TW202041216A - 金奈米團簇於治療高膽固醇血症或與高膽固醇血症相關之疾病的用途 - Google Patents

Abstract

本揭示內容是關於金奈米團簇於治療高膽固醇血症或與高膽固醇血症相關之疾病( 舉例來說，動脈粥狀硬化)的新穎用途。依據本揭示內容之實施方式，金奈米團簇的粒徑約為1到10奈米，且係由一包含複數個金奈米顆粒之金奈米團簇，以及複數個塗覆於該金奈米團簇之DHLA所組成。

Description

金奈米團簇於治療高膽固醇血症或與高膽固醇血症相關之疾病的用途

本揭示內容是關於治療疾病的領域。更具體來說，本揭示內容是關於以二氫硫辛酸(dihydrolipoic acid, DHLA)塗覆之金奈米團簇於治療高膽固醇血症(hypercholesterolemia)或與高膽固醇血症相關之疾病(舉例來說，動脈粥狀硬化(atherosclerosis))的用途。

高膽固醇血症(亦稱為高膽固醇(high cholesterol))是一種由血膽固醇含量過高所引發的疾病。膽固醇為形成細胞膜、荷爾蒙及與脂肪代謝相關之化合物不可缺少的物質。然而，過量的膽固醇會異常堆積於血管壁中，並形成斑塊，進而導致動脈粥狀硬化的產生；動脈粥狀硬化為一種血管壁增厚及喪失彈性的疾病。動脈粥狀硬化與不同心血管疾病(cardiovascular disease, CVD)的生成及進程相關，包含冠狀動脈心臟病、狹心症、心臟病、中風、暫時性缺血病發(transient ischaemic attack, TIA)、周邊動脈疾病(peripheral arterial disease, PAD；例如肢體缺血)，以及血管狹窄(restenosis)。

斯他汀(Statins)及外科手術為二種目前治療動脈粥狀硬化的主要療法。斯他汀為一類可降低脂肪的藥物，藉由抑制HMG-CoA 還原酶(HMG-CoA reductase, 3-hydroxy-3-methyl-glutaryl-　coenzyme A reductase)的作用來阻斷肝臟中膽固醇的合成路徑。作為動脈粥狀硬化的治療處方，斯他汀通常伴隨著不良的副作用，例如頭暈、鼻出血、喉嚨痛、頭痛、便秘、腹瀉、消化不良、肌肉或關節疼痛、高血糖及發炎反應。此外，亦有報導指出，斯他汀會與其他藥物相互作用，增加肌肉損傷等有害風險。當動脈粥狀硬化之病況較為嚴重且導致不可逆之缺血狀況時，外科手術(例如，血管繞道手術，或是有或無支架置入的血管成形術)提供了另一種治療動脈粥狀硬化的選擇。然而，已知外科手術會造成失血、傷口血腫、感染，或更嚴重地，神經損傷。

有鑑於此，相關領域亟需一種可更安全且有效地治療動脈粥狀硬化的新穎方法。

發明內容旨在提供本揭示內容的簡化摘要，以使閱讀者對本揭示內容具備基本的理解。此發明內容並非本揭示內容的完整概述，且其用意並非在指出本發明實施例的重要/關鍵元件或界定本發明的範圍。

本揭示內容的第一態樣是關於一種用以治療一個體之高膽固醇血症或一與高膽固醇血症相關之疾病的方法。該方法包含對該個體投予一有效量之以二氫硫辛酸(dihydrolipoic acid, DHLA)塗覆的金奈米團簇，其係由一金奈米團簇及複數個DHLA所組成，其中該金奈米團簇係由複數個金奈米顆粒所形成，且該複數個DHLA係塗覆於該金奈米團簇上。依據本揭示內容的實施方式，該以DHLA塗覆之金奈米團簇的粒徑約為1到10奈米；較佳地，約為1到5奈米。在本揭示內容特定的實施例中，以DHLA塗覆之金奈米團簇的粒徑約為2奈米。

依據本揭示內容某些實施方式，有效量約為每日每公斤個體體重0.001-10毫克；較佳地，約為每日每公斤個體體重0.01-1毫克；更佳地，約為每日每公斤個體體重 0.01-0.1毫克。依據本揭示內容一特定實施例，係對個體每日投予以DHLA塗覆之金奈米團簇，且連續投予56天。

本揭示內容亦提供以DHLA塗覆之金奈米團簇於製備藥物或藥學組合物的用途，其中該藥物或藥學組合物可用以治療一個體之高膽固醇血症或一與高膽固醇血症相關的疾病。該藥物或藥學組合物包含本揭示內容之以DHLA塗覆之金奈米團簇，以及非必要地，一藥學上可接受的賦形劑。

一般來說，可藉由本發明DHLA塗覆之金奈米團簇、藥物或藥學組合物治療之與高膽固醇血症相關的疾病是動脈粥狀硬化、高脂血症(hyperlipidemia)、胰臟炎(pancreatitis)、膽石(gallstone)、膽道癌(biliary tract cancer)，或是靜脈栓塞(venous thromboembolism, VTE)。

該個體是一哺乳動物。較佳地，該個體是一人類。

在參閱下文實施方式後，本發明所屬技術領域中具有通常知識者當可輕易瞭解本發明之基本精神及其他發明目的，以及本發明所採用之技術手段與實施態樣。

為了使本揭示內容的敘述更加詳盡與完備，下文針對了本發明的實施態樣與具體實施例提出了說明性的描述；但這並非實施或運用本發明具體實施例的唯一形式。實施方式中涵蓋了多個具體實施例的特徵以及用以建構與操作這些具體實施例的方法步驟與其順序。然而，亦可利用其他具體實施例來達成相同或均等的功能與步驟順序。

I. 定義

除非本說明書另有定義，此處所用的科學與技術詞彙之含義與本發明所屬技術領域中具有通常知識者所理解與慣用的意義相同。此外，在不和上下文衝突的情形下，本說明書所用的單數名詞涵蓋該名詞的複數型；而所用的複數名詞時亦涵蓋該名詞的單數型。

雖然用以界定本發明較廣範圍的數值範圍與參數皆是約略的數值，此處已盡可能精確地呈現具體實施例中的相關數值。然而，任何數值本質上不可避免地含有因個別測試方法所致的標準偏差。在此處，「約」通常係指實際數值在一特定數值或範圍的正負10%、5%、1%或0.5%之內。或者是，「約」一詞代表實際數值落在平均值的可接受標準誤差之內，視本發明所屬技術領域中具有通常知識者的考量而定。除了實驗例之外，或除非另有明確的說明，當可理解此處所用的所有範圍、數量、數值與百分比(例如用以描述材料用量、時間長短、溫度、操作條件、數量比例及其他相似者)均經過「約」的修飾。因此，除非另有相反的說明，本說明書與附隨申請專利範圍所揭示的數值參數皆為約略的數值，且可視需求而更動。至少應將這些數值參數理解為所指出的有效位數與套用一般進位法所得到的數值。在此處，將數值範圍表示成由一端點至另一段點或介於二端點之間；除非另有說明，此處所述的數值範圍皆包含端點。

「投予」(administer或administration)在本揭示內容係指一傳遞送模式，其包含，但不限於，靜脈內、肌肉內、腹腔內、動脈內、顱內或皮下遞送本揭示內容之藥劑(例如，以DHLA塗覆之金奈米團簇)。

在本揭示內容中，「治療」(treat)一詞包含部份或完全預防、改善、減輕及/或處理與高膽固醇血症相關或由高膽固醇血症造成之相關病徵(symptom)、次要病徵(secondary disorder)或症狀(condition)，其中降低高膽固醇血症的含量可對罹患或疑似罹患該些病徵、症狀或疾病的個體產生助益。「治療」(treat)一詞於本說明書中亦指對一個體應用或投予一或多本發明以DHLA塗覆之金奈米團簇，該個體係罹患與高膽固醇血症相關或由高膽固醇血症造成之相關病徵、次要病徵或症狀，以達到部份或完全減輕、減緩、治癒疾病、延遲發病、抑制病程發展、降低疾病嚴重性，及/或降低一或多種與高膽固醇血症相關或由高膽固醇血症造成之相關病徵、次要病徵或症狀的發生。與高膽固醇血症相關或由高膽固醇血症造成之相關病徵、次要病徵或症狀包含，但不限於，冠狀動脈心臟病、狹心症、心臟病、中風、TIA及PAD。在此「治療」(treat)亦可指投予至患有早期該些病徵或症狀之個體，以降低該個體發展與高膽固醇血症相關或由高膽固醇血症造成之相關病徵、次要病徵或症狀的風險。當一治療可減少一或多種病症或臨床標記時，則該治療為「有效的」(effective)。或者是，當一治療可降低、減緩或終止疾病病程、病徵或症狀的發展時，則該治療為「有效的」(effective)。

「有效量」(effective amount) 在此處係指一藥物的用量足以產生欲求的療效反應。有效量亦指一種化合物或組合物，其治療利益效果超越其毒性或有害影響。具體的有效量取決於多種因素，如欲治療的特定狀況、患者的生理條件(如，患者體重、年齡或性別)、接受治療的哺乳動物或動物的類型、治療持續時間、目前療法(如果有的話)的本質以及所用的具體配方和化合物或其衍生物的結構。舉例來說，可將有效量表示成藥物的總重量(譬如以公克、毫克或微克為單位)或表示成藥物重量與體重之比例(其單位為毫克/公斤(mg/kg))。或者是，可將有效量表示成活性成分(例如，本揭示內容之以DHLA塗覆的金奈米團簇) 的濃度，例如莫耳濃度、重量濃度、體積濃度、重量莫耳濃度、莫耳分率、重量分率及混合比值。習知技藝人士可依據動物模式的劑量來計算藥物(如本揭示內容之以DHLA塗覆之金奈米團簇) 的人體等效劑量(human equivalent dose, HED)。舉例來說，習知技藝人士可依據美國食品藥物管理局(US Food and Drug Administration, FDA)所公告之「估算成人健康志願者在初始臨床治療測式之最大安全起始劑量」(Estimating the Maximum Safe Starting Dose in Initial Clinical Trials for Therapeutics in Adult Healthy Volunteers)來估算人體使用之最高安全劑量。

在本揭示內容中，「高膽固醇血症」(hypercholesterolemia)係指任何因血液中膽固醇含量高於臨床建議含量所造成的疾病。舉例來說，當以低密度脂蛋白(low density lipoprotein, LDL)來測量血膽固醇含量時，若測得的LDL含量高於每分升(deciliter, dl)約75毫克，則個體即可能患有高膽固醇血症。或者是，當以無血漿膽固醇來測量血膽固醇含量時，若測得的無血漿高於每分升約200-220毫克，則個體即可能患有高膽固醇血症。

「與高膽固醇血症相關之疾病」(hypercholesterolemia-associated disease)在本揭示內容是指一源自血膽固醇異常升高或因血膽固醇異常升高而惡化的疾病、狀況或病徵；舉例來說，動脈粥狀硬化(包含不同的動脈粥狀硬化心血管疾病(various atherosclerotic cardiovascular disease, ASCVD))、高脂血症、胰臟炎、膽石、膽道癌，或是VTE。

在本揭示內容中，一「藥學上可接受的」(pharmaceutically acceptable)成分係指一可用於人體及/或動物體，而不會產生不良的副作用(例如，毒性、刺激及/或過敏反應)的成分，且具有合理的利益/風險比。

「賦形劑」(excipient)一詞在本揭示內容係指任何的惰性物質(例如，粉末或液體)，其可形成本揭示內容之以DHLA塗覆之金奈米團簇的載體或媒介物。賦形劑可以是任何商品化的賦形劑，只要其對於個體通常是安全且無毒性的。

「個體」(subject)一詞是指包含人類的動物，其可接受本發明以DHLA塗覆之金奈米團簇、藥物、藥學組合物或方法的治療。除非特定指出，否則「個體」(subject)一詞同時意指男性及女性。

II. 發明說明

本揭示內容至少部分是基於發明人首次發現以DHLA塗覆之金奈米團簇可藉由降低膽固醇、氧化壓力及血管發炎的含量/程度，來治療動脈粥狀硬化。因此，本揭示內容係關於以DHLA塗覆之金奈米團簇於治療高膽固醇血症或與高膽固醇血症相關之疾病的用途。

本揭示內容之以DHLA塗覆的金奈米團簇為此項技術領域所熟知的，其製程(Lin et al., ACS Nano (2009); 3: 395-401) 也是此項技術領域所熟知的，因此，不需進一步解釋其製備過程。塗覆有二氫硫辛酸之金奈米團簇，在激發波長約為420奈米的條件下，可發射出650奈米之偏振光，因此其發射波長範圍為紅色光至近紅外線範圍。每個金奈米團簇的粒徑約為1到10奈米間，較佳範圍約為1到5奈米間.在某些操作實施例中，金奈米團簇的粒徑約為2奈米。以上所揭露之金奈米團簇之粒徑為乾燥狀態下之金奈米團簇，然而，如果用於本揭露內容的金奈米團簇是水溶性的或至少可分散於液體培養基及/或水中，將會更好；由於與周邊溶劑分子(例如，水)耦合，因此金奈米團簇的流體動力學粒徑(hydrodynamic size)明顯大於其乾燥尺寸。於一實施例中，金奈米團簇之流體動力學粒徑(hydrodynamic size)約相當於0.1至30千耳頓 (kDa)之聚乙二醇。

在本揭示內容一態樣中，係利用以DHLA塗覆之金奈米團簇來製備藥學組合物或藥物，據以治療高膽固醇血症或與高膽固醇血症相關之疾病。該藥學組合物或藥物包含以DHLA塗覆之金奈米團簇，以及非必要地，一藥學上可接受的賦形劑.

以DHLA塗覆之金奈米團簇的重量約佔藥物或藥學組合物總重量之0.01%到99.9%。在某些實施方式中，以DHLA塗覆之金奈米團簇的重量至少佔藥物或藥學組合物總重量之0.1%。在某些實施方式中，以DHLA塗覆之金奈米團簇的重量至少佔藥物或藥學組合物總重量之5%。在某些實施方式中，以DHLA塗覆之金奈米團簇的重量至少佔藥物或藥學組合物總重量之10%。在某些實施方式中，以DHLA塗覆之金奈米團簇的重量至少佔藥物或藥學組合物總重量之25%。

在應用上，可將本揭示內容之以DHLA塗覆的金奈米團簇配製成不同劑型，例如錠劑、糖衣包覆錠劑、丸劑、顆粒、氣霧、糖漿、懸浮液、溶液、軟膏、乳膏、凝膠，或是任何實質上無毒且藥學上可接受之賦形劑或載體，特別是利用惰性物質所製備之賦形劑或載體。

本揭示內容亦提供用以治療一個體之高膽固醇血症或與高膽固醇血症相關之疾病的方法。該方法包含對該個體投予一有效量之本揭示內容之以DHLA塗覆的金奈米團簇，或包含該以DHLA塗覆之金奈米團簇的藥物或藥學組合物。

可全身性或局部性投予本揭示內容之以DHLA塗覆之金奈米團簇、藥物或藥學組合物。可藉由任何常規之投予路徑來投予本揭示內容之以DHLA塗覆的金奈米團簇。舉例來說，可以口服、齒舌、舌下、頰部、直腸或腸胃外(即，靜脈內、動脈內、心臟內、皮內、皮下、經皮、腹腔內或肌肉內)來進行投予。

依據本揭示內容某些實施方式，該個體為一小鼠。為對小鼠產生治療功效，係對該個體投予每日每公斤個體體重約0.01到150毫克之以DHLA塗覆的金奈米團簇；較佳地，每日每公斤個體體重約0.1到15毫克；更佳地，每日每公斤個體體重約0.1到1.5毫克。依據一操作實施例，係對該個體投予每日每公斤個體體重0.57毫克之以DHLA塗覆的金奈米團簇。

本所屬領域具有通常知識者可依據動物模式的使用劑量來計算本發明以DHLA塗覆之金奈米團簇的人體等效劑量。據此，本發明以DHLA塗覆之金奈米團簇的人體等效劑量為每日每公斤個體體重約0.001到10毫克；舉例來說，每日每公斤個體體重約0.001. 0.002、0.003、0.004、0.005、0.006、0.007、0.008、0.009、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5或10毫克。較佳地，係以每日每公斤個體體重約0.01到1毫克之本發明以DHLA塗覆之金奈米團簇來治療人類個體。更佳地，係以每日每公斤個體體重約0.01到0.1毫克之本發明以DHLA塗覆之金奈米團簇來治療人類個體。

或者是，可依據臨床因素來調整本揭示內容之以DHLA塗覆之金奈米團簇的有效量，例如欲治療之疾病、疾病的嚴重程度、病患的生理參數(包含年齡、身體狀況、體型、性別及體重)、治療的持續時間、同時投予的治療(若有)、投予路徑，以及習知技藝人士或臨床操作人員於知識或專業判斷上的其他考量因素。

習知技藝人士或臨床操作人員可依據不同因素來調整以DHLA塗覆之金奈米團簇的投予療程，例如年齡、性別、體重或其他治療(若有)。舉例來說，可每週對個體投予本發明以DHLA塗覆之金奈米團簇1-7次(例如，每週1、2、3、4、5、6或7次)，連續投予1、2、3、4或更多週。或者是，可每2週、每4週、每5週、每6週、每7週、每8週、每9週或每10週對個體投予本發明以DHLA塗覆之金奈米團簇1-10次(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10次)；或是每個月1次、每2個月1次、每3個月1次或更久時間1次。較佳地，每日對個體投予本發明以DHLA塗覆之金奈米團簇，且連續投予至少14天(即，2週)；舉例來說，投予14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60或更多天。更佳地，每日對個體投予本發明以DHLA塗覆之金奈米團簇，且連續投予至少28天(即，4週)。依據本揭示內容一操作實施例，每日對個體投予本發明以DHLA塗覆之金奈米團簇，且連續投予56天(即，8週)，以達到治療功效。

與高膽固醇血症相關之疾病可以是動脈粥狀硬化、高脂血症、胰臟炎、膽石(包含膽固醇膽石及綜合性膽石)、膽道癌(亦或為膽管癌(cholangiocarcinoma)，包含膽囊癌(gallbladder carcinoma, GBC)、肝內膽道癌(intrahepatic cholangiocarcinoma, iCC)及肝外膽道癌extrahepatic cholangiocarcinoma, eCC))，或是VTE (包含深層靜脈栓塞(deep vein thrombosis, DVT)及肺栓塞(pulmonary embolism, PE))。依據某些操作實施方式，與高膽固醇血症相關之疾病是動脈粥狀硬化，其中投予以DHLA塗覆之金奈米團簇可有效降低動脈粥狀硬化斑(atherosclerotic plaque)的形成，有助於治療及/或預防不同ASCVD，包含冠狀動脈心臟病、狹心症、心臟病、中風、TIA、周邊動脈疾病，以及血管狹窄。

基本上，該個體是一哺乳動物；舉例來說，人、小鼠、大鼠、倉鼠、天竺鼠、兔子、狗、貓、牛、山羊、綿羊、猴子及馬。較佳地，該個體是人類。

當可想見，本發明方法可單獨投予或與其他治療合併投予至個體體內，其中所述其他治療對高膽固醇血症或動脈粥狀硬化具有治療助益，舉例來說，斯他汀。依據使用需求的不同，本發明方法可於投予其他治療之前、同時或之後，投予至個體體內。

下文提出多個實驗例來說明本發明的某些態樣，以利本發明所屬技術領域中具有通常知識者實作本發明，且不應將這些實驗例視為對本發明範圍的限制。據信習知技藝者在閱讀了此處提出的說明後，可在不需過度解讀的情形下，完整利用並實踐本發明。此處所引用的所有公開文獻，其全文皆視為本說明書的一部分。 實施例

材料及方法

製備以 DHLA 塗覆之金奈米團簇 (FANC)

本發明之螢光金奈米團簇係以先前所述方法(參見Lin et al., ACS Nano (2009); 3: 395-401)。  簡言之，經由單相反應(single phase reaction) (參見Jana and Peng, J Am Chem Soc (2003); 125: 14280-14281) 來合成6-奈米之與雙十二烷基二甲基溴化銨( didodecyldimethylammonium) 穩定結合的金奈米團簇(AuNP @ DDAB)，其組成結構如第1圖所示。再逐漸滴加入黃金前驅溶液(氯化金溶於雙十二烷基二甲基溴化銨-甲苯溶液)使電漿吸收作用逐漸耗失，直至溶液轉變成黃色透明狀為止。接著，將先前製備之奈米團簇加入至還原態硫辛酸中以進行配位基置換；還原硫辛酸需新鮮製備，其係以硫辛酸與溴化四丁基銨(TBAB)莫耳比為4:1的比例混合。上述步驟生成深褐色奈米團簇凝塊混合物，以紫外線燈照射(365奈米，30分鐘)奈米團簇凝塊使凝塊凝集。去除上清液，加入甲醇至奈米團簇凝塊以重新懸浮並分散奈米團簇凝塊，接著加入氯仿沉澱去除遊離的介面活性劑。此乾燥之奈米團簇沉澱物可再次以硼酸緩衝液(pH 9)懸浮散開。接著進行超高速離心(110,000 rpm)三次，去除多餘的硫辛酸。為了收集金奈米團簇，加入PBS緩衝液至30千道耳頓分子量截斷(MWCO)濃縮離心管，至奈米團簇透明溶液膠體穩定且不具電漿吸收波鋒為止。該金奈米團簇之濃度，於波長420 奈米下的吸光係數約為450,000 M^-1 cm^-1 。

附著試驗

將人類主動脈內皮細胞(HAEC)培養於內皮生長培養液中。以每平方公分10,000個細胞的密度，將細胞種植於以1%明膠塗覆之塑膠器皿或2%明膠塗覆之玻璃蓋玻片上，置於37°C之具有95%空氣及5% CO₂ 氣體的潮溼環境中培養。

將HAEC與特定濃度(即，0 nM、50 nM或100 nM)之以DHLA塗覆的金奈米團簇混合3天，之後投予每毫升100奈克之脂多醣(lipopolysaccharide, LPS)刺激24小時。將活化的HAEC與經鈣黃綠素(Calcein AM)處理之單核球共同培養，進行附著試驗。培養2小時後，移除未結合的單核球，並以螢光顯微鏡紀錄細胞影像。

動物實驗

以正常食物或粒狀西式食物(包含0.21%膽固醇)餵食四週大之ApoE ^-/- 小鼠及野生型C57BL/6 小鼠，並投予FANC (每日每公斤體重0.57毫克，共投予56天)或安慰劑(PBS)。將小鼠分為三組：第1組為以正常食物餵食的野生型小鼠；第2組為以正常食物餵食且投予PBS治療之ApoE ^{‑ / ‑} 小鼠；第3組則為以西式食物餵食且投予FANC治療之ApoE ^{‑ / ‑} 小鼠。

偵測及定量分析動脈粥狀硬化區域

依據上述動物實驗，分別對ApoE 缺陷及野生型小鼠投予特定治療後，分離其主動脈，進行蘇丹IV染色(Sudan IV staining)分析，其係一種紅色β萘酚重氮染劑，用以分析細胞及組織中含有脂質的物質(例如，三酸甘油酯、脂質及脂蛋白)。以顯微鏡來觀察經染色之主動脈的組織及病理形態，並以軟體來決定動脈粥狀硬化區域的面積。

分析膽固醇、 MDA 及 4-HNE

為評估本揭示內容之以DHLA塗覆的金奈米團簇是否會影響膽固醇及氧化壓力的含量，分別分離經處理56天後之ApoE 缺陷小鼠的血清。以膽固醇檢測套組來分析血清中的總膽固醇量，並利用酵素連結免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)來檢測MDA及4-HNE (二種氧化壓力指標)的表現量。

實施例 1 以 DHLA 塗覆之金奈米團簇的抗動脈粥狀硬化功效

本實施例將分析以DHLA塗覆之金奈米團簇對動脈粥狀硬化的影響，其中係以正常食物(作為對照組)或西式食物(即高脂食物)餵食ApoE 缺陷小鼠，並投予PBS或以DHLA塗覆之金奈米團簇處理。

相較於餵食正常食物的ApoE 缺陷小鼠，其動脈粥狀硬化斑約佔管腔面積的2.57± 0.5 %，餵食高脂食物會顯著增加ApoE 缺陷小鼠體內動脈粥狀硬化斑的面積，其中動脈粥狀硬化斑約會增加6倍，佔管腔面積的15.35 ± 2.6 % (第2圖)。值得注意的是，投予以DHLA塗覆之金奈米團簇(於第2圖中標示為「FANC」)可明顯降低動脈粥狀硬化斑的面積(第2圖)。在餵食正常食物且投予以DHLA塗覆之金奈米團簇的ApoE 缺陷小鼠則無顯著影響。餵食高脂食物的ApoE 缺陷小鼠則具呈現相似結果，其中相較於PBS對照組，投予以DHLA塗覆之金奈米團簇會減少約43.3 %的動脈粥狀硬化斑，動脈粥狀硬化斑的面積會降低至管腔面積的8.70 ± 2.5 % (第2圖)。

該些結果顯示，本揭示內容之以DHLA塗覆之金奈米團簇對動脈粥狀硬化具有治療功效，可用以治療不同動脈粥狀硬化心血管疾病。

實施例 2 以 DHLA 塗覆之金奈米團簇對血清膽固醇及氧化壓力的抑制功效

本實施例將分析本揭示內容之以DHLA塗覆的金奈米團簇是會否影響膽固醇含量及氧化壓力。第3及4圖分析闡述分析結果。

第3圖的數據指出，相較於餵食正常食物，餵食高脂食物會增加ApoE 缺陷小鼠體內血清總膽固醇(正常食物：每分升567.7 ± 32.5毫克；高脂食物：每分升1020.0 ± 55.0毫克)。投予以DHLA塗覆之金奈米團簇(於第3圖中標示為「FANC」)會明顯降低膽固醇含量，其中在餵食正常食物且投予以DHLA塗覆之金奈米團簇治療的ApoE 缺陷小鼠體內，血清總膽固醇會降低至每分升501.0 ± 46. 7毫克；而在餵食高脂食物且投予以DHLA塗覆之金奈米團簇治療的缺陷小鼠體內，血清總膽固醇則會降低至每分升529.0 ± 300.0毫克，約降低48.1% (第3圖)。

除了膽固醇，本實驗亦檢測以DHLA塗覆之金奈米團簇對MDA及4-HNE表現的抑制功效。第4A及4B圖的結果分析指出，相較於餵食正常食物的野生型小鼠(ApoE ^­+/+ 小鼠)，不論是餵食正常食物或高脂食物皆會增加ApoE 缺陷小鼠血清中MDA及4-HNE的含量。相較於餵食相同食物且投予PBS之小鼠，投予以DHLA塗覆之金奈米團簇(於第4A及4B圖中標示為「FANC」)可顯著降低血清中該些氧化壓力指標的含量(第4A及4B圖)。

該些結果證實，本揭示內容之以DHLA塗覆的金奈米團簇可有效抑制個體體內的膽固醇含量及氧化壓力。

實施例 3 以 DHLA 塗覆之金奈米團簇對附著分子的功效

基於發炎細胞(例如，巨噬細胞)附著至血管壁會造成血管發炎反應，進而導致動脈粥狀硬化的生成及惡化，本實施例將以LPS刺激HAEC來評估本揭示內容之以DHLA塗覆的金奈米團簇(於第5A到5C圖標示為「FANC」)是否會影響血管發炎反應。第5A到5C圖分別闡述分析結果。

如第5A及5B圖所示，LPS會誘發HAEC表現附著分子(即，ICAM-1與VCAM-1，二種媒介血管發炎反應的附著分子)；投予以DHLA塗覆之金奈米團簇會顯著降低由LPS所誘發的表現。此外，本揭示內容之以DHLA塗覆的金奈米團簇亦可以劑量相關的方式，降低巨噬細胞附著至HAEC的數量(第5C圖)。

總結上述，本揭示內容證實以DHLA塗覆之金奈米團簇可藉由降低膽固醇、氧化壓力及附著分子(例如，ICAM-1與VCAM-1)的含量或表現量來治療動脈粥狀硬化。因此，以DHLA塗覆之金奈米團簇可用以製備治療不同ASCVD的藥物。

雖然上文實施方式中揭露了本發明的具體實施例，然其並非用以限定本發明，本發明所屬技術領域中具有通常知識者，在不悖離本發明之原理與精神的情形下，當可對其進行各種更動與修飾，因此本發明之保護範圍當以附隨申請專利範圍所界定者為準。

無

為讓本發明的上述與其他目的、特徵、優點與實施例能更明顯易懂，所附圖式之說明如下： 第1圖為依據本揭示內容一實施方式所繪示之示意圖，其係關於本揭示內容之以DHLA塗覆之金奈米團簇； 第2圖為依據本揭示內容實施例1所繪示的柱狀圖，其係關於動脈粥狀硬化區域的面積比例；各組之n=6；*, p＜0.05；**, P＜0.001； 第3圖為依據本揭示內容實施例2所繪示的柱狀圖，其係關於經投予特定治療之小鼠血清中總膽固醇的含量；各組之n=6；*, p＜0.05；**, P＜0.001； 第4A及4B圖為依據本揭示內容實施例2所繪示的柱狀圖，其係關於經投予特定治療之小鼠體內丙二醯雙醛(malondialdehyde, MDA)及4-羥基壬烯醛(4-hydroxynonenal, 4-HNE)的表現量；各組n=6；*, p＜0.05；**, P＜0.001；以及 第5A到5C圖為依據本揭示內容實施例3所繪示的柱狀圖，其分別闡述附著於人類主動脈內皮細胞(HAEC)之巨噬細胞數量(第5A圖)，以及附著分子ICAM-1 (第5B圖)及VCAM-1 (第5C圖)於HAEC的表現量；各組n=3；*, p＜0.05；**, P＜0.001。

無

Claims (8)

1. 一種粒徑為1到10奈米之以二氫硫辛酸(dihydrolipoic acid, DHLA)塗覆之金奈米團簇於製備一藥物的用途，其中該藥物可用以治療一個體之高膽固醇血症或一與高膽固醇血症相關之疾病，其中該以DHLA塗覆之金奈米團簇係由一金奈米團簇及複數個DHLA所組成，其中該金奈米團簇係由複數個金奈米顆粒所形成，且該複數個DHLA係塗覆於該金奈米團簇上。
2. 如請求項1所述之用途，其中該以DHLA塗覆之金奈米團簇的粒徑為1到5奈米。
3. 如請求項2所述之用途，其中該以DHLA塗覆之金奈米團簇的粒徑為2奈米。
4. 如請求項1所述之用途，其中該與高膽固醇血症相關之疾病是動脈粥狀硬化。
5. 如請求項1所述之用途，其中該個體是一人類，且係對該個體投予每日每公斤個體體重約0.001-10毫克之該藥物。
6. 如請求項5所述之用途，其中係對該個體投予每日每公斤個體體重約0.01-1毫克之該藥物。
7. 如請求項6所述之用途，其中係對該個體投予每日每公斤個體體重約0.01-0.1毫克之該藥物。
8. 如請求項5所述之用途，其中係對該個體連續投予至少56天之該藥物。

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