соwith
0000
00 05 Изобретение относитс к микробиологической промышленности, а именно к спо собам хранени культур метанокисл ющих микроорганизмов. Известен спрсоб хранени культур танокисл гощих микроорганизмов (Предусматривающий добавление к суспензии мик роорганизмов минеральных солей и поддер жание температуры 3-1 . Используют соли, вход щие в состав питательной сред в концентраци х, в 10 - 100 раз лревьпн ющихихконцентраииивисходнойсреде flj. Недостаткйми способа вл ютс сложность , подготовки суспензии к хранению, г.ак как необходимо,взвешивать и расгво р ть от 6 до 15 солей, вл ющихс комп . лентами известных питательных сред дл метанокйсл ющих микроорганизмов. Испытанный срок хранени по известному способу с .сохранением жизнес11особности клеток 1,5 года, при этом после засева культур в ферментер наблюдалась длительна (20-30 ч) лагфаза. Цель изобретени - упрощаете спосо-ба и увеличение срока сохранности метан кисл ющих. микроорганизмовУказанна цель достигаетс тем, что в способе хранени культур меганокисл ющих микроорганизмов, предусматриваю щем добавление к суспензии микроорга-.:НИ ..ЗМОВ минеральных солей и.поддержание температуры 3 - , в качестве, минеральной соли нспользутот cjoibijaT аммони в количестве 3 - мае. Способ осуществл ют следующим обрааом . В водную суспензию метанокис юших микроорганизмов, в частности таютх,. к.ак Methylococeus capsulatus, Methylosinu , sporiumj Methylosinus trichosporium Halobacterium gasotipicum добавл ют .сульфат аммони в количестве до 5 мас.%. .Сульфат аммони добавл ть к суспензии в виде концентрированного рас вора таким образом, чтобы концентраци сульфата в суспензии составл ла 3 - 5 мае. %. Концентраци сульфата а гмони 35 мае. % в суспензии выбрана экспериментальным путем. При содержании супъ та аммони менее 3Niac.% клетки микроор ганиэмов сохран ютс в жизнеспособном состо нии не более нескольких мес цев.Рри содержании сульфата аммони более 5 мас.% . в суспензии клетки микроорганизмов хоро шо сохран ютс длительное врем , но . продолжительность лагфазы увеличиваетс до нескольких суток. Суспензию хран т при температуре 3 15 С. При добавлетши сульфата аммони в суспензию микроорганизмов происходит осаждение клеток, что позвол ет после окончани хранени легко отделить клетки от культуральной жидкости, содержащей избыточное количество азота, вл ющегос консервантом, который может ингибировать ост клеток при засеве культуры после хранени . Культуральна жидкость, содержаща сульфат аммони , может быть использована в качестве источника азота дл - роста микроорганизмов . при засеве. Пример1.В1л -суспензии: культуры метанокйсл ющих микрорганизмов Methylococeus capsulatus,выращенной в непрерывном режиме со скоростью потока ,2 на минеральнойсреде любого Известного состава, добавл ют 30 г сульфата аммони ,этосоставл ет 3мас.%сопи в суспензии, перемещивают, закрывают ватной пробкой. При добавлении сульфата аммони в суспензию микроорганизмов клетки осаждаютс на дно. Смесь оставл ли хранить при в. течение трех лет. Через 3 года отдел ют культуру от |культуральной жидкости и в виде осадка ;засевают в ферментер дл культивировани в тех же услови х, при которых она была получена ранее. Клетки начинали расти через 18 ч после засева со скоростью роста (Ц 0,2 ч . Отделенную от осадка микроорганизмов культуральную жидкость с избыточным содержанием суль фата аммони используют в качестве источника азота в процессе культивировани .. П р и м е р 2. В суспензию той же, культуры,,что и в примере 1, добавл ют, сульфатаммони в количестве 4 мас.% хран т 2:,5 года при 15С. Далее способ осуществл ют по примеру 1. Клетки начинают р&сти через 20 ч со скоростью роста Ш О, 2 ч. ПримерЗ.В суспензию культуры Methylosinus s рог ium добавл ют сульфат аммони в количестве 5 мас.% и хран т в течение двух лет при 3 С. Далее с пособ. ocyщe 0твл ют по примеру 1. Клетки начинают расти через 24 ч со скоростью И 0,2 ч . Прим 4. Дл хранени уберут культуру Methylos inus trichosporium. Способ осуществл ют по примеру 1 с получением аналогичных результатов. ,00 05 The invention relates to the microbiological industry, namely to storage methods for cultures of methane-acidifying microorganisms. Known is the storage of cultures of tano-acidifying microorganisms (Providing for adding mineral salts to microorganism suspensions and maintaining a temperature of 3-1. Salts that are part of the nutrient medium in concentrations 10 to 100 times their concentration and source medium are not applicable. Use jj. the difficulty of preparing the suspension for storage, as necessary, weigh and disintegrate from 6 to 15 salts, which are components of well-known nutrient media for methanoglobulin microorganisms. storage by a known method with preservation of cell life capacity of 1.5 years, while after seeding cultures in the fermenter a long (20-30 h) lagphase was observed. The purpose of the invention is to simplify the method and increase the shelf life of methane-acidifying microorganisms. that in the method of storing cultures of meganoglyphic microorganisms, which provide for the addition of microorganism to the suspension -: NO. DEPTH of mineral salts and maintaining a temperature of 3 -, as a mineral salt, use ammonium ammonium in a quantity of 3 - May The method is carried out as follows. In the aqueous suspension of methanokis junctions of microorganisms, in particular, melts ,. K. Methylococeus capsulatus, Methylosinu, sporium Methylosinus trichosporium Halobacterium gasotipicum ammonium sulfate is added in an amount up to 5% by weight. Ammonium sulphate is added to the suspension as a concentrated solution so that the concentration of sulphate in the suspension is 3-5 May. % The concentration of sulphate a gmon 35 May. % in suspension is chosen experimentally. When the ammonium content is less than 3Niac.%, The cells of the microorganisms remain in a viable state for no more than a few months. The content of ammonium sulfate is more than 5% by weight. microbial cells are well preserved in suspension for a long time, but. the duration of the lag phase increases to several days. The suspension is stored at a temperature of 3–15 ° C. When ammonium sulfate is added to the suspension of microorganisms, the cells are precipitated, which makes it possible, after the end of storage, to easily separate the cells from the culture fluid containing an excess amount of nitrogen, a preservative, which can inhibit ost cells when cultured after storage. An ammonium sulphate culture fluid can be used as a nitrogen source for microbial growth. when sowing. Example 1. B1-suspensions: cultures of methanogenic microorganisms Methylococeus capsulatus grown in a continuous mode at a flow rate 2 on the mineral medium of any Known composition add 30 g of ammonium sulfate, which is 3 wt.% Copium in suspension, displaced, closed with a cotton plug. When ammonium sulfate is added to the suspension of microorganisms, cells precipitate to the bottom. The mixture was allowed to store at. for three years. After 3 years, the culture is separated from the culture broth and as a precipitate, seeded into a fermenter for cultivation under the same conditions as when it was obtained earlier. Cells began to grow 18 hours after seeding at a growth rate (C 0.2 h. The culture liquid separated from the sediment of microorganisms with an excessive content of ammonium sulfate was used as a nitrogen source in the cultivation process. Example 2: In suspension the same culture, as in example 1, is added, sulfate ammonium in an amount of 4 wt.% is stored 2: 5 years at 15 C. Further, the method is carried out as in example 1. The cells begin to work & after 20 hours with a speed growth rate, about 2 hours. Example 3. In a suspension of the culture of Methylosinus s horn ium, ammonium sulfate is added to the 5 wt.% and stored for two years at 3 C. Next, with a benefit of 0 0 in accordance with example 1. The cells begin to grow after 24 hours at a rate of 0.2 hours. Note 4. For storage, remove the culture of Methylos inus trichosporium. The method is carried out as in example 1 to obtain similar results.
3938б1в;43938b1v; 4
Таким образом, применение описанного личений срока хранени снизить на 2Ъ% способа мегонокисл юших микроорганиэ-длигельность лагфазы, т.е. позволит со- мов позвол ет увеличипь срок хранени кратить на несколько часов врем от з секлеток до трех лет, т.е. в 2 раза пова культуры ио начала ее роста. Культусравнению с известным способом, и зна-. 5тральна жидкость содержаща амчительно упростить метод хранени -мони , полностью используетс как ЯСточИспользование в качестве консервато- ник азота дл роста микрооргвииэра сульфата аммони позвол ет при уве-мрв.Thus, the use of the described storage period is reduced by 2% by the way of the megaconic acid of the microorganism lag phase, i.e. allowing soms allows to extend the storage period to shorten for several hours the time from 3 to 3 years, i.e. 2 times after the beginning of its growth. To a cultural comparison with a known method, and char. The neutral liquid containing the simplified storage method — the monium, is fully utilized as a SNR. Using nitrogen as a preservative for the growth of the microorganism of ammonium sulfate allows for an increase in the amount of ammonia.