Claims (10)
------16/12/2563------(OCR) 1. กรรมวิธีการผลิตสารประกอบบิสอินโดลอัลคาลอยด์ที่ออกฤทธิ์ยับยั้งเชื้อก่อโรคจากแบคทีเรีย จากเชื้อ รา Conoideocrella ที่ประกอบด้วยขั้นตอนดังนี้ ก. การเลี้ยงเชื้อรา Conoideocrella ก.1. การปลูกถ่ายเส้นใยเชื้อราหรือสปอร์ของเชื้อรา Conoideocrella มายังอาหารเลี้ยง หัวเชื้อที่มีสารอาหารโดยที่เหมาะสม, ก.2. การบ่มเชื้อราดังกล่าวในสภาวะที่มีอากาศ ทำโดยการเขย่าเชื้อราที่ได้ปลูกถ่ายแล้ว ด้วยความเร็ว 200 ถึง 220 รอบต่อนาที (rpm) ที่อุณหภูมิ 20 ถึง 30องศาซ เป็นเวลา 2 ถึง 15 วัน, ก.3. การหมักบ่มเชื้อราดังกล่าว ทำโดยถ่ายหัวเชื้อไปยังอาหารเลี้ยงเชื้อที่เหมาะสมในการ สร้างสารทุติยภูมิ การหมักบ่มเชื้อทำได้ทั้งสภาวะที่ตั้งทิ้งไว้นิ่งๆ หรือเขย่า 10 ถึง 80 วันที่อุณหภูมิ 20 ถึง 30องศาซ; และ ข. การแยกสารประกอบบิสอินโดลอัลคาลอยด์สูตร (I) จากเชื้อราดังกล่าว ประกอบด้วยขั้นตอน ดังต่อไปนี้ ข.1. การสกัดสารประกอบบิสอินโดลอัลคาลอยด์สูตร (I) ออกจากส่วนเส้นใย (ของแข็ง) โดยการกรองอาหารเลี้ยงเชื้อ จากนั้นนำส่วนเส้นใย (ของแข็ง) มาสกัดด้วยตัวทำ ละลายอินทรีย์ จะได้สารสกัดหยาบที่มีสารประกอบบิสอินโดยอัลคาลอยด์สูตร (I) ข.2. การแยกสารประกอบบิสอินโดลอัลคาลอยด์สูตร (I) ออกจากสารสกัดหยาบดังกล่าว โดยทำให้บริสุทธิ์โดยวิธีโครมาโตรกราฟีมาตรฐานโดยใช้ตัวดูดซับ (adsorbant) ที่ เลือกได้จากกลุ่มที่ประกอบด้วย เซฟาเด็กซ์, ซิลิกาเจล หรือเพรพาเรทีฟ เอชพีแอลซี ที่ซึ่ง สารประกอบบิสอินโดลอัลคาลอยด์สูตร (I) ดังกล่าว มีสูตรโครงสร้างดังนี้ (สูตรเคมี)(I) 2. กรรมวิธีการผลิตสารประกอบบิสอินโดลอัลคาลอยด์ที่ออกฤทธิ์ยับยั้งเชื้อก่อโรคจากแบคทีเรีย จากเชื้อ รา Conoideocrella ตามข้อถือสิทธิ 1 ที่ซึ่ง เชื้อรา Conoideocrella คือ เชื้อราสายพันธุ์ Conoideocrella luteorostrata BCC76664 3. กรรมวิธีการผลิตสารประกอบบิสอินโดลอัลคาลอยด์ที่ออกฤทธิ์ยับยั้งเชื้อก่อโรคจากแบคทีเรีย จากเชื้อ รา Conoideocrella ตามข้อถือสิทธิ 1 ที่ซึ่ง อาหารเลี้ยงเชื้อ คือ อาหารเหลวมินิมัมซอลท์มีเดีย (minimum salt media) 4. กรรมวิธีการผลิตสารประกอบนิสอินโดลอัลคาลอยด์ที่ออกฤทธิ์ยับยั้งเชื้อก่อโรคจากแบคทีเรีย จากเชื้อ รา Conoideocrella ตามข้อถือสิทธิ 1 ที่ซึ่ง การแยกด้วยโครมาโตรกราฟโดยใช้ตัวดูดซับเซฟาเด็กซ์ คือ เซฟาเด็กซ์ Trade Mark แอลเอช-20 (Sephadex(Trade Mark)LH-20) 5. องค์ประกอบทางเภสัชกรรม ที่ประกอบด้วย สารประกอบบิสอินโดลอัลคาลอยด์ (I) ที่ได้จากกรรมวิธี ตามข้อถือสิทธิ 1 หรือเกลือของสารประกอบนี้ และสารประกอบที่ยอมรับได้ทางเภสัชกรรม อย่างน้อย หนึ่งชนิด ------------ แก้ไข 07/12/2561 ข้อถือสิทธิไม่มี ---------------------------------------------------------------------------------------------------- หน้าที่ 1 ของจำนวน 2 หน้า ข้อถือสิทธิ------16/12/2563------(OCR) 1. A method for producing bisindole alkaloid compounds with antibacterial activity from the fungus Conoideocrella, consisting of the following steps: a. Cultivation of Conoideocrella fungus: a.1. Transplanting of fungal mycelium or spores of Conoideocrella fungus onto a suitable nutrient medium; a.2. Incubating the fungus under aerobic conditions by shaking the transplanted fungus at a speed of 200 to 220 rpm at a temperature of 20 to 30 degrees Celsius for 2 to 15 days; a.3. Fermentation of the fungus by transferring the inoculum to a suitable culture medium for secondary metabolite production. Fermentation can be done either in a static state or by shaking for 10 to 80 days at a temperature of 20 to 30 degrees Celsius; and b. Isolation of bisindole alkaloid compound (I) from the fungus. It consists of the following steps: B.1. Extraction of bisindole alkaloid compound formula (I) from the fibrous (solid) portion by filtering the culture medium. The fibrous (solid) portion is then extracted with an organic solvent to obtain a crude extract containing bisindole alkaloid compound formula (I). B.2. Separation of bisindole alkaloid compound formula (I) from the aforementioned crude extract by purification using standard chromatography with an adsorbant of choice from the group consisting of Sephadex, silica gel or preparatory HPLC, where the bisindole alkaloid compound formula (I) has the following structural formula: (chemical formula)(I). 2. The process for producing bisindole alkaloid compounds that inhibit bacterial pathogens from the fungus Conoideocrella according to claim 1, where the fungus Conoideocrella is a fungal strain. 3. A process for the production of a bisindole alkaloid compound with inhibitory activity against bacterial pathogens from the fungus Conoideocrella pursuant to Patent 1, where the culture medium is minimum salt media. 4. A process for the production of a bisindole alkaloid compound with inhibitory activity against bacterial pathogens from the fungus Conoideocrella pursuant to Patent 1, where separation is by chromatography using Sephadex adsorbent, Sephadex (Trade Mark) LH-20. 5. A pharmaceutical composition containing a bisindole alkaloid compound (I) obtained by the process pursuant to Patent 1, or a salt of this compound, and at least one pharmaceutically acceptable compound. ------------ Edited 07/12/2018 No claims. ---------------------------------------------------------------------------------------------------- Page 1 of 2: Claims
1. กรรมวิธีการผลิตสารประกอบบิสอินโดลอัลคาลอยด์ที่ออกฤทธิ์ยับยั้งเชื้อก่อโรคจากแบคทีเรีย จากเชื้อ รา ConoideocreUo ที่ประกอบด้วยขั้นตอนดังนี้ ก. การเลี้ยงเชื้อรา Conoideocrella ก.1. การปลูกถ่ายเส้นใยเชื้อราหรือสปอร์ของเชื้อรา ConoideocreUo มายังอาหารเลี้ยง หัวเชื้อที่มีสารอาหารโดยที่เหมาะสม, ก.2. การบ่มเชื้อราดังกล่าวในสภาวะที่มีอากาศ, ก.3. การหมักบ่มเชื้อราดังกล่าว; และ ข. การแยกสารประกอบบิสอินโดลอัลคาลอยด์สูตร (I) จากเชื้อราดังกล่าว ที่ซึ่ง สารประกอบบิสอินโดลอัลคาลอยด์สูตร (I) ดังกล่าว มีสูตรโครงสร้างดังนี้ (โครงสร้างทางเคมี)1. The process for producing an inhibitory bisindole alkaloid compound from the fungus Conoideocre Uo involves the following steps: a. Cultivation of the fungus Conoideocrella: a.1. Transplanting the fungal hyphae or spores of Conoideocre Uo onto a suitable nutrient medium; a.2. Incubating the fungus under aerobic conditions; a.3. Fermenting the fungus; and b. Isolation of the bisindole alkaloid compound (I) from the fungus. The bisindole alkaloid compound (I) has the following structural formula (chemical structure):
2. กรรมวิธีการผลิตสารประกอบบิสอินโดลอัลคาลอยด์ที่ออกฤทธิ์ยับยั้งเชื้อก่อโรคจากแบคทีเรีย จากเชื้อ รา ConoideocreUo ตามข้อถือสิทธิ 1 ที่ซึ่ง เชื้อรา ConoideocreUo ดังกล่าว ที่เหมาะสมคือ เชื้อรา สายพันธุ์ Conoideocrella luteorostrata BCC766642. A method for producing an inhibitory bisindole alkaloid compound from the fungus ConoideocreUo as per claim 1, where the suitable fungal strain Conoideocrella luteorostrata BCC76664 is...
3. กรรมวิธีการผลิตสารประกอบบิสอินโดลอัลคาลอยด์ที่ออกฤทธิ์ยับยั้งเชื้อก่อโรคจากแบคทีเรีย จากเชื้อ รา Conoideocrella ตามข้อถือสิทธิ 1 ที่ซึ่ง อาหารเลี้ยงเชื้อดังกล่าว ที่เหมาะสม คือ อาหารเหลว มินิมัมซอลท์มีเดีย (minimum salt media)3. A method for producing bisindole alkaloid compounds with antimicrobial activity against bacterial and fungal pathogens, as per claim 1, where the suitable culture medium is liquid minimum salt media.
4. กรรมวิธีการผลิตสารประกอบบิสอินโดลอัลคาลอยด์ที่ออกฤทธิ์ยับยั้งเชื้อก่อโรคจากแบคทีเรีย จากเชื้อ รา Conoideocrella ตามข้อถือสิทธิ 1 ที่ซึ่ง ชื้นตอบการบ่มเชื้อราดังกล่าวในสภาวะที่มีอากาศดังกล่าว ทำโดยการเขย่าเชื้อราที่ได้ปลูกถ่ายแล้ว ด้วยความเร็ว 200 ถึง 220 รอบต่อนาที (rpm) ที่อุณหภูมิ 20 ถึง 30(สัญลักษณ์)ซ เป็นเวลา 2 ถึง 15 วัน4. A method for producing an inhibitory bisindole alkaloid compound against bacterial pathogens from the fungus Conoideocrella as per claim 1, which responds to the incubation of the fungus under the specified atmospheric conditions, by shaking the inoculated fungus at a speed of 200 to 220 rpm at a temperature of 20 to 30°C for 2 to 15 days.
5. กรรมวิธีการผลิตสารประกอบบิสอินโดลอัลคาลอยด์ที่ออกฤทธิ์ยับยั้งเชื้อก่อโรคจากแบคทีเรีย จากเชื้อ รา Conoideocrella ตามข้อถือสิทธิ 1 ที่ซึ่ง ขั้นตอนการหมักบ่มเชื้อราดังกล่าว ทำโดยถ่ายหัวเชื้อไป ยังอาหารเลี้ยงเชื้อที่เหมาะสมในการสร้างสารทุติยภูมิ การหมักบ่มเชื้อทำได้ทั้งสภาวะที่ตั้งทิ้งไว้นิ่งๆ หรือเขย่า5. A method for producing antimicrobial bisindole alkaloid compounds from the fungus Conoideocrella, as per claim 1, where the fungal fermentation process is carried out by transferring the inoculum to a suitable culture medium for secondary metabolite production. Fermentation can be performed either statically or with shaking.
6. กรรมวิธีการผลิตสารประกอบบิสอินโดลอัลคาลอยด์ที่ออกฤทธิ์ยับยั้งเชื้อก่อโรคจากแบคทีเรีย จากเชื้อ รา Conoideocrella ตามข้อถือสิทธิ 6 ที่ซึ่ง การหมักบ่มเชื้อราในสภาวะเขย่า ทำเป็นเวลา 10 ถึง 80 หน้าที่ 2 ของจำนวน 2 หน้า วัน ที่อุณหภูมิ 20 ถึง 30(สัญลักษณ์)ซ6. A method for the production of an antimicrobial bisindole alkaloid compound against bacterial pathogens from the fungus Conoideocrella, as per claim 6, in which the fungal fermentation is carried out under shaking conditions for 10 to 80 days at a temperature of 20 to 30°C. (Page 2 of 2)
7. กรรมวิธีการผลิตสารประกอบบิสอินโดลอัลคาลอยด์ที่ออกฤทธิ์ยับยั้งเชื้อก่อโรคจากแบคทีเรียจากเชื้อ รา Conoideocrella ตามข้อถือสิทธิ 1 ที่ซึ่ง การแยกสารประกอบบิสอินโดลอัลคาลอยด์สูตร (I) จาก เชื้อราดังกล่าว (ขั้นตอน ข.) ประกอบด้วยขั้นตอน ข.1. การสกัดสารประกอบบิสอินโดลอัลคาลอยด์สูตร (I) ออกจากส่วนเส้นใย (ของแข็ง)โดยการ กรองอาหารเลี้ยงเชื้อ จากนั้นนำส่วนเส้นใย (ของแข็ง) มาสกัดด้วยตัวทำละลายอินทรีย์ จะได้ สารสกัดหยาบที่มีสารประกอบบิสอินโดยอัลคาลอยด์สูตร (I) ข.2. การแยกสารประกอบบิสอินโดลอัลคาลอยด์สูตร (I) ออกจากสารสกัดหยาบดังกล่าว โดยทำให้ บริสุทธิ์โดยวิธีโครมาโตรกราฟีมาตรฐานโดยใช้ตัวดูดซับ (adsorbant) ที่เลือกได้จากกลุ่มที่ ประกอบด้วย เซฟาเด็กซ์, ซิลิกาเจล หรือเพรพาเรทีฟ เอชพีแอลซี7. A procedure for the production of an inhibitory bisindole alkaloid compound from the fungus Conoideocrella, as per claim 1, in which the isolation of bisindole alkaloid compound (I) from the said fungus (Step B) consists of the following steps: B.1. Extraction of bisindole alkaloid compound (I) from the mycelial (solid) portion by filtration of the culture medium. The mycelial (solid) portion is then extracted with an organic solvent to obtain a crude extract containing bisindole alkaloid compound (I). B.2. Separation of the bisindole alkaloid compound (I) from the crude extract by purification using standard chromatography with an adsorbant of choice from the group consisting of Cephadex, silica gel, or preparatory HPLC.
8. กรรมวิธีการผลิตสารประกอบบิสอินโดลอัลคาลอยด์ที่ออกฤทธิ์ยับยั้งเชื้อก่อโรคจากแบคทีเรีย จากเชื้อ รา Conoideocrella ตามข้อถือสิทธิ 8 ที่ซึ่ง การแยกด้วยโครมาโตรกราฟีโดยใช้ตัวดูดซับเซฟาเด็กซ์ ดังกล่าว ที่เหมาะสมคือ เซฟาเด็กซ์TMแอลเอซ-20 (SephadexTMLH-20)8. A method for the production of bisindole alkaloid compounds with antimicrobial activity against bacterial and fungal pathogens, as per claim 8, where chromatographic isolation using the appropriate Sephadex adsorbent is Sephadex™ LH-20.
9. องค์ประกอบทางเภสัชกรรม ที่ประกอบด้วย สารประกอบบิสอินโดลอัลคาลอยด์ (I) ตามข้อถือสิทธิ 1 หรือเกลือของสารประกอบนี้ และสารประกอบที่ยอมรับได้ทางเภสัชกรรม อย่างน้อยหนึ่งชนิด9. Pharmaceutical compositions containing a bisindole alkaloid compound (I) as per claim 1 or a salt of this compound and at least one pharmaceutically acceptable compound.
10. กรรมวิธีการยับยั้งเชื้อก่อโรคจากแบคทีเรียในสิ่งมีชีวิต ที่ซึ่ง กรรมวิธีดังกล่าว ประกอบด้วย ขั้นตอนการ จัดการให้องค์ประกอบทางเภสัชกรรม ตามข้อถือสิทธิ 9 เข้าสู่ร่างกายสิ่งมีชีวิตนั้นๆ10. A process for inhibiting bacterial pathogens in living organisms, in which such process involves the steps of delivering the pharmaceutical components as described in claim 9 into the body of that organism.