TW201605907A - 一種調控精子授精能力短鏈胜肽之提高體外人工授精成功率之用途 - Google Patents

一種調控精子授精能力短鏈胜肽之提高體外人工授精成功率之用途 Download PDF

Info

Publication number
TW201605907A
TW201605907A TW103127557A TW103127557A TW201605907A TW 201605907 A TW201605907 A TW 201605907A TW 103127557 A TW103127557 A TW 103127557A TW 103127557 A TW103127557 A TW 103127557A TW 201605907 A TW201605907 A TW 201605907A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
short
kisspeptin
chain peptide
sperm
seq
Prior art date
Application number
TW103127557A
Other languages
English (en)
Inventor
邱智賢
許孟傑
Original Assignee
國立臺灣大學
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 國立臺灣大學 filed Critical 國立臺灣大學
Priority to TW103127557A priority Critical patent/TW201605907A/zh
Priority to US14/494,622 priority patent/US9221873B1/en
Publication of TW201605907A publication Critical patent/TW201605907A/zh

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4702—Regulators; Modulating activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/08—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for gonadal disorders or for enhancing fertility, e.g. inducers of ovulation or of spermatogenesis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4702—Regulators; Modulating activity
    • C07K14/4705—Regulators; Modulating activity stimulating, promoting or activating activity

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Pregnancy & Childbirth (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本發明係提供一種調控精子授精能力之短鏈胜肽，該短鏈胜肽係添加於包含精子及卵子的體外培養液，以提高體外人工授精之成功率，其特徵在於：該短鏈胜肽係包含一氨基酸序列(SEQ ID NO:1) H-Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg-X-NH2，其中X係為Tyr或Phe，而序列末端為醯胺(amide)。藉由含有該短鏈胜肽來調節精子細胞內自由態鈣離子之濃度，而完成提高體外人工授精之成功率。

Description

一種調控精子授精能力之短鏈胜肽
本發明係關於一種調控精子授精能力之短鏈胜肽，尤其是關係將一種短鏈胜肽添加於體外精子與卵子培養液中，用以提高體外人工授精成功率的短鏈胜肽。
所謂的授精乃是指精子與卵子之結合，曾有研究證實若於排卵時將精子直接注射至子宮內是無法進行授精；然而，若將精子提早注射在排卵前數小時，則可以成功的發生授精作用。而所謂的「獲能作用」就是用來描述此一過程，意即，精子必須要有足夠的時間進行生理上的改變，始有能力進行授精作用。而不同物種的精蟲進行獲能作用的時間亦不相同，例如兔子約為5小時、小鼠約為1小時、大鼠約為2~3小時，而人類則需時5~6小時。
獲能作用被研究至今約60年，但其中的分子調控機制與訊息傳遞路徑仍然未非常清楚。目前所知精子在獲能作用時合有許多的生理狀態改變，包括細胞膜的流動性(membrane fluidity)增加，膽固醇的移除(cholesterol efflux)、細胞內多種離子濃度的改變、細胞膜位過極化(hyperpolarization)、細胞內鹼化作用(alkaliztion)、精子內蛋白質的酪胺酸磷酸化(tyrosine phosphorylation)與超泳動現象(hyperactivation)，而至今研究指出可能是透過三種路徑來調控獲能作用，包括：cAMP/PKA路徑、受體型酪胺酸激(receptor tyrosine kinase)與非受體型酪胺酸激酶(non-receptor tyrosine kinase)路徑，此三個訊息傳遞路徑最終將使得細胞內蛋白質的酪胺酸磷酸化，而讓精子達到獲能的狀態。
目前已知影響獲能作用的因子包括膽固醇、鈣離子、重碳酸根離子、ROS(reactive oxygen species)、孕酮(progesterone)、GABA(gamma-aminobutyric acid)、去獲能因子(decapacitation factor)與多種細胞激素等等，其中鈣離子在上述諸多研究中具重要性。
鈣離子湧入(calcium influx)是能作中一項重要的生理反應，同時在後續的頂體反應也扮演相當重要的角色。有研究指出，許多哺乳動物的精子在獲能作用的過程中，細胞內的鈣離子濃度會顯著上升；此外，在不同物種的精子獲能對於胞外鈣離子濃度亦有不同的需求，如小鼠精子所需鈣離子濃度環境在毫微莫耳(micromolar)範圍內，而人類精子則在毫莫耳(millimolar)範圍內。
另外，亦有實驗數據顯示人類精子獲能在培養液中的鈣離子濃度需0.22mM，而在後續的頂體反應及與透明帶白結合則需要大於0.58mM，這是顯示同樣是發生在精子上鈣離子湧入，在不同階段會有不同的濃度需求。而在獲能作用之前，因為精蟲細胞上的一些鈣離子交換系統(如：voltage-dependent calcium channel; Ca2+ /ATPase; Na+ -Ca2+ exchange)的作用，使得精蟲細胞內的鈣離子維持較低的鈣離子濃度；但隨著獲能作用的進行，一直到發生頂體反應之前，將鈣離子由胞外進入或者是由貯存的胞器釋放至細胞質內，藉著鈣離子濃度的增加來進行訊息傳遞，影響後續的超泳動現象(hyperactivation)並誘發頂體反應(acrosome reaction)，即細胞內的鈣離子濃度上升，可代表著獲能作用的進行，同時可提高精子之授精成功率。
而在人類胎盤中發現與GPR54具有高度親和性的配體kisspeptins，其轉譯自KISS1基因。KISS1基因的初產物為包含145個胺基酸的蛋白質，再經由蛋白酶水解後形成含54個胺基酸的胜肽，稱為kisspeptin-54。然而，kisspeptin-54最早被稱為metastin，因為它被認定為具有抑制腫瘤轉移功能的基因，其能夠抑制黑色素瘤(melanomas)的轉移(metastaisi)。
除了kisspeptin-54外，其他來自kisspeptin前趨物的較小片段胜肽也被辨識出來，包括kisspeptin-14、kisspeptin-13及kisspeptin-10，而此等胜肽在C端具有期同的結構稱為RF-amide motif(Arg-Phe-NH2 )，此外，這些不同長度的胜肽都可與GPR54進行結合，並且具有相同的親合力。
而所謂的體外人工授精(in vitro fergilization)，是將卵子及精子自個體中取出，洗淨後並且共同培養，使卵子自然受精，為最常用之試管嬰兒受精方式，受精卵則繼續培養3~6天後形成胚胎再植回母體。此方法提供部分不孕患者，如：3-6~人工受孕(aritificial insemination)失敗者、嚴重子官內膜異位症者、高齡且急於懷孕者等患者之懷孕。
目前，臨床上體外人工授精之成功率仍偏低，約為30~40%；而在實驗動物上，不同品系之小鼠體外人工授精成功率亦不相同(約為10~20%)，因此改善受精方法而提高體外授精之成功率，仍為一待解決之問題。
有鑑於上述問題，本發明之目的係為提供一種短鏈胜肽添加於體外精子及卵子培養液，用以提高體外人工授精之成功率。
為達上述目的及其他目的，本發明係提供一種調控精子授精能力之短鏈胜肽，該短鏈胜肽係添加於包含精子及卵子的體外培養液，以提高體外人工授精之成功率，其特徵在於：該短鏈胜肽係包含一氨基酸序列 (SEQ ID NO:1)H-Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg-X-NH2 ，其中X係為Tyr或Phe，而序列末端為醯胺(amide)。
如上所述之短鏈胜肽，其中該短鏈胜肽於添加時之濃度係大於25μM，且較佳之濃度範圍係為50μM ~100μM，並該濃度更佳為50μM；該濃度最佳為100μM。
如上所述之短鏈胜肽，係為人類表現型胜肽kisspeptin-54 (SEQ ID NO:5)、kisspeptin-14 (SEQ ID NO:4)、kisspeptin-13 (SEQ ID NO:3)及kisspeptin-10 (SEQ ID NO:2)。
如上所述之短鏈胜肽，係為嚙齒類動物表現型胜肽kisspeptin-52 (SEQ ID NO:9)、kisspeptin-14 (SEQ ID NO:8)、kisspeptin-13 (SEQ ID NO:7)及kisspeptin-10 (SEQ ID NO:6)。
藉由添加本發明所提供之短鏈胜肽於包含精子及卵子的體外培養液，可提升精子細胞內自由態鈣離子濃度上升，完成精子於授精過程中之獲能作用，進而提高體外授精之成功率。
為充分瞭解本發明之目的、特徵及功效，茲藉由下述具體之實施例，並配合所附之圖式，對本發明做一詳細說明，說明如後：( 一 ) 動物及材料
實驗動物購自台大醫學院實驗動物中心之成熟雄性(10-16 週大)及雌性(8-12 週大)ICR (imprinting control region)老鼠，飼養環境控制在12小時之光(0800-2000)/暗(2000-0800)循環條件下，室溫維持在21±2℃，供給老鼠飼料(chow diet)、水份並於實驗期間採取任食任飲制。
短鏈胜肽kisspeptin 10 (SEQ ID NO:6)及其拮抗劑 peptide-234 (SEQ ID NO:10)皆購自Kelowna international Scientific (Taipei, Taiwan)，並其他試劑則購自sigma Aldrich 或 Invitrogen。( 二 ) 分離精子
製備精子用以測量細胞內自由鈣離子濃度變化([Ca2+ ]i )，測量精子[Ca2+ ]i時乃培養於改良型HEPES培養液(HEPES medium(HM))(120 mM NaCl, 2mM KCl, 1.2 mM MgSO4 ·7H2 O, 0.36 mM NaH2 PO4 , 15mM NaHCO3 , 10 mM HEPES, 5.6 mM glucose, 1.1 mM sodium pyruvate, 18.5 mM sucrose, 100 IU/ml penicillin, 及 100μg/ml streptomycin)。HEPES培養液在使用前24小時需置於37℃培養箱（含5% CO2 ）中將該pH值調整至7.3-7.4之間。將附睪尾段(cauda epididymis)切成數斷片，並培養於37℃培養液20分鐘，再置於1 ml 75%(v/v) Percoll 梯度溶液，300 xg 離心30分鐘之條件分離出活動力較佳精子，收集沉降的細胞並進行後續[Ca2+ ]i量測。
於體外人工授精實驗， 分離自附睪尾段之精子培養於37℃ HTF 培養液(Merck Millipore)中20分鐘，並稀釋至最終濃度為1×106 精子/ml 用於後續實驗。( 三 ) 測量精子之細胞內自由態鈣離子濃度 ([Ca2+ ]i)
測量未獲能精子細胞內自由態鈣離子濃度([Ca2+ ]i)之改變。並使用一Synergy H1 Hybrid Multi-Mode Microplate Reader (Bio-Tek, Winooski, VT, USA)於37℃。將精子(1×108 細胞/ml)置於含 15 μM Fluo-4 AM 之培養液，Fluo-4 AM係為一種具細胞膜穿透性螢光Ca2+ 指示劑，並於37℃黑暗中培養45分鐘。以室溫下100 xg 離心5分鐘之條件，進行三次離心步驟來移除未攝入細胞之染劑。沉澱的精子懸浮於含1.8 mM CaCl2 之HM培養液，並調整至5×106 細胞/ml。將精子注入96孔洞黑色格盤，每一個孔洞注入100 μl的精子懸浮液；使用Synergy H1 Hybrid Multi-Mode Microplate Reader (Bio-Tek, Winooski, VT, USA)於37℃記錄螢光強度變化，激發光波長為485 nm；發散光波長為520 nm。添加不同濃度之 kisspeptin 10 溶液（0-100 μM）100μl (1:1稀釋)以探討kisspeptin 10對精子細胞內自由態鈣離子濃度變化之影響。該[Ca2+ ]i 之改變量計算公式如 (F'-F0 )/F0 (%)，其中F'係為不同實驗時間點之螢光強度，而該F0 則為在處理kisspeptin 10前(-5~0分鐘)之螢光強度平均值。此外，亦統計[Ca2+ ]i於持續平原期（27~30分鐘）之螢光強度平均變化。( 四 )IVF 試驗
未獲能精子培養於HTF並於獲能反應以peptide 234進行處理，以測其對於授精作用之影響。於控制組中添加0.9%的生理食鹽水用於替代該peptide 234溶液。針對獲能反應階段，將精子(1×106 精子/ml)置於獲能反應條件培養液並加入50μM的peptide234或生理食鹽水於37℃培養箱下培養2小時。接著進行授精階段，添加卵丘-卵母細胞複合體(COCs, cumulus-oocyte complexes)並於37℃下培養6小時。將卵子洗滌三次，再以KSOM + AAs培養液(potassium simples optimized medium plus amino acids，購自 Merk Millipore)培養24小時。授精率之計算為統計卵子發育至兩細胞期之胚胎之比例。
製備卵丘-卵母細胞複合體(COCs)係如下方法：雌鼠以腹腔注射10 IU的孕馬血清促性腺素(PMSG, pregnant mare serum gonadotrophin)及10 IU 的人絨毛膜促性腺素(hCG, human chorionic gonadotropin)(二者皆購自China Chemical & Pharmaceutica, Taipei, Taiwan)，兩藥劑間隔48小時。於HCG注射12-14小時後，自輸卵管取出COCs並培養於HTF中。實驗結果 Kisspeptin 對於精子之細胞內 Ca2+ 濃度之影響
當老鼠精子內存在KISS1R時結果顯示kisspeptin系統於調節精子功能扮演重要角色，因為kisspeptin與[Ca2+ ]i變化程度具相關性。參見第1圖，當以0, 12.5, 25, 50及100μM的kisspeptin 10進行處理時，造成 [Ca2+ ]i增加，其中當kisspeptin 10濃度大於25μM時螢光強度明顯增加，且當分別添加50及100時，該顯示[Ca2+ ]i濃度-依存增加值分別為85.5±14.4%及129.9±24.9%。其結果證明kisspetin藉由釋放細胞內鈣離子而增加[Ca2+ ]i流動性，即當添加濃度大於之短鏈胜肽於精子培養液中，可提升精子細胞內自由態鈣離子濃度上升；而藉由自由態鈣離子濃度上升來提高精子獲能作用之可能，即當添加短鏈胜肽於體外培養液中可進一步提高精子授精之成功率。
雖然，本實驗係以kisspeptin 10進行精子之鈣離子濃度測試，但就本發明所屬技術領域具通常知識者應理解的是，與kisspeptin10具有相同活性之短鏈胜肽即有相同結果，即人類表現型胜肽kisspeptin-54、kisspeptin-14、kisspeptin-13及kisspeptin-10或嚙齒類動物表現型胜肽kisspeptin-52、kisspeptin-14、kisspeptin-13及kisspeptin-10等胜肽被添加短鏈胜肽於體外培養液中可提升精子細胞內自由態鈣離子濃度上升；而藉由自由態鈣離子濃度上升來提高精子獲能作用之可能來進一步提高精子授精之成功率。Kisspeptin 拮抗劑對於精子授精能力之影響
就添加kisspeptin拮抗劑(K1SS1R拮抗劑)peptide234於體外人工授精培養中，其結果可參見第2圖，於第2圖中，相對於控制組之授精成功率大於80%，於經kisspeptin拮抗劑peptide 234處理者授精成功率則降低至60%之下，即代表當有kisspeptin拮抗劑peptide 234存在下，該kisspeptin拮抗劑peptide234會與精子內之kisspeptin結合而阻斷kisspeptin之功能，進而降低精子卵子授精之成功率，亦即即可佐證kisspeptin可提高體外授精之成功率，而人類表現型胜肽kisspeptin-54、kisspeptin-14、kisspeptin-13及kisspeptin-10或嚙齒類動物表現型胜肽kisspeptin-52、kisspeptin-14、kisspeptin-13及kisspeptin-10等胜肽皆可被kisspeptin拮抗劑胜肽234所拮抗，故上述短鏈胜肽即可提高體外授精之成功率。
經由上述實驗結果證明，添加kisspeptin於體外授精之培養液中，可有效提升精子細胞內自由態鈣離子濃度上升，從而提高精子之獲能作用之進行；且於添加kisspeptin拮抗劑胜肽234於體外人工授精培養液中，會降低精子卵子授精成功率，進一步證明該kisspeptin於體外人工授精培養液不可或缺之角色，即添加該kisspeptin 於人工授精培養液中可提高人工授精之成功率。
本發明在上文中已以較佳實施例揭露，然熟習本項技術者應理解的是，該實施例僅用於描繪本發明，而不應解讀為限制本發明之範圍。應注意的是，舉凡與該實施例等效之變化與置換，均應設為涵蓋於本發明之範疇內。因此，本發明之保護範圍當以申請專利範圍所界定者為準。
無
第1圖係為添加不同濃度之短鏈胜肽於精子培養液中，精子細胞內自由鈣離子濃度變化情形。 第2圖係為添加kisspeptin拮抗劑peptide 234 (SEQ ID NO:10)於體外人工授精培養液中，精子卵子授精之成功率。
＜110＞  國立台灣大學 ＜120＞ 一種調控精子授精能力之短鏈胜肽 ＜160＞ 10 ＜210＞1 ＜211＞10 ＜212＞PRT ＜213＞ 人工序列 ＜223＞ 合成胜肽 ＜400＞1 Tyr Asn Trp Asn Ser Phe Gly Leu Arg X  -NH2 1               5                  10 X=Tyr or Phe   ＜210＞ 2 ＜211＞ 10 ＜212＞ PRT ＜400＞ 2 Tyr Asn Trp Asn Ser Phe Gly Leu Arg Phe-NH2 1               5                   10   ＜210＞ 3 ＜211＞ 13 ＜212＞ PRT ＜400＞ 3 Leu Pro Asn Tyr Asn Trp Asn Ser Phe Gly Leu Arg Phe-NH2 1              5                  10     ＜210＞ 4 ＜211＞ 14 ＜212＞ PRT ＜400＞ 4 Asp Leu Pro Asn Tyr Asn Trp Asn Ser Phe Gly Leu Arg Phe-NH2 1                5                   10 ＜210＞ 5 ＜211＞ 54 ＜212＞ PRT ＜400＞ 5 Gly Thr Ser Leu Ser Pro Pro Pro Glu Ser Ser Gly Ser Pro Gln 1              5                   10                  15 Gln Pro Gly Leu Ser Ala Pro His Ser Arg Gln Ile Pro Ala Pro                 20                   25                  30 Gln Gly Ala Val Leu Val Gln Arg Glu Lys Asp Leu Pro Asn Tyr                 35                   40                  45 Asn Trp Asn Ser Phe Gly Leu Arg Phe-NH2 50                         ＜210＞ 6 ＜211＞ 10 ＜212＞ PRT ＜400＞ 6 Tyr Asn Trp Asn Ser Phe Gly Leu Arg Tyr-NH2 1               5                   10     ＜210＞ 7 ＜211＞ 13 ＜212＞ PRT ＜400＞ 7 Leu Ser Thr Tyr Asn Trp Asn Ser Phe Gly Leu Arg Tyr-NH2 1              5                   10     ＜210＞ 8 ＜211＞ 14 ＜212＞ PRT ＜400＞ 8 Asp Leu Ser Thr Tyr Asn Trp Asn Ser Phe Gly Leu Arg Tyr-NH2 1                5                  10       ＜210＞ 9 ＜211＞ 52 ＜212＞ PRT ＜400＞ 9 Ser Ser Pro Cys Pro Pro Val Glu Gly Pro Ala Gly Arg Gln Arg 1               5                   10                  15 Pro Leu Cys Ala Ser Arg Ser Arg Leu Ile Pro Ala Pro Arg Gly                 20                   25                  30 Ala Val Leu Val Gln Arg Glu Lys Asp Leu Ser Thr Tyr Asn Trp                 35                   40                  45 Asn Ser Phe Gly Leu Arg Tyr-NH2 50     ＜210＞ 10 ＜211＞ 10 ＜212＞ PRT ＜400＞ 10 Ac-[(D)-Ala] Asn Trp Asn Gly Phe Gly [(D)-Trp] Arg Phe-NH2 1                 5                        10
無

Claims (7)

  1. 一種調控精子授精能力之短鏈胜肽，該短鏈胜肽係添加於包含精子及卵子的體外培養液，以提高體外人工授精之成功率，其特徵在於： 該短鏈胜肽係包含一氨基酸序列  (SEQ ID NO:1) H-Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg-X-NH2 ，其中X係為Tyr或Phe，而序列末端為醯胺(amide)。
  2. 如請求項第1項所述之短鏈胜肽，其中該短鏈胜肽於添加時之濃度係大於25μM。
  3. 如請求項第2項所述之短鏈胜肽，其中該短鏈胜肽於添加時之濃度範圍係為50μM ~100μM。
  4. 如請求項第2項所述之短鏈胜肽，其中該短鏈胜肽於添加時之濃度係為50μM。
  5. 如請求項第2項所述之短鏈胜肽，其中該短鏈胜肽於添加時之濃度係為100μM。
  6. 如請求項第1項所述之短鏈胜肽，係為人類表現型胜肽kisspeptin-54 (SEQ ID NO:5)、kisspeptin-14 (SEQ ID NO:4)、kisspeptin-13 (SEQ ID NO:3)及kisspeptin-10 (SEQ ID NO:2)。
  7. 如請求項第1項所述之短鏈胜肽，係為嚙齒類動物表現型胜肽kisspeptin-52 (SEQ ID NO:9)、kisspeptin-14 (SEQ ID NO:8)、kisspeptin-13 (SEQ ID NO:7)及kisspeptin-10 (SEQ ID NO:6)。
TW103127557A 2014-08-12 2014-08-12 一種調控精子授精能力短鏈胜肽之提高體外人工授精成功率之用途 TW201605907A (zh)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
TW103127557A TW201605907A (zh) 2014-08-12 2014-08-12 一種調控精子授精能力短鏈胜肽之提高體外人工授精成功率之用途
US14/494,622 US9221873B1 (en) 2014-08-12 2014-09-24 Short-chain peptide capable of controlling spermatozoa fertilization performance

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
TW103127557A TW201605907A (zh) 2014-08-12 2014-08-12 一種調控精子授精能力短鏈胜肽之提高體外人工授精成功率之用途

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW201605907A true TW201605907A (zh) 2016-02-16

Family

ID=54932289

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW103127557A TW201605907A (zh) 2014-08-12 2014-08-12 一種調控精子授精能力短鏈胜肽之提高體外人工授精成功率之用途

Country Status (2)

Country Link
US (1) US9221873B1 (zh)
TW (1) TW201605907A (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10470798B1 (en) 2018-11-30 2019-11-12 Ohana Biosciences, Inc. Methods for promoting fertilization

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2518541C (en) * 2003-03-12 2013-05-21 Takeda Pharmaceutical Company Limited Gonadal function improving agents
CA2562676A1 (en) * 2004-04-23 2005-12-15 Applied Research Systems Ars Holding N.V. Use of gpcr54 ligands for the treatment of infertility

Also Published As

Publication number Publication date
US9221873B1 (en) 2015-12-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Morielli et al. Oxidative stress impairs function and increases redox protein modifications in human spermatozoa
Li et al. Oviduct: roles in fertilization and early embryo development
AU2016310538B2 (en) Culture medium
Sturmey et al. Amino acid metabolism of bovine blastocysts: a biomarker of sex and viability
Gwatkin et al. Receptor activity of the hamster and mouse solubilized zona pellucida before and after the zona reaction
Songsasen et al. In vitro growth and steroidogenesis of dog follicles are influenced by the physical and hormonal microenvironment
EA030000B1 (ru) Способ стимуляции развития зрелого ооцита
WO2019061560A1 (zh) 未成熟卵母细胞的体外成熟培养液及其应用
BR102014006335A2 (pt) células-tronco de polpa dentária imaturas multifuncionais e aplicações terapêuticas
Lilao-Garzón et al. In vivo and in vitro models of diabetes: a focus on pregnancy
WO2014018404A1 (en) Gdf9:bmp15 heterodimers for enhancing fertility
Meier et al. Amino acid concentrations in uterine fluid during early pregnancy differ in fertile and subfertile dairy cow strains
De los Reyes et al. Immunolocalization of proacrosin/acrosin in bovine sperm and sperm penetration through the zona pellucida
TW201605907A (zh) 一種調控精子授精能力短鏈胜肽之提高體外人工授精成功率之用途
Mikhailov Life cycle of decidual cells
Valdivia et al. Immunolocalization of proacrosin/acrosin in rabbit sperm during acrosome reaction and in spermatozoa recovered from the perivitelline space
La Spina et al. Molecular and cellular aspects of mammalian sperm acrosomal exocytosis
Levoux et al. Platelets Promote Pro-Angiogenic Activity of Mesenchymal Stem Cells Via Mitochondrial Transfer and Metabolic Reprogramming
US20110250236A1 (en) Stem cells derived from the carotid body and uses thereof
KR101788968B1 (ko) 안지오텐신 ⅱ 수용체 작용제를 이용한 복수 난포 배양 방법
Sun Effect of Pre-maturation of Immature Oocyte with a C-type Natriuretic Peptide (CNP) on Maturation and Subsequent Embryo Production from Unstimulated Mice
CA3196378A1 (en) Metabolic activators for enhancing sperm capacitation in mammals
Mutluay et al. Relationships between Abelson tyrosine kinase (c-abl) and spindle during meiotic division in mouse oocyte in vitro
Perera ZnT‐1 expression in the preimplantation mouse embryo and its effect on calcium influx
KR20200034630A (ko) Kdm5b 억제제를 유효성분으로 포함하는 남성 피임용 조성물