TW201718853A - 用於麩胱甘肽Ｓ轉移酶Ｐｉ（ＧＳＴ－π）基因調控之ＲＮＡ干擾劑 - Google Patents

用於麩胱甘肽Ｓ轉移酶Ｐｉ（ＧＳＴ－π）基因調控之ＲＮＡ干擾劑 Download PDF

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Abstract

本發明提供利用RNA干擾以調控人麩胱甘肽S轉移酶Pi(GST-π)之表現的化合物、組成物及方法。RNA干擾分子可用於預防或治療疾病(諸如惡性腫瘤)的方法。本發明提供一系列具有一或多個經修飾或經化學修飾之核苷酸的siRNA結構。有利之結構包括具有位於種子區之2'-脫氧核苷酸及其他核苷酸修飾的siRNA。

Description

用於麩胱甘肽S轉移酶Pi(GST- π )基因調控之RNA干擾劑
本發明關於由基於核酸之分子所組成的生物製藥及治療劑的領域。更特別地，本發明關於利用RNA干擾(RNAi)以調控人麩胱甘肽S轉移酶Pi(GST-π)之表現的化合物和組成物以及彼等之用途。
序列表
本申請案包括在2015年12月20日創建，名為ND5123385WO_SL.txt之經由電子提交的ASC Ⅱ檔之序列表，其大小為100,000字節且其全部內容以引用方式併入本文。
現已發現各種人類癌症組織與突變之KRAS基因的出現有關。於一些病例中，組織亦出現提高之麩胱甘肽S轉移酶Pi(GST-π)表現水準。(Miyanishi et al.,Gastroenterology,2001,Vol.121：865-874，Abstract)。例如，在具有各種胃腸癌之患者中可觀察到血清GST-π 水準增加。(Niitsu et al.,Cancer,1989,Vol.63,No.2,pp.317-323，Abstract)
GST-π為GST酶家族的成員，該GST酶家族藉由催化疏水性及親電子性化合物與還原型麩胱甘肽軛合來參與解毒作用。GST-π之表現可在玻管內以siRNA降低。(Niitsu et al.,US 2014/0315975 A1)。然而，現存之siRNA劑有許多缺點，諸如活性不足、脫靶效果、缺乏血清穩定性、及缺乏體內效力或效果。
對於用於調控與癌症相關之基因表現的組成物和方法有迫切需求。尤其是，基於抑制GST-π表現之治療劑將需要高度有效及穩定之siRNA序列和結構，此種siRNA序列和結構可減少脫靶效果。
所需者為用於調控GST-π表現以治療疾病(諸如惡性腫瘤)之siRNA序列、化合物及結構。
本發明關於利用RNA干擾以調控人GST-π之表現的化合物、組成物及方法。
於一些實施態樣中，本發明提供用於RNA干擾GST-π基因沉默之分子。
於進一步之實施態樣中，本發明之結構、分子及組成物可用於預防或治療與GST-π相關之疾病或改善與GST-π相關之病症或失調(包括惡性腫瘤)的症狀之方法中。
本發明之實施態樣包括下列者： 一種用於抑制GST-π之表現的包含有義股和反義股之核酸分子，其中該等股形成雙股區。該核酸分子可為用於抑制GST-π之表現的siRNA分子且可含有一或多個經修飾或經化學修飾之核苷酸。
於一些實施態樣中，該用於抑制GST-π表現之核酸siRNA分子可包括2’-脫氧核苷酸、2’-O-烷基取代之核苷酸、2’-脫氧-2’-氟取代之核苷酸或彼等之任何組合。於某些實施態樣中，該2’-脫氧核苷酸可能在siRNA分子之種子區中。於某些態樣中，該用於抑制GST-π表現之siRNA分子可在反義股之多個位置具有脫氧核苷酸。
本發明之核酸分子可有利地以小於300pM之IC50抑制GST-π mRNA之表現。於某些實施態樣中，該核酸分子在單次投予該分子時抑制GST-π mRNA的活體內表現水準達至少25%。於一些實施態樣中，該核酸分子可具有降低的隨從股(passenger strand)脫靶活性或降低隨從股脫靶活性至少50倍或降低至少100倍。
本發明之實施態樣進一步提供含有siRNA分子及醫藥上可接受之載體的醫藥組成物。於一些實施態樣中，該載體可為脂質分子或脂質體。本發明包括含有該核酸分子之載體或細胞。
本發明亦考量藉由投予有需要之個體包含siRNA之組成物來治療與GST-π表現相關之疾病的方 法，其中該疾病為惡性腫瘤、癌症、由表現突變之KRAS的細胞所引起之癌症、肉瘤或癌瘤。
第1圖：第1圖顯示藉由本發明之靶向GST-π的siRNA在活體內大幅減少原位肺癌腫瘤。該GST-π siRNA係在脂質體調製劑中以2mg/kg之劑量投予呈現A549原位肺癌腫瘤之無胸腺裸鼠。在治療組和載體對照組之屍體解剖時測量最終之原發性腫瘤重量。該GST-π siRNA在此6週研究中顯示出明顯抑制肺癌腫瘤之效力。如第1圖所示，43天後，GST-π siRNA顯示出顯著有利之腫瘤抑制作用，與對照組相比較，最終之原發性腫瘤平均重量顯著減少2.8倍。
第2圖：第2圖顯示GST-π siRNA在活體內抑制腫瘤的效力。以0.75mg/kg之相對低的siRNA劑量，在利用A549細胞之癌異種移植物模型中進行研究。GST-π siRNA在幾天之內顯示出有利之腫瘤抑制作用。36天後，GST-π siRNA顯示出顯著有利之腫瘤抑制作用，與對照組相比較，最終之腫瘤平均體積顯著降低約2倍。
第3圖：第3圖顯示出在第2圖之終點的GST-π siRNA之活體內腫瘤抑制效力。GST-π siRNA顯示出有利之腫瘤抑制作用，腫瘤平均重量減少2倍以上。
第4圖：第4圖顯示出本發明之GST-π siRNA在玻管內藉由凋亡作用大幅增加癌細胞之死亡。GST-π siRNA引起PUMA(此為細胞凋亡之生物標記，其與細胞存活力損失有關)上調。第4圖中，在GST-π siRNA轉染後之2至6天，PUMA之表現大幅增加。
第5圖：第5圖顯示出本發明之GST-π siRNA在活體內提供對A549異種移植腫瘤之擊倒效力。在無胸腺裸鼠(nu/nu)雌性小鼠(Charles River)中以靶向GST-π之siRNA觀察劑量依賴性擊倒GST-π mRNA。如第5圖所示，在注射4mg/kg之劑量後24小時檢測到GST-π mRNA顯著減少約40%。
第6圖：第6圖顯示出本發明之GST-π siRNA在活體內抑制胰臟癌異種移植腫瘤。當將GST-π siRNA在脂質體調製劑中投予6至8週齡之無胸腺雌性裸鼠之胰臟癌異種移植腫瘤時，GST-π siRNA可在活體內提供基因沉默效力。如第6圖所示，以0.375mg/kg至3mg/kg之靶向GST-π的siRNA劑量取得劑量反應。GST-π siRNA顯示出在投予後幾天內有利地抑制腫瘤，終點時該腫瘤體積減少約2倍。
第7圖：第7圖顯示出本發明之GST-π siRNA表現出增加之血清穩定性。如第7圖所示，GST-π siRNA之有義股(第7圖，上方)及反義股(第7圖，下方)在血清中之半衰期(t½)為約100分鐘。
第8圖：第8圖顯示出本發明之GST-π siRNA在血漿中表現出在調製劑中之穩定性增強。第8圖顯示出將GST-π siRNA之脂質體調製劑在PBS中之50%人血清中培育，並在不同時間點檢測剩餘之siRNA。如第8圖所示，GST-π siRNA之調製劑在血漿中的半衰期(t½)明顯長於100小時。
第9圖：第9圖顯示出GST-π siRNA之嚮導股(guide strand)在玻管內之擊倒活性。如第9圖所示，與具有顯示出無效果之加擾序列(scrambled sequence)的對照組相比較，GST-π siRNA之嚮導股的擊倒活性約為指數倍數的。
第10圖：第10圖顯示出第9圖之GST-π siRNA的隨從股在玻管內之擊倒活性。如第10圖所示，該GST-π siRNA之隨從股的脫靶擊倒活性大為減少，基本上沒有效果。
第11圖：第11圖顯示出數種高活性GST-π siRNA之嚮導股在玻管內之擊倒活性。如第11圖所示，GST-π siRNA之嚮導股的擊倒活性約為指數倍數的。
第12圖：第12圖顯示出第11圖之GST-π siRNA的隨從股在玻管內之擊倒活性。如第12圖所示，GST-π siRNA之隨從股的脫靶擊倒活性顯著降低至低於約500pM。
第13圖：第13圖顯示出顯示出高活性GST-π siRNA之嚮導股在玻管內之擊倒活性。如第13圖所示，該GST-π siRNA之嚮導股的擊倒活性約為指數倍數 的。
第14圖：第14圖顯示出第13圖之GST-π siRNA的隨從股在玻管內之擊倒活性。如第14圖所示，該GST-π siRNA之隨從股的脫靶擊倒活性顯著降低。
本發明之詳細描述
本發明關於用於調控GST-π之表現的基於核酸之治療劑的化合物、組成物和方法。
於一些實施態樣中，本發明提供具有RNA干擾活性之分子以及可使GST-π不表現的結構和組成物。
本揭示內容之結構和組成物可用於預防或治療各種疾病，諸如惡性腫瘤。
於進一步之實施態樣中，本發明提供用於投遞和攝取本發明之一或多個治療性RNAi分子的組成物，以及彼等之使用方法。本發明之基於RNA的組成物可用於用來預防或治療惡性腫瘤(諸如癌症)之方法中。
本發明之治療性組成物包括具有RNA干擾活性之核酸分子。該治療性核酸分子可靶向GSTP1(GST-π)以使基因不表現。
於各種實施態樣中，本發明提供一系列可有效作為小分子干擾RNA(siRNA)且能調控或使GST-π基因不表現的分子。
本發明之siRNA可用於預防或治療惡性腫 瘤。
本發明之實施態樣進一步提供用於將本發明之siRNA投遞給有需要預防或治療惡性腫瘤之個體的載劑、調製劑或脂質奈米粒調製劑。本發明進一步設想用於投予哺乳動物作為治療劑之siRNA的方法。
本發明之治療性分子和組成物可藉由投予有需要之個體化合物或組成物而用於針對預防或治療與GST-π相關之疾病的RNA干擾中。
本發明之方法可利用本發明之化合物來預防或治療惡性腫瘤。
於某些態樣中，該惡性腫瘤可存在於各種疾病中，例如高度表現GST-π之癌症、由表現突變之KRAS的細胞所引起之癌症、肉瘤、纖維肉瘤、惡性纖維組織細胞瘤、脂肪肉瘤(liposarcoma)、橫紋肌肉瘤(rhabdomyosarcoma)、平滑肌肉瘤(leiomyosarcoma)、血管肉瘤(angiosarcoma)、卡波西氏肉瘤(Kaposi’s sarcoma)、淋巴管肉瘤(lymphangiosarcoma)、滑膜肉瘤(synovial sarcoma)、軟骨肉瘤(chondrosarcoma)、骨肉瘤(osteosarcoma)、及癌瘤(carcinomas)。
於某些態樣中，本發明之方法可利用本發明之化合物來預防或治療任何器官或組織中之惡性腫瘤和癌症，包括，例如腦瘤、頭頸癌、乳癌、肺癌、食道癌、胃癌、十二指腸癌、結腸直腸癌、肝癌、胰臟癌、膽囊癌、膽管癌、腎癌、尿道癌、膀胱癌、前列腺癌、睾丸癌、子 宮癌、卵巢癌、皮膚癌、白血病、惡性淋巴瘤、上皮性惡性腫瘤、及非上皮性惡性腫瘤。
於某些實施態樣中，本發明之治療性分子的組合可用於使GST-π基因不表現或抑制GST-π基因表現。
本發明提供一系列RNAi分子，其中各分子具有多核苷酸有義股及多核苷酸反義股；該分子之每一股的長度為15至30個核苷酸；該反義股之具有15至30個核苷酸的連續區與編碼GST-π之mRNA的序列互補；且至少一部分之有義股與至少一部分之反義股互補，且該分子具有長度為15至30個核苷酸的雙股區。
本發明之RNAi分子可具有長度為15至30個核苷酸之反義股連續區，此連續區與位於該分子之雙股區中的編碼GST-π之mRNA序列互補。
於一些實施態樣中，RNAi分子可具有長度為15至30個核苷酸之反義股連續區，此連續區與編碼GST-π之mRNA的序列互補。
本發明之實施態樣可進一步提供用於預防、治療或改善有此需要之哺乳動物的惡性腫瘤之一或多種症狀或降低發展出惡性腫瘤之風險或延緩惡性腫瘤發病的方法。
GST-π及RNAi分子
示例性靶的人麩胱甘肽S轉移酶Pi(人GST- π)mRNA之核酸序列揭示於GenBank編號NM_000852.3中(hGSTP1)，其長度為986個核苷酸。
本技藝之一般技術人士將理解報告之序列可能隨時間而改變，因此，本文納入該核酸分子中所需要之任何變化。
本發明之實施態樣可提供利用小核酸分子使GST-π基因不表現的組成物和方法。核酸分子之實例包括具RNA干擾活性之分子(RNAi分子)、短干擾RNA(siRNA)、雙股RNA(dsRNA)、微小RNA(miRNA)、和短髮夾RNA(shRNA)分子、以及DNA指導性RNA(ddRNA)、Piwi蛋白交互作用RNA(piRNA)、重複相關之siRNA(rasiRNA)。該等分子能夠介導針對GST-π基因表現之RNA干擾。
本文所揭示之組成物及方法亦可用於治療個體之各種惡性腫瘤。
本發明之核酸分子和方法可用於下調編碼GST-π之基因的表現。
本發明之組成物和方法可包括一或多個核酸分子，其可單獨或組合調控或調節下列群組之表現：GST-π蛋白及/或編碼GST-π蛋白之基因、與維持及/或發展與GST-π相關之疾病、病況或病症(諸如惡性腫瘤)相關的蛋白質及/或編碼GST-π的基因。
本發明之組成物和方法將參考GST-π之示例性序列說明。本技藝之一般技術人士將理解本發明之各種 態樣和實施態樣係針對任何相關之GST-π基因、序列或變體，諸如同系物基因和轉錄子變體及多型性，包括與任何GST-π基因相關之單核苷酸多型性(SNP)。
於一些實施態樣中，本發明之組成物和方法可提供下調GST-π基因(例如人GST-π)之表現的雙股短干擾核酸(siRNA)分子。
本發明之RNAi分子可，例如使用互補序列或藉由併入非標準鹼基對(例如可提供額外之靶序列的錯配及/或擺動鹼基對(wobble base pair))來靶向GST-π及任何同源序列。
在鑑定出錯配的情況中，可使用非標準鹼基對(例如錯配及/或擺動鹼基對)來產生靶向一個以上之基因序列的核酸分子。
例如，非標準鹼基對(諸如UU和CC鹼基對)可用於產生能靶向用於區別共享序列同源性之GST-π標靶的序列之核酸分子。因此，RNAi分子可靶向保留在同源基因之間的核苷酸序列，而單一RNAi分子可用於抑制一個以上之基因的表現。
於一些態樣中，本發明之組成物和方法包括能有效針對GST-π mRNA之RNAi分子，其中該RNAi分子包括與編碼GST-π序列之任何mRNA互補的序列。
於一些實施態樣中，本揭示內容之RNAi分子可具有針對GST-π之活性，其中該RNAi分子包括與具有變體GST-π編碼序列(例如本技藝已知之與惡性腫瘤 相關的突變的GST-π基因)之RNA互補的序列。
於進一步之實施態樣中，本發明之RNAi分子可包括可與GST-π基因之核苷酸序列交互作用並介導使GST-π基因不表現的核苷酸序列。
用於抑制GST-π之表現之核酸分子可具有有義股和反義股，其中該等股形成雙股區。該核酸分子可具有一或多個在雙股區中之經修飾或經化學修飾的核苷酸，包括本技藝中已知之該等修飾。siRNA之突出端中的任何核苷酸亦可經修飾或經化學修飾。
於一些實施態樣中，該較佳之經修飾或經化學修飾的核苷酸為2’-脫氧核苷酸。於另外之實施態樣中，該經修飾或經化學修飾之核苷酸可包括2’-O-烷基取代之核苷酸、2’-脫氧-2’-氟取代之核苷酸、硫代磷酸酯核苷酸、鎖核苷酸(locked nucleotide)或彼等之任何組合。
於某些實施態樣中，較佳之結構可具有在多個位置包含脫氧核苷酸的反義股，該多個位置為下列一者：從反義股之5’端開始之各位置4、6及8；從反義股之5’端開始之各位置3、5及7；從反義股之5’端開始之各位置1、3、5及7；從反義股之5’端開始之各位置3至8；或從反義股之5’端開始之各位置5至8。這些結構之任一者可與雙股區中之一或多個2’-脫氧-2’-氟取代之核苷酸組合。
本發明之核酸分子可有利地以小於約300pM 或小於約200pM或小於約100pM或小於約50pM之IC50抑制GST-π mRNA之表現。
此外，在單次投予時，該核酸分子抑制GST-π mRNA的活體內表現水準達至少25%。
醫藥組成物為本發明所考量的，其可含有一或多個如本文所描述之siRNA與醫藥上可接受之載體之組合。任何合適之載體均可使用，包括本技藝所已知者及脂質分子、奈米顆粒或脂質體，其中任一者均可包封siRNA分子。
本發明揭示用於治療與GST-π表現相關之疾病的方法，該方法包括投予有此需要之個體含有一或多個siRNA之組成物。欲治療之疾病可包括惡性腫瘤、癌症、由表現突變之KRAS的細胞所引起之癌症、肉瘤、及癌瘤，等。
本發明之靶向GST-π mRNA之RNAi分子的實例顯示於表1中。
表1之關鍵：大寫字母A、G、C、及U係分別指核糖-A、核糖-G、核糖-C、及核糖-U。小寫字母a、u、g、c、t係分別指2’-脫氧-A、2’-脫氧-U、2’-脫氧-G、2’-脫氧-C及脫氧胸苷。
本發明之靶向GST-π mRNA的RNAi分子之實例顯示於表2中。
表2之關鍵：大寫字母A、G、C、及U係分別指核糖-A、核糖-G、核糖-C、及核糖-U。小寫字母a、u、g、c、t係分別指2’-脫氧-A、2’-脫氧-U、2’-脫氧-G、2’-脫氧-C、及脫氧胸苷(dT=T=t)。下方劃線係指2’- OMe-取代的，例如U。小寫字母f係指2’-脫氧-2’-氟取代，例如fU為2’-脫氧-2’-氟-U。N為A、C、G、U、U、a、c、g、u、t或經修飾、反向或經化學修飾之核苷酸。“s”字符代表硫代磷酸酯鍵聯。
本發明之靶向GST-π mRNA的RNAi分子之實例顯示於表3中。
表3之關鍵：大寫字母A、G、C、及U係分別指核糖-A、核糖-G、核糖-C、及核糖-U。小寫字母a、u、g、c、t係分別指2’-脫氧-A、2’-脫氧-U、2’-脫氧-G、2’-脫氧-C、及脫氧胸苷(dT=T=t)。下方劃線係指2’-OMe-取代的，例如U。小寫字母f係指2’-脫氧-2’-氟取代，例如fU為2’-脫氧-2’-氟-U。N為A、C、G、U、 U、a、c、g、u、t或經修飾、反向或經化學修飾之核苷酸。
本發明之靶向GST-π mRNA的RNAi分子之實例顯示於表4中。
表4之關鍵：大寫字母A、G、C、及U係分別指核糖-A、核糖-G、核糖-C、及核糖-U。小寫字母a、u、g、c、t係分別指2’-脫氧-A、2’-脫氧-U、2’-脫氧-G、2’-脫氧-C、及脫氧胸苷(dT=T=t)。下方劃線係指2’-OMe-取代的，例如U。小寫字母f係指2’-脫氧-2’-氟取代，例如fU為2’-脫氧-2’-氟-U。N為A、C、G、U、U、 a、c、g、u、t或經修飾、反向或經化學修飾的核苷酸。
本發明之靶向GST-π mRNA的RNAi分子之實例顯示於表5中。
表5之關鍵：大寫字母A、G、C、及U係分別指核糖-A、核糖-G、核糖-C、及核糖-U。小寫字母a、u、g、c、t係分別指2’-脫氧-A、2’-脫氧-U、2’-脫氧-G、2’-脫氧-C、及脫氧胸苷(dT=T=t)。下方劃線係指2’-OMe-取代的，例如U。小寫字母f係指2’-脫氧-2’-氟取代，例如fU為2’-脫氧-2’-氟-U。N為A、C、G、U、U、a、c、g、u、t或經修飾、反向或經化學修飾的核苷酸。
本發明之靶向GST-π mRNA的RNAi分子之 實例顯示於表6中。
表6之關鍵：大寫字母A、G、C、及U係分別指核糖-A、核糖-G、核糖-C、及核糖-U。小寫字母a、u、g、c、t係分別指2’-脫氧-A、2’-脫氧-U、2’-脫氧-G、2’-脫氧-C、及脫氧胸苷(dT=T=t)。下方劃線係指2’-OMe-取代的，例如U。小寫字母f係指2’-脫氧-2’-氟取代，例如fU為2’-脫氧-2’-氟-U。N為A、C、G、U、U、a、c、g、u、t或經修飾、反向或經化學修飾的核苷酸。
於一些實施態樣中，本發明提供一系列之核酸分子，其中：a)該分子具有多核苷酸有義股和多核苷酸反義股；b)該分子之各股的長度為15至30個核苷 酸；c)該反義股之具有15至30個核苷酸的連續區域與編碼GST-π之mRNA的序列互補；d)至少一部分之有義股與至少一部分之反義股互補，且該分子具有長度為15至30個核苷酸之雙股區。
於一些實施態樣中，該核酸分子可具有包含15至30個核苷酸，與位於該分子之雙股區中的編碼GST-π之mRNA序列互補之反義股的連續區。
於另外之實施態樣中，該核酸分子可具有包含15至30個核苷酸，與編碼GST-π之mRNA序列互補之反義股的連續區。
於某些實施態樣中，該核酸分子之各股長度可為18至22個核苷酸。該核酸分子之雙股區的長度可為19個核苷酸。
於替換之形式中，該核酸分子可具有以單股形式連接之多核苷酸有義股及多核苷酸反義股，並在一端藉由環連接來形成雙股區。
本揭示內容之核酸分子的一些實施態樣可具有鈍端。於某些實施態樣中，核酸分子可具有一或多個3’突出端。
本發明提供一系列核酸分子，其為能有效使基因不表現的RNAi分子。本發明之核酸分子可為能有效使基因不表現的dsRNA、siRNA、微小RNA或shRNA，以及DNA指導性RNA(ddRNA)、Piwi蛋白交互作用RNA(piRNA)或重複相關之siRNA(rasiRNA)。該核 酸分子可有效抑制GST-π之表現。
本發明之實施態樣進一步提供以小於100pM之IC50擊倒GST-π之核酸分子。
本發明之另外的實施態樣提供以小於50pM之IC50擊倒GST-π之核酸分子。
本發明進一步考量含有一或多個本發明之核酸分子與醫藥上可接受之載體的組成物。於某些實施態樣中，該載體可為脂質分子或脂質體。
本發明之化合物和組成物可用於藉由投予有需要之個體化合物或組成物來預防或治療與GST-π相關之疾病的方法中。
本發明之方法可利用本發明之化合物來預防或治療惡性腫瘤。惡性腫瘤可出現在各種疾病中，例如與GST-π表現相關之癌症，由表現突變之KRAS的細胞所引起之癌症、肉瘤、纖維肉瘤、惡性纖維組織細胞瘤、脂肪肉瘤、橫紋肌肉瘤、平滑肌肉瘤、血管肉瘤、卡波西氏肉瘤、淋巴管肉瘤、滑膜肉瘤、軟骨肉瘤、骨肉瘤、癌瘤、腦腫瘤、頭頸癌、乳癌、肺癌、食道癌、胃癌、十二指腸癌、闌尾癌、結腸直腸癌、直腸癌、肝癌、胰臟癌、膽囊癌、膽管癌、肛門癌、腎癌、尿道癌、膀胱癌、前列腺癌、睾丸癌、子宮癌、卵巢癌、皮膚癌、白血病、惡性淋巴瘤、上皮惡性腫瘤、及非上皮性惡性腫瘤。
經修飾及經化學修飾之siRNAs
本發明之實施態樣包含經修飾或經化學修飾，以提供用於治療用途之增強的性質(諸如使基因不表現之增加的活性和效力)的siRNA分子。本發明提供經修飾或經化學修飾之可具有增加之血清穩定性以及降低之脫靶效應，而不會喪失調控基因和使基因不表現的活性和效力之siRNA分子。於一些態樣中，本發明提供具有各種組合之修飾或化學修飾的siRNA，該修飾或化學修飾之組合可增強siRNA之穩定性和效力。
於一些實施態樣中，本發明之siRNA分子可具有降低至少10倍或至少20倍或至少30倍或至少50倍或至少100倍之隨從股脫靶活性。
如本文中所使用之術語經修飾和經化學修飾係指在siRNA之天然存在的核苷酸或核酸結構中製造之變化，其包含具有一或多個核苷酸類似物、改變之核苷酸、非標準核苷酸、非天然存在之核苷酸及彼等之組合的siRNA。
於一些實施態樣中，siRNA中之經修飾或經化學修飾之結構的數目可包括siRNA分子中之所有結構組分及/或所有核苷酸。
經修飾和經化學修飾之siRNA的實例包括具有下列修飾之siRNA：核苷酸之糖基的修飾、核苷酸之核鹼基的修飾、核酸主鏈或鍵聯的修飾、在siRNA股之末端的核苷酸結構之修飾、以及彼等之組合。
經修飾和經化學修飾之siRNA的實例包括在 糖之2’碳具有取代基修飾的siRNA。
經修飾和經化學修飾之siRNA的實例包括在一股的5’端、3’端或二端具有修飾之siRNA。
經修飾和經化學修飾之siRNA的實例包括具有能在股之間製造互補錯配之修飾的siRNA。
經修飾和經化學修飾之siRNA的實例包括具有5’-丙胺端、5’-磷酸化端、3’-嘌呤黴素端或3’-生物素端基的siRNA。
經修飾和經化學修飾之siRNA的實例包括具有2’-氟取代之核糖核苷酸、2’-OMe取代之核糖核苷酸、2’-脫氧核糖核苷酸、2’-胺基取代之核糖核苷酸、2’-硫取代之核糖核苷酸的siRNA。
經修飾和經化學修飾之siRNA的實例包括具有一或多個5-鹵代尿苷、5-鹵代胞苷、5-甲基胞苷、核糖胸苷、2-胺基嘌呤、2,6-二胺基嘌呤、4-硫代尿苷或5-胺烯丙基尿苷之siRNA。
經修飾和經化學修飾之siRNA的實例包括具有一或多個硫代磷酸酯基團的siRNA。
經修飾和經化學修飾之siRNA的實例包括具有一或多個2’-氟取代之核糖核苷酸、2’-氟尿苷、2’-氟胞苷、2’-脫氧核糖核苷酸，2’-脫氧腺苷或2’-脫氧鳥苷之siRNA。
經修飾和經化學修飾之siRNA的實例包括具有一或多個硫代磷酸酯鍵聯之siRNA。
經修飾和經化學修飾之siRNA的實例包括具有一或多個亞烷基二醇鍵聯、氧-烷硫基鍵聯或氧羰氧基鍵聯的siRNA。
經修飾和經化學修飾之siRNA的實例包括具有一或多個脫氧鹼基、肌苷、N3-甲基-尿苷、N6,N6-二甲基-腺苷、假尿苷、嘌呤核糖核苷、及利巴韋林(ribavirin)之siRNA。
經修飾和經化學修飾之siRNA的實例包括具有一或多個3’或5’反向端基之siRNA。
經修飾和經化學修飾之siRNA的實例包括具有一或多個5-(2-胺基)丙基尿苷、5-溴尿苷、腺苷、8-溴鳥苷、7-去氮雜腺苷或N6-甲基腺苷之siRNA。
用於調控GST-π及治療惡性腫瘤之方法
本發明之實施態樣可提供可用於下調或抑制GST-π及/或GST-π蛋白之表現的RNAi分子。
於一些實施態樣中，本發明之RNAi分子可用於下調或抑制從GST-π單套型(haplotype)多形性產生之GST-π及/或GST-π蛋白表現，該GST-π單套型多形性可能與諸如惡性腫瘤之疾病或病症相關。
監控GST-π蛋白或mRNA水準可用於表徵基因沉默，並用於測定本發明之化合物和組成物的效力。
本揭示內容之RNAi分子可單獨使用，或與其他用於調控一或多個基因之表現的siRNA組合使用。
本揭示內容之RNAi分子可單獨使用，或與其他已知之用於預防或治療疾病或改善與GST-π相關之病況或病症(包括惡性腫瘤)的症狀之藥物組合或一起使用。
本發明之RNAi分子可用於以序列特異性方式來調控或抑制GST-π表現。
本揭示內容之RNAi分子可包括嚮導股，該嚮導股之一系列連續核苷酸與GST-π mRNA至少部分互補。
於某些態樣中，惡性腫瘤可使用本發明之RNAi分子藉由RNA干擾來治療。
惡性腫瘤之治療可在以細胞為基礎之合適的模型，及活體外或活體內動物模型中表徵。
惡性腫瘤之治療可藉由測定受影響之組織細胞中之GST-π mRNA的水準或GST-π蛋白之水準表徵。
惡性腫瘤之治療可藉由非侵入性醫療掃描受影響之器官或組織來表徵。
本發明之實施態樣可包括用於預防、治療或改善有此需要之個體中與GST-π相關之疾病或病況的症狀之方法。
於一些實施態樣中，用於預防、治療或改善個體之惡性腫瘤的症狀之方法可包括投予個體本發明之RNAi分子以調控個體或有機體之GST-π基因的表現。
於一些實施態樣中，本發明考量藉由將細胞或有機體與本發明之RNAi分子接觸以下調細胞或有機體中之GST-π基因的表現之方法。
本發明之實施態樣包含表1-6中根據上述實施例修飾或化學修飾的siRNA分子。
RNA干擾
RNA干擾(RNAi)係指動物中由短干擾RNA(siRNA)介導之序列特異性轉錄後基因沉默。參見，例如Zamore et al.,Cell,2000,Vol.101,pp.25-33；Fire et al.,Nature,1998,Vol.391,pp.806811；Sharp,Genes & Development,1999,Vol.13,pp.139-141。
細胞中之RNAi反應可由雙股RNA(dsRNA)觸發，雖然尚不完全清楚該機制。細胞中之某些dsRNA可經歷切丁酶(Dicer)(一種核糖核酸酶Ⅲ)之作用。參見，例如Zamore et al.,Cell,2000,Vol.101,pp.25-33；Hammond et al.,Nature,2000,Vol.404,pp.293-296。切丁酶可將dsRNA處理成較短之dsRNA片段，此為siRNA。
一般而言，siRNA之長度可為約21至約23個核苷酸，且包括長度為約19個核苷酸之鹼基對雙股區。
RNAi參與稱為RNA誘導沉默複合物(RISC)之核酸內切酶複合物。siRNA具有進入RISC複 合物並介導單股RNA靶的之裂解的反義股或嚮導股，該單股RNA靶的具有與該siRNA雙股之反義股互補的序列。siRNA之另一股為隨從股。靶的RNA係在與該siRNA雙股之反義股互補的區域中間發生裂解。參見，例如Elbashir et al.,Genes & Development,2001,Vol.15,pp.188-200。
如本文所使用之術語“有義股”係指與至少一部分之該siRNA分子的應反義股部分或完全互補的siRNA分子之核苷酸序列。siRNA分子之有義股可包括與靶的核酸序列具有同源性之核酸序列。
如本文所使用之術語“反義股”係指與至少一部分之靶的核酸序列部分或完全互補的siRNA分子之核苷酸序列。siRNA分子之反義股可包括與至少一部分之siRNA分子的對應有義股互補的核酸序列。
RNAi分子可藉由以序列特異性方式介導RNA干擾來下調或擊倒基因表現。參見，例如Zamore et al.,Cell,2000,Vol.101,pp.25-33；Elbashir et al.,Nature,2001,Vol.411,pp.494-498；Kreutzer et al.,WO2000/044895；Zernicka-Goetz et al.,WO2001/36646；Fire et al.,WO1999/032619；Plaetinck et al.,WO2000/01846；Mello et al.,WO2001/029058。
如本文所使用之關於基因表現的術語“抑制”、“下調”或“減少”係指該基因之表現或編碼一或多種蛋白質之mRNA分子的水準或一或多個經編碼之蛋白 質的活性被降至低於無本發明之RNAi分子或siRNA存在時所觀察到者。例如表現水準、mRNA之水準或經編碼之蛋白質活性的水準可被降至較無本發明之RNAi分子或siRNA存在時所觀察到的水準低至少1%或至少10%或至少20%或至少50%或至少90%。
RNAi分子亦可用於擊倒病毒基因表現，從而影響病毒複製。
RNAi分子可從單獨之多核苷酸股(有義股或隨從股、及反義股或嚮導股)製造。該嚮導股和隨從股為至少部分互補。該嚮導股和隨從股可形成具有約15至約49個鹼基對之雙股區。
於一些實施態樣中，該siRNA之雙股區可具有17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48或49個鹼基對。
於某些實施態樣中，RNAi分子在RISC複合物可具有活性，在RISC中之活性長度為雙股區。
於另外之實施態樣中，RNAi分子可有效作為切丁酶受質，以轉化成在RISC複合物中具有活性之RNAi分子。
於一些態樣中，RNAi分子在長分子之相對端可具有互補性嚮導及隨從序列部分，從而使該分子可與互補之序列部分形成雙股區，且該股係藉由核苷酸或非核苷酸連接子連接在雙股區的一端。例如髮夾排列或莖和環排 列。該連接子與股之交互作用可為共價鍵或非共價交互作用。
本揭示內容之RNAi分子可包括連接核酸之有義區至核酸之反義區的核苷酸、非核苷酸或混合之核苷酸/非核苷酸連接子。核苷酸連接子可為長度≧2個核苷酸(例如長為約3、4、5、6、7、8、9或10個核苷酸)之連接子。核苷酸連接子可為核酸適體(aptamer)。本文所使用之“適體”或“核酸適體”係指特異結合靶的分子之核酸分子，其中該核酸分子具有包括在其天然環境中可被靶的分子識別之序列的序列。或者，適體可為結合靶的分子之核酸分子，其中該靶的分子並不自然結合核酸。例如，適體可用於結合蛋白質之配體結合結構域，藉此防止天然存在之配體與蛋白質交互作用。參見，例如Gold et al.,Annu Rev Biochem,1995,Vol.64,pp.763-797；Brody et al.,J.Biotechnol.,2000,Vol.74,pp.5-13；Hermann et al.,Science,2000,Vol.287,pp.820-825。
非核苷酸連接子之實例包括無鹼基核苷酸、聚醚、聚胺、聚醯胺、肽、碳水化合物、脂質、聚烴或其他聚合型化合物(例如聚乙二醇，諸如那些具有2至100個乙二醇單元者)。一些實例描述於下列文獻中：Seela et al.,Nucleic Acids Research,1987,Vol.15,pp.3113-3129；Cload et al.,J.Am.Chem.Soc.,1991,Vol.113,pp.6324-6326；Jaeschke et al.,Tetrahedron Lett.,1993,Vol.34,pp.301；Arnold et al.,WO1989/002439；Usman et al., WO1995/006731；Dudycz et al.,WO1995/011910，及Ferentz et al.,J.Am.Chem.Soc.,1991,Vol.113,pp.4000-4002。
RNAi分子可具有一或多個來自雙股區之突出端。該突出端(其為非鹼基配對的)，單股區之長度為1至8個核苷酸或更長。突出端可為3’端突出端，其中該股之3’端具有長度為1至8個核苷酸之單股區。突出端可為5’端突出端，其中該股之5’端具有長度為1至8個核苷酸之單股區。
RNAi分子之突出端可具有相同長度，或可為不同長度。
RNAi分子可具有一或多個鈍端，其中該雙股區終端不具有突出端，且該股與雙股區之端點為鹼基配對。
本揭示內容之RNAi分子可具有一或多個鈍端或可具有一或多個突出端或可具有鈍端和突出端之組合。
RNAi分子之一股的5’-端可在鈍端，或可在突出端。RNAi分子之一股的3’-端可在鈍端，或可在突出端。
RNAi分子之一股的5’-端可在鈍端，而3’-端係在突出端。RNAi分子之一股的3’-端可在鈍端，而5’-端係在突出端。
於一些實施態樣中，RNAi分子之二端均為鈍端。
於另外之實施態樣中，RNAi分子之二端均具有突出端。
該5’-和3’-端之突出端可具有不同長度。
於某些實施態樣中，RNAi分子可具有鈍端，其中該反義股之5’-端和有義股之3’-端不具有任何突出端核苷酸。
於進一步之實施態樣中，RNAi分子可具有鈍端，其中該反義股之3’-端和有義股之5’-端不具有任何突出端核苷酸。
RNAi分子在雙股區之鹼基配對中可能具有錯配。
RNAi分子之突出端中的任何核苷酸可為脫氧核糖核苷酸或核糖核苷酸。
一或多個脫氧核糖核苷酸可在5’端，其中該RNAi分子之另一股的3’端可能不具有突出端，或可能不具有脫氧核糖核苷酸突出端。
一或多個脫氧核糖核苷酸可在3’端，其中該RNAi分子之另一股的5’端可能不具有突出端，或可能不具有脫氧核糖核苷酸突出端。
於一些實施態樣中，RNAi分子之一或多個或全部之突出端核苷酸可為2’-脫氧核糖核苷酸。
切丁酶受質RNAi分子
於一些態樣中，RNAi分子可具有適合作為 Dicer受質之長度，其可經處理以產生RISC活性RNAi分子。參見，例如Rossi et al.,US2005/0244858。
為切丁酶受質之雙股RNA(dsRNA)可具有足夠長度，從而使其可被切丁酶處理以產生活性RNAi分子，並可進一步包括一或多種下列性質：(i)切丁酶受質dsRNA可為不對稱的，例如反義股上具有3’突出端，及(ii)切丁酶受質dsRNA之有義股上可具有經修飾的3’端以指導切丁酶定向結合並將dsRNA處理成活性RNAi分子。
於某些實施態樣中，切丁酶受質dsRNA中之最長股的長度可為24至30個核苷酸。
切丁酶受質dsRNA可為對稱或不對稱的。
於一些實施態樣中，切丁酶受質dsRNA可具有長為22至28個核苷酸之有義股及長為24至30個核苷酸之反義股。
於某些實施態樣中，切丁酶受質dsRNA之反義股的3’端上可具有突出端。
於進一步之實施態樣中，切丁酶受質dsRNA可具有長度為25個核苷酸之有義股及長度為27個核苷酸之反義股，帶有2鹼基3’-突出端。該突出端之長度可為1、2或3個核苷酸。有義股亦可具有5’磷酸。
不對稱性切丁酶受質dsRNA在有義股之3’-端可具有二個脫氧核糖核苷酸來替代二個核糖核苷酸。
切丁酶受質dsRNA之有義股的長度可為約22 至約30，或約22至約28；或約24至約30；或約25至約30；或約26至約30；或約26至29；或約27至約28個核苷酸。
切丁酶受質dsRNA之有義股的長度可為22、23、24、25、26、27、28、29或30個核苷酸。
於某些實施態樣中，切丁酶受質dsRNA可具有長度為至少約25個核苷酸，且長度不超過約30個核苷酸之有義股和反義股。
於某些實施態樣中，切丁酶受質dsRNA可具有長度為26至29個核苷酸之有義股和反義股。
於某些實施態樣中，切丁酶受質dsRNA可具有長度為27個核苷酸之有義股和反義股。
切丁酶受質dsRNA之有義股和反義股在具有鈍端時可為相同長度，或在具有突出端時可具有不同長度，或可具有鈍端及突出端。
切丁酶受質dsRNA之雙股區的長度可為19、20、21、22、23、24、25、26或27個核苷酸。
切丁酶受質dsRNA之反義股可具有能在生物條件(諸如在真核細胞之細胞質內)下與至少一部分有義股之序列黏合的任何序列。
具有有義股和反義股之切丁酶受質可藉由第三結構(諸如連接子基團或連接子寡核苷酸)連接。該連接子連接，例如dsRNA的二股，從而在黏合時形成髮夾結構。
切丁酶受質之有義股和反義股大致上互補，但在鹼基配對中可能具有錯配。
於一些實施態樣中，切丁酶受質dsRNA可為不對稱的，從而使該有義股具有22至28個核苷酸且該反義股具有24至30個核苷酸。
切丁酶受質dsRNA的其中一股(尤其是反義股)之一區的序列長度可為至少19個核苷酸，其中這些核苷酸係在與反義股之3’端相鄰的21個核苷酸的區域中，且與從靶基因產生之RNA的核苷酸序列充分互補。
切丁酶受質dsRNA之反義股的5’端上可具有1至9個核糖核苷酸，以使長度為22至28個核苷酸。當反義股之長度為21個核苷酸時，可在3’端上添加1至7個核糖核苷酸或2至5個核糖核苷酸或4個核糖核苷酸。該添加之核苷酸可具有任何序列。
切丁酶受質dsRNA之有義股可具有24至30個核苷酸。該有義股可能基本上與反義股互補以在生物條件下與反義股黏合。
RNAi分子之使用方法
本發明之核酸分子和RNAi分子可藉由直接施用該分子或將分子與載體或稀釋劑組合來投遞至細胞或組織。
本發明之核酸分子和RNAi分子可藉由直接施用該分子與載體或稀釋劑或任何其他用於協助、促進或加 速進入細胞的投遞載劑(例如病毒序列、病毒物質或脂質或脂質體調製劑)來投遞或投予至細胞、組織、器官或個體。
本發明之核酸分子和RNAi分子可與陽離子脂質複合，包裝在脂質體內，或以其他方式投遞至靶的細胞或組織。該核酸或核酸複合物可在活體外或活體內透過直接皮膚施用、經皮施用或注射而局部投予在相關組織。
投遞系統可包括，例如水性和非水性凝膠、乳膏、乳劑、微乳劑、脂質體、油膏、水性和非水性溶液、洗劑、氣霧劑、烴類基劑和粉末且可含有賦形劑，諸如增溶劑和滲透增強劑。
本揭示內容之組成物和方法可包括表現載體，該表現載體包括以允許本發明之核酸分子表現的方式編碼至少一個本發明之RNAi分子的核酸序列。
本發明之核酸分子和RNAi分子可從插入DNA或RNA載體之轉錄單位表現。重組載體可為DNA質粒或病毒載體。可使用病毒載體來提供核酸分子之瞬時表現。
例如，該載體可含有同時編碼雙股RNAi分子之二個股的序列，或為自互補從而形成RNAi分子之單一核酸分子。表現載體可包括編碼二或多個核酸分子之核酸序列。
核酸分子可在細胞內從真核啟動子表現。本技藝之技術人士領悟到任何核酸均可在真核細胞中從合適 之DNA/RNA載體表現。
於一些態樣中，可使用病毒構建體將表現構建體引入細胞中，以用於轉錄由該表現構建體編碼之dsRNA構建體。
脂質調製劑可藉由靜脈內、肌肉內或腹膜內注射或口服或吸入或本技藝中已知之其他方法投予動物。
用於投予寡核苷酸之醫藥上可接受的調製劑為已知且可使用。
用於玻管內擊倒之示例方案
轉染前一天，以每孔2×103個細胞之密度將細胞接種在96孔盤中，該96孔盤之每一孔中具有100μl之包含10% FBS的DMEM(HyClone，目錄編號SH30243.01)，將該96孔盤在37℃，空氣中含有5%CO2之潮濕大氣的培養箱中培養。轉染前，將培養基換成90μl之含有2% FBS的Opti-MEM I低血清培養基(Life Technologies公司，目錄編號31985-070)。然後，將0.2μl之Lipofectamine RNAiMax(Life Technologies公司，目錄編號13778-100)與4.8μl之Opti-MEM I在室溫下混合5分鐘。接著，將1μl之siRNA與4μl之Opti-MEM I混合，並與LF2000溶液組合，再輕輕地混合，而不震盪混合。在室溫下5分鐘後，將混合物在室溫下另外培育10分鐘，以允許形成RNA-RNAiMax複合物。此外，在孔中加入10μl之RNA-RNAiMax複合物，並用手 將盤輕輕搖動。將細胞在37℃，空氣中含有5%CO2之潮濕大氣的培養箱中培育2小時。將培養基換成含有2% FBS之新鮮Opti-MEM I低血清培養基。轉染後24小時，以冰冷之PBS清洗細胞一次。在室溫下，以50μl之Cell-to-Ct細胞溶解緩衝液(Life Technologies公司，目錄編號4391851C)溶解細胞5至30分鐘。加入5μl之終止溶液，再在室溫下培育2分鐘。立即以TAQMAN，藉由RT-qPCR測量mRNA之量。樣本可冷凍在-80℃，並稍後進行分析。
用於血清穩定性之示例方案
將0.2mg/ml之siRNA與10%之人血清在37℃一起培育。在一定之時間點(0、5、15、及30分鐘)採取200μl之樣本等分並以200μl之萃取溶劑(氯仿：苯酚：異戊醇=24：25：1)萃取之。將樣本震盪混合並在室溫，13,000rpm下離心10分鐘，然後轉移上層溶液並使用0.45μm過濾器過濾之。將濾液轉移入300μl之HPLC注射小瓶中。在LCMS方面，移動相為MPA：100mM HFIP+7mM TEA，在水中，MPB：50%甲醇+50%乙腈。柱：Waters Acquity OST 2.1×50mm，1.7μm。
實施例1：本發明之靶向GST-π的siRNA被發現可在玻管內有效地使基因不表現。結果發現用於基因擊倒之GST-π siRNA的劑量依賴活性顯示出IC50低於約250皮莫耳(pM)且可低至1pM。
在A549細胞系中進行玻管內轉染以測定siRNA擊倒效力。以表1之siRNA觀察對GST-π mRNA之劑量依賴性擊倒作用，如表7中所示。
如表7中所示，表1之GST-π siRNA的活性係在17至235pM之範圍內，這適用於多種用途，包括作為活體內使用之藥劑。
實施例2：具有位於siRNA之反義股的種子區中之脫氧核苷酸的本發明之GST-π siRNA結構可在玻管內提供意料之外且有利地增加之基因擊倒活性。
在A549細胞系中進行玻管內轉染以測定基於結構BU2’(SEQ ID NO：131和157)之GST-π siRNA的擊倒效力。如表8中所示之基於結構BU2’的GST-π siRNA被觀察到劑量依賴地擊倒GST-π mRNA。
如表8中所示，與雙股區不具有脫氧核苷酸之GST-π siRNA相比較，反義股之種子區具有三個脫氧核苷酸之基於結構BU2’的GST-π siRNA之活性令人驚訝且出乎意料地增加多達6倍。
這些數據顯示與雙股區不具有脫氧核苷酸之GST-π siRNA相比較，在反義股之種子區具有三個位於位置3、5及7，或位置4、6及8的脫氧核苷酸之GST-π siRNA結構可提供驚人地增加之基因擊倒活性。
表8中所示之在反義股之種子區具有三個脫氧核苷酸的GST-π siRNA之活性係在5至8pM之範圍內，此範圍特別適合許多用途，包括作為活體內使用之藥劑。
實施例3：本發明之具有位於siRNA之反義股的種子區中之脫氧核苷酸的GST-π siRNA結構可在玻管內提供出乎意料且有利地增加之基因擊倒活性。
在A549細胞系中進行玻管內轉染以測定基於結構A9’(SEQ ID NO：183和195)之GST-π siRNA的擊倒效力。以如表9所示之基於結構A9’的GST-π siRNA觀察對GST-π mRNA的劑量依賴性擊倒作用。
如表9中所示，與雙股區不具有脫氧核苷酸之GST-π siRNA相比較，反義股之種子區具有三至六個脫氧核苷酸之基於結構A9’的GST-π siRNA之活性驚人地增加多達24倍。
這些數據顯示出與雙股區不具有脫氧核苷酸之GST-π siRNA相比較，具有包含三至六個位於反義股之種子區中位置4、6及8或位置1、3、5及7或位置3至8或位置5至8或位置3、5及7的脫氧核苷酸之結構的GST-π siRNA可提供令人意外地增加之基因擊倒活 性。
表9中所示之在反義股之種子區具有三至六個脫氧核苷酸的GST-π siRNA之活性係在1至15pM之範圍內，此範圍特別適合許多用途，包括作為活體內使用之藥劑。
實施例4：該具有位於siRNA之反義股種子區中之脫氧核苷酸的GST-π siRNA之結構可在玻管內提供出乎意料且有利地增加之基因擊倒活性。
在A549細胞系中進行玻管內轉染以測定基於結構B13’(SEQ ID NO：207和222)之GST-π siRNA的擊倒效力。以如表10所示之基於結構B13’的GST-π siRNA觀察對GST-π mRNA的劑量依賴性擊倒作用。
如表10中所示，與雙股區不具有脫氧核苷酸之GST-π siRNA相比較，反義股之種子區具有三個脫氧核苷酸之基於結構B13’的GST-π siRNA之活性出乎意料地增加。
這些數據顯示與雙股區不具有脫氧核苷酸之GST-π siRNA相比較，包含具有三個位在反義股之種子區 中的位置4、6及8之脫氧核苷酸的結構之GST-π siRNA提供令人意外地增加之基因擊倒活性。
表10中所示之在反義股之種子區具有三個脫氧核苷酸的GST-π siRNA之活性係在11pM之皮莫耳範圍內，此範圍特別適合許多用途，包括作為活體內使用之藥劑。
實施例5：具有位於siRNA之反義股的種子區中之脫氧核苷酸的GST-π siRNA之結構可在玻管內提供出乎意料且有利地增加之基因擊倒活性。
在A549細胞系中進行玻管內轉染以測定基於結構B4’(SEQ ID NO：261和273)之GST-π siRNA的擊倒效力。以如表11所示之基於結構B4’的GST-π siRNA觀察對GST-π mRNA的劑量依賴性擊倒作用。
如表11中所示，與雙股區不具有脫氧核苷酸之GST-π siRNA相比較，在反義股之種子區具有六個脫氧核苷酸之基於結構B4’的GST-π siRNA之活性出乎意料地增加超過2倍。
這些數據顯示與雙股區不具有脫氧核苷酸之 GST-π siRNA相比較，具有在反義股之種子區具有六個位於位置3至8的脫氧核苷酸之結構的GST-π siRNA提供驚人地增加之基因擊倒活性。
表11中所示之在反義股之種子區具有六個脫氧核苷酸的GST-π siRNA之活性係在113pM之皮莫耳範圍內，此範圍特別適合許多用途，包括作為活體內使用之藥劑。
實施例6：該具有位於siRNA之反義股的種子區中之脫氧核苷酸的GST-π siRNA之結構可在玻管內提供出乎意料且有利地增加之基因擊倒活性。
在A549細胞系中進行玻管內轉染以測定基於結構B2’(SEQ ID NO：237和249)之GST-π siRNA的擊倒效力。以如表12所示之基於結構B2’的GST-π siRNA觀察對GST-π mRNA的劑量依賴性擊倒作用。
如表12中所示，與雙股區不具有脫氧核苷酸 之GST-π siRNA相比較，在反義股之種子區具有三至四個脫氧核苷酸之基於結構B2’的GST-π siRNA之活性驚人地增加多達4倍。
這些數據顯示與雙股區不具有脫氧核苷酸之GST-π siRNA相比較，具有在反義股之種子區中帶有三至四個位於位置5至8或位置1、3、5及7或位置3、5及7的脫氧核苷酸之結構的GST-π siRNA提供出乎意料地增加之基因擊倒活性。
表12中所示之在反義股之種子區具有三至四個脫氧核苷酸的GST-π siRNA之活性係在30至100pM之範圍內，此範圍特別適合許多用途，包括作為活體內使用之藥劑。
實施例7：含有一或多個2’-脫氧-2’-氟取代之核苷酸的GST-π siRNA之結構可在玻管內提供出乎意料地增加之基因擊倒活性。
在A549細胞系中進行玻管內轉染以測定基於結構BU2’(SEQ ID NOs：131和157)之GST-π siRNA的擊倒效力。以如表13所示之基於結構BU2’的GST-π siRNA觀察對GST-π mRNA的劑量依賴性擊倒作用。
如表13中所示，與不具有2’-F脫氧核苷酸之GST-π siRNA相比較，具有一或多個2’-F脫氧核苷酸之基於結構BU2’的GST-π siRNA之活性驚人地增加多達10倍。
這些數據顯示與不具有2’-F脫氧核苷酸之GST-π siRNA相比較，具有一或多個2’-F脫氧核苷酸之結構的GST-π siRNA提供令人意外地增加之基因擊倒活性。
表13中所示之具有一或多個2’-F脫氧核苷酸的GST-π siRNA之活性係在3至13pM之範圍內，此範圍特別適合許多用途，包括作為活體內使用之藥劑。
實施例8：含有一或多個2’-脫氧-2’-氟取代之核苷酸的GST-π siRNA之結構可在玻管內提供出乎意料地增加之基因擊倒活性。
在A549細胞系中進行玻管內轉染以測定基於結構B13’(SEQ ID NOs：207和222)之GST-π siRNA的擊倒效力。以如表14所示之基於結構B13’的GST-π siRNA觀察對GST-π mRNA的劑量依賴性擊倒作用。
如表14中所示，與不具有2’-F脫氧核苷酸之GST-π siRNA相比較，具有三個位於非突出位置之2’-F脫氧核苷酸之基於結構B13’的GST-π siRNA之活性驚人地增加約3倍。
這些數據顯示與不具有2’-F脫氧核苷酸之GST-π siRNA相比較，具有一或多個2’-F脫氧核苷酸之結構的GST-π siRNA提供令人意外地增加之基因擊倒活性。
表14中所示之具有一或多個2’-F脫氧核苷酸的GST-π siRNA之活性係在6pM之皮莫耳範圍內，此範圍特別適合許多用途，包括作為活體內使用之藥劑。
實施例9：原位A549肺癌小鼠模型。本發明之GST-π siRNA在活體內可顯現出大幅減少原位肺癌腫瘤。於本實施例中，當將GST-π siRN在脂質體調製劑 中投予在無胸腺裸鼠之原位肺癌腫瘤時，GST-π siRN可在活體內提供基因擊倒效力。
一般而言，原位腫瘤模型可顯現出藥物功效和效力之直接臨床相關性，及改善之預測能力。在原位腫瘤模型中，腫瘤細胞係直接植入該細胞起源之同種器官中。
藉由比較在屍檢中所測得之治療組和載劑對照組的最終初級腫瘤重量來評估該siRNA調製劑對抗人肺癌A549的抗腫瘤效力。
第1圖顯示基於結構BU2(SEQ ID NO：61和126)之GST-π siRNA在活體內抑制原位肺癌腫瘤。原位A549肺癌小鼠模型係利用2mg/kg之相對低劑量的靶向GST-π之siRNA。
在此6週研究中，GST-π siRNA顯示出顯著且出乎意料地有利之肺腫瘤抑制效力。如第1圖所示，43天後，GST-π siRNA顯示出明顯有利之腫瘤抑制效力，與對照組相比較，最終腫瘤的平均重量顯著減少2.8倍。
在此研究中，使用5至6週齡之雄性NCr nu/nu小鼠。在實驗期間將實驗動物保持在HEPA過濾環境中。使用前，將該siRNA調製劑貯存在4℃，並在注入小鼠前將該siRNA調製劑溫熱至室溫10分鐘。
在本A549人肺癌原位模型中，在手術原位植入(SOI)當天，從攜帶A549腫瘤異種移植物之動物的皮下部位收穫貯存腫瘤並置於RPMI-1640培養基中。除 去壞死組織並將存活之組織切成1.5至2mm3小片。令動物吸入異氟烷以麻醉之並以碘和酒精消毒手術區域。使用手術剪刀在小鼠左胸壁製造一個長約1.5cm之橫切口。在第三和第四肋骨之間製造肋間切口並使左肺暴露出。以8-0手術縫線(尼龍)將一個A549腫瘤片段移植到肺的表面。以6-0手術縫線(絲)閉合胸壁。使用具有25GX 1½針頭之3cc注射器，藉由胸腔內穿刺來抽出胸腔內剩餘之空氣，以使肺重新充氣。以6-0手術絲縫線來閉合胸壁。上述之所有手術程序係在HEPA過濾層流罩下，使用放大7倍之顯微鏡進行。
腫瘤植入後3天，將荷瘤小鼠隨機分組，每組十隻小鼠。在所欲之組別方面，在植入腫瘤後三天開始該十隻小鼠的治療。
在所欲之組別方面，該調製劑為(可離子化脂質：膽固醇：DOPE：DOPC：DPPE-PEG-2K：DSPE-PEG-2K)一種脂質體組成物。該脂質體包封GST-π siRNA。
在研究終點方面，在治療開始後42天殺死實驗小鼠。切除原發性腫瘤並在電子天秤上稱重以用於隨後之分析。
在化合物毒性之估計方面，在整個實驗期間將治療組和對照組中之小鼠的平均體重維持在正常範圍內。小鼠中未觀察到其他毒性症狀。
實施例10：本發明之GST-π siRNA顯現出 在活體內大幅減少癌異種移植腫瘤。當在脂質體調製劑中投予至癌異種移植腫瘤時，GST-π siRNA提供活體內基因擊倒效力。
第2圖顯示GST-π siRNA(SEQ ID NO：156和182)抑制腫瘤的效力。使用癌異種移植模型和0.75mg/kg之相對低的靶向GST-π之siRNA劑量。
在投予後之幾天內，GST-π siRNA顯示出顯著且意料外之有利的腫瘤抑制效力。36天後，GST-π siRNA顯示出顯著有利之腫瘤抑制效力，與對照組相比較，腫瘤體積減少2倍。
如第3圖所示，GST-π siRNA在終點日證明顯著且意料外之有利的腫瘤抑制效力。尤其是，腫瘤重量減少2倍以上。
藉由注射(第1天及第15天)具有該組成物之脂質體調製劑(可離子化之脂質：膽固醇：DOPE：DOPC：DPPE-PEG-2K)(25：30：20：20：5)二次來投予GST-π siRNA。
在癌異種移植模型方面，從ATCC取得A549細胞。將細胞保持在補充有10%胎牛血清和100U/ml青黴素和100μg/ml鏈黴素之培養基中。接種前48小時，將細胞分裂培養以使細胞在收穫時係處於對數生長期。以胰蛋白酶-EDTA輕輕地將細胞進行胰蛋白酶化處理並從組織培養收穫細胞。在台盼藍(trypan blue)之存在下(僅計算存活細胞)，在血球計(hemocytometer)中計算並測 定存活細胞之數目。將細胞再懸浮於不含血清之培養基中，使細胞濃度為5×107/ml。然後，將細胞懸浮液與冰冷之解凍的BD基質膠以1：1之比例充分混合以供注射用。
小鼠為6至8週齡，免疫能力受損之查爾斯河實驗室無胸腺裸鼠(nu/nu)雌性小鼠，每組7至8隻。
為了製備腫瘤模型，使用25G針頭和注射器，經由皮下途徑在每隻小鼠之右脅腹接種0.1ml具有2.5×106個A549細胞的接種物，每隻小鼠接種一次。接種時小鼠未被麻醉。
在腫瘤體積測量和隨機化方面，腫瘤大小之測量係精確到0.1mm。使用下列公式計算腫瘤體積：腫瘤體積=長度×寬度2/2。一旦建立之腫瘤達到約120至175mm3，平均腫瘤體積為約150mm3時，將小鼠分配到各種載劑對照組和治療組，從而使治療組之平均腫瘤體積在載劑對照組之平均腫瘤體積的10%以內，理想上，腫瘤體積之CV%小於25%。在同一天，根據給藥方案投予試驗品及對照載劑。第1週監控腫瘤體積三次，其餘數週監控腫瘤體積二次，包括研究終止的那天。
在投予劑量方面，在給藥當天，從-80℃之冷凍庫取出試驗品並在冰上解凍。在施放於注射器之前，用手將含有調製劑之瓶子倒置數次。所有試驗品係藉由IV，給予0.75mg/kg，q2w X 2，10ml/kg之劑量。
在體重方面，為小鼠稱重，精確至接近0.1g。在給予第一個劑量後7天內每天監控並記錄體重。剩餘之數週，每週監控並記錄體重二次，包括研究終止的那天。
在收集腫瘤方面，在第一次給藥後的28天，測量腫瘤體積並解剖腫瘤以測量重量，儲存之以用於PD生物標記研究。記錄腫瘤重量。
實施例11：本發明之GST-π siRNA證明在玻管內藉由癌細胞之細胞凋亡來增加癌細胞死亡。GST-π siRNA提供擊倒GST-π，這導致PUMA(細胞凋亡之生物標記並與細胞存活力損失有關)上調。
GST-π siRNA SEQ ID NO：156和182(其包含在種子區中之脫氧核苷酸、2’-F取代之脫氧核苷酸及2’-OMe取代之核糖核苷酸的組合)提供意料外地增加之癌細胞凋亡。
如第4圖所示，測量GST-π siRNA SEQ ID NO：156和182之PUMA表現水準。第4圖中，PUMA之表現從轉染GST-π siRNA後之2-4天開始大幅增加。
這些數據顯示出含有在種子區中之脫氧核苷酸、2’-F取代之脫氧核苷酸及2’-OMe取代之核糖核苷酸的組合之GST-π siRNAs結構提供意料外地增加之癌細胞凋亡。
用於PUMA生物標記之方案如下。在轉染前一天，以2×103個細胞之密度將細胞接種在96孔盤中， 每孔中含有100μl之包含10%FBS的DMEM(HyClone公司，目錄編號SH30243.01)並將該96孔盤在37℃，空氣中具有5%CO2的加濕大氣的培養箱中培養。第二天，在轉染前以90μl之含有2% FBS的Opti-MEM I低血清培養基(Life Technologies公司，目錄編號31985-070)替換該培養基。然後，將0.2μl之Lipofectamine RNAiMAX(Life Technologies公司，目錄編號13778-100)與4.8μl之Opti-MEM I在室溫下混合5分鐘。將1μl之GST-π siRNA(儲存液濃度1μM)與4μl之Opti-MEM I混合，再與RNAiMAX溶液合併，然後輕輕地混合。將混合物在室溫下培育10分鐘，以允許形成RNA-RNAiMAX複合物。每孔中加入10μl之RNA-RNAiMAX複合物，使siRNA之最終濃度為10nM。將細胞溫育2小時並將培養基改變成含有2% FBS之新鮮的Opti-MEM I低血清培養基。在轉染後1、2、3、4、及6天，以冰冷之PBS洗滌細胞一次，然後，在室溫下以50μl之Cell-to-Ct細胞溶解緩衝液(Life Technologies公司，目錄編號4391851 C)溶解細胞5至30分鐘。加入5μl之終止溶液並在室溫下培育2分鐘。藉由qPCR，以TAQMAN測量PUMA(BBC3，目錄編號Hs00248075，Life Technologies公司)mRNA水準。
實施例12：本發明之GST-π siRNA可顯現出在活體內大幅減少癌異種移植腫瘤。當在脂質體調製劑中投予至癌異種移植腫瘤時，GST-π siRNA可在活體內 提供基因擊倒效力。
第5圖顯示GST-π siRNA(SEQ ID NO：61和126)之腫瘤抑制效力。在活體內觀察以靶向GST-π之siRNA劑量倚賴地擊倒GST-π mRNA。採用癌症異種移植模型和靶向GST-π之siRNA。
在投予後幾天內，GST-π siRNA顯示出顯著且意料外地有利之腫瘤抑制效力。如第5圖所示，以GST-π siRNA治療導致在注射脂質調製劑後4天GST-π mRNA之表現顯著減少。在4mg/kg之較高劑量下，注射後24小時檢測到表現顯著減少約40%。
藉由單次注射10mL/kg具有該組成物的脂質體調製劑(可離子化之脂質：膽固醇：DOPE：DOPC：DPPE-PEG-2K)(25：30：20：20：5)來投予GST-π siRNA。
在癌異種移植模型方面，從ATCC取得A549細胞。將細胞保持在補充有10%胎牛血清和100U/ml青黴素和100μg/ml鏈黴素之RPMI-1640中。接種前48小時，將細胞分裂培養以使細胞在收穫時處於對數生長期。以胰蛋白酶-EDTA輕輕地將細胞進行胰蛋白酶化處理並從組織培養收穫細胞。在台盼藍(trypan blue)之存在下(僅計算存活細胞)，在血球計(hemocytometer)中計算並測定存活之細胞數目。將細胞再懸浮於不含血清之培養基中，使細胞濃度為4×107/ml。然後，將細胞懸浮液與冰冷之解凍的BD基質膠以1：1之比例充分混合以供注 射用。
小鼠為6至8週齡，免疫能力受損之查爾斯河實驗室無胸腺裸鼠(nu/nu)雌性小鼠，每組3隻。
為了製備腫瘤模型，使用25G針頭和注射器，經由皮下途徑在每隻小鼠之右腹側接種0.1ml具有2×106個A549細胞的接種物，每隻小鼠接種一次。接種時小鼠未被麻醉。
在腫瘤體積測量和隨機化方面，腫瘤大小之測量係精確到0.1mm。使用下列公式計算腫瘤體積：腫瘤體積=長度×寬度2/2。每週監控腫瘤體積二次。一旦建立之腫瘤達到約350至600mm3，將小鼠分配在各種時間點之組別中。在同一天，根據給藥方案投予試驗品。
在投予劑量方面，當建立的腫瘤達到約350至600mm3那天，從4℃冷藏庫取出試驗品。在施放於注射器之前，用手將含有調製劑之瓶子倒置數次以使溶液均勻。
在體重方面，為小鼠稱重，精確至接近0.1g。在給予第一個劑量後7天內每天監控並記錄體重。剩餘之數週，每週監控並記錄體重二次，包括研究終止的那天。
在收集腫瘤方面，以過量之CO2殺死動物，並在給藥後0、24、48、72、96(視需要)及168小時切開腫瘤。首先將腫瘤稱重，然後分成三個部分以用於KD、分佈及生物標記分析。將樣本在液態氮中快速冷凍 並儲存在-80℃直至準備加工。
實施例13：本發明之GST-π siRNA可在活體內抑制胰臟癌異種移植腫瘤。當在脂質體調製劑中投予至胰臟癌異種移植腫瘤時，GST-π siRNA提供活體內基因擊倒效力。
在此異種移植模型中，經由皮下途徑在每隻小鼠之右脅腹接種0.1ml具有2.5×106個PANC-1細胞的接種物。使用6至8週齡之查爾斯河實驗室無胸腺雌性裸鼠。腫瘤大小之測量係精確到0.1mm。一旦建立的腫瘤達到約150至250mm3(平均腫瘤體積為約200mm3)時，將小鼠分配到各種載劑對照組和治療組，從而使治療組之平均腫瘤體積在載劑對照組之平均腫瘤體積的10%以內。在同一天，根據給藥方案投予試驗品及對照載劑。第1週監控腫瘤體積三次，其餘數週每週監控腫瘤體積二次，包括研究終止的那天。
第6圖顯示出GST-π siRNA(SEQ ID NO：61和126)抑制腫瘤的效力。如第6圖所示，以範圍在0.375mg/kg至3mg/kg之靶向GST-π的siRNA劑量取得劑量反應。該GST-π siRNA在投予後幾天內顯示出顯著且意料外地有利之抑制腫瘤之效力。因此，在終點時GST-π siRNA證明顯著且意料外地有利之抑制腫瘤之效力。
在具有組成物之脂質體調製劑中(可離子化脂質：膽固醇：DOPE：DOPC：DPPE-PEG-2K)(25： 30：20：20：5)投予GST-π siRNA。
實施例14：本發明之GST-π siRNA表現出增加之血清穩定性。
第7圖顯示在人血清中培育及在各種時間點藉由HPLS/LCMS檢測其餘之siRNA。如第7圖所示，GST-π siRNA(SEQ ID NO：61和126)之有義股(第7圖，上方)和反義股(第7圖，下方)在血清中的半衰期(t½)為約100分鐘。
實施例15：本發明之GST-π siRNA顯示出在血漿中之調製劑中的穩定性增強。
第8圖顯示出在血漿中培育調製劑並在各種時間點檢測剩餘之siRNA。如第8圖所示，GST-π siRNA(SEQ ID NO：61和126)之調製劑在血漿中的半衰期(t½)明顯長於100小時。
製備在具有該組成物之脂質體調製劑(可離子化脂質：膽固醇：DOPE：DOPC：DPPE-PEG-2K)(25：30：20：20：5)中的GST-π siRNA。該脂質體奈米粒之z平均尺寸為40.0nm，且該siRNA為91%經包封的。
將調製劑在PBS中之50%人血清中培育40分鐘、1.5小時、3小時、24小時、及96小時。藉由基於ELISA之分析測定GST-π siRNA之量。
實施例16：本發明之GST-π siRNA顯示出藉由隨從股降低脫靶效果。
在GST-π siRNA(SEQ ID NO：156和182)方面，第9圖顯示與表現出沒有效果之具有加擾序列之對照組相比較，該嚮導股在玻管內之擊倒效果約為指數倍數。本siRNA之IC50在5pM測得。第10圖顯示相同GST-π siRNA之隨從股在玻管內之擊倒效果。如第10圖所示，GST-π siRNA之隨從股的脫靶擊倒效果大為降低超過100倍。
在GST-π siRNA(SEQ ID NO：187和199)、(SEQ ID NO：189和201)及(SEQ ID NO：190和202)方面，第11圖顯示出嚮導股在玻管內之擊倒效果約為指數倍數。這些siRNA之IC50係分別在6、7、5pM測得。如第12圖所示，這些GST-π siRNA之隨從股在玻管內之擊倒效果顯著降低至少10倍。所有這些GST-π siRNA在雙股區之種子區中均具有脫氧核苷酸，雙股區中並無其他修飾。
在GST-π siRNA(SEQ ID NO：217和232)方面，第13圖顯示此高活性GST-π siRNA之嚮導股在玻管內之擊倒效果約為指數倍數。此siRNA之IC50係在11pM測得。如第14圖所示，GST-π siRNA之隨從股在玻管內之擊倒效果顯著降低100倍以上。此GST-π siRNA在雙股區之種子區具有脫氧核苷酸，雙股區中並無其他修飾。
使用表現報告質粒psiCHECK-2(其編碼Renilla螢光素酶基因)測定脫靶效果。(雙螢光素酶報 告基因分析系統(Dual-Luciferase Reporter Assay System，Promega公司，目錄編號：E1960)。siRNA之濃度通常為50pM。實驗計劃：第1天，以5至7.5×103/100ul/孔之密度接種HeLa細胞。第2天，在約80%之細胞匯合度下進行共轉染。第3天，收穫細胞以測量螢光素酶活性。根據製造商之實驗計劃，使用Promega公司之螢光素酶分析系統(E4550)測量螢光素酶活性。
該psiCHECK-2載體能夠監控與海腎螢光素酶之報告基因融合之靶基因表現的變化。將該siRNA構建體選殖入多選殖區，並將載體與siRNA共同轉染入HeLa細胞。若特異性siRNA結合靶的mRNA並起始RNAi過程，該融合之海腎螢光素酶：構建體mRNA將被裂解並隨後降解，減少海腎螢光素酶信號。
例如，用於具有BU2’結構之siRNA的質粒插入子如下：PsiCHECK-2(F)質粒插入子：SEQ ID NO：285
PsiCHECK-2(R)質粒插入子：SEQ ID NO：286
實施例17：本發明之GST-π siRNA顯示出有利地降低之miRNA樣脫靶效果，此為種子依賴性意料外脫靶基因沉默。
在GST-π siRNA(SEQ ID NO：156和182)、(SEQ ID NO：187和199)、(SEQ ID NO：189和201)、(SEQ ID NO：190和202)、和(SEQ ID NO：217和232)方面，模仿miRNA之脫靶活性被發現基本上可忽略。這些GST-π siRNAs之種子依賴性的意料外脫靶基因沉默至少較該嚮導股之對靶活性低10倍至100倍。
為了測試miRNA相關之脫靶效果，將一至四個與反義股之整個含種子區(5’端之位置1至8)互補，但不與其餘非種子區(位置9至21)互補的與種子匹配之靶的序列之重複子引入對應於該螢光素酶mRNA的3’UTR區中，以測定種子依賴性之意料外脫靶效果的效力。使用質粒插入子以模仿在種子區完全匹配，而在非種子區域中錯配(凸出位點(bulge))的miRNA。
例如，用於具有BU2’結構之siRNA的質粒插入子如下：PsiCHECK-2(Fmi1)質粒插入子：SEQ ID NO：287
PsiCHECK-2(Fmi2)質粒插入子：SEQ ID NO：288
PsiCHECK-2(Fmi3)質粒插入子： SEQ ID NO：289
PsiCHECK-2(Fmi4)質粒插入子：SEQ ID NO：290
本文所描述之實施態樣並非限制性且本技藝之技術熟習人士可輕易地理解本文所描述之修飾的特定組合可無需過度實驗，朝鑑別具有改善之RNAi活性的核酸分子進行試驗。
本文所具體提及之所有出版物、專利和文獻之全部內容以引用方式併入本文用於所有目的。
應理解的是，本發明並不限於所描述之特定方法、方案、材料及試劑，因為這些可以有所變化。亦需理解的是，本文所使用之術語僅用於描述特定之實施態樣，而不意圖限制本發明之範圍。本技藝之技術熟習人士可輕易理解可對本文揭示之描述作出各種取代和修飾，而不偏離本說明內容之範圍和精神，且那些實施態樣係在本說明書之範圍和所附之申請專利範圍內。
必須注意的是，除非上下文另有明確說明，如本文和所附之申請專利範圍中所使用之單數形式“一(a、an)”及“該(the)”包括複數指稱。同樣地，本文中術語“一(a或an)”、“一或多(個)”及“至少 一(個)”可互換使用。亦應注意的是，術語“包含(comprises、comprising)”、“含有(containing)”、“包括(including)”、及“具有(having)”可互換使用，並應擴大且不加限制地解讀。
除非本文另外指明，本文所列舉之數值範圍僅意圖作為單獨提及各個單獨落在該範圍內之數值的速記方法，且各個單獨數值被納入本專利說明書中如同其被單獨列舉於本文中。在馬庫西群組(markush group)方面，本技藝之技術熟習人士將察知本描述包括馬庫西群組之個別成員以及成員之次群組。
無需進一步詳細說明，咸信本技藝之技術熟習人士可根據上文中之描述來利用本發明至其最大限度。因此，下列特定實施態樣應解釋為僅用於說明且不以任何方式限制本揭示內容之其餘部分。
本專利說明書中所揭示之所有特性可以任何組合相結合。本專利說明書中所揭示之各種特性可被用於相同、等效或類似目的之替代特性所替代。
<110> NITTO DENKO公司
<120> 用於麩胱甘肽S轉移酶Pi(GST-π)基因調控之RNA干擾劑
<130> ND5123385WO
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<212> DNA
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<220>
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<220>
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<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
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<220>
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<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
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<212> RNA
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<220>
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<220>
<221> 經修飾的_鹼基
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<212> RNA
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<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
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<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
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<220>
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<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
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<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
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<220>
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<220>
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<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<400> 142
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<212> RNA
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<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
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<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
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<220>
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<220>
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<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (19)..(19)
<223> 2'-脫氧-2'-氟-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
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<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (14)..(14)
<223> 2'-脫氧-2'-氟-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (19)..(19)
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<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
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<400> 148
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<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (19)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 149
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<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (19)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 150
<210> 151
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (1)..(3)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 151
<210> 152
<211> 21
<212> RNA
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<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (1)..(3)
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<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (8)..(8)
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<220>
<221> 經修飾的_鹼基
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<223> 2'-OMe-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (18)..(18)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 152
<210> 153
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (1)..(3)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 153
<210> 154
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (1)..(3)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (8)..(8)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (10)..(10)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (18)..(18)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 154
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<212> RNA
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<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
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<220>
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<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (10)..(10)
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<220>
<221> 經修飾的_鹼基
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<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 155
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
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<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (8)..(8)
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<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (10)..(10)
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<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (18)..(21)
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
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<223> a,c,t,g,u，未知或其他
<400> 157
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<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
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<400> 158
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
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<220>
<221> 經修飾的_鹼基
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<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (8)..(8)
<223> 2'-脫氧-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (6)..(6)
<223> 2'-脫氧-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (8)..(8)
<223> 2'-脫氧-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
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<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (8)..(8)
<223> 2'-脫氧-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<220>
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<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (8)..(8)
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<220>
<221> 經修飾的_鹼基
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<223> 2'-OMe-核苷酸
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (6)..(6)
<223> 2'-脫氧-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (8)..(8)
<223> 2'-脫氧-核苷酸
<220>
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<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
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<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 164
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<220>
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<223> 2'-OMe-核苷酸
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<220>
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<220>
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<220>
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (6)..(6)
<223> 2'-脫氧-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (8)..(8)
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<220>
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<223> 2'-OMe-核苷酸
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (6)..(6)
<223> 2'-脫氧-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (8)..(8)
<223> 2'-脫氧-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (14)..(14)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (16)..(16)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (18)..(18)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 168
<210> 169
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (1)..(1)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 169
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<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (1)..(1)
<223> 2'-脫氧-2'-氟-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 170
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (1)..(1)
<223> 2'-脫氧-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 171
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<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (1)..(2)
<223> 硫代磷酸酯鍵聯
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
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<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (1)..(1)
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<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (9)..(9)
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<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (17)..(17)
<223> 2'-脫氧-2'-氟-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 173
<210> 174
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (1)..(1)
<223> 2'-脫氧-2'-氟-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (9)..(9)
<223> 2'-脫氧-2'-氟-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (11)..(12)
<223> 2'-脫氧-2'-氟-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (17)..(17)
<223> 2'-脫氧-2'-氟-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
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<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (1)..(1)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (9)..(9)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (17)..(17)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (1)..(1)
<223> 2'-脫氧-2'-氟-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (9)..(9)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (17)..(17)
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<220>
<221> 經修飾的_鹼基
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<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 177
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (6)..(6)
<223> 2'-脫氧-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (8)..(8)
<223> 2'-脫氧-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 178
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (1)..(1)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (6)..(6)
<223> 2'-脫氧-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (8)..(8)
<223> 2'-脫氧-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (9)..(9)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (11)..(12)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (18)..(18)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 179
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (1)..(1)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (6)..(6)
<223> 2'-脫氧-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (8)..(8)
<223> 2'-脫氧-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (9)..(9)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (11)..(12)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (18)..(18)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 180
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (1)..(1)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (6)..(6)
<223> 2'-脫氧-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (8)..(8)
<223> 2'-脫氧-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (9)..(9)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (11)..(12)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (17)..(18)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 181
<210> 182
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (1)..(1)
<223> 2'-脫氧-2'-氟-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (6)..(6)
<223> 2'-脫氧-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (8)..(8)
<223> 2'-脫氧-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (9)..(9)
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<222> (20)..(21)
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<212> DNA
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<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
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<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> a,c,t,g,u，未知或其他
<400> 183
<210> 184
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 184
<210> 185
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
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<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 185
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<212> RNA
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<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
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<212> RNA
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<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
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<220>
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<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
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<220>
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<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
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<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
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<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
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<212> RNA
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<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
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<220>
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<212> DNA
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<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<220>
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<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
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<220>
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<223> 2'-脫氧-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<220>
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<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (5)..(6)
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<220>
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<223> 2'-OMe-核苷酸
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<220>
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<220>
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
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<220>
<221> 經修飾的_鹼基
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<223> 2'-OMe-核苷酸
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<210> 201
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (5)..(6)
<223> 2'-脫氧-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
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<210> 202
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
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<223> 2'-脫氧-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 202
<210> 203
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (5)..(5)
<223> 2'-脫氧-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
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<210> 204
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (2)..(2)
<223> 2'-脫氧-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (6)..(6)
<223> 2'-脫氧-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
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<210> 205
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
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<223> 2'-脫氧-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 205
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (2)..(2)
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<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (5)..(6)
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<220>
<221> 經修飾的_鹼基
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<223> 2'-OMe-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
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<223> 2'-OMe-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (18)..(18)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 206
<210> 207
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> a,c,t,g,u，未知或其他
<400> 207
<210> 208
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 208
<210> 209
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 209
<210> 210
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
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<210> 211
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
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<210> 212
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
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<210> 213
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
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<210> 214
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
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<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 215
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<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 216
<210> 217
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 217
<210> 218
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (1)..(1)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (3)..(3)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (5)..(5)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (7)..(7)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 218
<210> 219
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (11)..(11)
<223> 2'-脫氧-2'-氟-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (13)..(13)
<223> 2'-脫氧-2'-氟-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 219
<210> 220
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (1)..(2)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 220
<210> 221
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (1)..(2)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 221
<210> 222
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> a,c,t,g,u，未知或其他
<400> 222
<210> 223
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 223
<210> 224
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (1)..(1)
<223> 2'-脫氧-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (5)..(6)
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<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 224
<210> 225
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (5)..(6)
<223> 2'-脫氧-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 225
<210> 226
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (5)..(6)
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<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (5)..(6)
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<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 227
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (5)..(6)
<223> 2'-脫氧-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
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<210> 229
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<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
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<220>
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<212> DNA
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<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
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<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 271
<210> 272
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (1)..(1)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (3)..(3)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (5)..(5)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (7)..(7)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (9)..(9)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 272
<210> 273
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> a,c,t,g,u，未知或其他
<400> 273
<210> 274
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 274
<210> 275
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (2)..(2)
<223> 2'-脫氧-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (5)..(6)
<223> 2'-脫氧-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 275
<210> 276
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (2)..(2)
<223> 2'-脫氧-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (5)..(6)
<223> 2'-脫氧-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 276
<210> 277
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (5)..(6)
<223> 2'-脫氧-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 277
<210> 278
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (5)..(6)
<223> 2'-脫氧-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 278
<210> 279
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (5)..(6)
<223> 2'-脫氧-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 279
<210> 280
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (5)..(5)
<223> 2'-脫氧-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 280
<210> 281
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (5)..(5)
<223> 2'-脫氧-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 281
<210> 282
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (2)..(2)
<223> 2'-脫氧-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (6)..(6)
<223> 2'-脫氧-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 282
<210> 283
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (6)..(6)
<223> 2'-脫氧-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 283
<210> 284
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (2)..(2)
<223> 2'-脫氧-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (5)..(6)
<223> 2'-脫氧-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (14)..(14)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (16)..(16)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (18)..(18)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<220>
<221> 經修飾的_鹼基
<222> (20)..(21)
<223> 2'-OMe-核苷酸
<400> 284
<210> 285
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<400> 285
<210> 286
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<400> 286
<210> 287
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<400> 287
<210> 288
<211> 71
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<400> 288
<210> 289
<211> 92
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<400> 289
<210> 290
<211> 113
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之描述：合成的寡核苷酸.
<220>
<223> 組合之DNA/RNA分子的描述：合成的寡核苷酸
<400> 290

Claims (70)

  1. 一種用於抑制麩胱甘肽S轉移酶Pi(GST-π)之表現的包含有義股及反義股之核酸分子，其中該等股形成雙股區，且其中該反義股為SEQ ID NO：157且該有義股為SEQ ID NO：131。
  2. 如申請專利範圍第1項之核酸分子，其中該雙股區中一或多個核苷酸係經修飾或經化學修飾。
  3. 如申請專利範圍第2項之核酸分子，其中該經修飾或經化學修飾之核苷酸為2’-脫氧核苷酸、2’-O-烷基取代之核苷酸、2’-脫氧-2’-氟取代之核苷酸、硫代磷酸酯核苷酸、鎖核苷酸(locked nucleotide)或彼等之任何組合。
  4. 如申請專利範圍第2項之核酸分子，其中該反義股在多個位置具有脫氧核苷酸，該多個位置為下列一者：從該反義股之5’端開始之各位置4、6及8；從該反義股之5’端開始之各位置3、5及7；從該反義股之5’端開始之各位置1、3、5及7；從該反義股之5’端開始之各位置3至8；或從該反義股之5’端開始之各位置5至8。
  5. 如申請專利範圍第4項之核酸分子，其中該分子在該雙股區具有一或多個2’-脫氧-2’-氟取代之核苷酸。
  6. 如申請專利範圍第2項之核酸分子，其中該反義股為SEQ ID NO：182且該有義股為SEQ ID NO：156。
  7. 如申請專利範圍第2項之核酸分子，其中該反義 股為SEQ ID NO：180且該有義股為SEQ ID NO：154。
  8. 如申請專利範圍第2項之核酸分子，其中該反義股為SEQ ID NO：181且該有義股為SEQ ID NO：155。
  9. 如申請專利範圍第1至8項中任一項之核酸分子，其中該分子以小於50pM之IC50抑制GST-π mRNA之表現。
  10. 如申請專利範圍第1至8項中任一項之核酸分子，其中單次投予該分子抑制GST-π mRNA的活體內表現水準達至少25%。
  11. 如申請專利範圍第1至8項中任一項之核酸分子，其中該隨從股(passenger strand)之脫靶活性降低至少50倍。
  12. 一種醫藥組成物，其包含如申請專利範圍第1至8項中任一項之核酸分子及醫藥上可接受之載體。
  13. 如申請專利範圍第12項之醫藥組成物，其中該載體包含脂質分子或脂質體。
  14. 一種載體或細胞，其包含如申請專利範圍第1至8項中任一項之核酸分子。
  15. 一種用於治療與GST-π表現相關之疾病的方法，該方法包含投予有需要之個體如申請專利範圍第12項之組成物，其中該疾病為惡性腫瘤、癌症、由表現突變之KRAS的細胞所引起之癌症、肉瘤或癌瘤。
  16. 一種用於抑制GST-π之表現之核酸分子，其包含有義股及反義股，其中該等股形成雙股區，且其中該反 義股為SEQ ID NO：195且該有義股為SEQ ID NO：183。
  17. 如申請專利範圍第16項之核酸分子，其中該雙股區中一或多個核苷酸係經修飾或經化學修飾。
  18. 如申請專利範圍第17項之核酸分子，其中該經修飾或經化學修飾之核苷酸為2’-脫氧核苷酸、2’-O-烷基取代之核苷酸、2’-脫氧-2’-氟取代之核苷酸、硫代磷酸酯核苷酸、鎖核苷酸或彼等之任何組合。
  19. 如申請專利範圍第17項之核酸分子，其中該反義股在多個位置具有脫氧核苷酸，該多個位置為下列一者：從該反義股之5’端開始之各位置4、6及8；從該反義股之5’端開始之各位置3、5及7；從該反義股之5’端開始之各位置1、3、5及7；從該反義股之5’端開始之各位置3至8；或從該反義股之5’端開始之各位置5至8。
  20. 如申請專利範圍第19項之核酸分子，其中該分子在該雙股區具有一或多個2’-脫氧-2’-氟取代之核苷酸。
  21. 如申請專利範圍第17項之核酸分子，其中該反義股為SEQ ID NO：205且該有義股為SEQ ID NO：193。
  22. 如申請專利範圍第17項之核酸分子，其中該反義股為SEQ ID NO：202且該有義股為SEQ ID NO：190。
  23. 如申請專利範圍第17項之核酸分子，其中該反義股為SEQ ID NO：199且該有義股為SEQ ID NO：187。
  24. 如申請專利範圍第17項之核酸分子，其中該反義股為SEQ ID NO：201且該有義股為SEQ ID NO：189。
  25. 如申請專利範圍第16至24項中任一項之核酸分子，其中該分子以小於50pM之IC50抑制GST-π mRNA之表現。
  26. 如申請專利範圍第16至24項中任一項之核酸分子，其中單次投予該分子抑制GST-π mRNA的活體內表現水準達至少25%。
  27. 如申請專利範圍第16至24項中任一項之核酸分子，其中該隨從股之脫靶活性降低至少50倍。
  28. 一種醫藥組成物，其包含如申請專利範圍第16至24項中任一項之核酸分子及醫藥上可接受之載體。
  29. 如申請專利範圍第28項之醫藥組成物，其中該載體為脂質分子或脂質體。
  30. 一種載體或細胞，其包含如申請專利範圍第16至24項中任一項之核酸分子。
  31. 一種用於治療與GST-π表現相關之疾病的方法，該方法包含投予有需要之個體如申請專利範圍第28項之組成物，其中該疾病為惡性腫瘤、癌症、由表現突變之KRAS的細胞所引起之癌症、肉瘤或癌瘤。
  32. 一種用於抑制GST-π之表現之核酸分子，其包含有義股及反義股，其中該等股形成雙股區，且其中該反義股為SEQ ID NO：222且該有義股為SEQ ID NO：207。
  33. 如申請專利範圍第32項之核酸分子，其中該雙股區中一或多個核苷酸係經修飾或經化學修飾。
  34. 如申請專利範圍第33項之核酸分子，其中該經修飾或經化學修飾之核苷酸為2’-脫氧核苷酸、2’-O-烷基取代之核苷酸、2’-脫氧-2’-氟取代之核苷酸、硫代磷酸酯核苷酸、鎖核苷酸或彼等之任何組合。
  35. 如申請專利範圍第33項之核酸分子，其中該反義股在多個位置具有脫氧核苷酸，該多個位置為下列一者：從該反義股之5’端開始之各位置4、6及8；從該反義股之5’端開始之各位置3、5及7；從該反義股之5’端開始之各位置1、3、5及7；從該反義股之5’端開始之各位置3至8；或從該反義股之5’端開始之各位置5至8。
  36. 如申請專利範圍第35項之核酸分子，其中該分子在該雙股區具有一或多個2’-脫氧-2’-氟取代之核苷酸。
  37. 如申請專利範圍第33項之核酸分子，其中該反義股為SEQ ID NO：232且該有義股為SEQ ID NO：217。
  38. 如申請專利範圍第32至37項中任一項之核酸分 子，其中該分子以小於50pM之IC50抑制GST-π mRNA之表現。
  39. 如申請專利範圍第32至37項中任一項之核酸分子，其中單次投予該分子抑制GST-π mRNA的活體內表現水準達至少25%。
  40. 如申請專利範圍第32至37項中任一項之核酸分子，其中該隨從股之脫靶活性降低至少50倍。
  41. 一種醫藥組成物，其包含如申請專利範圍第32至37項中任一項之核酸分子及醫藥上可接受之載體。
  42. 如申請專利範圍第41項之醫藥組成物，其中該載體為脂質分子或脂質體。
  43. 一種載體或細胞，其包含如申請專利範圍第32至37項中任一項之核酸分子。
  44. 一種用於治療與GST-π表現相關之疾病的方法，該方法包含投予有需要之個體如申請專利範圍第41項之組成物，其中該疾病為惡性腫瘤、癌症、由表現突變之KRAS的細胞所引起之癌症、肉瘤或癌瘤。
  45. 一種用於抑制GST-π之表現之核酸分子，其包含有義股及反義股，其中該等股形成雙股區，且其中該反義股為SEQ ID NO：249且該有義股為SEQ ID NO：237，且其中該雙股區中一或多個核苷酸係經修飾或經化學修飾。
  46. 如申請專利範圍第45項之核酸分子，其中該經修飾或經化學修飾之核苷酸為2’-脫氧核苷酸、2’-O-烷基 取代之核苷酸、2’-脫氧-2’-氟取代之核苷酸、硫代磷酸酯核苷酸、鎖核苷酸或彼等之任何組合。
  47. 如申請專利範圍第45項之核酸分子，其中該反義股在多個位置具有脫氧核苷酸，該多個位置為下列一者：從該反義股之5’端開始之各位置4、6及8；從該反義股之5’端開始之各位置3、5及7；從該反義股之5’端開始之各位置1、3、5及7；從該反義股之5’端開始之各位置3至8；或從該反義股之5’端開始之各位置5至8。
  48. 如申請專利範圍第47項之核酸分子，其中該分子在該雙股區具有一或多個2’-脫氧-2’-氟取代之核苷酸。
  49. 如申請專利範圍第45項之核酸分子，其中該反義股為SEQ ID NO：255且該有義股為SEQ ID NO：243。
  50. 如申請專利範圍第45項之核酸分子，其中該反義股為SEQ ID NO：256且該有義股為SEQ ID NO：244。
  51. 如申請專利範圍第45至50項中任一項之核酸分子，其中該分子以小於200pM之IC50抑制GST-π mRNA之表現。
  52. 如申請專利範圍第45至50項中任一項之核酸分子，其中單次投予該分子抑制GST-π mRNA的活體內表現水準達至少25%。
  53. 如申請專利範圍第45至50項中任一項之核酸分子，其中該隨從股之脫靶活性降低至少50倍。
  54. 一種醫藥組成物，其包含如申請專利範圍第45至50項中任一項之核酸分子及醫藥上可接受之載體。
  55. 如申請專利範圍第54項之醫藥組成物，其中該載體為脂質分子或脂質體。
  56. 一種載體或細胞，其包含如申請專利範圍第45至50項中任一項之核酸分子。
  57. 一種用於治療與GST-π表現相關之疾病的方法，該方法包含投予有需要之個體如申請專利範圍第54項之組成物，其中該疾病為惡性腫瘤、癌症、由表現突變之KRAS的細胞所引起之癌症、肉瘤或癌瘤。
  58. 一種用於抑制GST-π之表現之核酸分子，其包含有義股及反義股，其中該等股形成雙股區，且其中該反義股為SEQ ID NO：273且該有義股為SEQ ID NO：261，且其中該雙股區中一或多個核苷酸係經修飾或經化學修飾。
  59. 如申請專利範圍第58項之核酸分子，其中該經修飾或經化學修飾之核苷酸為2’-脫氧核苷酸、2’-O-烷基取代之核苷酸、2’-脫氧-2’-氟取代之核苷酸、硫代磷酸酯核苷酸、鎖核苷酸或彼等之任何組合。
  60. 如申請專利範圍第58項之核酸分子，其中該反義股在多個位置具有脫氧核苷酸，該多個位置為下列一者： 從該反義股之5’端開始之各位置4、6及8；從該反義股之5’端開始之各位置3、5及7；從該反義股之5’端開始之各位置1、3、5及7；從該反義股之5’端開始之各位置3至8；或從該反義股之5’端開始之各位置5至8。
  61. 如申請專利範圍第60項之核酸分子，其中該分子在該雙股區具有一或多個2’-脫氧-2’-氟取代之核苷酸。
  62. 如申請專利範圍第58項之核酸分子，其中該反義股為SEQ ID NO：277且該有義股為SEQ ID NO：265。
  63. 如申請專利範圍第58項之核酸分子，其中該反義股為SEQ ID NO：280且該有義股為SEQ ID NO：268。
  64. 如申請專利範圍第58至63項中任一項之核酸分子，其中該分子以小於300pM之IC50抑制GST-π mRNA之表現。
  65. 如申請專利範圍第58至63項中任一項之核酸分子，其中單次投予該分子抑制GST-π mRNA的活體內表現水準達至少25%。
  66. 如申請專利範圍第58至63項中任一項之核酸分子，其中該隨從股之脫靶活性降低至少50倍。
  67. 一種醫藥組成物，其包含如申請專利範圍第58至63項中任一項之核酸分子及醫藥上可接受之載體。
  68. 如申請專利範圍第67項之醫藥組成物，其中該 載體為脂質分子或脂質體。
  69. 一種載體或細胞，其包含如申請專利範圍第58至63項中任一項之核酸分子。
  70. 一種用於治療與GST-π表現相關之疾病的方法，該方法包含投予有需要之個體如申請專利範圍第67項之組成物，其中該疾病為惡性腫瘤、癌症、由表現突變之KRAS的細胞所引起之癌症、肉瘤或癌瘤。
TW105120007A 2015-06-24 2016-06-24 用於麩胱甘肽Ｓ轉移酶Ｐｉ（ＧＳＴ－π）基因調控之ＲＮＡ干擾劑 TWI715594B (zh)

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