Claims (10)
หน้าที่ 1 ของจำนวน 2 หน้า ข้อถือสิทธิPage 1 of 2: Claims
1. กรรมวิธีการผลิตสารประกอบลาโนสเตนไตรเทอร์ปีนอยด์ (I) ที่ออกฤทธิ์ยับยั้งเชื้อก่อโรคมาลาเรีย จาก เชื้อรา Ganoderma ที่ประกอบด้วยขั้นตอนดังนี้ ก. การเพาะเลี้ยงให้ออกดอกเชื้อรา Ganoderma ก.1. การปลูกถ่ายเส้นใยเชื้อราหรือสปอร์ของเชื้อรา Ganoderma มายังอาหารเลี้ยงหัวเชื้อ ก.2. การเตรียมหัวเชื้อราดังกล่าวโดยทำการบ่มในขวดบรรจุข้าวฟ่าง, ก.3. การหมักบ่มเชื้อราดังกล่าว, และ ข. การแยกสารประกอบลาโนสเตนไตรเทอร์ปีนอยด์สูตร (I) จากเชื้อราดังกล่าว ข.1. การสกัดสารประกอบลาโนสเตนไตรเทอร์ปีนอยด์สูตร (I) ออกจากส่วนดอกเห็ดของเชื้อ ราโดยการตัดดอกเห็ดให้เป็นชิ้นเล็กๆ จากนั้นจึงนำมาสกัดด้วยตัวทำละลายอินทรีย์ ที่ เลือกได้จากกลุ่มที่ประกอบด้วย เอทธิล อะซิเตท (ethyl acetate), เมธานอล (methanol), เอธานอล (ethanol), ไดคลอโรมีเธน (dichloromethane), อะซิโทน (acetone), หรือส่วนผสมของสารดังกล่าว โดยตัวทำละลายอินทรีย์ ที่เหมาะสม คือ ได คลอโรมีเธน (dichloromethane) จะได้สารสกัดหยาบที่มีสารประกอบลาโนสเตนไตร เทอร์ปีนอยด์สูตร (I) ข.2. การแยกสารประกอบลาโนสเตนไตรเทอร์ปีนอยด์สูตร (I) ออกจากสารสกัดหยาบ ดังกล่าว โดยทำให้บริสุทธิ์ด้วยวิธีโครมาโตรกราฟี โดยใช้ตัวดูดซับ (adsorbant); โดย หากใช้ซิลิกาเจลชนิดนอร์มาลเฟส (normal phase) เป็นตัวดูดซับ ตัวซะล้างที่เหมาะสม คือ ส่วนผสมของเฮกเซนและอะซีโตน; และหากใช้ตัวดูดซับชนิดรีเวอร์สเฟส (reverse phase (Cl8)) เป็นตัวดูดซับ ตัวชะล้างที่เหมาะสมคือ ส่วนผสมของอะซีโตไนไตรล์และ น้ำ; จะได้สารประกอบลาโนสเตนไตรเทอร์ปีนอยด์สูตร (I) (สูตรเคมี)1. The process for producing lanostenoid triterpenoid (I) compounds with antimalarial activity from the fungus Ganoderma consists of the following steps: a. Cultivating Ganoderma fruiting bodies: a.1. Transplanting Ganoderma fungal hyphae or spores onto a culture medium; a.2. Preparing the inoculum by incubating it in millet-filled bottles; a.3. Fermenting the fruiting bodies; and b. Isolating lanostenoid triterpenoid (I) compounds from the fungus: b.1. Extracting lanostenoid triterpenoid (I) compounds from the fruiting body of the fungus by cutting the fruiting body into small pieces and then extracting them with an organic solvent of choice from the group containing ethyl acetate, methanol, ethanol, dichloromethane, acetone, or a mixture of these solvents. The suitable organic solvent is dichloromethane, which yields a crude extract containing the lanostenite triterpenoid compound (I). B.2. Separation of the lanostenite triterpenoid compound (I) from the aforementioned crude extract by purification using chromatography with an adsorbent; if normal phase silica gel is used as the adsorbent, the suitable leachate is a mixture of hexane and acetone; and if reverse phase (Cl8) adsorbent is used as the adsorbent, the suitable leachate is a mixture of acetonitrile and water; the lanostenite triterpenoid compound (I) (chemical formula) will be obtained.
2. กรรมวิธีการผลิตสารประกอบลาโนสเตนไตรเทอร์ปีนอยด์ (I) ที่ออกฤทธิ์ยับยั้งเชื้อก่อโรคมาลาเรีย จาก เชื้อรา Ganoderma ตามข้อถือสิทธิ 1 ที่ซึ่ง เชื้อรา Ganoderma ดังกล่าว ที่เหมาะสมคือ Ganoderma colossus สายพันธุ์ BCC 813982. A method for the production of lanosten triterpenoid (I) compounds that exhibit inhibitory activity against malaria pathogens from the fungus Ganoderma, as per claim 1, where the suitable Ganoderma strain is Ganoderma colossus BCC 81398.
3. กรรมวิธีการผลิตสารประกอบลาโบสเตนไตรเทอร์ปีนอยด์ (I) ที่ออกฤทธิ์ยับยั้งเชื้อก่อโรคมาลาเรีย จาก เชื้อรา Ganoderma ตามข้อถือสิทธิ 1 ที่ซึ่ง อาหารเลี้ยงหัวเชื้อดังกล่าว ที่เหมาะสม คือ อาหารแข็งพี ดีเอ หน้า 2 ของจำนวน 2 หน้า3. A method for producing labosten triterpenoid (I) compounds that inhibit malaria pathogens from the fungus Ganoderma, as per claim 1, where the appropriate culture medium is solid PDA. (Page 2 of 2)
4. กรรมวิธีการผลิตสารประกอบลาโนสเตนไตรเทอร์ปีนอยด์ (I) ที่ออกฤทธิ์ยับยั้งเชื้อก่อโรคมาลาเรีย จาก เชื้อรา Gonoderma ตามข้อถือสิทธิ 1 ที่ซึ่ง ารเตรียมหัวเชื้อโดยทำการบ่มในขวดบรรจุข้าวฟ่าง ดังกล่าว ทำโดยการดัดก้อนเชื้อและถ่ายลงขวดบรรจุข้าวฟ่างที่ผ่านการฆ่าเชื้อ ทำการบ่มที่อุณหภูมิ 25 องศา ซ ถึง 35 องศา ซ เป็นเวลา 7 ถึง 14 วัน4. A method for producing antimalarial lanostenoid (I) compounds from the fungus Gonoderma, as per claim 1, in which the inoculum is prepared by incubating in millet-filled bottles as described above, by breaking up the inoculum and transferring it into sterilized millet-filled bottles, and incubating at 25°C to 35°C for 7 to 14 days.
5. กรรมวิธีการผลิตสารประกอบลาโนสเตนไตรเทอร์ปีนอยด์ (I) ที่ออกฤทธิ์ยับยั้งเชื้อก่อโรคมาลาเรีย จาก เชื้อรา Gonoderma ตามข้อถือสิทธิ 1 ที่ซึ่ง การหมักบ่มเชื้อราดังกล่าว ทำโดยการเพาะเลี้ยงเชื้อรา เพื่อให้เจริญเป็นดอกเห็ด และทำการถ่ายหัวเชื้อจากขวดข้าวฟาง ไปยังถุงพลาสติกที่บรรจุอาหารเลี้ยง เชื้อที่เหมาะสมในการผลิตดอกเห็ด และทำการหมักบ่มเชื้อเพื่อให้เส้นใยเดินเต็มก้อนเป็นเวลา 10 ถึง 20 วันที่อุณหภูมิ 25 ถึง 35 องศา ซ จากนั้นทำการเปิดถุง เพื่อให้ดอกเห็ดเจริญเป็นเวลา 60 ถึง 120 วัน5. A method for producing lanostenoid triterpenoid (I) compounds with antimalarial activity from the fungus Gonoderma, as per claim 1, in which the fungus is cultured to produce fruiting bodies, and the inoculum is transferred from straw bottles to plastic bags containing suitable culture media for fruiting body production. The inoculum is then fermented to allow the mycelium to fully colonize the substrate for 10 to 20 days at a temperature of 25 to 35 degrees Celsius. The bags are then opened to allow the fruiting bodies to develop for 60 to 120 days.
6. กรรมวิธีการผลิตสารประกอบลาโนสเตนไตรเทอร์ปีนอยด์ (I) ที่ออกฤทธิ์ยับยั้งเชื้อก่อโรคมาลาเรีย จาก เชื้อรา Gonoderma ตามข้อถือสิทธิ 5 ที่ซึ่ง การหมักบ่มเชื้อเพื่อให้เส้นใยเดินเต็มก้อนดังกล่าว มี อุณหภูมิที่เหมาะสม อยู่ระหว่าง 27 ถึง 30 องศา ซ6. A method for the production of lanosten triterpenoid (I) compounds that inhibit malaria pathogens from the fungus Gonoderma, as per claim 5, in which the fermentation for mycelial growth to complete the substrate is carried out at an optimal temperature between 27 and 30 degrees Celsius.
7. กรรมวิธีการผลิตสารประกอบลาโนสเตนไตรเทอร์ปีนอยด์ (I) ที่ออกฤทธิ์ยับยั้งเชื้อก่อโรคมาลาเรีย จาก เชื้อรา Gonoderma ตามข้อถือสิทธิ 1 การทำให้บริสุทธิ์โดยวิธีโครมาโตรกราฟีดังกล่าว ยังประกอบ เพิ่มเติมด้วย - ขั้นตอนการแยกด้วยเพรพาเรทีฟ เอชพีแอลซี (preparative HPLC) โดยคอลัมน์ชนิดที่เหมาะสม คือ ซันไฟร์ เพรพ ซี18 โอบีดี (SunFire Prep Ci8 OBD) ขนาด 19 X 250 มิลลิเมตร ขนาดซิลิ กาเจล 10 ไมโครเมตร โดยตัวชะล้างที่ใช้ เลือกได้จากกลุ่มที่ประกอบด้วย อะซีโตไนไตรล์ (acetonitrile), เมธานอล (methanol), น้ำ, หรือส่วนผสมของสารดังกล่าว โดยตัวชะล้างที่ เหมาะสม คือ ส่วนผสมของอะซีโตรไนไตรล์และน้ำ - ขั้นตอนการแยกสารทำให้บริสุทธิ์มากขึ้นด้วยวิธีเจลฟิลเตรชันโครมาโตกราฟี (gel filtration chromatography) โดยใช้ตัวดูดซับเซฟาเด็กซ์7. The process for producing lanosten triterpenoid (I) compounds with antimalarial activity from the fungus Gonoderma, as per claim 1, includes further purification by chromatography, comprising: - A preparative HPLC separation step using a suitable column, the SunFire Prep Ci8 OBD, 19 x 250 mm, 10 µm silicate gel, with a wash medium of acetonitrile, methanol, water, or a mixture of these, with the most suitable being a mixture of acetonitrile and water. - A further purification step using gel filtration chromatography with Cephadex adsorbent.
8. กรรมวิธีการผลิตสารประกอบลาโนสเตนไตรเทอร์ปีนอยด์ (I) ที่ออกฤทธิ์ยับยั้งเชื้อก่อโรคมาลาเรีย จาก เชื้อรา Gonoderma ตามข้อถือสิทธิ 7 ที่ซึ่ง ขั้นตอนการแยกสารทำให้บริสุทธิ์มากขึ้นด้วยวิธีเจล ฟิลเตรชันโครมาโตกราฟี โดยใช้ตัวดูดซับเซฟาเด็กซ์ดังกล่าว ใช้ตัวดูดซับเซฟาเด็กซ์ คือ เซฟาเด็กซ์ TM แอลเอช-20 (Sephadex?LH-20) และใช้ตัวชะล้าง ที่เลือกได้จากกลุ่มที่ประกอบด้วย สารเมธานอล (methanol), ไดคลอโรมีเธน (dichloromethane), หรือส่วนผสมของสารดังกล่าว8. A method for the production of an antimalarial lanostenite triterpenoid (I) compound from the fungus Gonoderma, as per claim 7, whereby a further purification step is performed by gel filtration chromatography using the aforementioned Sephadex adsorbent, namely Sephadex™ LH-20, and a wash medium of selectable composition from the group containing methanol, dichloromethane, or a mixture thereof.
9. องค์ประกอบทางเภสัชกรรม ที่ประกอบด้วย สารประกอบลาโนสเตนไตรเทอร์ปีนอยด์สูตร (I), เกลือ ของสารประกอบลาโนสเตนไตรเทอร์ปีนอยด์สูตร (I), หรือส่วนผสมของสารดังกล่าว ร่วมกับ สารประกอบที่ยอมรับได้ทางเภสัชกรรม อย่างน้อยหนึ่งชนิด9. Pharmaceutical compositions containing a lanostenoid triterpenoid compound (I), a salt of a lanostenoid triterpenoid compound (I), or a mixture of such compounds together with at least one other pharmaceutically acceptable compound.
10. กรรมวิธีการยับยั้งเชื้อก่อโรคจากมาลาเรียในสิ่งมีชีวิต ที่ซึ่ง กรรมวิธีดังกล่าว ประกอบด้วย ขั้นตอนการ จัดการให้องค์ประกอบทางเภสัชกรรม ตามข้อถือสิทธิ 9 เข้าสู่ร่างกายสิ่งมีชีวิตนั้นๆ10. A method for inhibiting malaria pathogens in living organisms, in which the method comprises steps for delivering the pharmaceutical components as described in claim 9 into the body of the organism.