SU986411A1

SU986411A1 - Способ консервировани спермы животных

Info

Publication number: SU986411A1
Application number: SU792846902A
Authority: SU
Inventors: Василий Архипович Наук; Василий Георгиевич Делеу
Original assignee: Институт Зоологии И Физиологии Ан Мсср
Priority date: 1979-12-04
Filing date: 1979-12-04
Publication date: 1983-01-07

Description

Изобретение относитс к области искусственного осеменени сельскохоз йственных животных, в частности к способам консервировани спермы путем замораживани .

Известен способ консервировани спермы животных в пайетах, включающий разбавление спермы до половины конечной стадии разбавлени защитной средой, содержащей 3% глицерина, охлаждение разбавленного семени до +4°С за 45-60 мин, вторичное разбавление семени защитной средой, содержащей 11% глицерина, расфасовку, в соломинки, эквилибрацию и, наконец , Зс1мораживание jero с последую-щим оттаиванием iF.

Недостатком этого способа вл етс быстрое охлаждение семени до +4°С, отрицательное- вли ние высокой концентрации глицерина и длительного времени контакта с ним живчиков, которое про вл етс в нарушении апиксшьного кра акросомы, разрушении устойчивости белково-липоидных комплексов, а после замораживани и оттаивани семени быков-производителей снижаетс подвижность живчиков и абсолютный показатель их живучести.

Кроме того, при длительном контакте живчиков с глицерином имеет место утечка р да ферментов, амино5 кислот, жирных кислот и функциональных групп из клеток сперматозоидов в плазму что ведет к снижению биологической полноценности спермы.

Известен также способ консерви 0 ровани спермл животных, включающий ее разбавление на первом этапе безглицериновой защитной средой, а на втором этапе - защитной средой с глицерином . При этом охлаждение провод т в течение 2 ч от 30 до а

замораживание провод т при -80°С .

Однако длительный контакт (более 30 мин) живчиков с глицерином приводит к нарушению устойчивости белко20 во-липидных комплексов, морфологическим изменением акросомы, выходу в плазму из живчиков ферментов.

В результате этого значительно снижаетс активность живчиков пгосле

25 оттаивани и составл ет примерно 22 ,5 балла.

Целью изобретени вл етс повышение жизнеспособности и биологической полноценности сперматозоидов

30 после замораживани и оттаивани . Цель достигаетс тем, охлаждение спермы провод т от +30 со скоростью 0,4-0,5°C/MHHf от +15 до +10С со скоростью 0,30 ,4°С/мин и от +10°до +4°С со скорос .тью о, 2-0,3° С/мин, эквилибрацию и глицерином провод т при +4-+5°С течение 25-30 мин, а замораживание спермы провод т в парах жидкого азо та при температуре -120-140°С в течение 8-3,5 мин. П р и м е р. Технологи приготов лени и консервировани семени сель СКОКОВ йственных животных заключает с в следукмцем. Вначале готов т защитную среду дл разбавлени семени Дл приготовлени используют лактозу , фруктозу, рафинозу, сульфат маг ни , куриный желток и спермосан-3. Разбавление семени вышеуказанной средой провод т на половину конечной степени разбавлени : температур среды в момент разбавлени +30°С. Баночки с разбавленной спермой помещают в ванночки с водой температура KOTopoJ +30°С, и перенос т в холодильную витрину с посто нной те пературой +4°С. Охлаждение семени провод т трехступенчато: от +30 до +15С, от +15 до +10°С и от +10 до +4°С. Охлаждение провод т путем добавлени кусоч ков тающего льда или воды комнатной температукжа. При проведении опыта вз то неско ко режимов охлаждени и изучено их вли ние на биохимические и физиологические показатели живчиков после замораживани и оттаивани семени (см табл.1): Установлено, что оптимальным режимом охлаждени вл етс режим 3. После охлаждени и выдержки семени при +4°С в течение 3,0-3,5 ч сперму разбавл ют вторично той же защитной средой, но содержащей двполнительно 10 мл глицерина на 100 дистиллированной воды. Температура среды в момент допол нительного разбавлени равна .

Режимы охлаждени семени

Таблица После второго разбавлени семени лактозо-фруктозо-магниево-желточной средой, содержащей дополнительно глицерин, провод т расфасовку семени вручную или автоматически в полимерные соломинки объемом 0,5 мл, выдерживают их в витрине холодильника в течение 30 мин, после чего сем сразу замораживают. Замораживание провод т в широкогорлом сосуде Дьюара, дл чего соломинки раскладывают горизонтально на специальной рампе и помещают ее над парами жидкого азота на уровне 3-4 см от уровн азота при следующих температурах (см. табл. 2) . Врем замораживани составл ет . 8 мин. Температуру замораживани семени контролируют термопарой и регулируют рассто нием от уровн жидкого азота до рампы, где горизонтешьно были расположены соломинки с семенем. Врем выдержки семени в парах жидкого азота составл ет 8 мин, после чего соломинки опускают в жидкий азот, где их карантируют в течение 30 дней, а затем перевод т в спермобанк дл дальнейшей отправки в хоз йства . В результате контакта семени с глицерином в течение 30 мин улучшаютс биохимические и физиологические показатели живчиков,в частности такие , как подвижность живчиков и продолжительность их жизни после оттаивани (см. табл. 3). При предложенном режиме охлгждени достигаетс стабилизаци морфологических , биохимических и физиологических показателей семени (см. табл. 4).. Данные показатели характеризуютсем до его замораживани . В табл. 5 приведены качественные показатели семени быков-производителей после оттаивани . Предложенный способ позвол ет улучшить качество отта нной спермы, повысить оплодотвор емость животных при снижении количества доз семени.

Вли ние различных режимов замораживани семени быков-производителей на подвижность и продолжительность жизни живчиков после оттаивани

Таблица2

различи статистически достоверны по отношению к прототипу

го

(в а

S С5 О

m EH

S Ш

ж S а м so ш ш о is

S

к ю

S

Е е ш

R S m

(и 0)

о со к гв О

0 Ш

og

о I в X д о t; S

Ш Ю ffl

н о S (d к к к S

о - т к S

OS

и

ег. а

Ш S

Ш d с; ц. S Ш и R н

о h П5 с со

« m

к 0) «

а о Ф е S и

Ш о,

и 0).

sg

i; о К а Ш S

3

Ш ш а. ts; о

0) S

Sо

шS

о.и

ш

V

и S

S ti

ж ш в; ЕН к ш

R S 03 ,и

.

с

S

н о в о ft

G

9 S

X

ш 3 о н о

о и

S

ш п о н и о «

S

к

о ш

g

и и S

н

ПЗ

н о

к

g

ti

(О

(d

at

9 864ll10

Морфологические, бийхимические и физиологические показатели семени до замораживаии

„-„.„.. Предложенный способ Патент Великобритании

показательохлаждени семени 1479648 Устойчивость белково-хслестериновых комплексов. мкг холестерина на . живчиков22116, Устойчивость белково-фосфолипидных комплексов, мкг%фосфолипидов2195fl7 ,2 % живчиков с нормальной акросомой75±1, Активность глутаминоаспаргиновой трансаминазы в плазме семени16112,5 Подвижность живчиков8,, 0,01; ,05. Результаты испытани предложенного замораживани с применением ЛФРИ : . ::.1.1 Опыт, №Показатель

7Устойчивость белково-холестериновых комплексов, мкг холестерина

на 10 живчиков .185

8Оплодотвор емость коров от первого осеменени 67,5

Claims

Формула изобретени ,60 ьм защитной средой,содержащий глицеСпособ консервировани сперкы жи- раживание,о тличающийс тем, вотных, включающий ее разбавление что, с целью повышени жиэнеспособбезглицериновой защитной средой, ох- ности и биологической полноценности лаждение, повторное разбавление спер-65: спермотозоидов замораживани

Таблица4

{М1Н,эквилибрацию с глицерином и. Зсшо203±5 ,8 . . ,2 69,0±1,3 184t2,8 7,5±0,06 аблица5 емпературного аемый .способ 11 9864И t и оттаинани , охлаждение спермы провод т от +30 до со скоростью 0,4-0 jS C/MHH, от +15 до со скоростью 0,3-0,4 С/мин и от +10 до со скоростью 0,2-0,3 С/мин, эквилибрацию с глицерином провод т при +4-:+5 С в течение 25-30 мин, а замораживание спермы провод т в па12 pax жидк.ого аЗота при температуре --120-140 С в течение 8-8,5 мин. Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе 1. Ihe French straw techniqui, 1976,
2. Патент Великобритании №1479648, кл. А 01 N 1/202, 1977 (прототип).