TW201840316A - Ｔｏｌｌ樣受體７／８激動劑之安全性和藥物活性 - Google Patents

Abstract

提供了藉由給予包含TLR7/8激動劑MEDI9197的組成物、較佳的是經由瘤內注射到皮膚腫瘤或皮下腫瘤中來增加人類受試者中先天性和適應性免疫激活之方法。

Description

Toll樣受體7/8激動劑之安全性和藥物活性

癌症一直是主要的全球健康負擔。在美國，它係繼心臟病之後第二大最常見的死亡原因，幾乎每4例死亡中就有1例死於癌症（美國癌症協會（American Cancer Society），2014）。在1999年至2006年之間所有被診斷的癌症的5年生存率為68%，這比在1975年至1977年之間報告的生存率高18%，可能反映了在更早地診斷某些癌症方面的進展和治療的改善（美國癌症協會，2014）。不幸地是，儘管在癌症的治療方面具有無可爭辯的進展，但是尤其是對於那些對現有療法無反應或已經變得有抗性的晚期疾病患者，持續存在對更有效且毒性更小的治療的未滿足的醫療需求。

用於局部實體癌的最有效的治療係藉由手術去除腫瘤，隨後進行術後化學治療或放療。然而，由於腫瘤大小、腫瘤的位置、和/或癌症的階段，許多患者不是外科手術的候選者，所以該方法對許多癌症並不適用。在一些情況下，即使在手術後，一些患者的總體存活率也不容樂觀。因此，包括化學治療和癌症免疫治療在內的治療係癌症治療的附加選項。

Toll樣受體（TLR）激動劑係已經對各種腫瘤顯示出功效的小核苷類似物。將TLR激動劑用於癌症免疫治療，以局部刺激免疫系統抵抗癌細胞（Shi等人，2016）。TLR激動劑的全身給予導致對整個身體的免疫系統的刺激，這可能具有非常不希望的副作用，例如患者不適，同時僅將全部給予的劑量中的一小部分遞送至腫瘤。因此，TLR激動劑的局部遞送係例如在真皮應用中進行給予的較佳方法。

因此，將TLR激動劑用作針對生殖器疣（Beutner等人，1998）和淺表性基底細胞癌的局部治療的有效調節劑。還將它們作為惡性皮膚病變的治療引入，該等惡性皮膚病變包括黑色素瘤（Singh等人，2014）和基底細胞癌。TLR激動劑在體外和體內誘導將免疫細胞吸引至給予部位的促炎性細胞介素和趨化介素。然後免疫細胞在該部位攻擊癌細胞，導致癌細胞的消除。研究表明，將TLR激動劑作為免疫刺激劑直接注射到腫瘤部位產生抗腫瘤CD8 T細胞應答，用於以低劑量放療治療低度淋巴瘤。

MEDI9197（也被稱為3M-052/S-36862）係一種激活人TLR7和TLR8受體的小分子咪唑并喹啉激動劑，該人TLR7和TLR8受體直接激活先天性免疫細胞。這導致先天性和適應性免疫調節，例如共刺激分子的激活、抗腫瘤和抗病毒細胞介素的產生、以及適應性免疫的刺激。因此，類似於MEDI9197的化合物已經在臨床前和臨床上顯示廣泛的抗病毒、抗腫瘤和佐劑功能（綜述於Tomai 2006中）。

在全身給予多種TLR 7/8激動劑的非臨床數據已經在一些腫瘤模型中證明了腫瘤生長抑制和根除（Sidky等人，1992；Dumitru等人，2009）。臨床上，全身給予的TLR 7/8激動劑已經顯示出一些抗腫瘤活性（Dudek等人，2007；Dummer等人，2008）；然而，副作用如淋巴細胞減少症、貧血和流感樣症狀（發熱、受寒（chill）、疲勞、頭痛）、噁心和嘔吐（Dudek等人，2007；Witt等人，1993；Savage等人，1996），其大概是由於廣效全身性細胞介素的產生，限制了它們的臨床應用。因此，MEDI9197專門被研發用於腫瘤內（IT）注射和全身暴露限制（Smirnov等人，2011）。

各種非臨床小鼠腫瘤研究已經證明了MEDI9197的抗腫瘤活性（Mullins等人，2016）。然而，MEDI9197在人類患者中的安全性、耐受性、最佳給藥劑量和藥物動力學（PK）/藥效學（PD）概況從前尚未建立。

本發明的一些主要方面總結如下。另外的方面描述於此揭露的具體實施方式、實例、附圖和申請專利範圍部分。此揭露的每個部分中的描述旨在與其他部分一起閱讀。此外，此揭露每個部分中所述各種實施方式能以各種不同方式進行組合，並且所有此類組合旨在落入本發明的範圍之內。

本揭露首次提供了MEDI9197的I期多中心開放標記和劑量遞增研究結果，以評估在患有選定的晚期實體瘤的成年人類受試者中的安全性、耐受性、藥物動力學、藥效學和初步抗腫瘤活性。在晚期實體瘤成年患者中，MEDI9197在每四週0.005 mg至0.037 mg的劑量範圍內通常耐受性良好。MEDI9197誘導局部和全身藥效學（PD）效應，伴有劑量反應趨勢。

在一方面，本發明提供了增加人類受試者中免疫激活之方法，該方法包括向該受試者給予包含0.005 mg/mL至0.037 mg/mL MEDI9197的組成物，其中該組成物經由注射給予至腫瘤。在某些實施方式中，與給予之前的循環水平相比，該受試者在給予24小時內具有IFN-γ、CXCL10或CXCL11中的一種或多種的循環水平增加，從而增加該受試者的免疫激活。

在另一方面，本發明提供了增加人類受試者中炎症之方法，該方法包括向該受試者給予包含0.005 mg/mL至0.037 mg/mL MEDI9197的組成物，其中該組成物經由注射給予至腫瘤；並且其中與給予之前的表現相比，該受試者在給予3週內在腫瘤中表現CD40、CD8、CD56或PD-L1中的一種或多種的免疫細胞具有增加的浸潤，從而增加該受試者的炎症。

在另外的方面，本發明提供了將免疫細胞（例如，T細胞和/或NK細胞）運輸至人類受試者的炎症部位之方法，該方法包括向該受試者給予包含0.005 mg/mL至0.037 mg/mL MEDI9197的組成物，其中該組成物經由注射給予至腫瘤。在一些實施方式中，來自受試者的血液樣品顯示出，與給予之前的表現相比，在給予24小時內，T_H 1標籤表現增加、1型IFN標籤表現增加、CD8a轉錄物表現減少、或NK細胞標籤表現減少中的一種或多種，從而將NK細胞和T細胞運輸至炎症部位。

本發明還提供了包含0.005 mg/mL至0.037 mg/mL MEDI9197的可注射組成物用於增加人類受試者的免疫激活之用途，其中與給予之前的循環水平相比，該受試者在給予24小時內具有IFN-γ、CXCL10或CXCL11中的一種或多種的循環水平增加。

本發明進一步提供了包含0.005 mg/mL至0.037 mg/mL MEDI9197的可注射組成物用於增加人類受試者的炎症之用途，其中與給予之前的表現相比，在給予3週內，該受試者在注射部位表現CD40、CD8、CD56或PD-L1中的一種或多種的免疫細胞具有增加的浸潤。

本發明另外提供了包含0.005 mg/mL至0.037 mg/mL MEDI9197的可注射組成物用於將免疫細胞（例如，T細胞和/或NK細胞）運輸至人類受試者中的炎症部位之用途。在一些實施方式中，與給予之前的表現相比，來自受試者的血液樣品顯示出，在給予24小時內，T_H 1標籤表現增加、1型IFN標籤表現增加或CD8a轉錄物表現減少中的一種或多種。

在一些實施方式中，組成物中MEDI9197的濃度為0.037 mg/mL。在其他的實施方式中，組成物中MEDI9197的濃度為0.012 mg/mL。在某些實施方式中，組成物中MEDI9197的濃度為0.005 mg/mL。

在一些情況下，可注射組成物包含芝麻油和無水乙醇。視情況，該組成物可以包含丁基羥基甲氧苯（BHA）。該組成物可以包含約92.47%（w/w）的芝麻油。該組成物可以包含約7.5%（w/w）的無水乙醇。該組成物可以包含約0.03%（w/w）的BHA。

人類受試者可能患有皮膚腫瘤或皮下腫瘤。 在某些實施方式中，包含MEDI9197的組成物的注射係瘤內的。

因此，本發明包括治療人類受試者的皮膚腫瘤或皮下腫瘤之方法，該方法包括經由瘤內注射向該受試者給予包含0.005 mg/mL至0.037 mg/mL MEDI9197、92.47%（w/w）芝麻油、7.5%（w/w）無水乙醇和0.03%（w/w）的BHA的組成物。在一些實施方式中，組成物中MEDI9197的濃度為0.005 mg/mL。在其他的實施方式中，組成物中MEDI9197的濃度為0.012 mg/mL。在仍然其他的實施方式中，組成物中MEDI9197的濃度為0.037 mg/mL。

在本發明的一些實施方式中，在給予包含0.005 mg/mL至0.037 mg/mL的MEDI9197的組成物後，在受試者中MEDI9197的峰值血漿濃度≤ 100 pg/mL。

除非另外指示，否則本發明的實踐將採用製藥學、配方科學、蛋白質化學、細胞生物學、細胞培養、分子生物學、轉基因生物學、微生物學、重組DNA、以及免疫學的常規技術，該等技術在本領域的技能範圍內。此類技術在文獻中得到充分解釋。參見，例如Handbook of Pharmaceutical Excipients [藥物賦形劑手冊]（第7版，Rowe等人編輯，2012）；Martin’s Physical Pharmacy and Pharmaceutical Sciences [馬丁的物理藥學與藥物科學]（第6版，Sinko，2010）；Remington: The Science and Practice of Pharmacy [雷明頓：藥學科學與實踐]（第21版，Univ. Sci. Philadelphia [費城科技大學]編輯，2005）；Current Protocols in Molecular Biology [分子生物學現代方法]（Ausubel等人編輯，2016）；Molecular Cloning: A Laboratory Manual [分子選殖：實驗室手冊]（第4版，Green和Sambrook編輯，2012）；Lewin’s Genes XI [勒溫的基因XI]（第11版，Krebs等人編輯，2012）；DNA Cloning: A Practical Approach, Volumes I and II [DNA選殖：實踐方法，第一卷和第二卷]（第2版，Glover和Hames編輯，1995）；Protein Engineering: A Practical Approach [蛋白質工程：實用方法]（第1版，Rees等人編輯，1993）；Culture Of Animal Cells [動物細胞培養]（第6版，Freshney，2010）；Antibodies: A Laboratory Manual [抗體：實驗室手冊]（第2版，Greenfield編輯，2013）；Antibody Engineering [抗體工程]（第2版，Borrebaeck編輯，1995）。

為了使本發明可以更容易理解，首先定義了某些術語。另外的定義在整個揭露中闡述。除非另外定義，否則在本文使用的所有技術和科學術語具有如熟悉該項技術者通常理解的相同含義。例如，Dictionary of Pharmaceutical Medicine [藥物醫學詞典]（第3版，Nahler和Mollet編輯，2013）；The Dictionary of Cell and Molecular Biology [細胞和分子生物學詞典]（第5版，J.M. Lackie編輯，2013），Oxford Dictionary of Biochemistry and Molecular Biology [牛津生物化學和分子生物學詞典]（第2版，R. Cammack等人編輯，2008），以及The Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology [簡明生物醫學與分子生物學詞典]（第2版，P-S. Juo，2002）可以為技術人員提供本文所使用的一些術語的通用定義。

本文提供的任何標題不是本發明不同方面或實施方式之限制，可以藉由作為一個整體參考本說明書來獲得該等方面或實施方式。因此，藉由參考本說明書以其全文更完全地定義了緊接著在下文中定義的術語。

此揭露中所引用的所有參考文獻藉由引用以其全文特此結合。此外，任何針對本文所引用或提及的任何產品的製造商說明書或目錄均藉由引用併入。藉由引用併入本文本的文件或其中的任何教導可以用於本發明之實踐中。藉由引用併入本文本的文件不被承認是先前技術。 I. 定義

如在本說明書和所附申請專利範圍中使用的，單數形式“一/一個/種（a/an）”、和“該/所述（the）”包括複數指代物，除非上下文明確地指示其他的情況。術語“一/一個/一種（a）”（或“一/一個/一種（an）”）、以及術語“一個或多個/一種或多種（one or more）”和“至少一個/至少一種（at least one）”可以互換地使用。

此外，“和/或”被理解為這兩個指定的特徵或組分的每一者與或不與另一者的特定揭露。因此，例如在短語如“A和/或B”中使用的術語“和/或”，旨在包括A和B、A或B、A（單獨）、以及B（單獨）。同樣，例如在短語如“A、B、和/或C”中使用的術語“和/或”旨在包括A、B、以及C；A、B、或C；A或B；A或C；B或C；A和B；A和C；B和C；A（單獨）；B（單獨）；和C（單獨）。

當用語言“包含”來描述實施方式時，包括了關於“由……組成”和/或“基本上由……組成”描述的其他類似實施方式。

單位、首碼、和符號係以其國際單位系統（Système International de Unites）（SI）接受的形式表示。數字範圍包括定義該範圍的數字，並且本文提供的任何單個值可以用作包括本文提供的其他單個值的範圍的端點。例如，一組值例如1、2、3、8、9和10來自1-10、來自1-8、來自3-9等的數字範圍的揭露。

“分離的”分子係以自然界中沒有發現的形式存在的分子，包括已被純化的那些分子。在一些實施方式中，分離的分子基本上是純的。如本文所使用的，術語“基本上純的”係指大於75%、較佳的是大於80%或90%，並且最較佳的是大於95%的純度。

“標記”係可以直接或間接與分子軛合的可檢測的化合物，以便產生“經標記的”分子。該標記可以是本身可檢測的（例如，放射性同位素標記或螢光標記），或者可以催化可檢測的底物化合物或組成物的化學改變（例如，酶標記）。

術語“抑制（inhibit）”、“阻斷（block）”、和“壓制（suppress）”可互換地使用，並且指發生或活性的任何統計學顯著降低，包括發生或活性的完全阻斷。例如，“抑制”可以指活性或發生的大約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或100%的降低。

“活性劑”係旨在在疾病的診斷、治癒、緩解、治療、或預防中提供藥理活性或其他直接作用、或影響人體的結構或任何功能的成分。活性劑可以與一種或多種其他成分結合，並且可以但不一定是呈成品劑型。術語“活性劑”和“藥物物質”在本文中可以互換地使用。

活性劑的“有效量”係足以實現明確規定的目的的量。關於規定的目的，“有效量”可以經驗為主地並且以常規方式來確定。

術語“藥物組成物”係指如下製劑，該製劑處於允許活性成分的生物活性有效的形式並且不含有對該組成物將要給予的受試者具有不可接受的毒性的另外組分。這種組成物可以是無菌的並且可以包括藥學上可接受的載體，例如生理鹽水。藥學上可接受的載體或稀釋劑的形式和特徵可藉由有待組合的活性成分的量、給予途徑和其他熟知的變數來確定。合適的藥物組成物可以包括一種或多種緩衝液（例如乙酸鹽、磷酸鹽或檸檬酸鹽緩衝液）、表面活性劑（例如聚山梨醇酯）、穩定劑（例如人白蛋白）、防腐劑（例如苯甲酸鈉）、增強生體可用率的吸收促進劑和/或其他常規的增溶劑或分散劑。

“受試者”或“個體”或“動物”或“患者”或“哺乳動物”意指期望診斷、預後、或治療的任何受試者，特別是哺乳動物受試者。哺乳動物受試者包括人、家畜、農畜、體育動物、和實驗室動物，包括例如人、非人靈長動物、犬科動物、貓科動物、豬、牛、馬、齧齒動物（包括大鼠和小鼠）、兔子等。

術語例如“治療（treating或treatment或to treat）”或“減輕（alleviating或to alleviate）”係指治癒、減慢已診斷的病理病症或障礙、減輕已診斷的病理病症或障礙的症狀、和/或停止已診斷的病理病症或障礙的進展的治療性措施。因此，需要治療的患者包括已患有該障礙的那些。在某些實施方式中，如果患者顯示例如全部、部分或者暫態減輕或消除與疾病或障礙相關的症狀，則該受試者根據本文提供的方法成功地“治療”了疾病或障礙。

“預防（prevent或prevention）”係指預防和/或減緩靶標病理病症或障礙發展的防禦性或預防性措施。因此，需要預防的患者包括那些容易患有或易患障礙的那些。在某些實施方式中，如果相比於未經受本發明方法的患者，患者暫態或永久地表現出，例如與疾病或障礙相關的更少或不太嚴重的症狀，或與該疾病或障礙相關的症狀的更遲的發作，則根據本文提供的方法成功地預防了疾病或障礙。

“不良事件”（AE）係給予藥物產品的受試者或臨床調查對象中的任何不良醫學事件，並且其不一定與該治療具有因果關係。因此，AE可以是與醫藥產品使用暫時相關的任何不利的和意想不到的徵兆（包括異常的實驗室發現）、症狀或疾病，無論其是否被認為與醫藥產品有關。（ICH良好臨床實踐指南（ICH Guideline for Good Clinical Practice）E6（R1）。）

“嚴重不良事件”（SAE）係指導致死亡、立即危及生命、需要住院治療或延長住院時間、導致持續性或顯著的殘疾/無行為能力、係受試者後代中的先天性畸形/先天性缺陷、並且/或者是可能危及受試者或可能需要醫療干預以防止上述結果之一的任何AE。

“細胞介素釋放綜合症”（CRS）係由活化的T細胞引起的全身性炎症反應，其特徵為噁心、頭痛、心動過速、低血壓、皮疹和氣短。

“週期”係劑量給予之間的時間段。例如，如果藥物組成物在8週的時間段裡每兩週給予一次，則給予會發生在四個週期裡，每個週期十四天。通常，給予當天係一個週期的第1天。 II. 免疫應答調節劑和組成物

本發明使用的組成物包含免疫應答調節劑（IRM）。已經顯示IRM可誘導某些細胞介素例如干擾素α（IFN-α）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）、和某些白細胞介素的產生，表明該等化合物可以抑制腫瘤細胞生長和病毒產生。藉由誘導細胞介素生物合成來調節免疫應答的能力也使得IRM可用作疫苗佐劑。在本發明中，IRM係Toll樣受體7/8（TLR7/8）激動劑，MEDI9197，也稱為S-36862和3M-052（圖 1 ）。

可以使用IRM及其鹽的任何藥學上可接受的形式，包括異構物（例如非鏡像異構物和鏡像異構物）、溶劑化物、多晶型物等。特別地，本發明具體地包括該化合物的鏡像異構物的每一者、以及鏡像異構物的外消旋混合物。

MEDI9197可以藉由合成路線合成，所述合成路線包括類似於化學領域熟知的那些過程。起始材料通常可從商業來源例如Aldrich Chemicals [奧德里奇化學品公司]（密爾沃基，威斯康辛州）獲得或者使用熟習該項技術者熟知的方法容易地製備（例如，藉由如下方法製備，該等方法一般性描述於：Louis F. Fieser和Mary Fieser，Reagents for Organic Synthesis [有機合成試劑]，第1-19卷，紐約州的威利出版社（Wiley）（1967-1999版）；Alan R. Katritsky、Otto Meth-Cohn、Charles W. Rees，Comprehensive Organic Functional Group Transformations [綜合性有機官能團轉化]，第1-6卷，Pergamon Press [帕加蒙出版社]，英格蘭牛津，(1995)；Barry M. Trost和Ian Fleming，Comprehensive Organic Synthesis [綜合有機合成]，第1-8卷, Pergamon Press [帕加蒙出版社]英格蘭牛津，(1991)；或Beilsteins Handbuch der organischen Chemie [貝爾斯坦有機化學手冊]，4，Aufl. Ed，Springer-Verlag [施普林格出版社]，德國柏林，包括增刊（也可以藉由貝爾斯坦（Beilstein）線上資料庫獲得））；也參見美國專利公開案號2016/0271059。

IRM可以使用本領域的標準方法純化。純化方法包括，例如層析法（例如高壓液相層析（HPLC））、溶劑提取和沈澱。

在一些實施方式中，用於本發明的組成物包含約0.0012 mg/mL至約0.055 mg/mL IRM（MEDI9197）。例如，組成物可以包含約0.0012 mg/mL、0.0025 mg/mL、0.005 mg/mL、0.012 mg/mL、0.037 mg/mL或0.055 mg/mL IRM。IRM的量可能會根據所處理的受試者和預期的指示而不同。

在一些實施方式中，組成物以約1 mL注射的注射體積給予至患者。在其他實施方式中，組成物以小於約1 mL的注射體積給予。例如，組成物能以約100 μL、約150 μL、約200 μL、約250 μL、約300 μL、約350 μL、約400 μL、約450 μL、約500 μL、約550 μL、約600 μL、約650 μL、約700 μL、約750 μL、約800 μL、約850 μL、約900 μL或約950 μL的注射體積給予。

用於本發明的一些可注射組成物包含乙醇。在一個實施方式中，組成物包含不含有任何水或變性劑的乙醇，例如USP等級的無水乙醇。乙醇能以從約1%w/w至約9%w/w，例如從約3%w/w至約8%w/w、從約5%w/w至約7.5%w/w、從約1%w/w至約3%w/w、從約3%w/w至約4%w/w、從約4%w/w至約5%w/w、從約5%w/w至約6%w/w、從約6%w/w至約7%w/w、從約6.5%w/w至約7.5%w/w、或從約8%w/w至約9%w/w的量存在。在具體的實施方式中，組成物包含約7.5%w/w乙醇。

在一些實施方式中，組成物包含過量的乙醇（即，比可溶於芝麻油的量更大），例如至少10%w/w乙醇、至少12%w/w乙醇、至少14%w/w乙醇，其用於溶解更大量的IRM化合物。在此類情況下，與簡單地將IRM添加至預混合的芝麻油-乙醇溶液中相比，當將IRM-乙醇溶液添加到芝麻油中時IRM溶解得快得多；然後將過量的乙醇（其以超過在芝麻油中的溶解度限度存在）蒸發以產生最終配製物（含有9%w/w乙醇或更少）。

代替乙醇或除了乙醇之外，可以使用其他藥學上可接受的共溶劑。

本發明中使用的可注射組成物還可以包括藥學上可接受的芝麻油，例如芝麻油（NF）。在一些實施方式中，芝麻油能以從約90%w/w至約99%w/w，例如從約91%w/w至約98%w/w、從約92%w/w至約97%w/w、從約93%w/w至約96%w/w、從約94%w/w至約95%，在進一步的實例中，從約92%w/w至約93%w/w、從約92.1%w/w至約92.9%w/w、從約92.2%w/w至約92.8%w/w、從約92.3%w/w至約92.7%w/w、從約92.4%w/w至約92.6%w/w、從約92.4%w/w至92.5%w/w、和更具體地約92.40%w/w或約92.47%w/w的量存在。在一些實施方式中，可以將芝麻油進行精製，這樣使得一種或多種極性化合物基本上從芝麻油中去除或在基本上不改變芝麻油的脂肪酸譜的情況下使其含量降低。例如，芝麻油可以具有包括棕櫚酸、硬脂酸、油酸、與亞油酸的脂肪酸譜（fatty acid profile）。其他脂肪酸也能以較低水平（典型地小於1%w/w）存在。存在於芝麻油中的極性化合物包括但不限於如下化合物：例如甘油單酯、甘油二酯、游離脂肪酸、植物固醇、色素（葉綠素、胡蘿蔔素）、芝麻素、芝麻酚林（sesamolin）、由氧化產生的產品、以及環境化學物質。可以使用標準試驗，例如酸值試驗、羥值試驗、過氧化值試驗、以及微量氮值試驗，定量地測量芝麻油中的極性化合物。可以將標準層析法用於從芝麻油中去除或實質性地降低至少一種極性化合物的含量，以提供精製的芝麻油。本領域熟知的適合的層析法包括基於重力的柱層析法、快速柱層析法、中壓液相層析法、或高壓層析法。

在一些實施方式中，芝麻油具有小於或等於2的羥值。可以根據USP 36 ＜401＞ Fats and Fixed Oils, Hydroxyl Value[《USP 36 ＜401＞ 脂肪與固定油，羥值》]中所描述的公佈的程序來確定芝麻油的羥值。在一些實施方式中，芝麻油的酸值小於或等於0.1。可以根據USP 36 ＜401＞ Fats and Fixed Oils, Acid Value[《USP 36 ＜401＞ 脂肪與固定油，酸值》]中所描述的公佈的程序來確定芝麻油的酸值。在一些實施方式中，芝麻油的過氧化值小於或等於1。可以根據USP 36 ＜401＞ Fats and Fixed Oils, Peroxide Value[《USP 36 ＜401＞ 脂肪與固定油，過氧化值》]中所描述的公佈的程序來測定芝麻油的過氧化值。在一些實施方式中，芝麻油的總氮含量小於或等於1 ppm。可以根據ASTM D5762-12中所描述的公佈的方法來確定芝麻油的微量氮值。在一些實施方式中，芝麻油包含不大於0.05%w/w的芝麻素。在一些實施方式中，芝麻油包含不大於0.05%w/w的芝麻酚林。可以根據T. Tashiro、Y. Fukuda、T. Osawa和M. Namiki在Journal of the American Oil Chemists’ Society [美國石油化學家學會雜誌], 67, 508 (1990)所述的公佈的芝麻素/芝麻酚林測定來確定芝麻素和芝麻酚林的水平。

代替芝麻油或除了芝麻油之外，可以使用其他藥學上可接受的脂質，包括但不限於蓖麻油、棉籽油、大豆油、紅花油和中鏈甘油三酯。

在一些實施方式中，藥物配製物可以進一步包括一種或多種添加劑，該添加劑包括但不限於抗氧化劑、抗微生物劑、佐劑、防腐劑、增稠劑、助懸劑、表面活性劑、以及分散劑。可以藉由滅菌程序並且藉由包括各種抗細菌劑和抗真菌劑（例如，對羥苯甲酸酯、三氯三級丁醇、山梨酸苯酚等）兩者來確保防止微生物的出現。在一些實施方式中，配製物可以包括抗氧化劑，例如丁基羥基甲氧苯（BHA）、丁基化羥基甲苯（BHT）、卵磷脂、沒食子酸丙酯、α-生育酚等。技術人員可以根據其特性和功能選擇合適濃度的給定添加劑。例如，在配製物中添加的抗氧化劑濃度可以是至少約10 ppm、50 ppm、100 ppm、200 ppm、300 ppm或400 ppm。在一個較佳的實施方式中，組成物包含約300 ppm（0.03%w/w）的BHA。在另一個較佳的實施方式中，組成物包含約200 ppm（0.02%w/w）的BHA。在另一個較佳的實施方式中，組成物包含約400 ppm（0.04%w/w）的BHA。

給予至受試者的組成物的pH通常為約5.5至約8.5，較佳的是約6.0至約7.8，其為用於注射到哺乳動物中的合適的pH水平。組成物的pH可以藉由任何合適的酸或鹼（例如鹽酸或氫氧化鈉）進行調節。 III. 使用方法

IRM，例如MEDI9197，可以誘導某些細胞介素的產生並且可用作能夠以許多不同的方式調節免疫應答的免疫應答調節劑，使它們可用於各種障礙的治療。

除引起細胞介素誘導的能力之外，IRM可對先天性免疫應答的其他方面產生作用。例如，可以刺激自然殺傷細胞的活性，其可能是由於細胞介素誘導。IRM也可以引起巨噬細胞的激活，它反過來刺激一氧化氮的分泌和另外的細胞介素的產生。此外，IRM可以引起B-淋巴細胞的增殖和分化。

IRM還可能對獲得性免疫應答產生作用。例如，當給予IRM例如MEDI9197時，可能間接誘導T輔助細胞1型（T_H 1）細胞介素IFN-γ的產生，並且可能抑制T輔助細胞2型（T_H 2）細胞介素IL-4、IL-5和IL-13的產生。

為此目的，本發明在一個實施方式中提供了藉由經由注射給予包含0.005 mg/mL至0.037 mg/mL MEDI9197的組成物來增加人類受試者的免疫激活的方法。與給予之前的循環水平相比，給予24小時內IFN-γ、CXCL10或CXCL11中的一種或多種的循環水平增加表示受試者中免疫激活增加。

本發明還提供了藉由經由注射給予包含0.005 mg/mL至0.037 mg/mL MEDI9197的組成物來增加人類受試者的炎症之方法。與給予之前的表現相比，在給予3週內表現CD40、CD8、CD56或PD-L1中的一種或多種的免疫細胞在注射部位的浸潤增加表明受試者的炎症增加。

本發明的另一個實施方式係藉由經由注射給予包含0.005 mg/mL至0.037 mg/mL MEDI9197的組成物，將免疫細胞運輸至人類受試者的炎症部位的方法。與給予之前的表現相比，給予24小時內來自受試者的血液樣品中T_H 1標籤表現增加、1型IFN標籤表現增加或CD8a轉錄物表現減少表明，將T細胞和/或NK細胞運輸到了炎症部位。

給予包含MEDI9197的可注射組成物的受試者可能患有疾病（例如病毒性疾病或腫瘤性疾病）；給予組成物可以提供治療處理。例如，受試者可能患有：(a) 腫瘤性疾病，例如黑色素瘤、白血病（例如骨髓性白血病、慢性淋巴球性白血病、多發性骨髓瘤、非何杰金氏淋巴瘤、皮膚T細胞淋巴瘤、B細胞淋巴瘤、以及毛細胞白血病）、乳癌、肺癌、前列腺癌、結腸癌、頭或頸部癌、膀胱癌或其他癌症；(b) 病毒性疾病，例如由痘病毒（例如正痘病毒，例如天花或牛痘、或觸染性軟疣）或乳多孔病毒（例如乳頭瘤病毒，例如引起生殖器疣、普通疣或足蹠疣的那些）感染導致的疾病；(c) 與傷口修復相關聯的疾病，例如抑制瘢痕疙瘩及其他類型瘢痕的形成（例如，組成物可以增強傷口癒合，包括慢性傷口）。

因此，本發明可以包括治療人類受試者疾病的方法，例如腫瘤性疾病或病毒性疾病。在一些實施方式中，受試者具有實體腫瘤，例如頭/頸腫瘤、乳房腫瘤、淋巴瘤、黑色素瘤或膀胱腫瘤。較佳的是，該方法包括將組成物注射到腫瘤塊中，即瘤內注射。一個實施方式包括用於治療皮膚T細胞淋巴瘤之方法。另一個實施方式包括治療人類受試者中的皮膚或皮下腫瘤的方法。在一個較佳的實施方式中，該方法包括經由瘤內注射向人類受試者給予包含0.005 mg/mL至0.037 mg/mL MEDI9197、92.47%（w/w）芝麻油、7.5%（w/w）無水乙醇和0.03%（w/w）BHA的組成物。在一些情況下，受試者中MEDI9197的峰值血漿濃度≤ 100 pg/mL。

包含MEDI9197的組成物可以作為單劑量或多劑量給予。可以根據需要按多次（即，週期）給予組成物以實現目標端點。注射間隔可能不同。例如，可以每1、2、3或4週、或每1、2、3、4、5或6個月給予組成物。在一個實施方式中，組成物每四週給予一次，持續1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16個週期。可以調整劑量方案以提供最佳的所希望的應答。 實例

可以藉由參考以下非限制性實例來進一步限定本揭露的實施方式，所述非限制性實例描述了TLR 7/8激動劑MEDI9197（藉由IT注射遞送）的1期、首次在人類中（FTIH）的、多中心、非盲、劑量遞增研究。熟習該項技術者應當清楚的是在不背離本揭露的範圍的情況下，可以對材料和方法二者做出許多修改。實例 1. 材料和方法 受試者和劑量

登記了23名男性和女性患者，所述患者年齡為18歲或以上，患有皮下/皮膚腫瘤。在篩查期間和治療期間的不同時間進行包括病史、體格檢查、標準臨床實驗室安全性測試和心電圖的篩查過程。

配製物係無菌溶液，其由溶解於與作為抗氧化劑的無水乙醇（7.5%w/w）和300 ppm（0.03%w/w）丁基羥基甲氧苯（BHA）一起配製的高度精製的芝麻油（92.47%w/w）的混合物中的MEDI9197組成。（參見US 2016/0271259）。MEDI9197活性溶液在5-mL琥珀色玻璃血清小瓶中作為3 mL配製物提供，該配製物含有0.6 mg/mL MEDI9197在92.40%芝麻油（NF）（%w/w）、7.5%無水乙醇（USP）（%w/w）和0.03%丁基羥基甲氧苯（NF）（%w/w）中的無菌溶液。稀釋劑也在5-mL琥珀色玻璃血清小瓶中作為3 mL配製物提供，在該配製物中芝麻油（92.47%w/w）與作為抗氧化劑的無水乙醇（7.5%w/w）和300 ppm（0.03%w/w）丁基羥基甲氧苯（BHA）一起配製。

對於給藥，將0.6 mg/ml活性溶液用稀釋劑稀釋至所希望的強度，並將1 mL給予至每個易於接近的在1.5 cm至5 cm之間的皮膚/皮下病變（其中容易接近的皮膚/皮下病變定義為藉由超音波可觸知和/或視覺化的皮膚或皮下團塊）。在每次訪問（Q28d）時，使用成像指導或視覺檢查在相同腫瘤中進行固定量瘤內注射。

在MEDI9197的每個劑量後觀察受試者並且監測生命徵象至少6小時，注意即時的不良事件（AE）。 樣品採集

在不同研究訪問中在具有乙二胺四乙酸鉀（K2 EDTA）的管中收集用於PK評估的血漿樣品，以便使用液相層析法和質譜法（LC/MS/MS）確定MEDI9197濃度。收集探索性血液樣品用於分析可溶性因子例如C反應蛋白、細胞介素和趨化介素的循環水平。收集全血用於PBMC分離。對於基因表現分析，將全血樣品收集在PAXgene管中並冷凍保存用於RNA樣品製備。分析與Th1和IFN途徑有關的炎症/免疫細胞介素和因子的mRNA水平的治療前/治療後變化。

根據院內診療進行圖像指導的芯針腫瘤生檢。在第22天（+/-1天）在注射前和注射後進行生檢。將生檢樣品置於福馬林中，並進行福馬林固定的石蠟包埋處理，或者立即在液氮中冷凍並保存於-80°C下。藉由免疫組織化學和藥物基因組學分析（包括許多免疫相關蛋白的表現水平和定位），將生檢樣品用於評估生物標誌物。實例 2. 研究設計和安全結果

最初的研究設計係3 + 3劑量遞增，如表 1 和圖 2 所示，以便評估從0.005 mg至2.4 mg/腫瘤的劑量範圍以確定每個方案的最大耐受劑量（MTD）/最大評估劑量（MAD）。MTD係給予的最高劑量水平，其不超過＞ 1/3或≥ 2/6劑量限制性毒性（DLT）的毒性標準。研究時間表的示意圖顯示於圖 3 中。[ 表 1. ] 針對 MEDI9197 之劑量計算

在小鼠中，約0.13 mg/cm³ 腫瘤的MEDI9197劑量在B16-OVA模型中始終表現出統計學上顯著的功效。小型人類腫瘤（0.037 mg/1.8 cm³ 腫瘤）的起始臨床劑量係約0.02 mg/cm³ ，比小鼠腫瘤模型中使用的有效劑量低6倍。在人和猴PBMC中和在小鼠脾細胞中誘導體外細胞介素產生的最低有效濃度係59 ng/mL（100 nM）；選擇該濃度作為用於全身效應的最小預期生物學效應水平（MABEL）。

在猴毒理學研究（WIL 180037）中，在測試的所有劑量水平（1.25 mg/kg至5 mg/kg）下，血清細胞介素水平增加。從1.8 ng/mL至4.3 ng/mL範圍內的中位血清MEDI9197 C_max 低於誘導體外細胞介素產生的最低有效濃度（59 ng/mL），表明體內猴血液中觀察到的細胞介素增加，這可能是由於局部生產的溢出，而不是細胞介素的全身性產生。

儘管小鼠同時表現TLR7和TLR8，但公開的文獻表明小鼠TLR8具有改變的結合結構域，使其對TLR8選擇性激動劑的反應性較低（Jurk等人，2002；Hemmi等人，2002；Colak等人，2014；Gorden等人，2006）。因此，使用小鼠的MEDI9197實驗產生的數據可能表示與TLR8相比TLR7的優先激活。然而，TLR7和TLR8兩者都對人和猴中的TLR7‑選擇性和TLR8選擇性激動劑響應（Wagner等人，1999；Ketloy等人，2008；Wille-Reece等人，2006；Philbin等人，2012）。因此，猴的毒理學數據與小鼠的毒理學數據相比，與人類更為相關。在SC注射後，猴HNSTD為5 mg/kg（約60 mg/m² ），這係研究WIL-180037中測試的最高劑量。根據國際協調會議（International Conference on Harmonisation，ICH）S9指南，允許的起始臨床劑量係HNSTD的1/6（10 mg/m² ），這相當於16 mg/次注射。

每四週注射一次（Q4W）。劑量遞增從0.037 mg/mL（0.023 mg/m² ）開始；一名患者接受了劑量水平1.5（0.055 mg/mL）。我們的起始劑量提供了顯著的安全限度：基於ICH S9指導允許的起始劑量的438倍或基於猴HNSTD的2,631倍。觀察到兩種DLT：在0.037 mg下的3級細胞介素釋放綜合症（CRS）和在0.055 mg下的4級CRS。MTD被確定為每四週0.037 mg/mL/腫瘤。鑒於在0.037 mg劑量下所觀察到的DLT，將兩種較低劑量的0.0012 mg/mL和0.0005 mg/mL添加到研究設計中。

平均暴露時間為12週，範圍為3-52週。平均相對劑量強度為94%，範圍為50-127%。

最常見的（≥ 20%）藥物相關AE包括發熱、疲勞、受寒、淋巴細胞計數減少、噁心和注射部位疼痛。一名患者由於藥物相關AE（4級CRS）而終止了MEDI9197；沒有5級的藥物相關AE。發燒/CRS一般在注射24小時內發生。發燒一般在48小時內消退；CRS持續大約一週，計數大約需要一週時間才能恢復，但是有些患者直到第三週才恢復。對於大多數患者，發燒/CRS在隨後的注射中不存在或減少。總結顯示於表 2 中。 [表 2. ] 治療相關之不良事件（在總群體裡的 ≥ 4 名患者中發生） 實例 3. 藥效學和藥物動力學效應

評估來自用0.037 mg（n = 6）、0.012 mg（n = 8）和0.005 mg（n = 8）處理的患者的MEDI9197的腫瘤和外周PD效應。局部PD效應在縱向生檢中藉由免疫組織化學（IHC）進行評估。

MEDI9197的峰值血漿水平極低（≤ 0.1 ng/mL）（圖 4A-4D ）。該等水平比在人PBMC中體外誘導細胞介素的最小有效濃度（59 ng/mL）低約600倍。

基於定量圖像分析（圖 5A-5C ），用0.037 mg治療的大多數患者在治療開始後3週表現出CD8（T細胞）、CD40（骨髓和B細胞）、CD56（NK細胞）或PD-L1（腫瘤和免疫細胞）標誌物的增加。

成對腫瘤生檢的RNAseq分析顯示TLR7/8-下游調節基因（圖X）和先天性和適應性免疫激活標籤（例如1型IFN、IFNγ和T效應子標籤（≥ 1.5倍））增加，其與IHC一致並表明了炎症的增加（圖 6 ）。全血微陣列數據的分析證明了，在給藥後24小時，1型IFN和T_H 1基因表現標籤增加（≥ 2倍），並且CD8A 轉錄物和NK細胞標籤表現暫態減少（≥ 1.5倍），表明在用0.005 mg、0.012 mg和0.037 mg的MEDI9197治療的患者中T細胞和NK細胞的運輸（圖 7A-7D ）。

對於所有同齡組，觀察到IFN-γ、CXCL10和CXCL11的外周水平增加（圖 8A-8C ）。在IT給予0.037 mg MEDI9197的24小時內，同齡組1中的IFN-γ、CXCL10和CXCL11的中位峰值分別為236 pg/mL、9,286 pg/mL和558 pg/mL（圖 8G-8I ）。相對於IFN-γ、CXCL10和CXCL11的基線這種倍數變化的增加範圍分別為4.5-43、30-132和3.7-52。在IT給予0.012 mg MEDI9197的24小時內，同齡組-1中的IFN-γ、CXCL10和CXCL11的中位峰值分別為125 pg/mL、6,684 pg/mL和808 pg/mL。相對於IFN-γ、CXCL10和CXCL11的基線這種倍數變化的增加範圍分別為1.1-35、2.6-72和1.9-24。在IT給予0.005 mg MEDI9197的24小時內，同齡組-2中的IFN-γ、CXCL10和CXCL11的中位峰值分別為58 pg/mL、5,120 pg/mL和344 pg/mL。相對於IFN-γ、CXCL10和CXCL11的基線這種倍數變化的增加範圍分別為0.9-6.4、0.9-27和0.8-7.3。

有趣的是，第二次IT注射到相同的病變中導致5/6的同齡組1患者中的峰值IFN-γ、CXCL10和CXCL11水平相對於第一次劑量後的平緩升高分別為51.1%、67.2%和58.2%（圖 9A-9C ）。與劑量1相比，劑量2後24小時觀察到了細胞介素升高的下降趨勢（圖 9G-9I ）。該等結果與耐受性或快速抗藥反應一致。

代謝反應在同齡組-1的患有橫紋肌肉瘤的患者中進行了評估，所述橫紋肌肉瘤患者接受了對單個病變中的反復的MEDI9197 IT注射並且然後對注射的病變進行了姑息性放射。在基線和第197天的PET掃描證明了，在注射的病變和未注射的病變中FDG攝取減少（圖 10A ）。與基線相比，兩種病變的腫瘤大小都減少了36%（圖 10B ）。在第141天和第197天在注射的病變中觀察到的腫瘤大小和SUV值的變化被對注射的病變的姑息性放射混淆（圖 10B ），其效應係未知的。 參考文獻 American Cancer Society. Cancer facts and figures; 2014 [引用於2015年5月27日]; [大約第72頁]. 獲得自www.cancer.org/acs/groups/content/@research/documents/webcontent/acspc-042151.pdf Beutner KR, Spruance SL; Hougham AJ, Fox TL, Owens ML, Douglas JM Jr Treatment of genital warts with an immune-response modifier (imiquimod). J Am Acad Dermatol. 1998;38;230-9. Colak E, Leslie A, Zausmer K, Khatamzas E, Kubarenko AV, Pichulik T, et al. RNA and imidazoquinolines are sensed by distinct TLR7/8 ectodomain sites resulting in functionally disparate signaling events. J Immunol. 2014;192(12):5963-73. Dudek AZ, Yunis C, Harrison LI, Kumar S, Hawkinson R, Cooley S et al. First in human phase I trial of 852A, a novel systemic toll-like receptor 7 agonist, to activate innate immune responses in patients with advanced cancer. Clin.Cancer Res. 2007;13 :7119-25. Dumitru CD, Antonysamy MA, Gorski KS, Johnson DD, Reddy LG, Lutterman JL et al. NK1.1+ cells mediate the antitumor effects of a dual Toll-like receptor 7/8 agonist in the disseminated B16-F10 melanoma model. Cancer Immunol. Immunother. 2009;58:575-87. Dummer R, Hauschild A, Becker JC, Grob JJ, Schadendorf D, Tebbs V et al. An exploratory study of systemic administration of the toll-like receptor-7 agonist 852A in patients with refractory metastatic melanoma. Clin.Cancer Res. 2008;14:856-64. Gorden KB, Gorski KS, Gibson SJ, Kedl RM, Kieper WC, Qiu X, et al. Synthetic TLR agonists reveal functional differences between human TLR7 and TLR8. J Immunol. 2005 Feb 1;174(3):1259-68. Hemmi H, Kaisho T, Takeuchi O, Sato S, Sanjo H, Hoshino K, et al. Small anti-viral compounds activate immune cells via the TLR7 MyD88-dependent signaling pathway. Nat Immunol. 2002;3(6):196-200. Jurk M, Heil F, Vollmer J, Schetter C, Krieg AM, Wagner H, et al. Human TLR7 or TLR8 independently confer responsiveness to the antiviral compound R-848. Nat Immunol. 2002;3(6):499. Ketloy C, Engering A, Srichairatanakul U, Limsalakpetch A, Yongvanitchit K, Pichyangkul S, et al. Expression and function of Toll-like receptors on dendritic cells and other antigen presenting cells from non-human primates. Vet Immunol and Immunopathol 2008;125:18-30. Mullins S, Grigsby I, Harrison L, et al. Local immune activation resulting in tumor growth inhibition with MEDI9197 – an intratumorally administered TLR7/8 agonist. Poster presented at the Annual Meeting of the American Association for Cancer Research, New Orleans, LA, April 16-20, 2016. Philbin VJ, Dowling DJ, Gallington LC, Cortés G, Tan Z, Suter EE, et al. Imidazoquinoline Toll-like receptor 8 agonists activate human newborn monocytes and dendritic cells through adenosine-refractory and caspase-1-dependent pathways. J Allergy Clin Immunol. 2012;130(1):195-204. Savage P, Horton V, Moore J, Owens M, Witt P. Gore ME et al. A phase I clinical trial of imiquimod, an oral interferon inducer, administered daily. Brit J Cancer. 1996;74:1482-6. Shi M, Chen X, Ye K, Yao Y, Li Y. Application potential of toll-like receptors in cancer immunotherapy. Medicine 2016;95:e3951. Sidky YA, Borden EC, Weeks CE, Reiter MJ, Hatcher JF, Bryan GT. et al. Inhibition of murine tumor growth by an interferon-inducing imidazoquinolinamine. Cancer Res. 1992;52 (13):3528-33. Singh M, Khong H, Dai Z, Huang XF, Wargo JA, Cooper ZA, et al. Effective innate and adaptive antimelanoma immunity through localized TLR7/8 activation. J Immunol. 2014;193(9):4722-31. Smirnov D, Schmidt JJ, Capecchi JT, Wightman PD. Vaccine adjuvant activity of 3M-052: an imidazoquinoline designed for local activity without systemic cytokine induction. Vaccine 2011;29:5434-5442. Tomai MA, Miller RL, Lipson KE. Immune response modifiers: imiquimod and future drugs for modulating the immune response. Drug Discov Today Ther Strateg. 2006;3:343-52. Wagner TL, Ahonen CL, Couture AM, Gibson SJ, Miller RL, Smith RM, et al. Modulation of TH1 and TH2 cytokine production with the immune response modifiers, R-848 and imiquimod. Cell Immunol. 1999 Jan 10;191(1):10-9. Wille-Reece U, Flynn BJ, Loré K, Koup RA, Miles AP, Saul A, et al. Toll-like receptor agonists influence the magnitude and quality of memory T cell responses after prime-boost immunization in nonhuman primates. J Exp Med. 2006;203(5):1249-58. Witt PL, Ritch PS, Reding D, McAuliVe TL, Westrick L, Grossberg SE, et al. Phase I trial of an oral immunomodulator and interferon inducer in cancer patients. Cancer Res. 1993;53:5176-80. ***

具體實施方式的前述描述將充分地揭示本發明之總體性質，使得在不脫離本發明總體概念情況下，其他人可以無需過多的實驗藉由應用本領域技術內的知識，容易地針對此類具體實施方式的各種應用進行修改和/或改編。因此，基於本文提出的傳授和指導，此類改編和修改旨在處於所揭露的實施方式的含義和等效範圍內。應當理解本文的短語或術語係出於描述而非限制的目的，這樣使得本說明書的術語或短語可根據該等傳授內容和指導為技術人員所理解。本發明進一步藉由下述申請專利範圍進行描述。

[ 圖 1 ] 顯示了MEDI9197之結構。

[ 圖 2 ] 顯示了劑量遞增研究之設計。

[ 圖 3 ] 顯示了劑量遞增研究時間表之示意圖。

[ 圖 4A-4D ] 顯示了第一次IT給予後MEDI9197的血漿濃度。在同齡組1.5（0.05455 mg）（圖 4A ）、同齡組1（0.037 mg）（圖 4B ）、同齡組-1（0.012 mg）（圖 4C ）和同齡組-2（0.005 mg）（圖 4D ）中，IT注射MEDI9197後MEDI9197的峰值血漿水平小於約100 pg/mL（0.1 ng/mL）。在人PBMC（59 ng/mL）中體外誘導細胞介素的MEDI9197的最小有效濃度在圖軸之外，並且比在IT給予MEDI9197後觀察到的峰值血漿水平高約600倍。

[ 圖 5A-5C ] 顯示了MEDI9197展示了在患者亞組中的PD效應的證據。局部PD效應在縱向生檢中藉由免疫組織化學（IHC）進行評估。圖 5A 顯示了在同齡組1（0.037 mg）中在治療前和第22天在患者腫瘤中觀察到的CD8（T細胞）、PD-L1（腫瘤和免疫細胞）、CD40（骨髓和B細胞）和CD56（NK細胞）IHC染色的代表性圖像。圖 5B 顯示了在第22天在來自同齡組1（0.037 mg）、同齡組-1（0.012 mg）和同齡組-2（0.005 mg）內的患者的腫瘤中經由IHC染色CD8（圓圈）、PDL1（正方形）、CD40（三角形）和CD56（菱形）相對於基線值的倍數變化。由Definiens定量分析進行定量。圖 5C 顯示了PD效應的總結，其中倍數增長被定義為在基線上的2倍增加。

[ 圖 6 ] 顯示了用MEDI9197治療與患者亞組中的先天性和適應性基因標籤的增加有關。顯示了相對於轉錄物或基因標籤表現的治療前的值，來自同齡組1、同齡組-1和同齡組-2中患者的腫瘤在治療開始後三週的Log2倍數變化，並藉由無監督聚類進行排序。X軸顯示了患者識別號，括弧內為同齡組。

[ 圖 7A-7D ] 顯示了來自同齡組1患者的血液樣品中經由基因表現的MEDI9197 PD效應。血液中的縱向基因表現顯示，在第1天（由↓標出），在同齡組1（0.037 mg，n = 6）、同齡組-1（0.012 mg，n = 8）和同齡組-2（0.005 mg，n = 6）中瘤內MEDI9197給藥後，T_H 1（圖7A）和1型干擾素（圖7B）基因表現標籤增加、以及CD8A 轉錄物（圖7C）和NK標籤（圖7D）暫態降低。

[ 圖 8A-8I ] 顯示了在MEDI9197給予24小時內增加的外周細胞介素水平。圖 8A-8F 顯示了在MEDI9197的第一次IT注射之後在同齡組1（n = 6）、同齡組-1（n = 9）和同齡組-2（n = 8）中的全身PD效應。IFNγ（圖 8A ）、CXCL10（圖 8B ）、CXCL11（圖 8C ）的縱向血漿水平證實了細胞介素的升高，其在注射後18-24小時達到峰值。IL-6（圖 8D ）、IL-10（圖 8E ）和TNFα（圖 8F ）顯示了細胞介素水平沒有顯著的升高。對於IFNγ（圖 8G ）、CXCL10（圖 8H ）和CXCL11（圖 8I ）顯示了來自三個同齡組的個體患者的峰值血漿細胞介素水平。圓圈表示同齡組1（A-I）；正方形表示同齡組-1（A-C、G-I）或同齡組-2（D-F）；三角形表示同齡組-1（D-F）或同齡組-2（A-C、G-I）。誤差條表示平均值的標準誤差。G、H和I中的水平線表示中位數。*= p ＜ 0.05

[ 圖 9A-9I ] 顯示了MEDI9197的第二次IT給予後，峰值細胞介素水平的平緩升高。圖 9A-9F 顯示了在兩次IT注射之後同齡組1中的全身PD效應。IFNγ（圖 9A ）、CXCL10（圖 9B ）、CXCL11（圖 9C ）、IL-6（圖 9D ）、IL-10（圖 9E ）和TNFα（圖 9F ）的縱向血漿水平證明了，對於同齡組1，與第一次注射（n = 6）峰值細胞介素水平相比，在第二次瘤內注射（n = 5）後峰值血漿水平平緩升高。對於IFNγ（圖 9G ）、CXCL10（圖 9H ）和CXCL11（圖 9I ）顯示了同齡組1中個體患者的峰值血漿細胞介素水平（其在注射後18-24小時發生，n = 4）。誤差條表示平均值的標準誤差。

[ 圖 10A-10B ] 顯示了瘤內（IT）給予0.012 mg MEDI9197後患者的代謝回應。圖 10A 顯示了在患者＃20018560005的注射（上）和非注射（下）橫紋肌肉瘤病變中在基線處和重複MEDI9197注射後197天的PET掃描。數據證明了FDG攝取減少。圖 10B 顯示了MEDI9197注射的病變和未注射的病變的腫瘤大小。還顯示了向注射的病變注射MEDI9197（黑色箭頭）、生檢（紅色短線）和姑息性放射（粉紅色盒子）。SUV = 標準化攝取值。FDG = [18F]-2-氟-2-去氧-D-葡萄糖。x軸顯示以每月為間隔的時間。

[ 圖 11A-I ] 顯示了每個同齡組的個體患者外周細胞介素水平。該等圖確認了圖 8D-8F 中的結果，其進一步證明了IL-6（圖 11A-11C ）、IL-10（圖 11D-11F ）和TNFα（圖 11G-11I ）顯示在第一次IT注射MEDI9197之後，在同齡組1（n = 6）、同齡組-1（n = 9）和同齡組-2（n = 8）中細胞介素水平沒有顯著的升高。

圖 12 顯示了用MEDI9197處理導致了在患者的亞組中TLR7和TLR8途徑激活。顯示了治療開始後3週相對於來自同齡組1、同齡組-1和同齡組-2中患者的腫瘤的轉錄物表現的預治療的值的log₂ 倍數變化，並且藉由無監督聚類進行排序。log₂ 倍數變化的範圍被截短至-5至5的範圍。x軸顯示患者識別號，括弧內為同齡組以及腫瘤類型。TLR7和TLR8下游基因來源於Guiducci等人。

Claims (18)

1. 005 mg/mL至0.037 mg/mL MEDI9197的可注射組成物之用途，其係用於製備用以增加人類受試者中的免疫激活之藥物，其中與給予之前的循環水平相比，該受試者在給予24小時內具有IFN-γ、CXCL10或CXCL11中的一種或多種的循環水平增加。
2. 005 mg/mL至0.037 mg/mL MEDI9197的可注射組成物之用途，其係用於製備用以增加患有腫瘤的人類受試者中的炎症之藥物，其中與給予之前的表現相比，在給予3週內，該受試者在該腫瘤中表現CD40、CD8、CD56或PD-L1中的一種或多種的免疫細胞具有增加的侵潤。
3. 005 mg/mL至0.037 mg/mL MEDI9197的可注射組成物之用途，其係用於製備用以將免疫細胞運輸至人類受試者中的炎症部位之藥物。
4. 如申請專利範圍第1至3項中任一項所述之用途，其中在該組成物中MEDI9197的濃度為0.037 mg/mL。
5. 如申請專利範圍第1至3項中任一項所述之用途，其中在該組成物中MEDI9197的濃度為0.012 mg/mL。
6. 如申請專利範圍第1至3項中任一項所述之用途，其中在該組成物中MEDI9197的濃度為0.005 mg/mL。
7. 如申請專利範圍第1至3項中任一項所述之用途，其中該組成物包含芝麻油和無水乙醇。
8. 如申請專利範圍第7項所述之用途，其中該組成物包含至少92.47%（w/w）芝麻油和至少7.5%（w/w）無水乙醇。
9. 如申請專利範圍第1至3項中任一項所述之用途，其中該組成物包含丁基羥基甲氧苯（BHA）。
10. 如申請專利範圍第9項所述之用途，其中該組成物包含0.03%（w/w）BHA。
11. 如申請專利範圍第1至3項中任一項所述之用途，其中該受試者具有皮膚腫瘤或皮下腫瘤。
12. 一種組成物之用途，該組成物包含0.005 mg/mL至0.037 mg/mL MEDI9197、92.47%（w/w）芝麻油、7.5%（w/w）無水乙醇和0.03%（w/w）BHA，其係用於製備用以治療人類受試者中的皮膚腫瘤或皮下腫瘤之藥物，其中該藥物係用於腫瘤內注射。
13. 如申請專利範圍第12項所述之用途，其中該組成物中MEDI9197的濃度為0.005 mg/mL。
14. 如申請專利範圍第12項所述之用途，其中該組成物中MEDI9197的濃度為0.012 mg/mL。
15. 如申請專利範圍第12項所述之用途，其中該組成物中MEDI9197的濃度為0.037 mg/mL。
16. 如申請專利範圍第12項所述之用途，其中在該受試者中MEDI9197的峰值血漿濃度為≤ 100 pg/mL。
17. 如申請專利範圍第3項所述之用途，其中該免疫細胞係T細胞。
18. 如申請專利範圍第3項所述之用途，其中該免疫細胞係NK細胞。