TW202132309A

TW202132309A - 新穎噻吩并嘧啶酮

Info

Publication number: TW202132309A
Application number: TW109135462A
Authority: TW
Inventors: 馬丁湯瑪斯弗列克; 弗羅利安保羅克里斯添賓德; 喬治達曼; 喬治Ｐ漢恩; 安妮卡翠夏綠蒂希曼; 詹恩斯威爾瓦契
Original assignee: 德商百靈佳殷格翰國際股份有限公司
Priority date: 2019-10-15
Filing date: 2020-10-14
Publication date: 2021-09-01
Also published as: EP4045509A1; AU2020366553A1; KR20220083778A; WO2021074196A1; CL2022000758A1; BR112022003862A2; JP7376706B2; US11136336B2; US20210107918A1; IL292093A; JP2022551712A; CA3153618A1; MX2022004565A; CN114929712A

Abstract

本發明係關於噻吩并嘧啶酮及其作為TRPA1活性抑制劑之用途、含有其之醫藥組合物，以及使用其作為用於治療及/或預防纖維化疾病、發炎性及自體免疫疾病及CNS相關疾病之藥劑的方法。

Description

新穎噻吩并嘧啶酮

瞬時受體電位通道(TRP通道)為一組主要位於眾多哺乳動物細胞類型之質膜上的電壓閘控離子通道。存在大約30個分類為以下群組的結構上相關之TRP通道：TRPA、TRPC、TRPM、TRPML、TRPN、TRPP及TRPV。瞬時受體電位陽離子通道子族A成員1 (TRPA1) (亦稱為瞬時受體電位錨蛋白1)為TRPA基因子族之唯一成員。在結構上，TRPA通道係藉由多個N端錨蛋白重複序列(在人類TRPA1之N端中約14個)表徵，此產生「A」之錨蛋白名稱(Montell, 2005)。

TRPA1高度表現於服務皮膚及肺兩者之背根及結節神經節中的感官神經元之質膜中以及小腸、結腸、胰臟、骨骼肌、心臟、大腦、膀胱及淋巴球中(https://www.proteinatlas.org/)以及人類肺纖維母細胞中。

TRPA1最佳稱為產生軀體感覺模態，諸如疼痛、冷及瘙癢之環境刺激感測器。TRPA1係藉由多個反應性親電子刺激(例如，異硫氰酸烯丙酯、反應性含氧物種)以及非反應性化合物(例如，依色林(icilin))活化，其涉及與哮喘相關之咳嗽、慢性肺阻塞性疾病(COPD)、特發性肺纖維化(idiopathic pulmonary fibrosis；IPF)或病毒後咳嗽或針對慢性特發性咳嗽以及敏感患者之咳嗽。(Song及Chang, 2015； Grace及Belvisi, 2011)。基於展示咳嗽誘導之TGF-β升高的研究，TRPA1抑制劑適用於治療IPF，其中咳嗽由於咳嗽與肺損傷之間的關係而高度流行(Xie等人, 2009；Froese等人, 2016；Tschumperlin等人, 2003；Yamamoto等人, 2002；Ahamed等人, 2008)。TRPA1拮抗劑抑制藉由咳嗽觸發物觸發之鈣信號傳導，諸如香菸煙霧提取物(cigarette smoke extract；CSE)氧化應力、發炎性介體釋放及下調的抗氧化基因表現(Lin等人, 2015；Wang等人, 2019)。TRPA1拮抗劑在異位性皮炎(Oh等人, 2013；Wilson等人, 2013)、接觸性皮炎(Liu等人, 2013)、牛皮癬相關之瘙癢(Wilson等人, 2013)及IL-31依賴性瘙癢(Cevikbas等人, 2014)之研究中有效。人類TRPA1之功能獲得與家族性間歇性疼痛症候群相關(Kremeyer等人, 2010)。TRPA1拮抗劑在偏頭痛相關之觸摸痛之行為模型中有效(Edelmayer等人, 2012)。當與使健康牙齒受神經支配之三叉神經神經節中之TRPA1表現相比時，在使損傷牙齒受神經支配之三叉神經神經節中選擇性增加TRPA1 (Haas等人, 2011)。已知若干種麻醉劑為包括異氟醚(Matta等人, 2008)之TRPA1促效劑，從而向用於減輕術後疼痛之TRPA1抑制劑提供基本原理。用TRPA1拮抗劑治療之TRPA1基因剔除小鼠及野生型小鼠展示抗焦慮樣及抗抑鬱樣表現型(de Moura等人, 2014)。基於展示AMPK與TRPA1之間的反向調節之機制關係之研究，預期TRPA1抑制劑有益於治療糖尿病神經病變(Hiyama等人, 2018；Koivisto及Pertovaara, 2013；Wang等人, 2018)。與野生型小鼠相比，TRPA1基因剔除小鼠展現較小心肌梗塞大小(Conklin等人, 2019)。TRPA1基因剔除及藥理干預抑制小鼠中TNBS誘導之結腸炎(Engel等人, 2011)。在小鼠大腦局部缺血模型中，TRPA1基因剔除及TRPA1拮抗劑減少髓鞘損傷(Hamilton等人, 2016)。尿酸鹽晶體及關節發炎在痛風之單鈉尿酸鹽小鼠模型中之TRPA1基因剔除小鼠中減少(Moilanen等人, 2015)。大鼠中之TRPA1缺失在急性痛風紅腫之大鼠模型中改善了關節發炎及痛覺過敏(Trevisan等人, 2014)。TRPA1之活化引發骨關節炎軟骨細胞中之發炎反應(Nummenmaa等人, 2016)。TRPA1抑制及基因缺失減少骨關節炎小鼠軟骨細胞及鼠類軟骨中之發炎介體(Nummenmaa等人, 2016)。最後，TRPA1基因剔除小鼠在MIA誘發之膝部腫脹模型中展現骨關節炎肢體上之負重改善(Horvath等人, 2016)。TRPA1在膀胱上皮大鼠(Du等人, 2007)中及患有膀胱出口梗阻(Du等人, 2008)之患者中差異性地表現。TRPA1受體調節在脊髓損傷之大鼠模型中減弱膀胱過度活性(Andrade等人, 2011)，且TRPA1拮抗劑之鞘內投藥減輕患有高反射性排尿(hyper-reflexia micturition)之大鼠的環磷醯胺誘導之膀胱炎(Chen等人, 2016)。

因此，需要提供有效的TRPA1抑制劑。

各種結構類別之TRPA1抑制劑綜述於S. Skerratt, Progress in Medicinal Chemistry, 2017, 第56卷, 81-115及D. Preti, G. Saponaro, A. Szallasi, Pharm. Pat. Anal. (2015) 4 (2), 75-94中。

WO2017/060488揭示作為TRPA1拮抗劑之化合物，其具有以下通用結構式

揭示其中實例53 、72 、73 、86 及90 之TRPA1活性，其IC₅₀ 在鈣通量分析中小於100 nM。

L. Schenkel等人, J. Med. Chem. 2016, 59, 2794−2809揭示了基於喹唑啉酮之TRPA1拮抗劑，其包括具有以下通用結構式之化合物

其中化合物31 (其中R為OH)揭示為在FLIPR分析中具有IC₅₀ 58 nM之拮抗TRPA1活性且在人類肝臟微粒體中具有＜14 µL/min/kg之內在清除率。

本發明提供新穎噻吩并嘧啶酮，其出人意料地為TRPA1 (分析A)之有效抑制劑，其進一步藉由以下表徵 - 人類肝臟微粒體(分析B)中之穩定性改善 - 人類肝細胞(分析C)中之穩定性改善。

本發明之化合物與WO2017/060488中之實例53 、72 、73 、86 及90 且與L. Schenkel等人, J. Med. Chem. 2016, 59, 2794−2809中之實例31 在結構上不同之處在於其含有具有醯胺基取代基以及鄰近於次級脂族醇之取代基的噻吩并嘧啶酮核心。此等結構差異意外引起以下之有利組合：(i) TRPA1之抑制、(ii)人類肝臟微粒體中之穩定性，及(iii)人類肝細胞中之穩定性。

因此，本發明之化合物在以下參數之組合方面優於先前技術中揭示之彼等化合物： -作為TRPA1抑制劑之效力 -人類肝臟微粒體中之穩定性 -人類肝細胞中之穩定性。

人類肝臟微粒體中之穩定性係指在選擇及/或設計具有有利藥物動力學特性之藥物作為第一篩檢步驟之情形中化合物對生物轉化的易感性。用於許多藥物之主要代謝部位為肝臟。人類肝臟微粒體含有細胞色素P450 (CYP)，且因此表示用於研究活體外I期藥物代謝之模型系統。人類肝臟微粒體中之經增強穩定性與若干優勢(包括增加的生物可用性及適當的半衰期)相關，其可實現患者之較低及較不頻繁的給藥。因此，人類肝臟微粒體中之經增強穩定性係待用於藥物之化合物的有利特徵。因此，除能夠抑制TRPA1以外，本發明之化合物還預期具有有利的活體內清除率且因此在人類中具有所需之作用持續時間。

人類肝細胞中之穩定性係指在選擇及/或設計具有有利藥物動力學特性之藥物之情形中化合物對生物轉化的易感性。用於許多藥物之主要代謝部位為肝臟。人類肝細胞含有細胞色素P450 (CYP)及其他藥物代謝酶，且因此表示用於研究活體外藥物代謝之模型系統。(重要地，與肝臟微粒體分析相比，肝細胞分析亦涵蓋II期生物轉化以及肝臟特異性轉運體介導之製程，且因此表示用於藥物代謝研究之更完整系統。)人類肝細胞中之經增強穩定性與若干優勢(包括增加的生物可用性及適當的半衰期)相關，其可實現患者之較低及較不頻繁的給藥。因此，人類肝細胞中之經增強穩定性係待用於藥物之化合物的有利特徵。

本發明提供根據式(I)之新穎化合物

其中 A係選自由以下組成之群：苯基、萘基、噻吩基、苯并噻吩基或苯并呋喃基，其視情況經由以下組成之群的一個或兩個成員取代：H、F、Cl、Br、C_1-4 烷基、F_1-3 -氟-C_1-4 烷基、CN、OCH₃ 、環丙基及環丁基，或 A係選自

；及 R¹ 係選自H、C_1-4 烷基、F_1-3 -氟-C_1-4 烷基、C_1-4 烷基-OH或C_1-4 烷基-CN； R² 係選自C_1-2 烷基或Cl；或R¹ 及R² 各自為經由一鍵接合之CH₂ ，從而形成6員環。

本發明之另一實施例係關於一種式(I)化合物，其中A係選自由以下組成之群：苯基或苯并呋喃基，其視情況經由以下組成之群的一個或兩個成員取代：H、F、Cl、Br、C_1-4 烷基、F_1-3 -氟-C_1-4 烷基、CN、OCH₃ 、環丙基及環丁基，或 A係選自

；且取代基R¹ 及R² 係如前述實施例中之任一者中所定義。

本發明之另一實施例係關於一種式(I)化合物，其中A係選自由以下組成之群：苯基或苯并呋喃基，其視情況經由以下組成之群的一個或兩個成員取代：H、F、Cl及CH₃ ；或 A係選自

；且取代基R¹ 及R² 係如前述實施例中之任一者中所定義。

本發明之另一實施例係關於一種式(I)化合物，其中A係選自由以下組成之群：

且取代基R¹ 及R² 係如前述實施例中之任一者中所定義。

本發明之另一實施例係關於一種式(I)化合物，其中R¹ 係選自由以下組成之群：H、CH₃ 、CH₂ CHF₂ 或CH₂ C(CH₃ )₂ OH；且取代基A及R² 係如前述實施例中之任一者中所定義。

本發明之另一實施例係關於一種式(I)化合物，其中R² 為-CH₃ ；且取代基A及R¹ 係如前述實施例中之任一者中所定義。

較佳為式(I)化合物，其選自由以下組成之群：

；且取代基A係如前述實施例中之任一者中所定義。

尤其較佳為根據式(I)之化合物之(S) -對映異構體，其選自由以下組成之群：

。

所使用之術語及定義未在本文中特定定義之術語應被賦予熟習此項技術者鑒於本發明及上下文將對其賦予之含義。然而，如本說明書中所使用，除非相反地說明，否則以下術語具有指定之含義且將遵守以下慣例。

在下文定義之基團(group/radical)或部分中，通常在基團之前指定碳原子數目，例如C_1-6 烷基意謂具有1至6個碳原子之烷基(alkyl group/radical)。一般而言，在如HO、H₂ N、(O)S、(O)₂ S、NC (氰基)、HOOC、F₃ C或類似者之基團中，熟習此項技術者可自基團本身之自由價數看出分子之基團連接點。對於包含兩個或更多個亞基之組合基團，最後命名之亞基為基團連接點，例如取代基「芳基-C_1-3 烷基」意謂與C_1-3 烷基-鍵結之芳基，該C_1-3 烷基-與核心或與取代基所連接之基團鍵結。

在本發明之化合物以化學名稱及化學式形式描繪之情況下，若有任何不一致，則應以化學式為準。星號可用於子式中以指示連接至如所定義之核心分子的鍵。

取代基原子之記數始於最接近核心或最接近取代基所連接之基團的原子。

舉例而言，術語「3-羧丙基-」表示以下取代基：

其中羧基連接至丙基之第三個碳原子。術語「1-甲基丙基-」、「2,2-二甲基丙基-」或「環丙基甲基-」表示以下基團：

星號可用於子式中以指示連接至如所定義之核心分子的鍵。

術語「C_1-n 烷基」 (其中n為選自2、3、4或5之整數)單獨或與另一個基團組合表示具有1至n個C原子之非環狀飽和分支鏈或直鏈烴基。舉例而言，術語C_1-5 烷基包涵基團H₃ C-、H₃ C-CH₂ -、H₃ C-CH₂ -CH₂ -、H₃ C-CH(CH₃ )-、H₃ C-CH₂ -CH₂ -CH₂ -、H₃ C-CH₂ -CH(CH₃ )-、H₃ C-CH(CH₃ )-CH₂ -、H₃ C-C(CH₃ )₂ -、H₃ C-CH₂ -CH₂ -CH₂ -CH₂ -、H₃ C-CH₂ -CH₂ -CH(CH₃ )-、H₃ C-CH₂ -CH(CH₃ )-CH₂ -、H₃ C-CH(CH₃ )-CH₂ -CH₂ -、H₃ C-CH₂ -C(CH₃ )₂ -、H₃ C-C(CH₃ )₂ -CH₂ -、H₃ C-CH(CH₃ )-CH(CH₃ )-及H₃ C-CH₂ -CH(CH₂ CH₃ )-。

術語「F_1-m -氟-C_1-n 烷基」 (其中m為選自2或3之整數且n為選自2、3、4或5之整數)表示如上文所定義之C_1-n 烷基，其中一或多個氫原子經1至m個氟置換。舉例而言，F_1-3 -氟-C_1-2 烷基包涵基團FH₂ C-、F₂ HC-、F₃ C-、FH₂ C-H₂ C-、F₂ HC-H₂ C-、F₃ C-H₂ C-、FH₂ C-FHC-、FH₂ C-F₂ C-、F₂ HC-FHC-、H₃ C-FHC-及H₃ C-F₂ C-。

術語苯基係指以下環之基團

。

術語萘基係指以下環之基團

。

術語噻吩基係指以下環之基團

。

術語苯并噻吩基係指以下環之基團

。

術語噻吩并嘧啶酮係指以下環之基團

且包括

。

術語苯并呋喃基係指以下環之基團

。

術語環丙基係指以下環之基團

。

術語環丁基係指以下環之基團

。

如本文中所使用之術語「經取代」意謂指定原子上之任何一或多個氫經來自所指示基團之選擇置換，其限制條件為不超出指定原子之正常價，且取代產生穩定的化合物。

除非特定指示，否則在整個說明書及隨附申請專利範圍中，給定化學式或名稱應涵蓋互變異構體及所有立體、光學及幾何異構體(例如，對映異構體、非對映異構體、E/Z異構體等)及其外消旋體，以及單獨對映異構體的不同比例之混合物、非對映異構體之混合物或其中存在此等異構體及對映異構體的任何上述形式之混合物，以及其鹽(包括其醫藥學上可接受之鹽)及溶劑合物(諸如水合物)，包括游離化合物之溶劑合物或化合物之鹽之溶劑合物。

一般而言，可根據熟習此項技術者已知之合成原理，例如藉由分離對應混合物、藉由使用立體化學純的起始物質及/或藉由立體選擇性合成來獲得實質上純的立體異構體。此項技術中已知如何製備光學活性形式，諸如藉由外消旋形式之解析或藉由合成，例如，自光學活性起始物質開始及/或藉由使用對掌性試劑。

可經由不對稱合成來製備本發明之對映異構性純化合物或中間物，例如藉由製備及後續分離可藉由已知方法(例如，藉由層析分離或結晶)分離的適當非對映異構化合物或中間物，及/或藉由使用對掌性試劑(諸如對掌性起始物質、對掌性催化劑或對掌性助劑)。

此外，熟習此項技術者已知如何由對應外消旋混合物製備對映異構性純化合物，諸如藉由在對掌性固定相上層析分離對應外消旋混合物；或藉由使用適當解析劑來解析外消旋混合物，例如藉助於外消旋化合物與光學活性酸或鹼一起形成非對映異構鹽，隨後解析該等鹽且自該鹽釋放所需化合物；或藉由用光學活性對掌性輔助試劑衍生對應外消旋化合物，隨後進行非對映異構體分離且移除對掌性輔助基團；或藉由動力學解析外消旋體(例如，藉由酶解析)；藉由在適合條件下自同形異向晶體之聚結物進行對映體選擇性結晶；或藉由在光學活性對掌性助劑之存在下自適合溶劑進行(部分)結晶。

片語「醫藥學上可接受」在本文中用於指在合理醫學判斷範疇內適合使用而無過度毒性、刺激、過敏反應或其他問題或併發症且與合理益處/風險比相稱的彼等化合物、材料、組合物及/或劑型。

如本文中所使用，「醫藥學上可接受之鹽」係指所揭示化合物之衍生物，其中親本化合物與酸或鹼形成鹽或複合物。

與含有鹼性部分之親本化合物一起形成醫藥學上可接受之鹽的酸之實例包括無機酸或有機酸，諸如苯磺酸、苯甲酸、檸檬酸、乙磺酸、反丁烯二酸、龍膽酸、氫溴酸、氫氯酸、順丁烯二酸、蘋果酸、丙二酸、杏仁酸、甲磺酸、4-甲基-苯磺酸、磷酸、柳酸、丁二酸、硫酸及酒石酸。

與含有酸性部分之親本化合物一起形成醫藥學上可接受之鹽的陽離子及鹼之實例包括Na⁺ 、K⁺ 、Ca²⁺ 、Mg²⁺ 、NH₄ ⁺ 、L-精胺酸、2,2'-亞胺雙乙醇、L-離胺酸、N-甲基-D-葡糖胺或參(羥甲基)-胺基甲烷。本發明之醫藥學上可接受之鹽可由含有鹼性或酸性部分之親本化合物藉由習知化學方法合成。一般而言，可藉由使此等化合物之游離酸或游離鹼形式與足夠量之適當鹼或酸在水或有機稀釋劑(如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈)或其混合物中反應來製備此等鹽。

除了例如適用於純化或分離本發明之化合物(例如，三氟乙酸鹽)的上文提及之彼等酸以外的其他酸之鹽亦包含本發明之部分。

生物分析

分析 A ： TRPA1 分析可使用以下活體外TRPA1細胞分析來證實本發明化合物之活性：方法：過度表現人類TRPA1離子通道之人類HEK293細胞株(Perkin Elmer，產品編號AX-004-PCL)用作化合物功效及效力之測試系統。藉由在FLIPRtetra系統(Molecular Devices)中量測化合物對由AITC (異硫氰酸烯丙酯(Allylisothiocyanat))促效作用誘導之胞內鈣濃度的影響來測定化合物活性。

細胞培養：在低溫小瓶中獲得呈冷凍細胞形式之細胞且將其儲存直至在-150℃下使用為止。

使細胞在培養基(具有10% FCS及0.4 mg/ML遺傳黴素(Geneticin)之MEM/EBSS培養基)中生長。重要的係密度不超出90%匯合率。為了傳代培養，由Versene (EDTA溶液)將細胞自燒瓶剝離。在分析之前一天，將細胞剝離，用培養基(具有10% FCS之MEM/EBSS培養基)洗滌兩次且以20微升/孔將20000個細胞接種至來自Corning的經多聚D-溶素(Poly D-Lysin)生物塗佈之384孔盤(黑色，透明底部，目錄號356697)。在用於分析之前，將盤在37℃/5% CO₂ 下培育24小時。

化合物製備將測試化合物以10 mM之濃度溶解於100% DMSO中，且在第一步驟中稀釋於DMSO中，達5 mM之濃度，隨後為在100% DMSO中進行之連續稀釋步驟。稀釋因子及稀釋步驟之數目可根據需要而變化。通常，製備8種不同濃度之1:5稀釋液，物質之其他中間物稀釋液(1:20)利用HBSS/HEPES緩衝液(1×HEPES，來自Gibco之目錄號14065；20 mM HEPES，來自SIGMA之目錄號83264；0.1% BSA，來自Invitrogen之目錄號11926)，pH 7.4進行。

FLIPR分析：在分析日，將細胞用分析緩衝液洗滌3次，在洗滌之後使20 µL緩衝液保留在孔中。將含10 µL Ca6套組(目錄號R8191，MolecularDevices)負載緩衝液之HBSS/HEPES添加至細胞中且將盤罩蓋著在37℃/5% CO₂ 下一起培育120分鐘。將含10 µL化合物或對照之來自中間物稀釋液盤之HBSS/HEPES緩衝液/5% DMSO謹慎地添加至孔中。在FLIPRtetra裝置上讀取發光(指示鈣流入或釋放)10分鐘，以監測化合物誘導之效果(例如，促效作用)。最後，將溶解於HBSS/HEPES緩衝液/0.05% DMSO中之10 µL促效劑AITC 50 µM (最終濃度10 µM)添加至孔中，隨後在FLIPRtetra裝置上額外讀取10分鐘。在AITC添加之後，信號曲線下面積(AUC)係用於IC50/抑制%計算。

資料評估及計算：各分析微量滴定盤含有具有媒劑(1% DMSO)對照而非化合物作為AITC誘導之發光的對照(100% CTL；高對照)之孔；及具有媒劑對照而無AITC作為發光之非特異性變化的對照(0% CTL；低對照)之孔。

藉由計算個別孔之信號曲線下面積來進行資料分析。基於此值，使用MegaLab軟體(內部研發)計算各物質濃度量測值% (AUC(樣品) - AUC(低))*100/(AUC(高) - AUC(低))。使用MegaLab軟體，根據對照值%計算IC50值。計算：[y=(a-d)/(1+(x/c)^b)+d]，a =低值，d =高值；x =濃度M；c=IC50 M；b =希爾(hill)；y =對照%

表1：如分析A中所獲得之本發明化合物的生物資料。

實例	hTRPA1 IC₅₀ [nM]
1	13
2	20
3	19
4	33
5	48
6	48
7	34
8	56
9	78
10	52
11	10
12	15
13	37
14	33
15	9
16	16

表2：如分析A中所獲得之先前技術化合物(WO2017/060488中之實例53 、72 、73 、86 、90 )的生物資料。

WO2017/060488中之實例	hTRPA1 IC₅₀ [nM]
53	36
72	14
73	35
86	67
90	41

表3：如分析A中所獲得之先前技術化合物(L. Schenkel等人, J. Med. Chem. 2016, 59, 2794−2809中之實例31 )的生物資料。

Med. Chem. 2016, 59, 2794−2809中之實例	hTRPA1 IC₅₀ [nM]
31	52

分析 B ： 微粒體清除率 ：在37℃下用混合的肝臟微粒體分析測試化合物之代謝降解。每個時間點之100 µl最終培育體積含有處於RT之TRIS緩衝液pH 7.6 (0.1 M)、氯化鎂(5 mM)、微粒體蛋白(1 mg/ml)及最終濃度為1 µM之測試化合物。

在37℃下之短預培育時段之後，反應係藉由添加還原形式之β-菸鹼醯胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH，1 mM)起始且藉由在不同時間點(0、5、15、30、60 min)後將等分試樣轉移至溶劑中來終止。另外，在不具有NADPH之培育時監測NADPH非依賴性降解，在最後時間點終止。NADPH非依賴性培育之後的剩餘測試化合物[%]係由參數c (對照) (代謝穩定性)反映。藉由離心(10000 g，5 min)來集結經淬滅之培育物。

藉由LC-MS/MS分析上清液之等分試樣中的親本化合物量。藉由濃度-時間特徵曲線之半對數繪圖的斜率來測定半衰期(t1/2活體外)。

藉由考慮蛋白質於培育物中之量來計算內在清除率(CL_INTRINSIC)： CL_INTRINSIC [µl/min/mg蛋白質] = (Ln 2/ (半衰期[min] * 蛋白質含量[mg/ml])) * 1000 CL_INTRINSIC_INVIVO [ml/min/kg] = (CL_INTRINSIC [µL/min/mg蛋白質] × MPPGL [毫克蛋白質/公克肝臟] × 肝臟因子[g/kg體重]) / 1000 Qh [%] = CL [ml/min/kg] / 肝血流量[ml/min/kg] 人類之肝細胞性：120×10e6個細胞/公克肝臟人類之肝臟因子：25.7 g/kg體重人類之血流量：21 ml/(min × kg)

表4：如分析B中所獲得之本發明化合物的生物資料。

實例	人類LM [%Qh]
1	29
2	＜23
3	＜23
4	＜23
5	＜23
6	＜23
7	23
8	＜23
9	29
10	＜23
11	＜23
12	24
13	＜23
14	＜23
15	＜23
16	＜23

表5：如分析B中所獲得之先前技術化合物(WO2017/060488中之實例53 、72 、73 、86 、90 )的生物資料。

WO2017/060488中之實例	人類LM [%Qh]
53	＜23
72	30
73	38
86	＜23
90	39

表6：如分析B中所獲得之先前技術化合物(L. Schenkel等人, J. Med. Chem. 2016, 59, 2794−2809中之實例31 )的生物資料。

Med. Chem. 2016, 59, 2794−2809中之實例	人類LM [%Qh]
31	＜23

分析 C ： 肝細胞清除率 在肝細胞懸浮液中分析測試化合物之代謝降解。將肝細胞(冷凍保存)培育於含有5%或50%物種血清之杜爾貝科改良伊格爾培養基(Dulbecco´s modified eagle medium) (補充有3.5 µg升糖素/500 mL、2.5 mg胰島素/500 mL及3.75 mg/500 mL氫皮質酮(hydrocortison))。

在培育箱(37℃，10% CO₂ )中預培育30 min之後，將5 µl測試化合物溶液(80 µM；用培養基自2 mM之DMSO儲備溶液以1:25稀釋)添加至395 µl肝細胞懸浮液中(視物種而定，細胞密度在0.25-5 Mio細胞/毫升範圍內，通常為1 Mio細胞/毫升；測試化合物之最終濃度為1 µM，最終DMSO濃度為0.05%)。

培育細胞六小時(培育箱，回旋震盪器)，且在0、0.5、1、2、4及6小時時取出樣品(25 µl)。將樣品轉移至乙腈中且藉由離心(5 min)集結。將上清液轉移至新的96深孔盤，在氮氣下蒸發且再懸浮。

藉由LC-MS/MS來分析親本化合物之減少如下計算CLint：CL_INTRINSIC =劑量/ AUC = (C0/CD) / (AUD + clast/k)×1000/60。C0：培育時之初始濃度[μM]，CD：活細胞之細胞密度[10e6個細胞/毫升]，AUD：資料下面積[μM×h]，clast：最後一個資料點之濃度[μM]，k：用於親本減少之回歸線之斜率[h-1]。

所計算之活體外肝內在清除率可按比例擴大為活體內內在肝清除率，且用於藉由使用肝臟模型(良好攪拌模型)來預測活體內肝血液清除率(CL)。 CL_INTRINSIC_INVIVO [ml/min/kg] = (CL_INTRINSIC [µL/min/10e6個細胞] × 肝細胞性[10e6個細胞/公克肝臟] × 肝臟因子[g/kg體重]) / 1000 CL [ml/min/kg] = CL_INTRINSIC_INVIVO [ml/min/kg] × 肝血流量[ml/min/kg] / (CL_INTRINSIC_INVIVO [ml/min/kg] + 肝血流量[ml/min/kg]) Qh [%] = CL [ml/min/kg] / 肝血流量[ml/min/kg] 人類之肝細胞性：120×10e6個細胞/公克肝臟人類之肝臟因子：25.7 g/kg體重人類之血流量：21 ml/(min × kg)

表7：如分析C中所獲得之本發明化合物的生物資料。

實例	人類肝細胞[%Qh]
1	25
2	29
3	36
4	29
5	37
6	23
7	39
8	24
9	24
10	25
11	29
12	36
13	18
14	24
15	31
16	39

表8：如分析C中所獲得之先前技術化合物(WO2017/060488中之實例53 、72 、73 、86 、90 )的生物資料。

WO2017/060488中之實例	人類肝細胞[%Qh]
53	25
72	50
73	36
86	12
90	61

表9：如分析C中所獲得之先前技術化合物(L. Schenkel等人, J. Med. Chem. 2016, 59, 2794−2809中之實例31 )的生物資料。

Med. Chem. 2016, 59, 2794−2809中之實例	人類肝細胞[%Qh]
31	73

治療方法本發明係關於通式1之化合物，其適用於預防及/或治療與TRPA1活性相關或由TRPA1活性調節之疾病及/或病狀，包括(但不限於)治療及/或預防纖維化疾病、發炎性及免疫調節病症、呼吸道或胃腸道疾病或不適、眼科疾病、關節之發炎性疾病以及鼻咽、眼睛及皮膚之發炎性疾病。該等病症、疾病及不適包括咳嗽、特發性肺纖維化、其他肺間質性疾病及其他纖維化、哮喘或過敏性疾病、嗜酸性球性疾病、慢性阻塞性肺病以及自體免疫性病變(諸如類風濕性關節炎及動脈粥樣硬化)、疼痛及神經病症(諸如抑鬱)。

通式1之化合物適用於預防及/或治療： (1) 咳嗽，諸如慢性特發性咳嗽或慢性難治性咳嗽、與哮喘相關之咳嗽、COPD及肺癌以及病毒後咳嗽。 (2) 肺纖維化疾病，諸如肺炎或與膠原性疾病相關之間質性肺炎(例如，紅斑狼瘡、全身性硬皮病、類風濕性關節炎、多發性肌炎及皮肌炎(dermatomysitis))、特發性間質性肺炎(諸如特發性肺纖維化(IPF))、非特異性間質性肺炎、呼吸性細支氣管炎相關之間質性肺病、落屑性間質性肺炎(desquamative interstitial pneumonia)、隱原性機化性肺炎(cryptogenic orgainizing pneumonia)、急性間質性肺炎及淋巴球性間質性肺炎、淋巴管肌瘤病(lymangioleiomyomatosis)、肺泡性蛋白沈積症(pulmonary alveolar proteinosis)、蘭格漢氏細胞組織細胞增生症(Langerhan's cell histiocytosis)、胸膜實質纖維彈性組織增生症(pleural parenchymal fibroelastosis)、已知病因之間質性肺病，諸如因職業暴露而引起之間質性肺炎，諸如石棉沈著病(asbestosis)、矽肺病(silicosis)、礦工肺(煤塵)、農民肺(乾草及黴菌)、養鴿人肺(鳥類)或其他職業表演者觸發物(諸如金屬灰塵或分枝桿菌)，或因治療(諸如輻射、甲胺喋呤(methotrexate)、胺碘酮、呋喃妥因(nitrofurantoin)或化學治療劑)引起之間質性肺炎，或針對肉芽腫性疾病之間質性肺炎，諸如肉芽腫性多血管炎(granulomatosis with polyangitis)、徹奇-斯全司症候群(Churg-Strauss syndrome)、類肉瘤病、過敏性肺炎，或由不同來源引起之間質性肺炎，該等來源例如抽吸、毒性氣體之吸入、蒸氣、支氣管炎或肺炎，或由心衰竭、X射線、輻射、化學療法、結節病(M. boeck)或類肉瘤病、肉芽腫病、囊腫性纖維化或黏液黏稠病或α-1-抗胰蛋白酶不足引起之間質性肺炎。 (3) 其他纖維化疾病，諸如肝橋接纖維化、肝硬化、非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)、心房纖維化、心內膜心肌纖維化、陳舊性心肌梗塞、膠質疤痕、動脈僵硬、關節纖維化、杜普宜特朗氏攣縮(Dupuytren's contracture)、瘢痕瘤、硬皮病/全身性硬化症、縱隔纖維化、骨髓纖維化、佩洛尼氏病(Peyronie's disease)、腎源性系統性纖維化、腹膜後纖維化、黏連性囊炎。 (4) 發炎性、自體免疫或過敏性疾病及病狀，諸如過敏性或非過敏性鼻炎或鼻竇炎、慢性鼻竇炎或鼻炎、鼻息肉病、慢性鼻竇炎、急性鼻竇炎、哮喘、兒童哮喘、過敏性支氣管炎、肺泡炎、高敏性氣道(hyperreactive airway)、過敏性結膜炎、支氣管擴張、成人呼吸窘迫症候群、支氣管及肺水腫、支氣管炎或肺炎、嗜酸性球性蜂巢組織炎(eosinophilic cellulites) (例如，維爾氏症候群(Well's syndrome))、嗜酸性球性肺炎(例如，呂弗勒氏症候群(Loeffler's syndrome)、慢性嗜酸性球性肺炎)、嗜酸性球性筋膜炎(例如，舒爾曼氏症候群(Shulman's syndrome))、遲發型過敏症、非過敏性哮喘；運動誘導之支氣管收縮；慢性阻塞性肺病(COPD)、急性支氣管炎、慢性支氣管炎、咳嗽、肺氣腫；全身性過敏反應或超敏反應、藥物過敏(例如，對青黴素、頭孢菌素過敏)、由於攝入經污染之色胺酸而引起之嗜酸細胞增多性肌痛症候群(eosinophiliamyalgia syndrome)、昆蟲蜇傷過敏；自體免疫性疾病，諸如類風濕性關節炎、格雷夫氏病(Graves' disease)、休格連氏症候群(Sjogren's syndrome)、牛皮癬性關節炎、多發性硬化症、全身性紅斑性狼瘡症、重症肌無力、免疫血小板減少症(成年ITP、新生兒血小板減少症、兒童ITP)、免疫溶血性貧血(自體免疫及藥物誘導)、伊凡氏症候群(Evans syndrome) (血小板及紅血球免疫血細胞減少症)、新生兒之Rh疾病、古巴斯德氏症候群(Goodpasture's syndrome) (抗GBM疾病)、腹瀉、自體免疫性心臟肌病青少年發病型糖尿病(autoimmune cardio-myopathy juvenile onset diabete)；絲球體腎炎、自體免疫甲狀腺炎、白塞氏病(Behcet's disease)；移植排斥反應(例如，移植中)，包括同種異體移植排斥反應或移植物抗宿主病；發炎性腸病，諸如克羅恩氏病(Crohn's disease)及潰瘍性結腸炎；脊椎關節病；硬皮病；牛皮癬(包括T細胞介導之牛皮癬)及發炎性皮膚病，諸如皮炎、濕疹、異位性皮炎、過敏性接觸性皮炎、蕁麻疹；血管炎(例如，壞死性血管炎、皮膚血管炎及超敏血管炎)；結節性紅斑；嗜酸性球性肌炎、嗜酸性球性筋膜炎、患有皮膚或器官之白血球浸潤之癌症；眼科疾病，諸如年齡相關黃斑變性、糖尿病性視網膜病變及糖尿病黃斑水腫、角膜炎、嗜酸性球性角膜炎、角膜結膜炎、春季角膜結膜炎、疤痕、前段疤痕(anterior segment scarring)、瞼炎、瞼結膜炎、大皰性病症、瘢痕性類天疱瘡、結膜黑素瘤、乳頭狀結膜炎、乾眼、上鞏膜炎、青光眼、神經膠瘤病、環狀肉芽腫(Granuloma annulare)、格雷夫氏眼病(Graves' ophthalmopathy)、眼內黑素瘤、結膜黃斑、增生性玻璃體視網膜病變(proliferative vitreoretinopathy)、翼狀胬肉(pterygia)、鞏膜炎、葡萄膜炎、急性痛風紅腫、痛風或骨關節炎。 (5) 疼痛，諸如慢性特發性疼痛症候群、神經痛、感覺遲鈍、觸摸痛、偏頭痛、牙痛及術後疼痛。 (6) 抑鬱、焦慮、糖尿病神經病變及膀胱病症，諸如膀胱出口梗阻、膀胱過動症、膀胱炎；心肌再灌注損傷或大腦局部缺血損傷。

因此，本發明係關於一種通式1之化合物，其用作藥劑。

此外，本發明係關於一種通式1之化合物的用途，其用於治療及/或預防與TRPA1活性相關或由TRPA1活性調節之疾病及/或病狀。

此外，本發明係關於一種通式1之化合物的用途，其用於治療及/或預防纖維化疾病、發炎性及免疫調節病症、呼吸道或胃腸道疾病或不適、眼科疾病、關節之發炎性疾病以及鼻咽、眼睛及皮膚之發炎性疾病。該等病症、疾病及不適包括咳嗽、特發性肺纖維化、其他肺間質性疾病及其他纖維化、哮喘或過敏性疾病、嗜酸性球性疾病、慢性阻塞性肺病以及自體免疫性病變，諸如類風濕性關節炎及動脈粥樣硬化。

此外，本發明係關於一種通式1之化合物的用途，其用於治療及/或預防： (1) 咳嗽，諸如慢性特發性咳嗽或慢性難治性咳嗽、與哮喘相關之咳嗽、COPD及肺癌以及病毒後咳嗽。 (2) 肺纖維化疾病，諸如肺炎或與膠原性疾病相關之間質性肺炎(例如，紅斑狼瘡、全身性硬皮病、類風濕性關節炎、多發性肌炎及皮肌炎)、特發性間質性肺炎(諸如特發性肺纖維化(IPF))、非特異性間質性肺炎、呼吸性細支氣管炎相關之間質性肺病、落屑性間質性肺炎、隱原性機化性肺炎、急性間質性肺炎及淋巴球性間質性肺炎、淋巴管肌瘤病、肺泡性蛋白沈積症、蘭格漢氏細胞組織細胞增生症、胸膜實質纖維彈性組織增生症、已知病因之間質性肺病，諸如因職業暴露而引起之間質性肺炎，諸如石棉沈著病、矽肺病、礦工肺(煤塵)、農民肺(乾草及黴菌)、養鴿人肺(鳥類)或其他職業表演者觸發物(諸如金屬灰塵或分枝桿菌)，或因治療(諸如輻射、甲胺喋呤、胺碘酮、呋喃妥因或化學治療劑)引起之間質性肺炎，或針對肉芽腫性疾病之間質性肺炎，諸如肉芽腫性多血管炎、徹奇-斯全司症候群、類肉瘤病、過敏性肺炎，或由不同來源引起之間質性肺炎，該等來源例如抽吸、毒性氣體之吸入、蒸氣、支氣管炎或肺炎，或由心衰竭、X射線、輻射、化學療法、結節病或類肉瘤病、肉芽腫病、囊腫性纖維化或黏液黏稠病或α-1-抗胰蛋白酶不足引起之間質性肺炎。 (3) 其他纖維化疾病，諸如肝橋接纖維化、肝硬化、非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)、心房纖維化、心內膜心肌纖維化、陳舊性心肌梗塞、膠質疤痕、動脈僵硬、關節纖維化、杜普宜特朗氏攣縮、瘢痕瘤、硬皮病/全身性硬化症、縱隔纖維化、骨髓纖維化、佩洛尼氏病、腎源性系統性纖維化、腹膜後纖維化、黏連性囊炎。 (4) 發炎性、自體免疫或過敏性疾病及病狀，諸如過敏性或非過敏性鼻炎或鼻竇炎、慢性鼻竇炎或鼻炎、鼻息肉病、慢性鼻竇炎、急性鼻竇炎、哮喘、兒童哮喘、過敏性支氣管炎、肺泡炎、高敏性氣道、過敏性結膜炎、支氣管擴張、成人呼吸窘迫症候群、支氣管及肺水腫、支氣管炎或肺炎、嗜酸性球性蜂巢組織炎(例如，維爾氏症候群)、嗜酸性球性肺炎(例如，呂弗勒氏症候群、慢性嗜酸性球性肺炎)、嗜酸性球性筋膜炎(例如，舒爾曼氏症候群)、遲發型過敏症、非過敏性哮喘；運動誘導之支氣管收縮；慢性阻塞性肺病(COPD)、急性支氣管炎、慢性支氣管炎、咳嗽、肺氣腫；全身性過敏反應或超敏反應、藥物過敏(例如，對青黴素、頭孢菌素過敏)、由於攝入經污染之色胺酸而引起之嗜酸細胞增多性肌痛症候群、昆蟲蜇傷過敏；自體免疫性疾病，諸如類風濕性關節炎、格雷夫氏病、休格連氏症候群、牛皮癬性關節炎、多發性硬化症、全身性紅斑性狼瘡症、重症肌無力、免疫血小板減少症(成年ITP、新生兒血小板減少症、兒童ITP)、免疫溶血性貧血(自體免疫及藥物誘導)、伊凡氏症候群(血小板及紅血球免疫血細胞減少症)、新生兒之Rh疾病、古巴斯德氏症候群(抗GBM疾病)、腹瀉、自體免疫性心臟肌病青少年發病型糖尿病；絲球體腎炎、自體免疫甲狀腺炎、白塞氏病；移植排斥反應(例如，移植中)，包括同種異體移植排斥反應或移植物抗宿主病；發炎性腸病，諸如克羅恩氏病及潰瘍性結腸炎；脊椎關節病；硬皮病；牛皮癬(包括T細胞介導之牛皮癬)及發炎性皮膚病，諸如皮炎、濕疹、異位性皮炎、過敏性接觸性皮炎、蕁麻疹；血管炎(例如，壞死性血管炎、皮膚血管炎及超敏血管炎)；結節性紅斑；嗜酸性球性肌炎、嗜酸性球性筋膜炎、患有皮膚或器官之白血球浸潤之癌症；眼科疾病，諸如年齡相關黃斑變性、糖尿病性視網膜病變及糖尿病黃斑水腫、角膜炎、嗜酸性球性角膜炎、角膜結膜炎、春季角膜結膜炎、疤痕、前段疤痕、瞼炎、瞼結膜炎、大皰性病症、瘢痕性類天疱瘡、結膜黑素瘤、乳頭狀結膜炎、乾眼、上鞏膜炎、青光眼、神經膠瘤病、環狀肉芽腫、格雷夫氏眼病、眼內黑素瘤、結膜黃斑、增生性玻璃體視網膜病變、翼狀胬肉、鞏膜炎、葡萄膜炎、急性痛風紅腫、痛風或骨關節炎。 (5) 疼痛，諸如慢性特發性疼痛症候群、神經痛、感覺遲鈍、觸摸痛、偏頭痛、牙痛及術後疼痛。 (6) 抑鬱、焦慮、糖尿病神經病變及膀胱病症，諸如膀胱出口梗阻、膀胱過動症、膀胱炎；心肌再灌注損傷或大腦局部缺血損傷。

在另一態樣中，本發明係關於一種通式1之化合物，其用於治療及/或預防上文所提及之疾病及病狀。

在另一態樣中，本發明係關於一種通式1之化合物的用途，其用於製備用於治療及/或預防上文所提及之疾病及病狀的藥劑。

在本發明之另一態樣中，本發明係關於用於治療或預防上文所提及之疾病及病狀的方法，該方法包含向人類投與有效量的通式1化合物。

組合療法 本發明之化合物可進一步與一或多種，較佳一種額外治療劑組合。根據一個實施例，額外治療劑係選自以下之群：適用於治療上文所描述，特定言之與纖維化疾病、發炎性及免疫調節病症、呼吸道或胃腸道疾病或不適、關節或鼻咽、眼睛及皮膚之發炎性疾病或病狀(諸如咳嗽)、特發性肺纖維化、其他肺間質性疾病、哮喘或過敏性疾病、嗜酸性球性疾病、慢性阻塞性肺病、異位性皮炎以及自體免疫性病變(諸如類風濕性關節炎及動脈粥樣硬化)相關之疾病或病狀的治療劑；或適用於治療眼科疾病、疼痛及抑鬱之治療劑。

適用於此類組合之額外治療劑特定言之包括例如強化關於所提及之適應症中之一者的一或多種活性物質之治療效果及/或使一或多種活性物質之劑量減少的彼等治療劑。

因此，本發明之化合物可與一或多種選自由以下組成之群的額外治療劑組合：抗纖維化劑、抗咳嗽劑、抗炎劑、抗異位性皮炎劑、鎮痛劑、抗驚厥劑、抗焦慮劑、鎮靜劑、骨骼肌鬆弛劑或抗抑鬱劑。

抗纖維化劑為例如尼達尼布(nintedanib)、吡非尼酮(pirfenidone)、磷酸二酯酶-IV (PDE4)抑制劑(諸如羅氟司特(roflumilast))、自分泌運動因子抑制劑(諸如GLPG-1690或BBT-877)；結締組織生長因子(connective tissue growth factor；CTGF)阻斷抗體，諸如潘瑞魯單抗(Pamrevlumab)；B細胞活化因子受體(BAFF-R)阻斷抗體，諸如蘭拉魯單抗(Lanalumab)；α-V/β-6阻斷抑制劑(諸如BG-00011/STX-100)、重組正五聚素蛋白-2 (PTX-2) (諸如PRM-151)；c-Jun N端激酶(JNK)抑制劑，諸如CC-90001；半乳糖凝集素-3抑制劑，諸如TD-139；G蛋白偶合受體84 (GPR84)抑制劑，諸如GLPG-1205；G蛋白偶合受體84/G蛋白偶合受體40雙抑制劑，諸如PBI-4050；Rho相關含有捲曲螺旋之蛋白激酶2 (ROCK2)抑制劑，諸如KD-025；熱休克蛋白47 (HSP47)小干擾RNA，諸如BMS-986263/ND-L02-s0201；Wnt路徑抑制劑，諸如SM-04646；LD4 / PDE3/4抑制劑，諸如泰魯司特(Tipelukast)；組胺醯基tRNA合成酶(HARS)之重組免疫調節域，諸如ATYR-1923；前列腺素合成酶抑制劑，諸如ZL-2102/SAR-191801；15-羥基-二十碳五烯酸(15-HEPE，例如DS-102)；離胺醯氧化酶樣2 (LOXL2)抑制劑，諸如PAT-1251、PXS-5382/PXS-5338；磷酸肌醇3-激酶(PI3K)/哺乳動物雷帕黴素靶蛋白(mammalian target of rapamycin；mTOR)雙抑制劑，諸如HEC-68498；鈣蛋白酶抑制劑，諸如BLD-2660；促分裂原活化蛋白激酶激酶激酶(mitogen-activated protein kinase kinase kinase，MAP3K19)抑制劑，諸如MG-S-2525；殼質酶抑制劑，諸如OATD-01；經促分裂原活化蛋白激酶活化之蛋白激酶2 (MAPKAPK2)抑制劑，諸如MMI-0100；轉型生長因子β 1 (TGF-β1)小干擾RNA，諸如TRK250/BNC-1021；或溶血磷脂酸受體拮抗劑，諸如BMS-986278。

抗咳嗽劑為例如嘌呤受體3 (P2X3)受體拮抗劑，諸如吉法匹生(gefapixant)、S-600918、BAY-1817080或BLU-5937；神經激肽1 (NK-1)受體拮抗劑，諸如奧維匹坦(Orvepitant)、阿瑞匹坦(Aprepitant)；菸鹼酸乙醯膽鹼受體α 7亞單位刺激劑，諸如ATA-101/布達尼寧(bradanicline)；可待因(codeine)、加巴噴丁(gabapentin)、普瑞巴林(pregablin)或阿奇黴素(azithromycin)。

抗炎劑為例如皮質類固醇，諸如普賴蘇穠(prednisolone)或地塞米松(dexamethasone)；環加氧酶-2 (COX2)抑制劑，諸如塞內昔布(celecoxib)、羅非考昔(rofecoxib)、帕瑞考昔(parecoxib)、伐地考昔(valdecoxib)、地拉考昔(deracoxib)、依託考昔(etoricoxib)或盧米羅可(lumiracoxib)；前列腺素E2拮抗劑；白三烯B4拮抗劑；白三烯D4拮抗劑，諸如孟魯司特(monteleukast)；5-脂肪加氧酶抑制劑；或其他非類固醇抗炎劑(NSAID)，諸如阿司匹靈(aspirin)、雙氯芬酸(diclofenac)、二氟尼柳(diflunisal)、依託度酸(etodolac)、布洛芬(ibuprofen)或吲哚美辛(indomethacin)。

抗異位性皮炎劑為例如環孢素(cyclosporin)、甲胺喋呤、黴酚酸嗎啉乙酯(mycophenolate mofetil)、硫唑嘌呤(azathioprine)、磷酸二酯酶抑制劑(例如，阿普司特(apremilast)、克里博羅(crisaborole))、Janus相關激酶(JAK)抑制劑(例如，托法替尼(tofacitinib))、抗IL-4/IL-13之中和抗體(例如，杜比拉單抗(dupilamab))、IL-13 (例如，雷布瑞奇單抗(lebrikizumab)、塔羅金單抗(tralokinumab))及IL-31 (尼立珠單抗(nemolizumab))。

鎮痛劑為例如類鴉片類型之鎮痛劑，諸如嗎啡、氧化嗎啡、左旋丹皮酚(levopanol)、羥考酮、丙氧吩(propoxyphene)、納美芬(nalmefene)、芬太尼(fentanyl)、氫可酮、氫嗎啡酮(hydromorphone)、美利皮定(meripidine)、美沙酮(methadone)、納洛芬(nalorphine)、納洛酮(naloxone)、納曲酮(naltrexone)、丁丙諾啡(buprenorphine)、布托啡諾(butorphanol)、納布啡(nalbuphine)、噴他佐辛(pentazocine)；或非類鴉片類型之鎮痛劑，諸如乙醯芬尼明(acetophenamine)。

抗抑鬱劑為例如三環抗抑鬱劑，諸如阿米替林(amitriptyline)、氯米帕明(clomipramine)、去甲丙咪𠯤(despramine)、多塞平(doxepin)、地昔帕明(desipramine)、伊米帕明(imipramine)、去甲替林(nortriptyline)；選擇性血清素再吸收抑制劑抗抑鬱劑(SSRI)，諸如氟西汀(fluoxetine)、帕羅西汀(paroxetine)、舍曲林(sertraline)、西它普蘭(citalopram)、艾司西酞普(escitalopram)；去甲腎上腺素再吸收抑制劑抗抑鬱劑(SNRI)，諸如麥普替林(maprotiline)、洛夫帕明(lofepramine)、米氮平(mirtazapine)、羥丙替林(oxaprotiline)、非左拉明(fezolamine)、托莫西汀(tomoxetine)、米安色林(mianserin)、丁胺苯丙酮(buproprion)、羥基丁胺苯丙酮(hydroxybuproprion)、諾米芬辛(nomifensine)、維洛沙𠯤(viloxazine)；雙血清素-去甲腎上腺素再吸收抑制劑抗抑鬱劑(SNRI)，諸如度洛西汀(duloxetine)、文拉法辛(venlafaxine)、去甲文拉法辛(desvenlafaxine)、左米那普侖(levomilnacipran)；非典型抗抑鬱劑，諸如曲唑酮(trazodone)、米氮平、沃替西汀(vortioxetine)、維拉唑酮(vilazodone)、安非他酮(bupropion)；或單胺氧化酶抑制劑抗抑鬱劑(MAOI)，諸如反苯環丙胺(tranylcypromine)、苯乙肼(phenelzine)或異卡波肼(isocarboxazid)。

抗焦慮劑為例如苯并二氮呯(benzodiazepine)，諸如阿普唑侖(alprazolam)、溴西泮(bromazepam)、氯氮卓(chlordiazepoxide)、氯硝西泮(clonazepam)、氯氮平酸鹽(clorazepate)、安定(diazepam)、弗西泮(flurazepam)、勞拉西泮(lorazepam)、奧沙西泮(oxazepam)、替馬西泮(temazepam)、三唑侖(triazolam)或托非索泮(tofisopam)；或其為非苯并二氮呯催眠藥，諸如艾司佐匹克隆(eszopiclone)、紮來普隆(zaleplon)、唑吡坦(zolpidem)或佐匹克隆(zopiclone)；或其為胺基甲酸酯，例如美普巴(meprobamate)、肌安寧(carisoprodol)、泰巴胺酯(tybamate)或勞胺酯(lorbamate)；或其為抗組織胺，諸如羥𠯤(hydroxyzine)、氯芬尼拉明(chlorpheniramine)或苯海拉明(diphenhydramine)。

鎮靜劑為例如巴比妥酸鹽鎮靜劑，諸如異戊巴比妥(amobarbital)、阿普比妥(aprobarbital)、布塔巴比妥(butabarbital)、布他比妥(butabital)、甲苯巴比妥(mephobarbital)、甲巴比妥(metharbital)、美索比妥(methohexital)、戊巴比妥(pentobarbital)、司可巴比妥(secobarbital)、他布比妥(talbutal)、塞米樂(theamylal)或硫噴妥(thiopental)；或其為非巴比妥酸鹽鎮靜劑，諸如格魯米特(glutethimide)、美普巴、甲喹酮(methaqualone)或二氯芬尼酮(dichloalphenazone)。

骨骼肌鬆弛劑為例如氯苯胺丁酸(baclofen)、美普巴、肌安寧、環苯紮平(cyclobenzaprine)、美他沙酮(metaxalone)、美索巴莫(methocarbamol)、替紮尼定(tizanidine)、氯唑沙宗(chlorzoxazone)或奧芬那君(orphenadrine)。

其他適合之組合搭配物為乙醯膽鹼酯酶抑制劑之抑制劑，諸如多奈哌齊(donepezil)；5-HT-3拮抗劑，諸如昂丹司瓊(ondansetron)；代謝型麩胺酸受體拮抗劑；抗心律失常藥，諸如美西律(mexiletine)或苯妥英(phenytoin)；或NMDA受體拮抗劑。

其他適合之組合搭配物為失禁藥物，例如抗膽鹼激導性劑，諸如氧基羥丁寧(oxybutynin)、托特羅定(tolterodine)、達非那新(darifenacin)、非索羅定(fesoterodine)、索非那新(solifenacin)或曲司銨(trospium)；或其為膀胱肌肉鬆弛劑，諸如米拉貝隆(mirabegron)；或其為α阻斷劑，諸如他蘇洛辛(tamsulosin)、阿夫唑𠯤(alfuzosin)、西洛多辛(silodosin)、多沙唑𠯤(doxazosin)或特拉唑𠯤(terazosin)。

上文所提及之組合搭配物之劑量通常為正常建議最低劑量的1/5至高達正常建議劑量的1/1。

因此，在另一態樣中，本發明係關於根據本發明之化合物與一或多種上下文中所描述之額外治療劑組合的用途，其用於治療可受TRPA1影響或介導的疾病或病狀，特定言之如上下文中所描述之疾病或病狀。

在另一態樣中，本發明係關於一種用於治療可受患者中TRPA1之抑制影響之疾病或病狀的方法，其包括以下步驟：向需要此類治療之患者投與治療有效量的式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽以及治療有效量的一或多種額外治療劑。

在另一態樣中，本發明係關於式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與一或多種額外治療劑組合的用途，其用於治療可受有需要之患者中TRPA1之抑制影響的疾病或病狀。

在又一態樣中，本發明係關於一種用於治療由患者中之TRPA1活性介導之疾病或病狀的方法，其包括以下步驟：向需要此類治療之患者(較佳人類)投與治療有效量的本發明之化合物以及治療有效量的一或多種上下文中所描述之額外治療劑。

根據本發明之化合物與額外治療劑組合的使用可同時進行或以錯開的時間進行。

根據本發明之化合物及一或多種額外治療劑均可在一種調配物(例如，錠劑或膠囊)中一起存在，或分別在兩種相同或不同的調配物中存在(例如以所謂的分裝部分之套組形式)。

因此，在另一態樣中，本發明係關於一種醫藥組合物，其包含根據本發明之化合物及一或多種上下文中所描述之額外治療劑，視情況連同一或多種惰性載劑及/或稀釋劑。

在又一態樣中，本發明係關於根據本發明之化合物在咳嗽量測裝置中之用途。

本發明之其他特徵及優勢將自以下更詳細之實例而變得顯而易見，該等實例以舉例方式說明本發明之原理。

製備可使用熟習此項技術者已知且描述於有機合成文獻中之合成方法來獲得本發明之化合物及其中間物。較佳地，以與下文更充分解釋(特定言之如實驗部分中所描述)之製備方法類似的方式來獲得化合物。在一些情況下，進行反應步驟之次序可變化。亦可使用熟習此項技術者已知但在此處未詳細描述的反應方法之變型。

用於製備根據本發明之化合物的通用製程對於研究以下流程之熟習此項技術者將變得顯而易見。起始物質可藉由描述於文獻或本文中之方法製備或可以類似或相似方式製備。可使用習知保護基來保護起始物質或中間物中之任何官能基。此等保護基可使用熟習此項技術者熟悉之方法在反應順序內之適合階段裂解。

根據本發明之化合物係藉由下文中描述之合成方法製備，其中通式之取代基具有上文給出之含義。此等方法意欲作為本發明之說明，而不會限制其主題及此等實例所主張之化合物之範疇。當未描述起始化合物之製備時，其為可商購的或可與本文中所描述之已知化合物或方法類似地製備。根據公開之合成方法來製備文獻中所描述之物質。

可如下文流程I中所示來製備式I化合物。流程I：

在流程I中，藉由使用適當的催化系統使用過渡金屬複合物(例如，Ru或Ir之過渡金屬複合物)以及對掌性配位體(例如，[(1S,2S)-(-)-2-胺基-1,2-二苯基乙基](4-甲苯磺醯基)醯胺基)而以對映選擇性方式還原子結構(A) 之α-氰基酮。向對應氰基-醇(B) 中添加羥胺以產生二羥基丙亞胺醯胺(C) 。可藉由將反應混合物與氯乙醯氯一起攪拌來實現氯甲基-㗁二唑(D) 之環封閉。最後，可藉由將通式(D) 之化合物與適當噻吩并嘧啶酮在鹼(例如，K₂ CO₃ )之存在下合併來製備通式(I)化合物。

可如下文流程II中所示來製備三環噻吩并嘧啶酮化合物。流程II：

在流程II中，在適合溶劑(例如，EtOH)中，在高溫(例如，100℃)下，將適合的噻吩并四氫吡啶前驅體用適當試劑(諸如甲脒、甲醯胺或其鹽)轉化成三環噻吩并嘧啶酮化合物(C)。接著使用適合氧化劑(例如，KMnO4)氧化四氫吡啶核心且藉由螯合試劑(例如，18-冠-6)之存在進行加速。此反應通常在非極性溶劑(例如，DCM)中進行且較佳在環境溫度下運行。在R3類似保護基(例如，BOC)之情況下，可使用適合之去保護條件(例如，對於R3=BOC，在RT下為TFA/DCM或HCl/二㗁烷)來移除此基團。

實例製備根據本發明之化合物及其中間物可使用熟習此項技術者已知且描述於有機合成文獻中之合成方法，例如使用描述於「Comprehensive Organic Transformations」, 第2版, Richard C. Larock, John Wiley & Sons, 2010及「March's Advanced Organic Chemistry」, 第7版, Michael B. Smith, John Wiley & Sons, 2013中之方法來獲得。較佳地，類似於下文中更充分解釋(特定言之如實驗部分中所描述)之製備方法來獲得化合物。在一些情況下，實行反應流程所採用之順序可以變化。亦可使用熟習此項技術者已知但在本文中未詳細描述的此等反應之變型。基於研究隨後之流程，用於製備根據本發明之化合物之通用製程對於熟習此項技術者將變得顯而易見。起始化合物為可商購的或可藉由描述於文獻或本文中之方法來製備，或可以類似或相似方式製備。在實行反應之前，起始化合物中之任何對應官能基可使用習知保護基團加以保護。可在反應順序內之適合階段，使用熟習此項技術者熟悉且描述於文獻，例如「Protecting Groups」, 第3版, Philip J. Kocienski, Thieme, 2005及「Protective Groups in Organic Synthesis」, 第4版, Peter G. M. Wuts, Theodora W. Greene, John Wiley & Sons, 2006中之方法再次裂解此等保護基。術語「環境溫度」及「室溫」可互換使用且表示約20℃，例如19℃與24℃之間的溫度。

縮寫：

ACN	乙腈
Aq.	水性
℃	攝氏度
CDI	1,1'-羰基二咪唑
CyH	環己烷
conc.	濃縮
DCM	二氯甲烷
DIPEA	N,N -二異丙基乙胺
DMF	N,N -二甲基甲醯胺
DMSO	二甲亞碸
ESI-MS	電噴霧電離質譜
EtOAc	乙酸乙酯
ex	實例
eq	當量
h	小時
HATU	N,N,N',N'-四甲基-O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)六氟磷酸鈾
HCl	氫氯酸
HPLC	高效液相層析
Int	中間物
L	公升
LiHMDS	鋰-雙(三甲基矽基)醯胺
MeOH	甲醇
NaHCO₃	碳酸氫鈉
min	分鐘
mL	毫升
MTBE	第三丁基甲醚
NaH	氫化鈉
Pd/C	鈀/活性碳
PE	石油醚
RT	室溫(約20℃)
sat.	飽和
TBTU	苯并三唑基四甲基脲鎓四氟硼酸鹽
TEA	三乙胺
TFA	三氟乙酸
THF	四氫呋喃
TLC	SiO2上之薄層層析

製備起始化合物

中間物 I 中間物 I.1 ( 一般途徑 ) (3S)-3-(4-氯苯基)-3-羥基丙腈

將10.0 g (55.7 mmol) 4-氯苯甲醯基乙腈在惰性氛圍下添加至100 mL ACN中。在逐滴添加8.30 mL (19.8 mmol)甲酸三乙胺複合物(5:2)之前，添加142 mg (0.23 mmol)氯([(1S,2S)-(-)-2-胺基-1,2-二苯基乙基](4-甲苯磺醯基)醯胺基)(均三甲苯)釕(II) (CAS 174813-81-1)。在RT下攪拌3 h之後，在真空中移除溶劑。向剩餘粗混合物中添加水且此混合物用EtOAc萃取兩次。將有機層合併，經MgSO4乾燥，且在真空中移除溶劑。 C₉ H₈ ClNO (M = 181.6 g/mol) ESI-MS: 226 [M+HCOO]^- R_t (HPLC): 0.81 min (方法B)

根據上文描述之通用程序(中間物I.1)來製備以下化合物：

中間物	起始物質	結構	ESI-MS	HPLC滯留時間(方法) [min]
I.2			EI-MS: 187 [M*]⁺	0.41 (A)
I.3			184 [M+Na]⁺	0.76 (B)
I.4			188 [M+Na]⁺	0.72 (B)
I.5			EI-MS: 183 [M*]⁺	0.79 (B)
I.6			184 [M+H]⁺	0.76 (B)
I.7	實例V		250 [M+Na]⁺	0.84 (B)
I.8			214 [M+Na]⁺	0.64 (B)

中間物 II 中間物 II.1 ( 一般途徑 ) (3S)-3-(4-氯苯基)-N,3-二羥基丙亞胺醯胺

將9.82 g (54.1 mmol) (3S)-3-(4-氯苯基)-3-羥基丙腈(中間物I.1)及8.00 mL (136 mmol)羥胺(50%於水中)之混合物添加至100 mL MeOH中且在75℃下攪拌1.5 h。在冷卻至RT之後，在真空中移除所有揮發物以得到不經進一步純化即使用之粗產物。 C₉ H₁₁ ClN₂ O₂ (M = 214.6 g/mol) ESI-MS: 215 [M+H]⁺ R_t (HPLC): 0.60 min (方法B)

根據上文描述之通用程序(中間物II.1)來製備以下化合物：

中間物	起始物質	結構	ESI-MS	HPLC滯留時間(方法) [min]
II.2	I.2		221 [M+H]⁺	0.27 (A)
II.3	I.3		195 [M+H]⁺	0.57 (B)
II.4	I.3		199 [M+H]⁺	0.43 (B)
II.5	I.5		217 [M+H]⁺	0.54 (B)
II.6	I.6		217 [M+H]⁺	0.55 (B)
II.7	I.7		261 [M+H]⁺	0.66 (C)
II.8	I.8		225 [M+H]⁺	0.24 (B)

中間物 III 中間物 III.1 ( 一般途徑 ) (1S)-2-[5-(氯甲基)-1,2,4-㗁二唑-3-基]-1-(4-氯苯基)乙-1-醇

向含11.2 g (52.4 mmol)中間物II之55 mL NMP中添加10.0 mL (57.8 mmol) DIPEA。在緩慢添加溶解於5 mL NMP中之4.60 mL (57.7 mmol)氯乙醯氯之前，將混合物冷卻至0℃，且將混合物在恆定溫度下攪拌45 min。接著將混合物加熱直至95℃且繼續攪拌4 h。在冷卻至RT之後，添加200 mL水且將所得混合物用EtOAc萃取三次。將有機層合併，經MgSO₄ 乾燥，過濾且在真空中移除溶劑。藉由管柱層析(矽膠；PE/EtOAc，7/3)純化殘餘物。 C₁₁ H₁₀ Cl₂ N₂ O₂ (M = 273.1 g/mol) ESI-MS: 271 [M-H]^- R_t (HPLC): 0.93 min (方法B)

根據上文描述之通用程序(中間物III.1)來製備以下化合物：

中間物	起始物質	結構	ESI-MS	HPLC滯留時間(方法) [min]
III.2	II.2		301 [M+Na]⁺	0.90 (B)
III.3	II.3		235 [M+H-H₂ O]⁺	0.92 (C)
III.4	II.4		255 [M-H]^-	0.86 (B)
III.5	II.5		273 [M-H]^-	0.93 (B)
III.6	II.6		273 [M-H]^-	0.93 (B)
III.7	II.7		EI-MS: 318 [M*]^-	0.96 (G)
III.8	II.8		281 [M-H]^-	0.82 (G)

中間物 IV 中間物 IV.1 ( 通用路徑 ) N,5-二甲基-4-側氧基-3H,4H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲醯胺

向含0.25 g (1.19 mmol) 5-甲基-4-側氧基-3H,4H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸之30 mL THF中添加331 µL (2.38 mmol) TEA及429 mg (1.19 mmol) TBTU。在添加654 µL (1.31 mmol)之甲胺溶液(c=2 mol/L於THF中)之前，將混合物在RT下攪拌30 min。在環境溫度下繼續攪拌16 h。在添加水及DCM之前，在真空中移除溶劑。將有機層分離，經Na₂ SO₄ 乾燥且在真空中移除溶劑。藉由管柱層析(矽膠；DCM/MeOH/NH₃ 90/10/1)純化粗產物。 C₉ H₉ N₃ O₂ S (M = 223.3 g/mol) ESI-MS: 224 [M+H]⁺ R_t (HPLC): 0.62 min (方法C)

根據上文描述之通用程序(實例IV.1) 來製備以下化合物：

中間物	起始物質	結構	ESI-MS	HPLC滯留時間(方法) [min]
IV.2			274 [M+H]⁺	0.72 (C)
IV.3			282 [M+H]⁺	0.68 (C)

中間物 V 3-(2,2-二氟-2H-1,3-苯并間二氧雜環戊烯-5-基)-3-側氧基丙腈

向含0.63 mL (12.0 mmol)乙腈之5 mL THF中添加18.0 mL 2-甲基-2-丁醇鉀(濃度：2 mol/L於THF中；36.1 mmol)且將所得混合物攪拌較短時段。接著添加2.60 g (12.0 mmol) 2,2-二氟-2H-1,3-苯并間二氧雜環戊烯-5-甲酸甲酯，且在RT下繼續攪拌30 min。藉由添加HCl水溶液(濃度：1 mol/L)淬滅反應。添加EtOAc且將有機層分離，用鹽水洗滌並經Na₂ SO₄ 乾燥。在真空中移除溶劑，且粗產物藉由管柱層析(矽膠；CyH/EtOAc 75/25 à 57/43)純化以得到所需產物。 C₁₀ H₅ F₂ NO₃ (M = 225.2 g/mol) ESI-MS: 224 [M-H]^- R_t (HPLC): 0.89 min (方法B)

中間物 VI 4,8-二側氧基-5,6-二氫-3H-吡啶并[2,3]噻吩并[2,4-c]嘧啶-7-甲酸第三丁酯

向含500 mg (1.63 mmol)之4-側氧基-3,5,6,8-四氫吡啶并[2,3]噻吩并[2,4-c]嘧啶-7-甲酸第三丁酯之8.0 mL DCM中添加86.0 mg (0.325 mmol)之18-冠-6及514 mg (3.25 mmol)之過錳酸鉀。將反應混合物在環境溫度下攪拌隔夜。接著藉由添加甲醇及10% Na₂ S₂ O₃ 水溶液來淬滅反應混合物。藉由過濾移除所沈澱固體且濃縮濾液。將殘餘物溶解於甲醇及DMF中，過濾且藉由製備型HPLC (ACN/H₂ O/TFA梯度)純化。合併含有產物之溶離份且在減壓下移除乙腈。剩餘產物水溶液用DCM (2×)萃取。將經合併之有機萃取物經硫酸鈉乾燥以得到所需產物。 C₁₄ H₁₅ N₃ O₄ S (M = 321.3 g/mol) ESI-MS: 322 [M +H]⁺ R_t (HPLC): 0.46 min (方法A)

中間物 VII 3,5,6,7-四氫吡啶并[2,3]噻吩并[2,4-c]嘧啶-4,8-二酮

向含264 mg (0.822 mmol) 4,8-二側氧基-5,6-二氫-3H-吡啶并[2,3]噻吩并[2,4-c]嘧啶-7-甲酸第三丁酯之6 mL DCM中添加380 µL (4.926 mmol)三氟乙酸。將所得混合物在環境溫度下攪拌45 min。在真空中移除所有揮發物，且如下一步驟中所獲得來使用殘餘物。 C₉ H₇ N₃ O₂ S (M = 221.2 g/mol) ESI-MS: 222 [M+H]⁺ R_t (HPLC): 0.22 min (方法A)

中間物 VIII 中間物 VIII.1 ( 一般途徑 )

向含5.00 g (26.8 mmol) 2-胺基-4-氯-3-氰基-5-甲醯基噻吩(CAS：104366-23-6)之25 mL吡啶中添加5.70 mL (42.9 mmol) N,N-二甲基甲醯胺二甲基縮醛。將混合物在100℃下攪拌3 h。在冷卻至環境溫度之後，在減壓下濃縮混合物。將殘餘物再懸浮於DCM中且用水洗滌。將有機相經Na₂ SO₄ 乾燥且濃縮以得到所需產物。 C₉ H₈ ClN₃ OS (M = 241.7 g/mol) ESI-MS: 242 [M+H]⁺ R_t (HPLC): 1.04 min (方法B)

中間物 IX 中間物 IX.1 ( 一般途徑 )

向含1.00 g (4.14 mmol)中間物IX.1之10 mL甲酸中添加678 mg (8.27 mmol)乙酸鈉。將反應混合物在回流下攪拌隔夜。在冷卻至環境溫度之後，將混合物傾倒至冰冷水上。其接著用二氯甲烷稀釋且濃縮至乾燥。將殘餘物懸浮於二氯甲烷中且過濾出剩餘鹽。濃縮濾液以得到所需產物。 C₇ H₃ ClN₂ O₂ S (M = 214.6 g/mol) ESI-MS: 213 [M-H]^- R_t (HPLC): 0.87 min (方法B)

中間物 X 中間物 X.1 ( 一般途徑 )

向含150 mg (699 µmol)中間物IX.1之4.0 mL DMF中添加473 mg (769 µmol)過氧硫酸鉀。將反應混合物在環境溫度下添加18 h。將混合物接著藉由製備型HPLC (H₂ O/ACN/TFA)純化以得到所需產物。 C₇ H₃ ClN₂ O₃ S (M = 230.6 g/mol) ESI-MS: 229 [M-H]^- R_t (HPLC): 0.58 min (方法C)

中間物 XI 中間物 XI.1 ( 一般途徑 )

向含45.0 mg (0.195 mmol)實例X.1之1.0 mL DMF中添加含81.7 mg (0.215 mmol) 1-[雙(二甲胺基)亞甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡錠鎓3-氧化六氟磷酸鹽、74.8 µL (0.429 mmol)二異丙基乙胺及1.17 mL (0.5 M，0.585 mmol)氨水溶液之THF。將反應混合物在環境溫度下攪拌18 h。將反應混合物接著藉由製備型HPLC (H₂ O/ACN/NH₃ )純化以得到所需產物。 C₇ H₄ ClN₃ O₂ S (M = 229.6 g/mol) ESI-MS: 230 [M+H]⁺ R_t (HPLC): 0.52 min (方法C)

製備最終化合物

實例 1 實例 1 ( 一般途徑 ) 3-({3-[(2S)-2-(4-氯苯基)-2-羥乙基]-1,2,4-㗁二唑-5-基}甲基)-5-甲基-4-側氧基-3H,4H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲醯胺

在添加4.30 g (31.1 mmol) K₂ CO₃ 之前，將2.00 g (9.56 mmol)之5-甲基-4-側氧基-3H,4H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲醯胺添加至20 mL DMA中。在添加含2.70 g (9.89 mmol)實例III.1之5 mL DMA之前，將混合物在RT下攪拌20分鐘。在50℃下繼續攪拌3 h。在冷卻至RT之後，將混合物過濾且藉由HPLC (含有0.3% TFA之ACN/H₂ O梯度)純化以得到所需產物。 C₁₉ H₁₆ ClN₅ O₄ S (M = 445.9 g/mol) ESI-MS: 446 [M+H]⁺ R_t (HPLC): 0.82 min (方法B)¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 2.70 (s, 3H), 2.92 - 3.05 (m, 2H), 4.94 (dt,J =7.60, 5.30 Hz, 1H), 5.52 (s, 2H), 5.60 (d,J =4.80 Hz, 1H), 7.26 - 7.39 (m, 4H), 7.69 (br s, 2H), 8.63 (s, 1H)。

根據上文描述之通用程序(實例1)來製備以下化合物：

實例	起始物質	結構	反應條件
2	III.3 + 5-甲基-4-側氧基-3H,4H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲醯胺		溶劑：DMF
3	III.2 + 5-甲基-4-側氧基-3H,4H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲醯胺		在RT下進行之反應
4	III.4 + 5-甲基-4-側氧基-3H,4H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲醯胺		在RT下進行之反應
5	III.5 + 5-甲基-4-側氧基-3H,4H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲醯胺		在RT下進行之反應
6	III.6 + 5-甲基-4-側氧基-3H,4H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲醯胺		在RT下進行之反應
7	III.7 + 5-甲基-4-側氧基-3H,4H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲醯胺		RT，16 h
8	III.8 + 5-甲基-4-側氧基-3H,4H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲醯胺		60℃，1 h
9	III.8 + IV.1		RT，DMF
10	III.4 + IV.1		RT，DMF
11	III.1 + IV.1		50℃，0.5 h，DMF
12	III.1 + IV.2		50℃，0.5 h，DMF
13	III.1 + IV.3		50℃，0.5 h，DMF
14	III.5 + IV.1		RT，DMF
15	III.1 + VI.1		RT，DMF
16	III.1 + XI.1		RT，DMF，18 h

最終化合物之分析資料描述於上表中：

實例	ESI-MS	HPLC滯留時間(方法) [min]	¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm
2	426 [M+H]⁺	0.56 (D)	2.25 (s, 3H), 2.70 (s, 3H), 2.91 (dd,J =14.6, 5.5 Hz, 1H), 2.99 (dd,J =14.7, 8.1 Hz, 1H), 4.86 (td,J =7.98, 5.3 Hz, 1H), 5.41 (d,J =4.8, 1H), 5.51 (s, 2H), 7.04 - 7.11 (m, 2H), 7.17 - 7.23 (m, 2H), 7.69 (s, 2H), 8.64 (s, 1H)
3	452 [M+H]⁺	0.81 (B)	2.69 (s, 3H), 3.19 (dd,J =14.8, 8.1 Hz, 1H), 3.25 (dd,J =15.1, 5.8 Hz, 1H), 5.05 - 5.12 (m, 1H), 5.52 (s, 2H), 5.91 (d,J =5.7 Hz, 1H), 6.75 (s, 1H), 7.23 (t,J =7.4 Hz, 1H), 7.26 (t,J =7.5 Hz, 1H), 7.51 (d,J =8.1 Hz, 1H), 7.55 (d,J =7.5 Hz, 1H), 7.69 (br s, 2H), 8.62 (s, 1H)
4	430 [M+H]⁺	0.82 (B)	2.70 (s, 3H), 2.95 (dd,J =14.6, 5.6 Hz, 1H), 3.01 (dd,J =14.6, 8.2 Hz, 1H), 4.94 (dd,J =8.1, 5.4 Hz, 1H), 5.52 (s, 2H), 7.06 - 7.12 (m, 2H), 7.34 - 7.40 (m, 2H), 7.69 (s, 2H), 8.64 (s, 1H)
5	448 [M+H]⁺	0.55 (E)	2.70 (s, 3H), 3.00 (d,J =6.6 Hz, 2H), 4.95 (t,J =6.7 Hz, 1H), 5.52 (s, 2H), 5.54 - 5.85 (m, 1H), 7.14 - 7.21 (m, 1H), 7.31 (dt,J =10.7, 8.4 Hz, 1H), 7.39 (ddd,J =11.9, 8.0, 1.8 Hz, 1H), 7.69 (br s, 2H), 8.63 (s, 1H)
6	448 [M+H]⁺	0.63 (F)	2.69 (s, 3H), 2.99 (dd,J =14.6, 8.0 Hz, 1H), 3.04 (dd,J =14.6, 5.3 Hz, 1H), 4.97 (br t,J =6.1 Hz, 1H), 5.52 (s, 2H), 5.75 (br s, 1H), 7.01 - 7.10 (m, 3H), 7.69 (s, 2H), 8.63 (s, 1H)
7	492 [M+H]⁺	0.71 (H)	2.70 (s, 3H), 2.95 - 3.06 (m, 2H), 4.97 (dt,J =7.7, 5.4 Hz, 1H), 5.52 (s, 2H), 5.66 (d,J =4.8 Hz, 1H), 7.16 (dd,J =8.3, 1.5 Hz, 1H), 7.28 (d,J =8.2 Hz, 1H), 7.40 (d,J =1.5 Hz, 1H), 7.69 (br s, 2H), 8.63 (s, 1H)
8	456 [M+H]⁺	0.52 (I)	2.70 (s, 3H), 2.91 (dd,J =14.6, 5.3 Hz, 1H), 2.98 (dd,J =14.6, 8.4 Hz, 1H), 4.85 (dd,J =8.2, 5.4 Hz, 1H), 5.43 (br s, 1H), 5.52 (s, 2H), 5.96 (dd,J =3.5, 1.0 Hz, 2H), 6.75 - 6.80 (m, 2H), 6.92 (s, 1H), 7.69 (br s, 2H), 8.64 (s, 1H)
9	470 [M+H]⁺	0.60 (H)	2.67 (s, 3H), 2.78 (d,J =4.6 Hz, 3H), 2.91 (dd,J =14.4, 5.3 Hz, 1H), 2.98 (dd,J =14.6, 8.4 Hz, 1H), 4.85 (dd,J =8.4, 5.3 Hz, 1H), 5.51 (s, 2H), 5.96 (dd,J =3.3, 0.9 Hz, 2H), 6.77 (s, 2H), 6.92 (s, 1H), 8.18 (br q,J =4.6 Hz, 1H), 8.64 (s, 1H)
10	444 [M+H]⁺	0.64 (H)	2.67 (s, 3H), 2.78 (d,J =4.6 Hz, 3H), 2.95 (dd,J =14.6, 5.6 Hz, 1H), 3.01 (dd,J =14.6, 8.1 Hz, 1H), 4.94 (dd,J =8.0, 5.5 Hz, 1H), 5.51 (s, 2H), 7.04 - 7.12 (m, 2H), 7.33 - 7.39 (m, 2H), 8.18 (q,J =4.5 Hz, 1H), 8.64 (s, 1H)
11	460 [M+H]⁺	0.92 (C)	2.68 (s, 3H), 2.78 (d,J =4.6 Hz, 3H), 2.92 - 3.04 (m, 2H), 4.94 (dd,J =7.8, 5.8 Hz, 1H), 5.52 (s, 2H), 7.30 - 7.36 (m, 4H), 8.18 (q,J =4.4 Hz, 1H), 8.63 (s, 1H)
12	510 [M+H]⁺	0.98 (C)	2.69 (s, 3H), 2.92 - 3.05 (m, 2H), 3.67 (tdd,J =15.7, 5.7, 4.1 Hz, 2H), 4.94 (dt,J =7.6, 5.3 Hz, 1H), 5.52 (s, 2H), 5.60 (d,J =4.8 Hz, 1H), 6.15 (tt,J =55.9, 3.8 Hz, 1H), 7.26 - 7.41 (m, 4H), 8.61 - 8.68 (m, 2H)
13	518 [M+H]⁺	0.93 (C)	1.12 (s, 6H), 2.69 (s, 3H), 2.92 - 3.05 (m, 2H), 3.24 (br d,J =6.1 Hz, 2H), 4.54 (s, 1H), 4.90 - 4.98 (m, 1H), 5.52 (s, 2H), 5.60 (d,J =4.8 Hz, 1H), 7.29 - 7.37 (m, 4H), 8.03 (t,J =6.1 Hz, 1H), 8.64 (s, 1H)
14	462 [M+H]⁺	0.68 (H)	2.67 (s, 3H), 2.78 (d,J =4.6 Hz, 3H), 2.96 - 2.04 (m, 2H), 4.92 - 4.98 (m, 1H), 5.51 (s, 2H), 5.67 (br d,J =4.2 Hz, 1H), 7.14 - 7.21 (m, 1H), 7.31 (dt,J =10.8, 8.4 Hz, 1H), 7.39 (ddd,J =11.8, 8.0, 2.0 Hz, 1H), 8.18 (q,J =4.5 Hz, 1H), 8.63 (s, 1H)
15	458 [M+H]⁺	0.46 (A)	2.96 (dd,J =14.4, 5.6 Hz, 1H), 3.01 (dd,J =14.6, 7.9 Hz, 1H), 3.13 (t,J =7.0 Hz, 2H), 3.48 - 3.53 (m, 2H), 4.94 (t,J =6.7 Hz, 1H), 5.54 (s, 2H), 5.60 (br s, 1H), 7.30 - 7.37 (m, 4H), 7.95 - 8.00 (m, 1H), 8.67 (s, 1H)
16	466 [M+H]⁺	0.85 (C)	2.93 - 3.04 (m, 2H), 3.17 (d,J =5.2 Hz, 1H), 4.94 (dt,J =7.6, 5.4 Hz, 1H), 5.53 (s, 2H), 5.60 (d,J =4.8 Hz, 1H), 7.30 - 7.37 (m, 4H), 7.70 (br s, 1H), 8.15 (br s, 1H), 8.73 (s, 1H)

分析型 HPLC 方法

方法 A

時間(min)	水體積% (包括0.1% TFA)	ACN體積%	流量[mL/min]
0.00	99	1	1.6
0.02	99	1	1.6
1.00	0	100	1.6
1.10	0	100	1.6

分析型管柱：XBridge BEH C18_2.1×30 mm，1.7 μm；管柱溫度：60℃

方法 B

時間(min)	水體積% (包括0.1% TFA)	ACN體積%	流量[mL/min]
0.00	97	3	2.2
0.20	97	3	2.2
1.20	0	100	2.2
1.25	0	100	3.0
1.40	0	100	3.0

分析型管柱 ： Stable Bond (Agilent) 1.8 µm ； 3.0×30 mm ； 管柱溫度 ： 60 ℃

方法 C

分析型管柱：Sunfire (Waters) 2.5 µm；3.0×30 mm；管柱溫度：60℃

方法 D

梯度/溶劑時間[min]	水體積% (包括0.1% NH₃ )	乙腈體積%	流量[ml/min]
0.0	95.0	5.0	1.5
1.3	0.0	100.0	1.5
1.5	0.0	100.0	1.5
1.6	95.0	5.0	1.5

製備型管柱：XBridge (Waters) C18_3.0 × 30 mm_2.5 µm；管柱溫度：60℃

方法 E

XBridge C18_3.0 × 30 mm_2.5 µm (Waters)；管柱溫度：60℃

方法 F

梯度/溶劑時間[min]	水體積% (包括0.1% TFA)	ACN體積% (包括0.08 % TFA)	流量[ml/min]
0.0	95.0	5.0	1.5
1.3	0.0	100.0	1.5
1.5	0.0	100.0	1.5
1.6	95.0	5.0	1.5

製備型管柱：Sunfire (Waters) C18_3.0 × 30 mm_2.5 µm；管柱溫度：60℃

方法 G

時間(min)	水體積% (包括0.1% NH₄ OH)	ACN體積%	流量[mL/min]
0.00	97	3	2.2
0.20	97	3	2.2
1.20	0	100	2.2
1.25	0	100	3
1.40	0	100	3

分析型管柱：XBridge C18 (Waters) 2.5 µm；3.0×30 mm；管柱溫度：60℃

方法 H

時間(min)	水體積% (包括0.1% TFA)	ACN體積% (包括0.08 % TFA)	流量[mL/min]
0.00	95	5	1.5
1.3	0	100	1.5
1.5	0	100	1.5
1.6	95	5	1.5

分析型管柱：Sunfire C18 (Waters) 2.5 µm；3.0×30 mm；管柱溫度：60℃

方法 I

梯度/溶劑時間[min]	水體積% (包括0.1% TFA)	ACN體積%	流量[ml/min]
0.0	50.0	50.0	1.5
0.02	50.0	50.0	1.5
1.0	0.0	100.0	1.5
1.1	0.0	100.0	1.5

分析型管柱：Sunfire (Waters) C18_2.1 × 30 mm_2.5 µm；管柱溫度：60℃

Claims

一種根據式(I)之化合物
其中 A係選自由以下組成之群：苯基、萘基、噻吩基、苯并噻吩基或苯并呋喃基，其視情況經由以下組成之群的一個或兩個成員取代：H、F、Cl、Br、C_1-4 烷基、F_1-3 -氟-C_1-4 烷基、CN、OCH₃ 、環丙基及環丁基，或 A係選自
；及 R¹ 係選自H、C_1-4 烷基、F_1-3 -氟-C_1-4 烷基、C_1-4 烷基-OH或C_1-4 烷基-CN； R² 係選自C_1-2 烷基或Cl；或R¹ 及R² 各自為經由一鍵接合之CH₂ ，從而形成6員環。
如請求項1之式(I)化合物，其中A係選自由以下組成之群：苯基或苯并呋喃基，其視情況經由以下組成之群的一個或兩個成員取代：H、F、Cl、Br、C_1-4 烷基、F_1-3 -氟-C_1-4 烷基、CN、OCH₃ 、環丙基及環丁基，或 A係選自
。
如請求項1之式(I)化合物，其中A係選自由以下組成之群：苯基或苯并呋喃基，其視情況經由以下組成之群的一個或兩個成員取代：H、F、Cl及CH₃ ；或 A係選自
。
如請求項1之式(I)化合物，其中A係選自由以下組成之群：
。
如請求項1至4中任一項之式(I)化合物，其中R¹ 係選自由以下組成之群：H、CH₃ 、CH₂ CHF₂ 或CH₂ C(CH₃ )₂ OH。
如請求項1至4中任一項之式(I)化合物，其中R² 為CH₃ 或Cl。
如請求項1至4中任一項之式(I)化合物，其選自由以下組成之群：

。
如請求項1之式(I)化合物，其為選自由以下組成之群的(S) -對映異構體：

。
一種鹽，特別為如請求項1至8中任一項之化合物的醫藥學上可接受之鹽。
一種醫藥組合物，其包含至少一種如請求項1至8中任一項之式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽，及一或多種醫藥學上可接受之賦形劑。
如請求項1至4及8中一或多項之式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用作藥劑。
如請求項1至4及8中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療或預防發炎性氣道疾病或纖維化疾病或咳嗽。
如請求項1至4及8中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療或預防特發性肺病(IPF)或咳嗽。
一種如請求項1至8中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造用於治療或預防發炎性氣道疾病或纖維化疾病或咳嗽之藥劑。
一種如請求項1至8中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造用於治療或預防特發性肺病(IPF)或咳嗽之藥劑。