TW200914052A - RNAi-related inhibition of TNFα signaling pathway for treatment of glaucoma - Google Patents

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200914052 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域；3 發明領域 本發明係關於藉由消音TNFa細胞表面受體TNF受體-1 5 (TNFR1) mRNA或TNFa轉化酶(TACE/ADAM17) mRNA用 以消音腫瘤壞死因子a (TNFa)之干擾性RNA組成物領域。 消音此等TNFa標靶可用於治療患有TNFa相關聯病症或有 發展成此等病症之風險之病人之治療，其中該病症為眼壓 (IOP)升高相關聯之眼部病症。 10 【先前技術】 發明背景 青光眼為共同具有某些臨床特徵之一組多種不同視神 、經病變。青光眼造成視力的喪失原因係由於神經視網膜中 視網膜神經節細胞的選擇性死亡，於臨床上係藉視野的特 15徵性改變、視神經層缺損及視神經頭（ONH)的進行性杯狀 反趣等特徵性變化做臨床診斷。發展成青光眼的主要風險 因子之—為眼高壓（眼壓升高，IOP)的存在。需要適當眼壓 來、維持眼球的形狀且提供壓力梯度來允許水狀液流至無血 s的眼角膜及水晶體。IOP高度也涉及正常壓力青光眼 20 (NTG)的病因，由病人藉IOP降低藥物可獲益可證。一旦對 =TG病人的I0P讀數做中心角膜厚度調整，則可發現許多此 等病人為高眼壓。 月光眼所弓丨發之IOP升高係由於於小梁網絡(TM)之水 夜w出阻力增加所致，TM是一種位在眼前房之虹膜-角 5 200914052 膜角隅之小型特殊組織。青光眼對TM造成的變化包括TM 細胞的喪失及胞外殘骸包括含蛋白質之班塊狀物質的沈積 及堆積。此外，於青光眼0ΝΗ也有變化。於患有青光眼的 眼球，ΟΝΗ神經膠細胞的型態及移動性上有變化。回應於 5 Ι0Ρ升高及/或暫時性缺血的影響，ΟΝΗ胞外基質的組成改 隻，神經膠細胞及視網膜神經節細胞軸突的型態變更。 原發性青光眼係來自於眼内液流動的干擾，具有解剖 上或生理上的基礎。繼發性青光眼係由於眼球受傷或創傷 或既有的疾病所導致的結果。原發性開放角隅性青光目『 10 (POAG)也稱作為慢性青光眼或單純青光眼占全部原發性 青光眼的90%。POAG的特徵是小梁網絡的退化，結果導致 對於流體從眼中排出的阻力異常升高。此種阻力的結果導 致眼球跨越升高阻力將正常產生的流體驅逐所需要的丨〇 ρ 增加。 15 目前抗青光眼治療包括使用水狀液生成抑制劑或促進 葡萄膜鞏膜流出藥劑、雷射小梁塑形術或小梁切開術（是— 種改善排水的過濾手術）來降低Ι〇Ρ。藥物抗青光眼辦法具 有多種非期望的副作用。舉例言之縮酮劑諸如毛果芸香鹼 可能造成視力的模糊對視覺有其它負面影響。系統性投予 2〇碳酸脫水酶抑制劑(CAI)也會造成呕吐、消化不良' 倦怠、 及代謝性酸中毒。進一步，某些貝它阻斷劑由於對肺臟組 織的β-2受體的作用結果引發嚴重的肺部副作用。擬交感神 經作用劑造成心搏過速、心律不整及高血壓。此等副作用 導致病人的遵從性減低或病人終止治療。此外，目前Ι〇ρ 200914052 降低治療的效果相當短，每天需要重複給藥，於某些情況 下效果會與日倶減。 有锻於β光眼的重Hx及先前^療方法的缺陷，期 望具有改良的治療方法。 5 腫瘤壞死因子a(TNFa)為發炎反應的主要媒介物質， * 涉及多項人類疾病。TNFa結合至其細胞表面受體亦即ΤΝρ 受體-1 (TNFR1)活化影響寬廣多種細胞反應，包括細胞〉周 亡和發炎的發訊串級。T N F a本身初步表現為無活性的與膜 結合的前驅物。由細胞表面釋放出活性形式TNFa需要藉 10 TNFa轉化酶(TACE/ADAM17)對前驅物進行蛋白質分解處 理。抑制TNFR1、TACE或二者之表現將有效降低顶仏之 作用。 此外，研究暗示TNFa發訊涉及青光眼的病程。視網膜 神經節細胞對TNFa誘發的細胞凋亡敏感（Fuchs等人， 15 2005 ’ Invest. Ophthalmol, Vis. Sci. 46:2983-2991)。TNFa 及其受體TNFR1之表現於患有青光眼的眼球增加(Tezel等 〇 人，2001，Invest. Ophthalmol. Vis. Sci· 42:1787-1794 ; Yuan 等人，2000，Glia 32:42-50; Yan等人，2000，Arch. Ophthalmol. 118:666-673)。回應於模擬缺血及流體靜力壓的升高，神經 20 膠細胞分泌TNFa，協助共同培養的視網膜神經節細胞的細 胞调亡性死亡（Tezel等人，2000，J. Neurosci. 20:8693-8700)。TNFa啟動基因的多形性關聯青光眼的風險 增高（Lin等人，2003，眼球 17:31-34; Funayama等人，2004， Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 45:4359-4367)。如此，期望干 200914052 擾TNFa發訊來保護視網膜神經節細胞免於眼内壓（I〇p)的 暫時性升高’以及治療及/或預防IOP升高。 本發明可解決前述眼部病變，提供使用靶定TACE及/ 或TNFR1之干擾性RNA用於治療與ιορ升高相關聯之眼部 5 病症諸如青光眼之組成物及方法。McSwiggen等人之美國 專利公告案2005/0227935 ’公告日期2005年10月13日係有 關RNA干擾媒介的TNF及TNF受體基因表現之抑制。但此公 告案並未教示如此處提供之RNA干擾之特定標靶序列。 【明内】 10 發明概要 本發明提供干擾性RNA，其消音TACE mRNA或TNFR1 mRNA之表現’如此干擾前驅物進行蛋白質分解處理成為 TNFa，或干擾TNFa結合至其細胞表面受體，因而於患有 TNFa相關聯之眼部病症病人或有發生與眼壓(I〇p)升高相 15關聯之TNF «相關聯之眼部病症風險之病人體内衰減TNF a活性，且降低TNFR1或TACE濃度。本發明之干擾性RNA 可用於治療患有10 P升高諸如高眼壓及青光眼之病人。 本發明也提供一種於個體衰減TNFR1或TACE mRNA 之表現之方法。於一個面相中，該方法包含對該個體投予 20包含有效量之具有19至49核苷酸長度之干擾性RNA及藥學 上可接受之載劑之組成物。於另一面相中，投藥係投予個 體眼部用於衰減人體之TNFR1或TACE之表現。 於一個面相中’本發明提供一種於一個體之眼部衰減 TACE mRNA之表現之方法，包含對該個體之眼部投予一干 200914052

擾性RNA，該干擾性RNA包含可辨識與SEQ ID NO : 1相對 應之mRNA部分之一區，SEQ ID NO : 1為編碼TACE之訊息 cDNA序列（基因存庫存取號碼NM_〇〇3183)，其中該TACE mRNA之表現藉此獲得衰減。此外，本發明提供於有需要 5之個體治療TNFa相關聯之眼部病症之方法，包含對該個 * 體之眼部投予一干擾性RNA，其包含可辨識與SEQ ID NO: 1之部分相對應imRNA部分之一區，其中藉此衰減 TACE mRNA之表現。

" 本發明也提供一種於一個體之眼部衰減TNFR1 mRNA 10之表現之方法，包含對該個體之眼部投予一干擾性rna， 該干擾性RNA包含可辨識與SEq ID NO : 2相對應之mRNA 部分之一區，SEQ ID NO : 1為編碼TACE或TNFR1之訊息 cDNA序列（基因存庫存取號，其中該TNFR1 mRNA之表現藉此獲得衰減。此外，本發明提供於有需要 15之個體治相關聯之眼部病症之方法，包含對該個 體之眼部投予一干擾性RNA，其包含可辨識與SEQ ID ( NO : 2之部分相對應imRNA部分之一區，其中藉此衰減 TNFR1 mRNA之表現。 於若干面相中，本發明之干擾性RNA係設計成靶定與 20 SEQ ID N0 : 1之部分相對應之mRNA，其中該部分包含SEQ IDNO : 1 之核 ^:酸297、333、334、335、434、470、493、 547 、 570 、 573 、 618 、 649 、 689 、 755 、 842 、 844 、 846 、 860、878、894、900、909、910、913、942、970、984、 1002' 1010、1〇53、1064、1137、1162、1215、1330、1334、 9 200914052 1340、1386、1393、1428、1505、1508、154卜 1553、1557、 159卜 1592、1593、1597、1604、1605、1626、1632、1658 ' 166卜 169卜 1794、1856、1945、1946、1947、1958、2022、 2094、2100、212卜 2263、2277、2347、2349、2549、2578、 5 2595、2606、2608、2629、2639、2764、2766、2767、2769、 3027、3028、326卜 3264、3284、3313、3317、3332或3337。 於特定面相中，「SEQ ID NO : 1之部分」長約19至約49核 苷酸。 於若干面相中，本發明之干擾性RNA係設計成靶定與 10 SEQ ID NO: 2之部分相對應之mRNA，其中該部分包含SEQ ID NO : 2之核苷酸 124、328、387、39卜 393、395、406、 421 、 423 、 444 、 447 、 455 、 459 、 460 、 467 、 469 、 470 、 471 、 475 、 479 、 513 、 517 、 531 、 543 、 556 、 576 、 587 、 588 、 589 、 595 、 601 、 602 、 611 、 612 、 651 、 664 、 667 、 15 668、669、677、678、785、786、788、791、792、804、 813 、 824 、 838 、 843 、 877 、 884 、 929 、 959 、 960 、 961 、 963、964、965、970、973、974、1000、1002、1013、1026、 1053、1056、1057、1058、116卜 1315、1318、1324、1357、 1360、1383、1393、1420、147卜 1573、167卜 2044、2045、 20 2046、2047、2048、2089、2090、2091 或 2092。於特定面 相中，「SEQ ID NO : 2之部分」長約19至約49核苷酸。 於若干面相中，本發明之干擾性RNA長約19至約49核 苷酸。於其它面相中，干擾性RNA包含一訊息核苷酸股及 一反訊息核苔酸股’其中各股具有與另一股接近完美接續 10 200914052 互補的長至少19核苔酸之一區；及其中該反訊息股可辨識 ⑻與SEQ ID NO : 1之一部分相對應之TACE抓似之一部 分，且具有與該TACEmRNA部分至少接近完美接續互補之 長至少19核普酸之一區；或(的與卿1〇购：2之一部分相 5對應之TNFR1 mRNA之一部分，且具有與該TNFRi ^ 部分至少接近完美接續互補之長至少19核苷酸之一區。訊 息股及反訊息股可藉鏈接子序列連接，鏈接子序列允許訊 息股及反訊息股彼此雜交，藉此形成如本文所述之髮夾環 # 圈結構。 10 於又有其它面相中，本發明之干擾性RNA為單股干擾 性RNA，及其中該單股干擾性!^八辨識與部分SEQ m NO : 1或SEQ ID NO : 2相對應之mRNA部分。於若干面相 中，該干擾性RNA具有與該SEQIDNO: 1或SEQIDNO: 2 之部分相對應之該mRNA部分至少接近完美接續互補之長 15至少19核苷酸之一區。於其它面相中，該部分SEQ ID NO : 1 包含SEQ ID NO : 1 之核 ^:酸297、333、334、335、434、 ί 470、493、547、570、573、618、649、689、755 ' 842、 844、846、860、878、894、900、909、910、913、942、 970、984、1002、1010、1053、1064、1137、1162、1215、 20 1330、1334、1340、1386、1393、1428、1505、1508、1541、 1553、1557、159卜 1592、1593、1597、1604、1605、1626、 1632、1658、166卜 169卜 1794、1856、1945、1946、1947、 1958、2022、2094、2100、212卜 2263、2277、2347、2349、 2549、2578、2595、2606、2608、2629、2639、2764、2766、 200914052 2767、2769、3027、3028、326卜 3264、3284、3313、3317、 3332或3337。於其它面相中，該部分SEQ ID NO: 2包含SEQ ID NO : 2之核誓酸124、328、387、391、393、395、406、 421、423、444、447、455、459、460、467、469、470、 5 471 、 475 、 479 、 513 、 517 、 531 、 543 、 556 、 576 、 587 、 588 、 589 、 595 、 601 、 602 、 611 、 612 、 651 、 664 、 667 、 668、669、677、678、785、786、788、791、792、804、 813 、 824 、 838 、 843 、 877 、 884 、 929 、 959 、 960 、 961 、 963、964、965、970、973、974、1000、1002、1013、1026、 10 1053、1056、1057、1058、116卜 1315、1318、1324、1357、 1360、1383、1393、1420、147卜 1573、167卜 2044、2045、 2046 、 2047 、 2048 、 2089 、 2090 、 2091或2092 。 於又有其它面相中，本發明之干擾性RNA包含：（a)具 有與 SEQ ID NO : 3及 SEQ ID NO : 14- SEQ ID NO : 58 中之 15 任一者相對應之mRNA之3’端倒數13核苷酸至少90%序列 互補度或至少90%序列相同性之長至少13接續核苷酸之一 區；⑻具有與SEQ ID NO : 3及SEQ ID NO : 14- SEQ ID NO : 58中之任一者相對應之mRNA之3,端倒數14核苷酸至 少85%序列互補度或至少85%序列相同性之長至少Η接續 20核苔酸之一區；或(c)具有與SEQ ID NO : 3及SEQ ID NO : 14- SEQ ID NO : 58中之任一者相對應之mRNA之3’端倒數 15、16、17、或18核苷酸至少80%序列互補度或至少8〇%序 列相同性之長至少15、16、17、或18接續核苷酸之一區； 其中藉此衰減TACE mRNA之表現。 12 200914052 於又有其它面相中，本發明之干擾性RNA包含：（a)具 有與SEQ ID NO : 155- SEQ ID NO : 201中之任一者相對應 之mRNA之3’端倒數13核苷酸至少90%序列互補度或至少 90%序列相同性之長至少13接續核苷酸之一區；（b)具有與 5 SEQ ID NO : 155- SEQ ID NO : 201 中之任一者相對應之 mRNA之3’端倒數14核苷酸至少85%序列互補度或至少85% 序列相同性之長至少14接續核苷酸之一區；或⑷具有與 SEQ ID NO : 155- SEQ ID NO : 201中之任一者相對應之 f mRNA之3’端倒數15、16、17、或18核苷酸至少80%序列立 10 補度或至少80%序列相同性之長至少15、16、17、或18接 續核苷酸之一區；其中藉此衰減TNFR1 mRNA之表現。 於額外面相中，本發明之干擾性RNA或包含本發明之 干擾性RNA之組成物係藉由局部、玻璃體内、經鞏膜、眼 周、結膜、腱下、眼房内、視網膜下、結膜下、眼球後、 15或淚小管内途徑投予個體。干擾性RNA或組成物例如圩逸 過活體内干擾性RNA表現載體之表現而投予。於若干面相 ί / 中，干擾性RNA或組成物可經由噴霧、經頰、經皮、鎳皮 内、經吸入、經肌肉、經鼻内、眼内、肺内、靜脈、腹内、 經鼻、經眼、經口、經耳、經腸道外、貼片、皮下、舌下、 20 局部、或經皮等途徑投予。 於一個面相中，本發明之干擾性RNA分子經分離。「嫁 分離」一詞表示干擾性RNA脫離其整個自然環境。 本發明進一步提供於有需要之個體治療TNFa相關聯 之眼部病症之方法，包含對該個體投予一種組成物，該龈 13 200914052 成物包含可透過RNA干擾而向下調節TACE或TNFR1基因 之表現之雙股siRNA分子，其中該siRNA分子之各股各自長 約19至約27核苷酸，以及該siRNA分子之一股包含一核苷酸 序列其具有與TACE或TNFR1基因相對應之mRNA實質上 5 互補度，故該siRNA分子透過RNA干擾指導mRNA之分解。 於若干面相中，siRNA分子可經由喷霧、經頰、經皮、經皮 内、經吸入、經肌肉、經鼻内、眼内、肺内、靜脈、腹内、 經鼻、經眼、經口、經耳、經腸道外、貼片、皮下、舌下、 局部、或經皮等途徑投予。 10 本發明進一步提供除了第一干擾性RNA外，將一第二 干擾性RNA投予一個體。該第二干擾性RNA可靶定於與第 一干擾性RNA相同之mRNA標靶基因或可靶定於不同基 因。進一步，可以類似方式投予第三、第四或第五等干擾 性 RNA。 15 使用如此處所述之任一實施例用於衰減TACE或 TNFR1 mRNA之表現用之藥物的製備之用途也屬於本發明 之實施例。 本發明之特佳實施例由後文若干較佳具體實施例之進 一步細節說明及申請專利範圍將更為彰顯。 20圖式簡單說明 第1圖提供以各自為1〇 nM、1 nM '及〇.1 nM之TNFR1 siRNA #1、#2、#3、及#4及不含RISC的對照 siRNA ; 10 nM 之非靶定對照siRNA (NTC2);及緩衝液對照（_siRNA)轉移 感染GTM-3細胞之TNF1西方墨點分析。箭頭指示55 kDa 14 200914052 TNF1帶與42kDa肌動蛋白帶之位置。

【實施方式;J 較佳實施例之詳細說明 此處所述細節僅供舉例說明本發明之較佳實施例之討 5論，相信可提供本發明之多個實施例之原理及構想等面相 之最有用且最容易瞭解之說明。就此方面而言，未曾試圖 顯示比較基礎瞭解本發明所需之本發明結構細節之更進一 步細節，圖式及/或實例之說明讓熟諳技藝人士瞭解實際上 如何具體實施本發明之若干形式。 10 下列定義及解釋表示且意圖控制於任何未來組成結 構，除非於後文實例中有明確無疑義之修飾，或當該定義 之應用讓任何組成結構變成無意義或大致上無意義。當該 術語之組成結構變成無意義或大致上無意義之情況下，可 採用早氏子典弟3版或熟諸技藝人士已知之字典諸如牛津 I5生物化學及分子生物學字典(編者Anthony Smith，牛津大學 出版社，牛津，2004年)之定義。 如此處使用，除非另行陳述，否則全部百分比皆為重 量百分比。 如此處使用，除非另行指不’否則r ·一」一詞表示「一 2〇個」、「至少一個」或「一個或多個」。除非内文另行要求， 否則此處使用之單數詞將包括多數，而多數詞包括單數。 於若干實施例中，本發明提供干擾性RNA分子，其透 過RNA干擾可指示TNFa細胞表面受體TNF受體-1 (TNFR1) mRNA，或 TNFot轉化(TACE/ADAM 17，此處稱作為「TACE」） 15 200914052 mRNA (TACE mRNA之抑制可執行腫瘤壞死因子a (TNFa) 活性的減低)之裂解及/或分解。TNFot結合至其細胞表面受 體TNF受體1 (TNFR1)，活化發訊串級，影響多項細胞反應， 包括細胞凋亡及發炎。TNFa本身最初係表現為無活性之與 5 膜結合之前驅物。由細胞表面釋放活化型TNFa需要藉TNFa 轉化(TACE/ADAM17)(屬於「分解素及金屬蛋白」（ADAM) 家族中的一個成員）對該前驅物進行蛋白質分解處理。 根據本發明，抑制TNFR1 mRNA、TACE mRNA、或 TNFR1 mRNA及TACE mRNA二者之表現可有效抑制TNFa 10 之作用。進一步’如前文所述，外生性提供或内生性表現 之干擾性RNA可特別有效消音TNFR1 mRNA或TACE mRNA。 RNA干擾(RNAi)是一種雙股RNA (dsRNA)用來消音 基因表現之程序。雖然不欲受理論所限，RNAi始於將較長 15的dsRNA藉RNaselll狀切割（dicer)裂解成為小型干擾性 RNA (siRNA)。SiRNA為dsRNA，通常長約19至28核替酸或 20至25核苷酸或21至22核苷酸且經常含有2-核苷酸3，旁懸 部分及5碟酸端基及3’經基端基。siRNA之一股合併入稱作 為RNA誘導消音複體(RISC)之核糖核蛋白複體。Rise使用 2〇此股siRNA來識別至少與所合併的siRNA股部分互補的 mRNA分子’然後裂解此等標把mRNA，或抑制其轉譯。因 此併入RISC之該siRNA股稱作為嚮導股或反訊息股。另一 siRNA股稱作為旅客股或訊息股，另一 siRNA從該siRNA中 去除’且與該標把mRNA至少部分同源。熟諳技藝人士瞭 16 200914052 解原則上,飄之任—股皆可併入Risc且可作為嚮導股。 但siRNA設計（例如於期望之嚮導股5,端之处从二倍體安 定性降低)可有利於期望的嚮導股結合人RISC。 siRNA之反成息股為其中反訊息股結合入Rue之 5 S1RNA之活性指導劑，如此允許RISC識別帶有與用於裂解 或轉澤遏止的反訊息siRNA股至少部分互補之標靶 mRNA。具有與嚮導股至少部分互補之序列之mRNA進行 RISC所媒介之裂解，結果導致該mRNA之及由此mRNA所 C 編碼之相對應的蛋白質之穩態程度降低。另外 ，RISC也可 10透過轉譯遏止而降低相對應之蛋白質的表現而未裂解標靶 mRNA。 本發明之干擾性RNA顯然係以催化方式作用於標靶 mRNA之裂解，亦即干擾性RNA可以低於化學計算量執行 標把mRNA之抑制。比較反訊息治療，需要顯著較少量干 15擾性RNA來提供於此等裂解條件下的治療效果。 於若干實施例中，本發明提供使用干擾性RNA抑制 \J TACE或TNFR1標靶mRNA之表現之方法，如此降低患有 TACE或TNFR1所媒介之眼部病症之病人之TACE或TNFR1 含量。根據本發明，外來提供或内部表現之干擾性RNA執 20 行於眼組織之TACE或TNFR1表現的消音作用。 如此處使用「衰減mRNA之表現」一詞’表示投予或 表現定量干擾性RNA (例如siRNA)來透過mRNA裂解或透 過直接抑制轉譯而減少標靶mRNA之轉譯成為蛋白質。「抑 制」、「消音」及「衰減」等詞用於此處表示標靶mRNA或 17 200914052 相對應之mRNA之表現比較於無本發明之干扉娜存在 下，該標乾mRNA或該相對應之蛋白質之表現可測量地降 低。標把mRNA或相對應蛋白f之表現降低俗稱為「擊倒 (knock-down)」，且係比較於投予或表現非較的對照⑽八 5 (例如非蚊的對—RNA)後存在的含量表*。此處所述實 施例預期50%至1〇〇%間（含)之表現量的「擊倒」。但用於本 發明之目的並非必要達成此種擊倒程度。 擊倒常見經由使収量聚合連鎖反應(qPCR)擴增測 量mRNA含量或藉西方墨點或鍵接免疫吸附檢定分析 10 (ELISA)測量蛋白質含量進行評估。分析蛋白質含量，提供 mRNA裂解及轉譯抑制的評估。料測量擊倒之額外技術 包括RNA溶液雜交、核酸保護、北方雜交、使用微陣列之 基因表現監視、抗體結合、放射性免疫檢定分析、及發光 活化細胞分析。 15 藉本發明之干擾性RNA分子衰減TACE或TNFR1之表 現於人體或其它喷乳動物可藉由觀察青光眼症狀的改良諸 如眼壓的改善、視野缺損的改善、或視神經頭部變化的改 善(舉例)推測得知。 於例如HeLa細胞干擾性rNa擊倒内生性標乾基因表 20現程度之能力可於試管内評估如下。於轉移感染前24小 時，HeLa細胞接種於標準生長培養基(例如補充1〇%胎牛血 清之DMEM)。轉移感染例如係使用達摩費（Dharmafect) i (達摩康公司（Dharmacon)，科羅拉多州拉法葉）根據製造商 之指示於由0.1 nM-100 nM之干擾性尺]^八濃度進行。Si對照 18 200914052 (SiCONTROL)非靶定siRNA #1及si對照親週期素 (CyCl〇philin) B SiRNA (達摩康公司）分別用作為陰性對照 及陽性對照。轉移感染後24小時，使用塔曼(TAqMAN)基 因表現檢定分析（其較佳重疊標乾位置，應用生物系統公司 5 (A卯1ied Bi〇systems)，加州福斯特城）藉qPCR評估標靶 mRNA濃度及親週期素B mRNA(ppiB，NM—刪942)濃度。 當轉移感染效率為100%時，陽性對照siRNA大致上獲得親 週期素BmRNA之完全擊倒。因此，經由參照使用親週期素 B siRNA轉移感染細胞中的親週期素B mRNA濃度而校正 1〇標femRNA擊倒得知轉移感染效率。轉移感染後抑小時 (實際時間依據蛋白質週轉率決定），例如藉西方墨點法評估 標靶蛋白質濃度。由培養細胞分離RNA及/或蛋白質之標準 技術為熟諳技藝人士眾所周知。為了減少非特異性偏離目 標效應的機會，使用於標靶基因表現可產生期望的擊倒程 15度之最低可能的干擾性RNA濃度。人角膜上皮細胞或其它 人眼細胞系也可用於評估干擾性尺>1八擊倒内生性標靶基因 之能力。 人小梁網絡(TM)細胞或其它人眼細胞系也可用於評 估干擾性RNA擊倒内生性標靶基因濃度的能力。tace—干 擾性RNA或TNFR1 -干擾性RNA擊倒於例如人gtm-3細胞 (Pang, I.H.等人，1994，Curr. Eye_ Res. 13:51-63)中之内生 性TACE或TNFR1表現程度之能力可於試管内評估如下。 GTM-3細胞接種24小時隨後轉移感染補充有丨〇% FBs及2 麵胺酸鹽之DMEM培養基。轉移感染係使用達摩費丨（達 200914052 摩康公司’科羅拉多州拉法葉）根據製造商的指示於由〇. i nM-100 nM之TACE-或TNFR1干擾性RNA執行。使用非靶定 對照干擾性RNA及週期親和素（CyCi〇phiiin) b干擾性RNA 作為對照組。於轉移感染後24小時使用例如塔克曼 5 (TAQMAN)正向引子及反向引子及涵蓋標靶部位的探針集 合(應用生物系統公司（Applied Biosystems)，加州福斯特城) 藉qPCR評估標靶mRNA濃度。標靶蛋白質濃度可於感染後 約72小時（實際時間係依據蛋白質之周轉率決定）例如藉西 方墨點分析評估。由培養細胞分離RNA及/或分離蛋白質之 10標準技術為熟諳技藝人士眾所周知。為了減低非特異性偏 離標靶效應的機會’使用可於標靶基因表現產生期望的擊 倒程度之最低可能的TACE干擾性RNA或TNFR1干擾性 RNA濃度。

於一個實施例中，投予單一干擾性RNA靶定TACE 15 mRNA或TNFR1 mRNA來降低TACE或TNFR1濃度。於其它 實施例中，投予兩種或多種靶定TACE及/或TNFR1 mRNA 之干擾性RNA來減低TACE及/或TNFR1濃度。於若干實施 例中，靶定TACE之干擾性RNA及靶定TNFR1之干擾性RNA 係循序或同時投予該個體，藉此治療TNFR1相關聯的眼部 20 疾病。 基因存庫資料庫提供TACE之DNA序列為存取號碼 NM_003183,於「序列表」中提供為SEQIDNO:卜SEQID NO : 1提供與編碼TACE之mRNA相對應之DNA之訊息股（但 以「T」鹼基取代「U」鹼基）。TACE之編碼序列係由核苷 20 200914052 酸184-2658 。 前文引述之TACE mRNA序列之相當物為其它剪接形 式、對偶形式、同功、或其同源形式。同源形式為與SEq NO : 1同源之得自另一種哺乳動物之腫瘤壞死因子以轉化 ’ 5 mRNA(亦即同源基因）。 ‘ 基因存庫資料庫提供TNFR1之DNA序列為存取號碼 ΝΜ_001065，於「序列表」中提供為SEQ ID NO : 2。SEQ ID NO : 2提供與編碼TNFR1之mRNA相對應之DNA之訊息股 f (但以「T」驗基取代「U」驗基）。TNFR1之編碼序列係由 10 核苷酸282-1649。 前文引述之TNFR1 mRNA序列之相當物為其它剪接 形式、對偶形式、同功、或其同源形式。同源形式為與SEQ ID NO : 2同源之得自另一種哺乳動物之腫瘤壞死因子受體 -lmRNA(亦即同源基因）。 15 於若干實施例中，有需要治療TNFa相關聯之眼部疾 病或有發展成TNFa相關聯之眼部疾病之風險之「個體」為 (., 患有與如此處引述之標靶亦即TACE或TNFR1之非期望的 或不當的表現或活性相關聯之TNFa相關聯之眼部疾病或 有TNFa相關聯之眼部疾病之風險之人類或其它哺乳動 20 物。此種病症相關聯之眼部結構包括眼球、視網膜、脈絡 膜、水晶體、角膜、小梁網絡、虹膜、視神經、視神經頭 部、鞏膜、眼前節或眼後節、或睫狀體(舉例）。個體也可能 為眼球細胞、細胞培養、器官、或活體外器官或組織或細 胞。於若干實施例中，個體患有或有發展出高眼壓及/或與 21 200914052 眼壓(IOP)升高相_之眼部疾病諸如青光眼之風險。 如此處使用「TNF__之眼部病症」包括高眼壓 及=眼壓⑻P)升高相關聯之眼部病症諸如青光眼。「眼部 血S生成」3如此處使用包括眼部血管生成前期病症及 5眼部企官生成病症，包括由TACE mRNA及々TNFR1 "跳表現所可能導致之該等細胞變化，結果直接或間接 導致眼球血管生成、眼球血管新生、視網膜水腫、糖尿病 性視網膜病變、視網膜缺血相關聯的後遺症、psw、及新 生血管性青光目艮(舉例）。本發明之干擾性RNA可用於治療患 1〇有眼球血管生成、眼球血管新生、視網膜水種、糖尿病性 視網膜病變、視網膜缺血相關聯的後遺症、眼後節血管新 生(PSNV)及新生血倾青光眼病人或有發展成此等病症 之=險之病人(舉例「眼部血管生成」—詞包括老化相關 之κ斑4退化白内障 ' 急性缺血性視神經病變(Mon)、 15視網膜振盡、視網膜剝離、視網膜撕裂、或視網膜裂孔、 醫原性視網膜病變及其它缺血性視網膜病變或視神經病變 近似著色性視網膜炎等。 20 除非另行陳述，否則「siRNA」一詞如此處使用表示 雙股干擾性RNA。典型地，本發明之_Α為包含兩個核 甘酸股之雙股猶分子，錢含約邮約28個核㈣(亦即 約 19、20、2卜 22、23、24、25 ' 26、27、或28核誓酸）。 當述及雙股谓性RNA時，「具有錢19至雜㈣之干擾 性RNA」一词表不分別具有長度約19至約49核苷酸之反訊 息股及訊息股’包括訊息股與反訊息股藉鏈接子分子連接 22 200914052 的干擾性RNA分子。 除了 siRNA分子外，其它干擾性RNA分子及RNA狀分 子可與RISC交互作用且消音基因表現。其它可與RISC交互 作用之干擾性RNA分子之實例包括短髮夹形RNA 5 (shRNA)、單股siRNA、微RNA (miRNA)、及切割-基質27-元體二倍體。可與RISC交互作用之RNA狀分子之實例包括 含有一個或多個經化學改性之核苷酸、一個或多個非核苷 酸、一個或多個去氧核糖核苷酸、及/或一個或多個非磷酸 二酯鍵聯之siRNA、單股siRNA、微RNA、及shRNA分子。 10 全部與RISC交互作用且參與RISC媒介之基因表現變化之 RNA或RNA狀分子於此處稱作為「干擾性RNA」或「干擾 性RNA分子」。因此siRNA、單股siRNA、shRNA、miRNA、 及切割基為27-元體二倍體為「干擾性RNA」或「干擾性 RNA分子」的子集。 15 儘管比雙股RNA無效，發現單股干擾性RNA可執行

mRNA消音。因此本發明之實施例也提供具有與部分SEq ID NO : 1或部分SEQ ID NO: 2至少接近完美接續互補之一 區的單股干擾性RNA之投予。如同前述雙股干擾性rnA， 該單股干擾性RNA長約19至約49核苷酸。單股干擾性RNA 20具有5’填酸根或於原位或於活體内於5,位置經璘酸化。「5, 經磷酸化」一詞係用來說明具有磷酸基透過酯鍵聯而附接 至位於多核苷酸或寡核苔酸之5,端之糖(例如核糖、去氧核 糖、或其類似物）之C5羥基之多核苷酸或募核苷酸。 如前文參照雙股干擾性RNA所述，單股干擾性RNA可 23 200914052 以化學方式合成或藉試管内轉錄或由載體或表現卡匣内生 性表現。5鱗酸基可透過激添加，或5,碟酸基係由於rna 經過核酸裂解的結果。髮夾形干擾性RNA為包含干擾性 RNA之訊息股及反訊息股呈柄-環圈或髮夾結構（例如 5 shRNA)之單一分子（例如單—寡核苷酸鏈）。舉例言之， shRNA可由DNA載體表現，於該DNA載體中編碼訊息干擾 性RNA股之DNA寡核苷酸係藉一個短的間隔子而鏈接至編 碼逆互補的反訊息干擾性RNA之DNA寡核苷酸。若對所選 用之表現載體有需要，可添加形成限剪位置之3,終端τ及核 10苷酸。所得RNA轉錄本反摺而形成柄-環圈結構。 此處引述之核酸序列除非另行指示否則於5,至3,方向 書寫。如此處使用「核酸」一詞係指包含存在於DNA (腺嘌 呤「A」' 胞嘧啶「C」、鳥嘌呤「G」、胸腺嘧啶「τ」）或存 在於RNA (腺嘌呤「A」、胞嘧啶「C」、鳥嘌呤「G」、尿嘧 15啶「u」）之嘌呤鹼基或嘧啶鹼基之RNA或DNA或其修飾形 式。此處提供之干擾性RNA可包含「T」鹼基特別於3,端， 即使「T」鹼基於天然並未出現於rna亦如此。「核酸」包 括「养核甘酸」及「多核苔酸」等詞，係指單股分子或雙 股分子。雙股分子係藉A與T鹼基、C與G鹼基、及八與1;鹼 20基間之華生-克里克驗基配對形成。雙股分子之股可彼此部 分互補、實質上互補或完全互補，形成二倍體雜交體，其 鍵結強度係依據驗基序列之本質及互補程度決定。 如此處使用「DNA標靶序列」一詞係指用來衍生本發 明之干擾性RNA之DNA序列。如此處使用「RNA標乾序 24 200914052 列」、「干擾性RNA標靶序列」、及「RNA標靶」等詞係指可 由本發明之干擾性RNA所辨識之TACE或TNFR1 mRNA或 TACE或TNFR1 mRNA序列部分，藉此干擾性RNA可如此處 所述消音TACE或TNFR1基因的表現。「RNA標靶序列」' " 5 「siRNA標靶序列」及「RNA標靶」為典型與DNA序列部 分相對應之mRNA序列。mRNA序列易由相對應之DNA序列 推定。例如SEQ ID NO : 1提供與TACE之mRNA相對應之 DNA之訊息股序列，而SEQ ID NO : 2提供與TNFR1之 , mRNA相對應之DNA之訊息股序列。該爪10心\序列係與該 10 DNA訊息股序列使用「τ」鹼基替代「u」鹼基完全相同。 因此，TACE之mRNA序列由SEQ ID NO: 1為已知，而TNFR1 之mRNA序列由SEQ ID NO: 2為已知。於mRNA中與SEQ ID NO · 1或SEQ ID NO . 2相對應之標把序列可於mRNA之5, 或3’未經轉譯區以及於mRNA之編碼區。 15 於若干實施例中，於標把mRNA序列中之干擾性rna — 標靶序列（例如siRNA標靶序列）使用可利用之設計工具選 I ； 定。然後藉表現標靶mRNA之細胞轉移感染，接著如本文 所述評估擊倒，於試管試驗中測試與TACE或TNFR1標乾序 列相對應之干擾性RNA。使用此處所述動物研究模型可進 20 一步於活體内評估干擾性RNA。 k供選擇siRNA之標乾序列之技術’例如藉Tuschi τ 等人’「siRNA使用者指南」，2004年5月6日修訂，得自洛克 斐勒大學網址；藉技術公報#506，「siRNA設計指南」，安比 恩公司（Ambion Inc·)，於安比恩網址；及藉其它網路上的 25 200914052 設計工具例如於因維左金(Invitrogen)、達摩康、積體DNA 技術(Integrated DNA Technologies) ' 金史奎（Genscript)、或 普利葛（Proligo)網址。初步研究參數包括35%至55%之G/C 含量及19至27核苷酸之siRNA長度。標靶序列可位於編碼區 5 或於mRNA之5’或3’未經轉譯區。標乾序列可用於衍生干擾 性RNA分子，諸如此處所述。 表1列舉SEQIDNO: 1之TACEDNA標靶序列實例，由 該序列以前文說明之方式設計本發明之干擾性RNA分子。 表1. siRNA之TACE標靶序列 TACE標靶序列 參照SEQ ID NO: 1之起點核 苷酸號礁 SEQ ID NO: GCTCTCAGACTACGATATT 297 3 CCAGCA6CATTC66TAAGA 333 14 CAGCAGCATTCGGTAAGAA 334 15 AGCAGCATTCGGTAAGAAA 335 16 AGAGAT C TACAGAC T T CAA 355 17 GAAAGCGAGTACACTGTAA 493 18 CCATGAAGAACACGTGTAA 842 19 GAAGAAC AC GT GT ΑΑΛΤ T A 846 20 ATCATCGCTTCTACAGATA 878 21 AGAGCAATTTAGCTTTGAT 1137 22 G6TTT6ACGAGCACAAA6A 1330 23 TGATCCGGATGGTCTAGCA 1428 24 GCGATCAC6AGAACAATAA 1508 25 GCAGTAAACAATCAATCTA 1541 26 CAATCTATAAGACCATTGA 1553 27 TTTCAAGAACGCAGCAATA 1591 28 TTCAAGAACGCAGCAATAA 1592 29 TCAAGAACGCAGCAATAAA 1593 30 TCATGTATCTGAACAACGA 1661 31 ACAGCGACTGCACGTTGAA 1691 32 GATTAATGCTACTTGCAAA 1794 33 26 200914052 CTGGAGTCCTGTGCATGTA 1945 34 TGGAGTCCTGTGCATGTAA 1946 35 GGAGTCCTGTGCATGTAAT 1947 36 CATGTAATGAAACTGACAA 1958 37 CTATGTCGATGCTGAACAA 2022 38 CAAATGTGAGAAACGAGTA 2100 39 GCATCGGTTCGCATTATCA 2347 40 ATCGGTTCGCATTATCAAA 2349 41 CCAAGTCATTTGAGGATCT 2549 42 CCGGTCACCAGAAGTGAAA 2578 43 AAAGGCTGCCTCCTTTAAA 2595 44 TTTAAACTGCAGCGTCAGA 2608 45 AGATGCTGGTCATGTGTTT 2764 46 ATGCTGGTCATGTGTTTGA 2766 47 TGCTGGTCATGTGTTTGAA 2767 48 CTGGTCATGTGTTTGAACT 2769 49 TGTAATGAACCGCTGAATA 3027 50 GTAATGAACCGCTGAATAT 3028 51 CTAAGACTAATGCTCTCTA 3261 52 AGACTAATGCTCTCTAGAA 3264 53 CCTAACCACCTACCTTACA 3284 54 TACATGGTAGCCAGTTGAA 3313 55 TGGTAGCCAGTTGAATTTA 3317 56 T T TAT GGAAT C TAC CAAC T 3332 57 GGAATCTACCAACTGTTTA 3337 58 CATCAAGTACTGAACGTTT 434 155 TCGTGGTGGTGGATGGTAA 470 156 GAAAGCGAGTACACTGTAA 493 157 GAGCCTGACTCTAGGGTTC 547 158 C CACATAAGAGATGAT GAT 570 159 CATAAGAGATGATGATGTT 573 160 CGAATATAACATAGAGCCA 618 161 GTTAATGATACCAAAGACA 649 162 CTGAAGATATCAAGAATGT 689 163 ATGAAGAGTTGCTCCCAAA 755 164 ATGAAGAACACGTGTAAAT 844 165 AATTATTGGTGGTAGCAGA 860 166 27 200914052 ATCATCGCTTCTACAGATA 878 167 ATACATG66CAGAGGGGAA 894 168 GGGCAGAGGGGAAGAGAGT 900 169 GGAAGA6A6TACAACTACA 909 170 GAAGA6A6TACAACTACAA 910 171 GAGAGTACAACTACAAATT 913 172 GCTAATTGACAGAGTTGAT 942 173 CGGAACACTTCATGGGATA 970 174 GGATAATGCAGGTTTTAAA 984 175 AGGC TAT GGAATACAGATA 1002 176 GAATACAGATAGAGCAGAT 1010 177 GGTAAAACCT66T6AAAAG 1053 178 GTGAAAAGCACTACAACAT 1064 179 GAGGAAGCATCTAAAGTTT 1162 180 TATGGGAACTCTTGGATTA 1215 181 T GAC GAG CACAAAGAAT TA 1334 182 GCACAAAGAATTATGGTAA 1340 183 GGTTACAACTCATGAATTG 1386 184 AC T CAT GAAT T GGGACATA 1393 185 GTGGCGATCACGAGAACAA 1505 186 C TATAAGAC CAT T GAAAG T 1557 187 GAACGCAGCAATAAAGTTT 1597 188 GCAATAAAGTTTGTGGGAA 1604 189 CAATAAAGTTTGTGGGAAC 1605 190 GAGGGTGGATGAAGGAGAA 1626 191 GGATGAAGGAGAAGAGTGT 1632 192 GCATCATGTATCTGAACAA 1658 193 CAGGAAATGCTGAAGATGA 1856 194 6AATGGCAAATGT6A6AAA 2094 195 GGATGTAATTGAACGATTT 2121 196 GT GGATAAGAAAT T GGATA 2263 197 GGATAAACAGTATGAATCT 2277 198 CCTTTAAACTGCAGCGTCA 2606 199 CGTGTTGACAGCAAAGAAA 2629 200 GCAAA6AAACAGA6T GC ΤΆ 2639 201 28 200914052 表2列舉可以前述方式設計本發明之siRNA2SEQ ID NO : 2之TNFR1 DNA標靶序列之實例。TNFR1編碼如前述 之腫瘤壞死因子α受體-1。 表2. siRNA之TNFR1標靶序列 TNFR1標靶序列 參照SEQID NO:2之起點核 苷酸號碼 SEQ ID NO: ACCAGGCCGTGATCTCTAT 124 59 AATTCGATTTGCTGTACCA 444 60 TCGATTTGCTGTACCAAGT 447 61 ACAAAGGAACCTACTTGTA 469 62 GAACCTACTTGTACAATGA 475 63 CTACTTGTACAATGACTGT 479 64 TGTGAGAGCGGCTCCTTCA 531 65 TCAGGTGGAGATCTCTTCT 611 66 CAGGTGGAGATCTCTTCTT 612 67 AGAAC CAGTAC C GGCAT TA 667 68 GAACCAGTACCGGCATTAT 668 69 AACCAGTACCGGCATTATT 669 70 CC6GCATTATTGGA6T6AA 677 71 C66CATTATT66AGT6AAA 678 72 agcctggagtgcacgaagt 843 73 CTCCTCTTCATTGGTTTAA 960 74 TTGGTTTAATGTATCGCTA 970 75 GTTTAATGTATC6CTACCA 973 76 TTTAATGTATCGCTACCAA 974 77 AGTCCAAGCTCTACTCCAT 1000 78 GAGCTT6AAGGAACTACTA 1053 79 CTTGAAGGAACTACTACTA 1056 80 TTGAAGGAACTACTACTAA 1057 81 ACAAGC CACA6A6C C TAGA 1318 82 TGTACGCC6T66T6GAGAA 1357 83 CCGTTGCGCTGGAAGGAAT 1383 84 TCTAAGGACCGTCCTGCGA 1671 85 CTAATAGAAACTTGGCACT 2044 86 TAATA6AAACTTGGCACTC 2045 87 29 AATAGAAACTTGGCACTCC 2046 88 ATAGAAACTTGGCACTCCT 2047 89 TAGAAACTTGGCACTCCTG 2048 90 ATAGCAAGCTGAACTGTCC 2089 91 TAGCAAGCTGAACTGTCCT 2090 92 AGCAAGCTGAACTGTCCTA 2091 93 GCAAGCTGAACTGTCCTAA 2092 94 TGAACTGTCCTAAGGCAGG 2098 95 CAAAGGAACCTACTTGTAC 470 96 GAGCTTGAAGGAACTACTA 1053 97 CACAGAGCCTAGACACTGA 1324 98 TCCAAGCTCTACTCCATTG 1002 99 TGGAGCTGTTGGTGGGAAT 328 100 GACAGGGAGAAGAGAGATA 387 101 GGGAGAAGAGAGATAGTGT 391 102 GAGAAGAGAGATAGTGTGT 393 103 GAAGAGAGATAGT6T6TGT 395 104 GTGTGTGTCCCCAAGGAAA 406 105 GAAAATATATCCACCCTCA 421 106 AAATATATCCACCCTCAAA 423 107 CTGTACCAAGTGCCACAAA 455 108 ACCAAGTGCCACAAAGGAA 459 109 CCAAGTGCCACAAAGGAAC 460 110 CCACAAAGGAACCTACTTG 467 111 CAAAGGAACCTACTTGTAC 470 112 AAAGGAACCTACTTGTACA 471 113 GATACGGACTGCAGGGAGT 513 114 CGGACTGCAGGGAGTGTGA 517 115 TCCTTCACCGCTTCAGAAA 543 116 CAGAAAAC CAC C T CAGACA 556 117 TGCCTCAGCTGCTCCAAAT 576 118 CTCCAAATGCCGAAAGGAA 587 119 TCCAAATGCCGAAAGGAAA 588 120 CCAAATGCCGAAAGGAAAT 589 121 6CCGAAAGGAAATGG6TCA 595 122 AGGAAATGGGTCAGGTGGA 601 123 66AAAT6GGTCAGGTGGAG 602 124 30 200914052 GTGTGTGGCTGCAGGAAGA 651 125 GGAAGAAC CA6TAC C G6CA 664 126 CCATGCAGGTTTCTTTCTA 785 127 CATGCAGGTTTCTTTCTAA 786 128 TGCAGGTTTCTTTCTAAGA 788 129 AGGTTTCTTTCTAAGAGAA 791 130 GGTTTCTTTCTAAGAGAAA 792 131 AGAGAAAACGAGTGTGTCT 804 132 GAGTGTGTCTCCTGTAGTA 813 133 CTGTAGTAACTGTAAGAAA 824 134 AGAAAAGCCTGGAGTGCAC 838 135 TTGAGAATGTTAAGGGCAC 877 136 TGTTAAGGGCACTGAGGAC 884 137 GGTCATTTTCTTTGGTCTT 929 138 CCTCCTCTTCATTGGTTTA 959 139 TCCTCTTCATTGGTTTAAT 961 140 CTCTTCATTGGTTTAATGT 963 141 TCTTCATTGGTTTAATGTA 964 142 CTTCATTGGTTTAATGTAT 965 143 TCCAAGCTCTACTCCATTG 1002 144 CTCCATTGTTTGTGGGAAA 1013 145 GGGAAAT C GAC AC C T GAAA 1026 146 T GAAGGAAC TAC TAG TAAG 1058 147 ACCTCCAGCTCCACCTATA 1161 148 CCCACAAGCCACAGAGCCT 1315 149 ACGCCGTGGTGGAGAACGT 1360 150 GGAAG6AATTCGTGC6GC6 1393 151 TGAGCGACCACGAGATCGA 1420 152 GCGAGGCGCAATACAGCAT 1471 153 TGGGCTGCCTGGAGGACAT 1573 154 如上實例所述，熟諳技藝人士可使用表1所提供之標靶 序列資訊，經由參照SEQ ID NO : 1之序列位置，且增減與 SEQ ID NO : 1互補或接近互補之核苷酸，來設計比表1所 提供之序列長度更短或更長的干擾性RNA。 31 200914052 例如，SEQ ID NO : 3表示TACE mRNA之19-核苷酸 DNA標靶序列之一個實例，存在kSEq m N〇 : 1之核苷酸 297至315 : 5 ’ - GCTCTCAGACTACGATATT -3 ' SEQ ID NO : 3 · 5 用於靶定於SEQ ID NO: 3之相對應mRNA序列且具有21- 核苷酸股及2-核苷酸3,旁懸部之本發明之siRNA之實例為： 5'- 6CUCUCAGACUACGAUAUUNN -3' SEQ ID NO : 4 3' -NNCGAGAGUCUGAUGCUAUAA -5' SEQ ID NO:5. 各個「N」殘基可為任何核苷酸(a、C、G、U、或T)或 10 已修飾的核苷酸。3’端於卜2、3、4、5、及6 (含）間共有「N」 個殘基。任一股上的「N」個殘基可為相同殘基(例如UU、 AA、CC、GG、或TT)或可相異(例如AC、AG、AU、CA、 CG、CU、GA、GC、GU、UA、UC、或UG)。3’旁懸部可相 同或可相異。於一個實施例中，二股具有3，UU旁懸部。 15 用於靶定於SEQ ID NO : 3之相對應mRNA序列且具有 21-核苷酸股且於各股上有一個3’UU旁懸部之本發明之 siRNA之實例為： 5'- GCUCUCAGACUACGAUAUUUU -3' SEQ ID NO : 6 3'- UUCGAGAGUCUGAUGCUAUAA -5' SEQ ID NO : 7 . 20 干擾性RNA可具有5’核苷酸旁懸部或可具有鈍端。用 於靶定於SEQ ID NO : 3之相對應mRNA序列且具有19-核苷 酸股及鈍端之本發明之siRNA為： 5'- GCUCUCAGACUACGAUAUU -3' SEQ ID NO:8 3，- CGAGAGUCUGAUGCUAUAA -5' SEQ ID NO:9. 25 雙股干擾性RNA (例如siRNA)之各股可藉鏈接子序列 連接而形成髮夾結構或柄-環圈結構(例如shRNA)。靶定於 32 200914052 SEQ ID NO : 3之相對應mRNA序列且具有19 bp雙股柄區及 3’UU旁懸部之本發明之shRNA為： / \

5 *-OCUCUCAGACUACQAUAUU N 3 · -UUCGAGA即CUGAtIGCTOajAA SEQ 功肋：10 . \ /

NNN - N為核苔酸A、Τ' C、G、U、或熟諸技藝人士已知之 5修飾形式。環圈中之核苷酸數目N為3至23、或5至15、或7 至Π、或4至9、或9至11 (含），或核誓酸數目_9。於環圈 之若干核苷酸可能涉及與環圈中其它核苷酸之鹼基對交互 作用。可用來形成環圈之募核答酸序列之實例包括 5’-UUCAAGAGA-3’(Bnimmdkamp, T.R.等人（2002)科學 10 296:550)及 5’-UUUGUGUAG-3，(Castanotto, D.等人（2002) RNA 8:1454)。熟諳技藝人士瞭解所得單股寡核苷酸形成包 含可與RNAi機構交互作用之雙股區的柄_環圈結構或髮夾 結構。 前述siRNA標靶序列可於3,端延長而協助切割_基質 V ; 15 27-元體二倍體的設計。於TACE DNA序列（SEQ ID NO : 1) 中識別的19-核苷酸DNA標靶序列（SEq ID N〇 : 3)延長6核 苷酸，獲得存在於SEQ ID NO : 1之核苷酸732至756之25-核苷酸DNA標靶序列： 5'- GCTCTCAGACTACGATATTCTCTCT -3' SEQ ID NO:11. 20 靶定於SEQ ID N〇: 11之相對應的mRNA序列之本發明 之切割-基質27-元體二倍體之實例為： 5'- GCUCUCAGACUACGAUAUUCUCUCU -3' SEQ ID NO: 12 3' -UUCGA6AGUCUGAU6CUAUAAGAGAGA -5' SEQ ID NO:13. 33 200914052 於訊息股之3,端的兩個核苷酸（亦即SEQ ID NO : 12之 CU核苷酸)可為去氧核苔酸來加強處理。由19-21核替酸標 靶序列設計切割-基質27-元體二倍體，諸如此處所提供進一 步討論於積體DNA技術（IDT)網址及討論於Kim, D.-H.等 5 人，（2005年2月）自然生物技術23:2 ; 222-226。 由siRNA及其它形式干擾性RNA所指導的標I&RNA裂 解反應高度具有序列特異性。例如通常，siRNA分子含有與 標靶mRNA部分相同序列之訊息核苷酸股及與用於抑制 mRNA表現之標靶部分恰互補之反訊息核苔酸股。但反訊 10 息siRNA股與標靶mRNA間或反訊息siRNA股與訊息siRNA 股間之100%序列互補並非實施本發明所必要，只要干擾性 RNA可辨識標靶mRNA及消音TACE或TNFR1基因之表現 即可。如此例如，本發明允許反訊息股與標靶mRNA間及 反訊息股與訊息股間之序列變化，包括不影響干擾性RNA 15 分子活性之核苷酸取代以及由於基因突變、應變多形性、 或演化分歧可能預期的變化，其中該等變化並未排除認知 反訊息股至標靶mRNA。 於本發明之一個實施例中，本發明之干擾性RNA具有 訊息股及反訊息股，訊息股及反訊息股包含至少19核苔酸 20 之至少接近完美接續互補之一區。於本發明之另一個實施 例中，本發明之干擾性RNA具有訊息股及反訊息股，及該 反訊息股包含與TACE或TNFR 1 mRNA之標乾序列至少接 近完美接續互補之至少19核苷酸之一區，及該訊息股包含 與TACE或TNFR1 mRNA之標靶序列至少接近完美接續互 34 200914052 補之至少19核甘酸之一區。於本發明之又一實施例中，干擾 性RNA包含具有與mRNA内部之相對應標靶序列3,端之倒 數13、14、15、16、17、或18核苷酸有某種百分比序列互補 或有某種百分比序列相同度之至少13、14、15、16、17、或 5 18接續核苷酸之一區。干擾性RNA之各股長度包含約19至約 49核苷酸’可包含約 19、20、21、22、23、24、25、26、27、 28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、 41、42、43、44、45、46、47、48、或49核:y：酸長度。

於若干實施例中’本發明之干擾性RNA之反訊息股具 10有至少19核苷酸之與標靶mRNA至少接近完美接續互補 度。「近完美」如此處使用表示siRNA之反訊息股於該標乾 mRNA之至少一部分「實質上互補」，且藉siRNA之訊息股 於該標靶mRNA之部分係「實質上相同」。如熟諳技藝人士 已知，「相同度」為將二序列間之核苷酸順序與身分配對測 15 得之核苷酸序列間之序列相同性程度。於一個實施例中， 具有與標乾mRNA序列80%及80%至1〇〇%互補例如85%、 90%或95%互補之siRNA之反訊息股被視為近完美互補且 可用於本發明。「完美」接續互補為相鄰驗基對之標準華生 -克里克鹼基配對。「至少近完美」接續互補包括如此處使 20用之「完美」互補。設計電腦運算測定相同度或互補度之 方法來識別核苷酸序列間之最大配對程度，例如BLASTN (Altschul，S.F.等人（1990) J. Mol. Biol. 215:403-410)。 「百分比相同度」一詞說明於第一核酸分子中與第二 核酸分子中具有相等長度之接續核苷酸集合相同的接續核 35 200914052 苷酸百分比。「百分比互補度」一詞說明於第一核酸分子中 可與第二核酸分子中之接續核苔酸集合形成華生_克里克 定義之驗基配對之接續核苷酸百分比。 標靶mRNA與siRNA之一股（訊息股）間之關係為相同 5 度關係。若存在時，siRNA之訊息股也稱作為旅客股。標乾 mRNA與siRNA之另一股(反訊息股）間之關係為互補關係。 siRNA之反訊息股也稱作為嚮導股。 可能有非與SEQ ID NO : 1之一部分或SEQ ID NO : 2 之一部分互補之反訊息siRNA股之一區或多區。非互補區可 10 位於互補區之3’端、5’端或兩端或位於二互補區之間。—區 可為一個鹼基或多個鹼基。 於干擾性RNA分子中之訊息股及反訊息股也包含不會 與另一股形成驗基對之核苷酸。舉例言之，一股或二股可 包含額外核苔酸或不會與另一股之該位置的核笞酸配對的 15 核苷酸，因此當二股雜交時可能形成膨出或不匹配。如此， 本發明之干擾性RNA分子包含具有不匹配、G-U晃動、或 膨出之訊息股或反訊息股。不匹配、G-U晃動、及膨出也出 現於反訊息股與其標靶間（例如參考Saxena等人，2003, J. Biol. Chem_278:44312-9)。 20 雙股干擾性RNA之一股或二股可具有1至6個核苷酸之 3’旁懸部，該等核苷酸可為核糖核苷酸或去氧核糖核苷酸 或其混合物。旁懸部之核苔酸並非鹼基配對。於本發明之 一個實施例中，干擾性RNA包含TT或UU 3’旁懸部。於本 發明之另一個實施例中’干擾性RNA包含至少一個鈍端。 36 200914052 端基通常具有5’磷酸基或3’羥基。於其它實施例中，反訊息 股具有5’磷酸基，訊息股具有5’羥基。於額外其它實施例 中，端基可進一步藉共價加成其它分子或其它官能基修飾。 雙股siRNA之訊息股及反訊息股可呈如前文說明之兩 5 個單股之二倍體形式，或可為單股分子，此處互補區為鹼 基配對，且當二區彼此雜交時藉鏈接子分子共價鏈接而形 成髮夾環圈。相信髮夾藉以蛋白質命名的切割進行胞内裂 解而形成兩個個別驗基配對RNA分子之干擾性RNA。鏈接 子分子也設計成包含一個限剪位置，於活體内或於試管内 10 該限剪位置可藉特定核酸裂解。 於一個實施例中，本發明提供一種干擾性RNA分子， 其包含與DNA標無相對應之mRNA 3 ’端之倒數13核普酸且 有至少90%序列互補度或至少90%序列相同度之長至少13 接續核苷酸之一區，於該區内允許一個核苷酸取代。本詞 15中未包括兩個核苷酸取代（亦即11/13 = 85%相同度/互補 度）。於另一個實施例中，本發明提供一種干擾性尺^^八分 子，其包含與DNA標靶相對應imRNA 3,端之倒數14核苷 酸具有至少85%序列互補度或至少85%序列相同度之長至 少13接續核苷酸之一區。本詞中包括兩個核苷酸取代（亦即 20 i2/14=86%相同度/互補度）。於又一個實施例中，本發明提 供種干擾性RNA分子，其包含與dna標乾相對應之 mRNA 3’端之倒數14核苷酸具有至少8〇%序列互補度或至 少8 0 %序列相同度之長至少i 5、】6、丄7、或丄8接續核答酸 之一區。本詞包括三個核苷酸取代。 37 200914052 於以5’至3’方向書寫的核苷酸序列中倒數第二個鹼基係 在最末一個鹼基旁，亦即3’鹼基旁之該鹼基。於5,至3,方向 書寫之核酸序列之倒數13個鹼基為3’鹼基旁其次最末13個鹼 基序列但不包括該3’驗基。同理，於5’至3,方向書寫之核酸 5 序列之倒數14、15、16、17、或18個鹼基為3’鹼基旁其次最 末14、15、16、17、或18個鹼基序列但不包括該3’鹼基。 干擾性RNA可藉化學合成於外生性產生，或藉試管内 轉錄，或使用切割或具有類似活性之另一種適當核酸裂解 較長的雙股RNA而外生性產生。使用習知DNA/RNA合成器 10 而由經保護之核糖核誓磷酸醯胺酸所製造之化學合成的干 擾性RNA可得自供應商諸如安比恩公司（德州奥斯j：丁）、因維 左金公司（加州卡斯貝）或達摩康公司（克羅拉多州拉法 葉）。干擾性RNA可使用溶劑或樹脂萃取 '沉濺、電泳、層 析、或其組合(舉例）純化。另外，干擾性RNA可極少（若有） 15 純化而使用以免因為樣本之加工處理而損耗。 當干擾性RNA係藉化學合成製造時，於核苷酸5,位置 於一股或二股5’端（當存在時）之磷酸化可提高結合的RISC 複體之siRNA功效及特異性，但非必要，原因在於可於胞内 發生磷酸化反應。 20 干擾性RNA也由質體或病毒性表現载體内生性表現或

由最低表現卡匣内生性表現，例如PCR產生的片段包含一 個或多個啟動基因及用於干擾性RNA之適當樣板。市售用 於shRNA之基於質體之表現載體實例包括p消音者 (pSilencer)系列（安比恩公司，德州奥斯汀）及pCpG-siRNA 38 200914052 (因維福金公司（InvivoGen)，加州聖地牙哥）之成員。用於表 現干擾性RNA之病毒性載體可衍生自多種病毒包括腺病 毒、腺病毒相關病毒、豆病毒(例如HIV、F1V、及EIAV)及 疱疹病毒。市售用於shRNA表現之病毒性載體之實例包括ρ 5 消音者腺體(pSilencer adeno)(安比恩公司，德州奥斯汀）及 pLenti6/BLOCK-iTTM-DEST(因維左金公司，加州卡斯貝）。 病毒性載體之選用、由該載體表現病毒性RNA之方法及遞 送病毒性載體之方法係屬於熟諳技藝人士之技巧範圍。 PCR所產生之shRNA表現卡匣之製造用套件組實例包括消 10 音者快速(Silencer Express)(安比恩公司，德州奥斯汀)及si 快遞(siXpress)(米魯斯公司（Mirus)，威斯康辛州麥迪遜）。 於若干實施例中，第一干擾性RNA可透過活體内表現 而由可表現第一干擾性RNA之第一表現載體投予及第二干 擾性RNA可透過活體内表現而由可表現第二干擾性rnA之 第二表現載體投予或兩種干擾性RNA可透過活體内表現而 由可表現兩種干擾性RNA之單一表現載體投予。額外干擾 性RNA可以類似方式投予（例如透過分開的表現載體，或透 過可表現多個干擾性RNA之單一表現載體）。 干擾性RNA可由熟諳技藝人士已知之多種真核啟動基 20因表現，包括P〇l III啟動基因諸如U6或H1啟動基因或pol II 啟動基因諸如細胞巨病毒啟動基因。熟諳技藝人士瞭解此 等啟動基因也適合允許誘導表現干擾性!^^八。 於本發明之若干實施例中，干擾性RNA之反訊息股於 活體内雜交mRNA作為RISC複體的一部分。 39 200914052 ▲雜交」係指其中單股核酸與互補或近互補驗基序列 交互作用而形成稱作為雜交體之氫鍵鍵結複體。雜交反應 敏感且具有選擇性。於試管内，雜交特異性（亦即苛刻幻 係由雜交前溶液及雜交溶液中之鹽濃度或甲醯胺濃度控制 5 (舉例)及由較溫度控制；此等程序為技藝界眾所周知。特 縣由降低鹽濃度、增加甲醯胺濃度或提升雜交溫度可提 高苛刻程度。 舉例。之，於37 C至42 C於約50%甲醯胺出現高度苛 刻情況。於3〇t至35t於約35%至25%出現較低苛刻的條 件雜父之可刻條件之實例提供於Sambrook，J·，1989，分 子選殖：實驗室手冊，冷泉港出版社，冷泉港，紐約。苛 玄J雜父條件之額外實例包括4〇〇 mM NaCl, 40 mM PIPES pH 6.4, 1 mM EDTA，50t：或 7(TC 歷時 12-16小時接著洗 務；或於70°C於1XSSC或於5CTC於1XSSC、50%甲醯胺中雜 15交，接著於70°C於0.3XSSC洗滌；或於70。(：於4XSSC或於50 C於4XSSC、50%甲醯胺中雜交，接著於67。(：於1XSSC洗 滌。雜交溫度比雜交體之熔點（Tm)低約5-l(TC，此處1^係使 用如下計算式而對長19至49鹼基對之雜交體測定：Tm°C = 81.5+16_6(log10[Na+])+0.41(% G+C)-(600/N)，此處N為雜交 20 體中之鹼基數目，及[Na+]為雜交緩衝液中之鈉離子濃度。 無論候選者siRNA與標靶間之結合是否具有特異性， 前述試管内雜交檢定分析提供一種預測方法。但就RISC複 體而言，使用反訊息股其於活體内並未顯示高度雜交苛刻 性，也可出現標靶之特異性裂解。 40 200914052 藉添力冊j失、取代或修錦—個或多個核苔酸，干擾 性RNA可與天然的RNA*同。非核誓酸材料可結合至干擾 !·生RNA口於5端、3端或内部。此種修飾常見設計來提 高干擾性RNA之核酸抗性，改良㈣的吸收，提升細胞的 5乾m協料軒舰觀，進—步改&安定性，或 降低干擾素徑路活化的可能。舉例言之，干擾性酿於旁 懸部末端包含嗓呤核:¾:酸。膽固醇利用吼洛咬鍵接劑輛合 至siRNA之訊息股3，端也提供安定性予siRNA。 進-步修飾包括3,端末生物素分子，該生物素分子為 1〇 -種已知具有細胞渗透性質之胜肽、奈米粒子、胜肽模擬 物、螢光染料、或樹狀體(舉例）。 核苷酸可於其分子之鹼基部分、糖部分、或鱗酸部分 修飾而於本發明之實施例發揮功能。修飾包括例如以烷 基、烷氧基、胺基、去吖、齒基、羥基、巯基、或其組合 15取代。核苷酸可以有較高安定性之類似物取代，諸如以去 氧核糖核誓酸置換核糖核苔酸，或具有糖修飾諸如2,〇11基 由2’胺基、2,〇_曱基、2,曱氧基乙基、或2，·〇、4，_c亞曱基 橋置換。核誓酸之°票°令或嘴。定類似物之實例包括黃。票a、 次黃嘌呤、吖嘌呤、甲硫基腺嘌呤、7-去吖-腺苷及〇_及义 20改性之核苔酸。核苔酸之磷酸基可經由以氮或硫(硫代磷酸） 取代磷酸基中的一個或多個氧而改性。改性通常可用於增 強功能、改善安定性或滲透度、或指導定位或靶定。 於若干實施例中，本發明之干擾性分子包含如前文說 明之至少一種改性。 41 200914052 於若干實施例中，本發明提供包含本發明之干擾性 RNA分子之藥學組成物（於此處也稱作為「組成物」）。藥學 組成物為包含高達99%重量比本發明之干擾性RNA或其鹽 混合生理上可接受之載劑介質包括如後文說明之介質，諸 如水、緩衝液、食鹽水、甘胺酸、玻尿酸、甘露糖醇等。 含量，重量％ 高達99 ; 0.1-99 ; 〇.1_5〇 . 0.5 ， 0.8 0.01 0.01 適量加至pH 7.4 適量加至100毫升 本發明之干擾性RNA可呈溶液、懸浮液或乳液劑型投 予。以下為可用於本發明方法之藥學組成物配方之實例 °-5'1〇.〇

干擾性RNA 羥丙基甲基纖維素 氣化納 氣化节烷鑕

EDTA

NaOH/HCl 純水（不含RNase)

含量，重量％ 干擾性RNA 磷酸鹽緩衝食鹽水 氣化苄烷鏘 波麗索貝（P〇lysorbate)80 純水（不含RNase) 干擾性RNA 一鹼基磷酸鈉 二驗基填酸納（無水） 氣化鈉 EDTA 二鈉 奎莫福（Cremophor)EL 氯化节烷鑕 HC1及 / 或 NaOH 純水（不含^^3如） 高達99 ; 0.1-99 ; 〇.U5〇 1.0 S〇,0M〇.0 0.01 0.5

_適量加至100毫升 pH 7.3-7.4 適量加至100毫升 42 200914052 含量，重量％ 高達99 ; 0.1-99 ; 0.1-50 ; 0.5-10 〇 1.0 4.0 適量加至100毫升

干擾性RNA 磷酸鹽缓衝食鹽水 經丙基-β_環糊精 純水（不含RNas e) ------ 如此處使用，「有效量」一詞係指測知可於哺乳動物體 產生治療反應之干擾性RNA數量或包含干擾性RNA之藥學 組成物數量。此種治療有效量方便由熟諳技藝人士使用如 5 本文所述方法確定。

大致上’有效量之本發明之干擾性RNA獲得由1〇〇 pM 至1 μΜ或由1 nM至100 nM或由5 nM至約50 nM或至約25 nM之於標靶細胞表面的胞外濃度。達成此種局部濃度所需 劑量將依據多項因素而改變，包括遞送方法、遞送部位' 10 遞送部位與標靶細胞或組織間之細胞層數、遞送為局部遞 送或系統性遞送等。於遞送部位之濃度顯著高於標靶細胞 或組織表面之濃度。局部組成物可每日一次至四次或於延 長之遞送计劃诸如母日、母週、每兩週、每月、或更長時 間根據熟練私床醫師之常規裁決而定遞送至標乾ι器官諸如 15 眼球表面。調配物之pH約為pH 4.0至約pH 9.0，或約pH 4.5 至約pH 7.4。 有效量之調配物係依據多項因素決定，諸如個體年 齡、種族及性別、標靶基因轉錄本/蛋白質周轉率、干擾性 RNA強度 '及干擾性RNA安定性。於一個實施例中，干擾 20性RNA局部遞送至標乾器官’且以治療濃度到達含tace或 TNFR1 mRNA之組織諸如小梁網、視網膜或視神經頭，藉 43 200914052 此缓和TNFa所引發之疾病病程。 使用針對TACE或TNFR1 mRNA之干擾性RNA對病人 作治療性處理由於延長作用時間，因而允許減少投藥頻率 及提高病人顺從性，以及經由增加標靶特異性，因而減少 5副作用，預期可比小分子治療更有利。 如此處使用「可接受性載劑」一詞係指至多造成極少 至無眼球刺激，若有所需提供適當保藏效果且以均勻劑量 遞送一種或多種本發明之干擾性^^人之該等載劑。用於投 予本發明之實施例之干擾性RN A之可接受性載劑包括基於 10脂質之轉移感染劑傳思(Trans) IT-TKO(米魯斯公司，威斯 康辛州麥迪遜）、里普費汀（lip〇FECtin)、里普費它明 (Lipofectamine)、歐里果費它明（OLIGOFECTAMINE)(因維 左金公司，加州卡斯貝）或達摩費（DHARMAFECT)(達摩康 公司’克羅拉多州拉法葉）；聚陽離子諸如聚伸乙基亞胺； 15陽離子性胜肽諸如塔特（Tat)、聚精胺酸、或潘尼塔丁 (Penetratin)(安堤(Antp)胜肽）；奈米粒子；或微脂粒。微脂 粒係由標準形成小囊之脂質及固醇諸如膽固醇所製成，微 脂粒包括靶定分子’諸如對細胞表面抗原具有結合親和力 之單株抗體。進一步，微脂粒可為PEG化微脂粒。 2〇 干擾性RNA可於溶液、於懸浮液、或於可生物溶蚀或 非可生物溶蝕遞送裝置内遞送。干擾性RNA可單獨遞送或 呈經過界定的共價輛合物組分遞送。干擾性RNA也可與陽 離子性脂質、陽離子性胜肽、或陽離子性聚合物複合；或 與蛋白質、融合蛋白質、或具有核酸結合性質之蛋白質功 44 200914052 能部位(例如脯胺）複合；或囊封於奈米粒子或微脂粒。組織 -或細胞-特異性遞送可藉含括適當靶定部分諸如抗體或抗 體片段而達成。 干擾性RNA例如可透過喷霧、經頰、經皮、經皮内、 5 經吸入、經肌肉、經鼻内、眼内、肺内、靜脈、腹内、經 鼻、經眼、經口、經耳、經腸道外、貼片、皮下、舌下、 局部、或經皮投予而遞送。 於若干實施例中，使用干擾性RNA分子治療眼部病症 可經由將干擾性RNA分子直接投予眼球而達成。局部投予 10 眼球由於多項理由故較為優異，包括：劑量比系統性遞送 小，因此於眼球以外組織干擾性RNA分子消音基因標靶的 機會降低。 多項研究顯示於活體内干擾性RNA分子可成功有效地 遞送至眼球。舉例言之，Kim等人驗證於小鼠眼球於結膜下 15 注射以及系統性遞送靶定於VEGF徑路基因之siRNA可抑 制血管新生（Kim 等人，2004，Am. J. Pathol. 165:2177-2185)。此外，研究顯示遞送至玻璃體腔的siRNA 可擴散遍及整個眼球，於注射後可檢測長達5曰 (Campochiaro, 2006,基因治療 13:559-562)。 2〇 干擾性RNA可直接遞送至眼球，採用之遞送方式可藉 眼組織注射諸如眼周、結膜、腱下、眼房内、玻璃體内、 眼内、視網膜下、結膜下、眼球後、或淚小管内注射；使 用套管或其它置放裝置直接施用於眼球，該等裝置諸如包 含多孔材料、非多孔材料、或明膠材料之視網膜小片、眼 45 200914052 内嵌體检體或植體，藉局部眼用滴劑或軟膏劑；或藉緩 J"又釋放虞置於盲路(cui_(；}e_sac)或植入相鄰於鞏膜（穿鞏膜) 或植入於鞏臈（鞏膜内）或植入於眼球内。眼房内注射可經角 膜注射入眼前房來允許藥劑達到小梁網。内小管内注射可 5 '主射入排放至許萊姆氏小管（Schlemm，s canai)之靜脈收集 管或注射入許萊姆氏小管。 用於眼科遞送，干擾性RNA可組合眼科可接受之保藏 劑、助溶劑、界面活性劑、黏度提升劑、滲透促進劑、緩 衝劑、氯化鈉、或水而形成水性無菌眼用懸浮液劑或溶液 1〇劑。經由將干擾性RNA溶解於生理上可接受之等張水性緩 衝液可製備溶液調配物。此外，溶液包括可接受性界面活 性劑來協助溶解干擾性RNA。黏度輔助劑諸如經甲基纖維 素、羥乙基纖維素、甲基纖維素、聚乙烯基吼咯啶酮等也 可添加至本發明之組成物來改良化合物之保持性。 15 為了製備無菌眼用軟膏劑調配物，干擾性RNA於適當 載媒劑諸如礦油、液體羊毛脂、或白軟石軸合保藏劑。無 囷眼用膠渡劑調配物可根據技藝界已知方法經由將干擾性 RNA懸、浮於由例如卡柏普(cARB〇p〇L)_94〇 (bf谷瑞奇公 司（BF Goodrich)，北卡羅萊那州夏洛特）等之組合所製備之 20親水性基劑而製備。例如維斯可(VISC〇AT)(愛爾康實驗室 公司，德州福特沃斯)可用於眼内注射。其它本發明組成物 於干擾性RNA於眼部穿透力較低時可含有穿透增強劑諸如 ^莫福及吞恩(TW咖）8〇 (聚氧伸乙基一月桂酸山梨聚糖 S日’西革瑪亞利敘公司⑸綱偷刪，密蘇里州聖路易）。 46 200914052 5 10 15 20 於若干實施例中，本發明也提供一種包括如此處引述 之衰減mRNA之試劑於一單元内之套件組。該套件組含有 siRNA或shRNA表現載體。至於siRNA及非病毒性shRNA表 現載體，套件組也含有轉移感染試劑或其它遞送載媒劑。 至於病毒性shRNA表現載體，套件組可含有病毒性載體及/ 或病毒性載體製造上所需的其它組分（例如封裝細胞系以 及包含病毒性載體樣板及額外輔助封裝載體之載體）。套件 組也含有陽性對照及陰性對照siRNA或shRNA表現载體（例 如非靶定之對照S1RNA或靶定於不相關的mRNA之 siRNA)。套件組也含有用於評估期望之標靶基因之擊匈的 試劑(例如用於定量PCR之引子及探針用來檢測餘她从 及/或抗西方墨點分析之相對應蛋白質之抗體）。另外，套件 組可包含SiRNA序歹I!或敵隱序列以及經由試管内轉錄而 產生siRNA餘融RNA表現紐f制指示與材料。 呈套件組形式之藥學組合物進—步於包裝組合物 供接納—容器1置呈封閉約束之—載舰置及包括干擾性 囊組成物及可接受性載劑之—第—容器裝置。此種 組若有所需可進-步包衫種#藥學⑽組組件中之— 者或多者，如熟諳技藝人士已知例如含—種或多種 可接受之載劑之容器、額外容器等。印 :懒籤形式其中指示投藥組分數量、投藥:南、及 、，且7刀之混合指示也可含括於套件組。 一 t引用之參考文獻特別以弓|用方式併入此處至其提 /、補充此處所陳述之程序實例或其它細節之程度。 47 200914052 鑑於本揭T 技藝人士瞭解可未丨㈣本發明之料 髓及範圍對此處揭示之實施例做出明顯修飾。锻於本^ 示，此處揭示之全部實施例皆可無需經過亦必要之實驗及 製作與執行。本案全㈣輯述於揭就減相當實施 5例《兑月書不可解澤為不當地縮窄本發明相關之整體保護 範圍。 雖然已經顯示及說明本發明之多個實施例，但熟諸技 藝人士顯然易知多項變化及其它實施例。如此，可未悼離 精髓或要義特徵而以其它特定形式具體實施本發明。所述 1〇實施例就各方面而言須考慮為僅供說明性而非限制性。因 此本發明之範圍係由隨附之申請專利範圍而非由前文說明 指定。屬於申請專利範圍之定義及範圍内之該申請專利範 圍之全部變化皆係涵蓋於本發明之範圍。進一步，此處所 述王部公開文件、專利案及申請案皆以引用方式併入此處 15彷彿全文呈現般。 實例 下述實例包括其組成實驗及達成的結果僅供說明目的 而非限制本發明。 資例1

於GTM-3細胞用於特異性消音TNFR12干擾性RNA 本研究檢驗TNFR1干擾性RNA於經培養的GTM-3細胞 中擊倒内生性TNFR1蛋白質表現程度的能力。 GTM_3細胞之轉移感染（Pang, I.H.等人，1994，流行眼 研努1 1 51-63)係使用標準試管試驗濃度（o.i-H) nM) 48 200914052 TNFRl siRNA、不含Si對照RISC siRNA#l或si對照非靶定 siRNA#2 (NTC2)及達摩費#l轉移感染試劑(達摩康公司，科 羅拉多州拉法葉）達成。全部siRNA皆係溶解於IX siRNA緩 衝液，亦即20 mM KC1, 6 mM HEPES (pH 7.5), 0.2 mM 5 MgCh之水溶液。對照樣本包括緩衝液對照，其中定量 siRNA係以等量IX siRNA緩衝液（-siRNA)置換。使用 TNFR1抗體（聖塔克魯茲生技公司（Santa Cruz Biotechnology) ’加州聖塔克魯茲）之西方墨點分析用來評估 〔 TNFR1蛋白質表現。TNFR1 siRNA為對下列標靶具有特異 10 性之雙股干擾性RNA : siTNFRl #1標把序列 CAAAGGAACCUACUUGUAC (SEQ ID NO ： 202) ； siTNFRl #2標靶序列GAGCUUGAAGGAACUACUA (SEQ ID NO : 203) ; siTNFRl #3標靶序列CACAGAGCCUAGACACUGA (SEQ ID NO : 204) ； siTNFRl #4 標靶序列 15 UCCAAGCUCUACUCCAUUG (SEQ ID NO : 205)。如第 1 圖資料顯示，siTNFRl #1、siTNFRl #2及siTNFRl #3比較 i 對照siRNA於10 nM濃度及1 nM濃度可顯著減低TNFR1蛋 白質表現，但於〇·1 nM之效果減低。siTNFRl #2及siTNFRl #3特別有效。siTNFRl #4 siRNA也顯示如所預期之tnFRI 20 蛋白質表現中之濃度相依性減低效果。 須瞭解前文揭示強調本發明之特定實施例，其全部相 當之修飾或替代例皆係落入如隨附之申請專利範圍陳述之 本發明之精髓及範圍。 C圖式簡單說明3 49 200914052 第1圖提供以各自為10 nM、1 nM、及0.1 nM之TNFRl siRNA#卜 #2、#3、及#4及不含RISC的對照 siRNA ; 10 nM 之非靶定對照siRNA (NTC2);及緩衝液對照（-siRNA)轉移 感染GTM-3細胞之TNF1西方墨點分析。箭頭指示55 kDa 5 TNF1帶與42kDa肌動蛋白帶之位置。 【主要元件符號說明】 (無） 50 序列表

200914052 <110> Chatterton, Jon E. Clark, Abbot F. Bingaman, David Wax, Martin B. Timmers, Adrian < 12 0 >腫瘤壞死因子α相關病症之RNAi媒介之抑制 <130> 3407 <160> 205 <170> Patentln version 3.3 <210> 1 <211> 3572 <212> DNA <213〉人類 <4〇〇> 1 acctgcactt ctgggggcgt cgagcctggc ggtagaatct tcccagtagg cggcgcggga gggaaaagag gattgagggg ctaggccggg cggatcccgt cctcccccga tgtgagcagt tttccgaaac cccgtcaggc gaaggctgcc cagagaggtg gagtcggtag cggggccggg aacatgaggc agtctctcct attcctgacc agcgtggttc ctttcgtgct ggcgccgcga cctccggatg acccgggctt cggcccccac cagagactcg agaagcttga ttctttgctc tcagactacg atattctctc tttatctaat atccagcagc attcggtaag aaaaagagat ctacagactt caacacatgt agaaacacta ctaacttttt cagctttgaa aaggcatttt aaattatacc tgacatcaag tactgaacgt ttttcacaaa atttcaaggt cgtggtggtg gatggtaaaa acgaaagcga gtacactgta aaatggcagg acttcttcac tggacacgtg gttggtgagc ctgactctag ggttctagcc cacataagag atgatgatgt tataatcaga atcaacacag atggggccga atataacata gagccacttt ggagatttgt taatgatacc aaagacaaaa gaatgttagt ttataaatct gaagatatca agaatgtttc acgtttgcag tctccaaaag tgtgtggtta tttaaaagtg gataatgaag agttgctccc aaaagggtta gtagacagag aaccacctga agagcttgtt catcgagtga aaagaagagc tgacccagat cccatgaaga acacgtgtaa attattggtg gtagcagatc atcgcttcta cagatacatg ggcagagggg aagagagtac aactacaaat tacttaatag agctaattga cagagttgat gscatct^tc ggssc^cttc atgggstsst gcHggtttts saggctstgg gagcagattc gcattctcaa gtctccacaa gaggtaaaac ctggtgaaaa gcactacaac atggcaaaaa gttacccaaa tgaagaaaag gatgcttggg atgtgaagat gttgctagag caatttagct ttgatatagc tgaggaagca tctaaagttt gcttggcaca ccttttcaca taccaagatt ttgatatggg aactcttgga ttagcttatg ttggctctcc cagagcaaac agccatggag gtgtttgtcc aaaggcttat tatagcccag ttgggaagaa aaatatctat ttgaatagtg gtttgacgag cacaa己gaat tatggtaaaa ccatccttac aaagg彐agct gacctggtta caactcatga attgggacat aattttggag cagaacatga tccggatggt ctagcagaat gtgccccgaa tgaggaccag ggagggaaat atgtcatgta tcccatagct gtgagtggcg atcacgagaa caataagatg ttttcaaact gcagtaaaca atcaatctat 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 660 720 780 840 900 960 1020 1080 1140 1200 1260 1320 1380 1440 1500 1560 1 200914052 ---g aaagtaaggc ccaggagtgt tttcaagaac gcagcaataa agtttgtggg aactcgaggg tggatgaagg agaagagtgt gatcctggca tcatgtatct gaacaacgac acctgctgca acagcgactg cacgttgaag gaaggtgtcc agtgcagtga caggaacagt ccttgctgta aaaactgtca gtttgagact gcccagaaga agtgccagga ggcgattaat gctacttgca aaggcgtgtc ctactgcaca ggtaatagca gtgagtgccc gcctccagga aatgctgaag atgacactgt ttgcttggat cttggcaagt gtaaggatgg gaaatgcatc cctttctgcg agagggaaca gcagctggag tcctgtgcat gtaatgaaac tgacaactcc tgcaaggtgt gctgcaggga cctttctggc cgctgtgtgc cctatgtcga tgctgaacaa aagaacttat ttttgaggaa aggaaagccc tgtacagtag gattttgtga catgaatggc aaatgtgaga aacgagtaca ggatgtaatt gaacgatttt gggatttcat tgaccagctg agcatcaata cttttggaaa gtttttagca gacaacatcg ttgggtctgt cctggttttc tccttgatat tttggattcc tttcagcatt cttgtccatt gtgtggataa gaaattggat aaacagtatg aatctctgtc tctgtttcac cccagtaacg tcgaaatgct gagcagcatg gattctgcat cggttcgcat tatcaaaccc tttcctgcgc cccagactcc aggccgcctg cagcctgccc ctgtgatccc ttcggcgcca gcagctccaa aactggacca ccagagaatg gacaccatcc aggaagaccc cagcacagac tcacatatgg acgaggatgg gtttgagaag gaccccttcc caaatagcag cacagctgcc aagtcatttg aggatctcac ggaccatccg gtcaccagaa gtgaaaaggc tgcctccttt aaactgcagc gtcagaatcg tgttgacagc aaagaaacag agtgctaatt tagttctcag ctcttctgac ttaagtgtgc aaaatatttt tatagatttg acctacaaat caatcacagc ttgtattttg tgaagactgg gaagtgactt agcagatgct ggtcatgtgt ttgaacttcc tgcaggtaaa cagttcttgt gtggtttggc ccttctcctt ttgaaaaggt aaggtgaagg tgaatctagc ttattttgag gctttcaggt tttagttttt aaaatatctt ttgacctgtg gtgcaaaagc agaaaataca gctggattgg gttatgaata tttacgtttt tgtaaattaa tcttttatat tgataacagc actgactagg gaaatgatca gttttttttt atacactgta atgaaccgct gaatatgagg catttggcat ttatttgtga tgacaactgg aatagttttt tttttttttt tttttttttg ccttcaacta aaaacaaagg agataaatct agtatacatt gtctctaaat tgtgggtcta tttctagtta ttacccagag tttttatgta gcagggaaaa tatatatcta aatttagaaa tcatttgggt taatatggct cttcataatt ctaagactaa tgctctctag aaacctaacc acctacctta cagtgagggc tatacatggt agccagttga atttatggaa tctaccaact gtttagggcc ctgatttgct gggcagtttt tctgtatttt ataagtatct tcatgtatcc ctgttactga tagggataca tgctcttaga aaattcacta ttggctggga gtggtggctc atgcctgtaa tcccagcact tggagaggct gaggttgcgc cactacactc cagcctgggt gacagagtga gactctgcct caaaaaaaaa aaaaaaaaaa aa <210> 2 <211> 2236 <212> DNA <213〉人類 1620 1680 1740 1800 I860 1920 1980 2040 2100 2160 2220 2280 2340 2400 2460 2520 2580 2640 2700 2760 2820 2880 2940 3000 3060 3120 3180 3240 3300 3360 3420 3480 3540 3572 2 200914052 、U U / 乙 gctgttgcaa cactgcctca ctcttcccct cccaccttct ctcccctcct ctctgcttta 60 attttctcag aattctctgg actgaggctc cagttctggc ctttggggtt caagatcact 120 gggaccaggc cgtgatctct atgcccgagt ctcaaccctc aactgtcacc ccaaggcact 180 tgggacgtcc tggacagacc gagtcccggg aagccccagc actgccgctg ccacactgcc 240 ctgagcccaa atgggggagt gagaggccat agctgtctgg catgggcctc tccaccgtgc 300 ctgacctgct gctgccactg gtgctcctgg agctgttggt gggaatatac ccctcagggg 360 ttattggact ggtccctcac ctaggggaca gggagaagag agatagtgtg tgtccccaag 420 gaaaatatat ccaccctcaa aataattcga tttgctgtac caagtgccac aaaggaacct 480 - acttgtacaa tgactgtcca ggcccggggc aggatacgga ctgcagggag tgtgagagcg 540 gctccttcac cgcttcagaa aaccacctca gacactgcct cagctgctcc aaatgccgaa 600 aggaaatggg tcaggtggag atctcttctt gcacagtgga ccgggacacc gtgtgtggct 660 gcaggaagaa ccagtaccgg cattattgga gtgaaaacct tttccagtgc ttcaattgca 720 gcctctgcct caatgggacc gtgcacctct cctgccagga gaaacagaac accgtgtgca 780 f ^ cctgccatgc aggtttcttt ctaagagaaa acgagtgtgt ctcctgtagt aactgtaaga 840 aaagcctgga gtgcacgaag ttgtgcctac cccagattga gaatgttaag ggcactgagg 900 actcaggcac cacagtgctg ttgcccctgg tcattttctt tggtctttgc cttttatccc 960 tcctcttcat tggtttaatg tatcgctacc aacggtggaa gtccaagctc tactccattg 1020 tttgtgggaa atcgacacct gaaaaagagg gggagcttga aggaactact actaagcccc 1080 tggccccaaa cccaagcttc agtcccactc caggcttcac ccccaccctg ggcttcagtc 1140 ccgtgcccag ttccaccttc acctccagct ccacctatac ccccggtgac tgtcccaact 1200 ttgcggctcc ccgcagagag gtggcaccac cctatcaggg ggctgacccc atccttgcga 1260 cagccctcgc ctccgacccc atccccaacc cccttcagaa gtgggaggac agcgcccaca 1320 — agccacagag cctagacact gatgaccccg cgacgctgta cgccgtggtg gagaacgtgc 1380 ccccgttgcg ctggaaggaa ttcgtgcggc gcctagggct gagcgaccac gagatcgatc 1440 I ggctggagct gcagaacggg cgctgcctgc gcgaggcgca atacagcatg ctggcgacct 1500 2220 ggaggcggcg cacgccgcgg cgcgaggcca cgctggagct gctgggacgc gtgctccgcg 1560 acatggacct gctgggctgc ctggaggaca tcgaggaggc gctttgcggc cccgccgccc 1620 tcccgcccgc gcccagtctt ctcagatgag gctgcgcccc tgcgggcagc tctaaggacc 1680 gtcctgcgag atcgccttcc aaccccactt ttttctggaa aggaggggtc ctgcaggggc 1740 aagcaggagc tagcagccgc ctacttggtg ctaacccctc gatgtacata gcttttctca 1800 gctgcctgcg cgccgccgac agtcagcgct gtgcgcgcgg agagaggtgc gccgtgggct 1860 caagagcctg agtgggtggt ttgcgaggat gagggacgct atgcctcatg cccgttttgg 1920 gtgtcctcac cagcaaggct gctcgggggc ccctggttcg tccctgagcc tttttcacag 1980 tgcataagca gttttttttg tttttgtttt gttttgtttt gtttttaaat caatcatgtt 2040 acactaatag aaacttggca ctcctgtgcc ctctgcctgg acaagcacat agcaagctga 2100 actgtcctaa ggcaggggcg agcacggaac aatggggcct tcagctggag ctgtggactt 2160 ttgtacatac actaaaattc tgaagttaaa gctctgctct tggaaaaaaa aaaaaaaaaa 3 200914052 2236 _______________3. 3.3 3 3.3.3. <210> 3 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標把序列 <40〇> 3 gctctcagac tacgatatt 19 <210> 4 <211> 21 <212> DNA <213> 人造 <220> <223> 帶有3’NN之訊息股 <22〇> <221> misc_RNA <222> (1).7(19) <223>核苷酸 <220> <221> misc_feature <222> (20)7.(21)

<223> 任何，A, T/U, C, G <400> 4 gcucucagac uacgauauun η 21 <21〇> 5 <211> 21 <212> DNA <213> 人造 <220> <223> 帶有3·ΝΝ之訊息股 <22〇> <221> raise RNA <222> (1).7(19) <223〉核苷酸 <220> <221> misc_feature <222> (20)7.(21)

<223> 任何，A, T/U, C, G <400> 5 aauaueguag ucugagagcn η 21 <210> 6 <211> 21 <212> RNA <213> 人造 <220> <223〉訊息股 <40〇> 6 gcucucagac uacgauauuu u 21 7 21 <210> <211> 4 200914052 <213〉人造 <220> <223〉反訊息股 <400> 7 aauaucguag ucugagagcu u <210> 8 <211> 19 丄z夕 RNA <213> 人造 <220> <223> 訊息股 <400> 8 gcucucagac uacgauauu <210> 9 <211> 19 <212> RNA <213> 人造 \ <220> <223> 反訊息股 <400> 9 aauaucguag ucugagagc <210> 10 <211> 48 <212> DNA <213> 人造 <220> <223> 帶有環圈之髮夾形二倍體 <220> <221> misc RNA <222> (1).7(19) <223> 核苷酸 <220> <221> misc feature <222> (20)7.(27) <223> 任何，A, T/U, C, G <220> <221> misc feature <222> (28)7.(48) <223> 核苷酸 <400> 10 gcucucagac uacgauauun nnnnnnnaau aucguagucu gagagcuu <21〇> 11 <211> 25 <212> DNA <213> 人造 <220> <223〉訊息股 <400> 11 gcucucagac uacgauauuc ucucu <21〇> 12 5 200914052 <212> RNA <213> 人造 <220> <223> 訊息股 <400> 12 gcucucagac uacgauauuc ucucu <210> 13 <211> <212> <213> 27 RNA 人造 <220> <223> 反訊息股 <400> 13 agagagaaua ucguagucug agagcuu <210> 14 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標靶序列 <4〇0> 14 ccagcagcat tcggtaaga <210> 15 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標靶序列 <4〇0> 15 cagcagcatt cggtaagaa <21〇> 16 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標靶序列 <400> 16 agcagcattc ggtaagaaa <21〇> 17 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標靶序列 <400> 17 agagatctac agacttcaa <210> 18 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 200914052 <220> <223>標靶序列 <400> 18 gaaagcgagt acactgtaa <210> 19 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <400> 19 ccatgaagaa cacgtgtaa <210> 20 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <22〇> <223>標靶序列 <400> 20 gaagaacacg tgtaaatta <210> 21 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <400> 21 atcatcgctt ctacagata <210> 22 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <4〇〇> 22 agagcaattt agctttgat <210> 23 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <400> 23 ggtttgacga gcacaaaga <210> 24 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 200914052 <400> 24 tgatccggat ggtctagca <210> 25 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <22〇> <223> 標靶序列 <400〉 25 gcgatcacga gaacaataa <210> 26 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標靶序列 <400> 26 gcagtaaaca atcaateta <210> 27 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <22〇> <223> 標靶序列 <400> 27 caatctataa gaccattga <21〇> 28 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標靶序列 <400> 28 tttcaagaac gcagcaata <210> 29 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <22〇> <223> 標靶序列 <400> 29 ttcaagaacg cagcaataa <210> 30 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標歡序列 <4〇0> 30 tcaagaacgc agcaataaa 200914052 <210> 31 <211> 19 <212> DNA <213〉人造 <220> <223>標靶序列 <400> 31 tcatgtatct gaacaacga <210> 32 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <400> 32 acagcgactg cacgttgaa f <210> 33 ^ <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <400> 33 gattaatgct acttgcaaa <210> 34 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <4〇0> 34 ctggagtcct gtgcatgta <210> 35 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <22〇> <223>標靶序列 <400> 35 tggagtcctg tgcatgtaa <210> 36 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <400> 36 ggagtcctgt gcatgtaat <210> 37 200914052 <212> DNA <213> 人造 <220> <223> 標把序列 <4〇〇> 37 catgtaatga aactgacaa <210> 38 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標把序列 <400> 38 ctatgtcgat gctgaacaa <210> 39 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標靶序列 <400> 39 caaatgtgag aaacgagta <210> 40 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標靶序列 <400> 40 gcatcggttc gcattatca <210> 41 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標靶序列 <400> 41 atcggttcgc attatcaaa <210> 42 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標靶序列 <4〇0> 42 ccaagtcatt tgaggatct <210> 43 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 200914052 <220> <22 3>標乾序列 <400> 43 ccggtcaeca gaagtgaaa <210> 44 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <400> 44 aaaggetgee tcctttaaa <210> 45 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <4〇0> 45 tttaaactgc agegteaga <210> 46 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <400> 46 agatgctggt catgtgttt <210> 47 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 i <220> <223>標靶序列 <400> 47 atgctggtca tgtgtttga <210> 48 <211> 19 <212> DNA <213〉人造 <220> <223>標靶序列 <400> 48 tgctggtcat gtgtttgaa <210> 49 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <22 3>標靶序列 200914052 <400> 49 ctggtcatgt gtttgaact <210> 50 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標把序列 <4〇0> 50 tgtaatgaac cgctgaata <210> 51 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標把序列 <400> 51 gtaatgaacc gctgaatat <210> 52 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標靶序列 <400> 52 ctaagactaa tgctctcta <210> 53 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標靶序列 <400> 53 agactaatgc tctctagaa <210> 54 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標把序列 <4〇〇> 54 cctaaccacc taccttaca <210> 55 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標靶序列 <4〇〇> 55 tacatggtag ccagttgaa 200914052 <210> 56 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <400> 56 tggtagccag ttgaattta <210> 57 <211〉 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <40〇> 57 tttatggaat ctaccaact f <210> 58 气_ <211> 19 <212> DNA <213〉人造 <220> <223>標靶序列 <400> 58 ggaatctacc aactgttta <210> 59 <211> 19 <212> DNA <213〉人造 <220> <223>標靶序列 <40〇> 59 accaggccgt gatctctat <210> 60 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <22〇> <223>標靶序列 <40〇> 60 aattcgattt gctgtacca <210> 61 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <400> 61 tcgatttgct gtaccaagt <210> 62 200914052 <212> DNA <213> 人造 <220> <223> 標靶序列 <400> 62 acaaaggaac ctacttgta <21〇> 63 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標靶序列 <4〇0> 63 gaacctactt gtacaatga <210> 64 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標靶序列 <400> 64 ctacttgtac aatgactgt <21〇> 65 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標靶序列 <400> 65 tgtgagagcg gctccttca <210> 66 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標靶序列 <4〇〇> 6 6 tcaggtggag atctcttct <210> 67 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標靶序列 <4〇0> 67 caggtggaga tctcttctt <210> 68 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 200914052 <220> <223>標靶序列 <40〇> 68 agaaccagta ccggcatta <21〇> 69 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <400> 69 gaaccagtac cggcattat <210> 70 <211> 19 <212> DNA <213〉人造 <220> <223>標靶序列 <400> 70 aaccagtacc ggcattatt <210> 71 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <400> 71 ccggcattat tggagtgaa <210> 72 <211> 19 <212> DNA <213> 人造

<220> <223>標靶序列 <400> 72 cggcattatt ggagtgaaa <210> 73 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <40〇> 73 agcctggagt gcacgaagt <210> 74 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 200914052 <400> 74 ctcctcttca ttggtttaa <210> 75 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <22〇> <223> 標靶序列 <4〇〇> 75 ttggtttaat gtatcgcta <210> 76 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標靶序列 <400> 76 gtttaatgta tcgctacca <210> 77 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標把序列 <400> 77 tttaatgtat cgctaccaa <210> 78 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <22〇> <223> 標把序列 <400> 78 agtccaagct ctactccat <210> 79 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標靶序列 <40〇> 79 gagcttgaag gaactacta <210> 80 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標靶序列 <400> 80 cttgaaggaa ctactacta 200914052 <21〇> 81 <211> 19 <212> DNA <213〉人造 <220> <223>標靶序列 <400> 81 ttgaaggaac tactactaa <210> 82 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <400> 82 acaagccaca gagcctaga f <210> 83 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <400> 83 tgtacgccgt ggtggagaa <210> 84 <211> 19 <212> DNA <213〉人造 <220> <223>標靶序列 <400> 84 ccgttgcgct ggaaggaat

<21〇> 85 <211〉 19 <212> DNA <213〉人造 <220> <223>標靶序列 <400> 85 tctaaggacc gtcctgcga <210> 86 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <400> 86 ctaatagaaa cttggcact <210> 87 200914052 <212> DNA <213> 人造 <220> <223> 標靶序列 <40〇> 87 taatagaaac ttggcactc <210> 88 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標把序列 <400> 88 aatagaaact tggcactcc <21〇> 89 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標靶序列 <400> 89 atagaaactt ggcactcct <210> 90 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標靶序列 <4〇0> 90 tagaaacttg gcactcctg <210> 91 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標靶序列 <400> 91 atagcaagct gaactgtcc <210> 92 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標靶序列 <40〇> 92 tagcaagctg aactgtcct <21〇> 93 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 200914052 <220> <223>標起序列 <4〇0> 93 agcaagctga actgtccta <210> 94 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <22〇> <223>標靶序列 <400> 94 gcaagctgaa ctgtcctaa <210> 95 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <4〇0> 95 tgaactgtcc taaggcagg <210> 96 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <400> 96 caaaggaacc tacttgtac <210> 97 — <211> 19 <212> DNA <213> 人造 〇 <220> <2 2 3>標靶序列 <400> 97 gagcttgaag gaactacta <210> 98 <211> 19 <212> DNA <213〉人造 <22〇> <223>標靶序列 <40〇> 98 cacagagcct agacactga <210> 99 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220〉 <223>標靶序列 200914052 <400> 99 tccaagctct actccattg <210> 100 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標乾序列 <400> 100 tggagctgtt ggtgggaat <210> 101 <211> 19 <212> DNA <213〉人造 <220> <223>標靶序列 <400> 101 gacagggaga agagagata <210> 102 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <40〇> 102 gggagaagag agatagtgt <210> 103 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <400> 103 gagaagagag atagtgtgt <210> 104 <211> 19 <212> DNA <213〉人造 <220> <223>標靶序列 <4〇〇> 104 gaagagagat agtgtgtgt <210> 105 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <22〇> <223>標靶序列 <4〇0> 105 gtgtgtgtcc ccaaggaaa 19200914052 <210> 106 <211> 19 <212> DNA <213〉人造 <220> <223>標靶序列 <400> 106 gaaaatatat ccaccctca <210> 107 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <400> 107 aaatatatcc accctcaaa 19 <210〉 <211> <212〉 <213> 8 A造 〇9 N J 1 1 D Λ <22〇> <223>標靶序列 <400> 108 ctgtaccaag tgccacaaa 19 <210> 109 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <400> 109 accaagtgcc acaaaggaa 19

<210> 110 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <400> 110 ccssgtgccscasaggsac <210> 111 <211> 19 <212> DNA <213〉人造 <220> <223>標靶序列 <400> 111 ccacaaaggaacctacttg 19 <210> 112 21 19 200914052 <212> DNA <213> 人造 <220> <223> 標靶序列 <400> 112 caaaggaacc tacttgtac <210> 113 <211> <212〉 <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標靶序列 <400> 113 aaaggaacct acttgtaca <210> 114 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標靶序列 <400> 114 gatacggact gcagggagt <210> 115 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標靶序列 <40〇> 115 cggactgcag ggagtgtga <210> 116 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標靶序列 <400> 116 tccttcaccg cttcagaaa <210> 117 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標靶序列 <4〇〇> 117 cagaaaacca cctcagaca <210> 118 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 200914052 <22〇> <223>標靶序列 <400> 118 tgcctcagct getccaaat <210> 119 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <4〇0> 119 ctccaaatgc cgaaaggaa <210〉 120 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <22〇> <223>標靶序列 <40〇> 120 tccaaatgccgaaaggaaa <210> 121 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <22〇> <223>標靶序列 <40〇> 121 ccaaatgccg aaaggaaat <210> 122 <211> 19 <212> DNA <213〉人造

<22〇> <223>標靶序列 <400> 122 gccgaaagga aatgggtca <21〇> 123 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <400> 123 aggaaatggg tcaggtgga <210> 124 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <22〇> <223>標靶序列 200914052 <400> 124 ggaaatgggt caggtggag <210> 125 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <400> 125 gtgtgtggct gcaggaaga <210> 126 <211> 19 <212> DNA <213〉人造 <220> <223>標靶序列 <400〉 126 ggaagaacca gtaccggca <210> 127 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <40〇> 127 ccatgcaggt ttctttcta <210> 128 <211> 19 <212> DNA <213〉人造 <220> <223>標靶序列 <400> 128 catgcaggtt tctttctaa <21〇> 129 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <40〇> 129 tgcaggtttc tttctaaga <210> 130 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <400> 130 aggtttcttt ctaagagaa 200914052 <210> 131 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <400> 131 ggtttctttc taagagaaa <210> 132 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <40〇> 132 agagaaaacg agtgtgtct <210> 133 <211> 19 <212> DNA <213〉人造 <220> <223>標靶序列 <400> 133 gagtgtgtct cctgtagta <210> 134 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <22 3>標靶序列 <400> 134 ctgtagtaac tgtaagaaa r\ <210> 135 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <400> 135 agaaaagcct ggagtgcac <21〇> 136 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <400> 136 ttgagaatgt taagggcac <210> 137 200914052 <212> DNA <213> 人造 <220> <223> 標靶序列 <400> 137 tgttaagggc actgaggac <210> 138 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標乾序列 <400> 138 ggtcattttc tttggtctt <210> 139 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標靶序列 <4〇0> 139 cctcctcttc attggttta <21〇> 140 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標靶序列 <40〇> 140 tcctcttcat tggtttaat <210> 141 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <22〇> <223> 標靶序列 <40〇> 141 ctcttcattg gtttaatgt <210> 142 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標靶序列 <400> 142 tcttcattgg tttaatgta <210> 143 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 200914052 <220> <223>標乾序列 <400> 143 cttcattggt ttaatgtat <210> 144 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標托序列 <40〇> 144 tccaagctct actccattg <210> 145 <211> 19 <212> DNA <213〉人造 <220> <223>標靶序列 <400> 145 ctccattgtt tgtgggaaa <210> 146 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <22〇> <223>標乾序列 <400> 146 gggaaatcga cacctgaaa <210> 147 - <211> 19 <212> DNA <213> 人造 广V <220〉 <223>標乾序列 <40〇> 147 tgaaggaact actactaag <210> 148 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <400> 148 acctccagct ccacctata <210> 149 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 200914052 <400> 149 ccc^casgcc acagagcct <210> 150 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標靶序列 <4〇〇> 150 acgccgtggt ggagaacgt <210> 151 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標靶序列 <400> 151 ggaaggaatt cgtgcggcg <21〇> 152 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標靶序列 <400> 152 tgagcgacca cgagatcga <21〇> 153 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標靶序列 <400> 153 gcgaggcgca atacagcat <210> 154 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標靶序列 <400> 154 tgggctgcct ggaggacat <210> 155 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標靶序列 <4〇0> 155 200914052 ·<_Λ tg33cgttt <210> 156 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <400> 156 L c y L y y L y y L yydLyyLcid <210> 157 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <400> 157 gaaagcgagt acactgtaa

<210> 158 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <400> 158 gagcctgact ctagggttc <210> 159 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <400> 159 ccacataaga gatgatgat <210> 160 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <400> 160 cataagagat gatgatgtt <210> 161 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <40〇> 161 cgaatataac atagagcca 200914052 ) <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <40〇> 162 gttaatgata ccaaagaca <210> 163 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <22〇> <223>標靶序列 <400> 163 ctgaagatat caagaatgt <210> 164 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <22〇> <223>標把序列 <400> 164 atgaagagtt getcccaaa <21〇> 165 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <4 0 0> 1 65 atgaagaaca cgtgtaaat <210> 166 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <40〇> 166 aattattggt ggtageaga <210> 167 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <400> 167 atcatcgctt ctacagata <210> 168 <211> 19

<212> DNA 200914052 <220> <223>標靶序列 <400> 168 atacatgggc agaggggaa <21〇> 169 <211> 19 <212> DNA < 213 > 人造 <220> <223>標靶序列 <400> 169 gggcagaggg gaagagagt <210> 170 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <400> 170 ggaagagagt acaactaca <210> 171 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <22〇> <223>標靶序列 <4〇0> 171 gaagagagta caactacaa <210> 172 <211> 19

<212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <4〇0> 172 gagagtacaa ctacaaatt <210> 173 <211〉 19 <212> DNA <213> 人造 <22〇> <223>標靶序列 <4〇〇> 173 gctaattgac agagttgat <210> 174 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> 200914052 序列 <400> 174 cggaacactt catgggata <210> 175 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標靶序列 <400> 175 ggataatgca ggttttaaa <210> 176 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標靶序列 <400> 176 aggctatgga atacagata <210> 177 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標靶序列 <40〇> 177 gaatacagat agagcagat <21〇> 178 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標靶序列 <400> 178 ggtaaaacct ggtgaaaag <210> 179 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標靶序列 <400> 179 gtgaaaagca ctacaacat <210> 180 <211> <212> <213> 19 DNA 人造 <220> <223> 標靶序列 <4〇0> 180 200914052 — 一 ctaaagttt <21〇> 181 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <400> 181 t a t g g g a a c L cLLyyaLLd <210> 182 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223> 標靶序列 <400> 182 tgacgagcac aaagaatta <210> 183 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223> 標靶序列 <4〇〇> 183 gcacaaagaa ttatggtaa <210> 184 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <22〇> <223> 標靶序列 <400> 184 ggttacaact catgaattg <210> 185 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223> 標靶序列 <400> 185 actcatgaat tgggacata <210> 186 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223> 標靶序列 <4〇0> 186 gtggcgatca cgagaacaa 200914052 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <40〇> 187 ctataagacc attgaaagt <210> 188 <211> 19 <212> DNA <213〉人造 <220> <223>標靶序列 <400> 188 gaacgcagca ataaagttt <210> 189 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <40〇> 189 gcaataaagt ttgtgggaa <210> 190 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <400> 190 caataaagtt tgtgggaac <210> 191 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <40〇> 191 gagggtggat gaaggagaa <21〇> 192 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <400> 192 ggatgaagga gaagagtgt <210> 193 <211> 19

<212> DNA 200914052 <220> <223>標靶序列 <400> 193 gcatcatgta tctgaacaa <210> 194 <211> 19 <212> DNA <2i3> 人造 <22〇> <223>標靶序列 <400> 194 caggaaatgc tgaagatga <210> 195 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 广） <220> 、 <223〉標靶序列 <400> 195 gaatggcaaa tgtgagaaa <21〇> 196 <211〉 19 <212> DNA <213> 人造 <22〇> <223>標靶序列 <4〇〇> 196 ggatgtaatt gaacgattt <210> 197 <211> 19 <212> DNA <213〉人造 <220> <223>標靶序列 <400> 197 gtggataaga aattggata <21〇> 198 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <40〇> 198 ggataaacag tatgaatct <21〇> 199 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> 19200914052 ,巴序列 <400> 199 cctttaaact gcagcgtca <210> 200 <211> 19 <212> DNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <40〇> 200 cgtgttgaca gcaaagaaa 19 <210〉 <211〉 <212> <213〉 14 ο 9 N V 2 1 D人 <220> <223>標靶序列 <400> 201 gcaaagaaac agagtgcta 19 <210> 202 <211> 19 <212> RNA <213> 人造 <220> <223>標靶序列 <400> 202 caaaggaacc uacuuguac 19 <21〇> 203 <211> 19 <212> RNA <213〉人造 <220> <223>標靶序列 <400> 203 gagcuugaag gaacuacua 19 <21〇> 204 <211> 19 <212> RNA <213> 人造 <220> <223〉標靶序列 <400> 204 cacagagccu agacacuga 19 <21〇> <211〉 <212〉 <213>

5A造 ο 9 N L 2 1 R <220> <223>標靶序列 <40〇> 205 uccaagcucu acuccauug 19 36

Claims (1)

1. 200914052 十、申請專利範圍： 1. 一種透過RNA干擾衰減TNFRl mRNA或TACE mRNA之 表現之干擾性RNA分子之用途，該用途係製造一醫藥品 用於高眼壓或青光眼之治療性及/或預防性處理。 2. 如申請專利範圍第1項之用途，其中該干擾性RNA分子 為雙股以及各股分別長約19至約27個核苷酸。 3. 如申請專利範圍第2項之用途，其中各股分別長約19核 苷酸至約25個核苷酸。 4. 如申請專利範圍第2項之用途，其中各股分別長約19核 苷酸至約21個核苷酸。 5. 如申請專利範圍第2項之用途，其中該訊息股及反訊息 股係藉一鏈接子連接而形成於病人體内可衰減TACE或 TNFRl mRNA之表現之shRNA。 6_如申請專利範圍第2項之用途，其中該干擾性RNA分子 具有鈍端。 、 7.如申請專利範圍第2項之用途，其中該干擾性RNA分子 之至少一股包含3,旁懸部。 8·如申請專利範圍第7項之用途，其中該3,旁懸部包含約1 至約6個核苷酸。 9. 如申請專利範圍第8項之用途，其中該3,旁懸部包含2個 核苷酸。 10. 如申請專利範圍第1項之用途，其中該干擾性RNA分子 係透過噴霧、經頰、經皮、經皮内、經吸入、經肌肉、 經鼻内、眼内、肺内、靜脈、腹内、經鼻、經眼、經口、 200914052 11. 12. 13. 14. 15. 、屋耳、經腸道外、貼片、皮下、舌下、局部、或經皮等 途徑投予。 如申晴專利範圍第1項之用途，其中該干擾性RNA分子 係透過由可表現該干擾性RNA分子之一表現載體之活 體内表現而投予。 如申請專利範圍第1項之用途，其中該病人患有或有發 展成高眼壓或青光眼之風險。 如申請專利範圍第1項之用途，其中該干擾性RNA分子 辨識與SEQ ID NO : 3及SEQ ID NO : 14-SEQ ID NO : 58中之任一者相對應之TACE mRNA之部分。 如申請專利範圍第1項之用途，其中該干擾性RNA分子 辨識與SEQ ID NO : 155-SEQ ID NO : 201中之任一者相 對應之TNFR1 mRNA之部分。 如申請專利範圍第1項之用途，其中該干擾性RNA分子 辨識TACE mRNA之一部分，其中該部分包含SEQ ID NO : 1 之核苷酸297 ' 333、334、335、434、470、493、 547、570、573、618、649、689、755、842、844、846、 860、878、894、900、909、910、913、942、970、984、 1002、1010、1053、1064、1137、1162、1215、1330、 1334 、 1340 、 1386 、 1393 、 1428 、 1505 、 1508 、 154卜 1553、1557、1591、1592、1593、1597、1604、1605、 1626 、 1632 、 1658 、 1661 、 1691 、 1794 、 1856 、 1945 、 1946、1947、1958、2022、2094、2100、212卜 2263、 2277 、 2347 、 2349 、 2549 、 2578 、 2595 、 2606 、 2608 、 2 200914052 2629、2639、2764、2766、2767、2769、3027、3028、 3261 、 3264 、 3284 、 3313 、 3317 、 3332或3337 。 16. 如申請專利範圍第1項之用途，其中該干擾性RNA分子 辨識TNFR1 mRNA之一部分，其中該部分包含SEQ ID NO : 2之核香酸124、328、387、39卜 393、395、406、 42卜 423、444、447、455、459、460、467、469、470、 471、475、479、513、517、531、543、556、576、587、 588、589、595、6(Π、602、6U、612、65卜 664、667、 668、669、677、678、785'786、788、79卜 792、804、 813 ' 824'838、843、877、884、929、959、960、961、 963、964、965、970、973、974、1000、1002、1013、 1026 、 1053 、 1056 、 1057 、 1058 、 1161 、 1315 、 1318 、 1324 、 1357 、 1360 、 1383 、 1393 、 1420 、 1471 、 1573 、 167卜 2044、2045、2046、2047、2048、2089、2090、 2091或2092 。 17. 如申請專利範圍第1項之用途，其中該干擾性RNA分子 包含至少一項修飾。 18. 如申請專利範圍第1項之用途，其中該干擾性RNA分子 為 shRNA、siRNA、或 miRNA。 19. 如申請專利範圍第1項之用途，其中該干擾性RNA分子 係經由局部、玻璃體内、經鞏膜、眼周、結膜、腱下、 眼房内、視網膜下、結膜下、眼球後、或淚小管内途徑 投予個體。 200914052 七、指定代表圖： (一） 本案指定代表圖為：第（1 )圖。 (二) 本代表圖之元件符號簡單說明： (無) 八、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式：