Изобретение относитс к спиртовой промышленности, в частности к способам производства спирта из раститель ного сырь : зерна, корнеплодов и пло . дов. . Известен способ производства спир та из целлюлозы, согласно которому целлюлозу подвергают ферментативному осахариванию до глюкозы с помощью целлюлозы и ферментируют глюкозу мик роорганизмами, продуцирующими спирт, Взаимодействр}е сырь ,-содержащего це люлозу, целлюлазы, микроорганизм, пр дуцирующие спирт, провод т в аэробных услови х, одновременно в одну стадию.. В качестве целлюлазы использ ют культуральную жидкость, полученну из Trichaderma viride LI, 2, 3. Данный способ в основном, применим дл получени спирта из субстратов, богатых целлюлозой,таких как газетна бума1га, солома и др. . Наиболее близким по технической сущности вл етс способ производств спирта из растительного сырь , преимущественно зерна, предусматривающи приготовление затора, разваривание массы, охлаждение ее, введение амило литических ферментных препаратов мик робного происхождени или солода и целлюлолитических ферментов - целлюлозы и гемицеллюлозы, осахаривание затора и сбраживание сусла . Недостатком данного способа вл етс недостаточно высокий выход спир та. Цель изобретени - увеличение вых да спирта за счет более полного осахаривани сырь . Эта цель достигаетс тем, что в предлагаемом способе целлюлолитические ферментные препараты ввод т в затор в виде культуральной жидкости или концентрата из культуры гриба Penicillium citreo viride при teMпературе и рН 5,0-6,5 в количестве 8 ед. С;( и 5 ед. С на 1 г целлюлозы. Целесообразно культуральную жидкость или концентрат из культуры гриба раздел ть на два потока, один из которых в количестве предпочтительно tO% от общего потока вводить i перед развариванием массы совместно с бактериальной Об-амилазой, а другой после осахаривани разваренной маесы амилолитическими ферментами при температуре 0-45°С, осуществл на каждой стадии выдержку массы с введе нием ферментным комплексом в течение 5-30 мин. Используемую культуру гриба Penicillium citreo viride целесообразно предварительно выращивать на питательной среде, содержащей целлюлозу или чменную, шелуху, трав ной гидролизат и -минеральные соли в виде фосфорнокислого аммони , фосфорнокислого кали , сернокислого магни . Штамм Penici11ium ci treo vi ride хранитс в коллекции штаммов Университета им. Гумбольдта и имеет следующую характеристику Рост на суслоагаре наблюдаетс по всей поверхности , окраска мицели на воздухе зеленовата до серовато-зеленоватой. Окраска мицели субстрата разнообразна - от желтоватой до бурой. Рост на среде Чапека или Чапек-Докс-агаре замкнутый (ограниченный), бархатистый , даже слегка ворсистый со складчатыми образовани ми. Окраска мицели на воздухе мен етс от белой, желтоватой до красновато-фиолетовой. Наблюдени под микроскопом дали следующие результаты. Спорул ци В- общем .не очень сильна и в основно .м на сусло-агаре. На сусло-агаре конидиеносцы образуютс из мицели на воздухе и несут характерную монопол рную кисточку. Конидиеносцы в большинстве случаев неразветвленные, случайно выступает бокова ветпь. Они различны по длине (ll-IO 2б10 м) и плоские. Они несут , реже 7 плотно сто щих стеригмов (спороносцы ). Стеригмы гладкие и трубчатые , средн длина составл ет от 5 10 до . Конидии образуют слабые колоночные цепочки, которые имеют запутанное расположение далеко отход щих друг от друга цепочек. Средн длина.цепочек составл ет от Ю доЧБ-Ю М. Споры круглые, гладкие, их диаметр от ЬЮ до 31(Г м. Споры в цепочках с большим tpyдoм отдел ютс друг от друга. Культуру PeniciIlium citreo viride культивируют поверхностным способом на пшеничных отруб х и/Или зеленой муке или глубинным способом на среде, содержащей целлюлозу или чменную шелуху, необходимые минеральные соли: фосфорнокислый аммоний, фосфорнокислый калий, сернокислый магнийj трав ной гидролизат. Дл увеличени ферментативной активности, в среду могут ыть внесены ОС-или/и f3-глюкозиды. Необходимое количество посевного материала составл ет 0, причем он должен находитьс в логарифмической фазе роста. Культивирование веду при- температуре . Полученную культуральную жидкость фильтруют и концентрируют, например упариванием под вакуумом, ультрафиль рацией, гельфильтрацией, и использую в качестве целлюлолитического фермен ного комплекса, ввод в сусло до и/и после его разваривают при температур kQ-60°C и при величине рН от 5|0 до 6,5 в количестве 8 ед. 5 ед Сх на 1 г целлюлозы. После введени фер ментного комплекса смесь перемешиваю не менее 5-30 мин. Дл гидролиза крахмала зерна используют солод или амилолитические ферменты микробного происхождени . Осахаренное сусло после охлаждени направл ют на сбраживание. 1рименение вышеуказанного целлюло литического комплекса обеспечивает увеличение выхода этилового спирта на 2-6% в зависимости от вида перерабатываемого сырь и содержани в нём целлюлозы,. Пример 1. 2000 кг ржи смешивают с водой в соотношении 1:2,5, разваривают при . Разваренную массу охлаждают до 58°С и ввод т в нее амилолитические ферменты микробного происхождени в количестве 1,5-ед. АС и 6 ед. ГлА на 1 г крахма ла, осуществл , таким образом, первую стадию осахариеани . Осахаренное сусло охлаждают до при рН 5,05 ,5, ввод т культуральную жидкость гриба Peniclllium citreo viride в количестве 15 ед. С и 8 ед, Сх на 1 г (при определении активности по методу ГДР), что соответствует 8 ед. С и 5 едо Cj (при определении активу ности по методу ВНИИПрБ). Культуру Penicillium citreo viride выращивают на водной среде, содержащей 0,5 цел люлозы, 20 трав ного гидролизата, 0,2% сернокислого магни , 0,2% фосфорнокислого аммони , 0,1% фосфорнокислого кали . Смесь сусла с введен-t ным культуральным раствором выдерживают 30 мин, охлаждают до 23С, ввод т дрожжи и направл ют на брожение. Выход спирта увеличиваетс против контрол на 3%. , Пример 2. Культуральную жид кость гриба Penicillium citreo virid или ее концентрат, содержащую целлюлолитический комплекс ферментов, раздел ют на два потока, один из них в количестве 10% от общего потока ввод т в суспензию измельченного зерна, приготовленную из 1000 кг зерна и 3000 кг воды совместно с раствором бактериальной о -амилазы, вводимой дJn разжи хенип крахмала, в количестве 0,8 ед, АС на 1 г крахмала. Раствор бактериальнойой-амилазы раздел ют на три дозы и на данной стадии ввод т 15% от общего ее количества . Суспенз11Ю измельченного зерна подваривают при 85с в течение 15 мин, а затем разваривают при 130 С в течение 60 мин, oxлaждaюt до и дл дальнейшего разжижени крахмала ввод т следующую дозу 15% раствора бактериальной ot-амилазы при рН сусла 5,,5. Разваренную разжиженную массу охлаждают до 55С и дл проведени дальнейшего осахаривани крахмала ввод т дозу оставшейс бактериальной об-амилазы и глюкоамилазы в соотношении 1,5 ёд АС и 6 ед ГлА. Осахаренное сусло выдерживают 5 мин, охлаждают до и осуществл ют гидролиз целлюлолитическим комплексом, задава в смесь сусла с бактериальной о6-амилазой и глюкоамилазой оставшуюс дозу - 90% культуральной жидкости гриба Penicillium citreo viride в количестве 15 еДо С и 8 ед, С на 1 г целлюлозы (по методу ГДР) или 8 ед. С и 5 ед. Сд (по методу ВНИИПрБ). Культуру выращивают на среде, состав которой аналогичен составу, описанному в примере 1. Гидролиз сырь осуществл ли в течение 30 мин. Осахаренное сусло сбраживают дрожжами в течение 72 ч. Выход спирта-сырца увеличиваетс против контрол на 2%. П р и м ер 3. 1000 кг чмен смешивают с водой, разваривают при , охлаждают до 60°С и осахаривают амилолитическими ферментами солода (16% по крахмалу) или смесью микробных препаратов глю1собататин Гх и глюкоэндомикопсин Гх (1,5 ед. АС и 6 ед, ГлА на 1 г крахмала). В процессе осахаривани разваренной массы амилолитическими ферментами задают целлюлолитическую культуру в дозировке 8 ед. С и 5 ед. Гх активности на 1 г целлюлозы, выращеннуюThe invention relates to the alcohol industry, in particular, to methods for the production of alcohol from vegetable raw materials: grains, root crops, and flat. Dov. . There is a known method of producing alcohol from cellulose, according to which cellulose is subjected to enzymatic saccharification to glucose using cellulose and the glucose is fermented by alcohol producing microorganisms, an alcohol, a cellulose containing cellulose, a microorganism producing alcohol, and a lead containing cellulose, cellulose containing cellulose, cellulose, cellulose, cellulose, cellulose. conditions at the same time in one stage. As cellulase, a culture fluid obtained from Trichaderma viride LI, 2, 3 is used. This method is mainly applicable to the production of alcohol from cellulose-rich substrates. Such as buma1ga newsprint, straw, etc... The closest in technical essence is a method of producing alcohol from vegetable raw materials, mainly grains, involving the preparation of a mash, cooking the mass, cooling it, introducing microbial amylotic enzyme preparations or malt and cellulolytic enzymes - cellulose and hemicellulose, saccharification of the mash and wort fermentation . The disadvantage of this method is not high enough alcohol yield. The purpose of the invention is to increase the yield and alcohol due to a more complete saccharification of the raw material. This goal is achieved by the fact that in the proposed method, cellulolytic enzyme preparations are introduced into the mash in the form of a culture fluid or concentrate from the culture of the fungus Penicillium citreo viride at a temperature and pH 5.0-6.5 in an amount of 8 units. C; (and 5 units of C per 1 g of cellulose. It is advisable to divide the culture liquid or concentrate from the culture of the fungus into two streams, one of which in an amount preferably tO% of the total flow is introduced i before cooking the mass together with the bacterial Ob-amylase, and the other, after saccharification of boiled mausa with amylolytic enzymes at a temperature of 0-45 ° С, at each stage, holding the mass with the introduction of an enzyme complex for 5-30 minutes. The culture of the fungus Penicillium citreo viride is expediently pre-grown on nutrient medium containing cellulose or barley, husk, herbal hydrolyzate and mineral salts in the form of ammonium phosphate, potassium phosphate, magnesium sulfate. Penici11ium ci treo vi ride strain is stored in the collection of strains of the Humboldt University and has the following characteristic Growth vi riod is stored in the collection of strains of the Humboldt University and has the following characteristic observed over the entire surface, the color of the mycelium in air is greenish to grayish-green. The substrate mycelium is varied from yellowish to brown. Growth on the Czapek or Czapek-Doks-Agar medium is closed (limited), velvety, even slightly pile with folded formations. The color of the mycelium in air varies from white, yellowish to reddish-violet. Observations under the microscope gave the following results. Sporuli V-general is not very strong, and mainly on wort agar. On wort agar, conidiophores are formed from a mycelium in air and carry a characteristic monopolar brush. Conidiophores in most cases unbranched, the side branch randomly protrudes. They are different in length (ll-IO 2b10 m) and flat. They carry, rarely 7 densely standing sterigms (sporosta). Sterigms are smooth and tubular, with an average length of from 5 to 10. Conidia form weak column chains, which have an intricate arrangement of chains far apart from each other. The average length of the chains is from 10 BC to 10 M. Spores are round, smooth, their diameter is from 12 to 31 (D m. Spores in chains with a large trype are separated from each other. The culture of PeniciIlium citreo viride is cultivated by the superficial method for wheat bran x and / or green flour or deep method on a medium containing cellulose or barley hulls, necessary mineral salts: ammonium phosphate, potassium phosphate, sulfate magnesium hydrolyzate. To increase the enzymatic activity, OC or / and f3 can be added to the medium -glucosides. Necessary The amount of inoculum is 0, and it must be in the logarithmic growth phase. I cultivate the culture at temperature. The resulting culture liquid is filtered and concentrated, for example by evaporation under vacuum, ultrafiltration, gel filtration, and using the cellulolytic truss complex, input into the wort before and / and after it is boiled at temperatures of kQ-60 ° C and at pH values from 5 | 0 to 6.5 in the amount of 8 units. 5 units of Cx per 1 g of cellulose. After the introduction of the enzyme complex, the mixture is stirred for at least 5-30 minutes. To hydrolyze the starch grain, malt or microbial amylolytic enzymes are used. The saccharified wort, after cooling, is sent to fermentation. The use of the above cellulose complex provides an increase in the yield of ethyl alcohol by 2-6%, depending on the type of processed raw material and the content of cellulose in it. Example 1. 2000 kg of rye mixed with water in a ratio of 1: 2.5, boil with. The pulverized mass is cooled to 58 ° C and 1.5-units amylolytic enzymes of microbial origin are introduced into it. AC and 6 units. GLA per 1 g of starch la, thus, carried out the first stage of saccharieani. The saccharified wort is cooled to a pH of 5.05, 5, the culture liquid of the fungus Peniclllium citreo viride is introduced in an amount of 15 units. C and 8 units, Cx per 1 g (when determining the activity according to the GDR method), which corresponds to 8 units. C and 5 units Cj (when determining the activity according to the VNIIPrB method). The Penicillium citreo viride culture is grown on an aqueous medium containing 0.5 cel lulose, 20 herbal hydrolyzate, 0.2% magnesium sulphate, 0.2% ammonium phosphate, 0.1% potassium phosphate. The mixture of the wort with the injected culture solution is kept for 30 minutes, cooled to 23 ° C, yeast is added and sent to fermentation. The alcohol yield is increased against the control by 3%. , Example 2. The culture fluid of the fungus Penicillium citreo virid or its concentrate containing the cellulolytic complex of enzymes is divided into two streams, one of them in an amount of 10% of the total flow is introduced into a suspension of crushed grain prepared from 1000 kg of grain and 3000 kg of water together with a solution of bacterial o-amylase, injected dJn dilute phenyl starch, in the amount of 0.8 units, AC per 1 g of starch. The bacterial amylase solution is divided into three doses and at this stage 15% of its total amount is administered. The suspension of crushed grain is boiled at 85 s for 15 min, and then boiled at 130 C for 60 min, cooled before and for further liquefaction of starch, the next dose of 15% solution of bacterial ot-amylase is added at wort pH 5, 5. The diluted liquefied mass is cooled to 55 ° C and, in order to further saccharify the starch, a dose of the remaining bacterial obamylase and glucoamylase is administered in a ratio of 1.5 U AC and 6 IU of Gla. The saccharified wort is kept for 5 minutes, cooled before and hydrolysis is carried out with the cellulolytic complex, setting the remaining dose in the mixture of the wort with bacterial o6-amylase and glucoamylase to 90% of the culture liquid of the fungus Penicillium citreo viride in the amount of 15 U to C and 8 units, C per 1 g cellulose (according to the GDR method) or 8 units. C and 5 units. Sd (by the method of VNIiprB). The culture was grown on a medium whose composition was similar to that described in Example 1. The raw material was hydrolyzed for 30 minutes. The saccharified wort is fermented with yeast for 72 hours. The yield of crude alcohol is increased against the control by 2%. Example 3: 1000 kg barley is mixed with water, boiled at, cooled to 60 ° C, and saccharified by malt enzymes with amylolytic enzymes (16% for starch) or a mixture of microbial preparations of glu1osobatin Gx and glucoendomicopsin Gx (1.5 AU and 6 units, GLA per 1 g of starch). In the process of saccharification of boiled mass, amylolytic enzymes set cellulolytic culture at a dosage of 8 units. C and 5 units. Gkh activity on 1 g of cellulose grown
S7M5826S7M5826
на среде, состав которой аналогиченПри этом выход спирта увеличиваетописанному в предыдущих примерах,с против контрол на 3%.on the medium, the composition of which is similar to this, the alcohol yield increases as described in the previous examples, with versus control by 3%.
только 0,5% препарата целлюлозы за-Предлагаемый способ позвол ет увемеивно 3 чменной шелухи.личить выход спирта на 2-3%.Only 0.5% of the cellulose preparation is per-The proposed method allows for 3 barley husks to detect the alcohol yield by 2-3%.