TW200911288A - Peptide-polymer conjugates - Google Patents

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TW200911288A TW097125276A TW97125276A TW200911288A TW 200911288 A TW200911288 A TW 200911288A TW 097125276 A TW097125276 A TW 097125276A TW 97125276 A TW97125276 A TW 97125276A TW 200911288 A TW200911288 A TW 200911288A
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Laurence I Wu
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Description

200911288 九、發明說明： 【發明所肩戈^技術領織】 交叉引用 本申請主張於2〇〇7年7月5曰遞交的美國臨時申請 5 60/948,095的優先權。該臨時申請的内容通過弓丨用引入。 本發明係為一種肽-聚合物的結合物。 t先前技術3 發明背景 細胞生物學和重組蛋白技術的進展導欵蛋白治療的産 10 生。 然而，仍舊存在主要的難題。多數蛋白容易發生蛋白 降解，因此具有短的壽命。其他缺點包括水溶性低以及中 和抗體的誘導。 聚合物（例如聚乙二醇(PEG)結合至蛋白阻礙了蛋白水 15解酶接近蛋白骨架’導致增強的蛋白穩定性。另外，其也 可以提高水溶性並最小化免疫原性。需要結合聚合物至蛋 白的有效方法。 【^^明内容】 發明概要 本發明基於出乎意料的發現肽的A 垃 町°卩分可以通過不飽和 ^貝偶聯至聚合物以顧肽_聚合物的結合物，雜蛋白藥 物：一方面，本發_倾在於下料式㈣合物·狀結合 200911288 A-GrL-G2-B， 其中，A是聚合物的部分；GjPG2每個獨立地是鍵或 者聯接官能團；L是亞稀基(alkenylene)或亞炔基(alkynylene) 部分；和B是肽部分。 5 參考上述通式’聚合物-肽結合物可具有一種或多種下 述特徵：A是具有分子量2〜l〇〇kD(優選12〜30kD)的聚亞 烷基氧化物(polyalkylene oxide)部分，G4〇G2每個是鍵，B 是干擾素部分或含有1〜4個其他氨基酸殘基的修飾干擾 素，和L是C6亞稀基。 10 術語“聚亞烷基氧化物部分’，指衍生自線性、分支或星 形聚亞烷基氧化物的單價基團。聚亞烷基氧化物部分的分 子量可以是2〜100 kD。聚亞烷基氧化物部分是飽和或不飽 和的。聚亞烷基氧化物部分的實例包括但不限於聚乙烯氧 化物、聚乙二醇、聚異丙烯氡化物、聚丁烯氧化物及其共 15聚物。其他聚合物例如葡聚糖、聚乙烯醇、聚丙醯胺或基 於碳水化合物的聚合物也可以用來代替聚亞烷基氧化物部 分，只要其不疋抗原性的、有毒的或者引發免疫反應。聚 亞烧基氧化物部分是取代的或未取代的。例如，其可以是 甲乳基封％>的 5^乙一醇（methoxy-capped polyethylene 20 glycol (mPEG))。 術語“肽部分，’指來自天然肽或修飾肽的單鍵基團。天 然肽可以疋干擾素-aa、干擾素_0、生長激素或抗體。修飾 肽可以是例如含有干擾素和在干擾素—以^的义末端有丨〜4 200911288 IFN ο
個其他氨基酸殘基的肽。該修飾干擾素的實例是 IFN表示干擾素-α^部分，其Ν-末端鍵合至羰基。 術語“聯接官能團，，指二價官能團，其—端與聚入 分連接而另-端與肽料連接。實例包括但不^於^部 -S-、羧酸酯、羰基、碳酸酯、胺、氨基甲酸鹽、尿素* 醢基、亞韻基、氨基、亞氨基、經錢基、1 磷酸酯基團。 幾'或 10 15 術語“亞烯基，，指含有2〜10個碳原子及一或多個 的二價直鏈或分支的碳氫化合物。亞稀基的實例包括作 限於乙烯基(ethenylenyl)、丙烯和2_丁烯。術語“亞炔武 含有2〜10個碳原子及-或多個三鍵的二價直鏈或分支^ 碳虱化合物。亞块基的實例包括但不限於 、ο狹、i_丙块和 2-丁炔。 本文提及的亞稀基和亞快基包括取代和未取代部分。 取代基：實例包括Cl-Cl0烷基、c2_Ci。烯基、Μι。炔基、 CVQ環烷基、Q-C8環稀基、Cl_Cl()烷氧基，芳基，芳氧美， 雜芳基’雜芳氧基，氨基、CrC—氨基、C ^ 二: 芳氨基、，二芳氨基、减基、絲基氨基、crCl^基續酿 胺，芳Μ醯胺，祕，_素，硫基、C1_C滅硫基，芳硫 基，腈，氮，醯基，醯氧基，羧基和羧酸酯。 如果可以，上述肽·聚合物的結合物可叹游離形式或 是鹽的形式。例如’可IX在本發明的肽_聚合物結合物的陰 離子和正電荷基團(例如氨基)之間形成鹽。適宜的陰離子包 7 20 200911288 括氣離子4科、_子、⑽嫌 _、甲績酸，、三氣乙_乙 r根、 在本發明的多肽·聚合物結合物的陽離子和2，可以 =1^形❹。適宜的陽離子包括鈉離子、^7 鎮離子、_子和_子，例如四曱基銨離子。離子、 另卜肽-聚合物結合物可具有一個 個或多個不對稱中心。〜m M u雙鍵’或〜 合物、π 合物可以0卜消旋物、消^ 、、a、單個相映體、非對映m物和"* 或順式或E-或Z-雙鍵異構形式。 反式 10 不 本發明聚合物-肽結合物的兩個實例如下所
〇*^IFN mPEG〆 V和 i5 其中’⑽阳具有分子量皿D和IFN是干擾素·％部分。 15 另—方面，本發明的特徵在於一種製備肽-聚合物結合 物的方法。該方法包括使A-GrL，-CHO和Ηπ-Β，偶聯，並 還原該偶聯産物以形成A.GrL，_CH2NHB，的肽_聚合物結合 物八中，A疋聚合物部分，（^是鍵或者聯接官能團，l， 是亞烯基或亞炔基，和H2N_b，是N_末端游離肽，例如干擾 20素或修飾的干擾素。 干擾素是用於治療HCV或HBV感染的免疫調節藥物。 參見例如Journal of Vascular and Interventional Radiology 13 (2002) _ 191-196。因此，再一方面’本發明的特徵在於 8 200911288 利用下述通式的干擾素-聚合物結合物治療丙型肝炎病毒 (HCV)感染或乙型肝炎病毒(HBV)感染： A-Gi-L-G2-B > 其中’ A是聚合物的部分，GjuG2每個獨立地是鍵或 5者聯接官能團；L是亞烯基或亞炔基部分；和B是N-末端游 離肽干擾素或在N-末端含有1〜4個其他氨基酸殘基的修飾 的干擾素。 另外，在本發明的範圍内是含有僅描述用於治療HCV 感染或HBV感染的多肽-聚合物結合物’和這一治療用途以 10 及該結合物在製造治療上述提及的感染的藥物中的應用。 發明的一個或多個實施方式的細節將在下述說明中提 出。發明的其他特徵，目的和優點將從說明書和申請專利 範圍中顯而易見。 【貧施方式3 15 較佳實施例之詳細說明 本發明涉及肽-聚合物結合物，其中肽部分通過不飽和 接頭偶聯至聚合物。 通過化學領域衆所周知的合成方法可以製備本發明的 肽-聚合物結合物。例如，含有離去基團（例如溴）的接頭分 20子可以通過醚聯接首先偶聯至含有羥基端基團的mpEG。隨 後，含有官能團（例如氣基）的肽分子可以與接頭的官能團 (例如醛官能團）反應以形成本發明的肽_聚合物結合物。 上述化學反應包括使用溶劑、試劑、催化劑、保護基 團及去保護基團反應劑，以及某些反應條件。它們在本文 9 200911288 具體描述的步驟前或步驟後可另外包括步驟，以爲了最終 允許合成肽-聚合物結合物而添加或移除適宜的保護基 團。另外，各種合成步驟可以改變的順序或次序進行以得 到目的多肽-聚合物結合物。在合成在適用的肽-聚合物結合 5 物中有用的合成化學轉變以及保護基團方法學是本領域已 知的並且包括例如，於下面所述R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers(1989) ； T.W. Greene 和 P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis，2d_ Ed.，John Wiley和 Sons(1991) ; L. Fieser和 M. 10 Fieser, Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis, John Wiley和 Sons(1994);以及L· Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley和 Sons (1995) 及其後續版本。 下述路線1示出了製備本發明的肽-聚合物結合物的實 15 例。化學品I具有聚合物部分和醛基官能團。其可以與肽 11(具有游離氣官能團）反應。生成産物III隨後例如通過加氮 或由NaBH3CN還原以提供肽-聚合物結合物IV。 II 偶聯 A—G1—L'—CH + H2N—B--► A —G^—i!一CH=N B丨 i π m I還原
A—G，一 L_ —CH2-NH—日1 IV A是聚合物部分 2〇 G〗是鍵或者聯接官能團 L’亞烯基或亞炔基 B是肽部分 10 200911288 路線1 因此合成的肽-聚合物結合物可以進一步通過諸如柱 色譜或高壓液相色譜的方法而純化。 本發明的肽-聚合物結合物可以以結合物的形式而是 5 藥學活性的。或者，其可以通過酶促切開肽部分和聚合物 部分間的聯接在體内釋放藥學活性肽(例如通過水解）。涉及 體内切開聯接的酶的實例包括氧化酶(例如過氧化酶、胺氧 . 化酶或脫氫酶）、還原酶(例如酮類還原酶)和水解酶(例如蛋 白酶、酯酶、硫酸酯酶或磷酸酯酶）。 10 因此，本發明的一個方面涉及給予有效量的一種或多 種上述肽-聚合物結合物用於治療疾病（例如H C V或Η B V感 染）的方法。具體地，通過給予受試者有效量的一種或多種 肽-聚合物結合物可以治療疾病。該受試者可以由衛生保健 專家根據任何適當的診斷方法的結果而鑒定。 15 如本文所使用，術語“治療”或“治療”限定爲施用或給 予具有病症、病症症狀、疾病或該病症的繼發性病症，或 者傾向於該病症的受試者（人或動物）包括肽-聚合物結合物 的組合物，其目的在於治癒、減輕、緩解、治療或改善該 病症、病症症狀、疾病或該病症的繼發性病症，或者該病 20 症的傾向。“有效量”指賦予被治療受試者治療效果的肽-聚 合物結合物的量。治療效果可以是被動的（即由一些檢測或 標記可測量的）或主動的（即受試者給出該效果的暗示或感 覺）。 含有有效量的至少一種上述肽-聚合物結合物以及藥 25 學可接受載體的藥物組合物也在本發明的範圍内。另外， 11 200911288 本發明包括給予患有一種或多種疾病的受試者有效量的一 種或多種肽-聚合物結合物的方法。如本領域技術人員所 知，有效的劑量根據例如肽-聚合物結合物的水解速率、待 治療的疾病類型、給藥途徑、賦形劑的使用以及與其他治 5 療學上的治療共同使用的可能性而變化。 爲了實踐本發明的方法，具有一種或多種上述提及化 合物的組合物可以非經腸道、口服、鼻腔、直腸、局部或 口腔給藥。本文使用的術語“非經腸道”指皮下、皮内、靜 脈内、肌内、關節内、動脈内、滑膜内、胸骨内、鞘内、 10 病竈内、腹腔内、氣管内或顱内注射以及任何適宜的注入 技術。 滅菌的可注射組合物可以是非毒性的非經腸道可接受 的稀釋劑或溶劑中的溶液或懸液，例如1，3-丁二醇的溶 液。可以使用的可接受的載體和溶劑是甘露醇、水、Ringer’s 15 溶液以及等滲氣化鈉溶液。另外，日常使用固定化油作爲 溶劑或懸浮介質（例如合成的單-或二-甘油自旨）。脂肪酸(例如 油酸）及其甘油S旨衍生物作爲天然藥物可接受油（例如撖複 油或蓖麻油）尤其是以其聚氧乙烯化形式在製備注射劑時 是有用的。這些油溶液或懸液也可以含有長鏈醇稀釋劑或 20 分散劑，或者甲基羧酸纖維素或類似的分散劑。其他通常 用於製造藥學可接受固體、液體或其他劑型的通常使用的 表面活性劑（例如Tweens或Spans或其他類似的乳化劑或生 物利用度增強劑）也可以用於配製的目的。 口服給藥的組合物可以是任何口服可接受的劑型，包 12 200911288 括膠囊、片劑、乳液和水懸液、分散劑和溶液。在片劑的 情況下，通常使用的載體包括乳糖和玉米澱粉。通常也添 加潤滑劑（例如硬脂酸鎂）。對於膠囊型式的口服給藥，有用 的稀釋劑包括乳糖和幹玉米澱粉。當口服給予水懸液或乳 5 液時，活性成分可以懸浮或溶解到與乳化劑或懸浮劑結合 的油相中。如果需要，可以加入某些甜味劑、調味劑或著 色劑。 根據藥物配製領域公知的技術可以製備鼻用氣霧劑或 吸入組合物。例如，該組合物可以使用苯甲醇或其他適宜 10 的防腐劑、吸收促進劑以增強生物利用度、氟碳、和/或本 領域已知的其他增溶劑或分散劑以鹽溶液製備。具有一種 或多種上述化合物的組合物也可以以用於直腸給藥的栓劑 形式給予。 藥學可接受載體通常與一種或多種上述提及的化合物 15 一起使用。藥物組合物的載體必須是“可接受的”條件是其 與組合物的活性成分相容（並優選能穩定該活性成分）並對 待治療的受試者無害。一種或多種增溶劑可以用作藥學賦 形劑以遞送上述提及的化合物。其他載體的實例包括膠體 二氧化碎、硬脂酸鎮、纖維素、十二烧基硫酸鈉和D&C黃 20 色 # 10。 下面的實施例被認爲僅僅是說明性的並且不以任何方 式限制公開文本的其餘内容。不需要進一步詳細闡述，相 信本領域技術人員可以基於本文的說明，利用本發明至其 最大限度。本文引用的所有文獻通過引用整體引入。 13 200911288 製備（Z)-六—4-嬌臬mPEG醛 ⑴製備2-[5-漠-(Z)-五-3-烯基]-1,3-二氧戊烷(化合物1)
在N2下於-40°C向 THF(120mL)中的（Z)-5-(l，3-二氧戊 5 環-2-基）五-2-浠-1-醇(3.〇g，19mmol)溶液加入三乙胺（5.8 mL, 41·7 mmol)和曱基磺醯氣(2_2 mL，28.5mmol)。攪拌lh後，加 入THF(20mL)中的LiBr(16.5g，190mmol)溶液。反應混合物 溫熱至室溫並攪拌lh以提供白色沈澱。加入甲基t-丁醚 (MTBE，60mL)和水飽和NH4Cl(120mL)。除去有機層並用甲 10 基t-丁醚（lOOmL)提取水層。在MgS04中乾燥結合的有機層 並濃縮以得到粗殘留物，其進一步利用使用20 : 1己烷 /EtOAc的混合物作爲洗脫劑的矽膠柱色譜純化以得到作爲 淡育液體的2-[5- >臭-(Z)-五-3-稀基]-1,3-二氧戊院 (3.4g，80%)。 15 'H NMR (400MHz,CDC13) ： 5.82-5.76(m. 1H) > 5.69-5.62 (m，1H)，4.92(t，J=4.6 Hz，1H)，4.06(d，J=8.4 Hz，2H)， 4.04-3.97(m，2H)，3.94-3.88(m，2 H)，2.35-2.29(m，2 H)， 1.83-1.78(m，2 H)。 (ii)製備(Z)-六_4_烯基mPEG醛乙二醇縮醛(化合物2) 20
1 2 14 200911288 向900mL 乾燥的THF中的20 kD Mpegoh (49.7g，2.49mmol)(SunBio Inc.,CA,USA)溶液加入 60% 氳化 鈉（1.5 g, 37.4 mmol)，隨後加入2-[5—溴-(Z)-五-3-烯基]-1,3-二氧戊烧(5.5 g, 24.9mmol)和蛾化鉀(0.32g)。生成的混合物 5 回流20h，冷卻至室溫，用冷水(600mL)緩慢淬火，然後真 空濃縮以除去THF。殘留物用二氯曱烷(3x900mL)提取。在 MgS04中乾燥結合的有機層並在真空中濃縮至約400mL。 該溶液然後在2h内滴加入MTBE(7.0L)。收集生成的白色沈 凝並在真空乾燥以産生作爲白色粉末的化合物2 10 (45.0g，91%)。 巾 NMR(400MHz，CDC13)5 5.55-5.52(m，2H)，4.82 (t， •M.OHz，1H)，4.06(d，J=4.0 Hz，2 Η)，3.95-3.89(m，2H)， 3.34(s，3H)，2.19-2.14(m，2H)，1.71—1.66(m，2H)。 (iii)製備(Z)-六-4—烯基mPEG醛（化合物3)
化合物2(45_0g，2.25mmol)溶解於700mL pH2的緩衝液 (檸檬酸-HC1-NaCl)中。室溫攪拌該溶液48h並用二氣甲烧 (3x1.0 L)提取。有機層被結合、用鹽水沖洗、用無水MgS〇4 乾燥，在真空中濃縮至約350mL並在2h内滴加入MTBE(6.0 2〇 L)。收集生成的白色沈澱並在真空下乾燥以産生白色粉末 化合物3(42.0g，93%)。 4 NMR(400MHz ’ CDC13)8 9.74(s，1H)，5.60-5.55(m， 15 200911288 1H)，5.53-5.48(m ’ 1H)，4.06(d, J=6.4 Hz，2H) ’ 3.34(s， 3H) ’ 2.49(t，J=6.8Hz，2H)，2.39~2.35(m，2H)。 製備（E)-六—4一烯早mPEG醛(化合物4、 以與化合物3相同的方法製備化合物4，除了使用2-[5-5 溴_(Z)-五-3-烯基]-1,3-二氧戊烷代替2-[5-溴-(E)-五-3-烯 基]-1,3-二氧戊烧。 NMR(400MHz, CDC13)S 9.71(s，1H)，5.70—5.61(m， 1 H)，5.68-5.49(m，1H)，3.90(d，J=5.6Hz，2H)，3.32(s， 3 H)，2.51-2.47(m，2H)，2.35-2.30(m，2H)。
10 製備前體TFN 使用人基因組DNA作爲模板利用PCR方法克隆修飾的 重組人干擾素-a2b，即前體IFN。基於人干擾素-a2b的側翼 序列(GenBank登陸號# J00207)合成募核苷酸。得到的PCR 產物亞克隆到pGEM-T載體(Promega)。通過pGEM-T克隆再 15 次PCR擴增IFN變體並隨後利用Ndel/BamHI作爲克隆位點 亞克隆到蛋白表達載體pET-24a(No vagen) ’ 一種T7 RNA聚 合酶啓動子驅動載體。然後將載體pET-24a轉化到E. coli BL21-CodonPlus(DE3)-RIL(Stratagene)株系。通過於卡那黴 素(50pg/mL)和氣黴素（50 pg/mL)存在下保持轉化的E. coli 20 BL21-CodonPlus(DE 3)-RIL來篩選高表達克隆。 使用極品肉湯培養基(BD,200mL)在1〇〇〇„^在燒瓶中 繁殖BL21-C〇d〇nPlus(DE 3)-RIL和前體IFN基因。燒瓶在 370C 以 230rpm搖蕩 16h。在 5L發酵罐（Bi0fl0 3⑽〇 ; New Brunswick Scientific Co.，Edison, NJ)中進行分批和補料分 16 200911288 批發酵。分批發酵使用150 mL過夜預培養的接種物和3L帶 有卡那徽素（50pg/mL)、氯徽素(50 ug/mL)、0.4%丙三醇和 〇·5%(ν/ν)痕量元素（1 〇g/L的 FeS04 · 7H20,2_25g/L 的 zns〇4. 7H20，lg/L 的 CuS04 _ 5H2O,0.5g/L 的 MnS04 . H2〇,〇.3g/L 的 5 H3B〇3,2g/L 的 CaCl2.2H2O,0.1g/L 的（NH4)6Mo7〇24, 0.84g/L EDTA,50ml/L HC1)的極品肉湯培養基。溶解的氧氣濃度控 制在35%而通過加入5N的NaOH水溶液將pH保持在7.2。製 備含有600g/L葡萄糖和20g/L的MgS〇4.7ΗζΟ的供料溶液。 當pH升高至高於設置點的數值，加入適當體積的供料溶液 10 以提高培養物肉湯中的葡萄糖濃度。通過加入iptg至終濃 度ImM誘導前體IFN基因的表達並在培育3h後收集培養物 肉湯。 用大約比例1 : 10(濕重g/mL)的TEN緩衝液（5〇mM Tris-HCl(pH8.0)，1 mM EDTA，100 mMNaCl)重懸浮收集 15 的細胞團’並利用微射流機破碎，然後於10,〇〇〇rpm離心 20min。用TEN緩衝液沖洗含有包涵體(IB)的糰粒2次並按上 述離心。然後在150 mL的4 Μ鹽酸胍(GuHCl)水溶液中懸浮 含IB的糰粒並在20,000 φΐη離心15min。然後在50 mL的6 Μ GuHCl溶液中溶解IB。通過在新製備的重折疊緩衝液（1〇〇 20 mM Tris-HCl(pH 8_0)，0.5 M L-精氨酸，2 mM EDTA)中稀 釋變性的IB開始重折疊，該緩衝液只在加入時攪拌。允許 重折疊反應混合物在不攪拌下混合48h。用20mM Tris緩衝 液（帶有2 mM EDTA和0.1M尿素，pH 7.0)透析重折疊的重組 人干擾素-《2b(即，前體IFN)用於Q-Sepharose柱色譜進一步 17 200911288 純化。 將重折疊後的重組人蛋白前體IFN上樣到 Q—Sepharose柱（GE Amersham Pharmacia, Pittsburgh, PA)。 柱被預平衡並用20 mM Tris-HCl緩衝液(pH 7.0)沖洗。産物 5 用 20 mM Tris-HCl緩衝液(pH 7.0)和200 mM NaCl的混合物 洗脫。含有前體IFN的流分基於其吸收在280nm收集。通過 蛋白檢測試劑盒利用Bradford方法(Pierce, Rockford, IL)確 定前體IFN的濃度。
結合 mPEGSj·和 Pro-IFN 10 上述實施例3中製備的Q-Sepharose純化的前體IFN( 1 mg)與化合物3反應。最終的反應産物含有50 mM麟酸納(pH 6.0)、5 mM硼氫化氰鈉（Aldrich, Milwaukee, WI)和 10 mg化 合物3。混合物然後在室溫培育20h以形成作爲主要
15 産物的單-PEG化的前體IFN(化合物5)，其然後用SP XL
Sepharose 色譜（GE Amersham Pharmacia, Pittsburgh,PA)純 化。具體地，SP柱被預平衡並用20mM乙酸鈉(pH5.4)沖洗。 然後用含有20mM乙酸鈉(pH5.4)和60mM NaCl的緩衝液洗 脫化合物5。未反應的ifn(即前體IFN)通過含有20 mM乙酸 20納(PH 5·4)和100 mM NaCl的緩衝液洗脫。通過12%的十二 烷基磺酸鈉-聚乙醯胺凝膠的凝膠電泳分析被洗脫流分並 且該信號通過考馬斯亮藍染色汉—25〇和銀染檢測。基於其保 18 200911288 留時間和在280 nm的吸收收集含化合物5的流分。通過蛋白 檢測試劑盒利用Bradford方法(Pierce, Rockford，IL)石雀定化 合物5的濃度。化合物5的分離産率是30%〜40%。 以類似的方式使化合物4與前體IFN反應以提供具有E 5 形式的結合物。 其他實施方式 說明書中公開的所有特徵可以以任何結合來組合。本 說明書中公開的每種特徵可以被用於相同、等效或類似目 的的替代特徵所代替。因此，除非另有說明，公開的每種 10 特徵僅僅是通用的等效或類似特徵系列的實例。 從上述說明中，本領域技術人員可以輕易地確定本發 明的必要特徵，並且可以對發明進行各種改變和修改以使 其適用於各種用途和條件而不背離其精神和範圍。因此， 其他實施方式也在下述申請專利範圍的範圍内。 15 【圖式簡單說明】 (無） 【主要元件符號說明】 (無） 19

Claims (1)

  1. 200911288 十、申請專利範圍： 1. 一種聚合物-肽的結合物，具有下述通式： A-G1-L-G2-B， 其中，A是聚合物的部分，Gj〇G2每個獨立地是鍵 5 或者聯接官能團；L是亞烯基或亞炔基部分；和B是肽部 分。 2. 如申請專利範圍第1項所述的結合物，其中所述A是 mPEG部分，其分子量是2〜100 kD。 3. 如申請專利範圍第2項所述的結合物，其中所述GjaG2 10 每個是鍵。 4. 如申請專利範圍第3項所述的結合物，其中所述B是干擾 素部分。 5. 如申請專利範圍第3項所述的結合物，其中所述B是含有 1〜4個其他氨基酸殘基的修飾的干擾素部分。 15 6.如申請專利範圍第5項所述的結合物，其中所述B是 ,IFN -nJ，IFn是干擾素-a2b部分，其N-末端鍵合至羰基。 7. 如申請專利範圍第6項所述的結合物，其中所述L*C6 亞烯基。 8. 如申請專利範圍第7項所述的結合物，其中所述A是具有 20 分子量12〜30 kD的mPEG。 9. 如申請專利範圍第1項所述的結合物，其中所述GjaG2 每個是鍵。 10. 如申請專利範圍第1項所述的結合物，其中所述B是干擾 20 200911288 素部分。 12_如申請專利範圍第1項所 貝所述的結合物，其中所述Β是 AFH 〜 U·如申請專利範圍第1項所逃的結合物，其中所述B是含有 1〜4個其他氨基酸殘基的修都的干擾素部分 Ο
    ’ IFN是干擾素_〇^部分 77其Ν-末端鍵合至羰基。 13·如申請專利範圍第丨項所 4的結合物，其中所述[是(：6 亞鄉暴。 14·^請專利範圍第1項所述的結合物，其中所述Α是聚亞 烧基乳化物部分。 10 15 15·::?專利範圍第14項所述的結合物，其中所述A的分 子罝疋12〜30 kD。 16.如申請專利範圍第丨項所述 曰 幻、，、° s物’其中所述結合物 疋 o^ifn 或， 其中所述mPEG的分子眚θ ^ ’ 疋20 kC^°IFN是干擾素 -an邛分，其N_末端鍵合至羰基。 17.—種製備肽-聚合物的結合物的方法， 偶聯A-GrU-CHC^uHA-B，，4 >f〇 還原偶聯產物以形成通式. 聚合物結合物; VA'G*^CH2NHB^a- 其中A是聚合物的部分， θ Λ , 鍵或者聯接官能團，L， 疋亞稀基或亞炔基部分；和ΗΝθ 疋末端游離肽。 21 20 200911288 18. 如申請專利範圍第17項所述的結合物，其中G!是鍵；和 A是具有分子量12〜30kD的mPEG。 19. 如申請專利範圍第18項所述的結合物，其中H2N-B’是干 擾素部分。 5 20.如申請專利範圍第18項所述的結合物，其中H2N-B’是在 N末端含有1〜4個其他氨基酸殘基的修飾的干擾素部 分。 21.如申請專利範圍第17項所述的結合物，其中所述肽-聚 合物結合物是
    其中所述mPEG的分子量是20kD和IFN是干擾素 -a2b部分，其N-末端鍵合至羰基。 22. —種治療丙型肝炎病毒或乙型肝炎病毒感染的方法，包 括給予需要的受試者有效量的下述通式的肽-聚合物結 合物： A-G1-L-G2-B ’ 其中，A是聚合物的部分；Gj〇G2每個獨立地是鍵 或者聯接官能團；L是亞烯基或亞炔基部分；和B是N-末端游離肽干擾素或在N-末端含有1〜4個其他氨基酸 殘基的修飾的干擾素。 23. 如申請專利範圍第22項所述的結合物，其中所述Gj〇G2 每個是鍵；和A是具有分子量12〜30kD的mPEG。 24. 如申請專利範圍第23項所述的結合物，其中所述B是干 22 200911288 擾素部分。 25. 如申請專利範圍第23項所述的結合物，其中所述B是含 有1〜4個其他氨基酸殘基的修飾的干擾素部分。 26. 如申請專利範圍第25項所述的結合物，其中所述B是 ,IFN IFN是干擾素-a2b部分，其N-末端鍵合至羰基。 27.如申請專利範圍第22項所述的結合物，其中所述肽-聚 合物結合物是 o^l FN mPEGs^ 或 mPEG 10 其中所述mPEG的分子量是20kD和IFN是干擾素 -a2b部分，其N-末端鍵合至羰基。 23 200911288 七、指定代表圖： (一） 本案指定代表圖為：第（ ）圖。（無) (二) 本代表圖之元件符號簡單說明： 八、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式：
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