Claims (2)
Изобретение относитс к штаммам грибов продуцентов полезных веществ и может быть использовано в микробиологической промышленности. Получae «Ie пектолитические ферменты примен ютс э пищевой промьшшенности, а производстве вин и соков, в сельскс к хоз йстве ив других отрасл х на pojtHoro хоз йства, где требуетс рас ( вепление пектиновых веществ. Известен штамм гриба Asp. foetidu М-45 - продуцент пектолитических ферментов. Выделен в результате ступенчатой селекции с применением мута генных факторов химической природы. Показатель общей пектолИтическоЙ активности составл ет 1,4-1,6 ед/млпри глубинном культивировании, что в два раза выше исходного штгима 1 Известен также штамм Asp.foetidus примен емый в микробиологической про мшшенности СССР. Обща пектолйтическа активность культурна, выращенной поверхностным способом, составл ет 14-18 ед/г 2. Недостатком зтих штаммов вл е Тс сравнительно невысока обща пектолитическа активность. Целью изобретени вл етс новый штамм Asp. foetidus-26, обладающий повышенной способностью к синтезу пектолитических ферментов при поверхностном способе культивировани . I - . . , , Предлагаетс штамм Asp. foetidus-26 . Получен в результате действи температу 100-120с при давле НИИ 1 ати в автоклаве на конидии гриба Asp. foetidus ( 351 музей ВНИИЦрБ) в колбах в слое среды см в течение 40-60 мин. Обработанные высокой температурой и давлением конидии гриба высевают на стерильную питательную среду (свекловичный жом30% , пшеничные отруби - 70%, морковный агар) и проращивают при в течение 15-20 суток, Вьаделенный активный штамм Asp. foetidus-26 подвергают многократным пассажам на морковный агар и питательную среду из свекловичного Жома и пшеничных отрубей и провер ют ферментативную .активность при хранении и пересевах. Примеры сравнени активности ферментов прототипа, и предлагаемого штамма, культивируеьшх в одинаковых услови х. Пример 1. Продуцейт пектолйтйческих ферментов Asp. foetidus культивируют поверхноетным методом на твердой питательной среде, состо 1ей-из пшеничных отрубей 69%, свекловичного жома 30%, сульфата аммони 1%. Питательную среду увлажн ют до 62%истерилизуют при 0,8 ати в течение 1 ч. Стерильную среду засевают суспензией конидий гриба Asp. foetidus, раскладывают по кюветам слоев 1,5 см и термостатируют при . Через 48 и по окончании выращ вани культура имеет общую пектолит ческую активность 16 ед/г сухого ве щества (по ГОСТу 20264.3-74). Пример 2. Asp. foetidus-26 культивируют поверхностным методом на питательной среде. Питательную среду увлажн ют до 62% и ст рилизуют при 0,8 ати в течение 1ч. Стгерильную среду засевают суспензией конидий гриба Asp.foetidus-26, раскладывают по кюветам слоем 1,5 с и термостатируют при . Через 48 ч по окончании выращивани культура имеет общую пектолитическую ак тивность Д ед/г сухого вещества. Проверкой, проведенной в течение 2 лет, установлено, что при хранени и пересевах высокий уровень ферментативной активности Asp.foetidus-26 не снижаетс . Asp. foetidus-26 имеет следующую морфологическую и культуральную характеристику . Морфологические признаки. Мицелий субстратный и воздушный, развит, септированный. Кони дйёнЬсцы , поднимающиес над субстра том, резко обособленные, несептированные , неветв щиес , очень длинные 0,5-1,0 мм, иногда до 2-3 мм, ширин 12-15 йкм, толстостенные, имейт вези кулу диаметром 25-35 мкм, концы конидиеносцев коричневого цвета. СтеРигмы двур дные, коричневого цйета. Размер первичных стеригм 7-10 мкм, вторичных 3-5 мкм. Конидии круглые, однокистныё с шиповидной оболочкой. цепочки конидий чаще свободно располагаютс пр всей поверхности голов ки, образу шаровидную головку, иног да цепочки склеены S колонки и распо лагаютс по верхней полоЕгине пузыр Диалютр конндий 4-5 мкм, ДЙамёт р головки 50-70 мкм. Культуральные признаки. На синтетической среде Чапека с агаром растёт медленно, достига к 1р-14 дн м диаметра колонии 3,5 - 4,5 см. Крдонии плоские или слегка радиальнй- складчатые. чСубстратный ми целий бесцветный или светло-желтый, спороносна зона колонии коричневочерна . Эксудата мало или он отсутст вует. С обратной стороны колонии жел того цвета. Запах сильный,земл ной. 54 На естественной среде из солодового сусла с агаром колонии к 10 14 дн м достигают 8-9 см в диаметре, имеют мозговидную складчатость. Спороносна зона колонии коричнево-черна , край колонии белый. Обратна сторона колонии светла-коричнева , по кра м желта . . На картофеле растет хорошо, спорообразует , желатину разжижает, молоко пептонизирует. Отношение к углеводному питанию: ассимилирует крахмал,глюкозу, мальтозу , мелибиозу, лактозу, галактозу. Отношение к азотному питанию: растет на нитратных, аммонийных и ррганических источниках азота. Оптимальна температура роста 34:35°С . Азроб. ; . , Таким образом, предложенный штамм по сравнению с ПРОТОТИПОМ обладает преимуществом, заключа(ощимс в повышенной способности к биоминтезу пектолитических ферментов и представл ет собой новую культуру со стойкими биохимическими свойствами. Формула изобретени . Штамм Aspergillus foetidus-26 - продуцент пектолитических ферментов. Хранитс в коллекции культур микроорганизмов Всесоюзного научно-исследовательского института генетики и селекции микроорганизмов, регистрационный номер ЦМПМ F-106. Морфологические признаки. Мицелий субстратный и воздушный, хорошо развитый, септированный. Конидиеносцы , поднимающиес над субстратом , резко, обособленные, несептированные , неветв щиес , очень длинные 0,5-1,0 мм, иногда до 2-3 мм, ширина 12-15 мкм, толстостенные, имеют везикулу диаметром25-35 мкм, кониы конидиеносцев коричневого цвета. Стеригмы двур дные, коричневого цвета . Размер первичных стеригм 710 мкм, вторичных - 3-5 мкм. Конидии круглые, однокистныё с шйповид-. ной оболочкой. Цепочки конидий чаще. свободно располагаютс по всей поверхности головки, образу шаровидную головку, иногда цепочки склеены в колонии и располагаютс по верхней пбловине пузыр . Диаметр конидий 4т 5 мкм, диаметр головки 50-70 мкм. . Культуральные признаки. На синтетической среде. Чапека с агаром растет медленно, достига к 10-14 дн м диаметра колонии 3,5 4 ,5 см. Колонии плоские или слегка радиально-складчатые. Субстратный мицелий бесцветный или светло-желтый, спороносна зона колоний коричневочерна . Эксудата мало или он отсутствует . С обратной стороны колонии желтого цвета. Запах сильный, земл ной. 74403 На естественной среде из солодоврго сусла с агаром колонии к 10 14 дн м достигают 8-9 см в диаметре, имеют мозговидную складчатость. Спороносна -зона колонии коричнево-черна , край колоний белый. Обратна 5 сторона колонии светло-коричнева , . по кра м желта . На картофеле растет хорошо, спорообразует. Желатину разжижает. Молоко п птонизирует. Отношениё к углеводному питанию: ассимилирует- крахмал, глюкозу, мгшьтозу , мелибиозу, лактозу, галактозу. Отношение к азотному питанию: штамм растет на нитратных, аммонийных и органических источниках азота. . Оптимальна температура роста 34-35 С. Аэроб. . Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе 1. Авторское свидетельство СССР 538022, кл. С 12 К 3/00, 1976. The invention relates to strains of fungi producing useful substances and can be used in the microbiological industry. The "Ie pectolytic enzymes are used in the food industry, and in the production of wines and juices, in agriculture, in other branches on the pojtoro farm, where races are required (heat of pectic substances. A strain of the fungus Asp. Foetidu M-45 is known - producing pectolytic enzymes. It was isolated as a result of stepwise selection using mutagenic factors of chemical nature. The total pectolytic activity indicator is 1.4-1.6 U / ml in submerged cultivation, which is twice as high as the initial strain 1 Asp.foeti strain is also known dus used in the microbiological pro cess of the USSR General crop activity grown by the superficial method is 14-18 u / g 2. The overall strain of the strains is TC is relatively low total pectolytic activity. The aim of the invention is a new strain Asp. foetidus- 26, which has an increased ability to synthesize pectolytic enzymes under the surface culture method. I -. . The proposed strain Asp. foetidus-26. Obtained as a result of the action of a temperature of 100-120 s at a pressure of the Scientific Research Institute of 1 MPa in an autoclave on conidia of the fungus Asp. foetidus (351 museum VNIITsrB) in flasks in the medium layer, see for 40-60 minutes Processed with high temperature and pressure, the conidia of the fungus are sown on a sterile nutrient medium (beet pulp 30%, wheat bran - 70%, carrot agar) and germinated during 15-20 days, Asp. Active strain. foetidus-26 is subjected to repeated passages for carrot agar and nutrient medium from beet pulp and wheat bran and the enzymatic activity is checked during storage and subcultures. Examples of comparison of the activity of the enzymes of the prototype, and the proposed culture, cultured under the same conditions. Example 1. Produce pectoly enzymes Asp. foetidus is cultivated by the surface method on a solid nutrient medium, consisting of 1% of wheat bran 69%, beet pulp 30%, ammonium sulfate 1%. The nutrient medium is moistened to 62% and then sterilized at 0.8 api for 1 hour. The sterile medium is inoculated with a suspension of conidia of the fungus Asp. foetidus, laid out in cuvettes layers of 1.5 cm and thermostatic at. After 48 and after the end of the cultivation, the culture has a total pectolytic activity of 16 units / g of dry matter (according to GOST 20264.3-74). Example 2. Asp. foetidus-26 is cultivated by the surface method on a nutrient medium. The nutrient medium is moistened to 62% and sterilized at 0.8 ATM for 1 hour. The sterile medium is inoculated with a suspension of the conidia of the fungus Asp.foetidus-26, laid out in cuvettes for 1.5 seconds and thermostatted at. After 48 h at the end of the cultivation, the culture has a total pectolytic activity of D units / g of dry matter. A test carried out over a period of 2 years showed that during storage and subcultures the high level of enzymatic activity of Asp.foetidus-26 does not decrease. Asp. foetidus-26 has the following morphological and cultural characteristics. Morphological signs. Mycelium substrate and air, developed, septate. Horses, rising above the substrate, sharply segregated, unseparated, unbranched, very long 0.5-1.0 mm, sometimes up to 2-3 mm, 12-15 in width, thick-walled, have a diameter of 25-35 microns , the ends of brown conidiophores. SteRigms are two-fold, brown color. The size of the primary sterigm 7-10 microns, secondary 3-5 microns. Conidia are round, single-leaved with a spinous shell. conidia chains are more often freely positioned across the entire surface of the head, forming a spherical head, sometimes the chains are glued together with S columns and are located in the upper half of the bubble. A diaper diameter of 4-5 microns, a dymetr 50-70 microns. Cultural features. On the synthetic medium of čapek with agar, it grows slowly, reaching a colony diameter of 3.5 - 4.5 cm by 1p-14 days m. Crdonia are flat or slightly radially folded. The substrate mycelium is colorless or light yellow, the spore-bearing zone of the colony is brown-black. Exudate is small or it is missing. On the back of the colony is a yellow color. The smell is strong, earthy. 54 On the natural environment, malt wort with agar of the colony reaches 10–9 days in diameter, 8–9 cm in diameter, and has a cerebral folding. The sporiferous zone of the colony is brown-black, the edge of the colony is white. The reverse side of the colony is light brown, yellow at the edges. . On potatoes it grows well, spores, liquefies gelatin, peptonized milk. Attitude to carbohydrate nutrition: assimilates starch, glucose, maltose, melibiosis, lactose, galactose. Attitude to nitrogen nutrition: grows on nitrate, ammonium and organic nitrogen sources. The optimum growth temperature is 34: 35 ° C. Azrob. ; . Thus, the proposed strain in comparison with PROTOTYPOM has the advantage of concluding (in the increased biomynthesis ability of pectolytic enzymes and is a new culture with persistent biochemical properties. Claims. Aspergillus foetidus-26 is a producer of pectolytic enzymes. It is stored in the collection cultures of microorganisms of the All-Union Scientific Research Institute of Genetics and Breeding of Microorganisms, registration number CMPM F-106. Morphological features. Mycelium substrate and stuffy, well developed, septic. Conidiophores, rising above the substrate, sharply, isolated, non-septic, unbranched, very long 0.5-1.0 mm, sometimes up to 2-3 mm, width 12-15 microns, thick-walled, have a vesicle diameters of 25-35 microns, horses of conidiophores brown, double-bodied sterigms, brown in color. The size of primary sterigms is 710 microns, secondary sterilms are 3-5 microns. Conidia are round, single-stranded with a shell-like membrane. Conidium chains are more often. freely placed over the entire surface of the head, forming a spherical head, sometimes the chains are glued together in colonies and are located on the upper side of the bubble. The diameter of conidia 4 t 5 microns, head diameter 50-70 microns. . Cultural features. On synthetic medium. A cap with agar grows slowly, reaching a colony diameter of 3.5-4.5 cm by 10-14 days. Colonies are flat or slightly radially folded. Substrate mycelium is colorless or light yellow, spore-bearing zone of colonies is brown-black. Exudate is small or absent. On the reverse side of the colony is yellow. The smell is strong, earthy. 74403 On the natural environment of malt wort with agar, colonies reach 10–9 cm in diameter by 10–14 days and have a cerebral folding. The sporiferous zone of the colony is brown-black, the edge of the colonies is white. Back side 5 of the colony is light brown,. on edge m yellow. On potatoes grows well, sporoobrazuet. Gelatinu liquefies. Milk ptonises. Relationship to carbohydrate nutrition: assimilates, starch, glucose, mgshitoza, melibiosis, lactose, galactose. Attitude to nitrogen nutrition: the strain grows on nitrate, ammonium and organic nitrogen sources. . The optimal growth temperature is 34-35 C. Aerobe. . Sources of information taken into account in the examination 1. USSR author's certificate 538022, cl. From 12 to 3/00, 1976.
2. Лос кова Л.С. и Москвичева Э.П. Регулирование гидролитических ферментов при культивировании гриба Aspergillus foetidus. Тезисы докладов научно-практической конференции по получению и применению пектолитических ферментов. Тбилиси, 1977, с. 77-78 |(прототип).2. Los Kova L.S. and Moskvicheva E.P. Regulation of hydrolytic enzymes in the cultivation of the fungus Aspergillus foetidus. Abstracts of scientific and practical conference on the receipt and application of pectolytic enzymes. Tbilisi, 1977, p. 77-78 | (prototype).