SU960190A1

SU960190A1 - Способ получени поливалентного панкреатического ингибитора,обладающего антикининогеназным действием

Info

Publication number: SU960190A1
Application number: SU813264578A
Authority: SU
Inventors: Илья Васильевич Березин; Вадим Владимирович Меньшиков; Новелла Федоровна Казанская; Петр Иванович Толстых; Наталья Ивановна Ларионова; Николай Валентинович Беляков; Иван Юрьевич Сахаров; Арамаис Вагаршакович Григорян; Владимир Гаврилович Владимиров; Валерий Иванович Сергиенко; Виктор Кузьмич Гостищев
Original assignee: 1-Ый Московский Ордена Ленина И Ордена Трудового Красного Знамени Медицинский Институт Им.И.М.Сеченова; Московский Государственный Ордена Ленина И Ордена Трудового Красного Знамени Университет Им.М.В.Ломоносова
Priority date: 1981-03-17
Filing date: 1981-03-17
Publication date: 1982-09-23

Description

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИВАЛЕНТНОГО ПАНКРЕАТИЧЕСКОГО ИНГИБИТОРА. ОБЛАДАЮЩЕГО АНТИКИНИНОГЕНАЗНЫМ ДЕЙСТВИЕМ

1

Изобретение относитс к фармацевтичеокой промышленности, в частности к спо- собу попучени вещества,, обладающего антикининогеназным действием, и может найти применение в медицине.

Молекула поливалентного панкреатичеокогр ингибитора кининогеназ (ППИК), выделенна из-поджелудочной и рколоуиьной желез и легких крупного рогатого скота, состоит из 58 аминокислотных ю остатков. ППИК широко примен етс в медицине в качестве лекарственного средства (гордокс) при лечении р да забол&ваний , сопровождаюишхс избыточным образованием биологически активных поли- ts пептидов - кининов

Недостатком известного средства вл етс К1ютковременное действие, св занное с быстрым выведением его вз организма. Врем полувыведени гордокса зависит 20 от дозы и составл ет ЗО-7О мин.

Целью изобретени вл етс получение целевого продукта, обладающего длител ной антикининогеназной активностью.

Поставленна цель достигаетс тем, что согласно способу получени поливалентного панкреатического ингибитора, обладающего антикининогеназным дейсгвкем , включающему выделение ингибитора из организма крупного рогатого скота , 1-8 вес.ч. поливалентного панкреатического ингибитора дополнительно обрабатывают раствором смеси карбоксц метилдекстрана и 1А-9тил-3-(з-диэтиламинопропил )карбодиимида при их соотношении 2,5-10:5-10 при рН 4,7-7,6 и 20-25°С.;

Следует отметить, что только использование карбоксимётилдекстрана приводит к пролонгированию действи ППИК, другие же полисахарвды, такие как декстран и ДЭАЗ-декстран, привод т к получению продуктов, содержащих 0,2-1% белка в препарате с сохранением менее 1О% и гибирующей активности, тогда как карбо ксиметилдекстран приводит к продукту, содерисащему 2О-50% белка от веса пре , парата с полным сохранением кин латических и равновесных ковстант в модельной реакции ассоциации с трипсином.

Структура нового произвол нотч) ПГШК индивидуального -полимерного продукта, полученного химическим путем аци лированием карбоксиметилдёкстраном. в присутст ВИИ карбодиимида, подтверждена химическими и физико-химическими методами. Образование св зи с носителем доказано измерением количества модифицированных аминогрупп ППИК. ,

Реакци с тринитробензолсуль юкислотой показывает, что при ашшировании КМ-дейстраном вступают в реакцию две аминогруппы белка. Выделение препарата ППЙК, св занного с карбоксИметилдёкстраном , проводилось Методом, гель-хроматографии , в основе которого лежит разделение веществ с различньпуги величинами Молекул рных весов. Хроматографически выделенный пик высокомолекул рного веще тва содержит белок, определенный известны методом Лоури, и. полисахарид, определенный по цветной реакции Дюбуа.

Новое производное ППИК сохран ет : биологическую активность - вл етс ингибитором кининогеназ, но в отличие от исходного продукта - ППИК обладает пролонгированным действием, что подтверждено на модели острого панкреат та у собак данными lio выживаемости и средней продолжительности жизни.

Пример 1. 200 мг КМ-декстрана (ст.з. 0,6; средний Mv- б-Ю) раствор ют в 1О мл ОД М раствора

хлористого натри и добавл ют 200 мг 1-©ти/1 (3 -диэтиламинопрошш) карбодиимида , рН реакционной смеси поддерживают 4,7 в течение 30 мин. Затем к реакционной смеси добавл ют 1ОО мг ППИК, смесь инкубтфуют при рН 5,7 в течение 16-24 ч при , ППИК, св занный с КМ-декстраном, отдел ют от нативного белка гель хроматографией реакционной смеси на колонке с сефарозо 6В-С1 (25 V400 мм), уравновешенной 0,1 М раствором хлористого натри при рН 5,7. За хроматографическим разделением след т по изменению оптической плотности при 23О и 2О6 нм. Первый пик, соответствующий высокомолекул рному производному ППИК, обессоливают ; на колонке с сефадексом G-25 (25 6ОО мм), уравновешенном 5%-ным раотвором уксусной кислоты. Обессоленный препарат лиофильно высушивают и определ ют в нем содеркание белка по- мето ду Лоури и ингибирующую активность по отношению к трипсину. Полученное водорастворимое соединение ППИК с КМ-дек . страном содержит ЗО% белка от сухого веса препарата и сохран ет 75% инга

бирующей активности по отношению к

трипсину.

Пример 2. 52 мг КМ-декстрана {ст.з. 0,6; средний Mr 6 10) рас. твор ют в 10 мл 0,1 М раствора хлорида натри и добавл ют 200 мг 1-етил-3 (3-диэ тилами нопропил) карбодиимида, рН реакционной смеси поддерживают 5,7 в течение 30 мин. Затем к реакционной смеси добавл ют 160 мг ППИК, смесь инкубируют при рН 5,7 в течение 1624 ч при 25РС.

Выделение ППИК, св занного с КМдекстраном , аналогично примеру 1. Полученное водорастворимое соединение ППИК с КМ-декстраном содержит 5О% белка от сухого вёса препарата и сохран ет 60% ингибирующей активности по отношению к трипсину..

Пример 3. 2ОО мг КМ-декстрана (ст.з. 0,6; средний М, 6 1О) )раотвор ют в 1О мл раствора 0,1 М NaC8 и добавл ют 100 мг 1-втил-3(3 -диэтиламинопропил )карбодиимида, рН реакцио ной смеси поддержттают 7,6 в течение ЗО мин. Затем к реакционной смеси добавл ют 20 мг ППИК, смесь инкубируют рН 5,7 в течение 16-24 ч Выделение ППИК, св занного с Р М-декстраном , аналогично примеру 1. Получеии ное водорастворимое соединение ППИК с КМ-декстраном содержит 20% белка от сухого веса препарата и сохран ет 10О% ингибируюшей активности по отношению к трипсину.

Пример 4. Испытание антикининогеназной активности полученного соединени . Высока биологическа активность и пролонгированность действи ППИК, св занного с КМ-декстраном, подтверждена данными о выживаемости и средней продолжительности жизни собак при экспериментальной форме острого панкреатита.

Острый панкреатит воспроизводилс введением в главный панкреатический проток инкубационной смеси желчи с трипсином . Через 3 ч: в вену задней конечности ввод т предлагаемое вещество. В эксперименте выделенй две контрольные группы животных: первую составили 11 собак, у которых лечение не проводилось; вторую 11 собак, у которых острый панкреатит Протекал на фоне применени поливалентно5 го т1гибитора китгаогеназ в виде (ственного препарата - гордокса. oeoiso лекар-Результаты эксперимента лредставпены ь таблице.

Таким образом, предлагаемый способ позвол ет получить препарат поливале.нт кого панкреатическогх) ингибитора кинвногеназ , обладающий пролонгированным действием по сравнению с известным.

Claims

Формула изобретени

Способ получени поливалентного панкреатического ингибитора, обладающего антикининогеназным действием, включаю-. щий выделение ингибитора из органиа «а крупного рогатого скота, отличаю1-2

О

11

щий с тем, что, с целью получени целевого продукта, обладающего длитепь ной антикининогеназной активностью, 1 « 8 вес.ч. поливалентного панкреатического 11нгибитора дополнительно обрабатывают : раствором смеси карбоксиметшэдекстрана и 1-9Тил-3-{з-«иэтиламинопрошш)карбодиимида при ИХсоотнощении 2,5-10-:-510 при рН 4,7 - 7,6 и 20-25С.

25

Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе

{. R.,We)e Е- KaE i1crein in itibors . Handbook of txpeHfuevitae Pjia r acoEog v . Ber-ewJQTO (прототип).