TW201518279A - 脯胺醯羥化酶抑制劑的晶體形態 - Google Patents

Abstract

本發明涉及[(4-羥基-1-甲基-7-苯氧基-異喹啉-3-羰基)-胺基]-乙酸的結晶固體形態、製備該形態的方法、以及其藥物組成物和使用方法。

Description

脯胺醯羥化酶抑制劑的晶體形態

本發明涉及[(4-羥基-1-甲基-7-苯氧基-異喹啉-3-羰基)-胺基]-乙酸的結晶固體形態、製備該形態的方法，及其藥物組成物和使用方法。

化合物可以以一種或多種晶體形態存在。藥物物質的晶體形態可具有不同的物理屬性，包括熔點、溶解度、溶離率、光學和機械屬性、蒸氣壓、吸濕性、微粒形狀、密度和流動性。這些屬性可對作為藥物產品的化合物加工和/或製造能力具有直接影響。晶體形態也可以表現出不同的穩定性和生體可用率。通常在藥物產品開發期間根據其轉化成另一種晶體形態的最小可能性和其更高的化學穩定性來選出藥物產品的最穩定晶體形態。為了確保藥物產品的品質、安全和效能，重要的是選擇穩定、可再現地製造和具有有利物理化學屬性的晶體形態。

如美國專利號7,323,475中所述，[(4-羥基-1-甲基-7-苯氧基-異喹啉-3-羰基)-胺基]-乙酸(在下文中稱為化合物 A)是低氧誘導因子(HIF)脯胺醯羥化酶的有效抑制劑。HIF脯胺醯羥化酶抑制劑可用於增加HIF的穩定性和/或活性，並且可用於治療和預防與HIF相關的失調等，包括貧血、局部缺血和缺氧。

藉由提供化合物A、鹽和溶劑合物的晶體形態，本發明公開的內容滿足了這些和其他需求。本發明也提供了化合物A的非晶態形態。本發明也提供了包含非晶態或一種或多種晶體形態化合物A的藥物組成物。本發明也提供了用於製造非晶態和結晶固體形態的方法，以及將其用於治療和預防包括涉及貧血、局部缺血和缺氧病症的與HIF相關的失調的方法。

因此，所提供的一個實施態樣為晶體[(4-羥基-1-甲基-7-苯氧基-異喹啉-3-羰基)-胺基]-乙酸(化合物A形態A)，其特徵在於X-射線粉末繞射圖包括以下峰：8.5、16.2和27.4°2θ±0.2°2θ。

所提供的另一個實施態樣為晶體[(4-羥基-1-甲基-7-苯氧基-異喹啉-3-羰基)-胺基]-乙酸半水合物(化合物A形態B)，其特徵在於X-射線粉末繞射圖包括以下峰：4.2、8.3和16.6°2θ±0.2°2θ。

所提供的又一個實施態樣為晶體[(4-羥基-1-甲基-7-苯氧基-異喹啉-3-羰基)-胺基]-乙酸六氟丙-2-醇溶劑合物(化合物A形態C)，其特徵在於X-射線粉末繞射圖包括以下 峰：4.5、13.7和16.4°2θ±0.2°2θ。

所提供的又一個實施態樣為晶體[(4-羥基-1-甲基-7-苯氧基-異喹啉-3-羰基)-胺基]-乙酸DMSO：水溶劑合物(化合物A形態D)，其特徵在於X-射線粉末繞射圖包括以下峰：8.4、8.5和16.8°2θ±0.2°2θ。

所提供的又一個實施態樣為晶體[(4-羥基-1-甲基-7-苯氧基-異喹啉-3-羰基)-胺基]-乙酸鈉鹽(化合物A的鈉鹽)，其特徵在於X-射線粉末繞射圖包括以下峰：5.3、16.0和21.6°2θ±0.2°2θ。

所提供的又一個實施態樣為晶體[(4-羥基-1-甲基-7-苯氧基-異喹啉-3-羰基)-胺基]-乙酸L-精胺酸鹽(化合物A的L-精胺酸鹽)，其特徵在於X-射線粉末繞射圖包括以下峰：20.8、21.8和25.4°2θ±0.2°2θ。

所提供的又一個實施態樣為晶體[(4-羥基-1-甲基-7-苯氧基-異喹啉-3-羰基)-胺基]-乙酸L-離胺酸鹽(化合物A的L-離胺酸鹽)，其特徵在於X-射線粉末繞射圖包括以下峰：19.8、20.7和21.2°2θ±0.2°2θ。

所提供的又一個實施態樣為晶體[(4-羥基-1-甲基-7-苯氧基-異喹啉-3-羰基)-胺基]-乙酸乙醇胺鹽(化合物A的乙醇胺鹽)，其特徵在於X-射線粉末繞射圖包括以下峰：21.8、22.7和27.1°2θ±0.2°2θ。

所提供的又一個實施態樣為晶體[(4-羥基-1-甲基-7-苯氧基-異喹啉-3-羰基)-胺基]-乙酸二乙醇胺鹽(化合物A的二乙醇胺鹽)，其特徵在於X-射線粉末繞射圖包括以下 峰：16.9、23.7和25.0°2θ±0.2°2θ。

所提供的又一個實施態樣為晶體[(4-羥基-1-甲基-7-苯氧基-異喹啉-3-羰基)-胺基]-乙酸三木甲胺鹽(化合物A的三木甲胺鹽)，其特徵在於X-射線粉末繞射圖包括以下峰：10.1、14.2和21.1°2θ±0.2°2θ。

所提供的又一個實施態樣為非晶態[(4-羥基-1-甲基-7-苯氧基-異喹啉-3-羰基)-胺基]-乙酸(非晶態化合物A)。

所提供的又一個實施態樣為實質上非晶態的[(4-羥基-1-甲基-7-苯氧基-異喹啉-3-羰基)-胺基]-乙酸鉀鹽(化合物A的鉀鹽)。

還提供的另一個實施態樣涉及包含晶體或非晶態形態的化合物A或其鹽以及藥用賦形劑的藥物組成物。

另外，本公開在一個實施態樣中提供了用於治療、預處理或延緩至少部分受低氧誘導因子(HIF)介導的病症的發作或惡化的方法。該方法包括給有需要的患者施用治療上有效量的選自下組的通常如上所述的化合物：化合物A形態A、化合物A形態B、化合物A形態C、化合物A形態D、化合物A的鈉鹽、化合物A的L-精胺酸鹽、化合物A的L-離胺酸鹽、化合物A的乙醇胺鹽、化合物A的二乙醇胺鹽、化合物A的三木甲胺鹽、非晶態化合物A、化合物A的鉀鹽。

還提供了用於治療、預處理或延緩至少部分受紅血球生成素(EPO)介導的病症的發作或惡化的方法。該方法包括給有需要的患者施用治療上有效量的選自下組的通常如 上所述的化合物：化合物A形態A、化合物A形態B、化合物A形態C、化合物A形態D、化合物A的鈉鹽、化合物A的L-精胺酸鹽、化合物A的L-離胺酸鹽、化合物A的乙醇胺鹽、化合物A的二乙醇胺鹽、化合物A的三木甲胺鹽、非晶態化合物A、化合物A的鉀鹽。

還提供了用於治療、預處理或延緩貧血症的發作或惡化的方法。該方法包括給有需要的患者施用治療上有效量的選自下組的通常如上所述的化合物：化合物A形態A、化合物A形態B、化合物A形態C、化合物A形態D、化合物A的鈉鹽、化合物A的L-精胺酸鹽、化合物A的L-離胺酸鹽、化合物A的乙醇胺鹽、化合物A的二乙醇胺鹽、化合物A的三木甲胺鹽、非晶態化合物A、化合物A的鉀鹽。

也提供了抑制HIF羥化酶活性的方法。該方法包括將HIF羥化酶與治療上有效量的選自下組的通常如上所述的化合物接觸：化合物A形態A、化合物A形態B、化合物A形態C、化合物A形態D、化合物A的鈉鹽、化合物A的L-精胺酸鹽、化合物A的L-離胺酸鹽、化合物A的L-離胺酸鹽、化合物A的乙醇胺鹽、化合物A的二乙醇胺鹽、化合物A的三木甲胺鹽、非晶態化合物A、化合物A的鉀鹽。

圖1為化合物A形態A的X-射線粉末繞射圖案。

圖2為化合物A形態A的差示掃描量熱(DSC)曲線。

圖3為用化合物A形態A的X-射線粉末繞射圖案(頂部)標繪的化合物A形態B的X-射線粉末繞射圖案(底部)。

圖4為化合物A形態B的熱重分析(TGA)(頂部)和差示掃描量熱(DSC)曲線(底部)。

圖5為用化合物A形態A的X-射線粉末繞射圖案(頂部)標繪的化合物A形態C的X-射線粉末繞射圖案(底部)。

圖6為化合物A形態C的差示掃描量熱(DSC)曲線(頂部)和熱重分析(TGA)(底部)。

圖7為化合物A形態D的X-射線粉末繞射圖案。

圖8為化合物A形態D的熱重分析(TGA)(頂部)和差示掃描量熱(DSC)曲線(底部)。

圖9為分離的(底部)和在40℃/75%RH下(頂部)的化合物A的鈉鹽的X-射線粉末繞射圖案。

圖10為化合物A的鈉鹽的熱重分析(TGA)(頂部)和差示掃描量熱(DSC)曲線(底部)。

圖11為分離的(底部)和在40℃/75%RH下(頂部)的化合物A的L-精胺酸鹽的X-射線粉末繞射圖案。

圖12為化合物A的L-精胺酸鹽的熱重分析(TGA)(頂部)和差示掃描量熱(DSC)曲線(底部)。

圖13為分離的(底部)和在40℃/75%RH下(頂部)的化合物A的L-離胺酸鹽的X-射線粉末繞射圖案。

圖14為化合物A的L-離胺酸鹽的熱重分析(TGA)(頂部)和差示掃描量熱(DSC)曲線(底部)。

圖15為化合物A形態A的X-射線粉末繞射圖案(底部)，分離的化合物A的乙醇胺鹽圖案1(次底部)，在40℃/75%RH下的化合物A的乙醇胺鹽的圖案3(中間)，分離的化合物A的乙醇胺鹽的圖案2(次頂部)和在40℃/75%RH下的化合物A的乙醇胺鹽圖案2(頂部)。

圖16為化合物A的乙醇胺鹽的熱重分析(TGA)(頂部)和差示掃描量熱(DSC)曲線(底部)。

圖17為化合物A形態A的X-射線粉末繞射圖案(底部)，來自丙酮的化合物A的二乙醇胺鹽的圖案1(次底部)，來自THF的化合物A的二乙醇胺鹽的圖案1(次頂部)，和在40℃/75%RH下化合物A的乙醇胺鹽(圖案2，頂部)。

圖18為化合物A的二乙醇胺鹽的熱重分析(TGA)(頂部)和差示掃描量熱(DSC)曲線(底部)。

圖19為化合物A形態A(底部)和分離的(中間)及在40℃/75%RH下(頂部)的化合物A的三木甲胺鹽的X-射線粉末繞射圖案。

圖20為化合物A的三木甲胺鹽的熱重分析(TGA)(頂部)和差示掃描量熱(DSC)曲線(底部)。

圖21為分離的(底部)和在40℃/75%RH下(頂部)的化合物A的鉀鹽的X-射線粉末繞射圖案。

圖22為化合物A的鉀鹽的熱重分析(TGA)(頂部)和 差示掃描量熱(DSC)曲線(底部)。

圖23為非晶態化合物A的X-射線粉末繞射圖案。

圖24為化合物A形態A的熱重分析(TGA)。

圖25為化合物A形態A(底部)和分離的(中間)及在40℃/75%RH下(頂部)的化合物A的鹽酸鹽的X-射線粉末繞射圖案。

圖26為化合物A的鹽酸鹽的熱重分析(TGA)(頂部)和差示掃描量熱(DSC)曲線(底部)。

圖27為化合物形態A(底部)和分離的(中間)及在40℃/75%RH下(頂部)的化合物A的硫酸鹽的X-射線粉末繞射圖案。

圖28為化合物A的硫酸鹽的熱重分析(TGA)(頂部)和差示掃描量熱(DSC)曲線(底部)。

圖29為化合物A形態A的X-射線粉末繞射圖案(底部)，分離的(次底部)和在40℃/75%RH下(中間)的化合物A的甲磺酸鹽的圖案1，以及分離的(次頂部)和在40℃/75%RH下(頂部)的化合物A的甲磺酸鹽的圖案2。

圖30為化合物A的甲磺酸鹽的熱重分析(TGA)(頂部)和差示掃描量熱(DSC)曲線(底部)。

圖31為化合物A形態A(底部)，分離的化合物A的雙三乙胺鹽(中間)和在40℃/75%RH下化合物A的雙三乙胺鹽(頂部)的X-射線粉末繞射圖案。

圖32為化合物A的雙三乙胺鹽的熱重分析(TGA)(頂部)和差示掃描量熱(DSC)曲線(底部)。

圖33為化合物A形態A(底部)以及化合物A的半鈣鹽(次頂部)在40℃/75%RH下(頂部)的X-射線粉末繞射圖案。

圖34為化合物A的半鈣鹽的熱重分析(TGA)(頂部)和差示掃描量熱(DSC)曲線(底部)。

圖35為化合物A形態A(底部)，以及化合物A的半鎂鹽(次頂部)在40℃/75%RH下(頂部)的X-射線粉末繞射圖案。

圖36為化合物A的半鎂鹽的差示掃描量熱(DSC)曲線。

圖37為化合物A形態A的分子結構。

化合物[(4-羥基-1-甲基-7-苯氧基-異喹啉-3-羰基)-胺基]-乙酸(化合物A)為低氧誘導因子(HIF)脯胺醯羥化酶的有效抑制劑並具有下式：

本公開提供了化合物A的晶體形態、化合物A的鹽和化合物A的溶劑合物。本公開也提供了化合物A的非晶態形態。本公開還提供了包含化合物A的非晶態或晶體形態的藥物組成物。本公開還提供了製備非晶態和結晶固體形態的方法和使用其治療和預防包括貧血症、局部缺血和缺氧的與HIF相關的失調的方法。

在進一步詳細討論之前，將定義以下術語。

1. 定義

如此處所用，以下術語具有下面的含義。

單數形式“一個/種(a)”、“一個/種(an)”和“所述(the)”等包括複數指示物，除非上下文另有清楚說明。因此，例如，提到“化合物(a compound)”的引用包括單個化合物和多個不同的化合物。

術語“約”當在包括範圍的數字標號，例如溫度、時間、數量和濃度之前使用時，表示能夠以±10%、±5%或±1%變化的近似值。

術語“溶劑合物”指的是由化合物A和溶劑結合形成的絡合物。

術語“實質上非晶態”和“大多數為非晶態”指的是可能存在少量的晶體化合物A的非晶態化合物A。在一些實施態樣中，晶體化合物A的量小於約10%，或小於約5%，或小於約2%，或小於約1%，或小於約0.2%，或小於約0.1%。

“施用”指的是將藥劑引入患者體內。可以施用治療量，其可以由治療醫生等來決定。對於此處所描述的晶體形態的化合物A，口服給藥途徑係較佳者。相關術語和短語“施用(administrating)”或“施用(administration of)”當與化合物或藥物組成物(和文法上的等同物)聯用時，指的是直接施用和/或間接施用，該直接施用可以藉由醫療專業 人員給患者施用或患者自己施用，該間接施用可以是開藥物處方的行為。例如，醫師指示患者自己施用藥物和/或給患者提供藥物的處方為給患者施用該藥物。無論如何，施用涉及將藥物遞送給患者。

如此處所用的“賦形劑”指的是藥品生產中所用的惰性或非活性物質，包括不限於任何用作黏合劑、崩解劑、包衣、壓縮/包囊助劑、乳劑或洗劑、潤滑劑、胃腸外注射物、甜味劑或調味劑、懸浮/膠凝劑或濕潤造粒劑的物質。黏合劑包括例如卡波姆(carbopol)、聚維酮、黃原膠樹膠等；包衣包括例如鄰苯二甲酸乙酸纖維素、乙基纖維素、結冷膠、麥芽糖糊精等；壓縮/封裝助劑包括例如碳酸鈣、葡萄糖、果糖、蜂蜜、乳糖(脫水或一水合物；隨意地與阿斯巴甜、纖維素或微晶纖維素結合)、澱粉、蔗糖等；崩解劑包括例如交聯甲羧纖維素鈉、結冷膠、羧甲基澱粉鈉等；乳劑或洗劑包括例如麥芽糖糊精、角叉菜膠等；潤滑劑包括例如硬酯酸鎂、硬酯酸、硬脂醯延胡索酸鈉等；用於咀嚼片劑的材料包括例如葡萄糖、果糖、乳糖(一水合物，隨意地與阿巴斯甜或纖維素結合)等；胃腸外注射物包括例如甘露醇、聚維酮等；增塑劑包括例如癸二酸二丁酯、聚乙酸乙烯鄰苯二甲酸酯等；懸浮/膠凝劑包括例如卡拉膠、羧甲基澱粉鈉、黃原膠樹膠等；甜味劑包括例如阿巴斯甜、葡萄糖、果糖、山梨醇、蔗糖等；以及濕潤造粒劑包括例如碳酸鈣、麥芽糊精、微晶纖維素等。

“治療有效量”或“治療量”指的是當施用於患有病症的 患者時的藥物或藥劑的量，其將具有預料的治療效果，例如減輕、改善、緩解或消除患者所患病症的一種或多種臨床表現。治療有效量會取決於下述因素而變化：被治療的個體或病症，個體的重量和年齡，病症的嚴重性，所選的具體組成物或賦形劑，待遵守的劑量給藥方案，給藥時間，給藥方式等，其所有這些因素都可容易地由本領域技術人員確定。總體的治療效果不必藉由施用一個劑量產生，而是可能只在服用一系列劑量後才產生。因此，治療有效量可能以一次或多次給藥來施用。例如但不限於，在治療貧血症的情況下的治療有效數量指的是減輕、改善、緩解或消除患者的一個或多個貧血症狀的藥劑量。

“治療(treatment)”、“治療(treating)”以及“治療(treat)”被定義為用藥劑作用於疾病、失調或病症，以減少或改善所述疾病、失調或病症和/或其症狀的有害或任何其他不期望的作用。此處使用的治療包括對人類患者的治療，並包括：(a)減少患者產生病症的風險，所述患者被確定為傾向患病但還沒有診斷為患有病症，(b)阻止病症的發展，和/或(c)減輕病症，即引起病症的消退和/或減輕病症的一種或多種症狀。

“XRPD圖案”為在x-軸上具有繞射角(即°2θ)並在y-軸上具有強度的x-y圖。這種圖案中的峰可以用於表徵晶體固態形態。在任何數據測量結果的情況下，XRPD數據存在可變性。數據經常唯一地由峰的繞射角來表示，而不包括峰的強度，因為峰的強度可能對樣品的製備特別敏感 (例如，粒徑、水分含量、溶劑含量和較佳的取向效果影響敏感性)，因此在不同條件下製備的相同材料的樣品可能產生略微不同的圖案；這一可變性通常大於繞射角的可變性。繞射角的可變性也可以對樣品的製備敏感。其他可變性的來源來自儀器參數和對原始X-射線數據的處理：不同的X-射線儀器操作使用不同的參數並且這些可能導致與相同的固體形態略微不同的XRPD圖案，並且類似地，不同套裝軟體以不同方式處理X-射線數據並且這也導致可變性。可變性的這些和其他的來源對藥學領域中的技術人員來說是已知的。由於該可變性的來源，通常對XRPD圖案中的繞射角分配±0.2°2θ的可變性。

2. 化合物A的固體形態

通常如上文所述，本公開提供了[(4-羥基-1-甲基-7-苯氧基-異喹啉-3-羰基)-胺基]-乙酸的固體形態。

化合物A形態A的特徵在於，X-射線粉末繞射圖包括處於8.5、16.2和27.4°2θ±0.2°2θ的峰。繞射圖包括處於12.8、21.6和22.9°2θ±0.2°2θ的另外的峰。形態A的特徵還在於，其整個X-射線粉末繞射圖實質上如圖1所示。

在一些實施態樣中，形態A的特徵在於，其差示掃描量熱(DSC)曲線包括於約223℃處的吸熱。形態A的特徵還在於其整個DSC曲線實質上如圖2所示。

化合物A形態B的特徵在於X-射線粉末繞射圖包括 處於4.2、8.3和16.6°2θ±0.2°2θ的峰。繞射圖包括處於12.5、14.1和17.4°2θ±0.2°2θ的另外的峰。形態B的特徵還在於其整個X-射線粉末繞射圖實質上如圖3所示。

在一些實施態樣中，形態B的特徵在於其差示掃描量熱(DSC)曲線包括於約222℃處的吸熱。形態B的特徵還在於其整個DSC曲線實質上如圖4所示。

化合物A形態C的特徵在於X-射線粉末繞射圖包括處於4.5、13.7和16.4°2θ±0.2°2θ的峰。繞射圖包括處於15.4、15.5和20.6°2θ±0.2°2θ的另外的峰。形態C的特徵還在於其整個X-射線粉末繞射圖實質上如圖5所示。

在一些實施態樣中，形態C的特徵在於其差示掃描量熱(DSC)曲線包括於約222℃處的吸熱。形態C的特徵還在於其整個DSC曲線實質上如圖6所示。

化合物A形態D的特徵在於X-射線粉末繞射圖包括處於8.4、8.5和16.8°2θ±0.2°2θ的峰。繞射圖包括處於4.2、12.6和28.4°2θ±0.2°2θ的另外的峰。形態D的特徵還在於其整個X-射線粉末繞射圖實質上如圖7所示。

在一些實施態樣中，形態D的特徵在於其差示掃描量熱(DSC)曲線包括於約222℃處的吸熱。形態D的特徵還在於其整個DSC曲線實質上如圖8所示。

化合物A的鈉鹽的特徵在於X-射線粉末繞射圖包括處於5.3、16.0和21.6°2θ±0.2°2θ的峰。繞射圖包括處於18.7、19.2和24.0°2θ±0.2°2θ另外的峰。化合物A的鈉鹽的特徵還在於其整個X-射線粉末繞射圖實質上如圖9所 示。

在一些實施態樣中，化合物A的鈉鹽的特徵在於其差示掃描量熱(DSC)曲線包括於約314℃處的吸熱。化合物A的鈉鹽的特徵還在於其整個DSC曲線實質上如圖10所示。

化合物A的L-精胺酸鹽的特徵在於X-射線粉末繞射圖包括處於20.8、21.8和25.4°2θ±0.2°2θ的峰。繞射圖包括處於22.7、23.4和26.4°2θ±0.2°2θ另外的峰。化合物A的L-精胺酸鹽的特徵還在於其整個X-射線粉末繞射圖實質上如圖11所示。

在一些實施態樣中，化合物A的L-精胺酸鹽的特徵在於其差示掃描量熱(DSC)曲線包括於約210℃處的吸熱。化合物A的L-精胺酸鹽的特徵還在於其整個DSC曲線實質上如圖12所示。

化合物A的L-離胺酸鹽的特徵在於X-射線粉末繞射圖包括處於19.8、20.7和21.2°2θ±0.2°2θ的峰。繞射圖包括處於10.2、16.9和18.4°2θ±0.2°2θ另外的峰。化合物A的L-離胺酸鹽的特徵還在於其整個X-射線粉末繞射圖實質上如圖13所示。

在一些實施態樣中，化合物A的L-離胺酸鹽的特徵在於其差示掃描量熱(DSC)曲線包括於約237℃處的吸熱。化合物A的L-離胺酸鹽的特徵還在於其整個DSC曲線實質上如圖14所示。

化合物A的乙醇胺鹽的特徵在於X-射線粉末繞射圖 包括處於21.8、22.7和27.1°2θ±0.2°2θ的峰。繞射圖包括處於21.1、26.2和26.6°2θ±0.2°2θ另外的峰。化合物A的乙醇胺鹽的特徵還在於其整個X-射線粉末繞射圖實質上如圖15所示。

在一些實施態樣中，化合物A的乙醇胺鹽的特徵在於其差示掃描量熱(DSC)曲線包括於約171℃處的吸熱。化合物A的乙醇胺鹽的特徵還在於其整個DSC曲線實質上如圖16所示。

化合物A的二乙醇胺鹽的特徵在於X-射線粉末繞射圖包括處於16.9、23.7和25.0°2θ±0.2°2θ的峰。繞射圖包括處於19.6、22.6和26.0°2θ±0.2°2θ另外的峰。化合物A的二乙醇胺鹽的特徵還在於其整個X-射線粉末繞射圖實質上如圖17所示。

在一些實施態樣中，化合物A的二乙醇胺鹽的特徵在於其差示掃描量熱(DSC)曲線包括於約150℃處的吸熱。化合物A的二乙醇胺鹽的特徵還在於其整個DSC曲線實質上如圖18所示。

化合物A的三木甲胺鹽的特徵在於X-射線粉末繞射圖包括處於10.1、14.2和21.1°2θ±0.2°2θ的峰。繞射圖包括處於20.1、25.7和28.4°2θ±0.2°2θ另外的峰。化合物A的三木甲胺鹽的特徵還在於其整個X-射線粉末繞射圖實質上如圖19所示。

在一些實施態樣中，化合物A的三木甲胺鹽的特徵在於其差示掃描量熱(DSC)曲線包括於約176℃處的吸熱。 化合物A的三木甲胺鹽的特徵還在於其整個DSC曲線實質上如圖20所示。

還提供了非晶態[(4-羥基-1-甲基-7-苯氧基-異喹啉-3-羰基)-胺基]-乙酸(非晶態化合物A)和實質上非晶態的[(4-羥基-1-甲基-7-苯氧基-異喹啉-3-羰基)-胺基]-乙酸鉀鹽(化合物A的鉀鹽)。實質上非晶態的化合物A的鉀鹽的特徵在於其差示掃描量熱(DSC)曲線包括於約291℃處的吸熱(圖22)。

如下文實施例所述，形態A是化合物A形態B、C和D中最穩定的晶體形態。

3. 藥物組成物、製劑和給藥途徑

在一個態樣中，本公開涉及一種藥物組成物，其包含具有下面結構的[(4-羥基-1-甲基-7-苯氧基-異喹啉-3-羰基)-胺基]-乙酸(化合物A)或其鹽的一種或多種晶體形態和至少一種藥用賦形劑：

在一個實施態樣中，該藥物組成物包含選自下組的化合物：通常如上文所述的化合物A形態A、化合物A形態B、化合物A形態C、化合物A形態D、化合物A的鈉鹽、化合物A的L-精胺酸鹽、化合物A的L-離胺酸鹽、化合物A的乙醇胺鹽、化合物A的二乙醇胺鹽、化 合物A的三木甲胺鹽、非晶態化合物A和化合物A的鉀鹽，和至少一種藥用賦形劑。

在一個實施態樣中，藥物組成物包含形態A的化合物A。在一個實施態樣中，藥物組成物包含化合物A，其中至少約85%的化合物A為形態A。在一個實施態樣中，藥物組成物包含化合物A，其中至少約90%的化合物A為形態A。在一個實施態樣中，藥物組成物包含化合物A，其中至少約95%的化合物A為形態A。在一個實施態樣中，藥物組成物包含化合物A，其中至少約99%的化合物A為形態A。在一個實施態樣中，藥物組成物包含化合物A，其中至少約99.5%的化合物A為形態A。在一個實施態樣中，藥物組成物包含化合物A，其中至少約99.9%的化合物A為形態A。在一個實施態樣中，藥物組成物包含化合物A，其中至少約99.99%的化合物A為形態A。

在一個實施態樣中，藥物組成物還包含選自下組的其他治療劑：維生素B12、葉酸、硫酸亞鐵、重組人類紅血球生成素和紅血球生成刺激劑(ESA)。在另一個實施態樣中，藥物組成物經配製用於口服遞送。在另一個實施態樣中，將藥物組成物配製為片劑或膠囊。

本公開的晶體形態可以被直接或採取與合適的賦形劑一起以藥物組成物的形式遞送，這在本領域中是熟知的。此處所體現的各種治療方法可以包括向有需要的個體施用有效量的本公開的晶體形態，例如，由於例如慢性腎衰竭、糖尿病、癌症、AIDS、放射治療、化療、腎透析或 外科手術而患有或處於貧血症風險的個體。在一個實施態樣中，所述個體為哺乳動物個體，而在一個實施態樣中，所述個體為人類個體。

晶體形態的有效量可容易地由常規試驗確定，如同最有效和最方便的給藥途徑和最合適的配方一樣。在一個實施態樣中，劑量可以為從每天0.05 mg/kg至約700 mg/kg。通常，劑量可以為從約0.1 mg/kg至約500 mg/kg；從約0.5 mg/kg至約250 mg/kg；從約1 mg/kg至約100 mg/kg；從約1 mg/kg至約10 mg/kg；從約1 mg/kg至約5 mg/kg；或從約1 mg/kg至約2 mg/kg。例如，劑量可以為約1.0 mg/kg；約1.2 mg/kg；約1.5 mg/kg；約2.0 mg/kg；或約2.5 mg/kg。各種配方和藥物遞送系統在本領域中是可獲得的(參見，例如Gennaro,A.R.,ed.(1995)Remington’s Pharmaceutical Sciences(雷明頓藥物學))。

合適的給藥途徑可以例如包括口服、直腸、透黏膜、鼻內或小腸給藥，以及胃腸外遞送包括肌肉內注射、皮下注射、髓內注射以及鞘內注射、直接心室內注射、靜脈注射、腹膜內注射、鼻內或眼內注射。晶體形態或其組成物可以以局部而不是全身的方式施用。例如，晶體形態或其組成物可以經由注射或以靶向藥物遞送系統，比如長效(depot)配方或緩釋放配方來輸送。在一個實施態樣中，給藥途徑為口服。

本公開的藥物組成物可以藉由任何本領域熟知的任何方法來製造，比如藉由常規混合、溶解、粒化、糖衣丸製 造、磨細、乳化、封裝、包載(entrapping)或凍乾處理。如上所指出的，組成物可包含一種或多種藥用賦形劑，其有助於將活性分子加工成藥物用途的製劑。

合適的製劑取決於選擇的給藥途徑。對於注射，例如，可以將組成物配製於水溶液中、較佳為生理上相容的緩衝液中，比如Hanks溶液、林格氏溶液或生理鹽水緩衝液。對於透黏膜或鼻內給藥，將適用於待滲透的屏障的滲透劑用於所述配方中。這種滲透劑在本領域通常是已知的。在本公開的較佳實施態樣中，將本晶體形態製備成用於口服給藥的配方。對於口服給藥，其可以容易地藉由將晶體形態與本領域熟知的藥用賦形劑組合來配製。這類賦形劑使得本公開的晶體形態能配製成片劑、丸劑、糖衣丸、膠囊、液體、凝膠、糖漿、料漿、懸浮劑等，用於個體的口服攝入。也可以將晶體形態配製成直腸組成物，比如栓劑或保留灌腸劑，例如包含常規栓劑基質如可可脂或其他甘油酯栓劑。

使用固體賦形劑，隨意地，如果需要，在加入合適的助劑後，研磨所得的混合物，並加工顆粒混合物，以獲得片劑或糖衣丸核心，可以製得口服使用的藥物製劑。合適的賦形劑例如為填料如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇；纖維素製劑，比如，例如玉米澱粉、小麥澱粉、大米澱粉、馬鈴薯澱粉、明膠、黃蓍膠、甲基纖維素、羥丙甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、微晶纖維素和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP或聚維酮)。如果需要，可以添加崩解劑， 如交聯聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂、交聯羧甲纖維素鈉或海藻酸或其鹽，比如海藻酸鈉等。還可以包括潤濕劑如十二烷基硫酸鈉或潤滑劑如硬脂酸鎂。

為糖衣丸核心提供有合適的包衣。出於這個目的，可以使用濃縮的糖溶液，其可以任選地包含阿拉伯樹膠、滑石、聚乙烯基吡咯烷酮、卡波姆凝膠、聚乙二醇和/或二氧化鈦、漆溶液和合適的有機溶劑或溶劑混合物。可以將染料或顏料添加到片劑或糖衣丸包衣，用於識別或描述不同組合的活性劑量。

用於口服給藥的藥物製劑包括由明膠製成的推合式膠囊(push-fit capsule)，以及由明膠和增塑劑製成的軟密封膠囊，如甘油或山梨糖醇。推合式膠囊可以包含活性成分，其摻加有填充劑如乳糖，黏合劑如澱粉，和/或潤滑劑如滑石或硬脂酸鎂，且隨意地穩定劑。在軟膠囊中，可以將晶體形態溶解或懸浮在合適的液體中，如脂肪油、液體石蠟或液體聚乙烯乙二醇。此外，可以添加穩定劑。所有口服給藥的製劑都應該採用適合這類給藥的劑量。

在一個實施態樣中，此處所述的結晶形態可以透過透皮地如透過皮膚貼劑施用或局部施用。在一個態樣，透皮或局部製劑還可以包含一種或多種滲透增強劑或其他效應物，包括提高遞送的化合物的遷移的試劑。透皮或局部給藥會是較佳的，例如，在需要定位遞送的情況下。

對於藉由吸入給藥，以來自加壓包或噴霧器的氣溶膠噴霧呈遞的形式，使用合適的推進劑，例如二氯二氟甲 烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或任何其他合適的氣體，便利地遞送本公開所用的晶體形態。對於加壓氣溶膠的情況，可以藉由提供一個閥以遞送計量的數量來確定適當的劑量單位。可以配置用於吸入器或吹藥器中的例如明膠膠囊和藥盒。這些通常包含晶體形態與合適的粉末基底如乳糖或澱粉的粉末混合物。

經配製用於藉由注射胃腸外給藥的組成物，例如藉由快速濃注或連續輸注，可以以單位劑型，例如在安瓿瓶或多劑量容器中，同時添加防腐劑來呈現。該組成物可以採取如懸浮液、溶液或在油性或水性載體中的乳劑的形式，並可以包含配製劑，如懸浮劑、穩定劑和/或分散劑。胃腸外給藥配方包括水溶液或水溶性形式的其他組成物。

晶體形態的懸浮劑也可以製備成適當的油性注射懸浮劑液。合適的親脂性溶劑或載體包括脂肪油如芝麻油和合成脂肪酸酯如油酸乙酯或甘油三酯或脂質體。含水注射懸浮劑可包含增加懸浮劑黏度的物質，如羧甲基纖維素鈉、山梨糖醇或葡聚糖。隨意地，懸浮劑還可包含合適的穩定劑或增加晶體形態溶解度的物質，以容許製備高濃縮溶液。或者，活性成分可以採用粉末形式，供在使用之前用合適載體例如無菌無熱原質水重組還原。

正如上面提到的，還可以將目前公開的組成配製為長效(depot)配方。這類長效配方可以藉由植入(例如，皮下或肌肉內注射)或藉由肌肉內注射來施用。因此，例如目前的晶體形態可以與合適的聚合物或疏水材料(例如作為 在可接受的油中的乳液)或離子交換樹脂，或作為難溶性衍生物，例如作為難溶性鹽來配製。

對於用於在此體現的各種治療方法中的任何組成物，可以使用本領域已知的各種技術初步估計治療有效劑量。例如，在細胞培養測定中，可以在動物模型中配製劑量，以獲得一個循環的濃度範圍，其包括在細胞培養中所確定的IC₅₀。例如，使用從細胞培養分析和非人類的動物研究中獲得的數據，可以確定適合人類個體的劑量範圍。在一個實施態樣中，定期施用的劑量可以為從0.05 mg/kg至約700 mg/kg。施用的劑量可以為一天一次，每隔一天一次，一個星期一、二、三次，或其他適當的間隔，這可以容易地由有能力的醫療從業者確定。通常，所施用的劑量是一個星期2或3次。通常，劑量可以為從約0.1 mg/kg至約500 mg/kg；從約0.5 mg/kg至約250 mg/kg；從約1 mg/kg至約100 mg/kg；從約1 mg/kg至約10 mg/kg；從約1 mg/kg至約5 mg/kg；或從約1 mg/kg至約2 mg/kg。例如，劑量可以為約1.0 mg/kg；約1.2 mg/kg；約1.5 mg/kg；約2.0 mg/kg；或約2.5 mg/kg。

化合物的治療有效劑量指的是導致個體的症狀改善或生存延長的化合物的量。該分子的毒性和治療功效可以由在細胞培養或實驗動物中藉由標準製藥過程確定，例如，藉由確定LD₅₀(對50%群體致死的劑量)和ED₅₀(在50%的群體中治療有效的劑量)。毒性與治療效果的劑量比率是治療指數，其可以表示為LD₅₀/ED₅₀比率。表現出高治療 指數的化合物為較佳者。

較佳地，劑量落入包括ED₅₀的具有較小或沒有毒性的循環濃度範圍內。劑量可以在該範圍內變化，這取決於採用的劑型和使用的給藥途徑。應根據本領域已知的方法，針對個體病症的特性，選擇準確的配方、給藥途徑和劑量。

可以單獨調整劑量和間隔，以提供足以調節所需的參數的活性部分血漿水準，如內源性紅血球生成素血漿水準，即最小有效濃度(MEC)。MEC會因每個化合物而改變，但可以由例如體外數據估計。獲得MEC需要的劑量會取決於個體特徵和給藥途徑。應當使用維持血漿水準高於MEC約10-90%的治療持續時間，較佳為約30-90%的治療持續時間、且最佳為介於50-90%的治療持續時間的治療方案，施用化合物或其組成物。在局部給藥或選擇性吸收的情況下，藥物的有效局部濃度可能不與血漿濃度相關。或者，對所需參數的調節，例如刺激內源性紅血球生成素，可能藉由以下方式實現：1)施用負荷劑量，隨後施用維持劑量，2)施用誘導劑量以在目標範圍內迅速達到所需的參數，如紅血球生成素水準，隨後施用低維持劑量來將例如血細胞容積率保持在所需的目標範圍內，或3)重複間歇劑量給藥。

所施用的化合物或組成物的量當然將取決於多種因素，包括被治療個體的性別、年齡和體重，痛苦的嚴重程度，給藥方式和處方醫生的判斷。

如果需要，可以將本發明的組成物呈現於含有一個或多個單位劑型的包裝或分配器裝置中，所述單位劑型包含包含活性成分。這類包或裝置可以例如包含金屬或塑膠箔，如泡殼包裝。所述包裝或分配器裝置可以伴有使用說明書。也可以將包含在可相容的藥物賦形劑中配製的本公開的晶體形態的組成物製備或放置在合適的容器中並標記，用於治療所示病症。在標籤上標示的合適的病症可包括治療病症、失調或疾病，其中貧血是一個主要的適應症。

4. 使用方法

本公開的一個態樣提供了一種或多種晶體或非晶態[(4-羥基-1-甲基-7-苯氧基-異喹啉-3-羰基)-胺基]-乙酸(化合物A)或包含一種或多種晶體或非晶形態的化合物A或其溶劑合物或鹽的組成物，在製造用於治療此處所述的各種病症或失調的藥物中的用途。其還提供了使用晶體或非晶態形態或其組成物或藥物來治療、預處理或延遲本文所述的各種病症或失調的惡化或發作的方法。在一個實施態樣中，該方法所用的化合物A的晶體形態為形態A。在一個實施態樣中，該方法所用的化合物A的晶體形態為形態B、形態C或形態D。如這一節“使用方法”和相應的方法請求項中所使用，“化合物”指的是晶體或非晶體形態的化合物A或其溶劑合物或鹽。

在一個實施態樣中，該方法所用的至少約85%的化合 物為化合物A形態A。在一個實施態樣中，該方法所用的至少約90%的化合物為化合物A形態A。在一個實施態樣中，該方法所用的至少約95%的化合物為化合物A形態A。在一個實施態樣中，該方法所用的至少約99%的化合物為化合物A形態A。在一個實施態樣中，該方法所用的至少約99.5%的化合物為化合物A形態A。在一個實施態樣中，該方法所用的至少約99.99%的化合物為化合物A形態A。

藥物或組成物可以用來調節HIF的穩定性和/或活性，由此啟動HIF調節的基因表現。該晶體或非晶形態或其組成物或藥物，可用於方法中，以治療、預處理、或延緩與HIF相關的疾病的惡化或發作，包括但不限於貧血、缺血和缺氧病症。在各種實施態樣中，在病症產生急性缺血，如心肌梗死、肺栓塞、腸梗塞、缺血性中風和腎缺血再灌注損傷之後，立即施用該晶體或非晶形態或其組成物或藥物。在另一個實施態樣中，將該晶體或非晶形態或其組成物或藥物施用於患者，該患者被診斷出患有與慢性缺血的發展相關的病症，例如心源性肝硬化、黃斑變性、肺栓塞、急性呼吸衰竭、新生兒呼吸窘迫綜合征以及充血性心力衰竭。在另一實施態樣中，在創傷或受傷後立即施用該晶體或非晶形態或其組成物或藥物。在其他實施態樣中，基於先兆病症，例如高血壓、糖尿病、動脈閉塞性疾病、慢性靜脈功能不全、雷諾氏病、慢性皮膚潰瘍、肝硬化、充血性心力衰竭和系統性硬化症，將該晶體或非晶形 態或其組成物或藥物施用於個體。在其他實施態樣中，可以施用該晶體或非晶形態或其組成物或藥物，以預處理個體來降低或預防與局部缺血或缺氧有關的組織損傷的發展。

該晶體或非晶形態或其組成物或藥物也可以用來增加內源性紅血球生成素(EPO)。可以施用該晶體或非晶形態或其組成物或藥物，以預防、預處理或治療EPO相關病症，包括例如與貧血和神經系統失調相關的病症。與貧血相關的病症包括諸如急性或慢性腎臟疾病的失調，糖尿病、癌症、潰瘍，病毒例如HIV、細菌或寄生蟲感染；炎症等。貧血病症還可以包括與程式或治療相關的那些病症，包括例如放射治療、化療、透析和外科手術。與貧血相關的失調還包括異常血紅蛋白和/或紅血球，如在諸如小紅血球貧血、血蛋白過少的貧血、再生障礙性貧血等失調中發現的。

本公開還涉及使用晶體或非晶形態或其組成物或藥物來治療、預處理或推遲與選自下組的失調相關的病症的發作：貧血性失調症；神經系統失調和/或損傷，包括中風、創傷、癲癇，和神經變性疾病；心肌缺血，包括但不限於心肌梗塞和充血性心力衰竭；肝缺血包括但不限於心源性肝硬化；腎缺血，包括但不限於急性腎衰竭和慢性腎衰竭；外周血管失調、潰瘍、燒傷和慢性傷口；肺栓塞；和缺血再灌注損傷。

本公開也涉及抑制至少一種修飾缺氧誘導因子α亞單 位的羥化酶的活性的方法。HIF的羥化酶可以是脯胺醯羥化酶，其包括但不限於EGLN1、EGLN2和EGLN3(也分別稱為PHD2、PHD1和PHD3)，並由Taylor(2001，Gene 275：125-132)作了描述，由Aravind and Koonin(2001,Genome Biol 2：RESEARCH0007)、Epstein et al.(2001,Cell 107：43-54)以及Bruick and McKnight(2001,Science 294：1337-1340)進行了表徵。該方法包括使所述酶與抑制有效量的一種或多種化合物A的晶體或非晶形態接觸。在一些實施態樣中，HIF羥化酶是天冬醯胺醯羥化酶或脯胺醯羥化酶。在其他實施態樣中，HIF羥化酶是抑制HIF的因子、人類EGLN1、EGLN2或EGLN3。

雖然已結合具體實施態樣和實施例而對本公開進行了描述，但鑒於所述技術和本公開，對於本領域技術人員顯而易見的是，所具體公開的材料和方法的等效物也適用於本公開；並且旨在將這類等效物包括在所附申請專利範圍的範圍內。

實施例

除非另有說明，整個說明書所用的下列縮略語具有以下定義：

X-射線粉末繞射(XRPD)

使用銅(Cu)Kα輻射(40kV,40 mA)、自動XYZ階段、用於自動樣品定位的鐳射視頻顯微鏡和HiStar二維區域檢測器，在Bruker AXS C2 GADDS繞射儀上採集X-射線粉末繞射圖案。X射線光學器件由連接有0.3 mm的針孔 準直器的單個Gobel多層鏡構成。使用認證標準NIST 1976剛玉(Corundum)(平板)進行每週性能檢查。

光束發散度，即在樣品上的X射線束的有效尺寸，為約4 mm。採用θ-θ連續掃描模式，其具有20 cm的樣品-探測器距離，該距離提供了3.2°-29.7°的有效2θ範圍。通常，會將樣品暴露於x射線光束下達120秒。用於數據收集的軟體為WNT4.1.16的GADDS，且使用DiffracPlusEVA v11.0.0.2或v13.0.0.2分析和呈現數據。

或者，使用銅Kα輻射(40 kV，40 mA)、θ-2θ測角儀和V4發散和接收狹縫、鍺(Ge)單色儀和Lynxeye檢測器，在Bruker D8繞射儀上採集X射線粉末繞射圖案。使用認證的剛玉(Corundum)標準(NIST 1976)檢查儀器的性能。用於數據收集的軟體是DiffracPlusXRD Commander v2.5.0，且使用DiffracPlus EVA v11.0.0.2或v13.0.0.2分析並呈現數據。

使用所接收的粉末，樣品在環境條件下作為平板標本運行。將樣品輕輕裝填在被切成拋光、零背景(510)矽片的腔中。在分析時，樣品在其自身的平面中轉動。數據收集的詳情是：‧角範圍：2至42°2θ

‧步長(step size)：0.05°2θ

‧收集時間：0.5 s/步

‧分析持續時間：7min

差示掃描量熱法(DSC)

將在配有50-位自動取樣器的TA儀器Q2000上收集DSC。使用藍寶石進行熱容量的校準，且使用合格的銦進行能量和溫度校準。通常，將0.5-3 mg每一樣品在銷孔鋁鍋內以10℃/min從25℃被加熱到300℃。在樣品上以50 ml/min保持乾燥氮氣的吹洗。使用2℃/min基礎加熱速度和每隔60秒(週期)的±0.318℃(振幅)的溫度調節參數，進行調節溫度的DSC。儀器控制軟體為Q系列的Advantage v2.8.0.392和Thermal Advantage v4.8.3，並使用Universal Analysis v4.4A分析數據。

或者，將在配有34-位自動取樣器的Mettler DSC 823 e上收集DSC數據。使用合格的銦校準儀器的能量和溫度。通常，將0.5-3 mg每一樣品，在銷孔的鋁鍋內以10℃/min從25℃加熱到300℃或從25℃到320℃。在樣品上以50 ml/min保持氮氣的吹洗。儀器控制和數據分析軟體為STARe v9.20。

熱重分析(TGA)

在配有34-位自動取樣器的Mettler TGNSDT A 851 e上收集TGA數據。使用合格的銦對儀器進行溫度校準。通常，將1-30 mg每一樣品載入到預先稱量好的鋁坩堝上，並以10℃/min從環境溫度加熱到350℃。在樣品上以50 ml/min保持氮氣的吹洗。儀器控制和數據分析軟體為STARe v9.20。

實施例1. 化合物A形態A的製備 方法

藉由以下方法製備晶體[(4-羥基-1-甲基-7-苯氧基-異喹啉-3-羰基)-胺基]-乙酸(化合物A形態A)。

方法I

晶體化合物A形態A(參見實施例1，方法I)用於這種方法。使用15 mg的晶體材料，同時以增量添加每種溶劑，直到獲得乾淨的溶液或直到添加50體積(750 μL)的溶劑。在添加每種溶劑後，對樣品進行超音波處理5秒。當不溶時，將料漿在25℃和50℃之間(在每個溫度為4 h)以500 rpm攪拌從16個小時至六天的時間。然後使所得的任何溶液在室溫下蒸發。藉由XRPD分析從這個實驗獲得的固體。

用於上述方法I的每種下述溶劑提供了形態A：乙酸、丙酮、苯乙酮、苄腈、苯甲醇、丁腈、氯苯、環己酮、1,2-二氯苯、1,2-二氯乙烷、二甲氧基乙烷、二甲基乙醯胺、DMSO、1,4-二噁烷、乙二醇、EtoAc、甲醯胺、六氟苯、己烷、IPA、IPA：10%水、iPrOAc、MeCN、MEK、MIBK、硝基甲烷、全氟己烷、丙腈、環丁碸、三級丁基甲基醚、三級丁醇、四氫化萘、THF和甲苯。

使用方法I，六氟丙-2-醇、甲醇和乙醇並未提供形態A。

方法II

將晶體化合物A形態A(參見實施例1，方法VIII)用於這種方法中。使用15 mg的晶體材料和30體積(450 μL)溶劑，例外是使用5體積的DMSO和DMA。將料漿超音波處理5秒。將料漿在5℃以500 rpm攪拌六天時間。然後使所得的任何溶液被在室溫下蒸發。藉由XRPD行獲得的固體。

用於上述方法II的下述每種溶劑提供了形態A：苄腈、環丁碸、甲醯胺、四氫化萘、苯乙酮、苯甲醇、乙二醇、1,2-二氯苯、氯苯、環己酮、丁腈、乙酸、硝基甲烷、丙腈、二甲氧基乙烷、1,2-二氯乙烷、六氟苯、三級丁醇、己烷和全氟己烷。

使用方法II，六氟丙-2-醇並未提供形態A。

方法III

晶體化合物A形態A(參見實施例1，方法VIII)用於這種方法。方法3實質上如上文的方法II所述，除了將料漿在50℃以500 rpm攪拌六天的時間之外。獲得的固體藉由XRPD進行分析。

用於上述方法3的下述每種溶劑提供了形態A：苄腈、環丁碸、甲醯胺、四氫化萘、苯乙酮、苯甲醇、乙二醇、1,2-二氯苯、氯苯、環己酮、丁腈、乙酸、硝基甲烷、丙腈、二甲氧基乙烷、1,2-二氯乙烷、六氟苯、三級 丁醇、己烷和全氟己烷。

使用方法III，二甲基乙醯胺、三級丁基甲基醚和六氟丙-2-醇並未提供形態A。

方法IV

晶體化合物A形態B(參見實施例2)用於這種方法。使用15 mg的晶體材料和30體積(450 μL)溶劑，例外是使用5體積的DMSO和DMA。將料漿超音波處理5秒。將料漿以500 rpm在25℃和50℃之間循環下(在每個溫度下為4小時)攪拌六天。然後靜置所得的任何溶液，以在室溫下快速蒸發。固體藉由XRPD進行分析。

用於上述方法IV的下述每種溶劑提供了形態A：苄腈、環丁碸、甲醯胺、四氫化萘、苯乙酮、苯甲醇、乙二醇、1,2-二氯苯、氯苯、環己酮、丁腈、乙酸、三級丁基甲基醚、硝基甲烷、丙腈、二甲氧基乙烷、1,2-二氯乙烷、六氟苯、三級丁醇、己烷、全氟己烷和六氟丙-2-醇。

方法V

晶體化合物A形態A(參見實施例1，方法VIII)用於這種方法。在添加10體積(200 μL)的溶劑之前，將20 mg的水晶材料溶解在四氫呋喃(410 μL)中，例外是使用5體積的DMSO和DMA。將料漿以500 rpm在25℃和50℃之間循環下(在每個溫度下為4小時)攪拌48小時。使在熱/ 冷循環之後獲得的任何溶液在室溫下蒸發。獲得的固體藉由XRPD進行分析。

用於上述方法V的下述每種溶劑提供了形態A：苄腈、環丁碸、甲醯胺、四氫化萘、苯乙酮、苯甲醇、乙二醇、DMSO、1,2-二氯苯、氯苯、環己酮、丁腈、乙酸、三級丁基甲基醚、丙腈、二甲氧基乙烷、1,2-二氯乙烷、六氟苯、三級丁醇和己烷。

使用方法V，硝基甲烷、六氟丙-2-醇和全氟己烷並未提供形態A。

方法VI

將晶體化合物A形態A(30 mg，參見實施例1，方法VIII)溶解在10 mL的丙酮中。將該溶液在旋轉蒸發器(40℃，35-50 Torr)上進行快速溶劑蒸發。將12.85 mg所得材料與10體積(128.5 μL)的溶劑一起使用，例外是使用5體積的DMSO和DMA。將料漿進行超音波處理5秒。將料漿以500 rpm在25℃和50℃之間(8小時循環)攪拌6天時間。然後使任何所得溶液在室溫下蒸發。獲得的固體藉由XRPD進行分析。

用於上述方法VI的下述每種溶劑提供了形態A：苄腈、環丁碸、甲醯胺、四氫化萘、苯乙酮、苯甲醇、乙二醇、DMSO、1,2-二氯苯、氯苯、丁腈、乙酸、三級丁基甲基醚、硝基甲烷、丙腈、二甲氧基乙烷、1,2-二氯乙烷、六氟苯、三級丁醇和己烷。

使用方法VI，環己酮、六氟丙-2-醇和全氟己烷並未提供形態A。

方法VII

晶體化合物A形態A(參見實施例1，方法VIII)用於這種方法。將30 mg懸浮在7體積的溶劑(10%含水)中。將料漿超音波處理5秒。將料漿以500 rpm在25℃和50℃之間循環下(8小時循環)攪拌4天時間。獲得的固體藉由XRPD進行分析。

用於上述方法VII的下述每種溶劑提供了形態A：丙酮、乙腈、乙醇、甲醇、2-甲基-四氫呋喃和異丙醇。

方法VIII

將氫氧化鈉水溶液在一溫度範圍內(10℃至90℃)慢慢添加至化合物A在水中的攪拌的懸浮液。然後將乙酸水溶液在一溫度範圍內(10℃至90℃)慢慢加入並攪拌混合物。過濾固體，水洗，並在真空下乾燥至恆定重量。獲得了白色至淡黃色結晶固體化合物A形態A。

數據

化合物A形態A的XRPD圖案如圖1所示，且在XRPD圖案中的峰和其相關強度如下面的表1所示。

化合物A形態A的差示掃描量熱法和熱重分析的結果分別如圖2和24所示。熱重分析顯示了在25℃和225℃之間可忽略的約0.4%的重量損失，隨後在225℃以上是一個穩定的重量損失，表明材料在這些溫度下的昇華或分解(圖24)。化合物A形態A的差示掃描量熱法分析顯示了在約80-190℃的範圍內非常淺的放熱線，隨後是一個在約224.3℃的急劇吸熱線(最大峰值)。急劇吸熱線對應於材料融化，如藉由熱台顯微鏡(hotstage microscopy)所確定的。

化合物A形態A的熱台顯微鏡顯示低於其熔點的材 料的較小變化。在約150-200℃的範圍內記錄了雙折射中的一些變化。樣品在約218.5-222.4℃的溫度範圍內融化。

化合物A形態A的水分吸附數據顯示了可忽略的重量增加，獲得了約0.2%介於5%至95%之間的相對濕度的重量增加，其在脫附時就損失。化合物A形態A的較小水分吸附表示動力非吸水材料。

實施例2. 化合物A形態B的製備 方法

在1,4-二噁烷：水(2：1)的混合物中藉由凍乾形態A提供晶體化合物A形態B。將20 mg晶體化合物A形態B溶解在20體積的1,4-二噁烷中，之後添加20體積的助溶劑。使溶劑系統在通風櫥中於室溫下蒸發。從這個實驗獲得的固體藉由XRPD進行分析。

用於上述方法的下述每種助溶劑提供了形態B。1,4-二噁烷：水(1：1)、1,4-二噁烷：水(1：1)、1,4-二噁烷：甲醇(1：1)、1,4-二噁烷：乙醇、1,4-二噁烷：丙酮(1：1)、1,4-二噁烷：四氫呋喃(1：1)和1,4-二噁烷：庚烷(1：1)。

數據

化合物A形態B的XRPD圖案如圖3所示，且在XRPD圖案中的峰值及其相關強度如下面的表2所示。在樣品在25℃/96% RH下儲存12天後，晶體圖案發生變 化，返回至形態A。

除了水，沒有觀察到殘留溶劑。在室溫和90℃之間在TGA熱譜中2.8% w/w的重量損失表明存在0.5當量的水(理論的2.5% w/w)(圖4)。DSC熱譜顯示了與重量損失相關的吸熱事件(圖4)。一個強烈吸熱事件發生在222.3℃(-127.8 J/g)，其與形態A的融化匹配。

採集超過一個月的高解析度XRPD數據。在處於環境溫度的整一個月後(32天)，樣品(形態B)幾乎完全恢復到無水形態A。

實施例3. 化合物A形態C的製備 方法

遵循在實施例1的方法I、II、III和IV中所述的步驟，使用六氟丙-2-醇作為溶劑，製備晶體[(4-羥基-1-甲基-7-苯氧基-異喹啉-3-羰基)-胺基]-乙酸六氟丙-2-醇溶劑合物(化合物A形態C)。

數據

化合物A形態C的XRPD圖案C如圖5所示，且在XRPD圖案中的峰值及其相關強度如下面的表3所示。

藉由質子核磁共振觀察殘留溶劑，且將其確定為六氟丙-2-醇。還對該樣品上進行了熱分析(圖6)。在室溫和130℃之間在TGA熱譜中7.8% w/w的重量損失，表明樣品中存在1/6當量的六氟丙-2-醇(理論的7.36% w/w)。DSC熱譜顯示了與重量損失相關的吸熱事件，隨後為小的放熱事件(ca.130℃)(圖6)。強烈的吸熱事件發生在222.2℃(-17.9 J/g)，其與形態A的融化匹配。總之，六氟丙-2-醇分離的材料在環境條件下為亞穩定的溶劑合物並轉化成形態A。

實施例4. 化合物A形態D的製備 方法

由多數為非晶態化合物A或形態A的THF/DMSO(20 體積THF/5體積DMSO)的緩慢蒸發，製備晶體[(4-羥基-1-甲基-7-苯氧基-異喹啉-3-羰基)-胺基]-乙酸DMSO：水溶劑合物(化合物A形態D)。

數據

化合物A形態D的XRPD圖案如圖8所示，且在XRPD圖案中的峰值及其相關強度如下面的表4所示。當在環境溫度下乾燥時，樣品(形態D)轉化成形態A。

藉由質子核磁共振觀察到殘留溶劑，且將其確定為DMSO。TGA熱譜和DSC熱譜如圖8所示。TGA在40-150℃之間顯示了18.5%(水和DMSO的組合)的第一重量損失和在170-220℃之間顯示了第二重量損失(可能的DMSO)。由於水和DMSO的損失，在37.6℃和90.4℃處的兩個寬吸熱線是可能的。由於形態A的融化，在222.0℃處觀察到小吸熱。

實施例5. 化合物A的鹽類的製備 方法

用晶體化合物A形態A製備下面的鹽。將化合物A形態A(每次實驗50 mg)在50℃溶解在丙酮或四氫呋喃(50體積，2.1 ml)中。用1.1 mol eq.的相應的反離子(例如，1.0 M氫氧化鈉、氫氧化鉀或鹽酸水溶液)，處理所述溶液。將溫度在50℃維持20 min，然後以0.1℃/min冷卻到0℃，同時攪拌。在0℃達20 h後，將固體過濾、空氣乾燥10 min，並藉由適當的技術進行分析。

數據 化合物A的鈉鹽

化合物A的鈉鹽的XRPD圖案如圖9所示，且在XRPD圖案中的峰值及其相關強度如下面的表5所示。

藉由離子色譜法(Metrohm761 Compact IC,IC Net軟體v2.3)，將化學計量(離子化合物A：反離子)確定為1：1。TGA熱譜和DSC熱譜如圖10所示。TGA熱譜在40-90℃之間顯示了11.5%的重量損失。DSC熱譜在64.1℃處顯示了寬的吸熱，其次是在150.5℃和190.3℃顯示了兩個放熱和在313.6℃處顯示了急劇融化。純度經確定為約99.6%。

化合物A的鉀鹽

藉由離子色譜法(Metrohm761 Compact IC,IC Net軟體v2.3)，將化學計量(離子化合物A：反離子)確定為1：1。 化合物A的鉀鹽的XRPD圖案如圖21所示。正如在該圖中所觀察到的，鉀鹽實質上為非晶態。熱分析表明了水的可能損失，隨後是再結晶事件，以產生在291℃融化的非溶劑化的晶體形態(圖22)。

化合物A的L-精胺酸鹽

化合物A的L-精胺酸鹽的XRPD圖案如圖11所示，且在XRPD圖案中的峰值及其相關強度如下面的表6所示。

藉由NMR，化學計量(離子化合物A：反離子)經確定為約1：1。TGA熱譜和DSC熱譜如圖12所示。TGA熱譜在40-100℃之間顯示了4.5%的重量損失。DSC熱譜在79.6℃和143.3℃處顯示了兩個寬的吸熱，在172.5℃顯示了放熱，隨後是在210.1℃處顯示了吸熱。純度經確定為約99.5%。

化合物A的L-離胺酸鹽

化合物A的L-離胺酸鹽的XRPD圖案如圖13所示， 且在XRPD圖案中的峰值及其相關強度如下面的表7所示。

藉由NMR，化學計量(離子化合物A：反離子)經確定為約1：1。TGA熱譜和DSC熱譜如圖14所示。TGA熱譜在235-270℃之間顯示了12.1%的重量損失。DSC熱譜在230.7℃處顯示了急劇融化和在237.1℃顯示了寬的吸熱，純度經確定為約99.6%。

化合物A的乙醇胺鹽

化合物A的乙醇胺鹽的XRPD圖案如圖15所示，且在XRPD圖案中的峰值及其相關強度如下面的表8、9和10所示。從由丙酮觀察圖案1，從四氫呋喃觀察圖案2，並在40℃/75% RH下觀察圖案3。

對於四氫呋喃和丙酮，藉由NMR，化學計量(離子化合物A：反離子)經確定為約1：1。來源於丙酮的化合物A的乙醇胺鹽的TGA熱譜和DSC熱譜如圖16所示。TGA熱譜顯示了在155-250℃之間的10.1%的重量損失(0.8當量的乙醇胺)。DSC熱譜顯示了在171.4℃處的急劇融化和在186.0℃處寬的吸熱。純度經確定為約99.0%。對於來源於四氫呋喃的化合物A的乙醇胺鹽，TGA熱譜在155- 250℃之間顯示了10.1%的重量損失(0.8當量的乙醇胺)，且DSC熱譜在172.4℃顯示了急劇融化和在185.5℃顯示了寬的吸熱。純度經確定為約99.1%。

化合物A的二乙醇胺鹽

化合物A的二乙醇胺鹽的XRPD圖案如圖17所示，且在XRPD圖案中的峰值及其相關強度如下面的表11和12所示。從丙酮觀察圖案1，並在40℃/75% RH下觀察圖案2。

藉由NMR，化學計量(離子化合物A：反離子)經確定為約1：1。TGA熱譜和DSC熱譜如圖18所示。TGA熱譜在155-250℃之間顯示了12.6%的重量損失。DSC熱譜在150.2℃處顯示了急劇融化和在172.2℃顯示了寬的吸熱。純度經確定為約99.7%。

化合物A的三木甲胺鹽

化合物A的三木甲胺鹽的XRPD圖案如圖19所示， 且在XRPD圖案中的峰值及其相關強度如下面的表13所示。

藉由NMR，化學計量(離子化合物A：反離子)經確定為約1：1。TGA熱譜和DSC熱譜如圖20所示。TGA熱譜在180-260℃之間顯示了11.0%的重量損失。DSC熱譜在176.5℃處顯示了急劇融化和在182.6℃顯示了寬泛的吸熱。純度經確定為約99.7%。

化合物A的氫氯酸鹽

化合物A的氫氯酸鹽的XRPD圖案如圖25所示，且在XRPD圖案中的峰值及其相關強度如下面的表14所示。

藉由離子色譜，化學計量(離子化合物A：反離子)經確定為約1：1。TGA熱譜和DSC熱譜如圖26所示。TGA熱譜在100-170℃之間顯示了6.5%的重量損失和在185-210℃之間顯示了3.4%的第二重量損失。DSC熱譜在154.3和201.6℃處顯示了兩個小的吸熱，以及在223.0℃顯示了 急劇融化。純度經確定為約99.1%。

化合物A的硫酸鹽

化合物A的硫酸鹽的XRPD圖案如圖27所示，為鹽和形態A的混合物。在XRPD圖案中的峰值及其相對強度如下面的表15所示。

TGA熱譜和DSC熱譜如圖28所示。TGA熱譜在10-110℃之間顯示了6.5%的重量損失和在180-280℃之間顯示了27.4%的第二重量損失。DSC熱譜在31.8、55.7和91.0處顯示了與第一重量損失相關的的三個小的吸熱，以 及由於分解在201.4℃顯示了大的、寬吸熱。

化合物A的甲磺酸鹽

化合物A的甲磺酸鹽的XRPD圖案如圖29所示，且在XRPD圖案中的峰值及其相關強度如下面的表16和17所示。從丙酮觀察圖案1，並從四氫呋喃觀察圖案2。圖案1在40℃/75% RH下返回至形態A，圖案2在40℃/75% RH下返回至形態A和圖案1的混合物。

對於四氫呋喃和丙酮，藉由NMR，化學計量(離子化合物A：反離子)經確定為約1：1。來源於四氫呋喃的化合物A的甲磺酸鹽的TGA熱譜和DSC熱譜如圖30所示。TGA熱譜在40-100℃之間顯示了2.1%的重量損失。DSC熱譜在153.5℃顯示了小的吸熱和在166.9℃顯示了急劇吸熱。純度經確定為約99.3%。對於來源於丙酮的化 合物A的甲磺酸鹽，TGA熱譜顯示直到樣品在約180℃降解無重量損失，且DSC熱譜顯示在144.5℃處由於樣品融化的吸熱。純度確定為約98.9%。

實施例6. 非晶態A的製備

非晶態化合物A獲得如下。將晶體化合物A形態A(500 mg)在室溫下溶解在四氫呋喃(1.5 mL)中。過濾溶液以去除任何殘留的晶體材料。藉由在旋轉蒸發器中迅速蒸發而被移除溶劑。藉由XRPD檢查一小份所獲得的固體。或者，藉由凍乾來自1,4-二噁烷：水(2：1 v/v)混合物的化合物A形態A，或藉由將化合物A包裝並密封在毛細管中，並將樣品於約240℃在Kofler熱臺上融化一分鐘和在環境溫度下冷卻，得到非晶態化合物A。非晶態化合物A的XRPD如圖23所示。

實施例7. 化合物A的雙三乙胺的製備 方法

將晶體化合物A形態A(50 mg)在50℃下溶解在丙酮(50體積)中。用2.1 mol eq.的三乙胺(TEA)處理溶液。將溫度於50℃維持20 min，然後以0.1℃/min冷卻到0℃，同時攪拌。在0℃ 72 h之後，將固體過濾、空氣乾燥5min並藉由XRPD分析。將溶液設置為在環境條件下緩慢蒸發。

數據

化合物A的雙TEA鹽的XRPD圖案如圖31所示，且在XRPD圖案中的峰值及其相關強度如下表18所示。

TGA熱譜和DSC熱譜如圖32所示。將TEA分離為雙鹽，然而在40℃/75% RH下存儲一個星期後，鹽開始離解成形態A。

實施例8. 半鈣鹽和鎂鹽的製備 方法

藉由離子交換從鈉鹽中製備化合物A的鈣和鎂鹽。將化合物A(450 mg)在50℃下溶解在丙酮(50體積，22.5 ml)中。用1.1 mol eq.的氫氧化鈉(1M的水溶液)處理溶液。在添加後形成懸浮液，然後其以0.1℃/min將其冷卻到0℃。在0℃經過48 h後，將固體過濾、空氣乾燥10min並藉由XRPD進行分析。在室溫下將鈉鹽(50 mg)溶解在甲醇(20體積，1 ml)中。將溶液加熱到50℃並使用相應的反離子(1M的甲醇溶液)處理。將混合物以0.1℃/min冷卻到0℃。在0℃經過24 h後，將固體過濾、空氣乾燥5min並藉由XRPD分析(第一批)。將液體保存和設置為在環境條件下緩慢蒸發，以提供第二批。從Ca⁺²和Mg⁺²半鹽實驗中分離的材料在40℃/75% RH下溫育一周後結晶。

數據

化合物A的半鈣和鎂鹽的XRPD圖案分別如圖33和圖35所示。在XRPD圖案中的峰值及其相關強度如下表19和20所示。

化合物A的半鈣和鎂鹽的DSC熱譜分別如圖34和圖36所示。

實施例9. 化合物A形態A的單晶體

由品質足以用於藉由單晶X射線繞射進行結構測定的丙酮生長單一晶體。

該結構溶液藉由直接的方法而得到，對F ² 進行全矩陣最小二乘法修正，具有加權w^-1=σ2(F _o ²)+(0.0697 P)²+(0.3149 P)，其中P=(F _o ²+2F _c ²)/3，各向異性位移參數，使用球面諧波的經驗吸收校正，在SCALE3 ABSPACK縮 放演算法(scaling algorithm)實施。對於所有的數據，最後wR ²={Σ[w(F _o ²-2F _c ²)²]/Σ[w(F _o ²)²]^½}=0.1376，對具有F _o >4σ(F _o )的2496反射的F值，通常R₁=0.0467，對所有的數據和248個參數，S=1.045。最終△/σ(max),0.000,△/σ(平均)，0.000。最後差分在+0.211和-0.318 eÅ^-3之間映射。

圖37根據示出了使用的編號方案的晶體結構顯示了化合物A形態A的分子視圖。非氫原子的各向異性原子位移橢圓體以50%的機率水準示出。氫原子以任意小的半徑顯示。

實施例10. 化合物A的製備 a)5-苯氧基苯酞

將用DMF(68 Kg)裝入反應器，並開始攪拌。然後用苯酚(51 Kg)、乙醯丙酮(8Kg)、5-溴苯酞(85 Kg)、溴化銅(9 Kg)和碳酸鉀(77 Kg)填充反應器。將混合物加熱超過85℃並保持到反應完成，然後冷卻。添加水。過濾固體並用水洗滌。將固體溶解在二氯甲烷中、用含水HCl洗滌，然後用水洗滌。在壓力下移除溶劑並添加甲醇。攪拌和過濾混合物。用甲醇洗滌固體並在烤箱中乾燥，從而產生5-苯氧基苯酞(產率：72%，HPLC：99.6%)。

b)2-氯甲基-4-苯氧基苯甲酸甲酯

將甲苯(24 Kg)裝入反應器，並開始攪拌。然後向反應器加入5-苯氧基苯酞(56 Kg)、亞硫醯氯(41 Kg)、硼酸三甲酯(1 Kg)、二氯三苯基正膦(2.5 Kg)，和碳酸鉀(77 Kg)。加熱混合物以回流，直至反應完成，然後移除溶劑，留下2-氯甲基-4-苯氧基苯甲醯氯化物。裝入甲醇，並將混合物加熱超過50℃，直到反應完成。移除溶劑並用DMF替代。在下一步中，直接使用產品甲基2-氯甲基-4-苯氧基苯甲酸甲酯在DMF中的溶液(HPLC：85%)。

c)4-羥基-7-苯氧基異喹啉-3-羧酸甲酯(1a)

將2-氯甲基-4-苯氧基苯甲酸甲酯在DMF中的溶液(約68 Kg)裝入反應器，並開始攪拌。然後將對甲苯磺醯甘胺酸甲酯(66 Kg)、碳酸鉀(60 Kg)和碘化鈉(4 Kg)裝入反應器。將混合物加熱至至少50℃，直到反應完成。冷卻混合物。加入甲醇鈉的甲醇溶液，攪拌混合物直到反應完成。加入乙酸和水，攪拌混合物，過濾並用水洗滌。用丙酮粉末純化固體，並在烤箱中乾燥，從而產生1a(來自步驟b的產率)：58%；HPLC：99.4%)。¹H NMR(200 MHz，DMSO-d6)δ11.60(s,1 H)，8.74(s,1 H)，8.32(d,J=9.0赫茲，1 H)，7.60(dd，J=2.3和9.0赫茲，1 H)7.49(m，3 H)，7.24(m、3 H)，3.96(s，3 H)；MS-(+)-離子M+1=296.09。

d)1-((二甲胺基)甲基)-4-羥基-7-苯氧基異喹啉-3-羧酸甲酯(1b)

將1a(29.5 g)和乙酸(44.3 g±5%)裝入燒瓶，然後攪拌。緩慢加入雙-二甲基胺基甲烷(12.8 g±2%)。將混合物 加熱至55±5℃並保持到反應完成。藉由MS、HPLC和¹H NMR估算反應產物。¹H NMR(200 MHz，DMSO-d6)δ11.7(s，1 H)，8.38(d，J=9.0赫茲，1 H)，7.61(dd，J=9.0,2.7赫茲，1 H),7.49(m，3 H)，7.21(m,3 H)，5.34(s，2H),3.97(s,3 H)，1.98(s,3 H)；MS-(+)-離子M+1=368.12。

e)1-((乙醯氧基)甲基)-4-羥基-7-苯氧基異喹啉-3-羧酸甲酯(1c)

將來自上述a)的1b的溶液冷卻至25℃以下，此時添加乙酸酐(28.6 g±3.5%)，以保持溫度低於50℃。將所得混合物加熱到100±5℃，直至反應完成。

將來自上述的1c和1d的溶液冷卻至低於65±5℃。緩慢加入水(250 mL)。然後將混合物冷卻到低於20±5℃並過濾。潮濕的結塊用水洗滌(3×50 mL)，並加入至一個新燒瓶中。添加二氯甲烷(90 mL)和水(30 mL)，且攪拌所得混合物。分離並藉由HPLC估算二氯甲烷層。

將有機層添加到燒瓶並冷卻5±5℃。加入嗎福啉，且攪拌混合物直到反應完成。用丙酮/甲醇的混合物取代溶劑。冷卻後，化合物1c沉澱並被過濾、清洗和在烤箱中 乾燥(產率：81%，HPLC：>99.7%)。¹H NMR(200 MHz，DMSO-d6)δ11.6(S，1 H)，8.31(d，J=9.0赫茲，1 H)，7.87(d，J=2.3赫茲，1 H),7.49(m，3 H)，7.24(m,3H)，3.95(s,3H)，3.68(s,2H)，2.08(s,6H)；MS-(+)-離子M+1=357.17。

f)4-羥基-1-甲基-7-苯氧基異喹啉-3-羧酸甲酯(1e)

將1c(16.0 g)、Pd/C(2.08 g)、無水碳酸鈉(2.56 g)和乙酸乙酯(120 mL)裝入反應器。將燒瓶用氮(3 X)進行真空吹洗並用氫(3 X))進行真空吹洗。然後用氫對燒瓶加壓，並在約60℃下攪拌，直到完成反應。將燒瓶冷卻到20-25℃，將壓力釋放到環境，用氮氣吹洗頭部空間三次，並過濾混合物。濃縮濾液。加入甲醇。攪拌然後冷卻混合物。將產品沉澱並過濾和在烤箱中乾燥(產率：90%，HPLC：99.7%)。

g)[(4-羥基-1-甲基-7-苯氧基-異喹啉-3-羰基)-胺基]-乙酸(化合物A)

將1e(30.92 g)、甘胺酸(22.52 g)、甲醇(155 mL)、甲 醇鈉溶液(64.81 g)裝入壓力燒瓶並將其密封(作為替代，甘胺酸鈉用於替代甘胺酸和甲醇鈉)。將反應加熱到約110℃，直至反應完成。將混合物冷卻、過濾、用甲醇洗滌、在真空下乾燥、溶解在水中以及用乙酸乙酯洗滌。將乙酸乙酯移除，並且將乙酸(18.0 g)溶液加入至所得的含水層。在室溫下攪拌懸浮液、過濾，用水(3×30 mL)、冷丙酮(5-10℃，2×20 mL)洗滌固體，在真空下乾燥，以獲得化合物A(產率：86.1%，HPLC：99.8%)。

實施例11. 生物試驗

本文所提供的固體形態可用於抑制HIF羥化酶的活性，從而增加低氧誘導因子(HIF)的穩定性和/或活性，並可用於治療和預防低氧誘導因子相關的病症和失調(參見例如美國專利No.7,323,475、美國專利申請公開No.2007/0004627、美國專利申請公開No.2006/0276477、和美國專利申請公開No.2007/0259960，此處藉由引用併入)。

本文所提供的固體形態的生物活性，可使用任何常規已知方法來評估。在具體實施例中，源自動物組織、較佳為人體組織的細胞，當受到本發明化合物的刺激時，能表現紅血球生成素，被培養以用於在體外生產內源性蛋白。考慮用於該方法的細胞包括但不限於來源於肝、造血、腎、神經組織的細胞。

在現有技術中通常有可用的細胞培養技術，並包括維 持細胞的生存力和促進內源性蛋白表現的任何方法。通常將細胞培養在針對細胞生長、生存力和蛋白質產量而優化的生長培養基中。細胞可以在懸浮液中或附著於基質，並且可以以批量進料或連續流動方案供應培養基。將本發明的化合物以刺激紅血球生成素產生而不影響細胞活力的量添加到培養基。細胞所產生的紅血球生成素被分泌到培養基中。然後收集培養基，並使用本領域技術人員已知的方法純化紅血球生成素(參見，例如，Lai et al.(1987)美國專利號4,667,016；和Egrie(1985)美國專利號4,558,006)。

合適的測定方法是本領域眾所周知的。下面的內容僅作為實例而不作為限制而給出。

基於細胞的HIFα穩定性分析

將源於各種組織的人類細胞(例如，來自肝細胞組織的Hep3B細胞)分別接種到35 mm的培養皿中，並在37℃、20% O₂、5% CO₂下，在標準培養基中生長，例如，DMEM(達爾伯克氏改良伊格爾培養基)，10%的FBS(胎牛血清)。當細胞層達到長滿(confluence)時，用OPTI-MEM培養基(Invitrogen Life Technologies,Carlsbad,CA)替換該培養基，且將細胞層於37℃下，在20% O₂、5%CO₂中溫育約24小時。然後將化合物A或0.013% DMSO(二甲亞碸)加入現有培養基中，並持續溫育過夜。

溫育後，移除培養基，離心並存儲用於分析(參見下文基於細胞的VEGF和EPO測定)。在冷磷酸緩衝鹽(PBS) 中將細胞洗滌兩次，然後在1 mL 10 mMTris(pH值7.4)、1mM EDTA、150 mM NaCl、0.5%IGEPAL(Sigma-Aldrich，密蘇里州聖路易斯市)和蛋白酶抑制劑混合物(Roche Molecular Biochemicals)中，在冰上裂解15min。將細胞裂解產物以3000xg在4℃經離心5min，且收集胞質部分(上清液)。將細胞核(顆粒)再懸浮並在100 μL的20 mM HEPES(pH值為7.2)、400 mM NaCl、1 mM EDTA、1mM二硫蘇糖醇和蛋白酶混合物(Roche Molecular Biochemicals)中裂解，以13,000xg在4℃離心5min，且收集核蛋白質部分(上清液)。

使用QUANTIKINE免疫測定(R&D Systems,Inc.,Minneapolis MN)，根據製造商的說明書，分析收集的核蛋白質部分的HIF-1α。

基於細胞的EPO分析

以每孔25,000個細胞，將Hep3B細胞(來自ATCC的人類肝癌細胞，cat #HB-8064)接種於96孔孔盤。第二天，將細胞用DMEM(Cellgro，cat#10-013-CM)+ 0.5%胎牛血清(Cellgro,cat#35-010-CV)洗滌一次，並與各種濃度的化合物或載體(vehicle)對照(0.15% DMSO)在DMEM+ 0.5%胎牛血清中溫育72小時。藉由轉移到錐形底部的96孔孔盤並以2000 rpm離心5min，產生無細胞的培養上清液。使用人類EPO的ELISA試劑盒(R&D Systems,cat# DEP 00)，將上清液的EPO定量。

本文所報導的化合物的EPO值(例如，表22)為細胞加化合物的測量值減去用於相同細胞製備的載體對照的值。用於細胞製備的載體對照的EPO值在0-12.5 mIU/mL內變化。

HIF-PH測定

酮戊二酸α-[1-¹⁴C]-鈉鹽、α-酮戊二酸鈉鹽和HPLC純化肽分別從例如珀金埃爾默(Perkin-Elmer,Wellesley MA)、西格瑪奧德里奇(Sigma-Aldrich)和SynPep集團(SynPep Corp,Doublin CA)等商業來源獲得。用於測定的肽是如上所述的或在國際公開WO2005/118836所公開的HIFα片段，在此處藉由引用而併入。例如，用於HIF-PH測定的HIF肽為[甲氧基香豆素]-DLDLEALAPYIPADDDFQL-醯胺。HIF-PH，例如HIF-PH2(也稱為EGLN1或PHD2)，在例如，昆蟲Hi5細胞中表現，並例如藉由SP離子交換層析管柱部分純化。酶的活性藉由使用由Kivirikko和Myllyla(1982,Methods Enzymol,82：245-304)所描述的測定捕獲¹⁴CO₂而測定。測定反應包含50 mM HEPES(pH 7.4)、100 μM α-酮戊二酸鈉鹽、0.30 μ Ci/mL α-酮戊二酸α-[1-¹⁴C]鈉鹽、40 μM FeSO₄、1 mM抗壞血酸鹽、1541.8單位/mL過氧化氫酶，有或沒有50 μM肽基質和各種濃度的本發明化合物。藉由添加HIF-PH酶開始反應。

藉由從存在基質肽的百分數周轉中減去缺乏基質肽百 分數周轉計算肽-依賴性百分數周轉。使用在給定抑制劑濃度下的肽-依賴性百分數周轉來計算抑制百分比和IC₅₀。使用GraFit軟體(Erithacus Software Ltd.,Surrey UK)來計算每種抑制劑的IC₅₀值。結果總結在表22中。

下面的表21用於證明化合物A的藥理效用。藉由抑制HIF脯胺醯羥化酶(例如PHD2，也稱為EGLN1)，化合物A穩定HIFα，其由此結合HIFβ，以形成活性轉錄因子，該活性轉錄因子增加了參與應答缺氧和缺血病症的許多基因的表現，包括紅血球生成素(EPO)。因此，化合物A可用於預防、預處理或治療與HIF和或EPO相關的病症，包括貧血、缺血和缺氧病症。

*與僅DMSO的對照相比，以在DMSO中30 μM化合物所測的細胞EPO

Claims (77)

1. 晶體[(4-羥基-1-甲基-7-苯氧基-異喹啉-3-羰基)-胺基]-乙酸(化合物A形態A)，其特徵在於，X-射線粉末繞射圖包括以下峰：8.5、16.2和27.4°2θ±0.2°2θ。
2. 如請求項1所述的化合物A形態A，其中，該繞射圖還包括處於12.8、21.6和22.9°2θ±0.2°2θ的峰。
3. 如請求項1所述的化合物A形態A，其中，該繞射圖實質上如圖1所示。
4. 如請求項1所述的化合物A形態A，其差示掃描量熱(DSC)曲線包括於約223℃處的吸熱。
5. 如請求項4所述的化合物A形態A，其中，該DSC曲線實質上如圖2所示。
6. 晶體[(4-羥基-1-甲基-7-苯氧基-異喹啉-3-羰基)-胺基]-乙酸半水合物(化合物A形態B)，其特徵在於，X-射線粉末繞射圖包括以下峰：4.2、8.3和16.6°2θ±0.2°2θ。
7. 如請求項6所述的化合物A形態B，其中，該繞射圖還包括處於12.5、14.1和17.4°2θ±0.2°2θ的峰。
8. 如請求項6所述的化合物A形態B，其中，該繞射圖實質上如圖3所示。
9. 如請求項6所述的化合物A形態B，其差示掃描量熱(DSC)曲線包括於約222℃處的吸熱。
10. 如請求項9所述的化合物A形態B，其中，該DSC曲線實質上如圖4所示。
11. 晶體[(4-羥基-1-甲基-7-苯氧基-異喹啉-3-羰基)- 胺基]-乙酸六氟丙-2-醇溶劑合物(化合物A形態C)，其特徵在於X-射線粉末繞射圖包括以下峰：4.5、13.7和16.4°2θ±0.2°2θ。
12. 如請求項11所述的化合物A形態C，其中，該繞射圖還包括處於15.4、15.5和20.6°2θ±0.2°2θ的峰。
13. 如請求項11所述的化合物A形態C，其中，該繞射圖實質上如圖5所示。
14. 如請求項11所述的化合物A形態C，其差示掃描量熱(DSC)曲線包括於約222℃處的吸熱。
15. 如請求項14所述的化合物A形態C，其中，該DSC曲線實質上如圖6所示。
16. 晶體[(4-羥基-1-甲基-7-苯氧基-異喹啉-3-羰基)-胺基]-乙酸DMSO：水溶劑合物(化合物A形態D)，其特徵在於，X-射線粉末繞射圖包括以下峰：8.4、8.5和16.8°2θ±0.2°2θ。
17. 如請求項16所述的化合物A形態D，其中，該繞射圖還包括處於4.2、12.6和28.4°2θ±0.2°2θ的峰。
18. 如請求項16所述的化合物A形態D，其中，該繞射圖實質上如圖7所示。
19. 如請求項16所述的化合物A形態D，其差示掃描量熱(DSC)曲線包括於約222℃處的吸熱。
20. 如請求項19所述的化合物A形態D，其中，該DSC曲線實質上如圖8所示。
21. 晶體[(4-羥基-1-甲基-7-苯氧基-異喹啉-3-羰基)- 胺基]-乙酸鈉鹽(化合物A的鈉鹽)，其特徵在於，X-射線粉末繞射圖包括以下峰：5.3、16.0和21.6°2θ±0.2°2θ。
22. 如請求項21所述的化合物A的鈉鹽，其中，該繞射圖還包括處於18.7、19.2和24.0°2θ±0.2°2θ的峰。
23. 如請求項21所述的化合物A的鈉鹽，其中，該繞射圖實質上如圖9所示。
24. 如請求項21所述的化合物A的鈉鹽，其差示掃描量熱(DSC)曲線包括於約314℃處的吸熱。
25. 如請求項24所述的化合物A的鈉鹽，其中，該DSC曲線實質上如圖10所示。
26. 晶體[(4-羥基-1-甲基-7-苯氧基-異喹啉-3-羰基)-胺基]-乙酸L-精胺酸鹽(化合物A的L-精胺酸鹽)，其特徵在於，X-射線粉末繞射圖包括以下峰：20.8、21.8和25.4°2θ±0.2°2θ。
27. 如請求項26所述的化合物A的L-精胺酸鹽，其中，該繞射圖還包括處於22.7、23.4和26.4°2θ±0.2°2θ的峰。
28. 如請求項26所述的化合物A的L-精胺酸鹽，其中，該繞射圖實質上如圖11所示。
29. 如請求項26所述的化合物A的L-精胺酸鹽，其差示掃描量熱(DSC)曲線包括於約210℃處的吸熱。
30. 如請求項29所述的化合物A的L-精胺酸鹽，其中，該DSC曲線實質上如圖12所示。
31. 晶體[(4-羥基-1-甲基-7-苯氧基-異喹啉-3-羰基)- 胺基]-乙酸L-離胺酸鹽(化合物A的L-離胺酸鹽)，其特徵在於，X-射線粉末繞射圖包括以下峰：19.8、20.7和21.2°2θ±0.2°2θ。
32. 如請求項31所述的化合物A的L-離胺酸鹽，其中，該繞射圖還包括處於10.2、16.9和18.4°2θ±0.2°2θ的峰。
33. 如請求項31所述的化合物A的L-離胺酸鹽，其中，該繞射圖實質上如圖13所示。
34. 如請求項31所述的化合物A的L-離胺酸鹽，其差示掃描量熱(DSC)曲線包括於約237℃處的吸熱。
35. 如請求項34所述的化合物A的L-離胺酸鹽，其中，該DSC曲線實質上如圖14所示。
36. 晶體[(4-羥基-1-甲基-7-苯氧基-異喹啉-3-羰基)-胺基]-乙酸乙醇胺鹽(化合物A的乙醇胺鹽)，其特徵在於，X-射線粉末繞射圖包括以下峰：21.8、22.7和27.1°2θ±0.2°2θ。
37. 如請求項36所述的化合物A的乙醇胺鹽，其中，該繞射圖還包括處於21.1、26.2和26.6°2θ±0.2°2θ的峰。
38. 如請求項36所述的化合物A的乙醇胺鹽，其中，該繞射圖實質上如圖15所示。
39. 如請求項36所述的化合物A的乙醇胺鹽，其差示掃描量熱(DSC)曲線包括於約171℃處的吸熱。
40. 如請求項39所述的化合物A的乙醇胺鹽，其 中，該DSC曲線實質上如圖16所示。
41. 晶體[(4-羥基-1-甲基-7-苯氧基-異喹啉-3-羰基)-胺基]-乙酸二乙醇胺鹽(化合物A的二乙醇胺鹽)，其特徵在於，X-射線粉末繞射圖包括以下峰：16.9、23.7和25.0°2θ±0.2°2θ。
42. 如請求項41所述的化合物A的二乙醇胺鹽，其中，該繞射圖還包括處於19.6、22.6和26.0°2θ±0.2°2θ的峰。
43. 如請求項41所述的化合物A的二乙醇胺鹽，其中，該繞射圖實質上如圖17所示。
44. 如請求項41所述的化合物A的二乙醇胺鹽，其差示掃描量熱(DSC)曲線包括於約150℃處的吸熱。
45. 如請求項44所述的化合物A的二乙醇胺鹽，其中，該DSC曲線實質上如圖18所示。
46. 晶體[(4-羥基-1-甲基-7-苯氧基-異喹啉-3-羰基)-胺基]-乙酸三木甲胺(tromethamine)鹽(化合物A的三木甲胺鹽)，其特徵在於，X-射線粉末繞射圖包括以下峰：10.1、14.2和21.1°2θ±0.2°2θ。
47. 如請求項46所述的化合物A的三木甲胺鹽，其中，該繞射圖還包括處於20.1、25.7和28.4°2θ±0.2°2θ的峰。
48. 如請求項46所述的化合物A的三木甲胺鹽，其中，該繞射圖實質上如圖19所示。
49. 如請求項46所述的化合物A的三木甲胺鹽，其 差示掃描量熱(DSC)曲線包括於約176℃處的吸熱。
50. 如請求項49所述的化合物A的三木甲胺鹽，其中，該DSC曲線實質上如圖20所示。
51. 非晶態[(4-羥基-1-甲基-7-苯氧基-異喹啉-3-羰基)-胺基]-乙酸(非晶態化合物A)。
52. 實質上非晶態的[(4-羥基-1-甲基-7-苯氧基-異喹啉-3-羰基)-胺基]-乙酸鉀鹽(化合物A的鉀鹽)。
53. 如請求項52所述的化合物A的鉀鹽，其差示掃描量熱(DSC)曲線包括於約291℃處的吸熱。
54. 如請求項53所述的化合物A的鉀鹽，其中，該DSC曲線實質上如圖22所示。
55. 藥物組成物，包含選自下組的化合物：請求項1所述的化合物A形態A、請求項6所述的化合物A形態B、請求項11所述的化合物A形態C、請求項16所述的化合物A形態D、請求項21所述的化合物A的鈉鹽、請求項26所述的化合物A的L-精胺酸鹽、請求項31所述的化合物A的L-離胺酸鹽、請求項36的所述化合物A的乙醇胺鹽、請求項41所述的化合物A的二乙醇胺鹽、請求項46所述的化合物A的三木甲胺鹽、請求項51所述的非晶態化合物A以及請求項52所述的化合物A的鉀鹽，以及藥用賦形劑。
56. 如請求項55所述的藥物組成物，包含形態A的化合物A。
57. 如請求項56所述的藥物組成物，其中，至少約 85%的化合物A為形態A。
58. 如請求項56所述的藥物組成物，其中，至少約90%的化合物A為形態A。
59. 如請求項56所述的藥物組成物，其中，至少約95%的化合物A為形態A。
60. 如請求項56所述的藥物組成物，其中，至少約99%的化合物A處於形態A。
61. 如請求項56所述的藥物組成物，其中，至少約99.5%的化合物A為形態A。
62. 如請求項56所述的藥物組成物，其中，至少約99.9%的化合物A為形態A。
63. 如請求項56所述的藥物組成物，其中，至少約99.99%的化合物A為形態A。
64. 選自下組的化合物在製造用於在有需要的患者中治療、預處理或延緩至少部分受低氧誘導因子(HIF)介導的病症的發作或惡化的藥物中的用途：請求項1所述的化合物A形態A、請求項6所述的化合物A形態B、請求項11所述的化合物A形態C、請求項16所述的化合物A形態D、請求項21所述的化合物A的鈉鹽、請求項26所述的化合物A的L-精胺酸鹽、請求項31所述的化合物A的L-離胺酸鹽、請求項36所述的化合物A的乙醇胺鹽、請求項41所述的化合物A的二乙醇胺鹽、請求項46所述的化合物A的三木甲胺鹽、請求項51所述的非晶態化合物A以及請求項52所述的化合物A的鉀鹽。
65. 如請求項64所述的用途，其中，該至少部分受HIF介導的病症為與局部缺血或缺氧相關的組織損傷。
66. 如請求項65所述的用途，其中，該局部缺血與選自下組的急性事件相關：心肌梗塞、肺栓塞、腸梗塞、慢性腎衰竭、缺血性中風和腎缺血再灌注損傷。
67. 如請求項65所述的用途，其中，該局部缺血與選自下組的慢性事件相關：心臟硬化、暫態缺血發作、黃斑退化、外周動脈疾病和充血性心臟衰竭。
68. 選自下組的化合物在製造用於在有需要的患者中治療、預處理或延緩至少部分受紅血球生成素(EPO)介導的病症的發作或惡化的藥物中的用途：請求項1所述的化合物A形態A、請求項6所述的化合物A形態B、請求項11所述的化合物A形態C、請求項16所述的化合物A形態D、請求項21所述的化合物A的鈉鹽、請求項26所述的化合物A的L-精胺酸鹽、請求項31所述的化合物A的L-離胺酸鹽、請求項36所述的化合物A的乙醇胺鹽、請求項41所述的化合物A的二乙醇胺鹽、請求項46所述的化合物A的三木甲胺鹽、請求項51所述的非晶態化合物A以及請求項52所述的化合物A的鉀鹽。
69. 選自下組的化合物在製造用於在有需要的患者中治療、預處理或延緩貧血症的發作或惡化的藥物中的用途：請求項1所述的化合物A形態A、請求項6所述的化合物A形態B、請求項11所述的化合物A形態C、請求項16所述的化合物A形態D、請求項21所述的化合物A 的鈉鹽、請求項26所述的化合物A的L-精胺酸鹽、請求項31所述的化合物A的L-離胺酸鹽、請求項36所述的化合物A的乙醇胺鹽、請求項41所述的化合物A的二乙醇胺鹽、請求項46所述的化合物A的三木甲胺鹽、請求項51所述的非晶態化合物A以及請求項52所述的化合物A的鉀鹽。
70. 如請求項64、68或69所述的用途，其中，該化合物為化合物A形態A。
71. 如請求項64、68或69所述的用途，其中，至少約85%的該化合物為化合物A形態A。
72. 如請求項64、68或69所述的用途，其中，至少約90%的該化合物為化合物A形態A。
73. 如請求項64、68或69所述的用途，其中，至少約95%的該化合物為化合物A形態A。
74. 如請求項64、68或69所述的用途，其中，至少約99%的該化合物為化合物A形態A。
75. 如請求項64、68或69所述的用途，其中，至少約99.5%的該化合物為化合物A形態A。
76. 如請求項64、68或69所述的用途，其中，至少約99.9%的該化合物為化合物A形態A。
77. 如請求項64、68或69所述的用途，其中，至少約99.99%的該化合物為化合物A形態A。