TW201200147A - Compound compositions for improving neurodegenerative diseases - Google Patents

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201200147 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係有關一種用以改善神經退化性疾病之複方組 成物，特別是指一種由龍眼花萃取物、綠蜂膠及國蘭多酚 所組成之複方組成物。 【先前技術】 根據世界衛生組織的流行病學調查指出，憂鬱症、癌 症以及愛滋病為21世紀的三大疾病；甚至預測西元 • 年時，精神疾病將成為殘疾的第二大原因⑴。神經退化性 疾病為老年人常見之疾病，如失智症，其導致學習記憶能 力減退、認知功能下降，亦為憂鬱情境產生的主要原因， 因此失智症與憂f症經常兩者同時發生。患有神經退化性 疾病，如失智症中的阿兹海默症(八出祀如〆sdisease)，的 患者會出現漸贼的記憶損害與其他如財軸、執行日 常生活作息功能降低等症狀’進而影響到工作表現、人際 關係與社會功能。在疾病過程中甚至會產生妄想、幻覺， • 其可對患者本身或他人產生危險，且隨著疾病的進展對他 人驗_度大幅增加，對患者本身及其家屬的生活亦有 極大的影響(2)。 -神經退化性疾病的致病原因為腦部產生發炎反應、神 經傳導物質減少、神經細胞死亡等神經老化現象。習知， 脂肪酸、腦職神賴翻子及單胺氧化_腦部發炎、 神經傳導物質及神經細胞之修復有密切的關聯。 研究指出罹紐贿默症之患麵部有明確地發炎反 應現象，且發作早期腦部神經膠細胞有活化的現象，其代 表患者腦部有異常發炎之反應，以致於病症晚期時會有腦 部萎縮情形發生⑴。脂肪酸如n-3不飽和脂肪酸可以代謝 抗發炎物質前列腺素3 (prostaglandin 3)的前驅物，而n-6不 飽和脂肪酸則為促發炎物質前列腺素2 (prostaglandin 2)及 白三烯B4(leukotrieneB4)的前驅物。因此，若提昇n-3不飽 和脂肪酸及降低n-6不飽和脂肪酸，則能改善腦部發炎之現 象。亦有研究指出憂鬱情境與發炎也具有一定相關性(m， 故，藉由改善發炎現象亦能改善其相關之憂鬱情境。 另’阿茲海默症患者腦部神經傳導物質，如乙醯膽鹼 (acetylcholine) ’會明顯減少，使記憶力及注意力降低。腦 源性神經滋養因子(Brain Derived Neurotrophie Factor; BDNF)主要是存在海馬迴中的神經生長蛋白，其掌管細胞 修復或學習記憶，並同時會帶動幾種荷爾蒙的分泌，如： 第類型騰島素生長因子(IGF-I)、血管内皮生長因子(vegF) 和纖維母細胞生長因子(FGF2)，啟動學習的機制並使幹細 胞分裂(26)。腦源性神經滋養因子可幫助大腦增加Ι(}ΙΜ， 並启欠動神經元製造與記憶相關的血清素和絲胺酸，這兩種 神經傳導物質會刺激更多的腦源性神經滋養因子受體產 生，增加神經元之間的連接⑴〉嘴著年紀的增長，腦源性 神經滋養0子會自釘降，耻，藉φ提昇腦神經滋 養因子能改善神經傳導物質減少之現象、促神經細胞生 長，進而改善神經退化性疾病。 神經細胞亦會隨著老化而死亡，氧化壓力亦會導致神 經細胞的受損及促進細胞死亡。單胺氧化酶⑻麵^ Oxidase)分別有兩種：單胺氧化酶A (ma〇_a)及單胺氧化酶 Β (ΜΑΟ·Β)。單職倾A的潍在患替輯化性疾症 而引起之錄症的患者巾較高，通常患者會使用單胺氧化 酶A抑制劑(ma0Is)崎低單胺氧化酶a之活性，其可使 神經系統突躺的單胺，如正壯腺素(_麵麵^)、血 清素(serotonin)及多巴胺(dopamine)的代謝率降低，進而增 強單胺之作用，達到減低憂鬱症患者的憂鬱情境(2,〉，而單 胺氧化酶B的潍齡隨著年齡㈣加，當活性過高時會 促進神經細胞及腎臟細胞的凋亡。因此，藉由降低單胺 氧化酶A及秘氧化_騎性級善因神祕化性疾病 所產生的憂鬱情境及神經細胞死亡之現象，進而改善神經 退化性疾病。 神經退化性疾病最有希望的治療方法之一為神經幹細 胞之移植，以補救受損的神經細胞，惟，幹細胞數量稀少， 其來源及臨床之細備受爭議，且侵人性的治療風險較 高，因此，一種低風險且非侵入性的之治療方法是有迫切 之需要。目前，市面上治療神經退化性疾病之藥物大多為 化學合成物，與天紐物巾所萃取出之天鎌合物相比， 副作用較多，天然萃取物所組成之複方，因成分天然，副 作用少’故較能被患者接受。惟’迄今未見使用天然萃取 物經成複方’並用於改善神經退化性疾病，因此若能將天 然萃取物製成-複方組合物’不僅對改善神經退化性疾病 有恨大的幫助’亦讓患者在治療過程中有多一種選擇。 【發明内容】 爰是，本發明之主要目的，旨在提供一種用以改善神 經退化性疾狀複枝成物，尤指—魏改㈣部發炎反 應、神經傳導物質減少及神經細胞死亡之現象，進而改善 神經退化性疾病之複方組成物。 本發明之另一目的為改善腦部發炎反應、神經傳導物 質減少及神經細胞死亡現象。 本發明之另一目的為提供一種用以改善神經退化性疾 病以及改善憂鬱症之複方組成物。 為達上述目的，本發明揭露一種複方組成物，其係由 下列成分所組成： 80%重量百分比之龍眼花萃取物； 10%重量百分比之綠蜂膠；以及 10%重量百分比之國蘭多酚。 本發明複賴成物具有提昇财n_3不飽和脂肪酸濃 度’降低腦t n-6不飽和月旨肪酸濃度，腦幅源性神經滋養 因子濃度，降低細胞中單胺氧化酶活性，提昇細胞腦源性 神經滋養因子濃度之功效，進_善腦部發炎反應、神經 傳導物質減少及神經細胞死亡之現象。因此，本發明之複 方組成物可作為改善神經退錄疾病，如失智症之阿兹海 默症或帕金森氏症，及伴隨神經退錄疾叙錄症之用 途。 本發明也可另外添加本領域中具有通常知識者所熟知 之添加劑’如—或多_上_學上可接受的佐劑或賦型 201200147 劑等，作為具有改善神經退化性疾病作用之保健食品Q 【實施方式】 茲為便於更進一步對本發明之構造、使用及其特徵有 更深一層明確、詳實的認識與瞭解，爰舉出較佳實施例， 配合圖式詳細說明如下： 本發明為一種用以改善神經退化性疾病之複方組成 物’特別是以龍眼花萃取物、綠蜂膠及國蘭多紛共同組成 之複方組合物’其中，上述龍眼花萃取物的重量百分比佔 複方組合物總重量的80%，上述綠蜂膠的重量百分比佔複 * 方組合物總重量的;而上述國蘭多酚的重量百分比佔 複方組合物總重量的10%。 如此即可形成一改善神經退化性疾病及伴隨神經退化 性疾病之憂鬱症的複方組合物。此外，本發明複方組合物 可進一步加入一種以上藥理學上可接受的添加劑，讓複方 組合物形成一作為具有改善神經退化性疾病作用之保健食 品。 • 動物實驗 本發明實驗動物是由靜宜大學王銘富教授實驗室所提 供之 senescence accelerated-prone 8 (SAMP8)老化促進小 鼠，經近親繁殖後選擇年齡及體重相仿的5騰雄性小鼠 共計42隻，實驗期間每3隻小鼠飼養於同一個飼養籠内， 所飼養的魏為：溫度22±2。(：、相職度65±5%，並給予 12小時光暗循環的動物房。 經適應期一週後開始進行飲食介入(每隻小鼠每日分別 給予自由飲食及飲水），並以隨機的方式分為7組，每組各 6隻’且小鼠的月齡及平均體重相似；分別為基礎組[Base] (飲食中油脂為大豆油）、控制組[c](飲食中油脂為大豆油）、 正控制組[IM](於進行強迫游水試驗前給予伊米胺 (unipramine))、n-3多元不飽和脂肪酸EpA組田伙](飲食中 油脂含EPA>60〇/〇)、n-3多元不飽和脂肪酸DHA組口岡 (飲食中油脂含DHA>60%)、複方組合物組[L](飲食中含龍 眼花萃取物、綠蜂膠、國蘭多盼）、咖旨質絲胺酸組[ps](飲 食中含峨脂質絲胺酸）。飲食介入後紀錄各組每日飲食攝取 狀況，並於每週記錄小鼠的體重變化以了解其生長狀況。_ 飲食介入六週後，除基礎組外，每組犧牲前先進行動 物行為分析(強迫游水試驗;Force Swim Test)，進行強迫游水 試驗後的行為模式分析後，將小鼠進行犧牲，犧牲時經由 心臟灌流固定液進行固定，從小鼠的心臟採取血液樣本， 並以含有抗凝血劑 EDTA (ethylene diamine tetraacetic acid) 之紫頭採血管收集血液。將收集到的血液以離心機進行離 心(離心機轉速設定為3,000 rpm，溫度4。(：，時間為10分籲 在里）’將以離心好的血液分為血漿及紅血球，分別以微量離 心管收集後儲存於-80°C冰箱中。 採集完血液後，利用磷酸綠衝液(PBS)由心臟灌流 (transcardiac perfbsion)以清除小鼠臟器内的血液及其他干 擾物質’將所有臟器固定後’取下腦部、心臟、肝臟及腎 臟’臟器以紹箔紙將其稍作包裹後，隨即放入_8〇〇C冰箱中 以待之後實驗分析。 201200147 統計分析 數值以平均值及標準偏差(Mean ± SD或SEM)來表 示，使用SAS 9.1版統計軟體來做數據分析，利用〇ne_way ANOVA進行比較’利用鄧肯多重差距檢定(Duncan’ s multiple range test)來進行事後檢定，當p < 〇 〇5時具有統計 上差異。 & ICN戶斤狀AIN-93M H姐複綠成滅食之組成 成分

乾酪素 糊精化玉米澱粉 蔗糖 玉米澱粉 α ,非營養性主體 (a , Non-Nutritive Bulk) 大豆油 富含EPA之魚油 富含DHA之魚油 AIN-93M礦物質混 合物 L-胱氨酸 AIN-93-VX維他命 混合物 膽鹼 第三丁基氫醌 複方組成物 AIN-93M 飲食 數量（％) 14.00 15.50 10.00 46.57 5.00 4.00 3.50 0.18 1.00 0.25 0,0014 EPA飲食DHA飲食 數量（％)數量（％)

複方糸且成""磷脂質絲胺S 14.00 15.50 10.00 46.57 5.00 14.00 15.50 10.00 46.57 5.00 物飲食 數量（％) 14.00 15.50 10.00 46.57 5.00 4.00 飲食 邀量（％、 14.00 15.50 10.00 46.57 5.00 4.00 4.00 . ' 4.00 3-5〇 3.50 018 0.18 ^00 1.00 °·25 0.25 0.0014 0.0014 3.50 0.18 1.00 0.25 0.0014 0.5 3.50 0.18 1.00 0.25 0.0014 磷脂質絲胺酸 _ 實施例-：複方莫式之影響 對小鼠進行強迫游水試驗，全程以攝影機記錄，試驗 後利用軟體(Clever Sys，Inc. ForcedswimScanTM 2 〇)分析， 而實驗動物的行為將分為： 0.5 9 201200147 a. 劇烈游水(escape):四肢不斷拍打水面的動作， 強烈想逃脫的動作。 且有 b. 攀攸(climb):前肢不斷攀爬容器邊緣的動作。 c_潛水(dive):全身（包含尾巴)都潛入水面以下的動作。 d_靜止期(immobility):漂浮在水面上，沒有任何其他 的動作。 ' e.小動作划糊(swim):紐且小動侧切維持身體 平衡及頭部保持在水面上的動作。 f·焦慮情境：於行為模式分析後，計算水中糞便數。 表一、強迫游水試驗 劇烈游水13.21 ±13.68 象牧 26.08tl8.80' '朁 7欠 1.82 ±1.74" 胃止期 226.2 ±45.2a 期 32.30±27.12 51.84i25.3l» 92.53±70.81^ 42.12±34.51» 37.55±5.5» ~ 69,.3.34,52^ 66.72 ±32.68b 52.9. ±37.34- 7^83,3..8^ 78.73±2..53^ ，19±，·50" 〇〇〇±〇〇〇a 450 ±8-56» 3.94 ±5.68» 3.57±3.04= 127.1 ±60.5» 41.7±44.5C 158.1 ±58.5b „2.3±29.4b 1,9.2±42^ 所有數值為平均值±標準偏差 50.78±18.16ab 99.00±46.38c 42.42t27.21ab 74.32i36.5^ 46.63 ±31,29ab 2同一欄内，有同一字母的數值，為經鄧肯多重差距檢定_ (Duncan s multiple range test)後與其他數值無明顯差異之 數值，P< 0.05· 實驗結果如表一所示，透過強迫游水試驗發現，給予 複方組合物組與控制組比較，可以增加小鼠在強迫游水試 201200147 驗中的攀爬時間，同時也可以減少動物在水中靜止不動的 時間。由此實驗可得知，複方組合物可改善小鼠因強大壓 力所導致之憂鬱情境。 貫％例二：複方組合物對於麟脂質脂肪酸比例之影響 將從血液離心後所取得的血漿、紅血球及小鼠腦前額 葉’進行以下粗脂肪酸萃取。 a. 紅血球：利用親和層析管柱萃取脂肪酸後，再使用 氣相層析儀(GC)分析。 b. 血聚：經萃取脂肪酸後’再使用氣相層析儀(GC)分 析。 C.月®組織：將腦前額葉均質並經脂肪酸萃取後，使用 氣相層析儀(GC)分析。 最後皆利用分析軟體辨認各種脂肪酸的含量並分析各 脂肪酸所佔的百分比。

複方組合 磷脂質絲 物組 胺酸組 C14:0 s 0.23±0.06〇 0.25 ±〇 η κ • ϋ·26±〇.〇4° 〇.46±0.07λ 0.61 ±0.05c 0.43 ±0.29* 0.50 ±0.24* C16:0 s 32.80 ±0.83aA 33.92 ±〇 w。 31.68 ±1.35* 46.56 ±2.67e 53.73 il.737 43.65 ±4.79^41.11 ±2.46 C16:l n-7 1.08 ±0.16a l_〇6 ±〇 3〇a n 丄八 a υ.73±〇.ι9* 〇.62±0.07b 0.82 ±0.18b 0.67 ±0.27* 0.81 ±〇.〇8* C18:0s 12.62 ±0.94〇A 12.〇4±〇8^ A , • 3.16±0_48*c 13.77 士0.80c 14.76 ±0.50 14.69 :1:0.41^4.76 ±1.15 C18:l n-9 15.20 ±0.73o 15.54 ±〇 ςι〇 16·12 ±〇.86ab 18.79 ±2.05c 17.09 ±0.60* 26.88 ±1.05c 26.95 ±1.31 C18:2 n-6 15.28 ±1.30a 14.56 ±0 λλ n • 14·71 士〇.9a 2.52 ±0.31rf 2.68 iCUO^ 6.25 ±1.17c 7.87 ±2.06* C18:3 n-3 0.36 ±0.12 0.24 ±〇 〇o° λ . • 〇.42 ±0.23 1.01 iO.l# 0.60 ±0.32c 〇·53 ±0.52° 0.37 iO.iea1 201200147 C20:l η-9 0.54 ±0·08ο* C20:2 n-6 0.19 ±0.08°* C20:4n-6 13.38 ±1.24° C20:5n-3 0.30 ±0.11°* C22:5 n-3 0.97 ±0.15a C22:6 n-3 7.06 士0.420 0.55 ±0.07〇6 0.14 ±0·05ο 13.81 ±1·110 0.28 ±0.09ο* 1.01 ±0.16° 6.60 ±0.79° 0.51 ±0.12* 0.36 ±〇.〇7ct/ 13.24 ±0.59° 0.32 ±〇.21α* 1.09 ±0.12° 7.40 士〇.74α 0.34 ±0.03c 0.39 iO.08^ 4.21 ±0.75* 2.58 土0.46c 2.04 ±0·37α 6.72 ±0.81° 0.29 ±〇.〇6e 0.27 ±〇.i〇Ac 3.98 ±〇.78*e 0.42 ±0.16° 0.08 ±〇.〇5e 4.68 ±0.99* 0.63 ±0.34° 0.27 ±0.13*c 3.07 ±1.45f 0.08 ±0.08a 〇.27±0.21c 2.88 ±2.24c 0.88 ±0.11^ 0.28 ±0.1 l6c 3.32±1.1〇4c 0.10 t〇.07* 0.23 ±〇-〇9c 2.52 ±1.86c /所有數值為平均值±標準偏差 2同一欄内，有同一字母的數值，為經鄧肯多重差距檢定 (Duncan’ s multiple range test)後與其他數值無明顯差異之 數值，P< 0.05. 由表二可得知，給予複方組合物的組別，其紅血球中 C18:3 n-3脂肪酸比例升高’ C18:2 n-6脂肪酸及C20:2 n-6 脂肪酸的比例降低。 表三、血漿脂肪酸之比例 脂肪酸 ⑻ 基礎組 控制組 正控制組 EPA組 C14:0 s 0.37 ±0.08°* 0.46 ±0.10° 0.59 ±〇.〇9d C16:0 s 13.54±1_84 油 13.31 ±1.7°* 12.56 ±1.55* C16:l n-7 0.61 ±0.2 Γ 1.30 ±0.47° 1.14±〇.37oc C18:0 s 11.62 ±0.97* 10.47 ±0.99° 11.15 士〇.44ολ C18:l n-9 43.59 ±5.33° 45.61 ±4.38°* 45.83 ±4.55°* C18:2 n-6 18.68 ±2.83° 16.89 ±2.11* 16.12 ±2.61Ac C18:3 n-3 0.62 ±0.26* 0.92 ±0.10° 0.20 ±0.04λ C20:l n-9 0.58 ±0.14οΛ 0.64 ±0.07° 0.50 ±0.08* C20:2 n-6 0.77 ±0.22βΑ 0.89 ±0.23° 0.64 ±0.16* C20:4 n-6 5.75 ±0.9 lAc 6.01 ±〇.80οί, 5.79 ±0.906c DHA組複方組合物組磷脂質絲胺酸組 0.63 ±0.07rf 0.76±0.15e 0.24 ±0.07c 0.29 ±〇.〇4*c 14.52 ±1.57° 14.84 ±1.55° 13.61 ±1.75°* 13.40 ±1.45oA 0.68 ±0.13e 0.73 ±0.17e 0.78 ±〇.45Ac 1.27 ±0.88〇W 11.01 ±0.62〇4 10.47 ±0.71° 10.96 ±0.32〇A 10.67 ±0.45° 51.40 ±3.48c 47.83 ±3.00Ac 46.38 ±3.33°* 48.63 ±2.94k. 8.08 ±0.52c 8.13±0.36e 14.07 ±1.49rf 14.88 ±0.73Ci/ 0.38 ±0.10^ 0.33 ±0.176/ 0.52 ±0.1 34c 0.48 ±0.09^ 0.63 土 0.110 0.24 ±0.13" 0.51 ±0.166 0.54 ±0.12οΛ 0.05 ±0.03^ 0.34±0.12e 0.06 ±〇.〇5rf 0.06 ±〇.〇4d 3.68 ±0.9\d 4.92 ±0.82" 6.85 ±1.45° 4.93 ±0.82c 12 201200147 C20:5 n-3 C22:S η·3 C22:6 n-3 0.35 ±0.07^ 0.36 ±0.07°* 0.05 ±0.06° 3.00±0.73c 0.57 ±0.12* Ο.34 ±〇,\3ah 〇<29 ±〇 〇sai> 0.13 ±0.04° 0.14 ±〇.〇4α 0.13±0.06a 1.20 ±0.29A 〇 11^0.03° 0.19±〇.〇3° 〇.13±〇.〇5e tbc 3·38 士0.68& 3.00 士〇.59° 5.31 士0.60c 4.75 ±1.03c 10.73 ±1.75^ 5 51 ±〇 24^ 4.44 ±0.47 /所有數值為平均值±標準偏差 2同一攔内，有同一字母的數值，為經鄧肯多重差距檢定 (Duncan’ s multiple range test)後與其他數值無明顯差異之 數值，P < 0.05. 由表二可得知，給予複方組合物的組別，其金漿中的 C22:6 n-3脂肪酸比例升高，C18:2 η·6脂肪酸及C20:2 n-6 脂肪酸的比例則降低。 表四、腦前額葉脂肪酸之比例 脂肪酸 (%) C14:0 s C16:0 s C16:l n-7 €18:0 s C18:l n-9 'C18:2 n-6 C18:3 n-3 C20:I n-9 C20:2 n-6 C20:4 n-6 C20:5 n-3 C22:5 n-3 C22:6 n-3 正控制組 EPA組 /所有數值為平均值±標準偏差 複方組合物組磷脂質絲胺酸組 基礎組 1.07 ±0.23° 19.59 ±0.37° 0.36 ±0.09° 16.69 ±1.〇〇α 32.08 ±1.76° 3.22 ±〇.〇5° 0.21 ±0.07* 1.59 ±0.20° 0.25 ±0.1 Γ* 7.73 ±0.29* 0.03 ±〇.〇i« 0.21 ±〇.13ft 16_97±Ui0 控制組 1.18±0.08ff 19.26 ±0.32 0 0.36 ±0.08° 17.22 ±0.16°* 31.30±1.03a 3.13 ±0.13e* 0.18±0.03Ar 1.75 ±0.28° 0.19 ±0.08° 7.96 ±0.17°* 0.03 ±0.01° 0.13 ±0.01° 17.32 ±0.73° 0.76 ±0.12ί, 19.65 ±0.50 0.85 ±0.10fc 18.11 ±0.53*c 32.25 ± 1.290 3.00 ±0.22ok 0.13 ±0.02f</ 1.68 ±0.14e 0.31 ±0.05* 8.55 ±0.23° 0.08 ±0.02° 0.15±0.03aA 14.48 ±1.68* 0.25 ±0.09c 20.49 ±0.89 οΛ 0.76 ±0.1〇h 18.42 ±〇.95C£/ 31.73 ±1.07 0 2.09 ±0.53* 0.27 ±0.04° 1.09 ±0.10«· 0.40 ±〇‘〇7(. 6.68 ±〇.77c 0.54 ±0.〇7l 1.03 ±〇.〇6c 16.24 ±0.43° dha m 0.22 ±〇.〇4lrf 19.82 ±1.38°* °-41 ±〇.〇9° •7.57 ±〇.44οΛί 3〇·7〇 ±2.10° 2·〇8 ±0.3 lc ' •20 ±0.16fti °·28 ±〇.〇5oft 6·38 ±〇.35^ 〇17±0.03λ °·17±〇.〇ιοΑ 20.33 ±1.21e 0.09 ±0.03^ 21.01 ±0.02* 0.41 ±0.07° 19.17^:0.31^ 30.89 ±0.92° 2.48 ±0.1 〇ώ 0.04 ±0.02c 1.20 ±0.13*° 0.06 ±0.00^ 8.17±0·72〇Λ 0.06 ±0.04° 0.11 ±0.00° 16.32 ±0.68° 〇.14±〇.〇4c</ 20.06 ±0.40 αΑ 0.37 ±〇.〇3° 18.08 ±〇.2〇Ac 32.33 ±1.32° 2.72 ±〇.l 9*ct/ 〇·〇8 ±〇.〇6λ 1.46 ±0.34油 007 £0.07^ 8.19 ±〇.73°* 0.05 ±〇.〇2β 〇·15±〇.〇3οΛ 16.27 ±0.88° 13 201200147 2同一攔内，有同一字母的數值，為經鄧肯多重差距檢定 (Duncan’ s multiple range test)後與其他數值無明顯差異之 數值，P< 0.05. 由表四可得知，給予複方組合物的組別，其腦前額葉 中C14:0 s脂肪酸、C16:0 s脂肪酸、Cl8:2n-6脂肪酸及C20:2 n-6脂肪酸的比例降低。 貫驗結果如表二至表四所示，給予複方組合物的組 別，其腦部n-3不飽和脂肪酸的濃度提升及n_6不飽和脂肪 酸的濃度降低。由此實驗可得知，複方組合物可改善神經 發炎之現象。 ί 實施例三：複方組合物對於腦前額葉中腦源性神經滋養因 子濃度之影響 將小鼠腦部進行均質後利用商業試劑組測定腦源性神 經滋養因子含量。·抗體與腦源性神經滋養因子的專一 性結合，再加入鏈霉親和酵素(streptavidin enzyme)、基質和 終止反應試劑，將其吸光值帶入標準曲線内，即可推算出鲁 樣品中腦雜神麵翻子的濃度。f聽果如第丨圖所 不’給予複方組合物的組別，其腦源性神經滋翻子的濃 度顯著高於基礎組、控制組及正控做。由此實驗可得知， 複方組合物可提升射腦源性神經滋養奸㈣度，其可 以调整神轉導物’進㈣加神經元之間的連接並促 經細胞之修復及新生。 J4 201200147 細胞實.驗 以 RPMI-1640 培養基(Roswen 卩地 Memorial Institute) 並添加5%胎牛血清、10%馬血清、42碰碳酸氫納（s〇dium bicarbonate)、2mM麩醯胺酸進行PC12細胞 (pheochromocytomaceU)培養，培養於 5% 二氧化碳(c〇2)、 37C的恆溫培養箱中培養。培養基2〜3天更換，於6〜7天 進行繼代培養。

將PC12細胞依前述方式培養至6 5χ1〇5 ceUs/mL，每皿 均加配置好的新鮮ΚΡΜΙ_ 1640培養基。控制組並不加入介 入物負，複方組合物組加入8〇〇 # g/ mL複方組合物，過氧 化氫組加入0.5 mM過氧化氫，並置回二氧化碳培養箱中繼 續培養24小時，之後收集細胞進行檢測。複方組合物及過 氧化氫組則於皿中加配置好的新鮮RPMJ4640培養基後， 一併加入800/zg/mL複方組合物，置回二氧化碳培養箱中 預培養30分鐘後，加入〇.5福過氧化氫，再繼續培養24 小時，之後收集細胞進行檢測。

細胞實驗設計與分組及各組介入物質 組別 — &合~~ " 控制 6.5 X lO^ells/mL ~ ΐίϊΐ物 :·5χ 1〇5 cdls/mL + 800//g/mL複方組合物 過氧化虱 6.5 X 1〇 cells/mL + 0.5 mM過氧化氫 複方組合物+過氧6.5 X 1〇5 cdis/mL + 800//g/mL複方組合物_ 實施例四：複方組合物對於細胞生長情形之影響 15 201200147 將進行實驗24小時之6.5xl05 ceIIs/mLPC12細胞收集 後打散，取50 v L細胞液與等體積的4%台紛藍(trypan blue) 均勻混合，以計數板對細胞數做計算，進行細胞計數，以 觀察細胞生長情形，並將細胞生長情形攝影。實驗結果如 表五及第2圖所示，在正常狀態下，給予複方組合物組別 之細胞密度比控制組高；而在氧化壓力的狀態下，給予複 方組合物組別之細胞密度比沒有給予複方組合物的組別 高。由此實驗可得知，複方組合物在正常狀態及氧化壓力 狀態下、皆可提升細胞存活率。 表五、細胞生長情形； 實驗組別 初始細胞密度 (105 cells/mL) 最終細胞密度 (105 cells/mL) Ρ 控制 6.5 8. 30 + 0.10 < 0.0001 複方組合物（L) 6. 5 11·17±0.15 < 0. 0001 過氧化氫 6.5 2. 27 ±0.15 < 0.01 複方組合物+過氧化氫（LH) 6.5 4. 07 + 0.12 < 0.001 所有數俏為单始佶+碑淮抱ϋ 貫施例五：複方組合物對於細胞單胺氧化酶活性之影響 將實驗24小時PC12細胞收集後以超音波細胞粉碎機 將細胞膜打破，於96孔分析盤中，加入i u/mL辣根過氧 晦_)、1 mM苯曱胺(單胺氧化酶B)或j視血清素(單 胺氧化酶 A)、50μΜ Amplex red、顧鉀缓驗(potassium

Phosphate buffer)及樣品均質之上清液，室溫下反應6〇分 鐘’以妓測定。實驗結果如第3圖及第4圖所示，給予 201200147 複方組合物組別之單胺氧化酶A與單胺氧化酶b活性皆顯 著低於控制組。由此實驗可得知，複方組合物在正常狀態 及氧化壓力狀態下皆可降低細胞單胺氧化酶之活性。 實施例六：複方組合物對於細胞腦神經滋養因子之影響 將已物質介入24小時之PC12細胞收集後以超音波細 胞粉碎機將細胞膜打破，以腦源性神經滋養因子間接式酵 素連結免疫吸附組(Brain Derived NeurotiOphie Paetoi· Sandwich ELISA Kit)(購自ChemiKine)酵素免疫分析法來進 鲁 行檢測，以螢光測定。實驗結果如第5圖所示，給予複方 組合物組別之腦神經滋養因子濃度顯著高於控制組。由此 實驗可得知，複方組合物在正常狀態及氧化壓力狀態下皆 可提升細胞腦神經滋養因子之濃度。 综上所述，本發明用以改善神經退化性疾病之複方組 成物具有提昇腦中n-3不飽和脂肪酸濃度，降低腦中n_6不 飽和脂肪酸濃度，腦中腦源性神經滋養因子濃度，降低細 • 胞中單胺氧化酶活性，提昇細胞腦源性神經滋養因子濃度 之功效，進而改善腦部發炎反應、神經傳導物質減少及神 經細胞死亡之現象。因此，本發明之複方組成物可作為改 善神經退化性疾病，如失智症之阿茲海默症或帕金森氏 症，及伴隨神經退化性疾病之憂鬱症之用途。 以上所舉實施例，僅用為方便說明本發明並非加以限 帝1 ’在不離本發明精神範嘴，熟悉此一行業技藝人士依本 發明申請專利範圍及發明說明所作之各種簡易變形與修 201200147 飾，均仍應含括於申請專利 【圖式簡單說明】

第1圖係複方組合物對於腦前額葉中腦源性神經滋着 因子(Brain Derived NeurotropWc心㈣濃度之影響的结果 分析圖； S (所有數值為平均值±標準偏差；具有的數 值，為經鄧肯多重差距檢定(Duncan，s __胃 test)後’與其他數值有明顯差異之數值，p<〇吻 第2圖係複方組合物對於細胞生長情形影響之照相圖，· 第3圖係複方組合物對於細胞單胺氧化酶八活性影響 之結果分析圖； ’/曰 (所有數值為平均值±標準偏差；‘‘#，，代 於控制組，P<_ “*，，代表_高於控制組^ 0.05) 第4圖係複方組合物對於細胞單胺氧化酶B活性影響 果分析11 ;以及 /曰 (财數值為平均值土標準偏差；“ #，，代表明顯低 於控制組’Ρ<α〇5; 代表明顯高於 0.05) Ρ 第5圖係複方組合物對於細胞腦神經滋養因子影塑 結果分析圖。 y s 丄（所有數值為平均值±標準偏差；代表明顯 高於控制組，p< 〇.〇5) ‘ 201200147 【主要元件符號說明】 無。 【參考資料】 1. Kessler RC, Chiu WT, Demler O, Merikangas KR, Walters EE. Prevalence, severity, and comorbidity of 12-month DSM-IV disorders in the National Comorbidity Survey Replication. Arch Gen Psychiatry. 2005 ;62:617-27. 2. American Psychatric Association: Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders, 4th edition, Text Revision. ® Washington, DC, American Psychatric Association, 2000. 3. Cagnin, A., D. J. Brooks, A. M. Kennedy, R. N. Gunn, R. Myers, F. E. Turkheimer, T. Jones, and R. B. Banati, 2001, In-vivo measurement of activated microglia in dementia: Lancet, v. 358, p. 461-7. 4. Tomiyama, Y., J. E. Brian, Jr., and Μ. M. Todd, 2000, Plasma viscosity and cerebral blood flow: Am J Physiol $ Heart Circ Physiol, v. 279, p. H1949-54. 5. Ajmani, R. S., E. J. Metter, R. Jaykumar, D. K. Ingram, E. L. Spangler, O. O. Abugo, and J. M. Rifkind, 2000, Hemodynamic changes during aging associated with cerebral blood flow and impaired cognitive function:

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Claims (1)

1. 201200147 七 申請專利範圍： ^.-種用以改善神經退化性疾敵複方組成物 列成分所喊： …节由下 80%重量百分比之龍眼花萃取物； 10%重量百分比之綠蜂膠；以及 10%重量百分比之國蘭多酚。 2.如申請專觀㈣丨項所述㈣改善神經退化 ，退化性疾病之改善係指提昇腦 甲nd不飽和脂肪酸〉農度。 範：Γ述—善神經退化性疾病之 2方,旦成物’其t，神魏倾疾紅改祕 中n-6不飽和脂肪酸濃度。 肀低細 4.=利範圍第1項所述用以改善神經退化性疾病之 複方組成物，其巾，神、_她疾叙 中腦源性神經滋養因子濃度。 乎4曰耠歼月自 用以改善神經退化性疾病之 胞單胺珅經退化性疾病之改善係指降低細 6. 如申請專利範圍第1項所述用以改善触退化性广广 複方組成物，Α中，疾病之 胞腦源性神㈣翻子;^化性雜之改善係指提昇細 7. 如申請專利範圍第丨項所 複方組成物，其中，神=改善神 η , ^ 甲退化性疾病係指失智症。 申_範圍第7項所述用以改善神經退化性疾病之 26 201200147 ^組成物’射’上述失智症係指㈣海默症及/或帕 金森氏症。 9 _如申請專利範圍第〗項所述 ^ 疋用以改善神經退化性疾病之 複方組成物，其包含作為保健食品用之添加劑。 10.如申請翻範㈣9項輯_ 之複方組成物，其中，上 化〖生疾病 型劑。 q加劑’其為佐劑及/或賦

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