFYGTIYYYAMDY (SEQ ID NO:107)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3；(d)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列DYYMN (SEQ ID NO:79)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NVNPNNGGTSYNQKFKG (SEQ ID NO:106)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列REIYFYGTIYYYAMDY (SEQ ID NO:107)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3；或(e)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列TDYYMN (SEQ ID NO:80)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列WIGNVNPNNGGTS (SEQ ID NO:109)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列ARREIYFYGTIYYYAMD (SEQ ID NO:110)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列DYYGNSFMYWY (SEQ ID NO:99)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LLIYFASNLE (SEQ ID NO:100)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPW (SEQ ID NO:101)之輕鏈可變區CDR3。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含：(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYTFTDYYMN (SEQ ID NO:70)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NVNPNNGGTSYNQKFKG (SEQ ID NO:106)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列REIYFYGTIYYYAMDY (SEQ ID NO:107)之重鏈可變區CDR3，及/或(b)輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYTFTDYYMN (SEQ ID NO:70)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NVNPNNGGTSYNQKFKG (SEQ ID NO:106)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列REIYFYGTIYYYAMDY (SEQ ID NO:107)之重鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含：(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYTFTDYYMN (SEQ ID NO:70)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NVNPNNGGTSYNQKFKG (SEQ ID NO:106)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列REIYFYGTIYYYAMDY (SEQ ID NO:107)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含重鏈可變區，其包含抗體73C4之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列且與SEQ ID NO:141之序列具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致性；及輕鏈可變區，其包含抗體73C4之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列且與SEQ ID NO:142之序列具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致性。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:141之序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%一致性之重鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:142之序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含含有SEQ ID NO:141之胺基酸序列之重鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含含有SEQ ID NO:142之胺基酸序列之輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:141具有至少80%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:142具有至少80%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:141具有至少90%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:142具有至少90%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:141具有至少95%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:142具有至少95%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含含有SEQ ID NO:141之胺基酸序列之重鏈可變區及含有SEQ ID NO:142之胺基酸序列之輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑(例如雙重結合劑)包含來自抗體73D1、其人類化形式(例如Hz73D1)或其變異體之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3及/或輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含重鏈可變區，其包含來自抗體73D1或抗體Hz73D1.v1之重鏈可變區CDR1、重鏈可變區CDR2及重鏈可變區CDR3。在其他實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含輕鏈可變區，其包含來自抗體73D1或抗體Hz73D1.v1之輕鏈可變區CDR1、輕鏈可變區CDR2及輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含：(a)重鏈可變區，其包含重鏈可變區CDR1、重鏈可變區CDR2、重鏈可變區CDR3；及(b)輕鏈可變區，其包含輕鏈可變區CDR1、輕鏈可變區CDR2及輕鏈可變區CDR3，該等CDR來自抗體73D1或抗體Hz73D1.v1。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑係抗體73D1之人類化形式。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑係抗體73D1之變異體。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑係抗體Hz73D1.v1之變異體。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含：(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYTFTDYYIN (SEQ ID NO:111)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NVNPNDGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO:112)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列REIYFYGTIYYYAMDY (SEQ ID NO:107)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3；(b)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYTFTDY (SEQ ID NO:76)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NPNDGG (SEQ ID NO:113)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列REIYFYGTIYYYAMDY (SEQ ID NO:107)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3；(c)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYTFTDYYIN (SEQ ID NO:111)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NVNPNDGGTT (SEQ ID NO:114)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列REIYFYGTIYYYAMDY (SEQ ID NO:107)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3；(d)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列DYYIN (SEQ ID NO:115)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NVNPNDGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO:112)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列REIYFYGTIYYYAMDY (SEQ ID NO:107)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3；或(e)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列TDYYIN (SEQ ID NO:116)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列WIGNVNPNDGGTT (SEQ ID NO:117)或胺基酸序列WMGNVNPNDGGTT (SEQ ID NO:124)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列ARREIYFYGTIYYYAMD (SEQ ID NO:110)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列DYYGNSFMYWY (SEQ ID NO:99)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列LLIYFASNLE (SEQ ID NO:100)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPW (SEQ ID NO:101)之輕鏈可變區CDR3。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含：(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYTFTDYYIN (SEQ ID NO:111)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NVNPNDGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO:112)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列REIYFYGTIYYYAMDY (SEQ ID NO:107)之重鏈可變區CDR3，及/或(b)輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYTFTDYYIN (SEQ ID NO:111)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NVNPNDGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO:112)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列REIYFYGTIYYYAMDY (SEQ ID NO:107)之重鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含：(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYTFTDYYIN (SEQ ID NO:111)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NVNPNDGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO:112)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列REIYFYGTIYYYAMDY (SEQ ID NO:107)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含：(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYTFTDYYIN (SEQ ID NO:111)之重鏈可變區CDR1，或其包含1個、2個、3個或4個胺基酸取代之變異體；含有胺基酸序列NVNPNDGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO:112)之重鏈可變區CDR2，或其包含1個、2個、3個或4個胺基酸取代之變異體；及含有胺基酸序列REIYFYGTIYYYAMDY (SEQ ID NO:107)之重鏈可變區CDR3，或其包含1個、2個、3個或4個胺基酸取代之變異體；及(b)輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1，或其包含1個、2個、3個或4個胺基酸取代之變異體；含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2，或其包含1個、2個、3個或4個胺基酸取代之變異體；及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3，或其包含1個、2個、3個或4個胺基酸取代之變異體。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含重鏈可變區，其包含抗體73D1之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列且與SEQ ID NO:143之序列具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致性；及輕鏈可變區，其包含抗體73D1之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列且與SEQ ID NO:142之序列具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致性。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:143之序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%一致性之重鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:142之序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含含有SEQ ID NO:143之胺基酸序列之重鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含含有SEQ ID NO:142之胺基酸序列之輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:143具有至少80%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:142具有至少80%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:143具有至少90%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:142具有至少90%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:143具有至少95%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:142具有至少95%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含含有SEQ ID NO:143之胺基酸序列之重鏈可變區及含有SEQ ID NO:142之胺基酸序列之輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含重鏈可變區，其包含抗體Hz73D1.v1之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列且與SEQ ID NO:144之序列具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致性；及輕鏈可變區，其包含抗體Hz73D1.v1之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3之胺基酸序列且與SEQ ID NO:145之序列具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致性。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:144之序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%一致性之重鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:145之序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含含有SEQ ID NO:144之胺基酸序列之重鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含含有SEQ ID NO:145之胺基酸序列之輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:144具有至少80%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:145具有至少80%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:144具有至少90%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:145具有至少90%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:144具有至少95%序列一致性之重鏈可變區及與SEQ ID NO:145具有至少95%序列一致性之輕鏈可變區。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含含有SEQ ID NO:144之胺基酸序列之重鏈可變區及含有SEQ ID NO:145之胺基酸序列之輕鏈可變區。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含重鏈可變區，其包含含有GYTFTDYYIN (SEQ ID NO:111)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NVNPNDGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO:112)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列REIYFYGTIYYYAMDY (SEQ ID NO:107)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3，其中重鏈可變區包含與SEQ ID NO:143之序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%、至少98%之一致性，且其中輕鏈可變區包含與SEQ ID NO:142之序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%、至少98%之一致性。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含重鏈可變區，其包含含有GYTFTDYYIN (SEQ ID NO:111)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NVNPNDGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO:112)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列REIYFYGTIYYYAMDY (SEQ ID NO:107)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3，其中重鏈可變區包含與SEQ ID NO:144之序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%、至少98%之一致性，且其中輕鏈可變區包含與SEQ ID NO:145之序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%、至少98%之一致性。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含重鏈，其包含含有GYTFTDYYIN (SEQ ID NO:111)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NVNPNDGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO:112)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列REIYFYGTIYYYAMDY (SEQ ID NO:107)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈，其包含含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3，其中重鏈包含與SEQ ID NO:156之序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%、至少98%、至少99%或100%之一致性，且其中輕鏈包含與SEQ ID NO:157之序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%、至少98%、至少99%或100%之一致性。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含重鏈，其包含含有GYTFTDYYIN (SEQ ID NO:111)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NVNPNDGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO:112)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列REIYFYGTIYYYAMDY (SEQ ID NO:107)之重鏈可變區CDR3，及輕鏈，其包含含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3，其中重鏈包含與SEQ ID NO:156之序列至少95%之一致性，且其中輕鏈包含與SEQ ID NO:157之序列至少95%之一致性。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含(a)重鏈，其包含SEQ ID NO:156之胺基酸，及(b)輕鏈，其包含含有RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3，其中輕鏈包含與SEQ ID NO:157之序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%、至少98%、至少99%或100%之一致性。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含(a)重鏈，其包含SEQ ID NO:156之胺基酸，及(b)輕鏈，其包含含有RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含：(a)重鏈，其包含含有胺基酸序列GYTFTDYYIN (SEQ ID NO:111)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NVNPNDGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO:112)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列REIYFYGTIYYYAMDY (SEQ ID NO:107)之重鏈可變區CDR3，其中重鏈包含與SEQ ID NO:156之序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%、至少98%、至少99%或100%之一致性，及(b)輕鏈，其包含SEQ ID NO:157之胺基酸序列。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含：(a)重鏈，其包含含有胺基酸序列GYTFTDYYIN (SEQ ID NO:111)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NVNPNDGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO:112)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列REIYFYGTIYYYAMDY (SEQ ID NO:107)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈，其包含SEQ ID NO:157之胺基酸序列。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑係包含含有SEQ ID NO:156之胺基酸序列之重鏈及含有SEQ ID NO:157之胺基酸序列之輕鏈的抗體。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:156之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%或至少95%一致性之重鏈。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:157之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%或至少95%一致性之輕鏈。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:156之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%或至少95%一致性之重鏈及與SEQ ID NO:157之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%或至少95%一致性之輕鏈。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:156之胺基酸序列具有至少90%一致性之重鏈。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:157之胺基酸序列具有至少90%一致性之輕鏈。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含與SEQ ID NO:156之胺基酸序列具有至少90%一致性之重鏈及與SEQ ID NO:157之胺基酸序列具有至少90%一致性之輕鏈。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含含有SEQ ID NO:156之胺基酸序列之重鏈。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含含有SEQ ID NO:157之胺基酸序列之輕鏈。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含含有SEQ ID NO:156之胺基酸序列之重鏈及含有SEQ ID NO:157之胺基酸序列之輕鏈。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑係包含SEQ ID NO:156之重鏈及/或SEQ ID NO:157之輕鏈之抗體。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑係包含SEQ ID NO:156之重鏈之抗體。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑係包含SEQ ID NO:157之輕鏈之抗體。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑係包含SEQ ID NO:156之重鏈及SEQ ID NO:157之輕鏈之抗體。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑係抗體73D1。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑係抗體Hz73D1.v1。
本文提供與一或多種本文所述之結合劑競爭結合至ILT2、ILT4或ILT2及ILT4二者之劑。在一些實施例中，劑與一或多種本文所述之抗體競爭結合至ILT2、ILT4或ILT2及ILT4二者。在一些實施例中，與一或多種本文所述之抗體競爭之劑係抗體。在一些實施例中，劑與一種本文所述之抗體結合相同之抗原決定基。在一些實施例中，劑結合與一種本文所述之抗體結合之抗原決定基重疊之抗原決定基。預期與本文所述之抗體競爭或結合相同抗原決定基之抗體及抗原結合片段顯示相似的功能性質。
在一些實施例中，劑與參考抗體競爭結合至人類ILT2、ILT4或ILT2及ILT4二者，其中參考抗體包含：(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYTFTDYYIN (SEQ ID NO:111)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NVNPNDGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO:112)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列REIYFYGTIYYYAMDY (SEQ ID NO:107)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，劑與參考抗體競爭結合至人類ILT2，其中參考抗體包含：(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYTFTDYYIN (SEQ ID NO:111)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NVNPNDGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO:112)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列REIYFYGTIYYYAMDY (SEQ ID NO:107)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3。
在一些實施例中，劑與參考抗體競爭結合至人類ILT2、ILT4或ILT2及ILT4二者，其中參考抗體包含：(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYTFTDYYMN (SEQ ID NO:70)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列DFNPNNGGTTYNQKFEG (SEQ ID NO:71)或DFNPNNAGTTYNQKFEG (SEQ ID NO:118)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列GRFYYGSLYSFDY (SEQ ID NO:72)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASGNIHNYLA (SEQ ID NO:73)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NAKTLAD (SEQ ID NO:74)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QHFWTSIT (SEQ ID NO:75)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，劑與參考抗體競爭結合至人類ILT4，其中參考抗體包含：(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYTFTDYYMN (SEQ ID NO:70)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列DFNPNNGGTTYNQKFEG (SEQ ID NO:71)或DFNPNNAGTTYNQKFEG (SEQ ID NO:118)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列GRFYYGSLYSFDY (SEQ ID NO:72)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASGNIHNYLA (SEQ ID NO:73)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NAKTLAD (SEQ ID NO:74)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QHFWTSIT (SEQ ID NO:75)之輕鏈可變區CDR3。
在一些實施例中，本文所述之ILT結合劑(例如ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑)包含抗體，其中抗體之至少一或多個恆定區已經修飾或缺失。在一些實施例中，抗體包含對三個重鏈恆定區(CH1、CH2或CH3)中之一或多者及/或對輕鏈恆定區(CL)之一或多種修飾。在一些實施例中，抗體包含對鉸鏈區之一或多種修飾。在一些實施例中，經修飾抗體之重鏈恆定區包含至少一個人類恆定區。在一些實施例中，經修飾抗體之重鏈恆定區包含一個以上之人類恆定區。在一些實施例中，對恆定區之修飾包含一或多個區域中之一或多個胺基酸之添加、缺失或取代。在一些實施例中，一或多個區域自經修飾抗體之恆定區部分或完全缺失。在一些實施例中，整個CH2結構域已自抗體移除(ΔCH2構築物)。在一些實施例中，一或多個區域自經修飾抗體之鉸鏈區部分或完全缺失。在一些實施例中，缺失的恆定區經短胺基酸間隔體替代，此提供通常由缺失的恆定區賦予之一定分子撓性。在一些實施例中，缺失的鉸鏈區經短胺基酸間隔體替代，此提供通常由缺失的鉸鏈區賦予之一定分子撓性。在一些實施例中，經修飾抗體包含直接融合至抗體鉸鏈區之CH3結構域。在一些實施例中，經修飾抗體包含插入鉸鏈區與經修飾CH2及/或CH3結構域之間之肽間隔體。
此項技術中已知，抗體之恆定區調介若干效應功能且該等效應功能可端視抗體之同型而變化。舉例而言，補體之C1組分與IgG或IgM抗體(結合至抗原)之Fc區之結合活化補體系統。補體之活化在細胞病原體之調理作用(opsonization)及溶解方面至關重要。補體之活化亦刺激發炎反應且可參與自體免疫過敏性。另外，抗體之Fc區可結合細胞表面上之Fc受體(FcR)。存在多種特異性針對不同類別之抗體之Fc受體，包括IgG (γ受體)、IgE (ε受體)、IgA (α受體)及IgM (μ受體)。抗體與細胞表面上之Fc受體之結合觸發多種重要且多樣之生物反應，包括吞食及破壞抗體包被之粒子、清除免疫複合物、藉由殺手細胞溶解抗體包被之靶細胞(稱為抗體依賴性細胞毒性或ADCC)、釋放發炎調介劑、胎盤轉移及控制免疫球蛋白產生。
在一些實施例中，ILT結合劑包含變異體Fc區。人類IgG1、IgG2、IgG3及IgG4之Fc區之胺基酸序列為熟習此項技術者已知(例如代表性人類IgG1區係SEQ ID NO:158)。在一些情形下，已在天然抗體中鑑別出具有胺基酸變化之Fc區。在一些實施例中，利用與天然Fc區相比在特定胺基酸位置取代來改造變異體Fc區。變異體Fc區為此項技術中所熟知且包括(但不限於) SEQ ID NO:159、SEQ ID NO:160、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:162及SEQ ID NO:163。
在一些實施例中，經修飾抗體提供改變的效應功能，其進而影響抗體之生物概況。舉例而言，在一些實施例中，恆定區之缺失或不活化(經由點突變或其他方式)會減少經修飾抗體在其循環時之Fc受體結合。在一些實施例中，恆定區修飾會延長抗體之血清半衰期。在一些實施例中，恆定區修飾會縮短抗體之血清半衰期。在一些實施例中，恆定區修飾降低或去除抗體之ADCC及/或補體依賴性細胞毒性(CDC)。在一些實施例中，人類IgG1 Fc區中使用相應IgG2或IgG4殘基之特定胺基酸取代會降低經修飾抗體之效應功能(例如ADCC及CDC)。在一些實施例中，經修飾抗體不具一或多種效應功能。在一些實施例中，經修飾抗體不具任何可偵測到之效應功能(例如「無效應」抗體)。在一些實施例中，經修飾抗體不具ADCC活性及/或不具CDC活性。在一些實施例中，經修飾抗體不結合Fc受體及/或補體因子。在一些實施例中，經修飾抗體不具效應功能。在一些實施例中，恆定區修飾會增加或增強抗體之ADCC及/或CDC。在一些實施例中，恆定區經修飾以消除二硫鍵或寡糖部分。在一些實施例中，恆定區經修飾以添加/取代一或多個胺基酸以提供一或多個細胞毒素、寡糖或碳水化合物連接位點。
可使用熟知之生物化學或分子改造技術對本文所述抗體之恆定區進行修飾。在一些實施例中，藉由將適宜核苷酸變化引入編碼DNA中及/或藉由合成期望抗體或多肽來製備抗體變異體。使用該等改造技術修飾抗體可能破壞特定序列或區域所提供之活性或效應功能，同時實質上維持經修飾抗體之結構、結合活性及其他期望特徵。
本揭示案進一步涵蓋與本文所述之重組、單株、嵌合、人類化及人類抗體或其抗體片段實質上同源之其他變異體及等效物。在一些實施例中，期望改良抗體之結合親和力。在一些實施例中，期望調節抗體之生物性質，包括(但不限於)特異性、熱穩定性、表現水準、效應功能、糖基化、免疫原性及/或溶解度。熟習此項技術者應了解，胺基酸變化可改變抗體之轉譯後過程，例如改變糖基化位點之數量或位置或改變膜錨定特徵。
變化可藉由對編碼抗體或多肽之多核苷酸中之一或多個核苷酸進行取代、缺失或插入、從而引起與天然抗體或多肽序列相比胺基酸或胺基酸序列之變化來生成。在一些實施例中，胺基酸取代係用具有相似結構及/或化學性質之另一胺基酸替代一個胺基酸、例如用絲胺酸替代白胺酸(即保守胺基酸替代)之結果。在一些實施例中，取代、缺失或插入包括相對於母體分子少於25個胺基酸之取代、少於20個胺基酸之取代、少於15個胺基酸之取代、少於10個胺基酸之取代、少於5個胺基酸之取代、少於4個胺基酸之取代、少於3個胺基酸之取代或少於2個胺基酸之取代。在一些實施例中，胺基酸序列之生物有用及/或相關之變化係藉由與親代抗體相比系統地在序列中製造插入、缺失或取代並測試所得變異體蛋白之活性來測定。
在一些實施例中，變異體可包括在抗體或多肽之胺基及/或羧基末端添加胺基酸殘基。添加胺基酸殘基之長度可介於1個殘基至100個或更多個殘基之範圍內。在一些實施例中，變異體包含N末端甲硫胺醯基殘基。在一些實施例中，變異體包含另一多肽/蛋白質以產生融合蛋白。在一些實施例中，變異體經改造以可偵測且可包含可偵測標記及/或蛋白質(例如螢光標籤、螢光蛋白或酶)。
在一些實施例中，不參與維持抗體之正確構象之半胱胺酸殘基經取代或缺失以調節抗體之特徵，例如以改良氧化穩定性及/或防止異常二硫化物交聯。相反，在一些實施例中，添加一或多個半胱胺酸殘基以產生二硫鍵以改良穩定性。
在一些實施例中，本揭示案之抗體為「去免疫化」。抗體之去免疫化通常係由引入可去除T細胞抗原決定基(已知或預測)而不顯著降低抗體之結合親和力或其他期望活性之特定胺基酸突變(例如取代、缺失、添加)組成。
本文所述之變異體抗體或多肽可使用此項技術中已知之方法生成，包括(但不限於)定點誘變、丙胺酸掃描誘變及PCR誘變。
在一些實施例中，本文所述之ILT結合劑(例如ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑)經化學修飾。在一些實施例中，ILT結合劑係(i)抗ILT2抗體，(ii)抗ILT4抗體，或(iii)抗ILT2/ILT4抗體，其藉由糖基化、乙醯化、聚乙二醇化、磷酸化、醯胺化、藉由已知保護/阻斷基團衍生、蛋白水解裂解及/或連接至細胞配位體或其他蛋白質進行化學修飾。多種化學修飾中之任一者可藉由已知技術實施。在一些實施例中，ILT結合劑係抗體片段(例如scFv、Fv、Fab、F(ab′)2
或F(ab′))，其中抗體片段連接(直接或間接)至半衰期延長部分，包括(但不限於)聚乙二醇(PEG)、PEG模擬物、XTEN®、血清白蛋白、聚唾液酸、N-(2-羥丙基)甲基丙烯醯胺或葡聚糖。
本揭示案涵蓋在非免疫球蛋白骨架上構建之ILT結合劑，其中劑與本文所揭示之抗ILT抗體結合相同的抗原決定基或基本上相同的抗原決定基。在一些實施例中，基於非免疫球蛋白之結合劑係在競爭性結合分析中與本文所述之(i)抗ILT2抗體、(ii)抗ILT4抗體及/或(iii)抗ILT2/ILT4抗體競爭之劑。在一些實施例中，替代性ILT結合劑包含支架蛋白。通常，支架蛋白可基於其骨架之架構指配至三組中之一者：(1)由α-螺旋組成之支架；(2)具有極少二級結構或α-螺旋及β-片之不規則架構之小支架；及(3)主要由β-片組成之支架。支架蛋白包括(但不限於)抗運載蛋白，其係基於脂質運載蛋白支架；阿德耐汀(adnectin)，其係基於人類3型纖連蛋白之第10結構域；親和體，其係基於金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus
)蛋白A之Ig結合區中之B結構域；darpin，其係基於錨蛋白重複結構域蛋白；fynomer，其係基於人類Fyn蛋白激酶之SH3結構域；親和素，其係基於嗜酸熱硫化葉菌(Sulfolobus acidocaldarius
)之Sac7d；載脂蛋白擬抗體(affilin)，其係基於人類γ-B-晶體蛋白或人類泛素；厄維體(avimer)，其係基於膜受體蛋白之A-結構域；打結素(半胱胺酸紐結小蛋白)，其係基於穩定的30胺基酸抗平行β-股蛋白折疊；及Kunitz結構域抑制劑支架，其係基於含有三個二硫鍵及三個環之結構。
在一些實施例中，ILT2結合劑包含經改造之支架蛋白，其包含表1中所顯示之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT2結合劑包含經改造之支架蛋白，其包含含有胺基酸序列GFSLTNYGVS (SEQ ID NO:22)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列IIWGDGSTNYHSALIS (SEQ ID NO:23)之重鏈可變區CDR2、含有胺基酸序列PNWDTYAMDF (SEQ ID NO:24)之重鏈可變區CDR3、含有胺基酸序列RASQDISNFLN (SEQ ID NO:25)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列CTSKLHS (SEQ ID NO:26)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQGNTLPPT (SEQ ID NO:27)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT2結合劑包含經改造之支架蛋白，其包含來自抗體27F9之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在一些實施例中，ILT4結合劑包含經改造之支架蛋白，其包含表2中所顯示之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT4結合劑包含經改造之支架蛋白，其包含含有胺基酸序列GYSFTGYYMH (SEQ ID NO:38)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列RVYPNNGDTSYNQKFKV (SEQ ID NO:39)之重鏈可變區CDR2、含有胺基酸序列GATVVESLFAY (SEQ ID NO:40)之重鏈可變區CDR3、含有胺基酸序列RASESVDNYGNNFLH (SEQ ID NO:41)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列RTSNLES (SEQ ID NO:42)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQSNEDPYT (SEQ ID NO:43)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT4結合劑包含經改造之支架蛋白，其包含來自抗體47C8之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在一些實施例中，ILT4結合劑包含經改造之支架蛋白，其包含表3中所顯示之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT4結合劑包含經改造之支架蛋白，其包含含有胺基酸序列GYTFTNYGMN (SEQ ID NO:54)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列WINTYIGEPIYADDFKG (SEQ ID NO:55)之重鏈可變區CDR2、含有胺基酸序列RSDYDGYAMDY (SEQ ID NO:56)之重鏈可變區CDR3、含有胺基酸序列KSSQSLLYSGNQKNYLA (SEQ ID NO:57)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列WASTRES (SEQ ID NO:58)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQHDSYPT (SEQ ID NO:59)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT4結合劑包含經改造之支架蛋白，其包含來自抗體48A5之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含經改造之支架蛋白，其包含表4A或表4B中所顯示之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含經改造之支架蛋白，其包含含有胺基酸序列GYTFTDYYMN (SEQ ID NO:70)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列DFNPNNGGTTYNQKFEG (SEQ ID NO:71)或DFNPNNAGTTYNQKFEG (SEQ ID NO:118)之重鏈可變區CDR2、含有胺基酸序列GRFYYGSLYSFDY (SEQ ID NO:72)之重鏈可變區CDR3、含有胺基酸序列RASGNIHNYLA (SEQ ID NO:73)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NAKTLAD (SEQ ID NO:74)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QHFWTSIT (SEQ ID NO:75)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含經改造之支架蛋白，其包含來自抗體47H6或抗體Hz47H6.v2之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含經改造之支架蛋白，其包含表5中所顯示之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含經改造之支架蛋白，其包含含有胺基酸序列GFTFNTYAMH (SEQ ID NO:86)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列RIRSKSSNYATYYADSVKD (SEQ ID NO:87)之重鏈可變區CDR2、含有胺基酸序列DGIYYYGTMYYYAMDY (SEQ ID NO:88)之重鏈可變區CDR3、含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含經改造之支架蛋白，其包含來自抗體51A1之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含經改造之支架蛋白，其包含表6A或表6B中所顯示之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含經改造之支架蛋白，其包含含有胺基酸序列GFTFNTYAMH (SEQ ID NO:86)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列RIRSKSSNYATYYADSVKD (SEQ ID NO:87)之重鏈可變區CDR2、含有胺基酸序列DGIYYYDTMYYYAMDY (SEQ ID NO:102)之重鏈可變區CDR3、含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFIY (SEQ ID NO:103)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含經改造之支架蛋白，其包含來自抗體64A12之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含經改造之支架蛋白，其包含表7中所顯示之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含經改造之支架蛋白，其包含含有胺基酸序列GYTFTDYYMN (SEQ ID NO:70)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NVNPNNGGTSYNQKFKG (SEQ ID NO:106)之重鏈可變區CDR2、含有胺基酸序列REIYFYGTIYYYAMDY (SEQ ID NO:107)之重鏈可變區CDR3、含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含經改造之支架蛋白，其包含來自抗體73C4之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含經改造之支架蛋白，其包含表8A或表8B中所顯示之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含經改造之支架蛋白，其包含含有胺基酸序列GYTFTDYYIN (SEQ ID NO:111)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NVNPNDGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO:112)之重鏈可變區CDR2、含有胺基酸序列REIYFYGTIYYYAMDY (SEQ ID NO:107)之重鏈可變區CDR3、含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含經改造之支架蛋白，其包含來自抗體73D1或抗體Hz73D1.v1之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在一些實施例中，組合物包含本文所述之ILT結合劑。在一些實施例中，組合物包含本文所述之ILT2結合劑。在一些實施例中，組合物包含本文所述之ILT4結合劑。在一些實施例中，組合物包含本文所述之ILT2/ILT4結合劑。在一些實施例中，組合物包含本文所述之抗ILT2抗體。在一些實施例中，組合物包含本文所述之單株抗ILT2抗體。在一些實施例中，組合物包含本文所述之抗ILT4抗體。在一些實施例中，組合物包含本文所述之單株抗ILT4抗體。在一些實施例中，組合物包含本文所述之抗ILT2/ILT4抗體。在一些實施例中，組合物包含本文所述之單株抗ILT2/ILT4抗體。在一些實施例中，組合物包含選自由以下組成之群之抗體：抗體27F9、抗體47C8、抗體48A5、抗體47H6、抗體51A1、抗體64A12、抗體73C4或抗體73D1或其人類化形式。
在一些實施例中，醫藥組合物包含本文所述之ILT結合劑及醫藥學上可接受之載劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含本文所述之ILT2結合劑及醫藥學上可接受之載劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含本文所述之ILT4結合劑及醫藥學上可接受之載劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含本文所述之ILT2/ILT4結合劑及醫藥學上可接受之載劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含本文所述之抗ILT2抗體及醫藥學上可接受之載劑。在一些實施例中，組合物包含本文所述之單株抗ILT2抗體及醫藥學上可接受之載劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含本文所述之抗ILT4抗體及醫藥學上可接受之載劑。在一些實施例中，組合物包含本文所述之單株抗ILT4抗體及醫藥學上可接受之載劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含本文所述之抗ILT2/ILT4抗體及醫藥學上可接受之載劑。在一些實施例中，組合物包含本文所述之單株抗ILT2/ILT4抗體及醫藥學上可接受之載劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含選自由以下組成之群之抗體：抗體27F9、抗體47C8、抗體48A5、抗體47H6、抗體51A1、抗體64A12、抗體73C4或抗體73D1或其人類化形式及醫藥學上可接受之載劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含抗體Hz73D1.v1及醫藥學上可接受之載劑。
在一些實施例中，ILT結合劑係經分離的。在一些實施例中，ILT結合劑係實質上純的。
一般而言，抗原-抗體相互作用係非共價且可逆的，由氫鍵、疏水相互作用及靜電以及凡得瓦力(van der Waals force)之組合形成。當闡述抗原-抗體複合物之強度時，通常使用術語親和力及/或親合力。抗體與其抗原之結合係可逆過程，且結合之親和力通常報告為平衡解離常數(KD
)。KD
係抗體解離速率(k解離
) (其自其抗原解離有多快)與抗體締合速率(k締合
) (其與其抗原結合有多快)之比率。在一些實施例中，KD
值係藉由量測特定抗體/抗原相互作用之k締合
及k解離
速率且然後使用該等值之比率計算KD
值來確定。KD
值可用於評估個別抗體/抗原相互作用之強度及將其排列等級。抗體之KD
越低，抗體對其靶之親和力越高。在一些實施例中，親和力係使用SPR技術(例如使用Biacore系統)來量測。親合力給出抗體-抗原複合物之總強度之量度。其取決於三個主要參數：(i)抗體對靶之親和力，(ii)抗體及抗原二者之化合價，及(iii)相互作用部分之結構排列。
在一些實施例中，ILT結合劑以下列解離常數(KD
)結合ILT2、ILT4或ILT2及ILT4二者：1 μM或更小、100 nM或更小、40 nM或更小、20 nM或更小、10 nM或更小、1 nM或更小、0.1 nM或更小、50 pM或更小、10 pM或更小、或1 pM或更小。在一些實施例中，ILT結合劑以約20 nM或更小之KD
結合ILT2、ILT4或ILT2及ILT4二者。在一些實施例中，ILT結合劑以10 nM或更小之KD
結合ILT2、ILT4或ILT2及ILT4二者。在一些實施例中，ILT結合劑以5 nM或更小之KD
結合ILT2、ILT4或ILT2及ILT4二者。在一些實施例中，ILT結合劑以3 nM或更小之KD
結合ILT2、ILT4或ILT2及ILT4二者。在一些實施例中，ILT結合劑以2 nM或更小之KD
結合ILT2、ILT4或ILT2及ILT4二者。在一些實施例中，ILT結合劑以1 nM或更小之KD
結合ILT2、ILT4或ILT2及ILT4二者。在一些實施例中，ILT結合劑以0.5 nM或更小之KD
結合ILT2、ILT4或ILT2及ILT4二者。在一些實施例中，ILT結合劑以0.1 nM或更小之KD
結合ILT2、ILT4或ILT2及ILT4二者。在一些實施例中，ILT結合劑以50 pM或更小之KD
結合ILT2、ILT4或ILT2及ILT4二者。在一些實施例中，ILT結合劑以25 pM或更小之KD
結合ILT2、ILT4或ILT2及ILT4二者。在一些實施例中，ILT結合劑以10 pM或更小之KD
結合ILT2、ILT4或ILT2及ILT4二者。在一些實施例中，ILT結合劑以1 pM或更小之KD
結合ILT2、ILT4或ILT2及ILT4二者。在一些實施例中，ILT結合劑以0.01 nM至2.5 nM之KD
結合ILT2、ILT4或ILT2及ILT4二者。在一些實施例中，ILT結合劑以0.1 nM至5 nM之KD
結合ILT2、ILT4或ILT2及ILT4二者。在一些實施例中，ILT結合劑以1 nM至5 nM之KD
結合ILT2、ILT4或ILT2及ILT4二者。在一些實施例中，結合劑對ILT2及/或ILT4之解離常數係使用固定在Biacore晶片上之ILT蛋白(例如ILT2或ILT4)及流過晶片之結合劑測定之解離常數。在一些實施例中，結合劑對ILT2及/或ILT4之解離常數係使用由Biacore晶片上之抗人類IgG抗體捕獲之結合劑及流過晶片之可溶性ILT2或ILT4測定之解離常數。
在一些實施例中，ILT結合劑以下列半最大有效濃度(EC50)結合ILT2、ILT4或ILT2及ILT4二者：1 μM或更小、100 nM或更小、40 nM或更小、20 nM或更小、10 nM或更小、1 nM或更小、或0.1 nM或更小。在一些實施例中，ILT結合劑以下列EC50結合人類ILT2、ILT4或ILT2及ILT4二者：1 μM或更小、100 nM或更小、40 nM或更小、20 nM或更小、10 nM或更小、1 nM或更小、或0.1 nM或更小。在一些實施例中，ILT結合劑以下列EC50結合食蟹猴或恆河猴ILT2：40 nM或更小、20 nM或更小、10 nM或更小、1 nM或更小或0.1 nM或更小。在一些實施例中，ILT結合劑以下列EC50結合ILT2及/或ILT4：0.1 nM至約3 nM、0.1 nM至2 nM、0.1 nM至1 nM、0.5 nM至3 nM、0.5 nM至2 nM、或0.5 nM至1 nM。
在一些實施例中，ILT結合劑結合人類ILT2及人類ILT4且具有以下性質中之至少一或多者：(i)結合恆河猴ILT2/4；(ii)結合食蟹猴ILT2/4；(iii)不結合ILT3、ILT5及LILRB5；(iv)不結合LILRA2、LILRA4、LILRA5及LILRA6；(v)係ILT2拮抗劑；(vi)係ILT4拮抗劑，(vii)抑制ILT2活性；(viii)抑制ILT4活性；(ix)抑制表現ILT2之細胞中之ILT2信號傳導；(x)抑制表現ILT4之細胞中之ILT4信號傳導；(xi)抑制ILT2與MHC I分子之結合；(xii)抑制ILT4與MHC I分子之結合；(xiii)抑制ILT2誘導之骨髓細胞阻抑；(xiv)抑制ILT4誘導之骨髓細胞阻抑；(xv)抑制ILT2誘導之骨髓細胞活性阻抑；(xvi)抑制ILT4誘導之骨髓細胞活性阻抑；(xvii)恢復骨髓細胞中之FcR活化；(xviii)增強NK細胞活性；(xix)增強CTL活性；及/或(xx)增強巨噬細胞吞噬作用。
本文所述之ILT結合劑(例如ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑)可藉由此項技術中已知之任一適宜方法來產生。此類方法介於直接蛋白質合成方法至構築編碼多肽序列之DNA序列及在適宜宿主中表現彼等序列之範圍內。在一些實施例中，DNA序列係使用重組技術藉由分離或合成編碼所關注野生型蛋白之DNA序列來構築。視情況地，可藉由位點特異性誘變對序列進行誘變以提供其功能變異體。在一些實施例中，使用寡核苷酸合成器藉由化學合成構築編碼所關注多肽之DNA序列。可基於期望多肽之胺基酸序列並選擇在將產生所關注重組多肽之宿主細胞中有利之彼等密碼子來設計寡核苷酸。標準方法可應用於合成編碼所關注經分離多肽之多核苷酸序列。舉例而言，可使用完整胺基酸序列來構築反向轉譯基因。另外，可合成含有編碼特定經分離多肽之核苷酸序列之DNA寡聚物。舉例而言，可合成編碼期望多肽之部分之若干小寡核苷酸且然後連結。個別寡核苷酸通常含有用於互補組裝之5′或3′懸突。
一旦組裝(藉由合成、定點誘變或另一方法)，編碼所關注特定多肽之多核苷酸序列可立即插入表現載體中且可操作連接至適於在期望宿主中表現蛋白質之表現控制序列。可藉由核苷酸測序、限制酶映射及/或適宜宿主中生物活性多肽之表現來確認正確組裝。
在一些實施例中，使用重組表現載體來擴增及表現編碼本文所述之ILT結合劑之DNA。舉例而言，重組表現載體可為可複製DNA構築物，其具有編碼ILT結合劑(例如抗ILT2/ILT4抗體或其抗原結合片段)之多肽鏈之合成或cDNA源性DNA片段，該等合成或cDNA源性DNA片段可操作連接至衍生自哺乳動物、微生物、病毒或昆蟲基因之適宜轉錄及/或轉譯調控元件。轉錄單元通常包含以下之總成：(1)一或多種在基因表現中具有調控作用之遺傳元件，例如轉錄啟動子及/或增強子，(2)轉錄成mRNA且轉譯成蛋白質之結構或編碼序列，及(3)適宜轉錄及轉譯起始及終止序列。調控元件可包括控制轉錄之操縱子序列。可另外納入通常由複製起點賦予之在宿主中複製之能力及幫助識別轉化體之選擇基因。DNA區域在其彼此功能相關時係「可操作連接的」。舉例而言，若信號肽(分泌性前導序列)表現為參與多肽之分泌之前體，則該信號肽之DNA可操作連接至該多肽之DNA；若啟動子控制編碼序列之轉錄，則該啟動子可操作連接至該編碼序列；或若核糖體結合位點經定位以允許轉譯，則該核糖體結合位點可操作連接至編碼序列。在一些實施例中，意欲用於酵母菌表現系統中之結構元件包括使得宿主細胞能夠細胞外分泌經轉譯蛋白質之前導序列。在一些實施例中，在重組蛋白在沒有前導序列或轉運序列下表現之情況下，多肽可包括N末端甲硫胺酸殘基。此殘基可隨後視情況地自所表現重組蛋白裂解以提供最終產物。
表現控制序列及表現載體之選擇通常取決於宿主之選擇。可採用眾多種表現宿主/載體組合。可用於真核宿主之表現載體包括例如包含來自SV40、牛乳頭瘤病毒、腺病毒及巨細胞病毒之表現控制序列之載體。可用於細菌宿主之表現載體包括已知細菌質體(例如來自大腸桿菌之質體，包括pCR1、pBR322、pMB9及其衍生物)及更寬宿主範圍之質體(例如M13及其他絲狀單股DNA噬菌體)。
在一些實施例中，本揭示案之ILT結合劑(例如ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑)係自一或多種載體表現。在一些實施例中，重鏈可變區係由一種載體表現且輕鏈可變區係由第二載體表現。在一些實施例中，重鏈可變區及輕鏈可變區係由一種載體表現。在一些實施例中，載體編碼本文所述ILT結合劑之重鏈可變區。在一些實施例中，載體編碼本文所述ILT結合劑之輕鏈可變區。在一些實施例中，載體編碼本文所述ILT結合劑之重鏈可變區及輕鏈可變區。在一些實施例中，重鏈多肽係由一種載體表現且輕鏈多肽係由第二載體表現。在一些實施例中，重鏈多肽及輕鏈多肽係由一種載體表現。在一些實施例中，載體編碼本文所述ILT結合劑之重鏈多肽。在一些實施例中，載體編碼本文所述ILT結合劑之輕鏈多肽。在一些實施例中，載體編碼本文所述ILT結合劑之重鏈多肽及輕鏈多肽。
適於在適宜啟動子控制下表現ILT結合劑(例如ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑)或ILT2或ILT4蛋白或其片段以用作抗原或免疫原之宿主細胞包括原核生物、酵母菌細胞、昆蟲細胞或更高級真核細胞。原核生物包括革蘭氏陰性(gram-negative)或革蘭氏陽性生物體，例如大腸桿菌或芽孢桿菌(Bacillus
)。更高級真核細胞包括如本文所述哺乳動物起源之已建立細胞株。亦可採用無細胞轉譯系統。適用於細菌、真菌、酵母菌及哺乳動物細胞宿主之選殖載體及表現載體以及蛋白質產生(包括抗體產生)之方法為此項技術中所熟知。
可使用多種哺乳動物培養系統來表現重組多肽。在哺乳動物細胞中表現重組蛋白可能合意之原因在於，該等蛋白質通常正確折疊，經適當修飾，且有生物功能。適宜哺乳動物宿主細胞株之實例包括(但不限於) COS-7 (猴腎臟源性)、L-929 (鼠類纖維母細胞源性)、C127 (鼠類乳房腫瘤源性)、3T3 (鼠類纖維母細胞源性)、CHO (中國倉鼠卵巢源性)、HeLa (人類子宮頸癌源性)、BHK (倉鼠腎臟纖維母細胞源性)、HEK-293 (人類胚胎腎臟源性)細胞株及其變異體。哺乳動物表現載體可包含非轉錄元件，例如複製起點、連接至欲表現基因之適宜啟動子及增強子及其他5′或3′側接非轉錄序列及5′或3′非轉譯序列，例如必需核糖體結合位點、多腺苷酸化位點、剪接供體及受體位點及轉錄終止序列。
在昆蟲細胞培養系統(例如桿狀病毒)中表現重組蛋白亦提供用於產生正確折疊且具生物功能之蛋白質之穩健方法。用於在昆蟲細胞中產生異源蛋白質之桿狀病毒系統為熟習此項技術者所熟知。
因此，本揭示案提供包含本文所述之ILT結合劑之細胞。在一些實施例中，細胞產生本文所述之ILT結合劑。在一些實施例中，細胞產生抗體。在一些實施例中，細胞產生結合人類ILT2之抗體。在一些實施例中，細胞產生結合人類ILT4之抗體。在一些實施例中，細胞產生結合人類ILT2及ILT4之抗體。在一些實施例中，細胞產生結合人類ILT2及食蟹猴ILT2之抗體。在一些實施例中，細胞產生抗ILT2抗體，稱為27F9。在一些實施例中，細胞產生抗ILT4抗體，稱為47C8。在一些實施例中，細胞產生抗ILT4抗體，稱為48A5。在一些實施例中，細胞產生抗ILT2/ILT4抗體，稱為47H6。在一些實施例中，細胞產生人類化抗ILT2/ILT4抗體，稱為Hz47H6.v2。在一些實施例中，細胞產生抗ILT2/ILT4抗體，稱為51A1。在一些實施例中，細胞產生抗ILT2/ILT4抗體，稱為64A12。在一些實施例中，細胞產生人類化抗ILT2/ILT4抗體，稱為Hz64A12。在一些實施例中，細胞產生抗ILT2/ILT4抗體，稱為73C4。在一些實施例中，細胞產生抗ILT2/ILT4抗體，稱為73D1。在一些實施例中，細胞產生人類化抗ILT2/ILT4抗體，稱為Hz73D1.v1。在一些實施例中，細胞係原核細胞。在一些實施例中，細胞係真核細胞。在一些實施例中，細胞係哺乳動物細胞。在一些實施例中，細胞係雜交瘤細胞。
由宿主細胞產生之蛋白質可根據任一適宜方法純化。標準方法包括層析(例如離子交換層析、親和層析及分級管柱層析)、離心、差異溶解度或藉由任何其他標準蛋白質純化技術。可將親和標籤(例如六組胺酸(His6；SEQ ID NO:173)、麥芽糖結合結構域、流行性感冒病毒包衣序列及麩胱甘肽-S-轉移酶)連接至蛋白質以允許藉由穿過適宜親和力管柱容易地純化。用於純化免疫球蛋白之親和層析方法可包括(但不限於)蛋白A、蛋白G及蛋白L層析。經分離蛋白質可使用包括(但不限於)以下之技術進行物理表徵：蛋白溶解、粒徑篩析層析(SEC)、質譜(MS)、核磁共振(NMR)、等電聚焦(IEF)、高效液相層析(HPLC)及x射線結晶學。經分離蛋白質之純度可使用熟習此項技術者已知之技術來測定，包括(但不限於) SDS-PAGE、SEC、毛細管凝膠電泳、IEF及毛細管等電聚焦(cIEF)。
在一些實施例中，首先使用市售蛋白質濃縮過濾器(例如Amicon®或Millipore Pellicon®超濾單元)濃縮將重組蛋白分泌至培養基中之表現系統之上清液。濃縮步驟後，可將濃縮物施加至適宜純化基質。在一些實施例中，採用陰離子交換樹脂，例如具有二乙基胺基乙基(DEAE)側基之基質或受質。基質可為丙烯醯胺、瓊脂糖、葡聚糖、纖維素或常用於蛋白質純化之其他類型。在一些實施例中，採用陽離子交換步驟。適宜陽離子交換劑包括多種包含磺丙基或羧甲基之不溶性基質。在一些實施例中，採用羥基磷灰石介質，包括(但不限於)陶瓷羥基磷灰石(CHT)。在一些實施例中，採用一或多個採用疏水RP-HPLC介質(例如具有甲基側基或其他脂族基團之矽膠)之反相HPLC步驟來進一步純化重組蛋白。在一些實施例中，使用疏水相互作用層析(HIC)基於重組蛋白之疏水性來分離重組蛋白。HIC係可用於純化蛋白質同時維持生物活性之分離技術，此乃因使用之條件及基質係在與一些其他技術相比更少之變性條件下操作。可採用呈多個組合之一些或所有前述純化步驟以提供均質重組蛋白。
可藉由此項技術中已知之多種分析來分析本揭示案之ILT結合劑(例如ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑)之物理/化學性質及/或生物活性。在一些實施例中，測試抗ILT2抗體結合ILT2 (例如人類ILT2及/或食蟹猴/恆河猴ILT2)之能力。在一些實施例中，測試抗ILT4抗體結合ILT4 (例如人類ILT4)之能力。在一些實施例中，測試抗ILT2/ILT4抗體結合ILT2及ILT4 (例如人類ILT2、人類ILT4及食蟹猴/恆河猴ILT2)之能力。結合分析包括(但不限於) SPR (例如Biacore)、ELISA及FACS。在一些實施例中，測試抗ILT2抗體抑制、減少或阻斷ILT2與I類MHC抗原結合之能力。在一些實施例中，測試抗ILT4抗體抑制、減少或阻斷ILT4與I類MHC抗原結合之能力。在一些實施例中，測試抗ILT2/ILT4抗體抑制、減少或阻斷ILT2及ILT4與I類MHC抗原結合之能力。另外，可評估抗體之溶解度、穩定性、熱穩定性、黏度、表現水準、表現品質及/或純化效率。
在一些實施例中，基於每一個別抗體識別之抗原決定基對針對ILT2、ILT4或ILT2及ILT4生成之單株抗體分組，該過程稱為「抗原決定基分倉」。通常，以成對組合方式測試抗體且將彼此競爭之抗體一起分組至多個倉中。舉例而言，在預混合分倉分析中，將第一抗體固定在表面上且使第二抗體及抗原之預混合溶液流過固定之第一抗體。協力地，將抗原固定在表面上且使兩種抗體流過固定之抗原並競爭結合。使用該等技術，可鑑別出彼此阻斷之抗體。創建每一抗體相對於另一抗體之競爭性阻斷概況。阻斷結果確定每一抗體所處之倉。抗原決定基分倉之高通量方法為此項技術中已知且允許在短時間段內篩選及表徵大量抗體。結合相似抗原決定基之抗體通常共享相似的功能及/或能力。相反，結合不同抗原決定基之抗體可具有不同的功能活性。
在一些實施例中，抗原決定基倉包含至少一種來自由以下組成之群之抗體：27F9、47C8、48A5、47H6、51A1、64A12、73C4及73D1。在一些實施例中，抗原決定基倉包含至少抗體27F9及73D1。在一些實施例中，抗原決定基倉包含至少抗體27F9、73C4及73D1。在一些實施例中，抗原決定基倉包含至少抗體48A5及47H6。
抗原決定基映射係鑑別在靶蛋白/抗原上抗體(或其他結合劑)結合之結合位點或抗原決定基之過程。此項技術中已知用於映射靶蛋白上之抗原決定基之多種方法。該等方法包括(i)誘變，包括(但不限於)鳥槍誘變、定點誘變及丙胺酸掃描；(ii)結構域或片段掃描；(iii)肽掃描(例如Pepscan技術)；(iv)展示方法，包括(但不限於)噬菌體展示、微生物展示及核糖體/mRNA展示；(v)涉及蛋白溶解及質譜之方法；(vi)涉及醯胺氫/氘交換之方法；及(vii)結構測定，包括(但不限於) x射線結晶學及NMR。
在一些實施例中，經純化抗ILT抗體(例如抗ILT2抗體、抗ILT4抗體或抗ILT2/ILT4抗體)藉由包括(但不限於)以下之分析進行表徵：N末端測序、胺基酸分析、HPLC、質譜、差示掃描螢光測定(DSF)、nanoDSF、毛細管等電聚焦(cIEF)、離子交換層析及木瓜酶消化。
表徵免疫細胞功能之活體外分析包括(但不限於)細胞活化分析(例如細胞增殖分析)、細胞毒性T細胞(CTL)分析、T細胞阻抑分析、MDSC分析、自然殺手(NK)細胞分析、混合淋巴球反應(MLR)分析、細胞介素/趨化介素產生分析、FcR結合分析、吞噬作用分析及細胞遷移分析。在一些實施例中，提供用於鑑別影響ILT活性之抗ILT抗體之分析。「影響(affect)或影響(affecting) ILT活性」可包括例如抑制、降低、阻斷、拮抗、阻抑及/或干擾ILT2活性、ILT4活性或ILT2及ILT4活性。由於ILT2及ILT4通常用作負調控劑/抑制分子，故在一些實施例中，抑制、降低、阻斷、拮抗、阻抑及/或干擾ILT2及/或ILT4活性會阻斷ILT2誘導及/或ILT4誘導之生物功能阻抑。熟習此項技術者可將此能力稱為「釋放制動器」，例如，本文所述之抗ILT抗體阻斷原本將發送阻抑訊息之ILT2及/或ILT4之信號傳導。一旦釋放「制動器」，免疫系統便立即能夠發動針對例如腫瘤之反應或更強反應。
如本文所述，ILT2在骨髓細胞(例如單核球、巨噬細胞、樹突細胞(DC)及APC)以及NK細胞、B細胞及CD8+ T細胞(CTL)上表現。ILT2活性或ILT2信號傳導活性包括(但不限於)骨髓細胞之阻抑、骨髓細胞活性之阻抑、腫瘤相關骨髓細胞之阻抑、NK細胞之阻抑及細胞溶解T細胞(CTL)之阻抑。在一些實施例中，抑制、降低、阻斷、拮抗、阻抑及/或干擾ILT2活性會釋放ILT2誘導之活化信號阻抑。在一些實施例中，抗ILT2抗體或抗ILT2/ILT4抗體抑制ILT2信號傳導。在一些實施例中，抗ILT2抗體或抗ILT2/ILT4抗體抑制ILT2信號傳導，從而逆轉ILT2誘導之阻抑效應。在一些實施例中，抗ILT2抗體或抗ILT2/ILT4抗體抑制ILT2誘導之消光信號。在一些實施例中，抗ILT2抗體或抗ILT2/ILT4抗體增加骨髓細胞活性。在一些實施例中，抗ILT2抗體或抗ILT2/ILT4抗體增加APC活性。在一些實施例中，抗ILT2抗體或抗ILT2/ILT4抗體增加巨噬細胞活性。在一些實施例中，抗ILT2抗體或抗ILT2/ILT4抗體增加巨噬細胞吞噬作用。在一些實施例中，抗ILT2抗體或抗ILT2/ILT4抗體增加NK細胞活性。在一些實施例中，抗ILT2抗體或抗ILT2/ILT4抗體增加CTL活性。
ILT4在骨髓細胞(例如單核球、巨噬細胞、樹突細胞(DC)、骨髓源性阻抑細胞(MDSC)及APC)以及嗜中性球及嗜酸性球上表現。ILT4活性或ILT4信號傳導活性包括(但不限於)骨髓細胞之阻抑、骨髓細胞活性之阻抑及腫瘤相關骨髓細胞之阻抑。在一些實施例中，抑制、降低、阻斷、拮抗、阻抑及/或干擾ILT4活性會釋放ILT4誘導之活化信號阻抑。在一些實施例中，抗ILT4抗體或抗ILT2/ILT4抗體抑制ILT4信號傳導。在一些實施例中，抗ILT4抗體或抗ILT2/ILT4抗體抑制ILT4信號傳導，從而逆轉ILT4誘導之阻抑效應。在一些實施例中，抗ILT4抗體或抗ILT2/ILT4抗體抑制ILT4誘導之消光信號。在一些實施例中，抗ILT4抗體或抗ILT2/ILT4抗體增加骨髓細胞活性。在一些實施例中，抗ILT4抗體或抗ILT2/ILT4抗體增加巨噬細胞活性。在一些實施例中，抗ILT4抗體或抗ILT2/ILT4抗體減少MDSC。在一些實施例中，抗ILT4抗體或抗ILT2/ILT4抗體減少MDSC之阻抑。在一些實施例中，抗ILT4抗體或抗ILT2/ILT4抗體誘導MDSC轉換成活化的巨噬細胞。
在一些實施例中，抗ILT2抗體或抗ILT2/ILT4抗體破壞ILT2信號傳導路徑。在一些實施例中，抗ILT2抗體或抗ILT2/ILT4抗體破壞ILT2信號傳導路徑且活化骨髓細胞。在一些實施例中，抗ILT2抗體或抗ILT2/ILT4抗體破壞ILT2信號傳導路徑且活化APC。在一些實施例中，抗ILT2抗體或抗ILT2/ILT4抗體破壞ILT2信號傳導路徑且活化樹突細胞。在一些實施例中，抗ILT2抗體或抗ILT2/ILT4抗體破壞ILT2信號傳導路徑且活化原代樹突細胞。在一些實施例中，抗ILT2抗體或抗ILT2/ILT4抗體破壞ILT2信號傳導路徑且增加NK細胞活性。在一些實施例中，抗ILT2抗體或抗ILT2/ILT4抗體破壞ILT2信號傳導路徑且增加CTL活性。
在一些實施例中，抗ILT4抗體或抗ILT2/ILT4抗體破壞ILT4信號傳導路徑。在一些實施例中，抗ILT4抗體或抗ILT2/ILT4抗體破壞ILT4信號傳導路徑且活化骨髓細胞。在一些實施例中，抗ILT4抗體或抗ILT2/ILT4抗體破壞ILT4信號傳導路徑且活化APC。在一些實施例中，抗ILT4抗體或抗ILT2/ILT4抗體破壞ILT4信號傳導路徑且活化樹突細胞。在一些實施例中，抗ILT4抗體或抗ILT2/ILT4抗體破壞ILT4信號傳導路徑且活化原代樹突細胞。
在一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體破壞ILT2信號傳導路徑及ILT4信號傳導路徑。在一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體破壞ILT2信號傳導路徑及ILT4信號傳導路徑且活化骨髓細胞。在一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體破壞ILT2信號傳導路徑及ILT4信號傳導路徑且活化APC。在一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體破壞ILT2信號傳導路徑及ILT4信號傳導路徑且活化樹突細胞。在一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體破壞ILT2信號傳導路徑及ILT4信號傳導路徑且活化原代樹突細胞。在一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體破壞ILT2信號傳導路徑及ILT4信號傳導路徑且增加骨髓細胞活性。在一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體破壞ILT2信號傳導路徑及ILT4信號傳導路徑且增加NK細胞活性。在一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體破壞ILT2信號傳導路徑及ILT4信號傳導路徑且增加CTL活性。在一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體破壞ILT2信號傳導路徑及ILT4信號傳導路徑且降低MDSC活性。
在一些實施例中，術語「抑制」、「降低」、「阻斷」、「拮抗」、「阻抑」及「干擾」係相對於不用ILT結合劑治療時之水準及/或活性。在一些實施例中，術語「抑制」、「降低」、「阻斷」、「拮抗」、「阻抑」及「干擾」係相對於用ILT結合劑治療前之水準及/或活性。
在一些實施例中，術語「活化」、「促進」、「增加」及「增強」係相對於不用ILT結合劑治療時之水準及/或活性。在一些實施例中，術語「活化」、「促進」、「增加」及「增強」係相對於用ILT結合劑治療前之水準及/或活性。
在一些實施例中，抑制ILT2活性之抗ILT2抗體係抗體27F9。在一些實施例中，抑制ILT4活性之抗ILT4抗體係抗體47C8。在一些實施例中，抑制ILT4活性之抗ILT4抗體係抗體48A5。在一些實施例中，抑制ILT2及ILT4活性之抗ILT2/ILT4抗體係抗體47H6。在一些實施例中，抑制ILT2及ILT4活性之抗ILT2/ILT4抗體係抗體Hz47H6.v2。在一些實施例中，抑制ILT2及ILT4活性之抗ILT2/ILT4抗體係抗體51A1。在一些實施例中，抑制ILT2及ILT4活性之抗ILT2/ILT4抗體係抗體64A12。在一些實施例中，抑制ILT2及ILT4活性之抗ILT2/ILT4抗體係抗體Hz64A12。在一些實施例中，抑制ILT2及ILT4活性之抗ILT2/ILT4抗體係抗體73C4。在一些實施例中，抑制ILT2及ILT4活性之抗ILT2/ILT4抗體係抗體73D1。在一些實施例中，抑制ILT2及ILT4活性之抗ILT2/ILT4抗體係抗體Hz73D1.v1。
本揭示案亦提供包含本文所述之抗ILT2抗體、抗ILT4抗體或抗ILT2/ILT4抗體之結合物。在一些實施例中，抗體連接至第二分子。在一些實施例中，抗體結合至細胞毒性劑或部分。在一些實施例中，抗體結合至細胞毒性劑以形成ADC (抗體-藥物結合物)。在一些實施例中，細胞毒性劑係化學治療劑，包括(但不限於)胺甲喋呤(methotrexate)、阿霉素(adriamycin)/多柔比星(doxorubicin)、美法崙(melphalan)、絲裂黴素C (mitomycin C)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、多卡米星(duocarmycin)、柔紅黴素(daunorubicin)、吡咯并苯并二氮呯(PBD)或其他嵌入劑。在一些實施例中，細胞毒性劑係微管抑制劑，包括(但不限於)奧裡斯他汀(auristatin)、類美登素(maytansinoid，例如DM1及DM4)及微管溶素(tubulysin)。在一些實施例中，細胞毒性劑係細菌、真菌、植物或動物起源之酶活性毒素或其片段，包括(但不限於)白喉A鏈、白喉毒素之非結合活性片段、外毒素A鏈、蓖麻毒素(ricin) A鏈、相思子素(abrin) A鏈、莫迪素(modeccin) A鏈、α-八疊球菌、光桐油(Aleurites fordii
)蛋白、石竹素(dianthin)蛋白、美洲商陸(Phytolaca americana
)蛋白(PAPI、PAPII及PAP-S)、苦瓜(Momordica charantia
)抑制劑、瀉果素(curcin)、巴豆素(crotin)、肥皂草(Sapaonaria officinalis
)抑制劑、白樹毒蛋白(gelonin)、邁托毒素(mitogellin)、局限麯菌素(restrictocin)、酚黴素(phenomycin)、依諾黴素(enomycin)及單端孢霉烯族毒素(tricothecene)。在一些實施例中，抗體結合至一或多種小分子毒素，例如卡奇黴素(calicheamicin)、類美登素、新月毒素(trichothene)及CC1065。可使用該等毒素中任一者之衍生物，只要衍生物保留母體分子之細胞毒性活性即可。
本文所述包含抗ILT抗體(例如ILT2抗體、ILT4抗體或ILT2/ILT4抗體)之結合物可使用此項技術中已知之任一適宜方法製造。在一些實施例中，結合物係使用諸如以下之多種雙功能蛋白質偶合劑來製造：3-(2-吡啶基二硫醇)丙酸N-琥珀醯亞胺酯(SPDP)、亞胺基硫雜環戊烷(IT)、亞胺酸酯之雙功能衍生物(例如己二醯亞胺二甲酯HCl)、活性酯(例如辛二酸二琥珀醯亞胺酯)、醛(例如戊二醛)、雙疊氮基化合物(例如雙(對-疊氮基苯甲醯基)己二胺)、雙重氮衍生物(例如雙-(對-重氮苯甲醯基)-乙二胺)、二異氰酸酯(例如甲苯2,6-二異氰酸酯)及雙活性氟化合物(例如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)。
在一些實施例中，本文所述之抗ILT抗體(例如抗ILT2抗體、抗ILT4抗體或抗ILT2/ILT4抗體)結合至允許抗體用於診斷及/或偵測之可偵測物質或分子。在一些實施例中，使用經標記之抗ILT抗體來監測腫瘤或腫瘤微環境中之免疫細胞。在一些實施例中，使用經標記之抗ILT抗體來監測治療後腫瘤或腫瘤微環境中之免疫細胞。可偵測物質可包括(但不限於)酶，例如辣根過氧化物酶、鹼性磷酸酶、β-半乳糖苷酶及乙醯膽鹼酯酶；輔基，例如生物素及黃素；螢光材料，例如傘形酮、螢光素、螢光素異硫氰酸酯(FITC)、羅丹明(rhodamine)、四甲基羅丹明異硫氰酸酯(TRITC)、二氯三嗪基胺螢光素、丹磺醯氯、酞菁(Cy3)及藻紅素；生物發光材料，例如螢光素酶；放射活性材料，例如212
Bi、14
C、57
Co、51
Cr、67
Cu、18
F、68
Ga、67
Ga、153
Gd、159
Gd、68
Ge、3
H、166
Ho、131
I、125
I、123
I、121
I、115
In、113
In、112
In、111
In、140
La、177
Lu、54
Mn、99
Mo、32
P、103
Pd、149
Pm、142
Pr、186
Re、188
Re、105
Rh、97
Ru、35
S、47
Sc、75
Se、153
Sm、113
Sn、117
Sn、85
Sr、99m
Tc、201
Ti、133
Xe、90
Y、69
Yb、175
Yb、65
Zn；正電子發射金屬；及磁性金屬離子。
在一些實施例中，將本文所述之抗ILT抗體(例如抗ILT2抗體、抗ILT4抗體或抗ILT2/ILT4抗體)用於免疫分析中。免疫分析為熟習此項技術者已知且包括(但不限於) ELISA、SPR (例如Biacore)、FACS及免疫組織化學法(IHC)。在一些實施例中，本文所述之抗ILT抗體用於組織樣品或腫瘤樣品上。
本文所述之抗ILT抗體(例如抗ILT2抗體、抗ILT4抗體或抗ILT2/ILT4抗體)亦可結合至第二抗體以形成抗體異源結合物。
如本文所述之抗ILT抗體(例如抗ILT2抗體、抗ILT4抗體或抗ILT2/ILT4抗體)可連接至固體載體。此類固體載體包括(但不限於)玻璃、纖維素、聚丙烯醯胺、耐綸、聚苯乙烯、聚氯乙烯或聚丙烯。在一些實施例中，將固定之抗ILT抗體用於免疫分析中。在一些實施例中，將固定之抗ILT抗體用於純化靶抗原。
III. 多核苷酸
在一些實施例中，本揭示案涵蓋多核苷酸，其包含編碼本文所述之多肽(例如ILT結合劑)之多核苷酸。術語「編碼多肽之多核苷酸」涵蓋僅包括多肽之編碼序列之多核苷酸以及包括其他編碼及/或非編碼序列之多核苷酸。本揭示案之多核苷酸可呈RNA形式或呈DNA形式。DNA包括cDNA、基因體DNA及合成DNA；且可為雙股或單股，且若為單股則可為編碼股或非編碼(反義)股。
在一些實施例中，多核苷酸包含編碼本文所述ILT2結合劑之重鏈可變區及/或輕鏈可變區之多核苷酸。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼本文所述ILT2結合劑之重鏈可變區之多核苷酸。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼本文所述ILT2結合劑之輕鏈可變區之多核苷酸。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼本文所述ILT2結合劑之重鏈可變區之多核苷酸及編碼ILT2結合劑之輕鏈可變區之多核苷酸。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼本文所述ILT4結合劑之重鏈可變區及/或輕鏈可變區之多核苷酸。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼本文所述ILT4結合劑之輕鏈可變區之多核苷酸。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼本文所述ILT4結合劑之重鏈可變區之多核苷酸。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼本文所述ILT4結合劑之重鏈可變區之多核苷酸及編碼ILT4結合劑之輕鏈可變區之多核苷酸。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼本文所述ILT2/ILT4結合劑之重鏈可變區及/或輕鏈可變區之多核苷酸。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼本文所述ILT2/ILT4結合劑之重鏈可變區之多核苷酸。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼本文所述ILT2/ILT4結合劑之輕鏈可變區之多核苷酸。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼本文所述ILT2/ILT4結合劑之重鏈可變區之多核苷酸及編碼ILT2/ILT4結合劑之輕鏈可變區之多核苷酸。
在一些實施例中，多核苷酸包含編碼本文所述ILT2結合劑之重鏈及/或輕鏈之多核苷酸。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼本文所述ILT2結合劑之重鏈之多核苷酸。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼本文所述ILT2結合劑之輕鏈之多核苷酸。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼本文所述ILT2結合劑之重鏈之多核苷酸及編碼ILT2結合劑之輕鏈之多核苷酸。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼本文所述ILT4結合劑之重鏈及/或輕鏈之多核苷酸。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼本文所述ILT4結合劑之重鏈之多核苷酸。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼本文所述ILT4結合劑之輕鏈之多核苷酸。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼本文所述ILT4結合劑之重鏈之多核苷酸及編碼ILT4結合劑之輕鏈之多核苷酸。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼本文所述ILT2/ILT4結合劑之重鏈及/或輕鏈之多核苷酸。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼本文所述ILT2/ILT4結合劑之重鏈之多核苷酸。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼本文所述ILT2/ILT4結合劑之輕鏈之多核苷酸。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼本文所述ILT2/ILT4結合劑之重鏈之多核苷酸及編碼ILT2/ILT4結合劑之輕鏈之多核苷酸。
在一些實施例中，多核苷酸包含編碼多肽之多核苷酸，該多肽包含選自由以下組成之群之胺基酸序列：SEQ ID NO:125-145。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼多肽之多核苷酸，該多肽包含SEQ ID NO:125之胺基酸序列。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼多肽之多核苷酸，該多肽包含SEQ ID NO:126之胺基酸序列。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼多肽之多核苷酸，該多肽包含SEQ ID NO:127之胺基酸序列。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼多肽之多核苷酸，該多肽包含SEQ ID NO:128之胺基酸序列。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼多肽之多核苷酸，該多肽包含SEQ ID NO:129之胺基酸序列。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼多肽之多核苷酸，該多肽包含SEQ ID NO:130之胺基酸序列。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼多肽之多核苷酸，該多肽包含SEQ ID NO:131之胺基酸序列。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼多肽之多核苷酸，該多肽包含SEQ ID NO:132之胺基酸序列。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼多肽之多核苷酸，該多肽包含SEQ ID NO:133之胺基酸序列。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼多肽之多核苷酸，該多肽包含SEQ ID NO:134之胺基酸序列。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼多肽之多核苷酸，該多肽包含SEQ ID NO:135之胺基酸序列。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼多肽之多核苷酸，該多肽包含SEQ ID NO:136之胺基酸序列。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼多肽之多核苷酸，該多肽包含SEQ ID NO:137之胺基酸序列。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼多肽之多核苷酸，該多肽包含SEQ ID NO:138之胺基酸序列。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼多肽之多核苷酸，該多肽包含SEQ ID NO:139之胺基酸序列。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼多肽之多核苷酸，該多肽包含SEQ ID NO:140之胺基酸序列。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼多肽之多核苷酸，該多肽包含SEQ ID NO:141之胺基酸序列。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼多肽之多核苷酸，該多肽包含SEQ ID NO:142之胺基酸序列。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼多肽之多核苷酸，該多肽包含SEQ ID NO:143之胺基酸序列。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼多肽之多核苷酸，該多肽包含SEQ ID NO:144之胺基酸序列。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼多肽之多核苷酸，該多肽包含SEQ ID NO:145之胺基酸序列。
在一些實施例中，多核苷酸包含編碼多肽之多核苷酸，該多肽包含選自由以下組成之群之胺基酸序列：SEQ ID NO:146-157。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼多肽之多核苷酸，該多肽包含SEQ ID NO:146之胺基酸序列。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼多肽之多核苷酸，該多肽包含SEQ ID NO:147之胺基酸序列。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼多肽之多核苷酸，該多肽包含SEQ ID NO:148之胺基酸序列。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼多肽之多核苷酸，該多肽包含SEQ ID NO:149之胺基酸序列。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼多肽之多核苷酸，該多肽包含SEQ ID NO:150之胺基酸序列。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼多肽之多核苷酸，該多肽包含SEQ ID NO:151之胺基酸序列。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼多肽之多核苷酸，該多肽包含SEQ ID NO:152之胺基酸序列。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼多肽之多核苷酸，該多肽包含SEQ ID NO:153之胺基酸序列。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼多肽之多核苷酸，該多肽包含SEQ ID NO:154之胺基酸序列。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼多肽之多核苷酸，該多肽包含SEQ ID NO:155之胺基酸序列。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼多肽之多核苷酸，該多肽包含SEQ ID NO:156之胺基酸序列。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼多肽之多核苷酸，該多肽包含SEQ ID NO:157之胺基酸序列。
在一些實施例中，多核苷酸包含編碼多肽之多核苷酸，該多肽包含一個以上之選自由以下組成之群之胺基酸序列：SEQ ID NO:125-145。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼以下多肽之多核苷酸：(i)包含SEQ ID NO:125之胺基酸序列之多肽及(ii)包含SEQ ID NO:126之胺基酸序列之多肽。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼以下多肽之多核苷酸：(i)包含SEQ ID NO:127之胺基酸序列之多肽及(ii)包含SEQ ID NO:128之胺基酸序列之多肽。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼以下多肽之多核苷酸：(i)包含SEQ ID NO:129之胺基酸序列之多肽及(ii)包含SEQ ID NO:130之胺基酸序列之多肽。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼以下多肽之多核苷酸：(i)包含SEQ ID NO:131之胺基酸序列之多肽及(ii)包含SEQ ID NO:132之胺基酸序列之多肽。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼以下多肽之多核苷酸：(i)包含SEQ ID NO:133之胺基酸序列之多肽及(ii)包含SEQ ID NO:134之胺基酸序列之多肽。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼以下多肽之多核苷酸：(i)包含SEQ ID NO:135之胺基酸序列之多肽及(ii)包含SEQ ID NO:136之胺基酸序列之多肽。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼以下多肽之多核苷酸：(i)包含SEQ ID NO:137之胺基酸序列之多肽及(ii)包含SEQ ID NO:138之胺基酸序列之多肽。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼以下多肽之多核苷酸：(i)包含SEQ ID NO:139之胺基酸序列之多肽及(ii)包含SEQ ID NO:140之胺基酸序列之多肽。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼以下多肽之多核苷酸：(i)包含SEQ ID NO:141之胺基酸序列之多肽及(ii)包含SEQ ID NO:142之胺基酸序列之多肽。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼以下多肽之多核苷酸：(i)包含SEQ ID NO:143之胺基酸序列之多肽及(ii)包含SEQ ID NO:142之胺基酸序列之多肽。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼以下多肽之多核苷酸：(i)包含SEQ ID NO:144之胺基酸序列之多肽及(ii)包含SEQ ID NO:145之胺基酸序列之多肽。
在一些實施例中，多核苷酸包含編碼多肽之多核苷酸，該多肽包含一個以上之選自由以下組成之群之胺基酸序列：SEQ ID NO:146-157。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼以下多肽之多核苷酸：(i)包含SEQ ID NO:146之胺基酸序列之多肽及(ii)包含SEQ ID NO:147之胺基酸序列之多肽。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼以下多肽之多核苷酸：(i)包含SEQ ID NO:148之胺基酸序列之多肽及(ii)包含SEQ ID NO:149之胺基酸序列之多肽。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼以下多肽之多核苷酸：(i)包含SEQ ID NO:150之胺基酸序列之多肽及(ii)包含SEQ ID NO:151之胺基酸序列之多肽。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼以下多肽之多核苷酸：(i)包含SEQ ID NO:152之胺基酸序列之多肽及(ii)包含SEQ ID NO:153之胺基酸序列之多肽。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼以下多肽之多核苷酸：(i)包含SEQ ID NO:154之胺基酸序列之多肽及(ii)包含SEQ ID NO:155之胺基酸序列之多肽。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼以下多肽之多核苷酸：(i)包含SEQ ID NO:156之胺基酸序列之多肽及(ii)包含SEQ ID NO:157之胺基酸序列之多肽。
本揭示案亦提供本文所述多核苷酸之變異體，其中變異體編碼例如多肽之片段、類似物及/或衍生物。在一些實施例中，本揭示案提供多核苷酸，其包含具有與編碼本文所述多肽之多核苷酸至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致及在一些實施例中至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核苷酸序列之多核苷酸。
在一些實施例中，多核苷酸包含具有與編碼選自由以下組成之群之胺基酸序列之多核苷酸至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致及在一些實施例中至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核苷酸序列之多核苷酸：SEQ ID NO:125-157。亦提供多核苷酸，其包含與編碼選自由以下組成之群之胺基酸序列之多核苷酸雜交之多核苷酸：SEQ ID NO:125-157。在一些實施例中，雜交係在如熟習此項技術者已知之高嚴格度條件下進行。
如本文所用之片語「具有與多核苷酸序列至少95%一致之核苷酸序列之多核苷酸」欲指多核苷酸之核苷酸序列與參考序列一致，只是多核苷酸序列可包括參考核苷酸序列之每100個核苷酸至多5個點突變。換言之，為獲得具有與參考核苷酸序列至少95%一致之核苷酸序列之多核苷酸，參考序列中至多5%之核苷酸可缺失或用另一核苷酸取代，或可將參考序列中至多5%之總核苷酸之數量的核苷酸插入參考序列中。熟習此項技術者應理解，將對其他「一致%」陳述(例如90%一致或85%一致)進行適宜計算。參考序列之突變可發生在參考核苷酸序列之5′或3′末端位置或彼等末端位置之間之任一處，個別地散佈於參考序列中之核苷酸之間或參考序列內之一或多個相鄰組中。
多核苷酸變異體可含有編碼區、非編碼區或二者之變化。在一些實施例中，多核苷酸變異體含有產生沈默取代、添加或缺失但不改變經編碼多肽之性質或活性之變化。在一些實施例中，多核苷酸變異體包含不引起多肽胺基酸序列變化之沈默取代(由於遺傳密碼之簡併性)。在一些實施例中，多核苷酸變異體包含一或多個突變的密碼子，該一或多個突變的密碼子包含一或多個(例如1個、2個或3個)密碼子取代，該等取代改變由該密碼子編碼之胺基酸。將一或多個取代引入密碼子之方法為此項技術中已知，包括(但不限於) PCR誘變及定點誘變。可出於多種原因產生多核苷酸變異體，例如為最佳化特定宿主之密碼子表現(例如使人類mRNA之密碼子變成細菌宿主(例如大腸桿菌)所偏好之彼等密碼子)。在一些實施例中，多核苷酸變異體包含序列之非編碼區或編碼區中之至少一個沈默突變。
在一些實施例中，產生多核苷酸變異體以調節或改變經編碼多肽之表現(或表現水準)。在一些實施例中，產生多核苷酸變異體以增加經編碼多肽之表現。在一些實施例中，產生多核苷酸變異體以減少經編碼多肽之表現。在一些實施例中，與親代多核苷酸序列相比，多核苷酸變異體具有增加的經編碼多肽之表現。在一些實施例中，與親代多核苷酸序列相比，多核苷酸變異體具有減少的經編碼多肽之表現。
在一些實施例中，多核苷酸包含在同一閱讀框中融合至多核苷酸之多肽的編碼序列，該多核苷酸幫助自宿主細胞表現及分泌多肽。在一些實施例中，幫助表現及分泌之多核苷酸係用作控制多肽轉運之分泌序列之前導序列。在一些實施例中，多肽具有由宿主細胞裂解以形成多肽之「成熟」形式之前導序列。
在一些實施例中，多核苷酸包含在同一閱讀框中融合至標記物或標籤序列之多肽之編碼序列。舉例而言，在一些實施例中，標記物序列係允許有效地純化融合至標記物之多肽之六組胺酸標籤(HIS標籤；SEQ ID NO:173)。在一些實施例中，在使用哺乳動物宿主時，標記物序列係衍生自流行性感冒血球凝集素蛋白之血球凝集素(HA)標籤。在一些實施例中，標記物序列係FLAG™標籤。在一些實施例中，標記物可與其他標記物或標籤結合使用。
在一些實施例中，多核苷酸係經分離的。在一些實施例中，多核苷酸係實質上純的。
亦提供包含本文所述多核苷酸中之每一者及每一種之載體及細胞。在一些實施例中，載體包含編碼本文所述之ILT結合劑(例如ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑)之多核苷酸分子。在一些實施例中，載體包含編碼為本文所述ILT結合劑之一部分之多肽之多核苷酸分子。在一些實施例中，細胞包含含有編碼本文所述ILT結合劑之多核苷酸分子之載體。在一些實施例中，細胞包含含有編碼為本文所述ILT結合劑之一部分之多肽之多核苷酸分子之載體。在一些實施例中，細胞包含編碼本文所述ILT結合劑之多核苷酸分子。在一些實施例中，細胞包含一或多種編碼本文所述ILT結合劑之多核苷酸。在一些實施例中，細胞包含編碼本文所述ILT結合劑之單一多核苷酸。在一些實施例中，細胞包含編碼本文所述ILT結合劑之重鏈可變區之第一多核苷酸及編碼本文所述ILT結合劑之輕鏈可變區之第二多核苷酸。在一些實施例中，細胞包含編碼本文所述ILT結合劑之重鏈可變區及輕鏈可變區之多核苷酸。在一些實施例中，細胞包含編碼本文所述ILT結合劑之重鏈之第一多核苷酸及編碼本文所述ILT結合劑之輕鏈之第二多核苷酸。在一些實施例中，細胞包含編碼本文所述ILT結合劑之重鏈及輕鏈之多核苷酸。在一些實施例中，細胞包含一或多種編碼本文所述ILT結合劑之載體。在一些實施例中，細胞包含編碼本文所述ILT結合劑之載體。在一些實施例中，細胞包含編碼本文所述ILT結合劑之重鏈可變區之第一載體及編碼本文所述ILT結合劑之輕鏈可變區之第二載體。在一些實施例中，細胞包含編碼本文所述ILT結合劑之重鏈可變區及輕鏈可變區之單一載體。在一些實施例中，細胞包含編碼本文所述ILT結合劑之重鏈之第一載體及編碼本文所述ILT結合劑之輕鏈之第二載體。在一些實施例中，細胞包含編碼本文所述ILT結合劑之重鏈及輕鏈之單一載體。
IV. 製造結合劑之方法
本揭示案提供製造本文所述之ILT結合劑(例如ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑)之方法。在一些實施例中，該方法包括提供包含一或多種編碼本文所述ILT結合劑之重鏈及/或輕鏈之多核苷酸之細胞，在允許結合劑表現之條件下培養細胞，及分離結合劑。在一些實施例中，該方法進一步包括純化結合劑。在一些實施例中，該方法進一步包括將結合劑調配為醫藥組合物。
在一些實施例中，細胞包含一或多種編碼本文所述ILT結合劑之重鏈及輕鏈之多核苷酸。在一些實施例中，細胞包含編碼ILT結合劑之重鏈之第一多核苷酸及編碼ILT結合劑之輕鏈之第二多核苷酸。在其他實施例中，細胞包含編碼本文所述ILT結合劑之重鏈及輕鏈之多核苷酸。在一些實施例中，將編碼本文所述ILT結合劑之多核苷酸瞬時轉染至細胞中。在一些實施例中，將編碼本文所述ILT結合劑之多核苷酸穩定轉染至細胞中。
在一些實施例中，細胞包含一或多種編碼本文所述ILT結合劑之重鏈可變區及輕鏈可變區之載體。在一些實施例中，細胞包含編碼ILT結合劑之重鏈可變區之第一載體及編碼ILT結合劑之輕鏈可變區之第二載體。在其他實施例中，細胞包含編碼ILT結合劑之重鏈可變區及輕鏈可變區之載體。在一些實施例中，細胞包含一或多種編碼本文所述ILT結合劑之重鏈及輕鏈之載體。在一些實施例中，細胞包含編碼ILT結合劑之重鏈之第一載體及編碼ILT結合劑之輕鏈之第二載體。在其他實施例中，細胞包含編碼本文所述ILT結合劑之重鏈及輕鏈之載體。
在一些實施例中，ILT結合劑(例如ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑)係包含至少一個抗原結合位點之抗體片段，且該方法涉及提供包含編碼抗ILT抗體片段之多核苷酸之細胞，在允許抗體片段表現之條件下培育細胞，及分離抗體片段。在一些實施例中，細胞包含編碼本文所述抗體片段之多核苷酸。在一些實施例中，細胞包含編碼本文所述抗體片段之載體。在一些實施例中，該方法包括純化抗體片段。在一些實施例中，抗體片段係Fab、Fab′、F(ab′)2
、Fv、scFv、(scFv)2
、單鏈抗體、雙可變區抗體、雙體抗體或奈米抗體。
在一些實施例中，ILT結合劑係scFv且該方法涉及提供包含scFv之細胞，在允許scFv表現之條件下培育細胞，及分離scFv。在一些實施例中，細胞包含編碼scFv之本文所述載體。在一些實施例中，細胞包含編碼scFv之本文所述多核苷酸。在一些實施例中，該方法包括純化scFv。
在一些實施例中，用於製造ILT結合劑之細胞係細菌細胞。在一些實施例中，用於製造ILT結合劑之細胞係酵母菌細胞。在一些實施例中，用於製造ILT結合劑之細胞係哺乳動物細胞。在一些實施例中，用於製造ILT結合劑之細胞係CHO細胞。在其他實施例中，用於製造ILT結合劑之細胞係HEK-293細胞。
V. 使用方法及醫藥組合物
本揭示案之ILT結合劑(例如ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑)可用於多種應用中，包括(但不限於)治療性治療方法，例如治療癌症。在一些實施例中，治療性治療方法包括癌症免疫療法。在一些實施例中，本文所述之ILT結合劑可用於活化、促進、增加及/或增強對癌症或癌細胞之免疫反應。在一些實施例中，本文所述之ILT結合劑可用於活化、促進、增加及/或增強對腫瘤或腫瘤細胞之免疫反應。使用方法可為活體外、離體或活體內方法。
本揭示案提供破壞、抑制或阻斷ILT2與一或多個MHC I分子之結合之方法。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷ILT2與一或多個MHC I分子之結合之方法包括使細胞與本文所述之ILT2結合劑接觸。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷ILT2與一或多個MHC I分子之結合之方法包括使細胞與本文所述之ILT2結合劑接觸，其中該方法會破壞、抑制或阻斷MHC I誘導之ILT2活性。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷ILT2與一或多個MHC I分子之結合之方法包括使細胞與本文所述之ILT2結合劑接觸，其中該方法會破壞、抑制或阻斷ILT2誘導之骨髓細胞阻抑。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷ILT2與一或多個MHC I分子之結合之方法包括使細胞與本文所述之ILT2結合劑接觸，其中該方法會破壞、抑制或阻斷ILT2誘導之骨髓細胞活性阻抑。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷ILT2與一或多個MHC I分子之結合之方法恢復骨髓細胞中之FcR信號傳導活性。在一些實施例中，骨髓細胞係單核球。在一些實施例中，骨髓細胞係巨噬細胞。在一些實施例中，骨髓細胞係樹突細胞。在一些實施例中，骨髓細胞係APC。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷ILT2與一或多個MHC I分子之結合之方法包括使細胞與本文所述之ILT2結合劑接觸，其中該方法增加NK細胞活性。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷ILT2與一或多個MHC I分子之結合之方法包括使細胞與本文所述之ILT2結合劑接觸，其中該方法增加CTL活性。在本文所述方法之一些實施例中，MHC I分子係經典MHC I分子。在本文所述方法之一些實施例中，MHC I分子係非經典MHC I分子。在本文所述方法之一些實施例中，MHC I分子係HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-E及/或HLA-G。
本揭示案提供破壞、抑制或阻斷ILT4與一或多個MHC I分子之結合之方法。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷ILT4與一或多個MHC I分子之結合之方法包括使細胞與本文所述之ILT4結合劑接觸。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷ILT4與一或多個MHC I分子之結合之方法包括使細胞與本文所述之ILT4結合劑接觸，其中該方法會破壞、抑制或阻斷MHC I誘導之ILT4活性。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷ILT4與一或多個MHC I分子之結合之方法包括使細胞與本文所述之ILT4結合劑接觸，其中該方法會破壞、抑制或阻斷ILT4誘導之骨髓細胞阻抑。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷ILT2與一或多個MHC I分子之結合之方法包括使細胞與本文所述之ILT4結合劑接觸，其中該方法會破壞、抑制或阻斷ILT4誘導之骨髓細胞活性阻抑。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷ILT4與一或多個MHC I分子之結合之方法恢復骨髓細胞中之FcR信號傳導活性。在一些實施例中，骨髓細胞係單核球。在一些實施例中，骨髓細胞係巨噬細胞。在一些實施例中，骨髓細胞係樹突細胞。在一些實施例中，骨髓細胞係APC。在本文所述方法之一些實施例中，MHC I分子係經典MHC I分子。在本文所述方法之一些實施例中，MHC I分子係非經典MHC I分子。在本文所述方法之一些實施例中，MHC I分子係HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-E及/或HLA-G。
本揭示案提供破壞、抑制或阻斷ILT2及ILT4與一或多個MHC I分子之結合之方法。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷ILT2及ILT4與一或多個MHC I分子之結合之方法包括使細胞與本文所述之ILT2/ILT4結合劑接觸。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷ILT2及ILT4與一或多個MHC I分子之結合之方法包括使細胞與本文所述之ILT2/ILT4結合劑接觸，其中該方法會破壞、抑制或阻斷MHC I誘導之ILT2及/或ILT4活性。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷ILT2及ILT4與一或多個MHC I分子之結合之方法包括使細胞與本文所述之ILT2/ILT4結合劑接觸，其中該方法會破壞、抑制或阻斷ILT2誘導及/或ILT4誘導之骨髓細胞阻抑。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷ILT2及ILT4與一或多個MHC I分子之結合之方法包括使細胞與本文所述之ILT2/ILT4結合劑接觸，其中該方法會破壞、抑制或阻斷ILT2誘導及/或ILT4誘導之骨髓細胞活性阻抑。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷ILT2及ILT4與一或多個MHC I分子之結合之方法恢復骨髓細胞中之FcR信號傳導活性。在一些實施例中，骨髓細胞係單核球。在一些實施例中，骨髓細胞係巨噬細胞。在一些實施例中，骨髓細胞係樹突細胞。在一些實施例中，骨髓細胞係APC。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷ILT2及ILT4與一或多個MHC I分子之結合之方法包括使細胞與本文所述之ILT2/ILT4結合劑接觸，其中該方法增加NK細胞活性。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷ILT2及ILT4與一或多個MHC I分子之結合之方法包括使細胞與本文所述之ILT2/ILT4結合劑接觸，其中該方法增加CTL活性。
本揭示案提供破壞、抑制或阻斷個體中ILT2及/或ILT4與MHC I分子之結合之方法。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷個體中ILT2及/或ILT4與MHC I分子之結合之方法包括向個體投與有效量之本文所述之ILT2/ILT4結合劑。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷個體中MHC I誘導之ILT2及/或ILT4活性之方法包括向個體投與有效量之本文所述之ILT2/ILT4結合劑。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷個體中ILT2誘導及/或ILT4誘導之骨髓細胞阻抑之方法包括向個體投與有效量之本文所述之ILT2/ILT4結合劑。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷個體中ILT2誘導及/或ILT4誘導之骨髓細胞活性阻抑之方法包括向個體投與有效量之本文所述之ILT2/ILT4結合劑。在一些實施例中，破壞、抑制或阻斷個體中ILT2誘導及/或ILT4誘導之抗原呈遞細胞活性阻抑之方法恢復骨髓細胞中之FcR活性。在一些實施例中，骨髓細胞係單核球。在一些實施例中，骨髓細胞係巨噬細胞。在一些實施例中，骨髓細胞係樹突細胞。在一些實施例中，骨髓細胞係APC。
本揭示案提供使用本文所述之ILT2/ILT4結合劑來活化個體之免疫反應之方法。在一些實施例中，本揭示案提供使用本文所述之ILT2/ILT4結合劑來促進個體之免疫反應之方法。在一些實施例中，本揭示案提供使用本文所述之ILT2/ILT4結合劑來增加個體之免疫反應之方法。在一些實施例中，本揭示案提供使用本文所述之ILT2/ILT4結合劑來增強個體之免疫反應之方法。在一些實施例中，活化、促進、增加及/或增強免疫反應包括刺激骨髓細胞。在一些實施例中，活化、促進、增加及/或增強免疫反應包括刺激單核球。在一些實施例中，活化、促進、增加及/或增強免疫反應包括刺激巨噬細胞。在一些實施例中，活化、促進、增加及/或增強免疫反應包括刺激樹突細胞。在一些實施例中，活化、促進、增加及/或增強免疫反應包括刺激APC。在一些實施例中，活化、促進、增加及/或增強免疫反應包括增加細胞介導之免疫性。在一些實施例中，活化、促進、增加及/或增強免疫反應包括增加效應T細胞活性。在一些實施例中，活化、促進、增加及/或增強免疫反應包括增加CTL活性。在一些實施例中，活化、促進、增加及/或增強免疫反應包括增加NK細胞活性。在一些實施例中，活化、促進、增加及/或增強免疫反應包括增強NK細胞活性。在一些實施例中，活化、促進、增加及/或增強免疫反應包括抑制或降低Treg之阻抑活性。在一些實施例中，活化、促進、增加及/或增強免疫反應包括抑制或降低MDSC之阻抑活性。在一些實施例中，免疫反應係抗原刺激之結果。在一些實施例中，抗原刺激係腫瘤細胞。在一些實施例中，抗原刺激係癌症。
本揭示案亦提供破壞及/或抑制細胞中之ILT2及/或ILT4信號傳導之方法，其包括使細胞與有效量之本文所述之ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑接觸。在一些實施例中，破壞及/或抑制細胞中之ILT2信號傳導之方法包括使細胞與有效量之抗體27F9、抗體47H6、抗體51A1、抗體64A12、抗體73C4或抗體73D1或其人類化形式接觸。在一些實施例中，破壞及/或抑制細胞中之ILT4信號傳導之方法包括使細胞與有效量之抗體47C8、抗體48A5、抗體47H6、抗體51A1、抗體64A12、抗體73C4或抗體73D1或其人類化形式接觸。在一些實施例中，破壞及/或抑制細胞中之ILT2信號傳導及ILT4信號傳導之方法包括使細胞與有效量之抗體47H6、抗體51A1、抗體64A12、抗體73C4或抗體73D1或其人類化形式接觸。在一些實施例中，破壞及/或抑制細胞中之ILT2信號傳導及ILT4之方法包括使細胞與有效量之抗體Hz47H6.v2接觸。在一些實施例中，破壞及/或抑制細胞中之ILT2信號傳導及ILT4之方法包括使細胞與有效量之抗體Hz64A12接觸。在一些實施例中，破壞及/或抑制細胞中之ILT2信號傳導及ILT4之方法包括使細胞與有效量之抗體Hz73D1.v1接觸。在一些實施例中，本揭示案提供本文所述ILT2結合劑之用途，其用於製造或製備用來破壞及/或抑制細胞中之ILT2信號傳導之藥物。在一些實施例中，本揭示案提供本文所述ILT4結合劑之用途，其用於製造或製備用來破壞及/或抑制細胞中之ILT4信號傳導之藥物。在一些實施例中，本揭示案提供本文所述ILT2/ILT4結合劑之用途，其用於製造或製備用來破壞及/或抑制細胞中之ILT2信號傳導及ILT4信號傳導之藥物。在一些實施例中，細胞係骨髓細胞。在一些實施例中，細胞係單核球。在一些實施例中，細胞係巨噬細胞。在一些實施例中，細胞係樹突細胞。在一些實施例中，細胞係抗原呈遞細胞。在一些實施例中，細胞係NK細胞。在一些實施例中，細胞係CTL。在一些實施例中，該方法係活體內方法，其中使細胞與劑接觸之步驟包括向個體投與治療有效量之ILT結合劑。在一些實施例中，該方法係活體外或離體方法。
本揭示案亦提供使用本文所述之ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑抑制腫瘤生長之方法。在一些實施例中，抑制腫瘤生長之方法包括使用本文所述之ILT2結合劑。在一些實施例中，抑制腫瘤生長之方法包括使用抗體27F9或其人類化形式。在一些實施例中，抑制腫瘤生長之方法包括使用本文所述之ILT4結合劑。在一些實施例中，抑制腫瘤生長之方法包括使用抗體47C8或抗體48A5或其人類化形式。在一些實施例中，抑制腫瘤生長之方法包括使用本文所述之ILT2/ILT4結合劑。在一些實施例中，抑制腫瘤生長之方法包括使用抗體47H6、抗體51A1、抗體64A12、抗體73C4或抗體73D1或其人類化形式。在一些實施例中，抑制腫瘤生長之方法包括使用抗體Hz47H6.v2。在一些實施例中，抑制腫瘤生長之方法包括使用抗體Hz64A12。在一些實施例中，抑制腫瘤生長之方法包括使用抗體Hz73D1.v1。在一些實施例中，抑制腫瘤生長之方法包括使細胞混合物與活體外ILT結合劑接觸。舉例而言，在添加有結合ILT2及/或ILT4之測試劑之培養基中培養無限增殖之細胞株或癌細胞株與免疫細胞(例如骨髓細胞)之混合物。在一些實施例中，自患者樣品(例如組織生檢、胸膜滲出液或血液樣品)分離腫瘤細胞，與免疫細胞(例如骨髓細胞)混合，且在添加有結合ILT2及/或ILT4之測試劑之培養基中培養。在一些實施例中，本揭示案提供本文所述ILT2結合劑之用途，其用於製造或製備用來抑制腫瘤或腫瘤細胞生長之藥物。在一些實施例中，本揭示案提供本文所述ILT4結合劑之用途，其用於製造或製備用來抑制腫瘤或腫瘤細胞生長之藥物。在一些實施例中，本揭示案提供本文所述ILT2/ILT4結合劑之用途，其用於製造或製備用來抑制腫瘤或腫瘤細胞生長之藥物。在一些實施例中，ILT2結合劑增加、促進及/或增強效應免疫細胞之活性。在一些實施例中，ILT2結合劑藉由增加、促進及/或增強效應免疫細胞之活性來抑制腫瘤細胞生長。在一些實施例中，ILT4結合劑增加、促進及/或增強效應免疫細胞之活性。在一些實施例中，ILT4結合劑藉由增加、促進及/或增強效應免疫細胞之活性來抑制腫瘤細胞生長。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑增加、促進及/或增強效應免疫細胞之活性。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑藉由增加、促進及/或增強效應免疫細胞之活性來抑制腫瘤細胞生長。
在一些實施例中，抑制腫瘤生長之方法包括使腫瘤及/或腫瘤微環境與本文所述之ILT結合劑(例如ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑)在活體內接觸。在一些實施例中，使腫瘤及/或腫瘤微環境與本文所述之ILT結合劑接觸係在動物模型中進行。舉例而言，可將測試劑(例如ILT2/ILT4結合劑)投與患有腫瘤之小鼠。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑增加、促進及/或增強小鼠中免疫細胞之活性。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑抑制腫瘤生長。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑使腫瘤消退。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑係與將腫瘤細胞引入動物中同時或在其之後不久投與以預防腫瘤生長(「預防模型」)。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑係在腫瘤已生長至指定大小或已變得「建立」之後投與用於治療(「治療模型」)。在一些實施例中，將ILT2/ILT4結合劑投與表現人類ILT2及/或ILT4之基因轉殖動物(例如基因轉殖小鼠)，其中基因轉殖動物患有衍生自人類細胞之腫瘤。
在一些實施例中，抑制腫瘤生長之方法包括向個體投與治療有效量之本文所述之ILT結合劑(例如ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑)。在一些實施例中，抑制腫瘤生長之方法包括向個體投與治療有效量之本文所述之ILT2/ILT4結合劑。在一些實施例中，增加或增強個體對腫瘤或腫瘤細胞之免疫反應之方法包括向個體投與治療有效量之本文所述之ILT2/ILT4結合劑。在一些實施例中，活化或增強個體對腫瘤或腫瘤細胞之持久或長期免疫反應之方法包括向個體投與治療有效量之本文所述之ILT2/ILT4結合劑。在一些實施例中，抑制個體中之腫瘤復發或腫瘤再生長之方法包括向個體投與治療有效量之本文所述之ILT2/ILT4結合劑。在一些實施例中，誘導個體中之抑制腫瘤復發或腫瘤再生長之持久或長期免疫性之方法包括向個體投與治療有效量之本文所述之ILT2/ILT4結合劑。在本文所述方法之一些實施例中，腫瘤係實體腫瘤。在一些實施例中，腫瘤係胰臟腫瘤、乳房腫瘤、肺腫瘤、非小細胞肺腫瘤、頭頸腫瘤、結腸直腸腫瘤、前列腺腫瘤、皮膚腫瘤、黑色素瘤、胃腫瘤(stomach tumor)、胃腫瘤(gastric tumor)、腸腫瘤、卵巢腫瘤、子宮頸腫瘤、子宮腫瘤、子宮內膜腫瘤、膀胱腫瘤、腦腫瘤、食管腫瘤、肝腫瘤、腎臟腫瘤、腎細胞癌或睪丸腫瘤。在一些實施例中，腫瘤係胰臟腫瘤。在一些實施例中，腫瘤係非小細胞肺腫瘤。在一些實施例中，腫瘤係腎細胞癌(RCC)。在一些實施例中，個體患有腫瘤或個體患有至少部分去除之腫瘤。在本文所述方法之一些實施例中，個體係人類。
在一些實施例中，本揭示案提供本文所述ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑之用途，其用於製造或製備用來抑制腫瘤或腫瘤細胞生長之藥物。在一些實施例中，抑制腫瘤生長之方法包括向個體投與治療有效量之抗體27F9、抗體47C8、抗體48A5、抗體47H6、抗體51A1、抗體64A12、抗體73C4或抗體73D1或其人類化形式。在一些實施例中，抑制腫瘤生長之方法包括向個體投與治療有效量之抗體Hz47H6.v2。在一些實施例中，抑制腫瘤生長之方法包括向個體投與治療有效量之抗體Hz64A12。在一些實施例中，抑制腫瘤生長之方法包括向個體投與治療有效量之抗體Hz73D1.v1。在本文所述方法之一些實施例中，個體係人類。
本揭示案提供治療癌症之方法。在一些實施例中，治療癌症之方法包括向個體投與治療有效量之本文所述之ILT2結合劑。在一些實施例中，治療癌症之方法包括向個體投與治療有效量之本文所述之ILT4結合劑。在一些實施例中，治療癌症之方法包括向個體投與治療有效量之本文所述之ILT2/ILT4結合劑。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑結合ILT2及/或ILT4且抑制或減少癌症之生長。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑結合人類ILT2表現細胞及/或ILT4表現細胞，增強對癌症之免疫反應，且抑制或減少癌症之生長。在一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑結合人類ILT2表現細胞及/或ILT4表現細胞，活化骨髓細胞，增強對癌症之免疫反應，且抑制或減少癌症之生長。在一些實施例中，個體係人類。在一些實施例中，個體患有癌性腫瘤。在一些實施例中，個體之癌症已至少部分地去除。
在一些實施例中，本揭示案提供本文所述ILT2結合劑之用途，其用於製造或製備用來治療癌症之藥物。在一些實施例中，本揭示案提供本文所述ILT4結合劑之用途，其用於製造或製備用來治療癌症之藥物。在一些實施例中，本揭示案提供本文所述ILT2/ILT4結合劑之用途，其用於製造或製備用來治療癌症之藥物。
在本文所述方法之一些實施例中，癌症係胰臟癌、乳癌、肺癌、非小細胞肺癌(NSCLC)、頭頸癌、結腸直腸癌、前列腺癌、皮膚癌、黑色素瘤、胃癌(stomach cancer)、胃癌(gastric cancer)、腸癌、卵巢癌、子宮頸癌、子宮癌、子宮內膜癌、膀胱癌、腦癌、食管癌、肝癌、腎癌、腎細胞癌(RCC)或睪丸癌。在一些實施例中，癌症係胰臟癌。在一些實施例中，癌症係乳癌。在一些實施例中，癌症係非小細胞肺癌。在一些實施例中，癌症係腎細胞癌。
在一些實施例中，治療個體癌症之方法包括向個體投與治療有效量之抗體27F9或其人類化形式。在一些實施例中，治療個體癌症之方法包括向個體投與治療有效量之抗體47C8或抗體48A5或其人類化形式。在一些實施例中，治療個體癌症之方法包括向個體投與治療有效量之抗體47H6、抗體51A1、抗體64A12、抗體73C4或抗體73D1或其人類化形式。在一些實施例中，治療個體癌症之方法包括向個體投與治療有效量之抗體Hz47H6.v2。在一些實施例中，治療個體癌症之方法包括向個體投與治療有效量之抗體Hz64A12。在一些實施例中，治療個體癌症之方法包括向個體投與治療有效量之抗體Hz73D1.v1。
在一些實施例中，本揭示案提供活化腫瘤微環境中之骨髓細胞之方法。在一些實施例中，活化患有腫瘤之個體之腫瘤微環境中之骨髓細胞的方法包括向個體投與治療有效量之本文所述之ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑。在一些實施例中，活化患有腫瘤之個體之腫瘤微環境中之骨髓細胞的方法包括向個體投與治療有效量之本文所述之ILT2/ILT4結合劑。在一些實施例中，骨髓細胞係原代樹突細胞。在一些實施例中，骨髓細胞係單核球。在一些實施例中，骨髓細胞係巨噬細胞。在一些實施例中，骨髓細胞係APC。
在一些實施例中，本揭示案提供活化腫瘤微環境中之NK細胞之方法。在一些實施例中，活化患有腫瘤之個體之腫瘤微環境中之NK細胞的方法包括向個體投與治療有效量之本文所述之ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑。在一些實施例中，活化患有腫瘤之個體之腫瘤微環境中之NK細胞的方法包括向個體投與治療有效量之本文所述之ILT2結合劑。在一些實施例中，活化患有腫瘤之個體之腫瘤微環境中之NK細胞的方法包括向個體投與治療有效量之本文所述之ILT2/ILT4結合劑。
在一些實施例中，本揭示案提供活化腫瘤微環境中之CTL之方法。在一些實施例中，活化患有腫瘤之個體之腫瘤微環境中之CTL的方法包括向個體投與治療有效量之本文所述之ILT2結合劑或ILT2/ILT4結合劑。在一些實施例中，活化患有腫瘤之個體之腫瘤微環境中之CTL的方法包括向個體投與治療有效量之本文所述之ILT2結合劑。在一些實施例中，活化患有腫瘤之個體之腫瘤微環境中之CTL的方法包括向個體投與治療有效量之本文所述之ILT2/ILT4結合劑。
在本文所述方法之一些實施例中，ILT2結合劑包含抗體27F9之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在本文所述方法之一些實施例中，ILT2結合劑係抗ILT2抗體。在本文所述方法之一些實施例中，抗ILT2抗體包含：(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GFSLTNYGVS (SEQ ID NO:22)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列IIWGDGSTNYHSALIS (SEQ ID NO:23)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列PNWDTYAMDF (SEQ ID NO:24)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASQDISNFLN (SEQ ID NO:25)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列CTSKLHS (SEQ ID NO:26)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQGNTLPPT (SEQ ID NO:27)之輕鏈可變區CDR3。在本文所述方法之一些實施例中，抗ILT2抗體包含：(a) SEQ ID NO:125之重鏈可變區及(b) SEQ ID NO:126之輕鏈可變區。在本文所述方法之一些實施例中，抗ILT2抗體係抗體27F9。在本文所述方法之一些實施例中，抗ILT2抗體係27F9之人類化形式。
在本文所述方法之一些實施例中，ILT4結合劑包含抗體47C8之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在本文所述方法之一些實施例中，ILT4結合劑係抗ILT4抗體。在本文所述方法之一些實施例中，抗ILT4抗體包含：(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYSFTGYYMH (SEQ ID NO:38)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列RVYPNNGDTSYNQKFKV (SEQ ID NO:39)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列GATVVESLFAY (SEQ ID NO:40)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDNYGNNFLH (SEQ ID NO:41)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列RTSNLES (SEQ ID NO:42)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQSNEDPYT (SEQ ID NO:43)之輕鏈可變區CDR3。在本文所述方法之一些實施例中，抗ILT4抗體包含：(a) SEQ ID NO:127之重鏈可變區及(b) SEQ ID NO:128之輕鏈可變區。在本文所述方法之一些實施例中，抗ILT4抗體係抗體47C8。在本文所述方法之一些實施例中，抗ILT4抗體係抗體47C8之人類化形式。
在本文所述方法之一些實施例中，ILT4結合劑包含抗體48A5之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在本文所述方法之一些實施例中，ILT4結合劑係抗ILT4抗體。在本文所述方法之一些實施例中，抗ILT4抗體包含：(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYTFTNYGMN (SEQ ID NO:54)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列WINTYIGEPIYADDFKG (SEQ ID NO:55)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列RSDYDGYAMDY (SEQ ID NO:56)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列KSSQSLLYSGNQKNYLA (SEQ ID NO:57)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列WASTRES (SEQ ID NO:58)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQHDSYPT (SEQ ID NO:59)之輕鏈可變區CDR3。在本文所述方法之一些實施例中，抗ILT4抗體包含：(a) SEQ ID NO:129之重鏈可變區及(b) SEQ ID NO:130之輕鏈可變區。在本文所述方法之一些實施例中，抗ILT4抗體係抗體48A5。在本文所述方法之一些實施例中，抗ILT4抗體係抗體48A5之人類化形式。
在本文所述方法之一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含抗體47H6或抗體Hz47H6.v2之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在本文所述方法之一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑係抗ILT2/ILT4抗體。在本文所述方法之一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體包含：(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYTFTDYYMN (SEQ ID NO:70)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列DFNPNNGGTTYNQKFEG (SEQ ID NO:71)或DFNPNNAGTTYNQKFEG (SEQ ID NO:118)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列GRFYYGSLYSFDY (SEQ ID NO:72)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASGNIHNYLA (SEQ ID NO:73)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NAKTLAD (SEQ ID NO:74)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QHFWTSIT (SEQ ID NO:75)之輕鏈可變區CDR3。在本文所述方法之一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體包含：(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYTFTDYYMN (SEQ ID NO:70)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列DFNPNNGGTTYNQKFEG (SEQ ID NO:71)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列GRFYYGSLYSFDY (SEQ ID NO:72)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASGNIHNYLA (SEQ ID NO:73)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NAKTLAD (SEQ ID NO:74)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QHFWTSIT (SEQ ID NO:75)之輕鏈可變區CDR3。在本文所述方法之一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體包含：(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYTFTDYYMN (SEQ ID NO:70)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列DFNPNNAGTTYNQKFEG (SEQ ID NO:118)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列GRFYYGSLYSFDY (SEQ ID NO:72)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASGNIHNYLA (SEQ ID NO:73)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NAKTLAD (SEQ ID NO:74)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QHFWTSIT (SEQ ID NO:75)之輕鏈可變區CDR3。在本文所述方法之一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體包含：(a) SEQ ID NO:131之重鏈可變區及(b) SEQ ID NO:132之輕鏈可變區。在本文所述方法之一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體包含：(a) SEQ ID NO:133之重鏈可變區及(b) SEQ ID NO:134之輕鏈可變區。在本文所述方法之一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體包含：(a) SEQ ID NO:148之重鏈及(b) SEQ ID NO:149之輕鏈。在本文所述方法之一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體係抗體47H6。在本文所述方法之一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體係抗體47H6之人類化形式。在本文所述方法之一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體係抗體Hz47H6.v2。
在本文所述方法之一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含抗體51A1或抗體51A1之人類化形式之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在本文所述方法之一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑係抗ILT2/ILT4抗體。在本文所述方法之一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體包含：(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GFTFNTYAMH (SEQ ID NO:86)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列RIRSKSSNYATYYADSVKD (SEQ ID NO:87)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列DGIYYYGTMYYYAMDY (SEQ ID NO:88)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3。在本文所述方法之一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體包含：(a) SEQ ID NO:135之重鏈可變區及(b) SEQ ID NO:136之輕鏈可變區。在本文所述方法之一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體係抗體51A1。在本文所述方法之一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體係抗體51A1之人類化形式。
在本文所述方法之一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含抗體64A12、抗體64A12之人類化形式或抗體Hz64A12之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在本文所述方法之一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑係抗ILT2/ILT4抗體。在本文所述方法之一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體包含：(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GFTFNTYAMH (SEQ ID NO:86)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列RIRSKSSNYATYYADSVKD (SEQ ID NO:87)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列DGIYYYDTMYYYAMDY (SEQ ID NO:102)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFIY (SEQ ID NO:103)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3。在本文所述方法之一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體包含：(a) SEQ ID NO:137之重鏈可變區及(b) SEQ ID NO:138之輕鏈可變區。在本文所述方法之一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體包含：(a) SEQ ID NO:139之重鏈可變區及(b) SEQ ID NO:140之輕鏈可變區。在本文所述方法之一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體包含：(a) SEQ ID NO:152之重鏈及(b) SEQ ID NO:153之輕鏈。在本文所述方法之一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體係抗體64A12。在本文所述方法之一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體係抗體64A12之人類化形式。在本文所述方法之一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體係抗體Hz64A12。
在本文所述方法之一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含抗體73C4或抗體73C4之人類化形式之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在本文所述方法之一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑係抗ILT2/ILT4抗體。在本文所述方法之一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體包含：(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYTFTDYYMN (SEQ ID NO:70)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NVNPNNGGTSYNQKFKG (SEQ ID NO:106)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列REIYFYGTIYYYAMDY (SEQ ID NO:107)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3。在本文所述方法之一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體包含：(a) SEQ ID NO:141之重鏈可變區及(b) SEQ ID NO:142之輕鏈可變區。在本文所述方法之一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體係抗體73C4。在本文所述方法之一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體係抗體73C4之人類化形式。
在本文所述方法之一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑包含抗體73D1、抗體73D1之人類化形式或抗體Hz73D1.v1之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3。
在本文所述方法之一些實施例中，ILT2/ILT4結合劑係抗ILT2/ILT4抗體。在本文所述方法之一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體包含：(a)重鏈可變區，其包含含有胺基酸序列GYTFTDYYIN (SEQ ID NO:111)之重鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列NVNPNDGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO:112)之重鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列REIYFYGTIYYYAMDY (SEQ ID NO:107)之重鏈可變區CDR3，及(b)輕鏈可變區，其包含含有胺基酸序列RASESVDYYGNSFMY (SEQ ID NO:89)之輕鏈可變區CDR1、含有胺基酸序列FASNLES (SEQ ID NO:90)之輕鏈可變區CDR2及含有胺基酸序列QQNNEDPWT (SEQ ID NO:91)之輕鏈可變區CDR3。在本文所述方法之一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體包含：(a) SEQ ID NO:143之重鏈可變區及(b) SEQ ID NO:142之輕鏈可變區。在本文所述方法之一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體包含：(a) SEQ ID NO:144之重鏈可變區及(b) SEQ ID NO:145之輕鏈可變區。在本文所述方法之一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體包含：(a) SEQ ID NO:156之重鏈及(b) SEQ ID NO:157之輕鏈。在本文所述方法之一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體係抗體73D1。在本文所述方法之一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體係抗體73D1之人類化形式。在本文所述方法之一些實施例中，抗ILT2/ILT4抗體係抗體Hz73D1.v1。
在本文所述方法之一些實施例中，該方法包括投與本文所述之ILT結合劑(例如ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑)與至少一種其他治療劑或治療性療法之組合。在本文所述方法之一些實施例中，該方法包括投與本文所述之ILT2/ILT4結合劑與至少一種其他治療劑或治療性療法之組合。使用兩種或更多種治療劑之治療通常使用藉由不同作用機制起作用之劑，但此並非必需的。使用具有不同作用機制之劑之組合療法可產生加和或協同效應。組合療法可允許每一劑之劑量低於單一療法中所用之劑量，由此減少劑之毒性副作用及/或增加劑之治療指數。組合療法可降低對劑產生抗性之可能性。
在所述方法之一些實施例中，本文所述之ILT結合劑(例如ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑)及至少一種其他治療劑之組合產生加和或協同結果。在一些實施例中，組合療法可增加ILT結合劑之治療指數。在一些實施例中，組合療法可增加其他治療劑之治療指數。在一些實施例中，組合療法可減小ILT結合劑之毒性及/或副作用。在一些實施例中，組合療法可減小其他治療劑之毒性及/或副作用。在一些實施例中，組合療法包含影響免疫反應(例如增強或活化反應)之治療劑及影響(例如抑制或殺傷)腫瘤/癌細胞之治療劑。
在本文所述方法之一些實施例中，組合治療包含一種其他治療劑。在本文所述方法之一些實施例中，組合治療包含至少一種其他治療劑。在本文所述方法之一些實施例中，組合治療包含兩種或更多種其他治療劑。
有用的治療劑類別包括(但不限於)抗微管蛋白劑、奧裡斯他汀、DNA小溝結合劑、DNA複製抑制劑、烷化劑(例如鉑錯合物，例如順鉑、單(鉑)、雙(鉑)及三核鉑錯合物及卡鉑(carboplatin))、蒽環、抗生素、抗葉酸藥、抗代謝物、化學療法敏化劑、多卡米星(duocarmycin)、依托泊苷(etoposide)、氟化嘧啶、離子載體、萊希菌素(lexitropsin)、亞硝基脲、順氯胺鉑(platinol)、嘌呤抗代謝物、嘌呤黴素(puromycin)、輻射敏化劑、類固醇、紫杉烷(taxane)、拓撲異構酶抑制劑、長春花生物鹼(vinca alkaloid)或諸如此類。在一些實施例中，第二治療劑係烷化劑、抗代謝物、抗有絲分裂劑、拓撲異構酶抑制劑或血管生成抑制劑。
可與本文所述之ILT結合劑組合投與之治療劑包括化學治療劑。因此，在一些實施例中，方法或治療涉及投與本揭示案之ILT結合劑與化學治療劑之組合或與化學治療劑混合劑之組合。
可用於本揭示案中之化學治療劑包括(但不限於)烷化劑，例如塞替派(thiotepa)及環磷醯胺(CYTOXAN)；磺酸烷基酯，例如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)及哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶，例如苯佐替派(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、美妥替哌(meturedopa)及烏瑞替哌(uredopa)；乙烯亞胺及甲基蜜胺，包括六甲蜜胺(altretamine)、三伸乙基三聚氰胺、三伸乙基磷醯胺、三伸乙基硫代磷醯胺及三羥甲基蜜胺；氮芥，例如苯丁酸氮芥、萘氮芥(chlornaphazine)、氯磷醯胺、雌莫司汀(estramustine)、異環磷醯胺、二氯甲基二乙胺、二氯甲基二乙胺氧化物鹽酸鹽、美法崙、新恩比興(novembichin)、膽固醇苯乙酸氮芥、潑尼莫司汀(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥；亞硝基脲，例如卡莫司汀(carmustine)、氯脲黴素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)、雷莫司汀(ranimustine)；抗生素，例如阿克拉黴素(aclacinomysin)、放線菌素(actinomycin)、安曲黴素(authramycin)、偶氮絲胺酸、博來黴素(bleomycin)、放線菌素c、卡奇黴素、卡柔比星(carabicin)、洋紅黴素(caminomycin)、嗜癌黴素(carzinophilin)、色黴素(chromomycin)、放線菌素d、柔紅黴素、地托比星(detorubicin)、6-重氮-5-側氧基-L-正白胺酸、多柔比星、泛艾黴素(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊達比星(idarubicin)、麻西羅黴素(marcellomycin)、絲裂黴素、霉酚酸(mycophenolic acid)、諾拉黴素(nogalamycin)、橄欖黴素(olivomycin)、培洛黴素(peplomycin)、泊非黴素(potfiromycin)、嘌呤黴素、三鐵阿霉素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑菌素(streptonigrin)、鏈脲黴素(streptozocin)、殺結核菌素(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、淨司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代謝物，例如胺甲喋呤及5-氟尿嘧啶(5-FU)；葉酸類似物，例如二甲葉酸、胺甲喋呤、丁蝶翼素(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤類似物，例如氟達拉濱(fludarabine)、6-巰基嘌呤、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鳥嘌呤(thioguanine)；嘧啶類似物，例如安西他濱(ancitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、6-阿扎尿苷、卡莫氟(carmofur)、胞嘧啶阿拉伯糖苷、二去氧尿苷、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依諾他濱(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)、5-FU；雄激素，例如卡普睪酮(calusterone)、丙酸曲他雄酮(dromostanolone propionate)、環硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睪內酯(testolactone)；抗腎上腺素，例如胺魯米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；葉酸補充劑，例如亞葉酸；乙醯格雷酮(aceglatone)；醛磷醯胺糖苷；胺基乙醯丙酸；安吖啶(amsacrine)；阿莫斯汀(bestrabucil)；比生群(bisantrene)；依達曲沙(edatraxate)；地磷醯胺(defofamine)；秋水仙胺(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；依氟鳥苷酸(elformithine)；依利醋銨(elliptinium acetate)；依托格魯(etoglucid)；硝酸鎵；羥基脲；香菇多糖；氯尼達明(lonidamine)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌達醇(mopidamol)；硝胺吖啶(nitracrine)；噴司他丁(pentostatin)；蛋胺氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；鬼臼酸(podophyllinic acid)；2-乙基醯肼；丙卡巴肼(procarbazine)；PSK；雷佐生(razoxane)；西佐呋喃(sizofuran)；鍺螺胺；替奴佐酸(tenuazonic acid)；三亞胺醌(triaziquone)；2,2',2''-三氯三乙胺；烏拉坦(urethan)；長春地辛(vindesine)；達卡巴嗪(dacarbazine)；甘露莫司汀(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴衛矛醇；哌血生(pipobroman)；加賽特辛(gacytosine)；阿拉伯糖苷(Ara-C)；類紫杉醇，例如太平洋紫杉醇(paclitaxel，TAXOL)及多西他賽(docetaxel，TAXOTERE)；苯丁酸氮芥；吉西他濱(gemcitabine)；6-硫鳥嘌呤；巰基嘌呤；鉑類似物，例如順鉑及卡鉑；長春鹼(vinblastine)；鉑；依托泊苷(VP-16)；異環磷醯胺；絲裂黴素C；米托蒽醌；長春新鹼(vincristine)；長春瑞濱(vinorelbine)；諾維本(navelbine)；邁杜蒽酮(novantrone)；替尼泊苷(teniposide)；道諾黴素(daunomycin)；胺喋呤(aminopterin)；伊班膦酸鹽(ibandronate)；CPT 11；拓撲異構酶抑制劑RFS 2000；二氟甲基鳥苷酸(DMFO)；視黃酸；埃斯培拉黴素(esperamicin)；卡培他濱(capecitabine，XELODA)；及上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、酸或衍生物。
化學治療劑亦包括用於調控或抑制腫瘤上之激素作用之抗激素劑，例如抗雌激素劑，包括例如他莫昔芬(tamoxifen)、雷洛昔芬(raloxifene)、抑制芳香酶之4(5)-咪唑、4-羥基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、可莫昔芬(keoxifene)、LY117018、奧那司酮(onapristone)及托瑞米芬(toremifene，FARESTON)；及抗雄激素劑，例如氟他胺(flutamide)、尼魯米特(nilutamide)、比卡魯胺(bicalutamide)、柳培林(leuprolide)及戈捨瑞林(goserelin)；及上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、酸或衍生物。
在本文所述方法之一些實施例中，化學治療劑係拓撲異構酶抑制劑。拓撲異構酶抑制劑係干擾拓撲異構酶(例如拓撲異構酶I或II)之作用之化學治療劑。拓撲異構酶抑制劑包括(但不限於)多柔比星HC1、檸檬酸柔紅黴素、米托蒽醌HC1、放線菌素D、依托泊苷、托泊替康(topotecan) HC1、替尼泊苷(VM-26)及伊立替康(irinotecan)以及該等藥物中任一者之醫藥學上可接受之鹽、酸或衍生物。在一些實施例中，其他治療劑係伊立替康。
在一些實施例中，化學治療劑係抗代謝物。抗代謝物係結構類似於正常生物化學反應所需之代謝物、但不同到足以干擾細胞之一或多種正常功能(例如細胞分裂)之化學物質。抗代謝物包括(但不限於)吉西他濱、氟尿嘧啶、卡培他濱、胺甲喋呤鈉、雷替曲塞(ralitrexed)、培美曲塞(pemetrexed)、替加氟(tegafur)、胞嘧啶阿拉伯糖苷、硫鳥嘌呤、5-氮胞苷、6-巰基嘌呤、硫唑嘌呤、6-硫鳥嘌呤、噴司他丁、磷酸氟達拉濱及克拉屈濱(cladribine)以及該等藥物中任一者之醫藥學上可接受之鹽、酸或衍生物。在一些實施例中，其他治療劑係吉西他濱。
在本文所述方法之一些實施例中，化學治療劑係抗有絲分裂劑，包括(但不限於)結合微管蛋白之劑。在一些實施例中，劑係紫杉烷。在一些實施例中，劑係太平洋紫杉醇或多西他賽或太平洋紫杉醇或多西他賽之醫藥學上可接受之鹽、酸或衍生物。在一些實施例中，劑係太平洋紫杉醇(TAXOL)、多西他賽(TAXOTERE)、結合白蛋白之太平洋紫杉醇(nab-太平洋紫杉醇；ABRAXANE)、DHA-太平洋紫杉醇或PG-太平洋紫杉醇。在某些替代性實施例中，抗有絲分裂劑包含長春花生物鹼，例如長春新鹼、長春鹼、長春瑞濱或長春地辛或其醫藥學上可接受之鹽、酸或衍生物。在一些實施例中，抗有絲分裂劑係驅動蛋白Eg5之抑制劑或有絲分裂激酶(例如Aurora A或Plkl)之抑制劑。在一些實施例中，其他治療劑係太平洋紫杉醇。在一些實施例中，其他治療劑係nab-太平洋紫杉醇。
在本文所述方法之一些實施例中，其他治療劑包含諸如小分子之劑。舉例而言，治療可涉及組合投與本揭示案之ILT結合劑與用作腫瘤相關抗原(包括但不限於EGFR、HER2 (ErbB2)及/或VEGF)之抑制劑之小分子。在一些實施例中，本揭示案之ILT結合劑(例如抗ILT2抗體、抗ILT4抗體或抗ILT2/ILT4抗體)係與選自由以下組成之群之蛋白激酶抑制劑組合投與：吉非替尼(gefitinib，IRESSA)、厄洛替尼(erlotinib，TARCEVA)、舒尼替尼(sunitinib，SUTENT)、拉帕替尼(lapatanib)、凡德他尼(vandetanib，ZACTIMA)、AEE788、CI-1033、西地尼佈(cediranib，RECENTIN)、索拉菲尼(sorafenib，NEXAVAR)及帕唑帕尼(pazopanib，GW786034B)。在一些實施例中，其他治療劑包含mTOR抑制劑。
在本文所述方法之一些實施例中，其他治療劑包含生物分子，例如抗體。舉例而言，治療可涉及組合投與本揭示案之ILT結合劑與針對腫瘤相關抗原之抗體，包括(但不限於)結合EGFR、HER2/ErbB2及/或VEGF之抗體。
在一些實施例中，其他治療劑係為血管生成抑制劑之抗體(例如抗VEGF或VEGF受體抗體)。在一些實施例中，其他治療劑係貝伐珠單抗(bevacizumab，AVASTIN)、雷莫蘆單抗(ramucirumab)、曲妥珠單抗(trastuzumab，HERCEPTIN)、帕妥珠單抗(pertuzumab，OMNITARG)、帕尼單抗(panitumumab，VECTIBIX)、尼妥珠單抗(nimotuzumab)、扎魯木單抗(zalutumumab)或西妥昔單抗(cetuximab，ERBITUX)。
在本文所述方法之一些實施例中，其他治療劑係免疫治療劑。在本文所述方法之一些實施例中，免疫治療劑係選自由以下組成之群：PD-1活性調節劑、PD-L1活性調節劑、PD-L2活性調節劑、CTLA-4活性調節劑、CD28活性調節劑、CD80活性調節劑、CD86活性調節劑、4-1BB活性調節劑、OX40活性調節劑、KIR活性調節劑、Tim-3活性調節劑、LAG3活性調節劑、CD27活性調節劑、CD40活性調節劑、GITR活性調節劑、TIGIT活性調節劑、CD20活性調節劑、CD96活性調節劑、IDO1活性調節劑。
在本文所述方法之一些實施例中，免疫治療劑係選自由以下組成之群：PD-1拮抗劑、PD-L1拮抗劑、PD-L2拮抗劑、CTLA-4拮抗劑、CD80拮抗劑、CD86拮抗劑、KIR拮抗劑、Tim-3拮抗劑、LAG3拮抗劑、TIGIT拮抗劑、CD20拮抗劑、CD96拮抗劑及/或IDO1拮抗劑。
在本文所述方法之一些實施例中，其他治療劑係檢查點抑制劑。在一些實施例中，其他治療劑係抗PD-1抗體、抗PD-Ll抗體、抗PD-L2抗體、抗CTLA-4抗體或抗TIGIT抗體、抗CD28抗體、抗CD80抗體、抗CD86抗體、抗4-1BB抗體、抗OX40抗體、抗KIR抗體、抗Tim-3抗體、抗LAG3抗體、抗CD27抗體、抗CD40抗體、抗GITR抗體、抗TIGIT抗體、抗CD20抗體、抗CD96抗體或抗IDO1抗體。在一些實施例中，其他治療劑係抗HLA-G抗體。在一些實施例中，其他治療劑係B7-1 (CD80)、B7-2 (CD86)、4-1BB配位體或抗CD3抗體。
在本文所述方法之一些實施例中，PD-1拮抗劑係特異性結合PD-1之抗體。在一些實施例中，結合PD-1之抗體係派姆單抗(MK-3475；KEYTRUDA)、匹利珠單抗(CT-011)、尼沃魯單抗(OPDIVO)、德瓦魯單抗(MEDI0680)、西米普利單抗(REGN2810)、替雷利珠單抗(BGB-A317)、司帕珠單抗(PDR-001)或STI-A1110。例示性抗PD-1抗體提供於例如美國專利第US10316089號、第US9580504號、第US9856320號、第US8609089號及第US8952136號中；該等美國專利之內容之全文皆以引用方式併入本文中。在一些實施例中，結合PD-1之抗體闡述於PCT公開案WO 2014/179664中，例如鑑別為APE2058、APE1922、APE1923、APE1924、APE 1950或APE1963之抗體或含有該等抗體中任一者之CDR區之抗體。在其他實施例中，PD-1拮抗劑係包括PD-L2之融合蛋白，例如AMP-224。在其他實施例中，PD-1拮抗劑係肽抑制劑，例如AUP-12。
在一些實施例中，PD-L1拮抗劑係特異性結合PD-L1之抗體。在一些實施例中，結合PD-L1之抗體係阿替珠單抗(Atezolizumab，TECENTRIQ)、MEDI4736、BMS-936559 (MDX-1105)、阿維魯單抗(Avelumab，BAVENCIO)、德瓦魯單抗(IMFINZI)、KD033、KD033之抗體部分或STI-A1014。在一些實施例中，結合PD-L1之抗體闡述於PCT公開案WO 2014/055897中，例如Ab-14、Ab-16、Ab-30、Ab-31、Ab-42、Ab-50、Ab-52或Ab-55或含有該等抗體中任一者之CDR區之抗體。
在一些實施例中，CTLA-4拮抗劑係特異性結合CTLA-4之抗體。在一些實施例中，結合CTLA-4之抗體係伊匹單抗(Ipilimumab，YERVOY)或曲美木單抗(Tremelimumab，CP-675,206)。在一些實施例中，CTLA-4拮抗劑係CTLA-4融合蛋白，例如KAHR-102。
在一些實施例中，LAG3拮抗劑係特異性結合LAG3之抗體。在一些實施例中，結合LAG3之抗體係IΜΡ701、IMP731、BMS-986016、LAG525及GSK2831781。在一些實施例中，LAG3拮抗劑包括可溶性LAG3受體，例如IMP321。
在一些實施例中，KIR拮抗劑係特異性結合KIR之抗體。在一些實施例中，結合KIR之抗體係利利單抗(Lirilumab)。
在一些實施例中，免疫治療劑係選自由以下組成之群：CD28促效劑、4-1BB促效劑、OX40促效劑、CD27促效劑、CD80促效劑、CD86促效劑、CD40促效劑及GITR促效劑。
在一些實施例中，OX40促效劑包括OX40配位體或其OX40結合部分。舉例而言，OX40促效劑可為MEDI6383。在一些實施例中，OX40促效劑係特異性結合OX40之抗體。在一些實施例中，結合OX40之抗體係MEDI6469、MEDI0562、PF-8600或MOXR0916 (RG7888)。在一些實施例中，OX40促效劑係能夠表現OX40配位體之載體(例如表現載體或病毒，例如腺病毒)。在一些實施例中，OX40表現載體係δ-24-RGDOX或DNX2401。
在一些實施例中，4-1BB (CD137)促效劑係結合分子，例如抗運載蛋白。在一些實施例中，抗運載蛋白係PRS-343。在一些實施例中，4-1BB促效劑係特異性結合4-1BB之抗體。在一些實施例中，結合4-1BB之抗體係烏托魯單抗(Utomilumab，PF-05082566)或烏瑞盧單抗(Urelumab，BMS-663513)。
在一些實施例中，CD27促效劑係特異性結合CD27之抗體。在一些實施例中，結合CD27之抗體係瓦利珠單抗(varlilumab，CDX-1127)。
在一些實施例中，GITR促效劑包含GITR配位體或其GITR結合部分。在一些實施例中，GITR促效劑係特異性結合GITR之抗體。在一些實施例中，結合GITR之抗體係TRX518、MK-4166或INBRX-110。
在本文所述方法之一些實施例中，其他治療劑係生物分子，例如細胞介素、趨化介素、生長因子、干擾素、介白素、淋巴介質、腫瘤壞死因子(TNF)家族之成員及免疫刺激寡核苷酸(例如CpG二核苷酸)。在一些實施例中，生物分子係選自由以下組成之群：腎上腺髓素(AM)、血管生成素(Ang)、BMP、BDNF、EGF、紅血球生成素(EPO)、FGF、GDNF、顆粒球-巨噬細胞群落刺激因子(GM-CSF)、巨噬細胞群落刺激因子(M-CSF)、顆粒球群落刺激因子(G-CSF)、GDF9、HGF、HDGF、IGF、遷移刺激因子、肌骨素(GDF-8)、NGF、神經滋養蛋白、PDGF、促血小板生成素、TGF-a、TGF-β、TNF-α、VEGF、PIGF、IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-12、IL-15及IL-18。
另外，用本文所述之ILT結合劑(例如ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑)治療可伴隨手術去除腫瘤、去除癌細胞或治療醫師認為所需之任何其他療法。
在一些實施例中，用ILT結合劑(例如ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑)治療可在投與其他治療劑之前、與其同步或在其之後進行。在一些實施例中，組合投與包括以單一醫藥調配物形式或使用單獨調配物共投與，或以任一順序但通常在一定時間段內連續投與，使得所有活性劑可發揮其生物活性。在一些實施例中，劑之製備及/或其他治療劑之給藥時間表係根據製造商之說明書或由熟習此項技術者憑經驗確定。
在本文所述方法之一些實施例中，ILT結合劑(例如ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑)係作為組合療法之一部分投與個體。
應了解，本文所述之ILT結合劑(例如ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑)及至少一種其他治療劑之組合可以任一順序或同步投與。在一些實施例中，將ILT結合劑投與先前已經歷治療劑治療之個體。在一些實施例中，ILT結合劑及第二治療劑係實質上同時或同步投與。舉例而言，個體可在經歷用第二治療劑(例如化學治療劑)治療之進程的同時給予ILT結合劑。在一些實施例中，ILT結合劑係在用第二治療劑治療之1年內投與。在一些實施例中，ILT結合劑係在使用第二治療劑之任何治療之10個月、8個月、6個月、4個月或2個月內投與。在一些實施例中，ILT結合劑係在使用第二治療劑之任何治療之4週、3週、2週或1週內投與。在一些實施例中，ILT結合劑係在使用第二治療劑之任何治療之5天、4天、3天、2天或1天內投與。應進一步了解，兩種(或更多種)劑或治療可在幾小時或幾分鐘內(即實質上同時)投與個體。
為治療疾病，本揭示案之ILT結合劑(例如ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑)之適宜劑量端視欲治療之病症或疾病、病症或疾病之嚴重程度及進程、病症或疾病之反應性、投與劑係用於治療抑或預防目的、先前療法、患者之臨床病史等而定。ILT結合劑可一次性投與，或在持續幾天至幾個月之一系列治療內投與，或直至實現治愈或達成疾病狀態之減少。
本揭示案提供醫藥組合物，其包含本文所述之ILT結合劑及醫藥學上可接受之媒劑。本揭示案亦提供醫藥組合物，其包含本文所述之ILT2結合劑及醫藥學上可接受之媒劑。本揭示案亦提供醫藥組合物，其包含本文所述之ILT4結合劑及醫藥學上可接受之媒劑。本揭示案亦提供醫藥組合物，其包含本文所述之ILT2/ILT4結合劑及醫藥學上可接受之媒劑。
藉由組合本揭示案之經純化抗體或劑與醫藥學上可接受之媒劑(例如載劑或賦形劑)來製備調配物用於儲存及使用。熟習此項技術者通常認為醫藥學上可接受之載劑、賦形劑及/或穩定劑係調配物或醫藥組合物之無活性成分。
適宜醫藥學上可接受之媒劑包括(但不限於)無毒緩衝劑，例如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸；鹽，例如氯化鈉；抗氧化劑，包括抗壞血酸及甲硫胺酸；防腐劑，例如十八烷基二甲基苄基氯化銨、氯化六甲雙銨、氯化苄烷銨、氯化苯銨松寧、苯酚、丁醇或苄醇、對羥基苯甲酸烷基酯，例如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯、兒茶酚、間苯二酚、環己醇、3-戊醇及間甲酚；低分子量多肽(例如少於約10個胺基酸殘基)；蛋白質，例如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水聚合物，例如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，例如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺、組胺酸、精胺酸或離胺酸；碳水化合物，例如單糖、二糖、葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，例如EDTA；糖，例如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成鹽抗衡離子，例如鈉；金屬錯合物，例如Zn-蛋白質錯合物；及非離子表面活性劑，例如TWEEN或聚乙二醇。(Remington: The Science and Practice of Pharmacy
，第22版，2012, Pharmaceutical Press, London。)。在一些實施例中，調配物呈水溶液形式。在一些實施例中，調配物係以凍乾形式或以替代性乾燥形式儲存。
本揭示案之ILT結合劑可以任一適於遞送至靶細胞/組織之形式調配。在一些實施例中，ILT結合劑(例如ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑)可調配為脂質體、微粒、微膠囊、白蛋白微球、微乳液、奈米粒子、奈米膠囊或粗滴乳液。
在一些實施例中，ILT結合劑(例如ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑)係用脂質體調配。產生脂質體之方法為熟習此項技術者已知。舉例而言，一些脂質體可藉由用包含磷脂醯膽鹼、膽固醇及PEG衍生之磷脂醯乙醇胺(PEG-PE)之脂質組合物反相蒸發來生成。
在一些實施例中，ILT結合劑(例如ILT2結合劑、ILT4結合劑或ILT2/ILT4結合劑)調配為持續釋放製劑。持續釋放製劑之適宜實例包括含有劑之固體疏水聚合物之半透性基質，其中基質呈成形物件(例如膜或微膠囊)之形式。持續釋放基質包括(但不限於)聚酯、水凝膠(例如聚(甲基丙烯酸2-羥基乙酯)或聚(乙烯醇))、聚乳酸、L-麩胺酸及L-麩胺酸7乙酯之共聚物、不可降解之乙烯-乙酸乙烯酯、可降解之乳酸-乙醇酸共聚物(例如LUPRON DEPOT™，由乳酸-乙醇酸共聚物及乙酸柳培林構成之可注射微球)、蔗糖乙酸異丁酸酯及聚-D-(-)-3-羥基丁酸。
本揭示案之醫藥組合物或調配物可以多種方式投與用於局部或全身性治療。投與可為藉由表皮或經皮貼片、軟膏劑、洗劑、乳霜、凝膠、滴劑、栓劑、噴霧劑、液體及粉劑之外用投與；藉由吸入或吹入粉劑或氣溶膠(包括藉由霧化器、氣管內及鼻內)之肺部投與；口服；或非經腸，包括靜脈內、動脈內、腫瘤內、皮下、腹膜內、肌內(例如注射或輸注)或顱內(例如鞘內或腦室內)。
實例
實例1
抗體之生成及抗體之篩選
使用人類ILT2之細胞外結構域、人類ILT4之細胞外結構域及/或恆河猴ILT2之細胞外結構域作為免疫原生成抗ILT抗體。舉例而言，使用人類ILT2之細胞外結構域生成抗ILT2抗體。類似地，使用人類ILT4之細胞外結構域生成抗ILT4抗體。使用人類ILT2之細胞外結構域、人類ILT4之細胞外結構域及恆河猴ILT2之細胞外結構域之混合物生成抗ILT2/ILT4抗體。在已確定個別動物具有適宜抗體效價後，自經免疫小鼠之脾及淋巴結獲得淋巴球之單細胞懸浮液。藉由標準方法使淋巴球與鼠類骨髓瘤細胞融合。將雜交瘤融合物平鋪至半固體培養基上用於HAT選擇。5-7天後，使用ClonePix™系統選擇單菌落且平鋪至96孔板中。
使用ELISA分析篩選針對人類ILT2、人類ILT4及恆河猴ILT2之抗體。選擇僅結合至人類ILT2、僅結合至人類ILT4或結合至人類ILT2、人類ILT4及恆河猴ILT2之抗體。
實例2
人類ILT2及ILT4基因與食蟹猴ILT2及ILT4基因之間之同線性
在嚙齒類動物中，成對Ig樣受體B (PirB)及gp49B1已闡述為人類LILRB受體家族之潛在直系同源物(Kang X等人，Cell Cycle
. (2016);15(1):25-40)。然而，PirB及gp49B1顯示與人類ILT2及人類ILT4二者小於50%之一致性。另外，嚙齒類動物與人類LILRB家族成員之間之受體/配位體配對存在顯著不同且不清楚嚙齒類動物受體之生物功能。因此，嚙齒類動物並不視為測試抗ILT抗體之生物效應之相關物種。
使用基因體結構分析(同線性)來鑑別食蟹猴中人類ILT2及ILT4二者之候選直系同源物。使用Ensembl提供之基因注解比較人類(hg38)及食蟹猴(食蟹獼猴(Macaca fascicularis) v5.0.95，「食蟹猴(cyno)」)中含有LILR家族成員之基因座之基因體組織。在未發現注解之情形下，使用間插序列之人工分析確認缺少開放閱讀框。使用UniProt上之blastp工具比較不含預注解基因符號之食蟹猴基因之經預測蛋白質序列與所有人類基因以基於一致性評分發現最可能的人類直系同源物。
發現食蟹猴基因體組織在與人類LILRB2 (ILT4)相同之基因體位置丟失基因，而在與人類LILRB1 (ILT2)相同之位置保留基因。使用恆河獼猴觀察到相似的組織。人類ILT2、人類ILT4與食蟹猴ILT2之間之序列一致性介於73%-80%範圍內。人類ILT2與食蟹猴ILT2之間之序列一致性係73%，而人類ILT4與食蟹猴ILT2之間之序列一致性係78%。相比之下，人類ILT2與人類ILT4之間之序列一致性係80%。
實例3
抗人類ILT2、ILT4及ILT2/ILT4抗體之結合特徵
使用Biacore系統(GE Healthcare LifeSciences)量測抗ILT2抗體及抗ILT4抗體之結合親和力。使用經純化抗體實施平衡解離常數(KD
)量測以評估其與人類ILT2、人類ILT4及恆河猴ILT2之結合。簡言之，在感測器晶片蛋白A (GE HealthCare)上捕獲經純化之抗ILT2抗體27F9、抗ILT4抗體47C8及48A5以及抗ILT2/ILT4抗體47H6、51A1、64A12、73C4及73D1。Biacore感測器晶片蛋白A之表面係由共價連接有重組蛋白A變異體之羧甲基化葡聚糖基質組成。在25℃下以30 µL/min之流量注入可溶性人類ILT2-ECD、人類ILT4-ECD或恆河猴ILT2-ECD。ILT2或ILT4蛋白係以在PBS-P緩衝液中以2倍稀釋之介於1.6 - 200 nM範圍內之濃度使用。隨時間收集動力學數據且使用同時全擬合方程擬合以產生每一抗體之親和常數(KD
值)。
結合數據顯示於表9A及表9B中。
表9A
1 - 結合分析係在低解析度參數下實施
表9B
1 - 結合分析係在低解析度參數下實施
實例4
抗ILT2抗體、抗ILT4抗體及抗ILT2/ILT4抗體之序列分析
| 人類ILT2 | 人類ILT4 | |||||
| 抗體 | K締合 [1/Ms] | K解離 [s-1 ] | KD M | K締合 [1/Ms] | K解離 [s-1 ] | KD M |
| 27F9 | 2.1 × 105 | 5.4 × 10-5 | 2.6 × 10-10 | NB | NB | NB |
| 47C8 | NB | NB | NB | 3.4 × 105 | 2.5 × 10-5 | 7.4 × 10-11 |
| 48A5 | NB | NB | NB | 8.1 × 105 | 2.1 × 10-5 | 2.6 × 10-11 |
| 47H6 | 4.2 × 104 | 8.6 × 10-5 | 2.1 × 10-9 | 3.7 × 104 | 2.8 × 10-5 | 7.6 × 10-10 |
| 51A1 | 3.9 × 104 | 2.2 × 10-4 | 5.8 × 10-9 | 6.8 × 104 | 1.4 × 10-5 | 2.0 × 10-10 |
| 64A121 | 2.0 × 104 | 約1.0 × 10-5 | ＜ 1.0 × 10-10 | 8.2 × 104 | 約1.0 × 10-5 | ＜ 1.0 × 10-10 |
| 73C41 | 3.1 × 104 | 約1.0 × 10-5 | ＜ 1.0 × 10-10 | 9.7 × 104 | 約1.0 × 10-5 | ＜ 1.0 × 10-10 |
| 73D1 | 5.0 × 104 | 6.0 × 10-5 | 1.2 × 10-9 | 3.0 × 105 | 5.4 × 10-5 | 1.8 × 10-10 |
| 恆河猴ILT2 | |||
| 抗體 | K締合 [1/Ms] | K解離 [s-1 ] | KD M |
| 27F9 | NB | NB | NB |
| 47C8 | 5.9 × 105 | 1.4 × 10-3 | 2.3 × 10-9 |
| 48A5 | 1.1 × 106 | 2.6 × 10-3 | 2.3 × 10-9 |
| 47H61 | 4.7 × 104 | 約1 × 10-5 | ＜ 1.0 × 10-10 |
| 51A1 | 1.0 × 105 | 2.1 × 10-5 | 2.0 × 10-10 |
| 64A121 | 2.0 × 104 | 約1.0 × 10-5 | ＜ 1.0 × 10-10 |
| 73C41 | 3.1 × 104 | 約1.0 × 10-5 | ＜ 1.0 × 10-10 |
| 73D1 | 5.0 × 104 | 6.0 × 10-5 | 1.2 × 10-9 |
對代表性抗ILT2抗體27F9、抗ILT4抗體47C8及48A5以及抗ILT2/ILT4抗體47H6、51A1、64A12、73C4及73D1測序且重鏈可變區及輕鏈可變區胺基酸序列揭示於本文中並彙總於表10中。
表10
| 抗體 | 靶 | 重鏈可變區 | 輕鏈可變區 |
| 27F9 | ILT2 | SEQ ID NO:125 | SEQ ID NO:126 |
| 47C8 | ILT4 | SEQ ID NO:127 | SEQ ID NO:128 |
| 48A5 | ILT4 | SEQ ID NO:129 | SEQ ID NO:130 |
| 47H6 | ILT2/ILT4 | SEQ ID NO:131 | SEQ ID NO:132 |
| 51A1 | ILT2/ILT4 | SEQ ID NO:135 | SEQ ID NO:136 |
| 64A12 | ILT2/ILT4 | SEQ ID NO:137 | SEQ ID NO:138 |
| 73C4 | ILT2/ILT4 | SEQ ID NO:141 | SEQ ID NO:142 |
| 73D1 | ILT2/ILT4 | SEQ ID NO:143 | SEQ ID NO:142 |
個別抗體之重鏈及輕鏈可變區CDR揭示於表1-8中且揭示為SEQ ID NO:22-124。
實例5
人類化抗體之生成
藉由熟習此項技術者已知之方法將幾種抗ILT2/ILT4抗體(即47H6、64A12及73D1)人類化。該等人類化抗體在本文中分別稱為Hz47H6.v2、Hz64A12及Hz73D1.v1。在抗體47H6之人類化過程期間，重鏈可變區CDR2自DFNPNNGGTTYNQKFEG (SEQ ID NO:71)修飾成DFNPNNA
GTTYNQKFEG (SEQ ID NO:118)。Hz47H6.v2之重鏈可變區序列係SEQ ID NO:133且Hz47H6.v2之輕鏈可變區序列係SEQ ID NO:134；Hz64A12之重鏈可變區序列係SEQ ID NO:139且Hz64A12之輕鏈可變區序列係SEQ ID NO:140；且Hz73D1.v1之重鏈可變區序列係SEQ ID NO:144且Hz73D1.v1之輕鏈可變區序列係SEQ ID NO:145。
使用如本文所述之Biacore系統量測人類化抗體對人類ILT2及人類ILT4之結合親和力。與親代抗體相比，抗體Hz47H6.v2、Hz64A12及Hz73D1.v1之結合親和力顯示於表11中。
表11
1 - 結合分析係在低解析度參數下實施
| 人類ILT2 | 人類ILT4 | |||||
| 抗體 | K締合 [1/Ms] | K解離 [s-1 ] | KD M | K締合 [1/Ms] | K解離 [s-1 ] | KD M |
| 47H6 | 1.0 × 105 | 2.1 × 10-5 | 2.0 × 10-10 | 1.0 × 105 | 2.1 × 10-5 | 2.0 × 10-10 |
| Hz47H6.v2 | 2.3 × 105 | 9.0 × 10-4 | 4.0 × 10-9 | 8.7 × 104 | 1.8 × 10-4 | 2.0 × 10-9 |
| 64A121 | 2.0 × 104 | 約1.0 × 10-5 | ＜ 1.0 × 10-10 | 8.2 × 104 | 約1.0 × 10-5 | ＜ 1.0 x10-10 |
| Hz64A121 | 9.3 × 104 | 1.4 × 10-4 | 1.6 × 10-9 | 3.0 × 105 | 約1.0 × 10-5 | ＜ 1 × 10-10 |
| 73D1 | 1.5 × 105 | 2.4 × 10-4 | 1.8 × 10-9 | 4.0 × 105 | 3.0 × 10-5 | 7.4 × 10-10 |
| Hz73D1.v1 | 8.5 × 104 | 2.5 × 10-4 | 3.0 × 10-9 | 3.6 × 105 | 2.7 × 10-4 | 7.5 × 10-10 |
該等結果展示，例示性抗ILT2/ILT4抗體之人類化過程對抗體與人類ILT2或人類ILT4結合之能力不具顯著效應。
亦分析人類化抗ILT2/ILT4抗體與食蟹猴(「食蟹猴(cyno)」，食蟹獼猴) ILT2之交叉反應性。與抗ILT2/ILT4抗體相似，人類化抗ILT2/ILT4抗體結合至食蟹猴ILT2。藉由Biacore系統量測之例示性純系Hz73D1.v1之結合親和力顯示於表12中。在Biacore系統中，在蛋白A晶片上捕獲人類化抗ILT2/ILT4抗體。在25℃下，將ILT蛋白以不同濃度注入流動池中以評估動力學參數。Hz73D1.v1與人類ILT2及ILT4之結合親和力(KD
)經測定分別為1.03 nM及0.205 nM。Hz73D1.v1與食蟹猴ILT2之KD
經測定為19.1 nM。
表12
實例6
免疫細胞亞組中之ILT2及ILT4表現
| ILT之種類 | KD (nM) | k締合 (1/Ms) | k解離 (1/s) |
| 人類ILT2 | 1.03 | 4.72 × 104 | 4.85 × 10-5 |
| 人類ILT4 | 0.205 | 2.2 × 105 | 4.6 × 10-5 |
| 食蟹猴ILT2 | 19.1 | 3.4 × 106 | 0.06 |
已闡述多種造血起源細胞(包括骨髓細胞、顆粒球及淋巴球)上之ILT2及ILT4表現(Colonna M等人，J Exp Med
. (1997) 12月1日;186(11): 1809-1818；Colonna M等人，J Immunol
(1998), 160(7): 3096-3100)。使用本文所述之抗ILT抗體進一步闡明人類及食蟹猴免疫細胞亞組上之ILT2及ILT4表現。
對人類及食蟹猴PBMC及全血實施血液免疫細胞之流式細胞術分析。自leukopak (Allcells Inc.)藉由ficoll離心、用PBS洗滌及冷凍於液氮中之低溫保藏緩衝液中直至使用來製備PBMC。獲得新鮮全血(Allcells Inc.)，並使用氯化銨RBC溶解溶液(Biolegend)清除紅血球(RBC)。用經螢光標記之抗體組對PBMC或全血樣品染色以區分各種免疫亞組(單核球、B細胞、NK細胞、CD4+及CD8+ T細胞、嗜中性球及嗜酸性球)。用經螢光標記之同型27F9 (ILT2特異性)、48A5 (ILT4特異性)、73D1及Hz73D1.v1進一步對樣品染色。藉由與量子簡單細胞微球(Quantum Simply Cellular microsphere)一起培育、然後藉由流式細胞術分析估計每一免疫亞組之每個細胞中ILT2及ILT4分子之數量。
如表13及圖1中所顯示，在單核球、B細胞、NK細胞亞組(5%-20%之總NK細胞)及CD8+ T細胞亞組(5%-20%之總CD8+ T細胞)上觀察到ILT2高表現。在單核球、嗜酸性球及嗜中性球上觀察到ILT4高表現。結果顯示，食蟹猴外周免疫細胞表現ILT2蛋白，其表現水準及免疫細胞分佈與人類外周血中ILT2及ILT4之組合相當。
表13
實例7
抗ILT抗體對ILT2或ILT4與MHC I分子之間之相互作用之抑制
| 抗原 | 單核球 | 嗜中性球 | B細胞 | NK細胞(亞組) | CD8 T細胞(亞組) |
| 人類ILT2 | 5.0 × 104 | 0 | 2.0 × 104 | 4.0 × 103 | 5.5 × 103 |
| 人類ILT4 | 5.0 × 104 | 2.5 × 104 | 0 | 0 | 0 |
| 食蟹猴ILT2 | 1.3 × 105 | 5.0 × 104 | 2.0 × 103 | 8.0 × 103 | 5.0 × 103 |
作為表徵過程之一部分，在競爭實驗中使用Biacore系統評估例示性抗體抑制或阻斷ILT2或ILT4與其天然配位體相互作用之能力。如本文所述，ILT2及ILT4之天然配位體包括(但不限於) I類HLA分子，包括HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-E及HLA-G。在NeutrAvidin晶片表面上大量捕獲生物素化HLA-A*1101。使用以下製備抗原-抗體複合物：(i) ILT2-ECD及抗ILT2抗體27F9、抗ILT4抗體48A5或抗ILT2/ILT4抗體Hz73D1.v1及(ii) ILT4-ECD及抗ILT2抗體27F9、抗ILT4抗體48A5或抗ILT2/ILT4抗體Hz73D1.v1。自0.09 - 100 nM滴定每一抗體之抗體濃度且使人類ILT2-ECD或ILT4-ECD之濃度在20 nM保持恆定。在96孔微量板中混合複合物且將每一者注入HLA-A包被之晶片表面上。針對抗體濃度對量測之信號(反應單位，RU)繪圖。
結果顯示於圖2中。隨著增加抗ILT2抗體27F9及抗ILT2/ILT4抗體Hz73D1.v1之濃度，觀察到ILT2與HLA-A之結合以劑量依賴性方式減少。相比之下，抗ILT4抗體48A5對ILT2與HLA-A之結合不具效應。類似地，隨著增加抗ILT4抗體48A5及抗ILT2/ILT4抗體Hz73D1.v1之濃度，觀察到ILT4與HLA-A之結合減少，其中抗ILT2抗體27F9無效應。觀察到抗體以奈莫耳範圍內之IC50抑制相互作用。使用HLA-G包被之晶片表面實施另一組實驗且具有相似之結果。
該等資料展示，本文所述之抗ILT2抗體及抗ILT2/ILT4抗體抑制ILT2與其天然配位體之間之相互作用。另外，本文所述之抗ILT4抗體及抗ILT2/ILT4抗體抑制ILT4與其天然配位體之間之相互作用。重要的是，此實驗亦顯示，抗ILT2/ILT4抗體不僅結合至兩個靶，即ILT2及ILT4，且亦在阻斷兩個靶與其配位體之相互作用方面具有生物功能。該等結果顯示，抗ILT2/ILT4抗體可為阻斷ILT2誘導及ILT4誘導之免疫反應阻抑之潛在治療劑。
實例8
抗ILT2/ILT4抗體與細胞之結合
評估抗ILT2/ILT4抗體與單核球之結合。藉由流式細胞術分析測定例示性抗ILT2/ILT4抗體73D1及人類化形式Hz73D1.v1與人類及食蟹猴PBMC之CD14+單核球群體之結合。簡言之，將人類或食蟹猴PBMC (各自來自2個供體)解凍，於培養基(RPMI，10% FBS、L-麩醯胺酸、pen/strep)中洗滌，且重懸浮於新鮮培養基中。用經標記抗體之混合劑對PBMC染色以區分不同的細胞類型。用經螢光標記之73D1或Hz73D1.v1抗體對1 × 106
個細胞/孔染色且在冰上培育。用冰冷試劑洗滌細胞且立即藉由流式細胞術分析。對每一樣品計算CD14+單核球之幾何平均螢光強度。如圖3中所顯示，在人類細胞及食蟹猴細胞二者中在遞增濃度之抗體73D1及Hz73D1.v1下觀察到螢光增加。另外，抗體與人類細胞及食蟹猴細胞之結合係相當的。舉例而言，Hz73D1.v1之50%有效濃度(EC50
)在使用人類單核球之情況下為8.8 nM且在使用食蟹猴單核球之情況下為1.8 nM。經對照抗體染色之細胞不顯示螢光之變化。該等結果展示，抗ILT2/ILT4抗體識別完整細胞(即原代單核球)上之ILT2及/或ILT4。重要的是，該等結果顯示，與人類及食蟹猴單核球二者之結合相當，此表明猴將為適用於未來研究之模型。另外，未觀察到本文所述之抗ILT2/ILT4抗體與大鼠及小鼠之單核球及其他免疫細胞之結合，此確認嚙齒類動物不為適用於非臨床測試之物種。
除與ILT2及ILT4結合之外，抗ILT2/ILT4抗體顯示與LILRA1之交叉反應性，而非與ILLRB3、ILLRB4、ILLRB5、ILLRA2、ILLRA4、ILLRA5及ILLRA6之交叉反應性。藉由螢光活化細胞分選(FACS)使用分別表現人類及食蟹猴ILT2、ILT4、LILRA1、ILLRB3、ILLRB4、ILLRB5、ILLRA2、ILLRA4、ILLRA5及ILLRA6之293T細胞評估抗ILT2/ILT4抗體與ILT家族成員之結合。例示性抗ILT2/ILT4抗體Hz73D1.v1與在293T細胞上表現且藉由流式細胞術量測之人類ILT2、人類ILT4、人類LILRA1及食蟹猴LILRA1之結合親和力分別顯示為1.2 nM、1.4 nM、2.64 nM及1.97 nM。
實例9
抗ILT抗體對ILT2或ILT4與MHC I分子之間之相互作用之抑制
使用報導細胞系統評估抗ILT2/ILT4抗體抑制ILT2及/或ILT4與MHC I分子之間之相互作用之能力。Raji細胞株係50年前自伯基特氏淋巴瘤(Burkitt lymphoma)建立且已顯示表現MHC I及MHC II分子。淋巴母細胞樣細胞株(LCL) 721.221係親代LCL 721之突變體，其中LCL 721.221不表現任何MHC I分子。用非經典MHC I分子HLA-G轉染LCL 721.221細胞且建立穩定細胞株，在本文中稱為721.221-HLA-G。將Raji細胞或721.221-HLA-G細胞與表現穩定報導系統及所關注細胞表面受體之細胞(「報導細胞」)共培養。在此嵌合受體系統中，使所關注受體(例如ILT2或ILT4)之細胞外結構域與銜接蛋白DAP12締合之PILRβ之跨膜/細胞內結構域融合。當嵌合受體(例如ILT2或ILT-4)藉由與配位體(例如MHC I分子)結合活化時，DAP12變得磷酸化且活化驅動GFP表現之NFAT反應性啟動子(參見例如Deng等人，2014,Blood
, 124:924-935)。
用細胞示蹤劑深紅(CellTracker Deep Red，ThermoFisher)對ILT2及ILT4報導細胞(表現人類ILT2或人類ILT4)染色以在分析時區分其與Raji或721.221-HLA-G細胞。在染色後洗滌報導細胞且以1 × 106
個細胞/ml重懸浮於X-VIVO™ 15培養基(Lonza)中。洗滌Raji細胞或721.221-HLA-G細胞且以1 × 106
個細胞/ml重懸浮於X-VIVO™ 15培養基中。對於使用Raji細胞之分析：將抗ILT2抗體27F9、抗ILT4抗體48A5、抗ILT2/ILT4抗體73D1及Hz73D1.v1及對照抗體連續稀釋且將50 µl添加至96孔平底細胞培養板之每孔中。對於使用721.221-HLA-G細胞之分析：將抗ILT4抗體48A5、抗ILT2/ILT4抗體Hz73D1.v1及對照抗體連續稀釋且將50 µl添加至96孔平底細胞培養板之每孔中。將表現ILT2或表現ILT4之報導細胞(100 µl/孔)與Raji細胞或721.221-HLA-G細胞(100 µl/孔)共培養。將板在37℃下培育過夜。第二天，藉由FACS分析報導細胞之GFP表現。
如圖4A中所顯示，GFP之表現係在Raji細胞存在下在報導細胞表面上表現ILT2或ILT4時被誘導。當報導細胞在其細胞表面上表現ILT2時，觀察到增加抗ILT2抗體27F9及抗ILT2/ILT4抗體73D1或Hz73D1.v1之濃度以劑量依賴性方式抑制GFP表現(表示為GFP陽性細胞%)。觀察到抗ILT4抗體不具抑制效應。類似地，當報導細胞在其細胞表面上表現ILT4時，觀察到增加抗ILT4抗體48A5及抗ILT2/ILT4抗體73D1或Hz73D1.v1之濃度以劑量依賴性方式抑制GFP表現且抗ILT2抗體不具效應。如圖4B中所顯示，GFP之表現係在721.221-HLA-G細胞存在下在報導細胞表面上表現ILT2或ILT4時被誘導。當報導細胞在其細胞表面上表現ILT2時，觀察到增加抗ILT2/ILT4抗體Hz73D1.v1之濃度以劑量依賴性方式抑制GFP表現。當報導細胞在其細胞表面上表現ILT4時，觀察到增加抗ILT4抗體48A5及抗ILT2/ILT4抗體Hz73D1.v1之濃度以劑量依賴性方式抑制GFP表現。表14顯示阻斷人類ILT2、人類ILT4及食蟹猴ILT2與Raji細胞上之MHC I分子之相互作用之Hz73D1.v1的IC50
。表15顯示阻斷人類ILT2、人類ILT4與在721.221細胞上表現之HLA-G之相互作用之Hz73D1.v1的IC50
。
表14
表15
| 報導基因 構築物 | Raji 細胞 IC50 (nM) |
| 人類ILT2 | 0.25 |
| 人類ILT4 | 0.066 |
| 食蟹猴ILT2 | 0.094 |
| 報導基因構築物 | 721.221-HLA-G IC50 (nM) |
| 人類ILT2 | 0.23 |
| 人類ILT4 | 0.26 |
該等結果顯示，抗ILT2抗體或抗ILT2/ILT4抗體能夠高水準地抑制及/或阻斷ILT2與經典MHC I分子之間之功能性相互作用。同時，該等結果顯示，抗ILT4抗體或抗ILT2/ILT4抗體能夠高水準地抑制及/或阻斷ILT4與經典及非經典MHC I分子(例如HLA-G)之間之功能性相互作用。該等結果支持以下觀點：結合ILT2及ILT4之抗體將調節該兩種分子所誘導之路徑。因此，抗ILT2/ILT4抗體可為強於僅靶向ILT2或僅靶向ILT4之抗體之治療劑。
使用表現食蟹猴ILT2之報導細胞進行另一研究。如上文所述，用細胞示蹤劑深紅對食蟹猴ILT2報導細胞染色，洗滌，且以1 × 106
個細胞/ml重懸浮於X-VIVO™ 15培養基(Lonza)中。洗滌Raji細胞且以1 × 106
個細胞/ml重懸浮於X-VIVO™ 15培養基中。將抗ILT2/ILT4抗體73D1及Hz73D1.v1及對照抗體連續稀釋且將50 µl添加至96孔平底細胞培養板之每孔中。將表現ILT2之報導細胞(100 µl/孔)與Raji細胞(100 µl/孔)共培養。將板在37℃下培育過夜。第二天，藉由FACS分析報導細胞之GFP表現。
如圖5中所顯示，GFP之表現係在Raji細胞存在下在報導細胞表面上表現食蟹猴ILT2/4時被誘導。在增加抗ILT2/ILT4抗體73D1或Hz73D1.v1之濃度之情況下，GFP表現細胞之百分比以劑量依賴性方式減小，表14顯示阻斷食蟹猴ILT2與Raji細胞上之MHC I分子之相互作用之Hz73D1.v1的IC50
。該等結果進一步證實猴將為良好的測試模型。
除報導細胞系統外，使用Biacore系統評估抗ILT2/ILT4抗體對ILT2與MHC I分子之間之相互作用及ILT4與MHC I分子之間之相互作用的抑制活性。使用人類ILT2-Fc及ILT4-Fc作為靶受體，且在25℃下在例示性抗ILT2/ILT4抗體Hz73D1.v1存在或不存在下分析其與例示性MHC-I分子(HLA-A)之相互作用。使用抗人類ILT2 (純系27F9)或ILT4 (純系48A5)抗體作為工具試劑來剖析ILT2及ILT4特異性阻斷活性。抗IL2/ILT4抗體產生ILT2與HLA-A之間以及ILT4與HLA-A之間之相互作用的劑量依賴性減小。所測試抗體之IC50顯示於表16中。
表16
實例10
抗ILT抗體對NK細胞活性之效應
| 抗體 | ILT2 IC50 (nM) | ILT4 IC50 (nM) |
| Hz73D1.v1 | 10 ± 0.36 | 9.4 ± 0.34 |
| 48A5 (ILT4特異性) | 無阻斷 | 8.4 ± 0.46 |
| 27F9 (ILT2特異性) | 8.9 ± 0.37 | 無阻斷 |
NKL係自患有大顆粒淋巴球(LGL)白血病之患者之外周血建立且由Louis Lanier博士友情提供之人類自然殺手(NK)細胞株。如本文所揭示，NK細胞表現ILT2，但通常不表現ILT4。用表現HLA-G或HLA-A*0201之質體轉染721.221細胞且藉由抗生素選擇富集高表現匯集物，生成721.221-HLA-G及721.221-A*0201細胞株。使用721.221-HLA-G細胞(本文所述)或721.221-HLA-A*0201細胞作為細胞溶解細胞分析中之靶。用細胞示蹤劑深紅(ThermoFisher)標記靶細胞以區分其與NKL細胞(共培養後)且然後以5 × 105
個細胞/ml重懸浮於分析培養基(RPMI，含有10% FBS、青黴素(penicillin)/鏈黴素(streptomycin)、L-麩醯胺酸、5%人類血清及20 ng/ml之重組人類IL-2 (rhIL-2))中。將NKL細胞以7.5 × 106
個細胞/ml懸浮於分析培養基中。在分析培養基中製備抗ILT2抗體27F9、抗ILT4抗體48A5、抗ILT2/ILT4抗體73D1或Hz73D1.v1及對照同型抗體之連續稀釋物且將50 µl添加至V底96孔板之孔中。將NKL細胞(50 µl)添加至每孔中，然後添加靶細胞(50 µl)，產生1:15之靶對NK比率。將板在37℃下培養3.5小時，然後在室溫下以360 × g離心8分鐘且去除培養基。然後將細胞重懸浮於含有Sytox Blue (ThermoFisher)之1:1,000稀釋物之PBS中。Sytox Blue將對細胞膜受損之細胞染色，從而允許將活細胞與死細胞或受損細胞區分開來。藉由FACS分析細胞且基於用清潔劑透化之靶細胞之陽性對照孔之值(100%溶解)計算靶細胞殺傷%。
如圖6中所顯示，抗ILT2抗體27F9及抗ILT2/ILT4抗體73D1及Hz73D1.v1以劑量依賴性方式增強NK細胞溶解活性。Hz73D1.v1對表現HLA-G之靶細胞之EC50
值為2.4 nM，且Hz73D1.v1對表現HLA-A*0201之靶細胞之EC50
值為0.13 nM。相比之下，27F9對表現HLA-G之靶細胞之EC50
為0.064 nM。抗ILT4抗體48A5對NK細胞活性具有極小至無效應。該等結果顯示，抗ILT2抗體及抗ILT2/ILT4抗體能夠阻斷NK細胞上之ILT2與靶細胞表面上之MHC I分子之間的功能性相互作用，從而增強細胞溶解活性。此支持以下理論：抗ILT2/ILT4抗體可藉由抑制ILT2誘導之NK細胞阻抑增強腫瘤細胞之殺傷。
使用人類原代NK細胞進行類似實驗。簡言之，藉由陰性選擇自PBMC分離NK細胞，於分析培養基(RPMI，含有10% FBS、pen/strep、5%人類血清、rhIL-2 (40 ng/ml)及IL-15 (50 ng/ml))中洗滌，且以7.5 × 106
個細胞/ml重懸浮於分析培養基中。用細胞示蹤劑深紅(ThermoFisher)標記721.221-HLA-G靶細胞且以5 × 105
個細胞/ml重懸浮於分析培養基中。將靶細胞及NK細胞(各自50 µl)合併於V底板之每孔中。將抗ILT2抗體27F9、抗ILT4抗體48A5或抗ILT2/ILT4抗體47H6、73D1或64A12以1 µg/ml之最終濃度添加至孔中。將板在37℃下培養過夜，然後在室溫下以360 × g離心8分鐘且去除培養基。然後將細胞重懸浮於含有Sytox Blue (ThermoFisher)之1:1,000稀釋物之PBS中。藉由FACS分析細胞且基於用清潔劑透化之靶細胞之陽性對照孔之值(100%溶解)計算靶細胞殺傷%。
如圖7中所顯示，抗ILT2抗體27F9或抗ILT2/ILT4抗體47H6、73D1及64A12之存在增強原代NK細胞之殺傷。與本文所述之其他實驗一致，該等結果顯示，ILT2調介原代NK細胞之阻抑且此阻抑可使用抑制或阻斷ILT2/MHC I相互作用之拮抗抗體逆轉。
實施其他實驗以經由分析CD137表現評估NK細胞細胞溶解活性，CD137表現係在細胞溶解期間在NK細胞上上調之標記物。自PBMC分離NK細胞且與經轉染以表現非經典MHC-I分子HLA-G之K562細胞株一起培養。藉由活化標記物CD137之表現之FACS分析、對CD3陰性CD56陽性NK群體設門來評估NK細胞細胞溶解活性。實施CD57染色以富集已知優先表現ILT2之記憶(適應性) NK細胞(Lopez-Vergès S等人，Proc.Natl. Acad. Sci
. (2011), 108 (36) 14725-14732)。CD137在細胞溶解期間在NK細胞上上調，此提供細胞殺傷之替代度量。Hz73D1.v1或抗ILT2 (27F9)而非抗ILT4 (48A5)顯著增加CD137+群體(圖8)。此效應在CD57+記憶NK細胞群體中最顯著。該等資料表明，抗IL2/ILT4抗體能夠阻斷原代NK細胞上之ILT2與靶細胞上之MHC-I之相互作用，從而增強活化及細胞溶解活性。
為評估抗IL2/ILT4抗體對天然表現HLA-A/B/C (經典MHC-I)之靶細胞之殺傷活性，實施抗體依賴性細胞細胞毒性(ADCC)分析。自PBMC分離NK細胞且與表現高水準HLA-A、HLA-B、HLA-C及NKG2A配位體HLA-E (資料未顯示)之CAL-27鱗狀細胞癌細胞株一起培養。添加抗EGFR抗體以誘導該等EGFR+ CAL-27細胞之ADCC。CD137在細胞溶解期間在NK細胞上上調，此提供細胞殺傷之替代度量。Hz73D1.v1或抗ILT2 27F9而非抗ILT4 48A5顯著增加CD57+群體中之CD137+ NK細胞% (圖9)。相比之下，抗NKG2A抗體顯著增加CD57-而非CD57+群體中之CD137+%。兩種抗體誘導相當之活化倍數增加(Hz73D1.v1使CD137+細胞%增加1.8倍，而抗NKG2A抗體使CD137+細胞%增加2.1倍)。抗KIR2DL抗體在此分析中不顯示活性。該等資料表明，抗ILT2/ILT4抗體能夠阻斷原代NK細胞上之ILT2與靶細胞上之經典MHC-I之相互作用，從而增強NK細胞之活化及細胞溶解活性。
實例11
在MLR分析中抗ILT抗體對MDSC活性之效應
已顯示骨髓源性阻抑細胞(MDSC)在藉由阻抑抗原呈遞細胞(APC)及T細胞調控免疫反應方面至關重要。另外，已觀察到其對免疫細胞之抗腫瘤活性具有負面效應。使用混合淋巴球反應分析(MLR)研究抗ILT抗體對MDSC活性之效應。為生成MDSC樣細胞，使人類外周單核球生長於預先條件化之X-VIVO™ 15培養基(Lonza)中。預先條件化之培養基係藉由與OVISE細胞株一起培養來生成。OVISE細胞株係將大量因子分泌至其生長培養基中之卵巢透明細胞腺癌。將單核球於由50% OVISE條件化培養基及50%新鮮X-VIVO™ 15組成之培養基中培養5天；所得MDSC樣細胞稱為ovMDSC。在MLR (混合淋巴球反應)分析中與單核球源性樹突細胞(資料未顯示)相比，該等MDSC樣細胞顯示MDSC功能特徵，包括增加的Arg1及IDO以及T細胞增殖阻抑及促發炎細胞介素。作為分析之陽性對照，單核球源性樹突細胞(moDC)係藉由將人類外周單核球與GM-CSF及IL-4一起培養5天來生成。為實施MLR分析，將1 × 105
個同種異體T細胞與2.5 × 104
個ovMDSC或moDC在96孔圓底細胞培養板中共培養。細胞係在抗ILT2抗體27F9、抗ILT4抗體48A5、抗ILT2/ILT4抗體47H6或73D1或同型對照抗體(各自為10 µg/ml)存在下共培養。對照包括僅T細胞、僅moDC、moDC與T細胞(陽性MLR)、僅ovMDSC及ovMDSC與T細胞。將細胞在37℃下培育且在5天後將50 µl含有3
H-胸苷之培養基添加至每孔中。培育18小時後，自每孔收穫細胞且分析胸苷納入作為增殖之標記物，並藉由多重珠粒陣列分析上清液之細胞介素分泌。
如圖10中所顯示，與ovMDSC共培養會阻抑T細胞增殖。抗ILT4抗體48A5及抗ILT2/ILT4抗體47H6及73D1之存在使與ovMDSC一起培養之T細胞之增殖增加至等效於T細胞與moDC之MLR反應之水準。抗ILT2抗體27F9不顯示增強T細胞增殖之能力。
設置另一MLR分析，其中將1 × 105
個同種異體T細胞與2.5 × 104
個ovMDSC於96孔圓底細胞培養板中共培養。細胞係在抗ILT2抗體27F9、抗ILT4抗體48A5、抗ILT2/ILT4抗體73D1或Hz73D1.v1或對照同型抗體之連續稀釋物存在下共培養。將細胞在37℃下培育且在5天後自每孔收穫50 µl上清液以使用Luminex系統進行細胞介素分析。隨後，將50 µl含有3
H-胸苷之培養基添加至每孔中。培育18小時後，自每孔收穫細胞且分析胸苷納入。
與上文所述之結果相似，顯示抗ILT4抗體48A5及抗ILT2/ILT4抗體73D1及Hz73D1.v1會增加T細胞增殖(圖11A)。另外，確定TNF-α分泌及GM-CSF分泌在抗ILT4抗體及抗ILT2/ILT4抗體存在下以劑量依賴性方式增加(圖11B-圖11C)。如在先前實驗中，使用抗ILT2抗體未觀察到效應。
該等結果顯示，抗ILT4抗體及抗ILT2/ILT4抗體能夠抑制及/或阻斷MDSC上之ILT4與相鄰細胞(例如APC)上之MHC I分子之間之功能性相互作用，從而逆轉MDSC阻抑並增強T細胞活化。MDSC誘導之阻抑之逆轉似乎亦會增加促發炎細胞介素(例如TNF-α及GM-CSF)之分泌。
實例12
抗ILT2/4抗體對LPS介導之細胞刺激之效應
脂多糖(LPS)經由鐸樣受體2及4 (TLR2及TLR4)刺激骨髓細胞上之先天性免疫反應。為確定抗ILT2抗體及/或抗ILT4抗體是否可增強LPS介導之刺激，實施PBMC/LPS分析。簡言之，將冷凍的人類PBMC解凍，於培養基(RPMI，含有10% FBS、L-麩醯胺酸及pen/strep)中洗滌且計數。將抗ILT2抗體27F9、抗ILT4抗體48A5、抗ILT2/ILT4抗體73D1及Hz73D1.v1及對照同型抗體於培養基中連續稀釋且將50 µl添加至96孔圓底組織培養板之每孔中。以100 µl體積中之1 × 106
個細胞/ml添加PBMC且將板在37℃下培育30分鐘。將LPS添加於50 µl培養基中(最終濃度為30 ng/ml)且將板在37℃下培育2天。取出細胞上清液以使用Luminex®系統分析細胞介素。
如圖12中所顯示，抗ILT4抗體及抗ILT2/ILT4抗體之存在可以劑量依賴性方式增加GM-CSF及TNFα之產生。舉例而言，Hz73D1.v1對TNFα分泌之EC50
值為0.76 nM且對GM-CSF分泌之EC50
值為1.5 nM。抗ILT2抗體27F9及對照抗體顯示極小的GM-CSF及TNFα分泌(大約20-40 pg/ml)。該等結果顯示，PBMC培養物中骨髓細胞上之ILT4表現可強烈地阻抑由LPS誘導之促發炎細胞介素之產生，且重要的是，該阻抑可藉由抑制及/或阻斷ILT4/MHC I相互作用來逆轉。
使用食蟹猴PMBC設置相似實驗。簡言之，在培養基(RPMI，含有10% FBS、L-麩醯胺酸及pen/strep)中洗滌食蟹猴PBMC且計數。將抗ILT2/ILT4抗體Hz73D1.v1或對照抗體在培養基中連續稀釋且將50 µl添加至96孔圓底組織培養板之每孔中。以100 µl中之2 × 106
個細胞/ml添加PMBC且將板在37℃下培育30分鐘。將LPS添加於50 µl培養基中(最終濃度為50 ng/ml)且將板在37℃下培育2天。取出細胞上清液以使用Luminex®系統分析細胞介素。
與使用人類PBMC之結果相似，抗ILT2/4抗體Hz73D1.v1增強食蟹猴PBMC之GM-CSF分泌(圖13)。EC50
經測定為14 nM。該等結果顯示，抗ILT2/ILT4抗體對食蟹猴免疫細胞及人類免疫細胞具有相似的生物效應。
為進一步評估抗ILT抗體對參與阻抑對腫瘤細胞之免疫反應之細胞的效應，使用耐受原性樹突細胞(tolDC)設置LPS分析。簡言之，將經分離之人類單核球以20 ml培養基(X-VIVO™ 15培養基(Lonza)，補充有50 ng/mL重組GM-CSF及IL-4 (Peprotech)中之每一者)體積中之4 × 106
個細胞/皿平鋪至10 cm組織培養皿上。將單核球在37℃下培育5-7天且然後收穫細胞。對於分析，將活體外生成之DC以6 × 105
個細胞/ml之濃度懸浮於含有Fc Block (Biolegend)之1:50稀釋物之新鮮培養基中。將DC以50 µl/孔接種於96孔組織培養板中且以50 µl/孔之連續稀釋物添加抗ILT4抗體48A5、抗ILT2/ILT4抗體Hz73D1.v1或對照抗體。將LPS (6 µg/ml最終濃度)與多種耐受化劑中之一者一起添加於50 µl培養基體積中。耐受化劑包括：分別為100 nM及10 nM之維生素D3/地塞米松(vitamin D3/dexamethasone，VitD3/Dex)、750 ng/ml之環孢素A、100 ng/ml之雷帕黴素(rapamycin)、1 µg/ml之前列腺素E2 (PGE2)、20 ng/ml之IL-6、20 ng/ml之IL-10或20 ng/ml之TGFα。將板在37℃下培育2天且收穫上清液以使用Luminex®系統分析。
如圖14中所顯示，抗ILT4抗體及抗ILT2/ILT4抗體以劑量依賴性方式增強LPS介導之細胞介素(例如TNFα)分泌。在LPS及其他耐受化劑存在下Hz73D1.v1誘導之TNFa分泌之EC50值顯示於表17中。相比之下，經對照抗體及抗ILT2抗體處理之tolDC中之TNF-α未增加(資料未顯示)。該等資料顯示，存在於患者腫瘤內之tolDC因存在抑制或阻斷ILT4及MHC I分子相互作用之抗ILT4抗體及/或抗ILT2/ILT4抗體將對再活化有反應。
表17
實例13
抗ILT抗體對PBMC之HMGB1、STING及/或抗CD3刺激之效應
| 處理 | VitD3/Dex | PGE2 | IL-10 | 環孢素 | 雷帕黴素 | IL-6 | TGFβ |
| EC50 (nM) | 0.40 | 0.44 | 1.2 | 0.20 | 0.15 | 0.14 | 0.10 |
高速泳動群蛋白B1 (HMGB1)係可自細胞釋放且結合至TLR之核蛋白。已顯示HMGB1以高濃度存在於壞死腫瘤組織中，從而提供腫瘤浸潤DC、單核球及巨噬細胞之先天性刺激之潛在來源(參見例如Guerriero等人，2011,J. Immunol.
, 186:3517-3526)。設計實驗以確定抗ILT抗體是否可增強經HMGB1處理之PBMC之促發炎細胞介素分泌。簡言之，將抗ILT2抗體27F9、抗ILT4抗體48A5、抗ILT2/ILT4抗體47H6、73D1及64A12及對照同型抗體在培養基中連續稀釋且將50 µl添加至96孔圓底組織培養板之每孔中。以100 µl體積中之1 × 106
個細胞/ml添加PBMC且將板在37℃下培育30分鐘。以2.5 µg/ml之濃度(預期存在於腫瘤微環境中之濃度)添加重組HMGB1 (Biolegend)且將板在37℃下培育2天。取出細胞上清液以使用Luminex®系統分析細胞介素。
如圖15中所顯示，抗ILT4抗體48A5及抗ILT2/ILT4抗體47H6、73D1及64A12增強TNF-α之分泌。該等資料顯示，抗ILT4抗體及抗ILT2/ILT4抗體將增強腫瘤內浸潤單核球之促發炎功能。
類似地，來自放射療法之腫瘤細胞壞死及/或腫瘤細胞死亡引起核DNA釋放。游離核DNA可經由STING (干擾素基因之刺激劑)信號傳導引起骨髓細胞刺激。設計實驗以確定抗ILT抗體是否可增強經STING促效劑處理之PBMC之發炎性細胞介素產生。簡言之，將PBMC平鋪於96孔圓底組織培養板中且添加抗ILT2抗體27F9、抗ILT4抗體48A5及對照同型抗體。培育30分鐘後，以10 µg/ml之濃度(預期存在於壞死腫瘤微環境中之濃度)添加STING促效劑2'3'-cGAMP (Invivogen)。將細胞培育兩天且使用Luminex®系統分析上清液。
如圖16中所顯示，例示性抗ILT4抗體48A5增強IFNγ、TNF-α及IL-1β之分泌。該等資料顯示，抗ILT4抗體及抗ILT2/ILT4抗體將增強腫瘤浸潤單核球之促發炎功能。
除阻抑先天性免疫活化劑外，ILT2或ILT4可在阻抑T細胞介導之骨髓細胞刺激方面起作用。為評估T細胞之骨髓細胞刺激，用抗CD3抗體及重組IL-2活化PBMC。簡言之，將抗ILT2抗體27F9、抗ILT4抗體48A5、抗ILT2/ILT4抗體47H6及64A12及對照同型抗體在培養基中連續稀釋且將50 µl添加至96孔圓底組織培養板之每孔中。以100 µl體積中之1 × 106
個細胞/ml添加PBMC且將板在37℃下培育30分鐘。以10 ng/ml之濃度添加抗CD3抗體純系HIT3a (eBioscience)且以100 U/ml之濃度添加重組IL-2 (Peprotech)。將細胞培育兩天且使用Luminex®系統分析上清液。
如圖17中所顯示，抗ILT4抗體48A5及抗ILT2/ILT4抗體47H6及64A12以劑量依賴性方式增強TNF-α分泌。抗ILT2抗體27F9不具任何細胞介素產生效應。該等資料顯示，ILT4阻斷會增強源自活化T細胞與骨髓細胞之間之相互作用之免疫反應(即促發炎細胞介素分泌)。
實例14
抗ILT抗體對巨噬細胞吞噬作用之效應
實施吞噬作用分析以進一步表徵抗ILT2抗體、抗ILT4抗體及抗ILT2/ILT4抗體對巨噬細胞功能之效應。藉由將經分離單核球在37℃下在12孔組織培養板中在含有50 ng/ml重組M-CSF (Peprotech)之培養基(RPMI，含有10% FBS、L-麩醯胺酸及pen/strep)中培養5天來生成巨噬細胞。用細胞刮刀自板取出巨噬細胞且以20,000個細胞/孔平鋪於96孔平底組織培養板中之100 µl培養基中。將巨噬細胞在37℃下培育過夜。第二天，將抗體以2.5 µg/ml之濃度與2.5 µg/ml之抗CD47抗體一起添加至巨噬細胞中以誘導抗體依賴性吞噬作用。用pH Rodo Red染料(Essen Bioscience)之1:4,000稀釋物將Raji細胞染色1小時，在培養基中洗滌且以50,000個細胞/孔添加至巨噬細胞中。在Incucyte機器上以45分鐘間隔藉由平均紅色螢光量測吞噬作用。在峰值反應時間點(3小時)下比較測試抗體與同型對照抗體。
如圖18中所顯示，抗ILT2/ILT4抗體(例如Hz73D1.v1)及抗ILT2抗體(例如27F9)增強巨噬細胞對經抗CD47抗體調理之Raji腫瘤細胞之吞噬活性。抗ILT4抗體(例如48A5)對巨噬細胞之吞噬作用不具效應。為控制Raji細胞之ILT2表現，使用抗體24E7，其係無法阻斷MHC-I相互作用之ILT2結合劑。該等資料顯示，抗ILT2抗體及抗ILT2/ILT4抗體能夠藉由阻斷巨噬細胞ILT2與腫瘤細胞上之MHC-I之相互作用並抑制ILT-2誘導之巨噬細胞阻抑來增強巨噬細胞吞噬作用，由此增加巨噬細胞對腫瘤之吞噬作用。儘管ILT4在巨噬細胞上表現，但抗ILT2抗體及抗ILT2/ILT4抗體之此活性對阻斷ILT2/MHC-I相互作用而非ILT4/MHC-1相互作用具有特異性。
實例15
抗ILT抗體對樹突細胞之效應
認為ILT2及/或ILT4充當骨髓細胞活化之阻抑劑且抑制或阻斷ILT2及/或ILT4將抑制ILT2及/或ILT4誘導之阻抑。
骨髓細胞之活化可藉由交聯細胞表面上之Fc受體(FcR)來達成且交聯引起細胞介素產生；此用作骨髓細胞活化分析之基礎。如本文所述生成樹突細胞。簡言之，將經分離之人類單核球以20 ml補充有50 ng/mL重組GM-CSF及IL-4 (Peprotech)中之每一者之培養基(Lonza)體積中之4 × 106
個細胞/皿平鋪於10 cm組織培養皿上。將單核球在37℃下培育5-7天且收穫所得樹突細胞。用抗KLH抗體(5 µg/mL)包被Maxisorp 96孔ELISA板且在4℃下培育過夜。抗KLH抗體含有能夠結合樹突細胞上之Fc受體之Fc結構域。將板洗滌且用X-VIVO™ 15培養基封閉1小時。以7 × 104
個細胞/孔添加樹突細胞。以連續稀釋物添加抗ILT2抗體27F9、抗ILT4抗體48A5、抗體27F9及48A5之組合、抗ILT2/ILT4抗體Hz73D1.v1或對照抗體且將板在37℃下培育2天。收集上清液且使用Luminex®系統分析TNF-α分泌。
如圖19中所顯示，抗ILT2抗體27F9及抗ILT4抗體48A5之組合及抗ILT2/ILT4抗體73D1以劑量依賴性方式增強樹突細胞之TNF-α分泌。作為單一劑之抗ILT2抗體27F9及作為單一劑之抗ILT4抗體48H6對增加細胞介素產生僅具有較小效應。因此，抗ILT2抗體27F9與抗ILT4抗體48A5之組合之細胞介素分泌之強烈增加係令人驚訝的。雙重結合抗ILT2/ILT4抗體Hz73D1.v1反映了此反應。該等資料顯示，ILT2及ILT4二者抑制Fc受體介導之樹突細胞活化且該等效應並非冗餘的。該等資料顯示，用靶向ILT2及ILT4二者之劑(即雙重結合抗ILT2/ILT4抗體)抑制樹突細胞之阻抑可產生遠優於使用單特異性抗體之療法之治療效應。
實例16
抗ILT抗體對人類及食蟹猴血球之細胞介素分泌之效應
為研究與細胞介素釋放相關之毒性(即「細胞介素風暴」)之潛能，將各種抗體與人類或食蟹猴血球一起培養且分析細胞介素產生。簡言之，將抗體以10 µg/ml添加至96孔平底板中且在室溫下振蕩1小時。所測試抗體包括抗ILT4抗體48A5、抗ILT2/ILT4抗體47H6、73D1及Hz73D1.v1、超級促效劑抗CD28抗體純系5D10 (Ancell)、多株抗ILT2抗體(R&D Systems)、多株抗ILT4抗體(R&D Systems)、抗LILRA1抗體(R&D Systems)、抗CD3抗體及對照抗體。將板洗滌且在振蕩的同時用培養基(RPMI，含有10% FBS、L-麩醯胺酸及pen/strep)封閉1小時。自健康人類供體及食蟹猴獲得血液。藉由溶解於RBC溶解緩衝液(eBioscience)中、然後離心自血液去除紅血球，且用培養基洗滌剩餘細胞。向每孔中添加5 × 105
個細胞，且將LPS添加至重複孔中作為陽性對照，並將板在37℃下培育24小時。收集上清液且使用Luminex®系統分析細胞介素分泌。
如圖20中所顯示，將人類血球與可溶性LPS或包被板之抗CD28抗體一起培育誘導許多細胞介素之顯著增加，該等細胞介素包括TNF-α、GM-CSF、MIP-1α、IL-6、IL-1β及IL-10。相比之下，多株抗ILT2抗體、多株抗ILT4抗體、抗LILRA1抗體、抗ILT4抗體48A5及抗ILT2/ILT4抗體73D1及Hz73D1.v1無法誘導高於來自人類血球之同型對照抗體之細胞介素水準。如圖21中所顯示，將食蟹猴血球與可溶性LPS一起培育誘導細胞介素(例如TNF-α、IL-1β、MIP-1α、IL-6及MIP-1β)之顯著增加。與人類血球分析相似，多株抗ILT2抗體、多株抗ILT4抗體、抗LILRA1抗體、抗CD3抗體及抗ILT2/ILT4抗體47H6、73D1及Hz73D1.v1無法誘導高於使用來自食蟹猴血球之同型對照抗體觀察到之細胞介素水準的細胞介素水準。該等資料顯示，抗ILT2抗體、ILT-4抗體及抗ILT2/ILT4抗體產生毒性免疫反應(例如細胞介素風暴)之潛能較低。
實施另一活體外細胞介素釋放分析來評估抗ILT2/ILT4抗體誘導促發炎細胞介素IL-2、TNF-α、IL-6及IFN-γ之能力。使用10個健康供體之全血樣品。比較抗ILT2/ILT4抗體與多種陽性及陰性對照。使用抗KLH同型對照抗體作為陰性對照。使用超級促效劑抗CD28抗體(純系ANC28.1)作為陽性對照(Walker 2011)。另外，使用葡萄球菌腸毒素B (SEB)作為可溶性抗體培養物之陽性對照。使用兩種分析格式。在第一格式中，將細胞與遞增濃度之抗體(Hz73D1.v1、同型對照抗體或抗CD28抗體)或SEB一起培養。在0.1 µg/ml、1 µg/ml、10 µg/ml及100 µg/ml下測試抗體。在0.01 µg/ml、0.1 µg/ml及1 µg/ml下測試SEB。在第二格式中，將96孔組織培養板與抗體在4℃下一起預培育過夜，洗滌且然後添加細胞並培養。然後收集細胞培養物上清液並藉由細胞計數珠粒陣列分析測試細胞介素水準。
在第一分析格式中，SEB在1 µg/mL下誘導高水準之所評估之所有細胞介素(IL-2、IL-6、TNFα及IFNγ)，且所有10個供體之細胞介素水準高於同型對照。可溶性抗CD28抗體在100 µg/mL下誘導高於同型對照之IL-6、TNFα及IFNγ之細胞介素水準。使用Hz73D1.v1之中值與同型對照相當(表18)。在第二分析格式中，包被板之抗CD28 (100 µg/ml)之陽性對照在10個供體中之5個中誘導IL-6。相比之下，包被板之Hz73D1.v1未將4种細胞介素中之任一者誘導至高於同型對照之水準(表19)。
表18
表19
實例17
抗ILT抗體對T細胞活性之效應
| 抗CD28 (μg/mL) | SEB (μg/mL) | 同型(μg/mL) | Hz73D1.v1 (μg/mL) | |||||
| 10 | 100 | 0.1 | 1 | 10 | 100 | 10 | 100 | |
| IL-6 | 1115 | 8934 | 571 | 1422 | 7 | 5 | 3 | 6 |
| IL-2 | 44 | 48 | 1309 | 3418 | 19 | 21 | 17 | 20 |
| TNFα | 52 | 605 | 614 | 1452 | 4 | 7 | 6 | 10 |
| IFNγ | 35 | 343 | 208 | 704 | 5 | 6 | 5 | 5 |
| 抗CD28 (μg/mL) | 同型(μg/mL) | Hz73D1.v1 (μg/mL) | ||||
| 10 | 100 | 10 | 100 | 10 | 100 | |
| IL-6 | 17 | 93 | 10 | 9 | 9 | 7 |
| IL-2 | 33 | 45 | 40 | 38 | 28 | 32 |
| TNFα | 18 | 26 | 17 | 19 | 16 | 12 |
| IFNγ | 12 | 21 | 13 | 13 | 12 | 14 |
已知ILT2表現在效應記憶CD45RA+ CD8+ T細胞(CD8+ TEMRA
細胞)之群體上富集(Gustafson 2017)。此群體僅係健康供體中CD8+ T細胞之一小部分，此使得大量CD8+ T細胞細胞殺傷分析具有挑戰性。因此，為表徵ILT2+ CD8 T細胞之細胞溶解活性，用ILT2轉導原代CD8+ T細胞且在活體外擴增以生成足夠數量之ILT2+ CD8+ T細胞。然後在CD8+ T細胞殺傷分析中使用經螢光標記之721.221-HLA-G靶細胞評估細胞溶解活性。簡言之，將冷凍的PBMC解凍，於培養基(RPMI，含有10% FBS、L-麩醯胺酸及pen/strep)中洗滌且使用CD8+ T細胞陽性選擇套組分離CD8+ T細胞。在基礎培養基(Xvivo15培養基，含有10 mM HEPES、2 mM麩醯胺酸、pen/strep及5%正常人類血清)中培養經分離之CD8+ T細胞且在37℃下用CD3/28珠粒刺激24小時，每100萬個細胞添加5 µl珠粒。然後收穫活化T細胞(2 × 105
)且在聚凝胺存在下以1 × 107
PFU/ml之病毒濃度重懸浮於1 ml表現人類ILT2之慢病毒中來感染細胞。然後將經感染細胞重懸浮於T細胞培養基(基礎培養基，補充有5 ng/ml IL-7、5 ng/ml IL-15及25 ng/ml IL-2)中且允許擴增兩週。然後針對ILT2+群體對細胞進行FACS分選且再擴增6週以生成足量細胞用於研究。為評估細胞溶解活性，將2.5 × 104
個經細胞示蹤劑深紅標記之721.221-HLAG細胞與2.5 × 105
個ILT2轉導之CD8+ T細胞(10:1 T細胞:靶比率)及0.1 µg/ml抗CD3/CD19雙特異性抗體在RPMI-10% FBS培養基中混合。將抗ILT抗體或對照抗體以10 µg/ml之濃度添加至細胞中且培育18小時。藉由FACS分析靶細胞且將靶細胞殺傷%計算為死靶細胞數除以靶細胞總數。
如圖22中所顯示，抗ILT2/ILT4抗體(例如Hz73D1.v1)及抗ILT2抗體(例如27F9)而非抗ILT4抗體(例如48A5)增強CD8+ T細胞對721.221-HLA-G靶細胞之細胞溶解活性。該等資料顯示，抗ILT2抗體及抗ILT2/ILT4抗體藉由阻斷CD8+ T細胞ILT2與靶細胞上之MHC-I之相互作用來增強CD8+ T細胞細胞溶解活性。因此，抗ILT2抗體及抗ILT2/ILT4抗體破壞細胞溶解淋巴球、尤其已知參與抗腫瘤細胞殺傷之效應記憶T細胞上之ILT2之免疫阻抑活性。
實例18
抗ILT2/ILT4抗體及抗PD1抗體對T細胞活性之協同效應
開發出混合白血球反應分析以評估抗ILT2/ILT4抗體與抗PD1抗體(派姆單抗)之組合之潛在協同或加和效應。生成單核球源性巨噬細胞且與11個不同供體之同種異體CD4+ T細胞以及同型對照、Hz73D1.v1、派姆單抗或Hz73D1.v1及派姆單抗之組合一起培養。簡言之，藉由將100,000個單核球/孔與50 ng/ml重組M-CSF一起培養6天生成單核球源性巨噬細胞。在第6天時，一起添加經純化之同種異體CD4+ T細胞(200,000/孔)與1 µg/ml抗KLH同型對照、1 µg/ml派姆單抗、1 µg/ml Hz73D1.v1或抗PD1及Hz73D1.v1之組合(各自1 µg/ml)。將細胞再培養6天且收集上清液用於分泌的細胞介素(IFN-γ、TNF-α及GM-CSF)之多重珠粒陣列分析。
如圖23A-圖23C中所顯示，單獨抗ILT2/ILT4抗體或派姆單抗通常誘導培養物中＜2 ng/ml之干擾素γ，且11個供體中之3個誘導＞2 ng/ml之干擾素γ。相比之下，抗ILT2/ILT4抗體及派姆單抗之組合在11個CD4+ T細胞供體對中之7個中誘導＞2 ng/ml之干擾素γ，且與該7個供體對中之每一單獨試劑相比具有大於加和之反應。使用GM-CSF及TNF-α分泌觀察到相似的反應。該等資料顯示，抗ILT2/ILT4抗體及派姆單抗一起對同種異體CD4+ T細胞誘導之細胞介素分泌具有協同效應，可能經由抗ILT2/ILT4抗體介導之巨噬細胞APC活性刺激及派姆單抗釋放CD4+ T細胞檢查點抑制的組合來實現。總之，單獨抗ILT2/ILT4抗體或抗PD-1抗體適度增強T細胞活化及細胞介素分泌增加。抗ILT2/ILT4抗體或抗PD-1抗體之組合使得T細胞活化及細胞介素分泌協同增加。
實例19
抗ILT2/ILT4抗體誘導單核球源性巨噬細胞之M2樣至M1樣極化
基於表面表現標記物CD80、CD86 (M1)、CD163、CD204及CD206 (M2)，巨噬細胞傳統上表徵為促發炎(M1)或免疫阻抑(M2)。評估抗IL2/ILT4抗體以及抗IL2抗體及抗ILT4抗體使巨噬細胞向M1樣或M2樣表型極化之能力。
藉由將單核球在37℃下在48孔組織培養板中在含有Hz73D1.v1、27F9、48A5或同型對照抗體(1 ug/ml)及50 ng/ml重組M-CSF (Peprotech)之培養基(RPMI，含有10% FBS、L-麩醯胺酸及pen/strep)中培養5天來生成巨噬細胞。在第5天時，藉由流式細胞術分析樣品之指示M1樣或M2樣表型之各種表面標記物。
如圖24中所顯示，Hz73D1.v1誘導M2樣巨噬細胞表型標記物CD163、CD204及CD206及其他M2樣標記物CD14及CD209之減少，此與在分化期間單核球之M2樣至M1樣極化一致。抗ILT4特異性抗體48A5而非抗ILT2特異性抗體27F9誘導M1樣標記物CD86之增加及M2樣標記物CD163、CD204及CD206及其他M2樣標記物CD14、CD209及CCR5之減少，此與使用ILT4阻斷之M2樣至M1樣極化一致。總體上，該等資料展示，抗ILT2/ILT4抗體在巨噬細胞分化期間誘導更加促發炎之M1樣表型，且此反應係藉由抑制ILT4與MHC-I之相互作用來調介。
儘管已出於清楚理解之目的藉由說明及實例方式一定詳細地闡述了前述本揭示案，但該等描述及實例不應解釋為限制本揭示案之範圍。本文所述之本揭示案之實施例意欲僅具有例示性，且熟習此項技術者將認識到本文所述之特定程序之許多等效物。所有此類等效物視為在本揭示案之範圍內且由實施例覆蓋。
本文引用之所有出版物、專利、專利申請案、網際網路網站及包括多核苷酸及多肽序列二者之登錄號/資料庫序列的全文出於所有目的皆以引用方式併入本文中，其併入程度如同每個個別出版物、專利、專利申請案、網際網路網站或登錄號/資料庫序列具體地且單獨地指示以引用方式併入一般。
下文係本申請案中所揭示之序列。CDR序列列於表1-8中。
經預測信號序列加下劃線之人類ILT2胺基酸序列(SEQ ID NO:1)MTPILTVLICLGLSLGPRTHVQA
GHLPKPTLWAEPGSVITQGSPVTLRCQGGQETQEYRL
YREKKTALWITRIPQELVKKGQFPIPSITWEHAGRYRCYYGSDTAGRSESSDPLELVVTG
AYIKPTLSAQPSPVVNSGGNVILQCDSQVAFDGFSLCKEGEDEHPQCLNSQPHARGSSRA
IFSVGPVSPSRRWWYRCYAYDSNSPYEWSLPSDLLELLVLGVSKKPSLSVQPGPIVAPEE
TLTLQCGSDAGYNRFVLYKDGERDFLQLAGAQPQAGLSQANFTLGPVSRSYGGQYRCYGA
HNLSSEWSAPSDPLDILIAGQFYDRVSLSVQPGPTVASGENVTLLCQSQGWMQTFLLTKE
GAADDPWRLRSTYQSQKYQAEFPMGPVTSAHAGTYRCYGSQSSKPYLLTHPSDPLELVVS
GPSGGPSSPTTGPTSTSGPEDQPLTPTGSDPQSGLGRHLGVVIGILVAVILLLLLLLLLF
LILRHRRQGKHWTSTQRKADFQHPAGAVGPEPTDRGLQWRSSPAADAQEENLYAAVKHTQ
PEDGVEMDTRSPHDEDPQAVTYAEVKHSRPRREMASPPSPLSGEFLDTKDRQAEEDRQMD
TEAAASEAPQDVTYAQLHSLTLRREATEPPPSQEGPSPAVPSIYATLAIH
不含經預測信號序列之人類ILT2胺基酸序列(SEQ ID NO:2)
GHLPKPTLWAEPGSVITQGSPVTLRCQGGQETQEYRLYREKKTALWITRIPQELVKKGQF
PIPSITWEHAGRYRCYYGSDTAGRSESSDPLELVVTGAYIKPTLSAQPSPVVNSGGNVIL
QCDSQVAFDGFSLCKEGEDEHPQCLNSQPHARGSSRAIFSVGPVSPSRRWWYRCYAYDSN
SPYEWSLPSDLLELLVLGVSKKPSLSVQPGPIVAPEETLTLQCGSDAGYNRFVLYKDGER
DFLQLAGAQPQAGLSQANFTLGPVSRSYGGQYRCYGAHNLSSEWSAPSDPLDILIAGQFY
DRVSLSVQPGPTVASGENVTLLCQSQGWMQTFLLTKEGAADDPWRLRSTYQSQKYQAEFP
MGPVTSAHAGTYRCYGSQSSKPYLLTHPSDPLELVVSGPSGGPSSPTTGPTSTSGPEDQP
LTPTGSDPQSGLGRHLGVVIGILVAVILLLLLLLLLFLILRHRRQGKHWTSTQRKADFQH
PAGAVGPEPTDRGLQWRSSPAADAQEENLYAAVKHTQPEDGVEMDTRSPHDEDPQAVTYA
EVKHSRPRREMASPPSPLSGEFLDTKDRQAEEDRQMDTEAAASEAPQDVTYAQLHSLTLRREA
TEPPPSQEGPSPAVPSIYATLAIH
人類ILT2細胞外結構域(aa 24-461) (SEQ ID NO:3)
GHLPKPTLWAEPGSVITQGSPVTLRCQGGQETQEYRLYREKKTALWITRIPQELVKKGQF
PIPSITWEHAGRYRCYYGSDTAGRSESSDPLELVVTGAYIKPTLSAQPSPVVNSGGNVIL
QCDSQVAFDGFSLCKEGEDEHPQCLNSQPHARGSSRAIFSVGPVSPSRRWWYRCYAYDSN
SPYEWSLPSDLLELLVLGVSKKPSLSVQPGPIVAPEETLTLQCGSDAGYNRFVLYKDGER
DFLQLAGAQPQAGLSQANFTLGPVSRSYGGQYRCYGAHNLSSEWSAPSDPLDILIAGQFY
DRVSLSVQPGPTVASGENVTLLCQSQGWMQTFLLTKEGAADDPWRLRSTYQSQKYQAEFP
MGPVTSAHAGTYRCYGSQSSKPYLLTHPSDPLELVVSGPSGGPSSPTTGPTSTSGPEDQP
LTPTGSDPQSGLGRHLGV
人類ILT2 Ig樣C2型結構域1胺基酸序列(aa 27-115) (SEQ ID NO:4)
PKPTLWAEPGSVITQGSPVTLRCQGGQETQEYRLYREKKTALWITRIPQELVKKGQFPIP
SITWEHAGRYRCYYGSDTAGRSESSDPLE
人類ILT2 Ig樣C2型結構域2胺基酸序列(aa 116-221) (SEQ ID NO:5)
LVVTGAYIKPTLSAQPSPVVNSGGNVILQCDSQVAFDGFSLCKEGEDEHPQCLNSQPHAR
GSSRAIFSVGPVSPSRRWWYRCYAYDSNSPYEWSLPSDLLELLVLG
人類ILT2 Ig樣C2型結構域3胺基酸序列(aa 222-312) (SEQ ID NO:6)
VSKKPSLSVQPGPIVAPEETLTLQCGSDAGYNRFVLYKDGERDFLQLAGAQPQAGLSQAN
FTLGPVSRSYGGQYRCYGAHNLSSEWSAPSD
人類ILT2 Ig樣C2型結構域4胺基酸序列(aa 313-409) (SEQ ID NO:7)
PLDILIAGQFYDRVSLSVQPGPTVASGENVTLLCQSQGWMQTFLLTKEGAADDPWRLRST
YQSQKYQAEFPMGPVTSAHAGTYRCYGSQSSKPYLLT
經預測信號序列加下劃線之人類ILT4胺基酸序列(SEQ ID NO:8)MTPIVTVLICLGLSLGPRTHV
QTGTIPKPTLWAEPDSVITQGSPVTLSCQGSLEAQEYRL
YREKKSASWITRIRPELVKNGQFHIPSITWEHTGRYGCQYYSRARWSELSDPLVLVMTGA
YPKPTLSAQPSPVVTSGGRVTLQCESQVAFGGFILCKEGEEEHPQCLNSQPHARGSSRAI
FSVGPVSPNRRWSHRCYGYDLNSPYVWSSPSDLLELLVPGVSKKPSLSVQPGPVVAPGES
LTLQCVSDVGYDRFVLYKEGERDLRQLPGRQPQAGLSQANFTLGPVSRSYGGQYRCYGAH
NLSSECSAPSDPLDILITGQIRGTPFISVQPGPTVASGENVTLLCQSWRQFHTFLLTKAG
AADAPLRLRSIHEYPKYQAEFPMSPVTSAHAGTYRCYGSLNSDPYLLSHPSEPLELVVSG
PSMGSSPPPTGPISTPAGPEDQPLTPTGSDPQSGLGRHLGVVIGILVAVVLLLLLLLLLF
LILRHRRQGKHWTSTQRKADFQHPAGAVGPEPTDRGLQWRSSPAADAQEENLYAAVKDTQ
PEDGVEMDTRAAASEAPQDVTYAQLHSLTLRRKATEPPPSQEREPPAEPSIYATLAIH
不含經預測信號序列之人類ILT4胺基酸序列(SEQ ID NO:9)
QTGTIPKPTLWAEPDSVITQGSPVTLSCQGSLEAQEYRLYREKKSASWITRIRPELVKNG
QFHIPSITWEHTGRYGCQYYSRARWSELSDPLVLVMTGAYPKPTLSAQPSPVVTSGGRVT
LQCESQVAFGGFILCKEGEEEHPQCLNSQPHARGSSRAIFSVGPVSPNRRWSHRCYGYDL
NSPYVWSSPSDLLELLVPGVSKKPSLSVQPGPVVAPGESLTLQCVSDVGYDRFVLYKEGE
RDLRQLPGRQPQAGLSQANFTLGPVSRSYGGQYRCYGAHNLSSECSAPSDPLDILITGQI
RGTPFISVQPGPTVASGENVTLLCQSWRQFHTFLLTKAGAADAPLRLRSIHEYPKYQAEF
PMSPVTSAHAGTYRCYGSLNSDPYLLSHPSEPLELVVSGPSMGSSPPPTGPISTPAGPED
QPLTPTGSDPQSGLGRHLGVVIGILVAVVLLLLLLLLLFLILRHRRQGKHWTSTQRKADF
QHPAGAVGPEPTDRGLQWRSSPAADAQEENLYAAVKDTQPEDGVEMDTRAAASEAPQDVT
YAQLHSLTLRRKATEPPPSQEREPPAEPSIYATLAIH
人類ILT4細胞外結構域(aa 22-461) (SEQ ID NO:10)
QTGTIPKPTLWAEPDSVITQGSPVTLSCQGSLEAQEYRLYREKKSASWITRIRPELVKNG
QFHIPSITWEHTGRYGCQYYSRARWSELSDPLVLVMTGAYPKPTLSAQPSPVVTSGGRVT
LQCESQVAFGGFILCKEGEEEHPQCLNSQPHARGSSRAIFSVGPVSPNRRWSHRCYGYDL
NSPYVWSSPSDLLELLVPGVSKKPSLSVQPGPVVAPGESLTLQCVSDVGYDRFVLYKEGE
RDLRQLPGRQPQAGLSQANFTLGPVSRSYGGQYRCYGAHNLSSECSAPSDPLDILITGQI
RGTPFISVQPGPTVASGENVTLLCQSWRQFHTFLLTKAGAADAPLRLRSIHEYPKYQAEF
PMSPVTSAHAGTYRCYGSLNSDPYLLSHPSEPLELVVSGPSMGSSPPPTGPISTPAGPED
QPLTPTGSDPQSGLGRHLGV
人類ILT4 Ig樣C2型結構域1胺基酸序列(aa 27-110) (SEQ ID NO:11)
PKPTLWAEPDSVITQGSPVTLSCQGSLEAQEYRLYREKKSASWITRIRPELVKNGQFHIP
SITWEHTGRYGCQYYSRARWSELS
人類ILT4 Ig樣C2型結構域2胺基酸序列(aa 111-229) (SEQ ID NO:12)
DPLVLVMTGAYPKPTLSAQPSPVVTSGGRVTLQCESQVAFGGFILCKEGEEEHPQCLNSQ
PHARGSSRAIFSVGPVSPNRRWSHRCYGYDLNSPYVWSSPSDLLELLVPGVSKKPSLSV
人類ILT4 Ig樣C2型結構域3胺基酸序列(aa 230-318) (SEQ ID NO:13)
QPGPVVAPGESLTLQCVSDVGYDRFVLYKEGERDLRQLPGRQPQAGLSQANFTLGPVSRS
YGGQYRCYGAHNLSSECSAPSDPLDILIT
人類ILT4 Ig樣C2型結構域4胺基酸序列(aa 330-419) (SEQ ID NO:14)
QPGPTVASGENVTLLCQSWRQFHTFLLTKAGAADAPLRLRSIHEYPKYQAEFPMSPVTSA
HAGTYRCYGSLNSDPYLLSHPSEPLELVVS
經預測信號序列加下劃線之恆河猴ILT2胺基酸序列(SEQ ID NO:15)MTPILMVLICLGLSLGSRTRVQA
GTFPKPTLWAEPGSMISKGSPVTLRCQGSLPVQDYRL
QREKKTASWVRRIQQELVKKGYFPIASITSEHAGQYRCQYYSHSWWSEPSDPLELVVTGA
YSKPTLSALPSPVVASGGNVTLQCDSQVAXGGFVLCKEGEDEHPQCLNSQPHTRGSSRAV
FSVGPVSPSRRWSYRCYGYDSRSPYVWSLPSDLLELLVPGVSKKPSLSVQPGPVVAPGDK
LTLQCGSDAGYNRFALYKEGERDFLQRPGRQPQAGLSQANFLLDPVRRSHGGQYRCSGAH
NLSSEWSAPSDPLDILIAGQIRGRPSLLVQPGPTVVSGENVTLLCQSSWQFHVFLLTQAG
AADAHLHLRSMYKYPKYQAEFPMSPVTSAHAGTYRCYGSHSSDSYLLSIPSDPLELVVSG
PSGGPSSPTTGPTSTCGPEDQPLTPTGSDPQSGLGRHLGVVTGVLVAFVLLLFLLLLLFL
VLRHRRQGKRWTSAQRKADFQHPAGAVEPEPRDRGLQRRSSPAANTQEENLYAAVKDTQP
EDGVELDSRSPHDEDPQAVTYARVKHSRPRREMASPPSPLSEEFLDTKDTQAAASEDPQD
VTYAQLQSLTLRRETTEPPPSQEREPPVESSIYATLTIH
不含經預測信號序列之恆河猴ILT2胺基酸序列(SEQ ID NO:16)
GTFPKPTLWAEPGSMISKGSPVTLRCQGSLPVQDYRLQREKKTASWVRRIQQELVKKGYF
PIASITSEHAGQYRCQYYSHSWWSEPSDPLELVVTGAYSKPTLSALPSPVVASGGNVTLQ
CDSQVAXGGFVLCKEGEDEHPQCLNSQPHTRGSSRAVFSVGPVSPSRRWSYRCYGYDSRS
PYVWSLPSDLLELLVPGVSKKPSLSVQPGPVVAPGDKLTLQCGSDAGYNRFALYKEGERD
FLQRPGRQPQAGLSQANFLLDPVRRSHGGQYRCSGAHNLSSEWSAPSDPLDILIAGQIRG
RPSLLVQPGPTVVSGENVTLLCQSSWQFHVFLLTQAGAADAHLHLRSMYKYPKYQAEFPM
SPVTSAHAGTYRCYGSHSSDSYLLSIPSDPLELVVSGPSGGPSSPTTGPTSTCGPEDQPL
TPTGSDPQSGLGRHLGVVTGVLVAFVLLLFLLLLLFLVLRHRRQGKRWTSAQRKADFQHP
AGAVEPEPRDRGLQRRSSPAANTQEENLYAAVKDTQPEDGVELDSRSPHDEDPQAVTYAR
VKHSRPRREMASPPSPLSEEFLDTKDTQAAASEDPQDVTYAQLQSLTLRRETTEPPPSQE
REPPVESSIYATLTIH
恆河猴ILT2細胞外結構域(aa 24-460) (SEQ ID NO:17)
GTFPKPTLWAEPGSMISKGSPVTLRCQGSLPVQDYRLQREKKTASWVRRIQQELVKKGYF
PIASITSEHAGQYRCQYYSHSWWSEPSDPLELVVTGAYSKPTLSALPSPVVASGGNVTLQ
CDSQVAXGGFVLCKEGEDEHPQCLNSQPHTRGSSRAVFSVGPVSPSRRWSYRCYGYDSRS
PYVWSLPSDLLELLVPGVSKKPSLSVQPGPVVAPGDKLTLQCGSDAGYNRFALYKEGERD
FLQRPGRQPQAGLSQANFLLDPVRRSHGGQYRCSGAHNLSSEWSAPSDPLDILIAGQIRG
RPSLLVQPGPTVVSGENVTLLCQSSWQFHVFLLTQAGAADAHLHLRSMYKYPKYQAEFPM
SPVTSAHAGTYRCYGSHSSDSYLLSIPSDPLELVVSGPSGGPSSPTTGPTSTCGPEDQPL
TPTGSDPQSGLGRHLGV
恆河猴ILT2 Ig樣C2型結構域1胺基酸序列(aa 27-114) (SEQ ID NO:18)
PKPTLWAEPGSMISKGSPVTLRCQGSLPVQDYRLQREKKTASWVRRIQQELVKKGYFPIA
SITSEHAGQYRCQYYSHSWWSEPSDPLE
恆河猴ILT2 Ig樣C2型結構域2胺基酸序列n (aa 115-220) (SEQ ID NO:19)
LVVTGAYSKPTLSALPSPVVASGGNVTLQCDSQVAXGGFVLCKEGEDEHPQCLNSQPHTR
GSSRAVFSVGPVSPSRRWSYRCYGYDSRSPYVWSLPSDLLELLVPG
恆河猴ILT2 Ig樣C2型結構域3胺基酸序列n (aa 221-311) (SEQ ID NO:20)
VSKKPSLSVQPGPVVAPGDKLTLQCGSDAGYNRFALYKEGERDFLQRPGRQPQAGLSQAN
FLLDPVRRSHGGQYRCSGAHNLSSEWSAPSD
恆河猴ILT2 Ig樣C2型結構域4胺基酸序列n (aa 312-408) (SEQ ID NO:21)
PLDILIAGQIRGRPSLLVQPGPTVVSGENVTLLCQSSWQFHVFLLTQAGAADAHLHLRSM
YKYPKYQAEFPMSPVTSAHAGTYRCYGSHSSDSYLLS
27F9重鏈可變區胺基酸序列(SEQ ID NO:125)
QVQLKESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVSWVRQPPGKGLEWLGIIWGDGSTNYH
SALISRLSISKDNSKSQVFLKLNSLQADDTATYYCAKPNWDTYAMDFWGQGTSVTVSS
27F9輕鏈可變區胺基酸序列(SEQ ID NO:126)
DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISNFLNWYQQKPDGTVKLLIYCTSKLHSGVPS
RFSGSGSETDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPPTFGGGTKLEII
47C8重鏈可變區胺基酸序列(SEQ ID NO:127)
EVQLQQSGPDLVKPGASVKISCKASGYSFTGYYMHWVKQSHGKSLEWIGRVYPNNGDTSY
NQKFKVKAILTVDKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCARGATVVESLFAYWGQGTLVTVSA
47C8輕鏈可變區胺基酸序列(SEQ ID NO:128)
DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDNYGNNFLHWYQQKPGQPPKLLIYRTSNLES
GIPARFSGSGSRTDFTLTINPVEADDVATYYCQQSNEDPYTFGGGTKLEIK
48A5重鏈可變區胺基酸序列(SEQ ID NO:129)
QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTNYGMNWVKQAPGKGLKWMGWINTYIGEPIY
ADDFKGRFAFSLETSASTAYLQINNLKNEDMATYFCARRSDYDGYAMDYWGQGTSVTVSS
48A5輕鏈可變區胺基酸序列(SEQ ID NO:130)
DIVMSQSPSSLAVSVGERVTMSCKSSQSLLYSGNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTR
ESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVKAEDLAVYYCQQHDSYPTFGGGSRLEIK
47H6重鏈可變區胺基酸序列(SEQ ID NO:131)
EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYTFTDYYMNWVKQSHGKSLEWIGDFNPNNGGTTY
NQKFEGKATLTVDKSSNTAYMDLRSLTSEDSAVYYCARGRFYYGSLYSFDYWGQGTTLTVSS
47H6輕鏈可變區胺基酸序列(SEQ ID NO:132)
DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASGNIHNYLAWYQQKQGKSPHLLVYNAKTLADGVPS
RFSGSGSGTQYSLKINNLQPEDFGSYYCQHFWTSITFGAGTKLDLK
Hz47H6.v2重鏈可變區胺基酸序列(SEQ ID NO:133)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYMNWVRQAPGQRLEWIGDFNPNNAGTTYN
QKFEGRVTITVDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGRFYYGSLYSFDYWGQGTLVTVSS
Hz47H6.v2輕鏈可變區胺基酸序列(SEQ ID NO:134)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASGNIHNYLAWYQQKPGKAPKLLIYNAKTLADGVPSR
FSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWTSITFGPGTKVDIK
51A1重鏈可變區胺基酸序列(SEQ ID NO:135)
EVQLVESGGGLVQPKGSLKLSCAASGFTFNTYAMHWVRQAPGKGLEWVARIRSKSSNYAT
YYADSVKDRFTISRDDSQSMLYLQMNNLKTEDTAMYYCVRDGIYYYGTMYYYAMDYWGQG
TSVTVSS
51A1輕鏈可變區胺基酸序列(SEQ ID NO:136)
NIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDYYGNSFMYWYQQKPGQPPKLLIYFASNLES
GVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEAADAASYYCQQNNEDPWTFGGGTKLEIK
64A12重鏈可變區胺基酸序列(SEQ ID NO:137)
EVQLVESGGGLVQPKGSLKLSCAASGFTFNTYAMHWVRQAPGKGLEWVARIRSKSSNYAT
YYADSVKDRFTISRDDSQSMLYLQMNNLKTEDTAMYYCVRDGIYYYDTMYYYAMDYWGQG
TSVTVSS
64A12輕鏈可變區胺基酸序列(SEQ ID NO:138)
NIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDYYGNSFIYWYQQKPGQPPKLLIYFASNLES
GVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEAADAASYYCQQNNEDPWTFGGGTKLEIK
Hz64A12重鏈可變區胺基酸序列(SEQ ID NO:139)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNTYAMHWVRQAPGKGLEWVARIRSKSSNYAT
YYADSVKDRFTISRDDAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGIYYYDTMYYYAMDYWGQG
TLVTVSS
Hz64A12輕鏈可變區胺基酸序列(SEQ ID NO:140)
NIVLTQSPDSLAVSLGERATINCRASESVDYYGNSFIYWYQQKPGQPPKLLIYFASNLES
GVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQNNEDPWTFGGGTKVEIK
73C4重鏈可變區胺基酸序列(SEQ ID NO:141)
AVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYTFTDYYMNWVKQSHGKSLEWIGNVNPNNGGTSY
NQKFKGKATLTVDKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCARREIYFYGTIYYYAMDYWGQGTS
VTVSS
73C4及73D1輕鏈可變區胺基酸序列(SEQ ID NO:142)
DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDYYGNSFMYWYQQKPGRPPNLLIYFASNLES
GVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEADDAATYYCQQNNEDPWTFGGGTKLEIK
73D1重鏈可變區胺基酸序列(SEQ ID NO:143)
AVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYTFTDYYINWVKQSHGKSLQWIGNVNPNDGGTTY
NQKFKGKATLTVDKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCARREIYFYGTIYYYAMDYWGQGTS
VTVSS
Hz73D1.v1重鏈可變區胺基酸序列(SEQ ID NO:144)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYINWVRQAPGQGLEWMGNVNPNDGGTTY
NQKFKGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARREIYFYGTIYYYAMDYWGQGTL
VTVSS
Hz73D1.v1輕鏈可變區胺基酸序列(SEQ ID NO:145)
DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCRASESVDYYGNSFMYWYQQKPGKAPKLLIYFASNLES
GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQNNEDPWTFGGGTKVEIK
信號序列加下劃線之Hz47H6.v2重鏈胺基酸序列(SEQ ID NO:146)MDMRVPAQLLGLLLLWLRGARC
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYMNWVR
QAPGQRLEWIGDFNPNNAGTTYNQKFEGRVTITVDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR
GRFYYGSLYSFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEP
VTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDK
KVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEV
KFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIE
KTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKT
TPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
信號序列加下劃線之Hz47H6.v2輕鏈胺基酸序列(SEQ ID NO:147)MDMRVPAQLLGLLLLWLRGARC
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASGNIHNYLAWYQQ
KPGKAPKLLIYNAKTLADGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWTSITFG
PGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNS
QESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
不含信號序列之Hz47H6.v2重鏈胺基酸序列(SEQ ID NO:148)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYMNWVRQAPGQRLEWIGDFNPNNAGTTY
NQKFEGRVTITVDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGRFYYGSLYSFDYWGQGTLVTV
SSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ
SSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELL
GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQ
YGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR
EEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKS
RWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
不含信號序列之Hz47H6.v2輕鏈胺基酸序列(SEQ ID NO:149)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASGNIHNYLAWYQQKPGKAPKLLIYNAKTLADGVPS
RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHFWTSITFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPS
DEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTL
SKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
信號序列加下劃線之Hz64A12重鏈胺基酸序列(SEQ ID NO:150)MDMRVPAQLLGLLLLWLRGARC
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNTYAMHWVR
QAPGKGLEWVARIRSKSSNYATYYADSVKDRFTISRDDAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYC
ARDGIYYYDTMYYYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKD
YFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSN
TKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSH
EDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL
PAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPE
NNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
信號序列加下劃線之Hz64A12輕鏈胺基酸序列(SEQ ID NO:151)MDMRVPAQLLGLLLLWLRGARC
NIVLTQSPDSLAVSLGERATINCRASESVDYYGNSFIY
WYQQKPGQPPKLLIYFASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQNNED
PWTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNAL
QSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
不含信號序列之Hz64A12重鏈胺基酸序列(SEQ ID NO:152)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNTYAMHWVRQAPGKGLEWVARIRSKSSNYAT
YYADSVKDRFTISRDDAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGIYYYDTMYYYAMDYWGQG
TLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTF
PAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCP
APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTK
PREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYT
LPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKL
TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
不含信號序列之Hz64A12輕鏈胺基酸序列(SEQ ID NO:153)
NIVLTQSPDSLAVSLGERATINCRASESVDYYGNSFIYWYQQKPGQPPKLLIYFASNLES
GVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQNNEDPWTFGGGTKVEIKRTVAAPSVF
IFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS
STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
信號序列加下劃線之Hz73D1.v1重鏈胺基酸序列(SEQ ID NO:154)MDMRVPAQLLGLLLLWLRGARC
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYINWVR
QAPGQGLEWMGNVNPNDGGTTYNQKFKGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCAR
REIYFYGTIYYYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYF
PEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTK
VDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHED
PEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPA
PIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENN
YKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
信號序列加下劃線之Hz73D1.v1輕鏈胺基酸序列(SEQ ID NO:155)MDMRVPAQLLGLLLLWLRGARC
DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCRASESVDYYGNSFMY
WYQQKPGKAPKLLIYFASNLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQNNED
PWTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNAL
QSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
不含信號序列之Hz73D1.v1重鏈胺基酸序列(SEQ ID NO:156)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYINWVRQAPGQGLEWMGNVNPNDGGTTY
NQKFKGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARREIYFYGTIYYYAMDYWGQGTL
VTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPA
VLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAP
ELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPR
EEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP
PSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTV
DKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
不含信號序列之Hz73D1.v1輕鏈胺基酸序列(SEQ ID NO:157)
DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCRASESVDYYGNSFMYWYQQKPGKAPKLLIYFASNLES
GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQNNEDPWTFGGGTKVEIKRTVAAPSVF
IFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS
STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
人類IgG1恆定區(SEQ ID NO:158)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS
GLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGG
PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYN
STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREE
MTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW
QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
人類IgG1恆定區E233A/L235A (SEQ ID NO:159)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS
GLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPALAGG
PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYN
STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREE
MTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW
QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
人類IgG1恆定區L234A/L235A (SEQ ID NO:160)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS
GLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGG
PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
人類IgG1恆定區L234A/L235A/P329G (SEQ ID NO:161)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS
GLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGG
PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
人類IgG1恆定區N297G (SEQ ID NO:162)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS
GLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGG
PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYG
STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREE
MTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW
QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
人類IgG1恆定區N297G/H310A (SEQ ID NO:163)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS
GLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGG
PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYG
STYRVVSVLTVLAQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREE
MTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW
QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
人類κ輕鏈恆定區(SEQ ID NO:164)
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQD
SKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
人類λ輕鏈恆定區(SEQ ID NO:165)
GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSK
QSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
經預測信號序列加下劃線之食蟹猴ILT2胺基酸序列(SEQ ID NO:166)MTPILMVLICLGLSLGPRTHVQA
GILPKPTLWAEPGSMISEGSPVTLRCQGSLQVQEYRL
YREKKPASWVRRIQQELVKKGYFAIGFITWEHTGQYRCQYYSHSWWSEPSDPLELVVTGA
YSKPTLSALPSPVVASGGNVTLQCDSQVAFDSFTLCKEGEDEHPQRLNCQSHARGWSWAV
FSVGPVSPSRRWSYRCYGYISSAPNVWSLPSDLLELLVPGVSKKPSLSVQPGPVVAPGDK
LTLQCGSDAGYDRFALYKEGEGDFLQRPVRQPQAGLSQANFLLGPVSRSHGGQYRCSGAH
NLSSEWSAPSDPLDILIAGQIRGRPFLSVQPGPKVVSGENVTLLCQSSWQFHAFLLTQAG
AADAHLHLRSMYKYPKYQAEFPMSPVTSAHAGTYRCYGSRSSNPYLLSVPSDPLELVVSG
PSGGPSSPTTGPTSTCAGPEDQPLTPTGSDPQSGLGRHLGVVTGILVAFVLLLFLLLLLF
LVLRHQRQGKHWTSAQRKADFQHPAGAVEPEPRDRGLQRRSSPAADTQEENLYAAVKDTQ
PEDGVELDSRQRPHDEDPQAVTYARVKHSRPRREMASPPSPLSEEFLDTKDTQAEEDRQM
DTEAAASEDPQDVTYAQLQSLTLRRETTEPPPSQERAPPVESSIYATLTIH
不含經預測信號序列之食蟹猴ILT2胺基酸序列(SEQ ID NO:167)
GILPKPTLWAEPGSMISEGSPVTLRCQGSLQVQEYRLYREKKPASWVRRIQQELVKKGYF
AIGFITWEHTGQYRCQYYSHSWWSEPSDPLELVVTGAYSKPTLSALPSPVVASGGNVTLQ
CDSQVAFDSFTLCKEGEDEHPQRLNCQSHARGWSWAVFSVGPVSPSRRWSYRCYGYISSA
PNVWSLPSDLLELLVPGVSKKPSLSVQPGPVVAPGDKLTLQCGSDAGYDRFALYKEGEGD
FLQRPVRQPQAGLSQANFLLGPVSRSHGGQYRCSGAHNLSSEWSAPSDPLDILIAGQIRG
RPFLSVQPGPKVVSGENVTLLCQSSWQFHAFLLTQAGAADAHLHLRSMYKYPKYQAEFPM
SPVTSAHAGTYRCYGSRSSNPYLLSVPSDPLELVVSGPSGGPSSPTTGPTSTCAGPEDQP
LTPTGSDPQSGLGRHLGVVTGILVAFVLLLFLLLLLFLVLRHQRQGKHWTSAQRKADFQH
PAGAVEPEPRDRGLQRRSSPAADTQEENLYAAVKDTQPEDGVELDSRQRPHDEDPQAVTY
ARVKHSRPRREMASPPSPLSEEFLDTKDTQAEEDRQMDTEAAASEDPQDVTYAQLQSLTL
RRETTEPPPSQERAPPVESSIYATLTIH
食蟹猴ILT2細胞外結構域(aa 24-461) (SEQ ID NO:168)
GILPKPTLWAEPGSMISEGSPVTLRCQGSLQVQEYRLYREKKPASWVRRIQQELVKKGYF
AIGFITWEHTGQYRCQYYSHSWWSEPSDPLELVVTGAYSKPTLSALPSPVVASGGNVTLQ
CDSQVAFDSFTLCKEGEDEHPQRLNCQSHARGWSWAVFSVGPVSPSRRWSYRCYGYISSA
PNVWSLPSDLLELLVPGVSKKPSLSVQPGPVVAPGDKLTLQCGSDAGYDRFALYKEGEGD
FLQRPVRQPQAGLSQANFLLGPVSRSHGGQYRCSGAHNLSSEWSAPSDPLDILIAGQIRG
RPFLSVQPGPKVVSGENVTLLCQSSWQFHAFLLTQAGAADAHLHLRSMYKYPKYQAEFPM
SPVTSAHAGTYRCYGSRSSNPYLLSVPSDPLELVVSGPSGGPSSPTTGPTSTCAGPEDQP
LTPTGSDPQSGLGRHLGV
食蟹猴ILT2 Ig樣C2型結構域1胺基酸序列(aa 27-114) (SEQ ID NO:169)
PKPTLWAEPGSMISEGSPVTLRCQGSLQVQEYRLYREKKPASWVRRIQQELVKKGYFAIG
FITWEHTGQYRCQYYSHSWWSEPSDPLE
食蟹猴ILT2 Ig樣C2型結構域2胺基酸序列n (aa 115-220) (SEQ ID NO:170)
LVVTGAYSKPTLSALPSPVVASGGNVTLQCDSQVAFDSFTLCKEGEDEHPQRLNCQSHAR
GWSWAVFSVGPVSPSRRWSYRCYGYISSAPNVWSLPSDLLELLVPG
食蟹猴ILT2 Ig樣C2型結構域3胺基酸序列n (aa 221-311) (SEQ ID NO:171)
VSKKPSLSVQPGPVVAPGDKLTLQCGSDAGYDRFALYKEGEGDFLQRPVRQPQAGLSQAN
FLLGPVSRSHGGQYRCSGAHNLSSEWSAPSD
食蟹猴ILT2 Ig樣C2型結構域4胺基酸序列n (aa 312-408) (SEQ ID NO:172)
PLDILIAGQIRGRPFLSVQPGPKVVSGENVTLLCQSSWQFHAFLLTQAGAADAHLHLRSMY
KYPKYQAEFPMSPVTSAHAGTYRCYGSRSSNPYLLS
六組胺酸肽標籤(SEQ ID NO:173)
HHHHHH
圖1. 藉由流式細胞術分析之各種免疫細胞中ILT2及ILT4之表現。
圖2. 抗ILT抗體對ILT2或ILT4與MHC I分子之間之相互作用之抑制。
圖3. 抗ILT2/ILT4抗體與單核球之結合。
圖4A及圖4B. 抗ILT抗體對人類ILT2或ILT4與MHC I分子之間之相互作用之抑制。
圖5. 抗ILT抗體對食蟹猴ILT2與MHC I分子之間之相互作用之抑制。
圖6. 抗ILT抗體對NKL細胞之細胞溶解活性之效應。
圖7. 抗ILT抗體對人類原代NK細胞之活性之效應。
圖8. 抗ILT抗體對原代NK細胞之細胞溶解活性之效應。
圖9. 在使用表現經典MHC-I之靶細胞之ADCC分析中，抗ILT抗體對原代NK細胞之細胞溶解活性之效應。
圖10. 在MLR分析中，抗ILT抗體對MDSC活性之效應。
圖11A-圖11C. 在MLR分析中，抗ILT抗體對MDSC活性之效應。
圖12. 如藉由細胞介素產生評價之抗ILT抗體對LPS介導之人類PBMC刺激之效應。
圖13. 如藉由細胞介素產生評價之抗ILT抗體對LPS介導之食蟹猴PBMC刺激之效應。
圖14. 如藉由細胞介素產生評價之抗ILT抗體對LPS介導之耐受化樹突細胞刺激之效應。
圖15. 抗ILT抗體對HMGB1處理之細胞之細胞介素產生之效應。
圖16. 抗ILT抗體對STING促效劑處理之細胞之細胞介素產生之效應。
圖17. 抗ILT抗體對T細胞介導之骨髓細胞刺激阻抑之效應。
圖18. 抗ILT抗體對巨噬細胞吞噬作用之效應。
圖19. 抗ILT抗體對樹突細胞之細胞介素產生之效應。
圖20. 抗ILT抗體對人類血球之細胞介素產生之效應。
圖21. 抗ILT抗體對食蟹猴血球之細胞介素產生之效應。
圖22. 抗ILT抗體對T細胞之細胞溶解活性之效應。
圖23A-圖23C. 抗ILT2/ILT4抗體及抗PD-1抗體對T細胞活化及T細胞之細胞介素釋放之協同效應。
圖24. 經由流式細胞術分析表現標記物，抗ILT2/ILT4抗體對單核球源性巨噬細胞極化之效應。
Claims (81)
- 一種包含抗原結合結構域之結合劑，其中該抗原結合結構域特異性結合至人類免疫球蛋白樣轉錄物2 (ILT2)及人類免疫球蛋白樣轉錄物4 (ILT4)二者。
- 如請求項1之結合劑，其中該抗原結合結構域包含： (1) 重鏈可變區，其包含來自SEQ ID NO:144之胺基酸序列之重鏈可變區CDR1 (VH-CDR1)、重鏈可變區CDR2 (VH-CDR2)及重鏈可變區CDR3 (VH-CDR3)；及輕鏈可變區，其包含來自SEQ ID NO:145之胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1 (VL-CDR1)、輕鏈可變區CDR2 (VL-CDR2)及輕鏈可變區CDR3 (VL-CDR3)； (2) 重鏈可變區，其包含來自SEQ ID NO:139之胺基酸序列之重鏈可變區CDR1 (VH-CDR1)、重鏈可變區CDR2 (VH-CDR2)及重鏈可變區CDR3 (VH-CDR3)；及輕鏈可變區，其包含來自SEQ ID NO:140之胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1 (VL-CDR1)、輕鏈可變區CDR2 (VL-CDR2)及輕鏈可變區CDR3 (VL-CDR3)； (3) 重鏈可變區，其包含來自SEQ ID NO:133之胺基酸序列之重鏈可變區CDR1 (VH-CDR1)、重鏈可變區CDR2 (VH-CDR2)及重鏈可變區CDR3 (VH-CDR3)；及輕鏈可變區，其包含來自SEQ ID NO:134之胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1 (VL-CDR1)、輕鏈可變區CDR2 (VL-CDR2)及輕鏈可變區CDR3 (VL-CDR3)； (4) 重鏈可變區，其包含來自SEQ ID NO:143之胺基酸序列之重鏈可變區CDR1 (VH-CDR1)、重鏈可變區CDR2 (VH-CDR2)及重鏈可變區CDR3 (VH-CDR3)；及輕鏈可變區，其包含來自SEQ ID NO:142之胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1 (VL-CDR1)、輕鏈可變區CDR2 (VL-CDR2)及輕鏈可變區CDR3 (VL-CDR3)； (5) 重鏈可變區，其包含來自SEQ ID NO:131之胺基酸序列之重鏈可變區CDR1 (VH-CDR1)、重鏈可變區CDR2 (VH-CDR2)及重鏈可變區CDR3 (VH-CDR3)；及輕鏈可變區，其包含來自SEQ ID NO:132之胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1 (VL-CDR1)、輕鏈可變區CDR2 (VL-CDR2)及輕鏈可變區CDR3 (VL-CDR3)； (6) 重鏈可變區，其包含來自SEQ ID NO:137之胺基酸序列之重鏈可變區CDR1 (VH-CDR1)、重鏈可變區CDR2 (VH-CDR2)及重鏈可變區CDR3 (VH-CDR3)；及輕鏈可變區，其包含來自SEQ ID NO:138之胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1 (VL-CDR1)、輕鏈可變區CDR2 (VL-CDR2)及輕鏈可變區CDR3 (VL-CDR3)； (7) 重鏈可變區，其包含來自SEQ ID NO:135之胺基酸序列之重鏈可變區CDR1 (VH-CDR1)、重鏈可變區CDR2 (VH-CDR2)及重鏈可變區CDR3 (VH-CDR3)；及輕鏈可變區，其包含來自SEQ ID NO:136之胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1 (VL-CDR1)、輕鏈可變區CDR2 (VL-CDR2)及輕鏈可變區CDR3 (VL-CDR3)；或 (8) 重鏈可變區，其包含來自SEQ ID NO:141之胺基酸序列之重鏈可變區CDR1 (VH-CDR1)、重鏈可變區CDR2 (VH-CDR2)及重鏈可變區CDR3 (VH-CDR3)；及輕鏈可變區，其包含來自SEQ ID NO:142之胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1 (VL-CDR1)、輕鏈可變區CDR2 (VL-CDR2)及輕鏈可變區CDR3 (VL-CDR3)。
- 如請求項2之結合劑，其中： (1) 該重鏈可變區包含具有SEQ ID NO:115之胺基酸序列之該VH-CDR1、具有SEQ ID NO:112之胺基酸序列之該VH-CDR2及具有SEQ ID NO:107之胺基酸序列之該VH-CDR3；且該輕鏈可變區包含具有SEQ ID NO:89之胺基酸序列之該VL-CDR1、具有SEQ ID NO:90之胺基酸序列之該VL-CDR2及具有SEQ ID NO:91之胺基酸序列之該VL-CDR3； (2) 該重鏈可變區包含具有SEQ ID NO:111之胺基酸序列之該VH-CDR1、具有SEQ ID NO:112之胺基酸序列之該VH-CDR2及具有SEQ ID NO:107之胺基酸序列之該VH-CDR3；且該輕鏈可變區包含具有SEQ ID NO:89之胺基酸序列之該VL-CDR1、具有SEQ ID NO:90之胺基酸序列之該VL-CDR2及具有SEQ ID NO:91之胺基酸序列之該VL-CDR3； (3) 該重鏈可變區包含具有SEQ ID NO:76之胺基酸序列之該VH-CDR1、具有SEQ ID NO:113之胺基酸序列之該VH-CDR2及具有SEQ ID NO:107之胺基酸序列之該VH-CDR3；且該輕鏈可變區包含具有SEQ ID NO:89之胺基酸序列之該VL-CDR1、具有SEQ ID NO:90之胺基酸序列之該VL-CDR2及具有SEQ ID NO:91之胺基酸序列之該VL-CDR3； (4) 該重鏈可變區包含具有SEQ ID NO:111之胺基酸序列之該VH-CDR1、具有SEQ ID NO:114之胺基酸序列之該VH-CDR2及具有SEQ ID NO:107之胺基酸序列之該VH-CDR3；且該輕鏈可變區包含具有SEQ ID NO:89之胺基酸序列之該VL-CDR1、具有SEQ ID NO:90之胺基酸序列之該VL-CDR2及具有SEQ ID NO:91之胺基酸序列之該VL-CDR3；或 (5) 該重鏈可變區包含具有SEQ ID NO:116之胺基酸序列之該VH-CDR1、具有SEQ ID NO:124之胺基酸序列之該VH-CDR2及具有SEQ ID NO:110之胺基酸序列之該VH-CDR3；且該輕鏈可變區包含具有SEQ ID NO:99之胺基酸序列之該VL-CDR1、具有SEQ ID NO:100之胺基酸序列之該VL-CDR2及具有SEQ ID NO:101之胺基酸序列之該VL-CDR3。
- 如請求項2之結合劑，其中： (1) 該重鏈可變區包含含有表6B中所示之五個CDR定義中之任一者之胺基酸序列的該VH-CDR1、該VH-CDR2、該VH-CDR3、該VL-CDR1、該VL-CDR2及該VL-CDR3； (2) 該重鏈可變區包含含有表4B中所示之五個CDR定義中之任一者之胺基酸序列的該VH-CDR1、該VH-CDR2、該VH-CDR3、該VL-CDR1、該VL-CDR2及該VL-CDR3； (3) 該重鏈可變區包含含有表8A中所示之五個CDR定義中之任一者之胺基酸序列的該VH-CDR1、該VH-CDR2、該VH-CDR3、該VL-CDR1、該VL-CDR2及該VL-CDR3； (4) 該重鏈可變區包含含有表4A中所示之五個CDR定義中之任一者之胺基酸序列的該VH-CDR1、該VH-CDR2、該VH-CDR3、該VL-CDR1、該VL-CDR2及該VL-CDR3； (5) 該重鏈可變區包含含有表6A中所示之五個CDR定義中之任一者之胺基酸序列的該VH-CDR1、該VH-CDR2、該VH-CDR3、該VL-CDR1、該VL-CDR2及該VL-CDR3； (6) 該重鏈可變區包含含有表5中所示之五個CDR定義中之任一者之胺基酸序列的該VH-CDR1、該VH-CDR2、該VH-CDR3、該VL-CDR1、該VL-CDR2及該VL-CDR3；或 (7) 該重鏈可變區包含含有表7中所示之五個CDR定義中之任一者之胺基酸序列的該VH-CDR1、該VH-CDR2、該VH-CDR3、該VL-CDR1、該VL-CDR2及該VL-CDR3。
- 如請求項2或3之結合劑，其中： (a) 該重鏈可變區包含與SEQ ID NO:144中所示之序列具有至少80%序列一致性之胺基酸序列； (b) 該輕鏈可變區包含與SEQ ID NO:145中所示之序列具有至少80%序列一致性之胺基酸序列；或 (c) 該重鏈可變區包含與SEQ ID NO:144具有至少80%序列一致性之胺基酸序列，且該輕鏈可變區包含與SEQ ID NO:145具有至少80%序列一致性之胺基酸序列。
- 如請求項5之結合劑，其中該重鏈可變區包含SEQ ID NO:144之胺基酸序列。
- 如請求項5或6之結合劑，其中該輕鏈可變區包含SEQ ID NO:145之胺基酸序列。
- 如請求項4之結合劑，其中： (a) 該重鏈可變區包含與SEQ ID NO:139、133、143、131、137、135或141中所示之序列中之任一者具有至少80%序列一致性之胺基酸序列； (b) 該輕鏈可變區包含與SEQ ID NO:140、134、142、132、138、136或142中所示之序列中之任一者具有至少80%序列一致性之胺基酸序列；或 (c) 該可變區包含以下胺基酸序列中之任一者： (i) 該重鏈可變區包含與SEQ ID NO:139之序列具有至少80%序列一致性之胺基酸序列，且該輕鏈可變區包含與SEQ ID NO:140之序列具有至少80%序列一致性之胺基酸序列； (ii) 該重鏈可變區包含與SEQ ID NO:133之序列具有至少80%序列一致性之胺基酸序列，且該輕鏈可變區包含與SEQ ID NO:134之序列具有至少80%序列一致性之胺基酸序列； (iii) 該重鏈可變區包含與SEQ ID NO:143之序列具有至少80%序列一致性之胺基酸序列，且該輕鏈可變區包含與SEQ ID NO:142之序列具有至少80%序列一致性之胺基酸序列； (iv) 該重鏈可變區包含與SEQ ID NO:131之序列具有至少80%序列一致性之胺基酸序列，且該輕鏈可變區包含與SEQ ID NO:132之序列具有至少80%序列一致性之胺基酸序列； (v) 該重鏈可變區包含與SEQ ID NO:137之序列具有至少80%序列一致性之胺基酸序列，且該輕鏈可變區包含與SEQ ID NO:138之序列具有至少80%序列一致性之胺基酸序列； (vi) 該重鏈可變區包含與SEQ ID NO:135之序列具有至少80%序列一致性之胺基酸序列，且該輕鏈可變區包含與SEQ ID NO:136之序列具有至少80%序列一致性之胺基酸序列；或 (vii) 該重鏈可變區包含與SEQ ID NO:141之序列具有至少80%序列一致性之胺基酸序列，且該輕鏈可變區包含與SEQ ID NO:142之序列具有至少80%序列一致性之胺基酸序列。
- 如請求項8之結合劑，其中該重鏈可變區包含SEQ ID NO:139、133、143、131、137、135或141中任一者之胺基酸序列。
- 如請求項8之結合劑，其中該輕鏈可變區包含SEQ ID NO:140、134、142、132、138、136或142中任一者之胺基酸序列。
- 如請求項8之結合劑，其中： (i) 該重鏈可變區包含SEQ ID NO:139之胺基酸序列，且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO:140之胺基酸序列； (ii) 該重鏈可變區包含SEQ ID NO:133之胺基酸序列，且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO:134之胺基酸序列； (iii) 該重鏈可變區包含SEQ ID NO:143之胺基酸序列，且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO:142之胺基酸序列； (iv) 該重鏈可變區包含SEQ ID NO:131之胺基酸序列，且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO:132之胺基酸序列； (v) 該重鏈可變區包含SEQ ID NO:137之胺基酸序列，且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO:138之胺基酸序列； (vi) 該重鏈可變區包含SEQ ID NO:135之胺基酸序列，且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO:136之胺基酸序列；或 (vii) 該重鏈可變區包含SEQ ID NO:141之胺基酸序列，且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO:142之胺基酸序列。
- 一種特異性結合人類ILT2之結合劑，其包含抗原結合結構域，該抗原結合結構域包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含來自SEQ ID NO:125之胺基酸序列之VH-CDR1、VH-CDR2及VH-CDR3；及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含來自SEQ ID NO:126之胺基酸序列之VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3。
- 如請求項12之結合劑，其中： (1) 該重鏈可變區包含具有SEQ ID NO:31之胺基酸序列之該VH-CDR1、具有SEQ ID NO:23之胺基酸序列之該VH-CDR2及具有SEQ ID NO:24之胺基酸序列之該VH-CDR3；且該輕鏈可變區包含具有SEQ ID NO:25之胺基酸序列之該VL-CDR1、具有SEQ ID NO:26之胺基酸序列之該VL-CDR2及具有SEQ ID NO:27之胺基酸序列之該VL-CDR3； (2) 該重鏈可變區包含具有SEQ ID NO:22之胺基酸序列之該VH-CDR1、具有SEQ ID NO:23之胺基酸序列之該VH-CDR2及具有SEQ ID NO:24之胺基酸序列之該VH-CDR3；且該輕鏈可變區包含具有SEQ ID NO:25之胺基酸序列之該VL-CDR1、具有SEQ ID NO:26之胺基酸序列之該VL-CDR2及具有SEQ ID NO:27之胺基酸序列之該VL-CDR3； (3) 該重鏈可變區包含具有SEQ ID NO:28之胺基酸序列之該VH-CDR1、具有SEQ ID NO:29之胺基酸序列之該VH-CDR2及具有SEQ ID NO:24之胺基酸序列之該VH-CDR3；且該輕鏈可變區包含具有SEQ ID NO:25之胺基酸序列之該VL-CDR1、具有SEQ ID NO:26之胺基酸序列之該VL-CDR2及具有SEQ ID NO:27之胺基酸序列之該VL-CDR3； (4) 該重鏈可變區包含具有SEQ ID NO:22之胺基酸序列之該VH-CDR1、具有SEQ ID NO:30之胺基酸序列之該VH-CDR2及具有SEQ ID NO:24之胺基酸序列之該VH-CDR3；且該輕鏈可變區包含具有SEQ ID NO:25之胺基酸序列之該VL-CDR1、具有SEQ ID NO:26之胺基酸序列之該VL-CDR2及具有SEQ ID NO:27之胺基酸序列之該VL-CDR3；或 (5) 該重鏈可變區包含具有SEQ ID NO:32之胺基酸序列之該VH-CDR1、具有SEQ ID NO:33之胺基酸序列之該VH-CDR2及具有SEQ ID NO:34之胺基酸序列之該VH-CDR3；且該輕鏈可變區包含具有SEQ ID NO:35之胺基酸序列之該VL-CDR1、具有SEQ ID NO:36之胺基酸序列之該VL-CDR2及具有SEQ ID NO:37之胺基酸序列之該VL-CDR3。
- 如請求項12之結合劑，其中： (a) 該重鏈可變區包含與SEQ ID NO:125中所示之序列具有至少80%序列一致性之胺基酸序列； (b) 該輕鏈可變區包含與SEQ ID NO:126中所示之序列具有至少80%序列一致性之胺基酸序列；或 (c) 該重鏈可變區包含與SEQ ID NO:125中所示之序列具有至少80%序列一致性之胺基酸序列，及/或該輕鏈可變區包含與SEQ ID NO:126中所示之序列具有至少80%序列一致性之胺基酸序列。
- 如請求項12之結合劑，其中： (a) 該重鏈可變區包含SEQ ID NO:125中所示之胺基酸序列； (b) 該輕鏈可變區包含SEQ ID NO:126中所示之胺基酸序列；或 (c) 該重鏈可變區包含SEQ ID NO:125中所示之胺基酸序列，及/或該輕鏈可變區包含SEQ ID NO:126中所示之胺基酸序列。
- 一種特異性結合人類ILT4之結合劑，其包含抗原結合結構域，該抗原結合結構域包含： (a) 重鏈可變區，其包含來自SEQ ID NO:129之胺基酸序列之VH-CDR1、VH-CDR2及VH-CDR3；及輕鏈可變區，其包含來自SEQ ID NO:130之胺基酸序列之VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3；或 (b) 重鏈可變區，其包含來自SEQ ID NO:127之胺基酸序列之VH-CDR1、VH-CDR2及VH-CDR3；及輕鏈可變區，其包含來自SEQ ID NO:128之胺基酸序列之VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3。
- 如請求項16之結合劑，其中對於(a)： (1) 該重鏈可變區包含具有SEQ ID NO:63之胺基酸序列之該VH-CDR1、具有SEQ ID NO:55之胺基酸序列之該VH-CDR2及具有SEQ ID NO:56之胺基酸序列之該VH-CDR3；且該輕鏈可變區包含具有SEQ ID NO:57之胺基酸序列之該VL-CDR1、具有SEQ ID NO:58之胺基酸序列之該VL-CDR2及具有SEQ ID NO:59之胺基酸序列之該VL-CDR3； (2) 該重鏈可變區包含具有SEQ ID NO:54之胺基酸序列之該VH-CDR1、具有SEQ ID NO:55之胺基酸序列之該VH-CDR2及具有SEQ ID NO:56之胺基酸序列之該VH-CDR3；且該輕鏈可變區包含具有SEQ ID NO:57之胺基酸序列之該VL-CDR1、具有SEQ ID NO:58之胺基酸序列之該VL-CDR2及具有SEQ ID NO:59之胺基酸序列之該VL-CDR3； (3) 該重鏈可變區包含具有SEQ ID NO:60之胺基酸序列之該VH-CDR1、具有SEQ ID NO:61之胺基酸序列之該VH-CDR2及具有SEQ ID NO:56之胺基酸序列之該VH-CDR3；且該輕鏈可變區包含具有SEQ ID NO:57之胺基酸序列之該VL-CDR1、具有SEQ ID NO:58之胺基酸序列之該VL-CDR2及具有SEQ ID NO:59之胺基酸序列之該VL-CDR3； (4) 該重鏈可變區包含具有SEQ ID NO:54之胺基酸序列之該VH-CDR1、具有SEQ ID NO:62之胺基酸序列之該VH-CDR2及具有SEQ ID NO:56之胺基酸序列之該VH-CDR3；且該輕鏈可變區包含具有SEQ ID NO:57之胺基酸序列之該VL-CDR1、具有SEQ ID NO:58之胺基酸序列之該VL-CDR2及具有SEQ ID NO:59之胺基酸序列之該VL-CDR3；或 (5) 該重鏈可變區包含具有SEQ ID NO:64之胺基酸序列之該VH-CDR1、具有SEQ ID NO:65之胺基酸序列之該VH-CDR2及具有SEQ ID NO:66之胺基酸序列之該VH-CDR3；且該輕鏈可變區包含具有SEQ ID NO:67之胺基酸序列之該VL-CDR1、具有SEQ ID NO:68之胺基酸序列之該VL-CDR2及具有SEQ ID NO:69之胺基酸序列之該VL-CDR3；或 其中對於(b)： (1) 該重鏈可變區包含具有SEQ ID NO:47之胺基酸序列之該VH-CDR1、具有SEQ ID NO:39之胺基酸序列之該VH-CDR2及具有SEQ ID NO:40之胺基酸序列之該VH-CDR3；且該輕鏈可變區包含具有SEQ ID NO:41之胺基酸序列之該VL-CDR1、具有SEQ ID NO:42之胺基酸序列之該VL-CDR2及具有SEQ ID NO:43之胺基酸序列之該VL-CDR3； (2) 該重鏈可變區包含具有SEQ ID NO:38之胺基酸序列之該VH-CDR1、具有SEQ ID NO:39之胺基酸序列之該VH-CDR2及具有SEQ ID NO:40之胺基酸序列之該VH-CDR3；且該輕鏈可變區包含具有SEQ ID NO:41之胺基酸序列之該VL-CDR1、具有SEQ ID NO:42之胺基酸序列之該VL-CDR2及具有SEQ ID NO:43之胺基酸序列之該VL-CDR3； (3) 該重鏈可變區包含具有SEQ ID NO:44之胺基酸序列之該VH-CDR1、具有SEQ ID NO:45之胺基酸序列之該VH-CDR2及具有SEQ ID NO:40之胺基酸序列之該VH-CDR3；且該輕鏈可變區包含具有SEQ ID NO:41之胺基酸序列之該VL-CDR1、具有SEQ ID NO:42之胺基酸序列之該VL-CDR2及具有SEQ ID NO:43之胺基酸序列之該VL-CDR3； (4) 該重鏈可變區包含具有SEQ ID NO:38之胺基酸序列之該VH-CDR1、具有SEQ ID NO:46之胺基酸序列之該VH-CDR2及具有SEQ ID NO:40之胺基酸序列之該VH-CDR3；且該輕鏈可變區包含具有SEQ ID NO:41之胺基酸序列之該VL-CDR1、具有SEQ ID NO:42之胺基酸序列之該VL-CDR2及具有SEQ ID NO:43之胺基酸序列之該VL-CDR3；或 (5) 該重鏈可變區包含具有SEQ ID NO:48之胺基酸序列之該VH-CDR1、具有SEQ ID NO:49之胺基酸序列之該VH-CDR2及具有SEQ ID NO:50之胺基酸序列之該VH-CDR3；且該輕鏈可變區包含具有SEQ ID NO:51之胺基酸序列之該VL-CDR1、具有SEQ ID NO:52之胺基酸序列之該VL-CDR2及具有SEQ ID NO:53之胺基酸序列之該VL-CDR3。
- 如請求項16之結合劑，其中： (a) 該重鏈可變區包含與SEQ ID NO:129中所示之序列具有至少80%序列一致性之胺基酸序列；(b) 該輕鏈可變區包含與SEQ ID NO:130中所示之序列具有至少80%序列一致性之胺基酸序列；或(c) 該重鏈可變區包含與SEQ ID NO:129中所示之序列具有至少80%序列一致性之胺基酸序列，及/或該輕鏈可變區包含與SEQ ID NO:130中所示之序列具有至少80%序列一致性之胺基酸序列。
- 如請求項16之結合劑，其中： (a) 該重鏈可變區包含SEQ ID NO:129中所示之胺基酸序列；(b) 該輕鏈可變區包含SEQ ID NO:130中所示之胺基酸序列；或(c) 該重鏈可變區包含SEQ ID NO:129中所示之胺基酸序列，及/或該輕鏈可變區包含SEQ ID NO:130中所示之胺基酸序列。
- 如請求項16之結合劑，其中： (a) 該重鏈可變區包含與SEQ ID NO:127中所示之序列具有至少80%序列一致性之胺基酸序列； (b) 該輕鏈可變區包含與SEQ ID NO:128中所示之序列具有至少80%序列一致性之胺基酸序列；或 (c) 該重鏈可變區包含與SEQ ID NO:127中所示之序列具有至少80%序列一致性之胺基酸序列，及/或該輕鏈可變區包含與SEQ ID NO:128中所示之序列具有至少80%序列一致性之胺基酸序列。
- 如請求項16之結合劑，其中： (a) 該重鏈可變區包含SEQ ID NO:127中所示之胺基酸序列； (b) 該輕鏈可變區包含SEQ ID NO:128中所示之胺基酸序列；或 (c) 該重鏈可變區包含SEQ ID NO:127中所示之胺基酸序列，及/或該輕鏈可變區包含SEQ ID NO:128中所示之胺基酸序列。
- 如請求項1至21中任一項之結合劑，其係抗體。
- 如請求項1至22中任一項之結合劑，其係重組抗體。
- 如請求項1至23中任一項之結合劑，其係嵌合抗體。
- 如請求項1至23中任一項之結合劑，其係人類化抗體。
- 如請求項1至25中任一項之結合劑，其係雙特異性抗體或多特異性抗體。
- 如請求項22至26中任一項之結合劑，其中該抗體係包含至少一個抗原結合位點之抗體片段。
- 如請求項27之結合劑，其中該抗體片段係Fab、Fab′、F(ab′)2 、Fv、scFv、(scFv)2 、單鏈抗體、雙可變區抗體、雙體抗體或奈米抗體。
- 如請求項1至25中任一項之結合劑，其係IgG1抗體，視情況地人類IgG1抗體，且另外視情況地具有降低的效應功能或無效應功能之人類IgG1抗體。
- 如請求項1至25中任一項之結合劑，其係IgG2抗體，視情況地人類IgG2抗體。
- 如請求項1至25中任一項之結合劑，其係IgG4抗體，視情況地人類IgG4抗體。
- 如請求項1至25或29至31中任一項之結合劑，其包含κ輕鏈恆定區，視情況地人類κ輕鏈恆定區。
- 如請求項1至25或29至31中任一項之結合劑，其包含λ輕鏈恆定區，視情況地人類λ輕鏈恆定區。
- 如請求項1至11中任一項之結合劑，其包含： (a) 包含與SEQ ID NO:148之序列具有80%一致性之胺基酸序列之重鏈，及包含與SEQ ID NO:149之序列具有80%一致性之胺基酸序列之輕鏈； (b) 包含與SEQ ID NO:152之序列具有80%一致性之胺基酸序列之重鏈，及包含與SEQ ID NO:153之序列具有80%一致性之胺基酸序列之輕鏈；或 (c) 包含與SEQ ID NO:156之序列具有80%一致性之胺基酸序列之重鏈，及包含與SEQ ID NO:157之序列具有80%一致性之胺基酸序列之輕鏈。
- 一種特異性結合人類ILT2及ILT4之抗體，其包含： (a) 包含SEQ ID NO:148之胺基酸序列之重鏈，及包含SEQ ID NO:149之胺基酸序列之輕鏈； (b) 包含SEQ ID NO:152之胺基酸序列之重鏈，及包含SEQ ID NO:153之胺基酸序列之輕鏈；或 (c) 包含SEQ ID NO:156之胺基酸序列之重鏈，及包含SEQ ID NO:157之胺基酸序列之輕鏈。
- 如請求項1至35中任一項之結合劑或抗體，其具有以下性質中之一或多者： (1) 結合恆河猴ILT2； (2) 結合食蟹猴ILT2； (3) 不結合ILT3、ILT5及LILRB5； (4) 不結合LILRA2、LILRA4、LILRA5及LILRA6； (5) 係ILT2拮抗劑； (6) 係ILT4拮抗劑； (7) 抑制ILT2活性； (8) 抑制ILT4活性； (9) 抑制表現ILT2之細胞中之ILT2信號傳導； (10) 抑制表現ILT4之細胞中之ILT4信號傳導； (11) 抑制ILT2與MHC I分子之結合； (12) 抑制ILT4與MHC I分子之結合； (13) 抑制ILT2誘導之骨髓細胞阻抑； (14) 抑制ILT4誘導之骨髓細胞阻抑； (15) 抑制ILT2誘導之骨髓細胞活性阻抑； (16) 抑制ILT4誘導之骨髓細胞活性阻抑； (17) 恢復骨髓細胞中之FcR活化； (18) 增強NK細胞活性； (19) 增強CTL活性； (20) 增強巨噬細胞吞噬作用；及 (21) 抑制MDSC介導之免疫細胞阻抑。
- 如請求項1至36中任一項之結合劑或抗體，其中該結合劑或該抗體連接至半衰期延長部分。
- 一種抗體，其與如請求項1至36中任一項之結合劑或抗體競爭結合至人類ILT2及/或ILT4。
- 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至38中任一項之結合劑或抗體及醫藥學上可接受之載劑。
- 一或多種經分離多核苷酸，其編碼如請求項1至39中任一項之結合劑或抗體。
- 一或多種載體，其包含如請求項40之一或多種多核苷酸。
- 一種經分離細胞，其包含如請求項40之一或多種多核苷酸。
- 一種經分離細胞，其包含如請求項41之一或多種載體。
- 一種經分離細胞，其產生如請求項1至36中任一項之結合劑或抗體。
- 抑制或阻斷細胞混合物中ILT2及/或ILT4與MHC I分子之結合之方法，該方法包括使該等細胞與如請求項1至38中任一項之結合劑或抗體或如請求項39之醫藥組合物接觸。
- 抑制或阻斷細胞混合物中MHC I誘導之ILT2及/或ILT4活性之方法，該方法包括使該等細胞與如請求項1至38中任一項之結合劑或抗體或如請求項39之醫藥組合物接觸。
- 如請求項45或46之方法，其中該MHC I分子係HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-E及/或HLA-G。
- 抑制或阻斷ILT2誘導之骨髓細胞阻抑之方法，該方法包括使該等骨髓細胞與如請求項1至15及22至38中任一項之結合劑或抗體接觸。
- 抑制或阻斷ILT4誘導之骨髓細胞阻抑之方法，其包括使該等骨髓細胞與如請求項1至11及16至38中任一項之結合劑或抗體接觸。
- 抑制或阻斷ILT2及/或ILT4誘導之骨髓細胞阻抑之方法，其包括使該等骨髓細胞與如請求項1至38中任一項之結合劑或抗體接觸。
- 一種抑制或減小骨髓源性阻抑細胞(MDSC)活性之方法，該方法包括使該等MDSC與如請求項1至38中任一項之結合劑或抗體接觸。
- 一種增強或增加自然殺手(NK)細胞活性之方法，該方法包括使該等NK細胞與如請求項1至38中任一項之結合劑或抗體接觸。
- 一種增強或增加細胞溶解T淋巴球(CTL)活性之方法，該方法包括使CTL與如請求項1至38中任一項之結合劑或抗體接觸。
- 抑制或阻斷個體中ILT2或ILT4與MHC I分子之結合之方法，該方法包括向該個體投與有效量之如請求項1至38中任一項之結合劑或抗體或如請求項39之醫藥組合物。
- 抑制或阻斷個體中MHC I誘導之ILT2及/或ILT4活性之方法，該方法包括向該個體投與有效量之如請求項1至38中任一項之結合劑或抗體或如請求項39之醫藥組合物。
- 如請求項49或50之方法，其中該MHC I分子係HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-E及/或HLA-G。
- 抑制或阻斷個體中ILT2或ILT4誘導之骨髓細胞阻抑之方法，該方法包括向該個體投與有效量之如請求項1至38中任一項之結合劑或抗體或如請求項39之醫藥組合物。
- 一種抑制或減小個體中之MDSC活性之方法，該方法包括向該個體投與有效量之如請求項1至38中任一項之結合劑或抗體或如請求項39之醫藥組合物。
- 一種增強或增加個體中之NK細胞活性之方法，該方法包括向該個體投與有效量之如請求項1至38中任一項之結合劑或抗體或如請求項39之醫藥組合物。
- 一種增強或增加個體中之CTL活性之方法，該方法包括向該個體投與有效量之如請求項1至38中任一項之結合劑或抗體或如請求項39之醫藥組合物。
- 一種治療個體之癌症之方法，該方法包括向該個體投與治療有效量之如請求項1至38中任一項之結合劑或抗體或如請求項39之醫藥組合物。
- 如請求項61之方法，其中該癌症係間皮瘤、神經膠質母細胞瘤、腎細胞癌、非小細胞肺癌、黑色素瘤、胰管腺癌、胃癌、頭頸部鱗狀細胞癌、膽管癌、乳癌、卵巢癌、子宮頸癌、子宮頸內癌、結腸直腸癌或食管癌。
- 一種抑制個體之腫瘤生長之方法，該方法包括向該個體投與治療有效量之如請求項1至38中任一項之結合劑或抗體或如請求項39之醫藥組合物。
- 一種增加或增強個體對腫瘤或腫瘤細胞之免疫反應之方法，該方法包括向該個體投與治療有效量之如請求項1至38中任一項之結合劑或抗體或如請求項39之醫藥組合物。
- 一種活化或增強個體對腫瘤或腫瘤細胞之持久或長期免疫反應之方法，該方法包括向該個體投與治療有效量之如請求項1至38中任一項之結合劑或抗體或如請求項39之醫藥組合物。
- 一種抑制個體之腫瘤復發或腫瘤再生長之方法，該方法包括向該個體投與治療有效量之如請求項1至38中任一項之結合劑或抗體或如請求項39之醫藥組合物。
- 一種誘導個體中之抑制腫瘤復發或腫瘤再生長之持久或長期免疫性之方法，該方法包括向該個體投與治療有效量之如請求項1至38中任一項之結合劑或抗體或如請求項39之醫藥組合物。
- 如請求項63至67中任一項之方法，其中該腫瘤係胰臟腫瘤、乳房腫瘤、肺腫瘤、非小細胞肺腫瘤、頭頸腫瘤、結腸直腸腫瘤、前列腺腫瘤、皮膚腫瘤、黑色素瘤、胃腫瘤、結腸直腸腫瘤、卵巢腫瘤、子宮頸腫瘤、子宮腫瘤、子宮內膜腫瘤、子宮頸內腫瘤、膀胱腫瘤、腦腫瘤、食管腫瘤、肝腫瘤、腎臟腫瘤、腎腫瘤、間皮瘤、神經膠質母細胞瘤、膽管腫瘤或睪丸腫瘤。
- 一種活化患有腫瘤之個體之腫瘤微環境中之骨髓細胞的方法，該方法包括向該個體投與治療有效量之如請求項1至38中任一項之結合劑或抗體或如請求項39之醫藥組合物。
- 如請求項36、48至51、57及69中任一項之方法，其中該等骨髓細胞係樹突細胞。
- 如請求項36、48至51、57及69中任一項之方法，其中該等骨髓細胞係單核球或巨噬細胞。
- 如請求項54至71中任一項之方法，其中該結合劑或該抗體係作為包含另一治療劑之組合療法之一部分來投與。
- 如請求項72之方法，其中該組合療法包含抗PD-1抗體或抗PD-L1抗體。
- 如請求項73之方法，其中該組合療法包含至少一種其他治療劑。
- 如請求項54至74中任一項之方法，其中該個體係人類。
- 一種如請求項1至39中任一項之結合劑或抗體之用途，其用於治療癌症。
- 一種如請求項1至39中任一項之結合劑或抗體之用途，其用於製造用來治療癌症之藥物。
- 一種醫藥組合物，其包含： (a) 用於抑制ILT2及/或ILT4與I類MHC (例如在腫瘤細胞上)之間之相互作用之劑；及 (b) 醫藥學上可接受之載劑。
- 如請求項78之醫藥組合物，其中該用於抑制ILT2及/或ILT4與I類MHC之間之相互作用之劑包含抗體，該抗體包含含有VH-CDR1、VH-CDR-2及VH-CDR-3之重鏈可變區以及含有VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3之輕鏈可變區，該等CDR來自27F9、47C8、48A5、47H6、Hz47H6.v2、51A1、64A12、Hz64A12、73C4、73D1及Hz73D1.v1中之任一者。
- 一種組合，其包含用於抑制ILT2及/或ILT4與I類MHC (例如在腫瘤細胞上)之間之相互作用之劑，及PD-1或PD-L1活性之調節劑。
- 如請求項73之方法，其中該抗PD-1抗體係派姆單抗(Pembrolizumab，MK-3475；KEYTRUDA)、匹利珠單抗(Pidilizumab，CT-011)、尼沃魯單抗(Nivolumab，OPDIVO)、德瓦魯單抗(Durvalumab，MEDI0680)、西米普利單抗(Cemiplimab，REGN2810)、替雷利珠單抗(Tislelizumab，BGB-A317)、司帕珠單抗(Spartalizumab，PDR-001)或STI-A1110。
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