TR201703149A2 - Kemoterapi̇k i̇laç kompozi̇syonu - Google Patents
Kemoterapi̇k i̇laç kompozi̇syonu Download PDFInfo
- Publication number
- TR201703149A2 TR201703149A2 TR2017/03149A TR201703149A TR201703149A2 TR 201703149 A2 TR201703149 A2 TR 201703149A2 TR 2017/03149 A TR2017/03149 A TR 2017/03149A TR 201703149 A TR201703149 A TR 201703149A TR 201703149 A2 TR201703149 A2 TR 201703149A2
- Authority
- TR
- Turkey
- Prior art keywords
- abt
- everolimus
- treatment
- cells
- cell
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 66
- HKVAMNSJSFKALM-GKUWKFKPSA-N Everolimus Chemical compound C1C[C@@H](OCCO)[C@H](OC)C[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@](O)(O2)[C@H](C)CC[C@H]2C[C@H](OC)/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1 HKVAMNSJSFKALM-GKUWKFKPSA-N 0.000 claims abstract description 125
- 229960005167 everolimus Drugs 0.000 claims abstract description 124
- HPLNQCPCUACXLM-PGUFJCEWSA-N ABT-737 Chemical compound C([C@@H](CCN(C)C)NC=1C(=CC(=CC=1)S(=O)(=O)NC(=O)C=1C=CC(=CC=1)N1CCN(CC=2C(=CC=CC=2)C=2C=CC(Cl)=CC=2)CC1)[N+]([O-])=O)SC1=CC=CC=C1 HPLNQCPCUACXLM-PGUFJCEWSA-N 0.000 claims abstract description 96
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 93
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 91
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 58
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 claims abstract description 49
- JLYAXFNOILIKPP-KXQOOQHDSA-N navitoclax Chemical compound C([C@@H](NC1=CC=C(C=C1S(=O)(=O)C(F)(F)F)S(=O)(=O)NC(=O)C1=CC=C(C=C1)N1CCN(CC1)CC1=C(CCC(C1)(C)C)C=1C=CC(Cl)=CC=1)CSC=1C=CC=CC=1)CN1CCOCC1 JLYAXFNOILIKPP-KXQOOQHDSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 20
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 claims description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 17
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 claims description 16
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 claims description 15
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 claims description 15
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 claims description 15
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 7
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 4
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims description 3
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 claims description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 abstract description 72
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 26
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 abstract description 25
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 abstract description 21
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 abstract description 16
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 abstract description 13
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 abstract description 11
- 230000034994 death Effects 0.000 abstract description 11
- 231100000517 death Toxicity 0.000 abstract description 11
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 abstract description 11
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 abstract description 11
- 101000971171 Homo sapiens Apoptosis regulator Bcl-2 Proteins 0.000 abstract description 10
- 230000002424 anti-apoptotic effect Effects 0.000 abstract description 9
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 abstract description 9
- 102100021569 Apoptosis regulator Bcl-2 Human genes 0.000 abstract description 8
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 abstract description 7
- 239000012664 BCL-2-inhibitor Substances 0.000 abstract description 5
- 229940123711 Bcl2 inhibitor Drugs 0.000 abstract description 5
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 abstract description 4
- 108010090931 Proto-Oncogene Proteins c-bcl-2 Proteins 0.000 abstract description 3
- 102000013535 Proto-Oncogene Proteins c-bcl-2 Human genes 0.000 abstract description 3
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 abstract description 3
- 206010050513 Metastatic renal cell carcinoma Diseases 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 126
- 108010065917 TOR Serine-Threonine Kinases Proteins 0.000 description 37
- 102000013530 TOR Serine-Threonine Kinases Human genes 0.000 description 37
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 34
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 30
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 28
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 24
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 19
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 18
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 18
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 17
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 14
- 101000951234 Homo sapiens Solute carrier family 49 member 4 Proteins 0.000 description 13
- 102100037945 Solute carrier family 49 member 4 Human genes 0.000 description 13
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 12
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 12
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 11
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 11
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 10
- 230000005740 tumor formation Effects 0.000 description 10
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 9
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 8
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 7
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 7
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 7
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 7
- CBPNZQVSJQDFBE-FUXHJELOSA-N Temsirolimus Chemical compound C1C[C@@H](OC(=O)C(C)(CO)CO)[C@H](OC)C[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@](O)(O2)[C@H](C)CC[C@H]2C[C@H](OC)/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1 CBPNZQVSJQDFBE-FUXHJELOSA-N 0.000 description 6
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 6
- QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N sirolimus Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@](O)(O2)[C@H](C)CC[C@H]2C[C@H](OC)/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1 QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N 0.000 description 6
- 229960000235 temsirolimus Drugs 0.000 description 6
- QFJCIRLUMZQUOT-UHFFFAOYSA-N temsirolimus Natural products C1CC(O)C(OC)CC1CC(C)C1OC(=O)C2CCCCN2C(=O)C(=O)C(O)(O2)C(C)CCC2CC(OC)C(C)=CC=CC=CC(C)CC(C)C(=O)C(OC)C(O)C(C)=CC(C)C(=O)C1 QFJCIRLUMZQUOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 5
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 5
- ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N rapamycin Natural products COCC(O)C(=C/C(C)C(=O)CC(OC(=O)C1CCCCN1C(=O)C(=O)C2(O)OC(CC(OC)C(=CC=CC=CC(C)CC(C)C(=O)C)C)CCC2C)C(C)CC3CCC(O)C(C3)OC)C ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229960002930 sirolimus Drugs 0.000 description 5
- JUJBNYBVVQSIOU-UHFFFAOYSA-M sodium;4-[2-(4-iodophenyl)-3-(4-nitrophenyl)tetrazol-2-ium-5-yl]benzene-1,3-disulfonate Chemical compound [Na+].C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1N1[N+](C=2C=CC(I)=CC=2)=NC(C=2C(=CC(=CC=2)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)=N1 JUJBNYBVVQSIOU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 4
- 108091007960 PI3Ks Proteins 0.000 description 4
- 102000003993 Phosphatidylinositol 3-kinases Human genes 0.000 description 4
- 108090000430 Phosphatidylinositol 3-kinases Proteins 0.000 description 4
- 108010034782 Ribosomal Protein S6 Kinases Proteins 0.000 description 4
- 102000009738 Ribosomal Protein S6 Kinases Human genes 0.000 description 4
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 4
- 238000002651 drug therapy Methods 0.000 description 4
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 4
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 4
- 238000005470 impregnation Methods 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 4
- 229950004847 navitoclax Drugs 0.000 description 4
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 4
- 102000004121 Annexin A5 Human genes 0.000 description 3
- 108090000672 Annexin A5 Proteins 0.000 description 3
- 102000010565 Apoptosis Regulatory Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010063104 Apoptosis Regulatory Proteins Proteins 0.000 description 3
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 102000004039 Caspase-9 Human genes 0.000 description 3
- 108090000566 Caspase-9 Proteins 0.000 description 3
- 102000011727 Caspases Human genes 0.000 description 3
- 108010076667 Caspases Proteins 0.000 description 3
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 102000002278 Ribosomal Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010000605 Ribosomal Proteins Proteins 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 3
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 3
- 238000013043 cell viability test Methods 0.000 description 3
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 3
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 3
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 3
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 3
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 3
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 3
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 3
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 3
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 3
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 3
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 3
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 3
- 101800001643 6K protein Proteins 0.000 description 2
- 102100022900 Actin, cytoplasmic 1 Human genes 0.000 description 2
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 2
- 108010062544 Apoptotic Protease-Activating Factor 1 Proteins 0.000 description 2
- 102100034524 Apoptotic protease-activating factor 1 Human genes 0.000 description 2
- MLDQJTXFUGDVEO-UHFFFAOYSA-N BAY-43-9006 Chemical compound C1=NC(C(=O)NC)=CC(OC=2C=CC(NC(=O)NC=3C=C(C(Cl)=CC=3)C(F)(F)F)=CC=2)=C1 MLDQJTXFUGDVEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000003952 Caspase 3 Human genes 0.000 description 2
- 108090000397 Caspase 3 Proteins 0.000 description 2
- 102100030497 Cytochrome c Human genes 0.000 description 2
- 108010075031 Cytochromes c Proteins 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 102100021238 Dynamin-2 Human genes 0.000 description 2
- 101000817607 Homo sapiens Dynamin-2 Proteins 0.000 description 2
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 2
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 2
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 2
- 239000002147 L01XE04 - Sunitinib Substances 0.000 description 2
- 239000005511 L01XE05 - Sorafenib Substances 0.000 description 2
- 239000003798 L01XE11 - Pazopanib Substances 0.000 description 2
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 2
- 206010067482 No adverse event Diseases 0.000 description 2
- 102000046951 Ras Homolog Enriched in Brain Human genes 0.000 description 2
- 108700019578 Ras Homolog Enriched in Brain Proteins 0.000 description 2
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 2
- 230000035578 autophosphorylation Effects 0.000 description 2
- 229960003005 axitinib Drugs 0.000 description 2
- RITAVMQDGBJQJZ-FMIVXFBMSA-N axitinib Chemical compound CNC(=O)C1=CC=CC=C1SC1=CC=C(C(\C=C\C=2N=CC=CC=2)=NN2)C2=C1 RITAVMQDGBJQJZ-FMIVXFBMSA-N 0.000 description 2
- 108700000707 bcl-2-Associated X Proteins 0.000 description 2
- 102000055102 bcl-2-Associated X Human genes 0.000 description 2
- 229960000397 bevacizumab Drugs 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 2
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 2
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 229940124302 mTOR inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 239000003628 mammalian target of rapamycin inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 2
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 2
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 229960000639 pazopanib Drugs 0.000 description 2
- CUIHSIWYWATEQL-UHFFFAOYSA-N pazopanib Chemical compound C1=CC2=C(C)N(C)N=C2C=C1N(C)C(N=1)=CC=NC=1NC1=CC=C(C)C(S(N)(=O)=O)=C1 CUIHSIWYWATEQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 2
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 2
- 229960003787 sorafenib Drugs 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 229960001796 sunitinib Drugs 0.000 description 2
- WINHZLLDWRZWRT-ATVHPVEESA-N sunitinib Chemical compound CCN(CC)CCNC(=O)C1=C(C)NC(\C=C/2C3=CC(F)=CC=C3NC\2=O)=C1C WINHZLLDWRZWRT-ATVHPVEESA-N 0.000 description 2
- 230000004654 survival pathway Effects 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 229940121358 tyrosine kinase inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 239000005483 tyrosine kinase inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 2
- CVCLJVVBHYOXDC-IAZSKANUSA-N (2z)-2-[(5z)-5-[(3,5-dimethyl-1h-pyrrol-2-yl)methylidene]-4-methoxypyrrol-2-ylidene]indole Chemical compound COC1=C\C(=C/2N=C3C=CC=CC3=C\2)N\C1=C/C=1NC(C)=CC=1C CVCLJVVBHYOXDC-IAZSKANUSA-N 0.000 description 1
- YPSXFMHXRZAGTG-UHFFFAOYSA-N 4-methoxy-2-[2-(5-methoxy-2-nitrosophenyl)ethyl]-1-nitrosobenzene Chemical compound COC1=CC=C(N=O)C(CCC=2C(=CC=C(OC)C=2)N=O)=C1 YPSXFMHXRZAGTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OONFNUWBHFSNBT-HXUWFJFHSA-N AEE788 Chemical compound C1CN(CC)CCN1CC1=CC=C(C=2NC3=NC=NC(N[C@H](C)C=4C=CC=CC=4)=C3C=2)C=C1 OONFNUWBHFSNBT-HXUWFJFHSA-N 0.000 description 1
- 230000007730 Akt signaling Effects 0.000 description 1
- 102000051485 Bcl-2 family Human genes 0.000 description 1
- 108700038897 Bcl-2 family Proteins 0.000 description 1
- 102100026596 Bcl-2-like protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- DNJVYWXIDISQRD-UHFFFAOYSA-N Cafestol Natural products C1CC2(CC3(CO)O)CC3CCC2C2(C)C1C(C=CO1)=C1CC2 DNJVYWXIDISQRD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 101710134671 Executioner caspase Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000878221 Homo sapiens Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase FKBP8 Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102100023915 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 102100020870 La-related protein 6 Human genes 0.000 description 1
- 108050008265 La-related protein 6 Proteins 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 102000009308 Mechanistic Target of Rapamycin Complex 2 Human genes 0.000 description 1
- 108010034057 Mechanistic Target of Rapamycin Complex 2 Proteins 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 1
- PQAPVTKIEGUPRN-UHFFFAOYSA-N N-[4-(2-tert-butylphenyl)sulfonylphenyl]-2,3,4-trihydroxy-5-[(2-propan-2-ylphenyl)methyl]benzamide Chemical compound CC(C)C1=CC=CC=C1CC1=CC(C(=O)NC=2C=CC(=CC=2)S(=O)(=O)C=2C(=CC=CC=2)C(C)(C)C)=C(O)C(O)=C1O PQAPVTKIEGUPRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007999 Nuclear Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010089610 Nuclear Proteins Proteins 0.000 description 1
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 1
- 102100027913 Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase FKBP1A Human genes 0.000 description 1
- 102100036978 Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase FKBP8 Human genes 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 1
- 101150020518 RHEB gene Proteins 0.000 description 1
- 108010006877 Tacrolimus Binding Protein 1A Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 108700025716 Tumor Suppressor Genes Proteins 0.000 description 1
- 102000044209 Tumor Suppressor Genes Human genes 0.000 description 1
- 108010040002 Tumor Suppressor Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000001742 Tumor Suppressor Proteins Human genes 0.000 description 1
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- 101150046474 Vhl gene Proteins 0.000 description 1
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 1
- 230000035508 accumulation Effects 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000005775 apoptotic pathway Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 108700039689 bcl-2 Homologous Antagonist-Killer Proteins 0.000 description 1
- 102000055574 bcl-2 Homologous Antagonist-Killer Human genes 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- DNJVYWXIDISQRD-JTSSGKSMSA-N cafestol Chemical compound C([C@H]1C[C@]2(C[C@@]1(CO)O)CC1)C[C@H]2[C@@]2(C)[C@H]1C(C=CO1)=C1CC2 DNJVYWXIDISQRD-JTSSGKSMSA-N 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000010307 cell transformation Effects 0.000 description 1
- 238000003570 cell viability assay Methods 0.000 description 1
- 230000007541 cellular toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 230000002925 chemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007012 clinical effect Effects 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000002900 effect on cell Effects 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N etoposide Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@H](C)OC[C@H]4O3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N 0.000 description 1
- 229960005420 etoposide Drugs 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 1
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001146 hypoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000031146 intracellular signal transduction Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 229940043355 kinase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000013059 nephrectomy Methods 0.000 description 1
- 231100000065 noncytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 229950006584 obatoclax Drugs 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003614 peroxisome proliferator Substances 0.000 description 1
- 238000009522 phase III clinical trial Methods 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000003757 phosphotransferase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000861 pro-apoptotic effect Effects 0.000 description 1
- 229940121649 protein inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000012268 protein inhibitor Substances 0.000 description 1
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 230000007420 reactivation Effects 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 201000010174 renal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000015347 renal cell adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000009094 second-line therapy Methods 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 1
- 125000002456 taxol group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003831 tetrazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000019432 tissue death Effects 0.000 description 1
- 230000009772 tissue formation Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 238000011277 treatment modality Methods 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 239000000225 tumor suppressor protein Substances 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
- A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
- A61K31/5377—1,4-Oxazines, e.g. morpholine not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. timolol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
- A61K31/436—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a six-membered ring having oxygen as a ring hetero atom, e.g. rapamycin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/63—Compounds containing para-N-benzenesulfonyl-N-groups, e.g. sulfanilamide, p-nitrobenzenesulfonyl hydrazide
- A61K31/635—Compounds containing para-N-benzenesulfonyl-N-groups, e.g. sulfanilamide, p-nitrobenzenesulfonyl hydrazide having a heterocyclic ring, e.g. sulfadiazine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/24—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing atoms other than carbon, hydrogen, oxygen, halogen, nitrogen or sulfur, e.g. cyclomethicone or phospholipids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Buluş, günümüzde malignant tümörlerin %2-3'ünü oluşturan metastatik Böbrek hücreli karsinoma (BHK) tedavisinde kullanılan ilaçlardan biri olan Everolimus'un, ilaç direnci geliştiren BHK tümörlerine yönelik olarak Bcl-2 anti-apoptotik inhibitörü ABT-737 ile kombine edilmesi ile gerçekleştirilen bir kemoterapik ilaç kompozisyonu ile ilgilidir. Oluşturulan bu kompozisyonla tedavinin BHK tedavisinde başarısı buluş kapsamında test edilmiştir. Bu bağlamda Everolimus direnci gösteren ve Bcl-2 proteinini yüksek ifade eden BHK hücre hatlarında Everolimus ve ABT-737 ilaç kompozisyonunun hücre sağkalımı ve ölümü üzerine etkisi in vitro ve in vivo deneyler ile gösterilmiş ve ilaç kompozisyonunun BHK üzerindeki etki mekanizması moleküler açıdan incelenmiştir. Everolimus direnci gösteren BHK tedavisinde kullanılmak üzere ABT-737'nin analoğu olan ve oral yolla alınan Navitoclax (ABT-263) ve diğer Bcl-2 inhibitörlerinin tek başına veya günde bir kez 10 mg dozunda kullanılan Everolimus ile birlikte uygulanması buluş kapsamında yer almaktadır.
Description
TARIFNAME
KEMOTERAPIK ILAÇ KOMPOZISYONU
Teknik Alan
Bu bulus böbrek kanseri tedavisinde kullanilabilecek ABT-737 ve/veya ABT-737
analogu Navitoclax (ABT-263) çözeltisi ve/veya bunun Everolimus çözeltisi
ve/veya diger mTOR yolagi inhibitör rapolog,lari ile olusturulan bir kemoterapik
ilaç kompozisyonu ile ilgilidir.
Önceki Uygulama
Türkiye,de Halk Sagligi Kurumu, Kanser Daire Baskanligiinin 2009 verilerine
göre ölümlerin %20,7,si kansere baglidir. Erkeklerde görülen kanserlerin %5,1,ini
de böbrek kanseri olusturmaktadir. Avrupa Birligi ülkelerinde böbrek kanseri
hesaplanmaktadir. Ayni veriler mortalite hizinin erkeklerde 100.000,de 6,5
kadinlarda 100.000,de 2,7 oldugunu göstermektedir [1]. Yetiskinlerde
böbreklerde en yaygin görülen kanser Böbrek hücreli karsinom (BHK),dur.
BHK,nin radyoterapiye ve kemoterapiye dirençli olmasi nedeni ile metastatik
BHK,de 5-yillik sagkalim %10”un altindadir [2]. Günümüzde metastatik BHK,de
lisans almis 7 ilaç bulunmaktadir. Bunlar Bevacizumab (anti-endotelin büyüme
faktörü monoklonal antikoru, interferon ile kombine olarak kullanilir), tirozin
kinaz inhibitörleri olan Sunitinib, Pazopanib, Axitinib, Sorafenib ve mTOR
(memelilerin rapamisin hedefi) inhibitörleri olan Everolimus (RAD001) ve
Temsirolimus,tur [3].
Böbrek kanserine sebebiyet veren mutasyonlarin en sik rastlandigi gen, von
Hippel-Lindau (VHL) tümör baskilayici proteinini kodlayan gendir. BHK
tümörlerinin %90lninda VHL geninde mutasyon bulunmasi bu tümörlerin
hipoksik ortam kosullarini taklit ederek yogun damarlasma, hizli büyüme ve
yüksek invasif potansiyel göstermesine sebebiyet vermektedir. VHL fonksiyon
bozuklugu sonrasi HIF-a (hipoksi-indüklenir faktör-(1) transkripsiyon faktörlerinin
25418.62
aktive olarak PI3K (fosfotidilinositol-3-kinaz)-AKT-mTOR yolagi sagkalim
mekanizmasini harekete geçirdigi ve hücre transformasyonunu saglayan mutasyon
birikmesine sebebiyet verdigi bildirilmistir. mTOR yolagi PI3K-AKT-mTOR
ayaginda bulunan, hücre büyüme faktörleri tarafindan indüklenen ve hücre
büyümesi, çogalmasi, migrasyonu, yasamasi ve anjiyogenez gibi hücre için önem
arz eden olaylarin merkezinde yer alan bir hücre-içi sinyal yolagidir [4, 5]. mTOR
yolaklarinin hücre sagkalim/ büyüme ve protein sentezinin uyarimindaki önemli
görevleri göz önüne alinarak mTOR yolagina bagimli BHK, yumurtalik ve kemik
kanseri tedavilerinde yukarida bahsi geçen rapamisin veya Everolimus,
Temsirolimus gibi diger rapamisin analoglari (Rapalog) mTOR yolaginin
inhibisyonunda kemoteröpatik ilaçlar olarak kullanilmaktadirlar.
Metastatik BHK tedavisinde bu ilaçlarin kullanimi bahsi geçen mTOR kinaz
yolagini durdurarak hücre büyüme/sagkalimini inhibe etmeye yöneliktir [6].
Metastatik BHKlde bahsi geçen 7 ilaç tedavisine ragmen tüm hastalarda bu
ilaçlara direnç gelismektedir ve bir kisim hastalar yan etkilerden dolayi da bu
ilaçlari alamamaktadir. Su ana kadar yapilan klinik çalismalarda birinci sonlanim
noktasi olarak progresyonsuz sagkalim ele alinmistir ve progresyonsuz sagkalim
1,1 ay ile 8,3 ay arasinda degismektedir [3]. Nitekim, ileri evre BHK tedavisinde
Everolimuslun tarafindan
VEGF terapi basarisizligi sonrasi onay alarak Faz III klinik çalismalarinda
sagkalimi sadece 4.9 ay uzattigi tespit edilmistir [7]. Buna karsin genel sagkalim
avantaji saptanmamistir. Ayrica yapilan in vitro deneylerde de rapalog
muamelesinin Caki-l, KTC-26 ve A-498 BHK hücre hatlarinda %33-%57
oraninda hücre büyümesini azalttigi ancak hücre ölümüne sebebiyet vermedigi
gözlemlenmistir [8].
Rapaloglar (Everolimus, Temsirolimus ve Deferolimus) 12 kilo daltonluk
sitoplasmik protein FKBPl2°ye baglanarak sadece mTORCl kompleksi
içerisindeki mTOR kinazini inhibe eder [9]. Rapalog türevleri kanser tedavisinin
baslarinda etki göstermelerine ragmen tedavi sürecinin ileri asamalarinda,
25418.62
tümörlerin bu ilaçlara karsi direnç gelistirmesi ile etkilerini yitirmektedirler. &
ilaçlara karsi tümörlerin direnç kazanmasinda mTORC2 (memelilerin rapamisin
hedefi kompleksi 2) yolaginin aktif kalmasi sebep olarak gösterilse de sonraki
çalismalarda uzun süreli rapalog tedavisinin mTORCZ kompleksi ve bu
komplekse bagimli AKT sinyal yolaklarini inhibe edebildigi belirtilmistir [10,
11]. Bu durum; rapalog direnci gösteren tümörlerde mTORCl (memelilerin
rapamisin hedefi kompleksi 1) tarafindan inhibe edilen PI3K, MAPK (mitojen
tarafindan aktive edilen protein kinazi) ve IGKF (insülin büyüme kinazi faktörü)
kinaz geri bildirim yolaklarinin rapalog uygulamasi ile tekrar aktive olmasi ile
açiklanabilir [12].
Nitekim literatürde yapilan pek çok çalismada, kanser hücrelerinde anti-apoptotik
Bol-2 proteininin ifade düzeyinde artis oldugu ve bu artisin kemoterapi ve
radyoterapide direnç gelismesine sebebiyet verdigi gösterilmistir [13, 14, 15]. Bu
nedenle, anti-apoptotik Bcl-2 proteini hedef alan TW-37, obatoclax, ABT-737
gibi ilaçlar gelistirilerek piyasaya sürülmüstür. Bu ilaçlarin amaci Bcl-2
proteinlerinin BH3 bölgesine baglanarak onlarin pro-apoptotik proteinlerle
etkilesime girmesini Önlemektir [16, 17]. Baska bir deyisle, anti-apoptotik Bol-2
protein ailesi üyelerinin sahip olduklari BH3 bölgesinin olusturdugu hidrofobik
oyuga baglanan bu inhibitör ilaçlar pro-apoptotik proteinlerin Bcl-2 anti-apoptotik
proteinlerine baglanarak inaktif olmasina mani olurlar [18, 19]. ABT-737, Abbott
Laboratuarlari tarafindan gelistirilmis olan bir Bcl-2 inhibitörüdür ve anti-
apoptotik proteinlerden Bc1-2, Bcl-xL ve Bcl-W3nin BH3 bölgesine baglanarak
pro-apoptotik proteinlerin bu bölgeye baglanmasini önler [20, 21, 22]. Anti-
apoptotik Bcl-2 proteinin ifadesindeki artisin BHK da gözlemlenmis olmasi ve bu
hücrelerin kemoterapi tedavisine karsi direnç kazanmasi [23, 24] literatürde çesitli
çalismalarda kullanilan ABT-737,in bu hücreler üzerinde de denenebilecegini
önermistir. Örnegin bir çalismada RCC-2l, RCC-26A, RCC-30, Caci-2 gibi BHK
hücre hatlarinda ABT-737 ile Taksol grubu ilaç kombinasyonunun, bu hücrelerin
Taksol-indüklü apoptoza karsi direncini düsürdügü gösterilmistir [25]. Ayrica
ABT-737 preklinik deneylerde lenfoma, multipl miyelom, gögüs kanseri, küçük
25418.62
hücreli akciger kanseri, skuamöz hücreli bas ve boyun kanseri ve çesitli lösemi
kanseri modellerinde denenmis ve basarili olmustur [24]. Ancak ABT-737”nin
BHK tedavisi için kullanildigi herhangi bir preklinik ya da in vitro çalisma
bulunmamaktadir. ABT-737 ajani için preklinik çalismalardan klinik çalismalara
geçiste oral çözünürlük açisindan gelistirilmis ABT-737 analogu ABT-263
kullanilmaktadir [26]. Ora] yolla alinan ABT-263,ün klinik denemeleri lenfatik
kötü huylu tümörler ile kati tümör türleri üzerinde denenmistir [27, 28]. Klinik
çalismalarda Navitoclax ismi ile kullanilan ABT-263, faz l denemelerinde küçük
hücreli akciger kanseri (KHAK) hastalarinda, faz iki çalismalarinda ise KHAK,si
nüksetmis ve kemotarapiye direnç gösteren hastalarda denenmistir [29, 301. Bu
klinik faz çalismalari sonucunda Navitoclaxîn monoterapi ajani olarak tedavide
kullanilmasi açisindan etkisi kisitli olarak belirlenmis ve Navitoclaxsin kombine
tedavilerde kullanilmasi tavsiye edilmistir. Literatürde yapilan bu deneyler
isiginda patent basvurusuna konu olan çalismada Navitoclax Bel-2 inhibitör
fonksiyonuna sahip ABT-737 ajaninin Everolimus veya diger rapolog ilaçlarina
direnç gösteren BHK tedavisinde kullanilmasi hedeflenmistir.
Böbrek hücreli karsinoma (BHK) yetiskinlerdeki malignant tümörlerin %2-3lünü
ise hayatini kaybetmesi BHK”nin mortalite oraninin %50 civarlarinda oldugunu
göstermektedir [38]. Böbrek hücreli karsinoma böbrekte kanser türleri arasinda en
sik rastlanan (%90) malignant tümörlerdendir [39]. BHK tedavisinde en yaygin
olarak kullanilan yöntem lokalize olmus kanserin radikal ve parsiyel nefroktomi
yöntemi ile böbrekten alinmasidir. BHK,da ameliyat sonrasi rekürrans olasiligi
yüksektir ve kanser genellikle metastatik evrede teshis edilmektedir. Metastatik
evrede teshis edilen BHK radyoterapi ve kemoterapiye direnç gösterdigi için 5-
yillik sagkalim %10,nun altindadir [2]. BHK olusumunda ve metastatik BHK,da
görülen radyoretapi ve kemoterapi direncinde rol oynayan moleküler
mekanizmanin belirlenmesi hedefe yönelik ilaç tedavisini gündeme getirmistir.
Hedefe yönelik ilaç tedavisi basligi altinda ilk kullanilan ilaçlar interlökin-alfa ve
interlökin-2 bazli sitokinlerdir. Tedavide kullanilan sitokinlerin yetersiz kalmasi
25418.62
ve birçok yan etkisinin bulunmasi sonucunda günümüzde metastatik BHK
tedavisini lisansli 7 ilaç ile sinirlandirmistir. Bunlar Bevacizumab (anti-endotelin
büyüme faktörü monoklonal antikoru, interferon ile kombine olarak kullanilir),
tirozin kinaz inhibitörleri olan Sunitinib, Pazopanib, Axitinib, Sorafenib ve mTOR
(memelilerin rapamisin hedefi) inhibitörleri olan Everolimus ve Temsirolimus,tur
progresyonsuz sagkalimi 5,9 ay uzatmaktadir [40]. Ikinci basamak tedavide
kullanilan mTOR inhibitörlerden olan Temsirolimus sagkalimi 3,8 ay uzatirken,
progresyonsuz sagkalim Everolimus tedavisinde 4,9 ay olarak tespit edilmistir [7].
bilesigi olan cafestol ile ABT-737 Bol-2 protein inhibitörü kombinasyonunun
böbrek kanseri tedavisinde kullanilmasindan bahsedilmektedir.
Bulusun Kisa Açiklamasi
Bulusun amaci BHK tedavisinde aktif olarak kullanilabilecek ve genel sagkalimda
fark olusturacak bir kemoterapik ilaç kompozisyonu gerçeklestirmektir.
Bulusun diger amaci BHK tedavisinde Rapolog (Everolimus, Temsirolimus ve
Deferolimus) ilaç direnci gelistiren BHK tümörlerinde Bcl-2 anti-apoptotik
inhibitörü ABT-737 ile kombine tedavinin BHK tedavisindeki basarisini
göstermektir.
Bulusun bir diger amaci, BHK tedavisinde kolay hazirlanabilen, kesin ve hizli
tedavi saglayan bir kemoterapik ilaç kompozisyonu gerçeklestirmektir.
25418.62
Bulusun bir diger amaci, rapalog direncinin gelistigi kanserlerde Bcl-2 anti-
apoptotik proteinlerinin aktive olarak, bu tümörlerin hücre ölümünü baskilayan bir
kemoterapik ilaç kompozisyonu gerçeklestirmektir.
Bulusun Ayrintili Açiklamasi
Bu bulusun amacina ulasmak için gerçeklestirilen “Kemoterapik ilaç
kompozisyonu” ekli sekillerde gösterilmis olup; bu sekillerden:
Sekil 1 - Everolimus ilacinin kimyasal yapisinin gösterimidir.
Sekil 2 - ABT-737 ilacinin kimyasal yapisinin gösterimidir.
Sekil3- Everolimus (a) ve ABT-737 (b) monoterapinin A-498 hücreleri
üzerindeki toksik etkisinin görünümleridir.
Sekil4- Everolimus (a) ve ABT-737 (b) monoterapinin Caki-l hücreleri
üzerindeki toksik etkisinin görünümleridir.
Sekil 5 - Ilaç kompozisyonunun A-498 hücreleri üzerindeki toksik etkisinin
P degeri istatistiksel açidan bir sonucun gerçeklesme olasilik
degerlendirilmesini temsil etmektedir.
Sekil6- Ilaç kompozisyonun Caki-l hücre canliligi üzerindeki etkisinin
Örnegin 0,05 p degeri %5 anlamlilik seviyesini gösterirken %95
güvenle ve %5 hata payini anlatmaktadir.
Sekil 7 - Ilaç kompozisyonunun A-498 hücreleri üzerindeki apoptoz
güdümlü hücre ölümüne etkisinin görünümüdür a: 24 saat, b: 48
Sekil 8 - Ilaç kompozisyonunun Caki-l hücreleri üzerindeki apoptoz
güdümlü hücre Ölümüne etkisinin görünümüdür a: 24 saat, b: 48
Sekil 9 - Ilaç kompozisyonunun hücre ölümünde rol alan moleküler
mekanizmaya olan etkisinin (a) A-498 ve (b) Caki-l hücreleri için
olan görünümüdür.
25418.62
Ilaç kompozisyonunun mTOR yolagi üzerindeki etkisinin A-498
hücreleri için olan görünümüdür. mTOR; Memelilerin rapamisin
hedefi, mTOR-S2448P; Memelilerin rapamisin hedefinin serin
2448 bölgesinde fosfatlanmis türevi, p70S6K; Ribosomal protein
S6 kinazi, p7OS6K-T389P; Ribosomal protein S6 kinazinin
trenonin 389 bölgesinde fosfatlanmis türevi, S6; Ribosomal
240/244 bölgesinde fosfatlanmis türevi. Hücre iskelet proteini ß-
Aktin, esit yüklemeyi göstermek için kullanilmistir.
Ilaç kompozisyonunun mTOR yolagi üzerindeki etkisinin Caki-l
hücreleri için olan görünümüdür. mTOR; Memelilerin rapamisin
hedefi, mTOR-S2448P; Memelilerin rapamisin hedefinin serin
2448 bölgesinde fosfatlanmis türevi, p70S6K; Ribosomal protein
S6 kinazi, p7086K-T389P; Ribosomal protein S6 kinazinin
trenonin 389 bölgesinde fosfatlanmis türevi, S6; Ribosomal protein
bölgesinde fosfatlanmis türevi. Hücre iskelet proteini ß-Aktin, esit
yüklemeyi göstermek için kullanilmistir.
Everolimus ilacinin RenCa hücreleri üzerindeki toksik etkisinin
görünümüdür.
RenCa hücrelerinde gelistirilen Everolimus direncinin
görünümüdür.
Everolimus dirençli RenCa (erRenCa) hücre enjeksiyonunun
hayvanlarin sirt bölgesinde olusturdugu tümörlerin görünümüdür.
a: Kontrol grubu; b: Everolimus grubu; c: ABT-737 grubu; (1:
ABT-737 ve Everolimus kombinasyon grubu
Ilaç kompozisyonun HEK293 hücreleri üzerindeki toksik etkisinin
görünümüdür.
25418.62
Bulus kapsaminda, böbrek hücreli karsinoma (BHK) kaynakli böbrek kanserinin
ve Rapolog direnci gösteren ileri böbrek kanserinin tedavisinde ABT-737 ve/veya
ABT- çözeltisi
içeren bir kemoterapik ilaç kompozisyonu kullanilmaktadir. Bulusun bir
uygulamasinda ise, rapolog direnci gösteren ileri böbrek kanserinin tedavisinde
ABT-737 ve/veya ABT-737lnin analogu olan ve oral yolla alinan Navitoclax
(ABT-263) çözeltisi ile Everolimus çözeltisini bir kemoterapik ilaç kompozisyonu
olarak böbrek hücreli kanser tedavisinde kullanmaktadir.
Bulus konusu kemoterapik ilaç kompozisyonu içerisinde yer alan ABT-737
ve/veya ABT- çözeltisinin olusturulma
yöntemi,
- 10 mg ABT-737 ve/veya ABT-737,nin analogu olan ve oral yolla alinan
mg/ml) konsantrasyonu 10 mM olan Everolimus stock çözeltisinin
hazirlanmasi,
- in vivo sartlar için, ABT-737 ve/veya ABT-737,nin analogu olan ve oral
yolla alinan Navitoclax (ABT-263) stok konsantrasyonundan alinmis
örnegin 75mg/kg olacak sekilde ilacin PBS (Phosphate-buffered saline)
içerisinde seyreltilmesi,
- ABT-737 ve/veya ABT-737anin analogu olan ve oral yolla alinan
Navitoclax (ABT-263) çözeltisinin hazirlanmasi adimlarini içermektedir.
Bulus konusu ilaç kompozisyonu içerisinde yer alan Everolimus çözeltisinin
olusturulma yöntemi,
- 10mg liyofilize Everolimus içerisinde
çözülmesiyle (9,6 mg/ml) konsantrasyonu 10 mM olan Everolimus stock
çözeltisinin hazirlanmasi,
- in vi'vo sartlar için, Everolimus stok konsantrasyonundan alinmis örnegin
2mg/kg olacak sekilde ilacin PBS (Phosphate-buffered saline) içerisinde
seyreltilmesi,
25418.62
- Everolimus çözeltisinin hazirlanmasi adimlarini içermektedir.
Böbrek hücreli karsinoma (BHK) hücre modeli olarak yayginca kullanilan A-498,
Caki-2, Caki-l ve ACHN hücre hatlarinda Bel-2 protein seviye ölçümü yapilarak,
Bel-2 proteinini çokça ifade eden iki hücre hatti (A-498 ve Caki-l) belirlenmis ve
bu hücre hatlarinin Sekil 1”de formülü gösterilen Everolimus terapötik ajanina
karsi dirençli olduklari belirlenmistir. Everolimus direncinin belirlenmesinde
hücre canliligi testleri ve hücre ölüm testleri kullanilmistir. Everolimus direncinin
asilmasinda ABT-737 (Sekil 2) ajaninin etkisinin belirlenmesi için bu hücreler
çesitli ABT-737 dozlari ile muamele edilmistir. Belirlenen minimum efektif ABT-
737 konsantrasyonu Everolimus ile kombine edilerek A-498 ve Caki-l hücreleri
üzerinde kullanilmistir.
Yapilan hücre canliligi ve apoptoz ölçümü testlerinde ABT-737/Everolimus
kombine tedavisinin her iki ilaç ile yapilan monoterapiden daha etkili oldugu
tespit edilmistir. In vitro deneylerde elde edilen sonuçlarin hayvan modeline
aktarilmasi ve çalismanin pre-klinik asamasinin tamamlanmasi için gene Bel-2
proteinini çokça ifade eden RenCa hücreleri Everolimus ilacina dayanikli hale
getirilmistir ve bu hücreler erRenCa olarak isimlendirilmistir. Bu Everolimus
dirençli BHK RenCa hücrelerinin hayvanlarin sirt bölgesine transplante
edilmesini takip eden 4 gün içerisinde mono ve kombine terapiye baslanmistir.
Tedavi almayan kontrol ve monoterapi alan hayvanlarda tümör olusumu
gözlemlenirken kombine terapi alan hayvanlarda tümör olusumu
gözlemlenmemistir. Çalismanin sonlandirilmasini takiben alinan dokulann
patolojik incelenmesi sonucunda mono ve kombine terapilerin hayvanlar üzerinde
bir toksik etki göstermedigi tespit edilmistir. Everolimus ve ABT-737 ile
monoterapi hayvanlarda tümör olusumunu engelleyemezken kombine terapinin
tümör olusumunu tamamiyla baskiladigi tespit edilmistir.
Deneysel Çalisma
25418.62
Ilaç kompozisyonunun hazirlanmasi
Böbrek hücreli karsinoma (BHK) tedavisinde kullanilmak amaciyla olusturulan
Everolimus ve ABT-737 ilaç kompozisyonu, in vitro ve in vivo sartlarda farkli
konsantrasyonlarda hazirlanarak deneylerde uygulanmistir.
Ilaç kompozisyonunun hazirlanmasinda;
Everolimus stock hazirlanmasi için; lOmg liyofilize Everolimus 1,043m1 DMSO
(Dimetil sülfoksit) içerisinde çözülürken (9,6 mg/ml), ABT-737 stogu 10 mg
ABT- ile
hazirlanmistir. Her iki ilacinda stok konsantrasyonu 10 mM dir. In vitro sartlar
için, Everolimus stok konsantrasyonundan 1-5uM arasi degisen
konsantrasyonlarda hücre kültür besiyeri içerisinde seyreltilme yapilmaktadir. In
vivo sartlar için, Everolimus stok konsantrasyonundan hayvanlara enjekte
edilecek miktarin 2mg/kg olacak sekilde ilaç PBS (Phosphate-buffered saline)
içerisinde seyreltilerek hazirlanmaktadir. In vitro sartlar için, ABT-737 stok
konsantrasyonundan 1-10uM arasi degisen konsantrasyonlarda hücre kültür
besiyeri içerinde seyreltilme yapilmaktadir. In vivo sartlar için, ABT-737 stok
konsantrasyonundan hayvanlara enjekte edilecek miktarin 75mg/kg olacak sekilde
ilacin PBS (Phosphate-buffered saline) içerisinde seyreltilerek hazirlanmaktadir.
Enjeksiyon öncesinde ilaç enjeksiyon hacminin 200ul,ye PBS (Phosphate-
buffered saline) ile tamamlanmasi adimlarindan olusmaktadir. Ilaçlar ayri ayri
karistirilmadan hayvanlara birer dakika ara ile enjekte edilmistir.
Hücre toksisitesinin belirlenmesi
Hücre canliliginin ölçülmesi için WST-l testi uygulanmistir. Bu testin çalisma
prensibi, stabil tetrazoliyum tuzu olan WST-llin canli hücreler tarafindan
çözünebilir formazana dönüstürülmesine dayanir. WST- 1 ,in formazana çevrilmesi
sirasinda hücre besi yerinde 450 ve 630nm dalga boylarinda ölçülebilen bir renk
dönüsümü yasanir. Bir baska degisle formazan boyasinin miktari metabolik olarak
aktif (canli) olan hücre sayisi ile orantilidir. Renk degisimi ELISA cihazinda
absorbansin ölçülmesi ile degerlendirilerek, elde edilen degerler Graph Pad Prism
7 veritabani kullanilarak analiz edilmistir.
25418.62
Everolimus ve ABT-737,nin hücre canliligina olan toksik etkisini belirlemek için
çalismada Everolimus ilacina dirençli olan primer A-498 ve metastatik Caki-l
BKH hücre hatlari kullanilmistir ve toksik etki WST-l metodu kullanilarak
belirlenmistir.
Everolimus ve ABT-737 ilaçlari, kombinasyon için uygun olan dozu belirlemek
üzere 96 kuyucuklu kültür kaplarina ekilen A-498 ve Caki-l hücrelerine üç gün
süre ile verilmistir. Üç farkli konsantrasyon olarak hazirlanan ilaçlarin (l, 5, veya
lOuM) hücre canliligi üzerindeki etkisi WST-l metodu kullanilarak tespit
edilmistir. Bu deneyin sonucunda ilaç kompozisyonu Everolimus için 1 uM, ABT-
737 için ise 5uM konsantrasyonlarda hazirlanarak, 96 kuyucuklu kültür
kaplarinda ekilmis bulunan A-498 (2000 hücre/kuyucuk) hücreleri üzerinde test
edilmistir. Caki-l (10000 hücre/kuyucuk) metastatik hücreleri için ilaç
kompozisyonu miktari luM Everolimus ve IOuM ABT-737 olarak belirlenmistir.
Hücrelerin ilaç kompozisyonuna cevabi; 3 gün süre ile hücre canliliginin ölçümü
seklinde belirlenmistir.
Everolimus ve ABT-737snin saglikli böbrek hücreleri üzerinde herhangi bir toksik
etkiye sahip olup olmadigini test etmek için insan embriyonik böbrek (HEK293)
hücreleri model hücre olarak kullanilmistir. HEK293 hücreleri ilaç kompozisyonu
(Everolimus için lpM, ABT-737 için ise SpM) ile 3 gün muamele edilmis ve
toksisite cevabi 3 gün süre ile hücre canliliginin WST-l testi ile ölçülmesi ile
tespit edilmistir.
Hücre ölümünün belirlenmesi
Toksikoloji analizi sirasinda hücre canliliginda gözlemlenen düsüsün hücre
ölümüne bagli olup olmadigi Annexin-V hücre ölümü testi yapilarak tespit
edilmistir. A-498 BHK hücreleri için 1 pM Everolimus ve SüM ABT-737, Caki-l
BHK hücreleri için ise luM Everolimus ve 10uM ABT-737 hazirlanmis ve 6
kuyucuklu kültür kaplarinda büyütülen hücrelere 3 gün boyunca uygulanmistir.
25418.62
Her 24, 48 ve 72 saatin sonunda Annexin-V metodu uygulanmis ve analizler
Microsoft Excel veri tabani kullanilarak yapilmistir.
Ilaç kompozisyonunun apoptoz moleküler mekanizmasina etkisinin tespit
edilmesi
Ilaç kompozisyonunun hücre ölümü moleküler mekanizmasi üzerindeki etkisini
arastirmak için 6 kuyucuklu tabaklara ekilen A-498 hücreleri, luM Everolimus ve
5uM ABT-737 ile,Caki-l hücreleri ise luM Everolimus ve IOuM ABT-737 ile 24
saat boyunca muamele edilmistir. 24 saatin sonunda hücrelerden elde edilen
protein lizatlarinda Western Emdirimi teknigi kullanilarak kaspaz proteinlerinin
ifadelerine bakilmistir.
Ilaç kompozisyonunun mTOR yolagina etkisinin tespit edilmesi
Everolimus ve ABT-737 ilaç kompozisyonunun mTOR yolagi üzerindeki
moleküler etkisini arastirmak için A-498 ve Caki-l BHK hücreleri kullanilmistir.
6 kuyucuklu tabaklara ekilen A-498 hücreleri, luM Everolimus ve 5uM ABT-
737, Caki-l hücreleri ise luM Everolimus ve lOpM ABT-737 ilaçlariyla 24 saat
süresince muamele edilmislerdir. 24 saatin sonunda hücrelerden proteinler elde
edilmistir. Bu proteinler daha sonra Western Emdirimi teknigi ile mTOR
yolaginda kilit rol oynayan proteinlerin ifadelerine bakmak üzere
kullanilmislardir.
Everolimusia dirençli RenCa hücrelerinin olusturulmasi
In vi'vo deneylerde kullanilmak üzere RenCa hücreleri Evereolimus,a dirençli hale
getirilmistir. Bu baglamda, RenCa hücreleri 96 kuyucuklu kültür kaplanna
ekilmislerdir. Ekimden 24 saat sonra hücreler luM Everolimus ile 72 saat
boyunca muamele edilmislerdir. 72 saatin sonunda hücreler PBS (Phosphate-
25418.62
buffered saline) ile yikanmis ve ekstra 72 saat boyunca lOuM Everolimus ile
muamele edilmislerdir. Everolimus'a karsi direnç gelistiren hücreler 6 kuyucuklu
kültür kaplarina alinmis ve Everolimus içermeyen besiyeri içerisinde
büyütülmüslerdir. %90 yogunluga ulasan hücreler T-75 kültür kaplarina
aktarilmis ve luM Everolimus içeren besiyeri içerisinde 2 ay boyunca
büyütülmüslerdir.
erRenCa hücrelerinin ve in vivo tümör modelinin olusturulmasi
Iri vitro bulgulardan Everolimus ve ABT-737 ilaç kompozisyonun A-498 ve Caki-
l BHK hücre hatlarinda hücre ölümüne sebebiyet vermesinin ardindan, in vi'vdda
da kompozisyonun ayni etkiyi gösterip göstermedigini arastirmak için RenCa
hücreleri kullanilmistir. RenCa hücreleri öncelikle farkli konsantrasyonlarda
hazirlanan Everolimus (l, 5, ve IOuM) ile üç gün boyunca muamele edilmistir.
WST-l hücre canlilik testi ile elde edilen sonuçlar RenCa hücrelerinin
Everolimus,a karsi hassas oldugunu göstermistir. Bu baglamda Everolimussa
direnç gösteren BHK hücre modelini hayvan modeline aktarmak amaci ile RenCa
hücreleri Everolimus,a dirençli hale getirilmistir. Bunun için RenCa hücreleri
Everolimus içeren besiyeri içerisinde 2 ay süre ile büyütülmüstür. Hücrelerin ilaca
direnç gösterip göstermedigi WST-l hücre canlilik testi ile tespit edilmistir.
Everolimus°a dirençli hale getirilen RenCa hücreleri, hayvanlarin sirt bölgesine
implante edilerek tümör dokusu olusumu gerçeklestirilmistir [34, 35]. Tümör
olusum süreci takip edilmistir. Yaklasik 10 günlük bir süreç sonunda tümörler
gözle görülür boyutlara ulasmistir. Ilaç kompozisyonunun tümör olusumu
üzerindeki etkilerini gözlemlemek amaci ile tümör implantasyonundan 4 gün
sonra ilaç tedavisine baslanmistir. Deney düzenegimiz 4 grup hayvandan olusup
l. grupdaki 8 hayvana tümör implantasyonu sonrasinda ilaçlarin çözündügü
solüsyonlar gün asiri karin içi enjeksiyonla tatbik edilmistir. Grup 2,deki
hayvanlara sadece 2mg/kg Everolimus gün asiri karin içi enjeksiyonla verilirken,
Grup 35deki hayvanlara 75mg/kg ABT-737 gün asiri karin için enjeksiyonla tatbik
edilmistir. Grup 4,deki hayvanlara tümör implantasyonunu takip eden 4. günden
baslanilarak gün asiri karin için 2mg/kg Everolimus ve 75mg/kg ABT-737
25418.62
kombine edilerek enjekte edilmistir. Gün asiri gerçeklestirilen ll enjeksiyon
sonunda deney hayvanlarin sakrifikasyonu ile deney sonlandirilmistir.
Hayvanlarda olusan tümörler fotograflandirilmis, izole edilmis, tartilmis, ve
patolojik incelemeye gönderilmistir. Ilaçlarin toksik etkisini belirlemek için
hayvanlardan alinan organlar (beyin, timüs, kalp, akciger, mide, karaciger, dalak,
ince bagirsak, böbrek ve testis) da patolojik incelemeye gönderilmistir.
Istatistik analiz
Elde edilen sonuçlar GraphPad Prism 7 programi kullanilarak multiple t test
analizi ile istatistiksel olarak degerlendirilmis, p<0.05 anlamli olarak kabul
degeri %5 anlamlilik seviyesini gösterirken %95 güvenle ve %5 hata payini
anlatmaktadir.
Deneysel Sonuçlar
Bulus konusu ilaç kompozisyonunun hücre canliligi üzerindeki etkisinin
belirlenmesi için Everolimus direnci gösteren primer A-498 ve metastatik Caki-l
böbrek hücreli karsinom (BHK) hücre hatlari WST-l hücre testi deneylerinde
kullanilmistir. Yaptigimiz öncül deneyler sonucu ilaç kompozisyonu için luM
Everolimus ve SuM ABT-737lin A-498 hücrelerine uygulanmasi kararina
varilmistir (Sekil 3).
Benzer sekilde Caki-l hücrelerinin ise luM Everolimus ve lOuM ABT-737 ilaç
kompozisyonu ile muamele edilmesine kararlastirilmistir (Sekil 4).
Yapilan toksikoloji analizleri sonunda A-498 (Sekil 3) ve Caki-l (Sekil 4)
hücrelerinin Everolimus°a karsi direnç gösterdigi tespit edilmis ve bu baglamda
literatürde bulunan diger çalismalar ile mutabakata varilmistir.
Everolimus ile ABT-737 birlikte kullanildiginda ikinci günden itibaren her iki
hücre hattinda da toksik etki gözlemlenmeye baslamistir (Sekil 5 ve 6). Üç günlük
25418.62
analiz sonrasinda A498 hücrelerinde ABT-737 monoterapiye oranla ilaç
kompozisyonunun hücre canliligini %90 daha azalttigi tespit edilmistir (Sekil 5).
Caki-l hücrelerine bakildiginda ise ABT-737 monoterapisinin de basari sagladigi,
72 saatin sonunda kayit edilen %80 hücre canliligi ile görülmüstür. Ilaç
kompozisyonunun Caki-l hücre canliligi üzerine etkisine bakildiginda; hücre
canliligini kontrol (ilaç muamelesi görmemis) ve Everolimus muamelesi görmüs
hücrelere göre %60 daha düsürdügü görülmüstür (Sekil 6).
Ilaç kompozisyonunun hücre canliliginda yol açtigi düsüsün hücre ölümünden
kaynaklanip kaynaklanmadigi Annexin-V metodu ile tespit edilmistir. luM
Everolimus ve 5uM ABT-737 ile birlikte muamale edilen A-498 hücrelerinde 24
saatin sonunda erken apoptoz gözlemlenmistir (Sekil 7a). 48 ve 72 saatin sonunda
hücrelerde erken ve geç apoptoz birlikte olmak üzere anlamli derecede hücre
ölümü gözlemlenmistir (Sekil 7b ve 7c).
luM Everolimus ve 10uM ABT-737 ile muamele edilen metastatik Caki-l
hücrelerinde kombinasyonun 24, 48 ve 72 saatlik inkübasyon sonunda hücre
ölümüne yol açtigi tespit edilirken, ABT-7379nin tek basina uygulandiginda hücre
ölümünde daha anlamli artisa yol açtigi gözlemlenmistir (Sekil Sa, 8b ve 80).
Analiz sonucunda ilaç kompozisyonunun her iki BHK hücre hattinda da apoptoza
bagli hücre ölümüne sebebiyet verdigi tespit edilmisken metastatik BHK
tedavisinde ABT-737 monoterapisinin de basarili sonuç verebilecegi kanisi
dogmustur.
Ilaç kompozisyonu sonucunda gözlemlenen hücre ölümünün moleküler
mekanizmasini anlayabilmek için apoptoz yolaginda rol alan kaspaz proteinlerinin
ifadelerine Western Emdirimi teknigi ile bakilmistir. Hücre ölümü esnasinda pro-
apoptotik Bax/Bak proteinlerinin mitokondri çeperinde olusturduklari kanaldan
sitoplazmaya salgilanan sitokrom c, diger hücre ölümü proteinlerinden olan
APAFl (Apoptotik proteaz aktiflestirici faktör 1) ve pro-kaspaz 9 ile
25418.62
saglar. Aktif kaspaz-9 cellat kaspazlari (pro-kaspaz 3, 6, 7) aktive eder ve
apoptozu gerçeklestirir [36, 37]. Bu sebeple kaspaz proteinlerinde görülen
parçalanma apoptoz mekanizmasinin aktif olmasiyla iliskilidir. Yukarida belirtilen
ilaç dozlariyla 24 saat inkübe edilen A-498 ve Caki-l hücrelerinden elde edilen
protein lizatlarinda ilaç kompozisyonunun kaspaz 3 ve kaspaz 9 proteinlerinde
parçalanmaya yol açtiginin tespit edilmesi, ilaç kompozisyonunun her iki hücre
hattinda da hücre ölümüne sebebiyet verdigini moleküler olarak da göstermistir
(Sekil 9a ve 9b).
Everolimus ve ABT-737 kombinasyonunun etki ettigi bir diger moleküler
mekanizma PI3K/AKT/mTOR sagkalim yolagidir. Bu yolak hücre büyüme
faktörleri tarafindan indüklenir ve hücre büyümesi, çogalmasi, migrasyonu,
yasamasi ve anjiyogenez gibi hücre için önem arz eden olaylarin merkezinde
bulunur [4, 5]. Çalismamizda kullanilan Everolimus, 12 kilodaltonluk FK506,ya
baglanan protein FKBP12,ye baglanarak sadece mTORCl kompleksi içerisindeki
mTOR kinazini inhibe eder [9]. Bu baglamda A-498 BHK hücreleri luM
Everolimus ve 5uM ABT-737 ile, Caki-l hücreleri ise luM Everolimus ve lOuM
ABT-737 ile 24 saat süresince muamele edilmislerdir. 24 saatin sonunda
hücrelerden elde edilen protein lizatlannda ilaç kompozisyonunun mTOR yolagi
üzerindeki etkisini arastirmak için bu yolakta rol alan proteinlerin ifadelerine
Western Emdirimi teknigi ile bakilmistir.
Büyüme faktörlerinin indüklemesi sonucunda treonin 308sde fosfatlanan AKT
(AKT-T308P) proteini, aktive olarak mTORCl kompleksinde yer alan mTOR
kinazini aktif hale getirir. Aktif hale gelen mTOR kinazinin serin 2448sde
(mTOR-S2448P) otofosforilasyonu gerçeklesir [38]. Buna bagli olarak mTOR
kinazinin serin 2448,de fosfatlanmis türevinin ifadesinde görülen artis, mTORCl
yolaginin aktif olabilecegine isaret eder. mTOR yolagi akis mekanizmasinda aktif
hale gelen mTOR kinazi, hedef proteinlerinden biri olan p7OS6K proteinini
kinazi kendi hedef proteini olan ribozomal S6 proteinini serin S240/244 (S6-
25418.62
S240/244P) bölgesinde fosfatlayarak protein translasyonunun baslamasini saglar
Hem A-498 (Sekil 10) hem de Caki-l (Sekil 11) hücrelerinde luM
Everolimus,un ve ilaç kompozisyonunun mTOR kinazinin serin 2448Sde
gerçeklesen otofosforilasyonunu ilaç muamelesi görmeyen kontrol hücrelerine
kiyasla düsürdügü görülmüstür. Everolimus muamelesine ek olarak Everolimus
ve ABT-737 kombinasyonunun, bazal p70$6K protein ifadesini kontrol
hücrelerine kiyasla düsürdügü ve bu düsüsün p70$6K proteininin treonin 389sda
fosfatlanmis türevinde de görüldügü saptanmistir. p7OS6 kinazinin hedef proteini
olan 86 proteininin ifadesi ilaç muameleleri sonucunda A-498 hücrelerinde (Sekil
) düsüs gösterirken Caki-l hücrelerinde artisa yol açmistir (Sekil 11). Her iki
hücre hattinda da ayni proteinin serin 240/244”de fosfatlanmis aktif türevinin
ifadesinde Everolimus muamelesi sonunda düsüs görülmüstür. 86 proteininin
serin 240/244 fosfatli türevinde görülen anlamli düsüs ise Everolimus ve ABT-
737 ilaç kompozisyonu sonucunda gözlemlenmistir. A-498 ve Caki-l hücreleri ile
yapilan bu deney sonucunda Everolimus ve ABT-737 ilaç kompozisyonunun
mTOR yolagini baskiladigi tespit edilmistir.
In vitro deneyler sonucunda Everolimus ve ABT-737 ilaç kompozisyonunun A-
498 ve Caki-l hücre hatlarinda hücre ölümüne yol açtigi tespit edilmistir. Bu
bulgulardan yola çikarak ilaç kompozisyonunun klinik etkisini gözlemleyebilmek
için in vivo çalismalara baslanmistir. Hayvanlarda böbrek kanseri modelini
olusturmak için literatürde yaygin olarak kullanilan RenCa (fare murine renal
adenokarsinoma) hücreleri kullanilmistir. RenCa hücre modeli Hrushesky ve
Murphy tarafindan 1970'li yillarda balb-c soyundan olan farelerin böbreklerinden
spontane olarak üreyen böbrek tümörlerinden hücreler izole edilerek
gelistirilmistir [31].
In vi'vo deneylere baslamadan önce, RenCa hücrelerinde uygulanmak üzere
Everolimus ilacinin bu hücrelerin canliligina etkisi WST-l yöntemi ile
25418.62
arastirilmistir. Farkli konsantrasyonlarda hazirlanan Everolimus,un (l, 5 ve
lOuM) RenCa hücreleri üzerinde 48 saat muamele sonrasinda toksik etkiye yol
açtigi tespit edilmistir (Sekil 12). Bu deneyler yabanil RenCa hücrelerinin
insanlarda olusan Everolimus”a dirençli böbrek tümörü olusturamayacagini
göstermistir. Bu problemi asmak için hücre kültürü ortaminda Everolimus,a
dirençli bir RenCa hücre soyu gelistirilmesi geregi dogmustur. Bu neden ile in
vi'vo çalismalara baslamadan önce Everolimus ilacina hassasiyet gösteren RenCa
hücreleri öncelikle Everolimus,a karsi dirençli hale getirilmistir. Sekil 13”da,
farkli konsantrasyonlarda hazirlanan Everolimuslun (l, 5 ve lOuM) üç günün
sonunda RenCa hücre canliliginda herhangi bir degisime yol açmadigi
gösterilmistir.
Everolimus dirençli bu RenCa (erRenCa) böbrek kanseri hücreleri, kanser hücre
hatti olarak hayvanlarda böbrek kanseri tümör modelini olusturmak için
kullanilmislardir. Bu amaçla hücreler Balb/c farelerin sirt bölgesine subkutan
olarak enjekte edilmislerdir. Enjeksiyonu takip eden dördüncü günün sonunda
2mg/kg Everolimus ve 75mg/kg ABT-737 ilaç kompozisyonu gün asiri olmak
üzere hayvanlarin karin içine uygulanmistir. ll enjeksiyon sonunda deney
sonlandirilmistir. Ilaç muamelesine maruz kalmayan kontrol grubundaki sekiz
hayvanda tümör olusumu gözlemlenmistir (Sekil l4a). Kontrol hayvanlarina
kiyasla sadece Everolimus ile muamele edilen hayvanlarin sekizinden dördünde
tümör olusumu gözlemlenirken (Sekil 14b), ABT-737 ile muamele edilen
hayvanlarin sekizinden üçünde tümör olustugu tespit edilmistir (Sekil 14c). Ilaç
kompozisyonu ile tedavi edilen hayvan grubunda ise sekiz hayvanin hiçbirinde
tümör olusumu gözlemlenmemistir (Sekil 14d). Everolimus,a direnç gelistirmek
için hücreler mTOR yolaklarini inaktive ederek sag kalimda Bcl-2 yolagina
kullanmaya baslarlar. Sag kalim yolagi Bcl-2 anti-apoptotik proteinlerinin, ABT-
737 ilaci ile bloke edilmesi ile de kanser hücreleri ölüme giderler.
Deney sonunda her bir gruptaki hayvandan timus, kalp, mide, bagirsak, böbrek,
dalak, testis, akciger, karaciger ve beyin alinarak patolojik incelemeye
25418.62
gönderilmistir. Patolojik inceleme sirasinda ilaç tedavisinin izole edilen dokular
üzerinde herhangi bir toksik etki yaratip yaratmadigi tespit edilirken, ayni
zamanda bu dokularda metastatik bir odagin var olup olmadigina bakilmistir.
Yukarida bahsi geçen organlarda patolojik inceleme sonrasinda herhangi bir
Hayvanlarda olusan tümör dokusunun patolojik incelenmesi sonucunda bu
tümörlerin böbrek hücreli karsinom oldugu belirlenmistir. Hayvanlarda olusan
tümörlerde nekroz adi verilen doku ölümü olgusu tespit edilmistir (Tablo 1, 2, 3
ve 4). Kanser dokusunda nekroz; patolojik olaylar sonucunda (enfeksiyon, kanser
veya enflamasyon gibi) tetiklenir ve tümörde özellikle vasküler destek yetersiz
kaldiginda olusur. Bu duruma bagli olarak nekroz hücre bütünlügünün kimyasal
ve yapisal olarak bozulmasi sonucunda görülen bir ölüm seklidir. Böbrek hücreli
karsinoma için dört tane sirali derecelendirme sistemi WHO/ISUP (World Health
Organization/International Society of Urological Pathology) tarafindan
önerilmistir. Nükleolar belirginlige göre tümörler 1-3 arasinda derecelendirilir.
Dördüncü derece ise belirgin nükleer pleomorfizm (bir hücrenin birkaç degisik
sekil göstermesi), tümör dev hücreleri ve/veya sarkomatoid (bag dokusunda
olusan kötü huylu ura benzeyen) farklilasma varligina göre belirlenmektedir. Bu
baglamda ilaç tedavisi verilmeyen hayvanlarda en yüksek derece olan 4 dereceli
tümörler gözlemlenirken Everolimus ve ABT-737 monoterapisi alan farelerde
olusan tümörlerin farkli derecelerde oldugu tespit edilmistir. Ayrica hayvanlardan
alinan organlardan olan timüs, kalp, mide, bagirsak, böbrek, dalak, testis, akciger,
karaciger ve beyinde metastatik tümör bulgusuna rastlanmamistir.
Tablo 1: Kontrol grubu hayvanlarindan alinan tümörlerin patolojik inceleme
sonuçlaridir.
Kontrol Tümör Derece Nekroz
Hl Böbrek hücreli karsinom 4 Var
H2 Böbrek hücreli karsinom 4 Var
25418.62
H3 Böbrek hücreli karsinom 4 Var
H4 Böbrek hücreli karsinom 4 Var
H5 Böbrek hücreli karsinom 4 Var
H6 Böbrek hücreli karsinom 4 Var
H7 Böbrek hücreli karsinom 4 Var
HS Böbrek hücreli karsinom 4 Var
Tablo 2: Everolimus grubu hayvanlarindan alinan tümörlerin patolojik inceleme
sonuçlaridir.
Everolimus Tümör Derece N ekroz
Hl Böbrek hücreli karsinom 4 Var
H2 Tümör yok - Yok
H3 Tümör yok - Yok
H4 Tümör yok - Yok
H5 Böbrek hücreli karsinom 4 Yok
H6 Böbrek hücreli karsinom 2 Yok
H7 Tümör yok - Yok
H8 Böbrek hücreli karsinom 4 Yok
Tablo 3: ABT-737 grubu hayvanlarindan alinan tümörlerin patolojik inceleme
sonuçlaridir.
ABT-737 Tümör Derece Nekroz
Hl Böbrek hücreli karsinom 4 Yok
H2 Böbrek hücreli karsinom 4 Yok
H3 Tümör yok - Yok
H4 Tümör yok - Yok
H5 Tümör yok - Yok
H6 Tümör yok - Yok
H7 Tümör yok - Yok
25418.62
Tablo 4: Kombinasyon grubu hayvanlarindan alinan tümörlerin patolojik
inceleme sonuçlaridir.
Kombinasyon Tümör Derece Nekroz
Hl Tümör yok - Yok
H2 Tümör yok - Yok
H3 Tümör yok - Yok
H4 Tümör yok - Yok
H5 Tümör yok - Yok
H6 Tümör yok - Yok
H7 Tümör yok - Yok
H8 Tümör yok - Yok
Yukarida bahsi geçen deney sonuçlarimiza ek olarak ilaç kompozisyonunun
saglikli insan embriyonik böbrek (HEK293) hücrelerinde herhangi bir toksik
etkiye yol açip açmadigi hücre canlilik testi ile incelenmistir. Kontrol hücreleri ile
kiyaslandiginda, 24 ve 48 saat süresince HEK293 hücrelerine uygulanan luM
Everolimus ajani sitotoksik etki göstermezken, 72 saat süresince uygulandiginda
hücre canliliginda sadece %50 oraninda düsüse sebebiyet vermistir (Sekil 15).
Everolimus ajanina kiyasla, ABT-737°nin saglikli böbrek hücrelerinde canliligi
etkilemedigi görülmüstür. Öyle ki, uygulamanin üçüncü gününde dahi 5uM ABT-
737 ajani hücre canliliginda herhangi bir düsüse yol açmazken, hücreler
çogalmaya devam etmislerdir. Monoterapilere ek olarak ilaç kompozisyonu 24, 48
ve 72 saatin sonunda hücre canliliginda anlamli bir düsüse yol açmamistir.
Bulus, böbrek hücreli karsinom tedavisinde Everolimus ve ABT-737 ilaç
kompozisyonunun uygulanabilecegini göstermektedir.
25418.62
Bulusun Uygulanmasi
Hedefe yönelik ilaçlardan olan Everolimus, rapalog direnci gelistiren BHK
hastalarinda sagkalim potansiyelini artirmak ve BHK için yeni bir tedavi yöntemi
gelistirmek üzere bulus kapsaminda Bcl-2 inhibitörlerinden olan ABT-737 ile
birlikte kullanilmistir.
Yukarida sunulan sonuçlarin isiginda ABT-737,nin tek basina veya Everolimus
ile birlikte uygulandiginda BHK hücre hatlarinda hücre ölümüne yol açtigi
gözlemlenmistir. Ayni zamanda ABT-737 monoterapi veya ABT-737°nin
Everolimus ile kombinasyonunun hayvanlarda tümör olusumunu engellendiginin
kanitlanmasi, bu ilacin BHK tedavisinde çare olabilecegini göstermektedir. Bu
bulgularin isiginda rapalog direnci gösteren BHK tedavisinde kullanilmak üzere
ABT- ve diger
Bcl-2 inhibitörlerinin tek basina veya günde bir kez 10 mg dozunda kullanilan
Everolimus ile birlikte uygulanmasinin patentlenmesi talep edilmektedir.
Yetiskinlerdeki malignant tümörlerin %2-35ünü olusturan Böbrek hücreli
karsinoma (BHK) böbrekte görülen kanser türleri arasinda en sik rastlanan (%85)
malignant tümördür ve %50 oraninda bir mortaliteye sahiptir. BHK tümörlerinin
aktive olarak PI3K-AKT-mTOR yolagi sagkalim mekanizmasini harekete
geçmesine ve bu sebeple tümörlerin yogun damarlasma ve metastaz özelligi
kazanmasina sebebiyet vermektedir. Günümüzde metastatik BHK tedavisinde
kullanilan ilaçlardan biri olan Everolimus bu kinaz yolagini hedef alarak hücre
büyüme/sagkalimini inhibe eder. Ancak bu ilaçlarla yapilan kemoterapötik
tedaviler ileri evre yada metastatik BHK,ne sahip hastalarin Ömürlerini sadece
uzatabilmekte hastaligi tedavi ederek ölüm oranini azaltamamaktadir. Metastatik
BHK tedavisinde istenilen basarinin elde edilememesinin sebeplerinden bir tanesi
tümörlerin kemoterapötik tedaviye direnç göstermesidir. Literatürde BHK,da
görülen kemoterapi ilaç direnci anti-apoptotik protein Bol-2 anlatiminin yüksek
olmasi ile iliskilendirilmistir. Bu bilgilerin isiginda patent basvurusuna konu olan
25418.62
ve TÜBITAK (1148332) destekli bu çalismada Everolimus ilaç direnci gelistiren
BHK tümörlerinde Bcl-2 anti-apoptotik inhibitörü ABT-737 ile kombine
tedavinin BHK tedavisinde basarisi test edilmistir. Bu baglamda Everolimus
direnci gösteren ve Bel-2 proteinini yüksek ifade eden BHK hücre hatlarinda
Everolimus ve ABT-737 ilaç kompozisyonunun hücre sagkalimi ve ölümü üzerine
etkisi in vitro ve in vi'vo deneyler ile gösterilmis ve ilaç kompozisyonunun BHK
üzerindeki etki mekanizmasi moleküler açidan incelenmistir. ABT-737,nin BHK
tedavisi için kullanildigi herhangi bir preklinik ya da in vitro çalisma
bulunmamaktadir. Rapalog direnci gösteren BHK tedavisinde kullanilmak üzere
ABT- ve diger
Bcl-2 inhibitörlerinin tek basina veya günde bir kez 10 mg dozunda kullanilan
Everolimus ile birlikte uygulanmasinin patentlenmesi talep edilmektedir.
Bulus, günümüzde malignant tümörlerin %2-3`ünü olusturan metastatik Böbrek
hücreli karsinoma (BHK) tedavisinde rapalog direnci gelistiren BHK tümörlerine
yönelik olarak Bcl-2 anti-apoptotik inhibitörü ABT-737 ile kombine edilmesi ile
gerçeklestirilen bir kemoterapik ilaç kompozisyonu ile ilgilidir. Olusturulan bu
kompozisyonla tedavinin BHK tedavisinde basarisi bulus kapsaminda test
edilmistir. Bu baglamda rapalog direnci gösteren ve Bol-2 proteinini yüksek ifade
eden BHK hücre hatlarinda Everolimus ve ABT-737 ilaç kompozisyonunun hücre
sagkalimi ve ölümü üzerine etkisi in vitro ve in vi'vo deneyler ile gösterilmis ve
ilaç kompozisyonunun BHK üzerindeki etki mekanizmasi moleküler açidan
incelenmistir. Rapalog direnci gösteren BHK tedavisinde kullanilmak üzere ABT-
ve diger Bel-2
inhibitörlerinin tek basina veya günde bir kez 10 mg dozunda kullanilan
Everolimus ile birlikte uygulanmasi bulus kapsaminda yer almaktadir.
25418.62
REFERANSLAR
Ferlay, J., Skin, H.R., Bray, F. 2010. “Estimates of worldwide burden
Yamamoto, Y., Koma, H., Hiramatsu, H., Abe, M., Murakami, K.,
Ohya, A., Yagami, T. 2014. “Treatment of etoposide combined With
l5-deoxy-A12,14-prostaglandin J 2 exerted synergistic antitumor effects
against renal cell carcinoma via peroxisome proliferator-activated
receptor-y-independent pathway”, Mol Clin Oncol, 2, 292-6
Calvo, E., Grünwald, V., Belmunt, J. 2014. “Contraversies in renal cell
carcinoma: Treatment Choice after progression on vascular endothelial
Gnarra, J.R., Tory, K., Weng, Y., Schmidt, L., Wei, M.H., Li, H., Latif,
F., Liu, S., Chen, F., Duh, F.M., et al. 1994 “Mutations of the VHL
tumour suppressor gene in renal carcinoma”, Nat Genet., 7(1), 85-90.
Sato, T., Umetsu, A., Tamanoi, F. 2008. “Characterization of the Rheb-
mTOR signaling pathway in mammalian cells: constitutive active
mutants of Rheb and mTOR”, Methods Enzymol., 438, 307-20
Banumathy, G., Cairns, P. 2010. “Signaling pathways in renal cell
carcinoma”, Cancer Biol Ther., 10(7), 658-64
Motzer, R., Escudier, B., Oudard, S. 2008. “Efficacy of everolimus in
advanced renal cell carcinoma: a double-blind, randomized, placebo-
Juengel, E., Engler, J., Natsheh, I., Jones, J., Mickuckyte, A., Hudak,
L., Jonas, D., Blaheta, R.A. 2009. “Combining the receptor tyrosine
25418.62
kinase inhibitor AEE788 and the mammalian target of rapamycin
(mTOR) inhibitor RAD001 strongly inhibits adhesion and growth of
renal cell carcinoma cells”, BMC Cancer, 9, 161
Brown, E.J., Albers, M.W., Shin, T.B., Ichikawa, K., Keith, C.T., Lane,
W.S., and Schreiber, S.L. 1994. “A mammalian protein targeted by Gl-
arresting rapamycin-receptor complex”, Nature 369, 756-758
Oh, W.J., Jacinto, E. 2011. “mTOR complex 2 signaling and
Laplante M and Sabatini DM. 2012. “mTOR signaling in growth
Santoni, M., Pantano, F., Amantini, C., Nabissi, M., Conti, A.,
Burattini, L., Zoccoli, A., Berardi, R., Santoni, G., Tonini, G., Santini,
D., Cascinu, S. 2014. “Emerging strategies to overcome the resistance
to current mTOR inhibitors in renal cell carcinoma”, Biochim Biophys
Cory, S., Adams, J .M. 2005. “Killing cancer cells by flipping the Bcl-
2/Bax switch”, Cancer Cell, 8(1), 5-6
Bajwa, N., Liao, C., Nikolovska-Coleska, Z. 2012. “Inhibitors of the
anti-apoptotic Bol-2 proteins: a patent review”, Expert Opin Ther Pat.
22( l ), 37-55.
Adams, J.M., Cory S. 2007. “The Bcl-2 apoptotic switch in cancer
development and therapy”, Oncogene, 26(9), 1324-37.
25418.62
Azmi, A.S., Mohammad, R.M. 2009. “Non-peptidic small molecule
inhibitors against Bel-2 for cancer therapy”, J Cell Physiol., 218(l),l3-
Labi, V., Grespi, F., Baumgartner, F., Villunger, A. 2008. “Targeting
the Bcl-2-regulated apoptosis pathway by BH3 mimetics: a
breakthrough in anticancer therapy?”, Cell Death Differ., 15(6), 977-87.
Muchmore, S.W., Sattler, M., Liang, H., Meadows, R.P., Harlan, J .E.,
Yoon, H.S., Nettesheim, D., Chang, B.S., Thompson, C.B., Wong, S.L.,
Ng, S.L., Fesik, S.W. 1996. “X-ray and NMR structure of human Bcl-
Cory, S., Adams, J.M. 2002. “The Bc12 family: regulators of the
cellular life-or-death switch”, Nat Rev Cancer, 2(9), 647-56
Konopleva, M., Contractor, R., Tsao, T., Samudio, I., Ruvolo, P.P.,
Kitada, S. 2006. “Mechanisms of apoptosis sensitivity and resistance to
the BH3 mimetic ABT-737 in acute myeloid leukemia”, Cancer Cell,
, 375-388.
Pellecchia, M., Reed, J.C.2004. “Inhibition of anti-apoptotic Bel-2
family proteins bynatural polyphenols: new avenues for cancer
chemoprevention and chemotherapy”, Curr Pharm Des., 10(12), 1387-
Vogler, M., Dinsdale, D., Dyer, M.J., Cohen, G.M. 2009. “Bel-2
inhibitors: small molecules With a big impact on cancer therapy”, Cell
Death Differ., 16(3), 360-7.
25418.62
Tomita, Y., Bilim, V., Kawasaki, T., Takahashi, K., Okan, I.,
Magnusson, K.P., Wiman, K.G. 1996. “Frequent expression of Bol-2 in
renal-cell carcinomas carrying wild-type p53”, Int J Cancer.
Zheng, L., Yang, W., Zhang, C., Ding, W.J., Zhu, H., Lin, N.M., Wu,
H.H., He, Q.J., Yang, B. 2011. “GDC-0941 sensitizes breast cancer to
ABT -737 in vitro and in vivo through promoting the degradation of
Mcl-l”, Cancer Lett., 309(1), 27-36.
Zall, H., Weber, A., Besch, R., Zantl, N., Hacker, G. 2010.
ABT-737 by a mechanism involving the Noxa-dependent inactivation
of MCl-l or A1”, Mol Cancer, 9, 164.
Tse C., Shoemaker A.R., Adickes J. Ve digerleri 2008. “ABT-263: a
potent and orally bioavailable Bel-2 family inhibitor,” Cancer Research,
Wilson W.H., O'Connor O.A., Czuczman M.S.ve digerleri 2010.
malignancies: a phase l dose-escalation study of safety,
pharmacokinetics, pharmacodynamics, and antitu- mour activity.”
Lancet Oncol., 11:1149-59.
Roberts A.W., Seymour J.F., Brown J.R. ve digerleri 2012.
inhibition: results of a phase I study of navitoclax in patients With
relapsed or refractory disease”, J Clin Oncol., 30:488-96.
Gandhi, L., Camidge D.R., de Oliveira, M.R. ve digerleri 2011. “Phase
25418.62
patients with small-cell lung cancer and other solid tumors,” Journal of
Clinical Oncology, 29, 909-916.
Rudin C.M., Hann C.L., Garon E.B. ve digerleri 2012 “Phase II study
of single-agent navitoclax (ABT-263) and biomarker correlates in
patients with relapsed small cell lung cancer,” Clinical Cancer
Gupta, K., Miller, J .D., Li, J 2., Russell, M.W., Charbonneau, C. 2008.
carcinoma (mRCC): a literature review." Cancer Treat Rev, 34(3), 193-
Ljungberg, B., Cowan, N.C., Hanbury, D.C., Hora, M., Kuczyk, M.A.,
Merseburger, A.S., Patard, J .J ., Mulders, P.F., Sinescu, I.C. 2010.
Escudier, B., Eisen, T., Stadler, W.M., Szczylik, C., Oudard, S.,
Siebels, M., Negrier, S., Chevreau, C., Solska, E., Desai, A.A., Rolland,
F., Demkow, T., Hutson, T.E., Gore, M., Freeman, S., Schwartz, B.,
Shan, M., Simantov, R., Bukowski, R.M. 2007. “Sorafenib in advanced
clear-cell renal-cell carcinoma”, N Eng] J Med., 356(2), 125-34.
Erratum in: N Eng] J Med.,357(2), 203.
Murphy, G.P., Hrushesky, W.J. 1973 “A murine renal cell carcinoma”,
J Natl Cancer Inst., 50(4), 1013-25.
Hillman, G.G., Droz, J.P., Haas, GF. 1994. “Experimental animal
models for the study of therapeutic approaches in renal cell carcinoma”,
25418.62
Corrano, L., Korsmeyer, SJ. 2003. “Mechanisms of cytochrome c
release by proapoptotic BCL-2 family members”, Biochem Biophys
Res Commun., 304(3), 437-44.
Bratton, S.B., Salvesen, GS. 2010. “Regulation of the Apaf-l-caspase-
Ma D, Bai X, Zou H, Lai Y, Jiang Y. 2010. “Rheb GTPase controls
apoptosis by regulating interaction of FKBP38 with Bel-2 and Bol-XL”,
Holz, M.K, Ballif, B.A., Gygi, S.P., Blenis J. 2005. “mTOR and SöKl
Mediate Assembly of the Translation Preinitiation Complex through
Dynamic Protein Interchange and Ordered Phosphorylation Events”,
Rosner, M. and Hengstschlâger, M. 2010. “Evidence for cell cycle-
dependent, rapamycin-resistant phosphorylation of ribosomal protein
18° ' A-498-Ever0limus
Claims (1)
- ISTEMLER . ABT-737 ve/veya ABT-737,nin analogu olan ve oral yolla alinan Navitoclax (ABT-263) çözeltisi içeren bir ilaç kompozisyonunun böbrek kanseri tedavisi için kullanilmasi. . Everolimus çözeltisi içeren Istem l,deki gibi bir ilaç kompozisyonunun böbrek kanseri tedavisi için Istem l,deki gibi kullanilmasi. . Istem l,deki gibi ABT-737 ve/veya ABT-737inin analogu olan ve oral yolla alinan Navitoclax (ABT-263) çözeltisinin rapalog direnci gösteren ileri böbrek kanseri tedavisi için kullanilmasi. . Istem ?deki gibi ABT-737 ve/veya ABT-737 analogu Navitoclax (ABT- 263) çözeltisi ve Everolimus çözeltisinin birlikte, rapalog direnci gösteren ileri böbrek kanseri tedavisi için kullanilmasi. . Yukaridaki istemlerden herhangi birindeki gibi, böbrek hücreli karsinoma (BHK) tedavisinde kullanilan ABT-737 ve/veya ABT-737 analogu Navitoclax (ABT-263) çözeltisinin olusturulma yöntemi olup, - 10 mg ABT-737 ve/veya ABT-737inin analogu olan ve oral yolla alinan Navitoclax (ABT-263),nin 1,229m1 DMSO içerisinde çözülmesiyle (8,14 mg/ml) konsantrasyonu 10 mM olan Everolimus stock çözeltisinin hazirlanmasi, - in vi'v0 sartlar için, ABT-737 ve/veya ABT-737°nin analogu olan ve oral yolla alinan Navitoclax (ABT-263) stok konsantrasyonundan alinmis örnegin 75mg/kg olacak sekilde ilacin PBS (Phosphate-buffered saline) içerisinde seyreltilmesi, - ABT-737 ve/veya ABT-737lnin analogu olan ve oral yolla alinan Navitoclax (ABT-263) çözeltisinin hazirlanmasi adimlarini içermektedir. 6. Istem 2 veya 4”deki gibi, böbrek hücreli karsinoma (BHK) tedavisinde kullanilan Everolimus çözeltisinin olusturulma yöntemi olup, - lOmg liyofilize Everolimus içerisinde çözülmesiyle (9,6 mg/ml) konsantrasyonu 10 mM olan Everolimus stock çözeltisinin hazirlanmasi, - in vi'vo sartlar için, Everolimus stok konsantrasyonundan alinmis örnegin 2mg/kg olacak sekilde ilacin PBS (Phosphate-buffered saline) içerisinde seyreltilmesi, - Everolimus çözeltisinin hazirlanmasi adimlarini içermektedir.
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| TR2017/03149A TR201703149A2 (tr) | 2017-03-01 | 2017-03-01 | Kemoterapi̇k i̇laç kompozi̇syonu |
| EP18855220.2A EP3589372A4 (en) | 2017-03-01 | 2018-03-01 | COMPOSITION OF CHEMOTHERAPEUTIC DRUG |
| US16/490,085 US10918644B2 (en) | 2017-03-01 | 2018-03-01 | Chemotherapeutic drug composition |
| PCT/TR2018/050073 WO2019054966A2 (en) | 2017-03-01 | 2018-03-01 | CHEMOTHERAPEUTIC DRUG COMPOSITION |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| TR2017/03149A TR201703149A2 (tr) | 2017-03-01 | 2017-03-01 | Kemoterapi̇k i̇laç kompozi̇syonu |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| TR201703149A2 true TR201703149A2 (tr) | 2018-09-21 |
Family
ID=65722990
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| TR2017/03149A TR201703149A2 (tr) | 2017-03-01 | 2017-03-01 | Kemoterapi̇k i̇laç kompozi̇syonu |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US10918644B2 (tr) |
| EP (1) | EP3589372A4 (tr) |
| TR (1) | TR201703149A2 (tr) |
| WO (1) | WO2019054966A2 (tr) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US11285159B2 (en) | 2019-11-05 | 2022-03-29 | Abbvie Inc. | Dosing regimens for use in treating myelofibrosis and MPN-related disorders with navitoclax |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20090098118A1 (en) * | 2007-10-15 | 2009-04-16 | Thomas Friess | Combination therapy of a type ii anti-cd20 antibody with an anti-bcl-2 active agent |
| US20100280031A1 (en) * | 2009-04-30 | 2010-11-04 | Paul David | Lipid formulation of apoptosis promoter |
| NZ598461A (en) * | 2009-09-20 | 2013-12-20 | Abbvie Inc | Abt-263 crystalline forms and solvates for use in treating bcl-2 protein related diseases |
| CA2780177A1 (en) | 2009-12-22 | 2011-06-30 | Abbott Laboratories | Abt-263 capsule |
| WO2011133668A2 (en) * | 2010-04-20 | 2011-10-27 | President And Fellows Of Harvard College | Methods and compositions for the treatment of cancer |
| US20120077837A1 (en) * | 2010-09-24 | 2012-03-29 | Eisai R&D Management Co., Ltd. | Anti-tumor agent |
| KR101456754B1 (ko) | 2012-12-07 | 2014-10-31 | 계명대학교 산학협력단 | Ａｂｔ-737 및 카페스톨을 유효성분으로 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학 조성물 |
| US20170202782A1 (en) * | 2014-04-06 | 2017-07-20 | Abraxis Bioscience, Llc | Combination therapy comprising nanoparticles of a taxane and albumin with abt-263 in methods for treating cancer |
| US20180021259A1 (en) * | 2015-02-10 | 2018-01-25 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Dye-stabilized nanoparticles and methods of their manufacture and therapeutic use |
| US9717745B2 (en) * | 2015-03-19 | 2017-08-01 | Zhejiang DTRM Biopharma Co. Ltd. | Pharmaceutical compositions and their use for treatment of cancer and autoimmune diseases |
-
2017
- 2017-03-01 TR TR2017/03149A patent/TR201703149A2/tr unknown
-
2018
- 2018-03-01 WO PCT/TR2018/050073 patent/WO2019054966A2/en unknown
- 2018-03-01 US US16/490,085 patent/US10918644B2/en active Active
- 2018-03-01 EP EP18855220.2A patent/EP3589372A4/en active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US10918644B2 (en) | 2021-02-16 |
| WO2019054966A3 (en) | 2019-05-09 |
| EP3589372A4 (en) | 2021-01-20 |
| US20200061075A1 (en) | 2020-02-27 |
| WO2019054966A2 (en) | 2019-03-21 |
| EP3589372A2 (en) | 2020-01-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Nawrocki et al. | The proteasome inhibitor bortezomib enhances the activity of docetaxel in orthotopic human pancreatic tumor xenografts | |
| Rattan et al. | Metformin suppresses ovarian cancer growth and metastasis with enhancement of cisplatin cytotoxicity in vivo | |
| Santoni et al. | Emerging strategies to overcome the resistance to current mTOR inhibitors in renal cell carcinoma | |
| CA2955384C (en) | Treatment of cancer with a combination of radiation, cerium oxide nanoparticles, and a chemotherapeutic agent | |
| Ewald et al. | Dual Inhibition of PI3K-AKT-mTOR-and RAF-MEK-ERK-signaling is synergistic in cholangiocarcinoma and reverses acquired resistance to MEK-inhibitors | |
| Mukhopadhyay et al. | Recent progress of autophagy signaling in tumor microenvironment and its targeting for possible cancer therapeutics | |
| Freeman et al. | Effect of perioperative lidocaine and cisplatin on metastasis in a murine model of breast cancer surgery | |
| Du et al. | Vascular tumors have increased p70 S6-kinase activation and are inhibited by topical rapamycin | |
| Lee et al. | Growth inhibitory and anti-tumour activities of OSU-03012, a novel PDK-1 inhibitor, on vestibular schwannoma and malignant schwannoma cells | |
| Almahariq et al. | Inhibition of colony-stimulating factor-1 receptor enhances the efficacy of radiotherapy and reduces immune suppression in glioblastoma | |
| Wei et al. | Obatoclax and LY3009120 efficiently overcome vemurafenib resistance in differentiated thyroid cancer | |
| Zhou et al. | Platycodin D induces tumor growth arrest by activating FOXO3a expression in prostate cancer in vitro and in vivo | |
| WO2015179436A1 (en) | Inflammation therapy using mekk3 inhibitors or blocking peptides | |
| Margue et al. | Kinase inhibitor library screening identifies synergistic drug combinations effective in sensitive and resistant melanoma cells | |
| Cho et al. | The molecular chaperone heat shock protein 70 controls liver cancer initiation and progression by regulating adaptive DNA damage and mitogen-activated protein kinase/extracellular signal-regulated kinase signaling pathways | |
| US20220211690A1 (en) | Methods for treating pten-mutant tumors | |
| Squillace et al. | Synergistic activity of the mTOR inhibitor ridaforolimus and the antiandrogen bicalutamide in prostate cancer models | |
| Wang et al. | Inhibition of insulin‐like growth factor 1 receptor enhances the efficacy of sorafenib in inhibiting hepatocellular carcinoma cell growth and survival | |
| Winski et al. | MEK162 (ARRY-162), a novel MEK 1/2 inhibitor, inhibits tumor growth regardless of KRas/Raf pathway mutations | |
| Dodhiawala et al. | TPL2 enforces RAS-induced inflammatory signaling and is activated by point mutations | |
| Ma et al. | Benzyl isothiocyanate inhibits human brain glioblastoma multiforme GBM 8401 cell xenograft tumor in nude mice in vivo | |
| May et al. | Co-targeting PI3K, mTOR, and IGF1R with small molecule inhibitors for treating undifferentiated pleomorphic sarcoma | |
| Shi et al. | Gossypin induces G2/M arrest in human malignant glioma U251 cells by the activation of Chk1/Cdc25C pathway | |
| Liu et al. | Ethyl gallate as a novel ERK1/2 inhibitor suppresses patient‐derived esophageal tumor growth | |
| Zhang et al. | Concomitant targeting of FLT3 and BTK overcomes FLT3 inhibitor resistance in acute myeloid leukemia through the inhibition of autophagy |