SU826241A1

SU826241A1 - Method of determining serotonin in biological liquids

Info

Publication number: SU826241A1
Application number: SU792742062A
Authority: SU
Inventors: Александра Борисовна Самаль; Сергей Николаевич Черенкевич; Андрей Михайлович Клочков
Original assignee: Bruss G Univ Im V I Leni
Priority date: 1979-03-26
Filing date: 1979-03-26
Publication date: 1981-04-30

Description

(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СЕРОТОНИНА В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ(54) METHOD FOR DETERMINING SEROTONIN IN BIOLOGICAL LIQUIDS

Изобретение относитс к биологии и медицине и может быть использовано как физико-химический метод исследовани сёротонина и определени его концентраций в биологических средах, крови, плазме, суспензи х тромбоцитов и т.д.The invention relates to biology and medicine and can be used as a physicochemical method for studying serotonin and determining its concentrations in biological media, blood, plasma, platelet suspensions, etc.

Известен способ определени сёротонина в биологических жидкост х путем измерени интенсивности их флюоресценции до и после обработки биологической жидкости .перекисью водорода l .There is a known method for determining surotonin in biological fluids by measuring the intensity of their fluorescence before and after the treatment of the biological fluid with hydrogen peroxide l.

Однако определить сефотонин известным способом сложно, требуетс много времени и происход т большие потери сёротонина при экстрагирова;нии (до 50%),However, it is difficult to determine cefotonin by a known method, it takes a lot of time and large losses of sirotonin occur during extraction (up to 50%),

Цель изобретени - повышение точности способа.The purpose of the invention is to improve the accuracy of the method.

Эта цель достигаетс тем, что способ определени сёротонина в биологических жидкост х осуществл ют путем измерени интенсивности их флюоресценции до и после обработки биологической жидкости перекисью водорода, при этом-биологическую жикость обрабатывают перекисью водородс . при концентрации последнейThis goal is achieved by the fact that the method of determination of sirotonin in biological fluids is carried out by measuring the intensity of their fluorescence before and after the treatment of the biological fluid with hydrogen peroxide, while the biological fluid is treated with hydrogen peroxide. at last concentration

0,0003-0,003% в присутствии пероксидазы .0.0003-0.003% in the presence of peroxidase.

Дл определени сёротонина, опредбш ют уровень интенсивности ультрафиолетовой флюоресценции раствора содержащего серотонин, затем добавл ют пероксидазу и HgOg (в концентрции 0,003-0,0003%). Завершение реакции сопровождаетс полным исчезновением ультрафиолетовой флюоресценции сёротонина.To determine serotonin, a level of intensity of ultraviolet fluorescence of a solution containing serotonin is determined, then peroxidase and HgOg are added (at a concentration of 0.003-0,0003%). The completion of the reaction is accompanied by the complete disappearance of the ultraviolet fluorescence of sirotonin.

Таким образом, по исчезновению ультрафиолетовой флюоресценции сёротонина , исходна интенсивность которой пропорциональна исходной концентрации сёротонина, определ ют его концентрацию. Исследование люминесценции провод т на обычных флюориметрических установках, работающих в режиме измерени среднего тока или счета фотонов.Thus, the disappearance of the ultraviolet fluorescence of sirotonin, the initial intensity of which is proportional to the initial concentration of sirotonin, determines its concentration. The luminescence study is carried out on conventional fluorimetric facilities operating in the mode of measuring the average current or photon counting.

В результате исследований спектров поглощени люминесценции сёротонина и перекиси водорода установлено , что поглощение используемых концентраций HjOj (0,003-0,0003%) незначительно, и экранирующего эффекта Н О, на флюоресценцию сёротонина нет.As a result of studies of the absorption spectra of luminescence of sirotonin and hydrogen peroxide, it was found that the absorption of the used concentrations of HjOj (0.003–0,0003%) is insignificant, and there is no shielding effect of H 0 on the fluorescence of sirotonin.

В присутствии 0,01 мг/мл пероксидазы и Ь,ОрЗ-0,0003% .перекиси водорода происходит полное окисление серотонина в широком диапазоне концентраций , Врем определени сероторина в жидкости в этом случае 5-10мин.ВарБированием концентраций пероксидазы (0,2-0,001j и Н202.(0,003-0,0003%) врем определени серотонина можно сократить до 25мин .Во всех случа х соблюдаетс линейна зависимость А1(1,у(-1) после окончани реакции от концентрацииIn the presence of 0.01 mg / ml peroxidase and L, O3-0.0003% of hydrogen peroxide, serotonin is completely oxidized in a wide range of concentrations. The time for determining serotorin in a liquid in this case is 5–10 min. Cooking peroxidase concentrations (0.2– 0.001j and Н202. (0.003-0,0003%) the time to determine serotonin can be reduced to 25 minutes. In all cases, the linear dependence of A1 (1, y (-1) after the end of the reaction on concentration

серотонина.serotonin.

С целью проверки специфичности .этой реакции исследован целый р д триптаминов, ароматических аминокислбт и белков плазмы.In order to verify the specificity of this reaction, a whole series of tryptamines, aromatic amino acids and plasma proteins have been studied.

Добавление пероксидазы и Н2О2 не приводит к изменени м интенсивности флюоресценции этих веществ, поэтому наличие их в биосистемах не оказывает вли ни на определение концентрации серотонина.The addition of peroxidase and H2O2 does not lead to changes in the fluorescence intensity of these substances; therefore, their presence in biosystems does not affect the determination of serotonin concentration.

Пример . Определение концентрации свободного серотонина в реакции высвобождени из тромбоцитов под действием агрегирующих агентов ,. .An example. Determination of the concentration of free serotonin in the reaction of platelet release under the action of aggregating agents,. .

Дл этого из тромбоцитов (число клеток 108 мл) при инкубировании последних в среде с агрегирующими агентами (рН 7/6 тромбин) к надосадочной жидкости (1,8 мл), получаемойпосле центрифугировани взвеси сти-, мулиров|.нных тромбоцитов, добавл ютFor this, from platelets (the number of cells is 108 ml), while incubating the latter in medium with aggregating agents (pH 7/6 thrombin), to the supernatant (1.8 ml) obtained after centrifuging a suspension of stili-mimir |

0,1 мл 0,05 пероксидазы и 0,1 мл 0,003%-ного . Фиксируют изменение флюоресценции и полученный реЗйгльтат сопоставл ют с калибровочной кривой.Дл построени калибровочной кривой используют серотонин в той же среде, что и тромбоциты. Линейна зависимость интенсивности флюоресценции серотонина на длине волны 330 нм от концентрации серотонина сохр н етс до концентрации ,0.1 ml of 0.05 peroxidase and 0.1 ml of 0.003%. The change in fluorescence is recorded and the resultant result is compared to a calibration curve. Serotonin is used in the same medium as the platelets to construct a calibration curve. The linear dependence of serotonin fluorescence intensity at a wavelength of 330 nm on serotonin concentration is preserved to a concentration

В таблице-представленыданные определени серотонина по предлагаемому способу в отмытых тромбоцитах. . Из данн.ых приведенных в таблице, видно, что при стимулировании тромбоцитов тромбином или изменении рН, происходит выделение серотонина, концентраци которого легко определ етс предлагаемым способом. При добавлении серотонина к тромбоцитам, наход щимс в среде с рН 7,6, т.е к стимулированным тромбоцитам, поглощени серотонина нэ происходит и обща концентраци определенного сиротонина состоит из серотонина, ВЕлшедшего из тромбоцитов при ихсти5 мулировании изменением рН- среды, и серотонина, добавленного в раствор (1,0- М). .The table presents the data for the determination of serotonin by the proposed method in washed platelets. . From the data given in the table, it can be seen that when platelets are stimulated by thrombin or pH changes, serotonin is released, the concentration of which is easily determined by the proposed method. When serotonin is added to platelets in a medium with a pH of 7.6, i.e. to stimulated platelets, the absorption of serotonin does not occur and the total concentration of a certain orthotinin consists of serotonin, lost from the platelets at their own pH change, and serotonin, added to the solution (1.0 M). .

Предлагаемый способ определени серотонина обладает высокой чувствительностью, не требует применени дополнительных методов обработки биологических жидкостей, вл етс специфическим и экспресс- метрдом.The proposed method for the determination of serotonin is highly sensitive, does not require the use of additional methods for the treatment of biological fluids, is a specific and express meter.

Claims

Claim

A method for determining serotonin in biological fluids by measuring the intensity of their fluorescence before and after treating the biological fluid with hydrogen peroxide :, ¢ 0 characterized in that, in order to improve the accuracy of the method. ''

VNIIPI Order 2368/33 'biological fluid is treated with hydrogen peroxide at a concentration of 0.0003-0.003% in the presence of peroxidase.