Claims (9)
ข้อถือสิทธฺ์ (ทั้งหมด) ซึ่งจะไม่ปรากฏบนหน้าประกาศโฆษณา :------21/12/2561------(OCR) หน้า 1 ของจำนวน 2 หน้า ข้อถือสิทธิAll rights reserved which will not appear on the advertisement page:------21/12/2018------(OCR) Page 1 of 2 pages of rights reserved
1. กรรมวิธีการเก็บรักษาถุงเก็บนํ้าเชื้อของกุ้งด้วยการแช่แข็ง ที่มีลักษณะเฉพาะคือ ใช้สารละลายบัฟเฟอร์ที่เหมาะสมในการปรับสมดุลถุงเก็บนาเชือของกุ้งและใช้สารละลายใครโอโพรเทคแทนท์ (cryoprotectant) เพื่อป้องกันเซลล์สเปิร์มขณะแช่แข็ง โดยนำถุงเก็บน้ำเชื้อกุ้งแช่สารละลายบัฟเฟอร์และสารละลายไครโอโพรเทคแทนท์ จนกระทั่งถุงเก็บน้ำเชื้อกุ้งอยู่ในภาวะสมดุล ทำการลดอุณหภูมิเพื่อแช่แข็งถุงเก็บน้ำเชื้อกุ้ง ปล่อยพักไว้ แล้วนำไปแช่แข็งในไนโตรเจนเหลวตามระยะเวลาที่เหมาะสม เมื่อจะนำถุงเก็บน้ำเชื้อกุ้งที่แช่แข็งไปใช้จะทำการละลายถุงเก็บน้ำเชื้อดังกล่าว1. The unique freezing preservation method of shrimp semen storage bags is the use of an appropriate buffer solution to balance the shrimp semen storage bags and the use of a cryoprotectant solution to protect sperm cells during freezing. The shrimp semen storage bags are immersed in the buffer solution and cryoprotectant solution until the shrimp semen storage bags are in an equilibrium state. The temperature is then lowered to freeze the shrimp semen storage bags, left to rest, and then frozen in liquid nitrogen for an appropriate period of time. When the frozen shrimp semen storage bags are to be used, the said semen storage bags are thawed.
2. กรรมวิธีการเก็บรักษาถุงเก็บน้ำเชื้อของกุ้งด้วยการแช่แข็ง ตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ชึ่ง การละลายถุงเก็บน้ำเชื้อดังกล่าว มีลักษณะเฉพาะคือ นำถุงเก็บน้ำเชื้อที่ถูกแช่แข็งมาละลาย (thawing) ในซึ่งมีอุณหภูมิระหว่าง 30-35 องศาเซลเซียสนานไม่เกิน1นาที แล้วนำถุงเก็บน้ำเชื้อไปใช้ประโยชน์ต่อไป2. The process of freezing shrimp semen storage bags, as per claim 1, wherein the thawing of the semen storage bags is characterized by the thawing of the frozen semen storage bags at a temperature between 30-35 degrees Celsius for no more than 1 minute, and then the semen storage bags are used for further purposes.
3. กรรมวิธีการเก็บรักษาถุงเก็บน้ำเชื้อของกุ้งด้วยการแช่แข็ง ตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่ง มีลักษณะเฉพาะคือ เป็นวิธีที่ใช้กับกุ้งกุลาดำ (Penaeus monodon)3. A method for freezing shrimp semen storage bags according to claim 1, wherein the specific characteristic is that it is a method used for black tiger shrimp (Penaeus monodon).
4. กรรมวิธีการเก็บรักษาถุงเก็บน้ำเชื้อของกุ้งด้วยการแช่แข็งตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่ง มีลักษณะเฉพาะคือ สารละลายบัฟเฟอร์ที่เหมาะสม ได้แก่ แคลเซียมฟรีซาสิน (Calcium Free saline, Ca Free saline, C-F saline) ซึ่งเตรียมโดยนำโซเดียมคลอไรด์ (NaCI) 20-25 กรัม, โปแตสเชียมคลอไรด์ (KCI) 1-5 กรัม, ไตรไฮโดรเจนโบร์ไมด์ (FI3BO3) 0.5-1กรัม, โซเดียมไฮดรอกไซด์ (NaOH) 0.1-0.3 กรัม และแมกนีเซียมซัลเฟต (MgSo4.7FI20) 1-5 กรัม เจือจางในน้ำกลั่นปริมาตร 1 ลิตร แล้วปรับความเป็นกรดด่าง (pH) ให้อยู่ระหว่าง 7-8 โดยใช้กรดไฮโดรคลอรค (HCI)4. The freezing process of shrimp semen storage bags according to claim 1, wherein the specific characteristics are: a suitable buffer solution, namely calcium free saline (Ca Free saline, C-F saline), prepared by diluting 20-25 g of sodium chloride (NaCI), 1-5 g of potassium chloride (KCI), 0.5-1 g of trihydrogen bromide (FI3BO3), 0.1-0.3 g of sodium hydroxide (NaOH), and 1-5 g of magnesium sulfate (MgSo4.7FI20) in 1 liter of distilled water and adjusting the pH to between 7-8 using hydrochloric acid (HCI).
5. กรรมวิธีการเก็บรักษาถุงเก็บน้ำเชื้อของกุ้งด้วยการแช่แข็ง ตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่ง มีลักษณะเฉพาะคือ สารไครโอโพรเทคแทนท์ (cryoprotectant) เลือกได้จาก นาตาลซูโครส (sucrose) ความเข้มข้น 5-10 เปอร์เซ็นต์ และ/หรือไดเมทธีลซัลฟอกไซด์ (dimethylsulfoxide หรอ DMSO) ความเข้มข้น 5-10 เปอร์เซ็นต์ชนิดใดชนิดหนึ่ง หรือสองชนิดรวมกัน5. A method for freezing shrimp semen storage vesicles according to claim 1, wherein the cryoprotectant is selected from sucrose at a concentration of 5-10 percent and/or dimethylsulfoxide (DMSO) at a concentration of 5-10 percent, either one of the two or a combination thereof.
6. กรรมวิธีการเก็บรักษาถุงเก็บน้ำเชื้อของกุ้งด้วยการแช่แข็ง ตามข้อถือสิทธิที่ 1,3, 5ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ซึ่ง สารไครโอโพรเทคแทนท์ (cryoprotectant) มีการเตรียมที่มีลักษณะเฉพาะคือ ชั่งน้ำตาลซูโครส และ/หรือ ดีเอ็มเอสโอ แล้วเจือจางในนำกลั่นใน 3 ลักษณะคือ ก. ใส่น้ำตาลซูโครส (sucrose) ความเข้มข้น 5-10 เปอร์เซ็นต์โดยปริมาตร พร้อมกับดีเอ็มเอสโอ (DMSO) ความเข้มข้น5-10 เปอร์เซ็นต์โดยปริมาตร อย่างละปริมาณเท่ากันในบีกเกอร์ให้ได้ ความเข้มข้นสุดท้ายของสารละลายไครโอโพรเทคแทนท์เป็นครึ่งหนึ่งของความเข้มข้นตั้งต้น แล้วแช่ถุงเก็บน้ำเชื้อลงไปในสารละลาย ข. เตรียมน้ำตาลซูโครส (sucrose) ความเข้มข้น 5-10 เปอร์เซ็นต์โดยปริมาตร ก่อนในบีกเกอร์แล้ว แช่ถุงเก็บน้ำเชื้อทั่งไว้ 10 นาที แล้วใส่ดีเอ็มเอสโอ (DMSO) ความเข้มข้น 5-10 เปอร์เซ็นต์โดย ปริมาตร ในปริมาณที่เท่ากับปริมาณสารละลายซูโครส (sucrose solution) ที่ใส่ลงไปเพื่อให้ได้หน้า 2 ของจำนวน 2 หน้าความเข้มข้นสุดท้ายของสารละลายไครโอโพรเทคแทนท์ (cryoprotectant) เป็นค\'รึงหนึงของความเข้มข้นเดิม แล้วแช่ถุงเก็บนาเชือลง1ไป\'ในสารละลายค. เต่รืยมดีเอ็มเอสโอ (DMSO) ความเข้มข้น 5-10 เปอร์เซ็นต์โดย!]ริมาตร ในปีกเกอร์แล้วแซ่ถุงเก็บนาเชือลงไปในสารละลาย6. A method for freezing shrimp semen storage bags according to any one of claims 1, 3, or 5, wherein the cryoprotectant is prepared in a manner that is characterized by weighing sucrose and/or DMSO and diluting it in distilled water in one of three ways: a. Adding equal amounts of 5-10% volume sucrose and 5-10% volume DMSO in a beaker to obtain a final concentration of the cryoprotectant solution that is half the initial concentration, and then immersing the semen storage bags in the solution; b. Preparing 5-10% volume sucrose in the beaker; Immerse the semen collection bag for 10 minutes, then add 5-10% DMSO by volume in an amount equal to the amount of sucrose solution added to obtain a final concentration of 2.5% cryoprotectant solution, which is half the original concentration. Then immerse the semen collection bag in solution C. Prepare 5-10% DMSO by volume in a picker and immerse the semen collection bag in the solution.
7. กรรมวิธีการเก็บรักษาถุงเก็บนาเชือของกุ้งด้วยการแซ่แข็งตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่ง มีลักษณะเฉพาะคือ เวลาที่ใช้แซ่ถุงเก็บนํ๋าเชือกุ้งในสารละลายไครโอโพรเทคแทนท์ เพื่อให้เกิดภาวะสมดุล (equilibration period) นานไม,เกิน 60 นาที7. A method for freezing shrimp egg storage bags according to claim 1, wherein the specific characteristic is that the time used to freeze the shrimp egg storage bags in the cryoprotectant solution to achieve an equilibration period of not more than 60 minutes.
8. กรรมวิธีการเก็บรักษาถุงเก็บนํ้าเชือฃองกุ้งด้วยการแซ่แข็งตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่ง มีลักษณะเฉพาะคือ อัตราการลดอุณหภูมิ คือ 2 องศาเซลเซียสต่อนาที8. The process of preserving shrimp sperm bags by freezing according to claim 1, wherein the specific characteristic is that the temperature reduction rate is 2 degrees Celsius per minute.
9. กรรมวิธีการเก็บรักษาถุงเก็บนํ้าเซือฃองกุ้งด้วยการแซ่แข็งตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่ง มีลักษณะเฉพาะคือ อุณหภูมิสุดท้าย (final temperature) ที่ต้องการ มีค่าระหว่าง -80 ถืง -90 องศาเซลเซียส ปล่อยพักไว้นาน 1-5 นาที1 กรรมวิธีการเก็บรักษาถุงเก็บนํ้าเชือฃองกุ้งด้วยการแซ่แข็งตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่ง มีลักษณะเฉพาะคือ ระยะเวลาเก็บรักษาถุงเก็บนํ้าเชือในไนโตรเจนเหลวเก็บได้นานกว่า 1 เดือน โดยที่คุณภาพสเปิร์มภายในถุงเก็บนาเชือไม่เปลี่ยนแปลง1 กรรมวิธีการเก็บรักษาถุงเก็บนาเชือของกุ้งด้วยการแซ่แข็ง ตามข้อถือสิทธิที่ 1 -10ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ซึ่ง สามารถนำไปใช้กับ ไข่ ตัวอ่อนระยะต่างๆ ของกุ้งกุลาดำ (Penaeus monodon) และลัตว์ครัสเตเชี่ยนนอกเหนือจากกุ้ง คือ กัง ปูปลาหมึก ------------ กรรมวิธีการเก็บรักษาถุงเก็บน้ำเชื้อของกุ้งด้วยการแช่แข็ง มีลักษณะเฉพาะคือ ใช้สารละลายบัฟเฟอร์ที่ เหมาะสมในการปรับสมดุล ถุงเก็บน้ำเชื้อของกุ้งและใช้สารละลายไคโอโพรเทคแทนท์ (cryopro tectant) ชนิดต่าง ๆ เพื่อ ป้องกันเซลล์เปิร์มขณะแช่แข็ง โดยนำถุง เก็บน้ำเชื้อกุ้งแช่สารละลายบัฟเฟอร์และสารละลายไคโอโพรเทคแทนท ์ จน กระทั่งถุงเก็บน้ำเชื้อกุ้งอยู่ในภาวะสมดุล ทำการลดอุณหภูม ิเพื่อแช่แข็งถุงเก็บน้ำเชื้อกุ้ง ปล่อยพักไว้ แล้วนำไปแช่แข็งใน ไนโตรเจนเหลวตามระยะเวลาที่เหมาะสม กรรมวิธีการละลายถุงเก็บน้ำเชื้อกุ้งที่ถูกเก็บรักษาด้วยวิธี การแช่แข็ง มีลักษณะเฉพาะ คือ นำถุงเก็บน้ำ เชื้อที่ถูกแช่แข็งมา ละลาย (thawing) ในน้ำซึ่งมีอุณหภูมิระหว่าง 30-35 องศาเซลเซีย ส นานไม่เกิน 1 นาที แล้วนำถุงเก็บ น้ำเชื้อไปใช้ประโยชน์ต่อไป กรรมวิธีการเก็บรักษาถุงเก็บน้ำเชื้อของกุ้งด้วยการแช่แข็งตา มข้อถือสิทธิข้อ 1 มีลักษณะเฉพาะคือ เป็นวิธีที่ ใช้กับกุ้งกุลา ดำ (penaeus monodon) กรรมวิธีเก็บรักษาถุงเก็บน้ำเชื้อของกุ้งด้วยการแช่แข็งตามข้ อถือสิทธิข้อ 1 มีลักษณะเฉพาะคือ สารละ- ลายบัฟเฟอร์ที่เหมาะสม ไ ด้แก่ แคลเซียมฟรีซาลีน (Calcium Free saline, Ca Free saline, C -F saline) ซึ่งเตรียมโดยนำ โซเดียมคลอไรด์ (NaCl) ประมาณ 20-25 ก รัม, โปแตสเซียมคลอไรด์ (KCl) ประมาณ 1-5 กรัม, ไตรไฮโดรเจนโบร์ ไมด์ (H3BO3) ประมาณ 0.5-1 กรัม และแมกนีเซียมซัลเฟต (MgSo4.7H 2O) ประมาณ 1-5 กรัม เจือจางในน้ำกลั่นปริมาตร 1 ลิตร แล้วปรับค วามเป็นกรดด่าง (pH) ให้อยู่ระหว่าง 7-8 โดยใช้กรดไฮโดรคลอริค ( Hcl) กรรมวิธีการเก็บรักษาถุงเก็บน้ำเชื้อของกุ้งด้วยการแช่แข็งตา มข้อถือสิทธิข้อ 1 มีลักษณะเฉพาะคือ สารไค โอโพรเทคแทน (cryoprot ectant) ชนิดต่างๆ ได้แก่ น้ำตาลซูโครส (sucrose) ความเข้มข้น 5- 10 เปอร์เซ็นต์, ไดเมทธิลซัล โฟไซด์ (dimethylsulfoxide หรือ DMS O) ความเข้มข้น 5-10 เปอร์เซ็นต์ สารไครโอโพรเทคแทน (cryoprotectant) ที่ใช้ในกรรมวิธีการเก็บรักษาถุงเก็บน้ำเชื้อของกุ้งด้วยการแช่แข็ง ตามข้อถือสิทธิข้อ 5 มีลักษณะเฉพาะคือ 6.1 ใส่น้ำตาลซูโครส (sucrose) ความเข้มข้น 5-10 เปอร์เซ็นต์ พ ร้อมกับดีเอ็มเอสโอ (DMSO) ความเข้มข้น 5-10 เปอร์เซ็นต์ อย่างล ะปริมาณเท่ากันในบีกเกอร์ให้ได้ความเข้มข้นสุดท้ายของ สารละลายไ คโอโพรเทคแทนท์เป็นครึ่งหนึ่งของความเข้มข้นตั้งต้น แล้วแช่ถุงเ ก็บน้ำเชื้อลงไปใน สารละลาย 6.2 เตรียมน้ำตาลซูโครส (sucrose) ความเข้มข้น 5-10 เปอร์เซนต์ ก่อนในบีกเกอร์แล้วแช่ถุงเก็บน้ำ เชื้อทิ้งไว้ 10 นาที แล้วใส่ ดีเอ็มเอสโอ (DMSO) ความเข้มข้น 5-10 เปอร์เซ็นต์ ในปริมาณที่เ ท่า กับปริมาณสารละลายซูโครส (sucrose solution) ที่ใส่ลงไปเ พื่อให้ได้ความเข้มข้นสุดท้ายของ สารละลายไคโอโพรเทคแทนท์ (cryo protectant) เป็นครึ่งหนึ่งของความเข้มข้นเดิม แล้วแช่ถุง เก็บน้ำเชื้อลงไปในสารละลาย 6.3 เตรียมดีเอ็ทเอสโอ (DMSO) ความเข้มข้น 5-10 เปอร์เซ็นต์ ใน บีกเกอร์แล้วแช่ถุงเก็บน้ำเชื้อลง ไปในสารละลาย กรรมวิธีการเก็บรักษาถุงน้ำเชื้อของกุ้งด้วยการแช่แข็งตามข้อ ถือสิทธิข้อ 1 มีลักษณะเฉพาะคือ เวลาที่ ใช้แช่ถุงเก็บน้ำเชื้อก ุ้งในสารละลายไคโอโพรเทคแทนท์ เพื่อให้เกิดภาวะสมดุล (equilibr ation period) นานไม่เกิน 60 นาที กรรมวิธีการเก็บรักษาถุงเก็บน้ำเชื้อของกุ้งด้วยการแช่แข็งตา มข้อถือสิทธิ 1 มีลักษณะฉพาะ คือ อัตรา การลดอุณหภูมิ คือ 2 องศาเซลเซีย สต่อนาที กรรมวิธีการเก็บรักษาถุงเก็บน้ำเชื้อของกุ้งด้วยการแช่แข็งตา มข้อถือสิทธิข้อ 1 มีลักษณะฉพาะคือ อุณหภูมิ สุดท้าย (final te mperature) ที่ต้องการ มีค่าระหว่าง -80 ถึง -90 องศาเซลเซียส ปล่ อยพักไว้นาน 1-5 นาที 1 กรรมวิธีการเก็บรักษาถุงเก็บน้ำเชื้อของกุ้งด้วยการแช่แข็งต ามข้อถือสิทธิข้อ 1 มีลักษณะฉพาะคือ ระยะ เวลาเก็บรักษาถุงเก็บ น้ำเชื้อในไนโตรเจนเหลวเก็บได้หลายปีโดยที่คุณภาพสเปิร์มภายในถุงเก็บน้ำเชื้อไม่เปลี่ยนแปลง 1 1.กรรมวิธีการประดิษฐ์ตามข้อถือสิทธิข้อที่ 1-10 สามารถนำไปใช ้กับ ไข่ ตัวอ่อนระยะต่างๆ ของกุ้งกุลาดำ (Penaeus monodon) แล ะสัตว์ครัสเตเชี่ยนชนิดอื่นๆ เช่น กั้ง ปู ปลาหมึก ฯลฯ9. The freezing method for preserving shrimp semen sacs according to claim 1, wherein the specific characteristic is that the required final temperature is between -80 and -90 degrees Celsius and the temperature is allowed to stand for 1-5 minutes.1 The freezing method for preserving shrimp semen sacs according to claim 1, wherein the specific characteristic is that the storage period of the semen sacs in liquid nitrogen is longer than 1 month without any change in the quality of the sperm inside the sacs.1 The freezing method for preserving shrimp semen sacs according to any one of claims 1-10, wherein the freezing method can be applied to eggs, larvae of various stages of black tiger shrimp (Penaeus monodon) and crustaceans other than shrimp, namely, crayfish, crabs, squid. ------------ The freezing method for preserving shrimp semen sacs is characterized by the use of an appropriate buffer solution for equilibration. Shrimp semen storage bags and various cryoprotectant solutions are used to protect sperm cells during freezing. The shrimp semen storage bags are immersed in buffer solution and cryoprotectant solution until the shrimp semen storage bags reach equilibrium. The temperature is lowered to freeze the shrimp semen storage bags, let them rest, and then freeze them in liquid nitrogen for an appropriate amount of time. The process of thawing shrimp semen storage bags that have been stored by freezing has a unique characteristic: the frozen semen storage bags are thawed in water with a temperature between 30-35 degrees Celsius for no more than 1 minute, and then the semen storage bags are used. The process of preserving shrimp semen storage bags by freezing Claim 1 is unique in that it is a method used with black tiger shrimp (Penaeus monodon). The freezing preservation process of shrimp semen according to claim 1 is unique in that the appropriate buffer solution is calcium free saline (Ca Free saline, C -F saline), which is prepared by diluting approximately 20-25 g of sodium chloride (NaCl), approximately 1-5 g of potassium chloride (KCl), approximately 0.5-1 g of trihydrogen bromide (H3BO3), and approximately 1-5 g of magnesium sulfate (MgSo4.7H2O) in 1 liter of distilled water and adjusting the pH to between 7-8 using hydrochloric acid (Hcl). The freezing preservation process of shrimp semen Claim 1 is characterized by various cryoprotectants, namely, sucrose at a concentration of 5-10 percent, dimethylsulfoxide (DMS O) at a concentration of 5-10 percent, and cryoprotectants used in the cryopreservation process of shrimp sperm vesicles. According to claim 5, the specific characteristics are: 6.1 5-10% sucrose and 5-10% DMSO are added in equal amounts in a beaker to obtain a final concentration of the bioprotectant solution to be half the initial concentration, and the semen storage bag is immersed in the solution. 6.2 5-10% sucrose is prepared first in a beaker, and the semen storage bag is immersed for 10 minutes, and an equal amount of 5-10% DMSO is added to obtain a final concentration of the sucrose solution. 6.3 Prepare 5-10% DMSO in a beaker and immerse the semen collection bag into the solution. The process of freezing shrimp semen storage bags according to claim 1 is characterized by the time required to immerse the shrimp semen collection bags in the cryoprotectant solution to achieve equilibrium period of no more than 60 minutes. The process of freezing shrimp semen storage bags according to claim 1 is characterized by the temperature reduction rate of 2 degrees Celsius per minute. The process of freezing shrimp semen storage bags according to claim 1 is characterized by the required final temperature being between -80 and -90 degrees Celsius and left to stand for 1-5 minutes. 1. The process of freezing shrimp semen storage bags Claim 1 has the specific characteristics of being able to store the semen in liquid nitrogen for several years without changing the quality of the sperm inside the semen. 1. The inventive process according to claims 1-10 can be applied to eggs, larvae of various stages of black tiger shrimp (Penaeus monodon) and other crustaceans such as mantis shrimp, crab, squid, etc.