TARIFNAME THIEL-BEHNKE KORNEA DISTROFISI (TBKD) IÇIN BIR YÖNTEM VE SÖZ KONUSU YÖNTEM ILE ÜRETILEN BIR YAPAY DOKU ISKELESI Teknik Alan Bulus, Thiel-Behnke Komea Distrofisini (TBKD) tedavi etmek üzere gelistirilmis bir yöntem ve söz konusu yönteme göre üretilen üç boyutlu yapay bir doku iskelesi ile ilgilidir. Önceki Teknik Bowman tabakasi eriskinlerde 8-12 um kalinliginda tip 1, tip III, tip V ve tip VII kollajen agindan olusmaktadir. TGFBI genindeki mutasyonlar bu tabakada iki farkli formda hiyalin yapida birikimle karakterize olan Reis-Bücklers kornea distrofisi (RBKD) ve Thiel-Behnke kornea distrofisine (TBKD) neden olurlar. Klinik olarak bu iki distrofiyi birbirinden ayirmak güçtür (Dr. Fulya YAYLACIOGLU TUNCAY Doktora Tezi, Hacettepe Üniversitesi 2019). TBKD, 10-20 yas arasinda ortaya çikan bal petegi görünümünde subepitelyal opasiteler ile karakterizedir. Birikimler Masson Trikrom ile boyanir. Bu fenotipten R555Q mutasyonu sorumludur (Dr. Fulya YAYLACIOGLU TUNCAY Doktora Tezi, Hacettepe Üniversitesi 2019). Teknigin bilinen durumunda yer alan US4014335A yayin numarali patent dokümaninda bir oküler ilaç verme cihazindan bahsedilmektedir. Söz konusu dokümanda kontrollü salim yapan bir ilaçtan, ve göze yerlestirilmek üzere sekillendirilmis sizdirrnaz bir kaptan bahsedilmektedirj ilacin uzun bir süre boyunca sürekli uygulanmasi için bir oküler uygulama cihazinin birkaç katmandan olustugu da anlatilmaktadir. Bulusnn Kisa Açiklamasi: Bulusun amaci, Thiel-Behnke Kornea Distrofisini (TBKD) tedavi etmek üzere gelistirilmis bir yöntem ve söz konusu yönteme göre üretilen kontrollü salim (controlled release) yapan üç boyutlu yapay bir doku iskelesi gerçeklestirrnektir. Söz konusu amaca yönelik olarak bulusta, bahsedilen hasarin boyutunu ve morfolojisini taklit eden üç boyutlu yapay bir doku iskelesi (veya yama) üretilmektedir. Bulusun avantaji, hastanin hasarli bölge boyutlari referans alinarak sadece o hastaya özgü hasarli bölgeyi tedavi edebilecek boyutlari ayarlanabilir 3 boyutlu doku iskelesi üretilebilmektedir. Karmasik geometrilerin 3 boyutlu yazici kullanilarak üretilmesi diger tekniklere göre avantajdir. 3D (üç boyutlu) yazici, dokularin tam sekillerini taklit etmek için idealdir. Diger yöntemlerle yapilarin kalinlik ve gözenek boyutu degerlerinin tam olarak ayarlanmasi kolay degildir. Bununla birlikte, 3D baski, karmasik geometrileri her katmani da taklit ederek olusturmak için islevsel bir tekni'ktir. Diger üretim tekniklerine göre yeni ve daha iyi bir yöntemdir ve doku iskelesinin gözenek boyutu, gözenekliligi ve karmasik sekillerinin kontrollü üretimini saglamaktadir. Thiel-Behnke hasarinin taklit edilmesi de geometri, por boyutlari, kalinlik gibi parametrelerin kolay ayarlanabilirligini gerektirir. Bu nedenle üç boyutlu yazici kullanmak avantajdir. Sekillerin açiklamasi Sekil 1. Antibiyotik katkili ve polimerik yapida yapay doku iskelesinin temsili görünümüdür. Sekil 2. Yapay doku iskelesi üretmek için kullanilan solüsyon üretim yönteminin akis diyagramidir. Sekil 3. Thiel Behnke distrofisinin insan korneasindaki görünümüdür. Sekil 4. Üç boyutlu, antibiyotik yüklü, bal petegi desenine sahip dokunun mikroskop görüntüleridir. Sekil 5. Taramali elektron mikroskop görüntüleridir. Sekil 6. Yapay doku iskelelerinin floresan mikroskop görüntüsüdür. Sekil 7. Hücrelerin iskeleler üzerindeki morfolojik görüntüsüdür. Sekil 8. Doku iskelelerinin S. aureous bakterisine karsi antibakteriyel aktivite sonucu: %0.l Van (1), % . Sekillerdeki Referanslarin Aciklanmasi Bulusun daha iyi anlasilabilmesi için sekillerdeki numaralarin karsiligi asagida verilmistir: . Yapay doku iskelesi l. Etken madde 2. Polimer HK. Hasarsiz Kisim 100.Yöntem Bulusun Detayli Açiklamasi: Bulus, Thiel-Behnke kornea distrofisi (TBKD) hasari tedavisinde kullanilmak üzere hasarli dokunun iyilesmesi için 3D olarak üretilen bir yapay doku iskelesi (10) ile ilgilidir. Söz konusu yapay doku iskelesi (10), kontrollü salim (controlled release) yaparak belli zaman araliklarinda ilaç etken maddesinin salimini saglamaktadir. Böylece ilaç, kontrollü bir sekilde hasarli dokuya salinmaktadir. Söz konusu hasarin tedavisinde kullanilmak üzere yapay doku iskelesini (10) meydana getirmek için kullanilan solüsyon; en az bir etken madde (1) ve/veya en az bir tasiyici polimer (2) içermektedir. Söz konusu sentetik polimer (2), tercihen Polimetilmetakrilatdir (PMMA), ancak uygulamada bununla sinirli degildir. Söz konusu PMMA polimeri, göz içi lenste özellikle kullanildigi için yani lenslerin ana malzemesi oldugu için tercih edilmistir. Söz konusu etken madde bir antibiyotik sinifinda olup, tercihen Vankomisindir, ancak uygulamada bununla sinirli degildir. Yapay doku iskelesi (10), % 0.] ila % 10 oraninda Vankomisinîn içermektedir. Yapay doku iskelesi (10), bulusun uygulamalarina göre, % 0.1 veya % 0.5 veya % 2 veya % 10 Vankomisin içermektedir. Söz konusu oranlarin kullanilma amaci, ilacin hem bakteriye karsi etkili olmasini saglamak hem de mümkün oldugunca etken madde miktarini düsük kullanmaktir. Vankomisin, kornea keratite neden olan S.aureus bakterisine karsi antibakteriyel etkisi oldugu için tercih edilmistir. Bulusta kullanilan vankomisin etken maddesi kullanimi ile; epitel iyilesme, stromal intiltratlarin çözülmesi ve ön kamara iltihabinin temizlenmesi açisindan sefazolin- gentamisin göz damlalarindan üstün oldugu bulunmustur. Yapay doku iskelesi (10), tercihen biyomimetik bal petegi fomiunda olup, biyoyazici ile üç boyutlu yazim teknigiyle üretilmektedir. Yapay doku iskelesi (10), normal nanotiber ya da düz film seklinde de üretilebilmektedir. Ancak, Thiel-Behnke distrofisinin özelligi bal petegi seklinde hasar olusturmasi sebebiyle bulusta biyomimetik bal petegi formu tercih edilmistir. Eger, form normal düz film ya da fiber form olarak kullanilirsa tüm bölgelere ilaç verilmis olmakta yani saglikli bölge de ilaca maruz kalmaktadir. Fakat bal petegi formundaki doku iskelesine yüklenen ilaç, sadece etken maddenin yüklendigi doku iskelesinin kapsadigi bölgelerde etkili olmaktadir. Thiel Behnke distrofisinin insan korneasindaki görünümü Sekil 3 "te verilmistir. Yapay doku iskelesi (10), önceden belirlenmis boyutlarda üretilebilmektedir. Söz konusu boyut, tercihen 20 x 20 x 0.3 mm3 olup , ancak uygulamada bununla sinirli degildir. Yapay doku iskelesinin (10) bal petegi (veya altigen) görünümlü formu Sekil-1`de temsili olarak verilmistir. Ayrica Sekil 4 ve Sekil 5"te üç boyutlu, antibiyotik yüklü, bal petegi desenine sahip yapay doku iskelesinin (10) optik mikroskop ve taramali elektron mikroskobu (Scanning Electron Microseopy, SEM) görüntüleri verilmistir. Bulus; söz konusu dokunun tasarimi, üretimi ve karakterizasyonu asamalarindan olusmaktadir. Üç boyutlu yapay doku iskelelerinin (10) üretiminin ilk kismi tasarimdir. Üç boyutlu yapay doku iskeleleri (10) önceden belirlenmis boyutlarda olup, tercihen 20 x 20 x 0.3 mm3 boyutlarindadir. Bulusun ilk asamasinda doku iskelesi modeli, bir 3D çizim programinda (örnegin Solidworks) olusturulmustur. Söz konusu programda önceden belirlenmis boyutlarda tasarlanan model bir dilimleme programi (örnegin Simplify) yardimiyla cihazin içerdigi bir kontrol birimi vasitasiyla üretilmistir. 3D yapay doku iskelelerinin (10) üretilebilmesi için kontrol birimi söz konusu yapay modeli bir koda dönüstürmektedir. Daha sonra olusturulan kod, üç boyutlu yaziciya bir haberlesme birimi örnegin bluetooth yardimiyla aktarilmistir. Üç boyutlu üretim yapan cihaza yüklenen kod ile cihazin içerdigi bir diger kontrol birimi tarafindan yapay doku iskelesi (10), 3D olarak üretilmektedir. Söz konusu yapay doku iskelesinin (10) eni ve boyu, üç boyutlu yazicinm X-Y eksenlerinde hareketini saglayan siringa baglantili baslik ile ve yüksekligi ise Z ekseni hareketini saglayan tabla hareketi ile üretilmistir. Bulus konusu yapay doku iskelesinin (10) üretimi için kullanilacak final solüsyonun üretim yönteminin (100) yöntem adimlari asagidaki gibidir: - Yapay doku iskelesinin (10) matriksini olusturmak için önceden belirlenmis oranlarda en az bir polimerin önceden belirlenmis oranda en az bir organik bilesik içerisinde çözdürülmesi (101) - Farkli oranlarda en az bir etken maddenin solüsyon içerisine eklenmesi ve 3D yapay doku iskelesi üretiminde kullanilacak final solüsyonun elde edilmesi (102) 101 . adimda söz edilen polimer PMMA"dir, ancak uygulamada bununla sinirli degildir. 101 . adimda söz edilen organik bilesikler Diklorometan/Tetrahidrofurari (50:50) karisimi olup, uygulamada bununla sinirli degildir. PMMA; siklohekzan, kloroform, diklorometan, benzen, etil asetat, formik asit gibi birçok çözücüde de çözünmektedir. Dolayisiyla, 101 . adimda söz edilen organik bilesikler siklohekzan, kloroform, diklorometan, benzen, etil asetat, forrnik asit olup, uygulamada bununla sinirli degildir. 101 . adimda söz edilen polimer ve Diklorometan/Tetrahidrofuran orani tercihen % 40 olup, ancak uygulamada bununla sinirli degildir. Söz konusu oranin tercih edilmesinin nedeni, akiskanlik ve üç boyutlu yazicida yazdirilabilirdik açisindan en etkili oran olmasidir. 102. adimda söz edilen etken madde tercihen Vankomisin olup, uygulamada bununla sinirli degildir. Yapay doku iskelesinin (10) transplantasyonunda herhangi bir bakteri kaynakli keratit olusumunu engellemek için vankomisin gibi gram pozitif bakteriye etki edebilecek herhangi bir ilaç ya da bitki ekstresi kullanilabilmektedir. 102. adimda etken madde oranlari % 0.1 ila % 10'dir, ancak uygulamada bununla sinirli degildir. uygulamada bununla sinirli degildir. 102 . adimda söz edilen etken madde oranlari daha tercihen %8 ila % 10"dur. 102 . Adimda elde edilen solüsyon, biyoyazim yapan üç boyutlu yazici haznesine konulmakta ve üç boyutlu yapay doku iskeleleri (10) olusturulmaktadir. Biyoyazim süresince, önceden belirlenmis bir dis çapa sahip bir igne kullanilmistir. Söz konusu ignenin dis çapi 0.3 mm olup, uygulamada bununla sinirli degildir. Kullanilan igne plastik olup, uygulamada bununla sinirli degildir. Yapay doku iskelesinin (10) üretimi için kullanilan parametreler, yazim hizi, solüsyon akis orani, igne çapi ve yazim sicakligidir. Söz konusu parametreler tercihen sirasiyla 6 mm/sn Bu parametreler farkli oranlarda antibiyotik yüklü solüsyonlarin fiziksel özelliklerine göre optimize edilmistir. Optimize parametreler; viskozite, yogunluk, yüzey gerilimi parametreleridir. Bu degerler tüm konsantrasyonlar için farkli olmakla birlikte Tablo-1 "de verilmistir. Doluluk orani (%60) ise tüm solüsyonlar için sabittir. Üretimden sonra floresan mikroskopta hücrelerin çekirdeklerini görüntülemek için DAPI (4',6-Diamidino-Z-phenylindole dihydrochloride) boyama kullanilmistir. Solüsyonlar Yogunluk (g/cm3) Yüzey gerilimi V'islgozLtg Tablo-1: Bulusta kullanilan PMMA ve/Veya Vankomisin oranlarina göre Viskozite, yogunluk, yüzey gerilim parametreleri Üretilen yapay doku iskelelerinin (10); l, 3, 7 günlük MTT testi sonucunda, tüm inkübasyon süreleri için, üretilen tüm doku iskelelerinin %100 canlilik degerinin üzerinde olduklari, proliferasyonu arttirdiklari söylenebilir (Grafik 1 (a)). Hücre yogunlugu, tutunmasi DAPI ile boyanan hücre çekirdeklerinin iskele üzerindeki dagilimi Iloresan mikroskobu (Sekil 6).ile incelenmistir. Kök hücrelerin doku iskeleleri üzerindeki morfolojisi taramali elektron mikroskop ile incelenmistir (Sekil 7). Grafik 1, mezenkimal kök hücrelerin, bulus ile üretilen yapay doku iskelesi (10) ile 1, 3, 7 gün kültürlendikten sonraki canlilik degerlerini göstermektedir. 2B kök hücre hatti olup kontrol grubu olarak seçilmistir. MTT testi sonucunda canlilik degerleri %50 oldugundan üretilen yapay doku iskeleleri (10) biyouyumludur. Tüm örnekler için canlilik degerleri %100 oldugundan üretilen doku iskelelerinin hücre çogalmasini, büyümesini arttirdigi söylenebilmektedir. Sekil 6°da, hücre çekirdek boyasi olan DAPI ile boyanan kök hücrelerin yapay doku iskelesi (10) üzerinde kültürlendikten sonraki dagilimi, yogunlugu görülmektedir. Görüldügü gibi hücreler, yapinin her tarafina yayilmis ve oldukça yogundur. Bu da kullanilan yapay doku iskelesinin (10) hücre ile ne kadar uyumlu oldugunu göstermektedir. Sekil ?de ise SEM ile hücrelerin yapay doku iskelesi (10) üzerindeki morfolojisi gösterilmektedir. Yapay doku iskelesi (10), hücre ile kültürlendikten sonra fikse edilmekte ve hücrenin fiksasyon sonrasi yapiya tutunma potansiyeline bakilmaktadir. Görüldügü gibi siyah kisim yapay doku iskelesini (10), beyaz yuvarlak toplu sekil ise hücreyi göstermektedir. Hücre yasavahlllrllgi ('36) Grafik 1. Yapay doku iskelelerinin (10) hücre canlilik grafigi (a), Üretilen yapay doku iskelelerinin (10) disk difüzyon yöntemi ile belirlenen antibakteriyel aktivite sonuçlarina göre, %10 Vankomisin içeren diskler S.aure0us bakterisine karsi antibakteriyel aktivite göstermistir ve ölçülen zon çapi 12 mm"dir (Sekil 8). Vankomisin, birçok Gram pozitif bakteriye karsi etkindir. S. Aureous, kornea keratite neden olan bakterilerden biri oldugu için bu bakteriye odaklanilmistir. Sekil 8"de, IV numarali kisim, %10 Vankomisinin aktivitesini göstermektedir. Görüldügü gibi diger ilaç yüklü örneklerde yapay doku iskelesi (10) etrafinda bakterinin yaklasmasini engelleyecek bir inhibisyon bölgesi olusmamis, sadece %10 Van içeren örnegin etrafinda 12 mm, lik zon çapi olusmustur. Bulusun Sanayiye Uygulanabilirligi: Bulus konusu yöntem (100) ve söz konusu yöntemle (100) üretilen bir yapay doku iskelesi (10), Thiel-Behnke teshisli hastalarinin tedavisinde kullanilmak üzere sanayiye uygulanabilir niteliktedir. Bulus yukaridaki örnek uygulamalar ile sinirli olmayip, teknikte uzman bir kisi kolaylikla bulusun farkli diger uygulamalarini ortaya koyabilir. Bunlar bulusun istemler ile talep edilen koruma kapsaminda de gerlendirilmelidir. Sekil 1H K Yapay doku iskelesinin (10) matriksini olusturmak için önceden belirlenmis 100 oranlarda en az bir polimerin önceden belirlenmis oranda en az bir organik bilesik içerisinde çözdürülmesi Farkli oranlarda en az bir etken maddenin solüsyon içerisine eklenmesi ve 3D yapay doku iskelesi (10) üretiminde kullanilacak final solüsyonun elde edilmesi TR TR TR DESCRIPTION A METHOD FOR THIEL-BEHNKE CORNEA DYSTROPHY (TBKD) AND AN ARTIFICIAL TISSUE SCAFFOLD PRODUCED BY SAID METHOD Technical Field The invention includes a method developed to treat Thiel-Behnke Corneal Dystrophy (TBKD) and a three-dimensional artificial structure produced according to said method. It is related to tissue scaffolding. Background Art Bowman's layer consists of type 1, type III, type V and type VII collagen networks with a thickness of 8-12 um in adults. Mutations in the TGFBI gene cause Reis-Bücklers corneal dystrophy (RBKD) and Thiel-Behnke corneal dystrophy (TBKD), which are characterized by two different forms of hyaline structure accumulation in this layer. It is difficult to distinguish these two dystrophies clinically (Dr. Fulya YAYLACIOGLU TUNCAY Doctoral Thesis, Hacettepe University 2019). TBKD is characterized by subepithelial opacities with a honeycomb appearance that appear between the ages of 10-20. Accumulations are stained with Masson Trichrome. R555Q mutation is responsible for this phenotype (Dr. Fulya YAYLACIOGLU TUNCAY PhD Thesis, Hacettepe University 2019). An ocular drug delivery device is mentioned in the state-of-the-art patent document with publication number US4014335A. The document describes a controlled-release drug, a sealed container shaped to be placed in the eye, and an ocular delivery device consisting of several layers for continuous administration of the drug over an extended period of time. Brief Description of the Invention: The purpose of the invention is to realize a method developed to treat Thiel-Behnke Corneal Dystrophy (TBKD) and a three-dimensional artificial tissue scaffold with controlled release produced according to the said method. For this purpose, in the invention, a three-dimensional artificial tissue scaffold (or patch) that mimics the size and morphology of the said damage is produced. The advantage of the invention is that, taking the patient's damaged area dimensions as a reference, a 3D tissue scaffold with adjustable dimensions that can treat only the damaged area specific to that patient can be produced. Producing complex geometries using 3D printing is an advantage over other techniques. A 3D (three-dimensional) printer is ideal for mimicking the exact shapes of tissues. It is not easy to precisely adjust the thickness and pore size values of the structures with other methods. However, 3D printing is a functional technique for creating complex geometries by mimicking each layer. It is a new and better method compared to other production techniques and provides controlled production of pore size, porosity and complex shapes of the tissue scaffold. Simulating Thiel-Behnke damage also requires easy adjustment of parameters such as geometry, pore sizes, and thickness. Therefore, using a 3D printer is an advantage. Explanation of the figures Figure 1. Representative view of the antibiotic-added and polymeric artificial tissue scaffold. Figure 2. Flow diagram of the solution production method used to produce artificial tissue scaffolds. Figure 3. The appearance of Thiel Behnke dystrophy in the human cornea. Figure 4. Microscope images of three-dimensional, antibiotic-loaded, honeycomb-patterned tissue. Figure 5. Scanning electron microscope images. Figure 6. Fluorescence microscope image of artificial tissue scaffolds. Figure 7. Morphological view of cells on scaffolds. Figure 8. Antibacterial activity result of tissue scaffolds against S. aureous bacteria: 0.1% Van (1), % . Explanation of References in the Figures In order to better understand the invention, the corresponding numbers in the figures are given below: . Artificial tissue scaffold l. Active ingredient 2. Polymer HK. Undamaged Part 100. Method Detailed Description of the Invention: The invention relates to an artificial tissue scaffold (10) produced in 3D for the healing of damaged tissue to be used in the treatment of Thiel-Behnke corneal dystrophy (TBKD) damage. The artificial tissue scaffold (10) in question ensures the release of the active pharmaceutical ingredient at certain time intervals by performing controlled release. Thus, the drug is released into the damaged tissue in a controlled manner. The solution used to create the artificial tissue scaffold (10) to be used in the treatment of the damage in question; It contains at least one active ingredient (1) and/or at least one carrier polymer (2). The synthetic polymer (2) in question is preferably Polymethylmethacrylate (PMMA), but in practice it is not limited to it. The PMMA polymer in question was preferred because it is used specifically in intraocular lenses, that is, it is the main material of lenses. The active ingredient in question is in a class of antibiotics, preferably Vancomycin, but in practice it is not limited to this. Artificial tissue scaffold (10) contains 0% to 10% Vancomycin. The artificial tissue scaffold (10) contains 0.1% or 0.5% or 2% or 10% Vancomycin, according to the applications of the invention. The purpose of using these ratios is to ensure that the drug is effective against bacteria and to use the amount of active ingredient as low as possible. Vancomycin was preferred because it has an antibacterial effect against S.aureus bacteria, which causes corneal keratitis. With the use of vancomycin active ingredient used in the invention; Cefazolingentamicin was found to be superior to eye drops in terms of epithelial healing, dissolution of stromal infiltrates, and clearance of anterior chamber inflammation. The artificial tissue scaffold (10) is preferably in the form of biomimetic honeycomb and is produced by three-dimensional printing technique with a bioprinter. Artificial tissue scaffold (10) can also be produced in the form of normal nanotiber or flat film. However, due to the characteristic of Thiel-Behnke dystrophy that it causes damage in the form of honeycomb, the biomimetic honeycomb form was preferred in the invention. If the form is used as a normal flat film or fiber form, the drug is administered to all areas, meaning the healthy area is also exposed to the drug. However, the drug loaded into the honeycomb-shaped tissue scaffold is effective only in the areas covered by the tissue scaffold where the active ingredient is loaded. The appearance of Thiel Behnke dystrophy in the human cornea is given in Figure 3. The artificial tissue scaffold (10) can be produced in predetermined dimensions. The size in question is preferably 20 x 20 x 0.3 mm3, but in practice it is not limited to this. The artificial tissue scaffold (10) can be produced in predetermined dimensions. Its honeycomb (or hexagonal) looking form is given representatively in Figure 1. Additionally, optical microscope and scanning electron microscopy (Scanning Electron Microseopy) of the three-dimensional, antibiotic-loaded, honeycomb patterned artificial tissue scaffold (10) is shown in Figure 4 and Figure 5. , SEM) images are given. Meet; It consists of the design, production and characterization stages of the tissue in question. The first part of the production of three-dimensional artificial tissue scaffolds (10) is the design. Three-dimensional artificial tissue scaffolds (10) have predetermined dimensions, preferably 20 x 20 x 0.3 mm3. In the first stage of the invention, the tissue scaffold model was created in a 3D drawing program (for example, Solidworks). The model, designed in predetermined dimensions in the program in question, was produced by a control unit included in the device with the help of a slicing program (e.g. Simplify). In order to produce 3D artificial tissue scaffolds (10), the control unit converts the artificial model in question into a code. The created code was then transferred to the 3D printer with the help of a communication unit, such as Bluetooth. The artificial tissue scaffold (10) is produced in 3D by the code loaded into the three-dimensional production device and another control unit included in the device. The width and length of the artificial tissue scaffold (10) in question were produced with the syringe-connected head that enables the movement of the three-dimensional printer in the X-Y axes, and the height was produced with the table movement that provides the Z-axis movement. The method steps of the production method (100) of the final solution to be used for the production of the artificial tissue scaffold (10) of the invention are as follows: - Dissolving at least one polymer in predetermined proportions into at least one organic compound in predetermined proportions to form the matrix of the artificial tissue scaffold (10). (101) - Adding at least one active ingredient in different proportions into the solution and obtaining the final solution to be used in the production of 3D artificial tissue scaffold (102) 101. The polymer mentioned in step 1 is PMMA, but it is not limited to it in practice. The organic compounds mentioned in step 101 are Dichloromethane/Tetrahydrofurary (50:50) mixture, but it is not limited to it in practice. PMMA; cyclohexane, chloroform, dichloromethane, benzene, ethyl acetate, It is also soluble in many solvents such as formic acid. Therefore, the organic compounds mentioned in step 101 are cyclohexane, chloroform, dichloromethane, benzene, ethyl acetate, fornic acid and are not limited to them in practice. The polymer mentioned in step 101 and the Dichloromethane/Tetrahydrofuran ratio are preferably % 40, but it is not limited to this in practice. The reason why this ratio is preferred is that it is the most effective ratio in terms of fluidity and printability on a three-dimensional printer. The active substance mentioned in step 102 is preferably Vancomycin, and it is not limited to this in practice. The artificial tissue scaffold (10) To prevent the formation of any bacterial keratitis during transplantation, any drug or plant extract that can affect gram-positive bacteria, such as vancomycin, can be used. In step 102, the active ingredient rates are 0.1% to 10%, but are not limited to this in practice. In practice, it is not limited to this. 102 . The active ingredient rates mentioned in step 102 are more preferably 8% to 10%. The solution obtained in step 102 is placed in the bioprinting three-dimensional printer chamber and three-dimensional artificial tissue scaffolds (10) are created. During the bioprinting process, they have a predetermined outer diameter. A needle is used. The outer diameter of the needle in question is 0.3 mm, and it is not limited to this in practice. The needle used is plastic, and it is not limited to this in practice. The parameters used for the production of the artificial tissue scaffold (10) are writing speed, solution flow rate, needle diameter and writing. temperature. The parameters in question are preferably 6 mm/sec, respectively. These parameters have been optimized according to the physical properties of solutions loaded with antibiotics at different rates. The optimized parameters are viscosity, density, surface tension parameters. Although these values are different for all concentrations, they are given in Table-1. The filling rate (60%) is constant for all solutions. After production, DAPI (4',6-Diamidino-Z-phenylindole dihydrochloride) staining was used to visualize the nuclei of the cells under a fluorescence microscope. Solutions Density (g/cm3) Surface tension V'islgozLtg Table-1: Viscosity, density, surface tension parameters according to the PMMA and/or Vancomycin ratios used in the invention. The artificial tissue scaffolds produced (10); As a result of the 1, 3, 7-day MTT test, it can be said that all tissue scaffolds produced were above 100% viability for all incubation periods and increased proliferation (Graph 1 (a)). Cell density, adhesion, and the distribution of DAPI-stained cell nuclei on the scaffold were examined by fluorescent microscopy (Figure 6). The morphology of stem cells on tissue scaffolds was examined with a scanning electron microscope (Figure 7). Graph 1 shows the viability values of mesenchymal stem cells after being cultured with the artificial tissue scaffold (10) produced with the invention for 1, 3, 7 days. It is a 2B stem cell line and was chosen as the control group. Since the viability values as a result of the MTT test were 50%, the artificial tissue scaffolds (10) produced are biocompatible. Since the viability values for all samples were 100%, it can be said that the tissue scaffolds produced increased cell proliferation and growth. Figure 6 shows the distribution and density of stem cells stained with DAPI, a cell nuclear dye, after they are cultured on the artificial tissue scaffold (10). As can be seen, the cells are spread throughout the structure and are quite dense. This shows how compatible the artificial tissue scaffold (10) used is with the cell. Figure shows the morphology of the cells on the artificial tissue scaffold (10) using SEM. The artificial tissue scaffold (10) is fixed after being cultured with cells, and the cell's potential to adhere to the structure after fixation is checked. As can be seen, the black part shows the artificial tissue scaffold (10) and the white round lumped shape shows the cell. Cell viability ('36) Graph 1. Cell viability graph of artificial tissue scaffolds (10) (a), According to the antibacterial activity results of the produced artificial tissue scaffolds (10) determined by the disk diffusion method, disks containing 10% Vancomycin are antibacterial against S.aure0us bacteria. activity and the measured zone diameter was 12 mm (Figure 8). Vancomycin is effective against many Gram-positive bacteria. S. Aureous was focused on this bacterium because it is one of the bacteria that causes corneal keratitis. In Figure 8, part IV, % 10 shows the activity of vancomycin. As can be seen, in other drug-loaded samples, no inhibition zone was formed around the artificial tissue scaffold (10) that would prevent the bacteria from approaching, but a zone diameter of 12 mm was formed around the sample containing only 10% Van. Industrial Applicability of the Invention: The method (100) of the invention and an artificial tissue scaffold (10) produced by the said method (100) are industrially applicable for use in the treatment of patients with Thiel-Behnke diagnosis. The invention is not limited to the sample applications above, and a person skilled in the art can easily reveal other applications of the invention. These should also be evaluated within the scope of the protection claimed by the invention's claims. Figure 1H K Dissolving at least one polymer at a predetermined ratio of 100 into at least one organic compound at a predetermined ratio to form the matrix of the artificial tissue scaffold (10). Adding at least one active ingredient at different ratios into the solution to be used in the production of 3D artificial tissue scaffold (10). obtaining the final solution TR TR TR