SU703927A1 - Способ очистки антитоксической иммунной сыворотки - Google Patents

Description

держащ ю 8% белка, развод т до содержани  3% белка и подвергают ферментолизу в присутствии 0,25%-кого иммобилизованного пепсина (процентное содержание фермента указано без веса носител ) в течение 1 ч при рН 3,2 и температуре 22°С и еще 1 ч при той же температуре и рН - 4,2 при непрерывном шутелировании. После ферментолиза иммобилизованный пепсин отдел ют декантацией. Освобожденный от пепсина ферментат сыворотки прогревают при 56°С в течение 45 мин в присутствии 14%-ного сернокислого аммони . Осажденные термолабильные неактивные белки отдел ют центрифугированием. В нейтрализованную надосадочную жидкость добавл ют 20% сухого сернокислого аммони  и выпавший в осадок активный белок диализуют против воды дл  удалени  сернокислого аммони . Отдиализованный раствор белка обрабатывают 30%-ным раствором хлороформа с последующим подкислением до рН 5-5,3. Осадок, состо щий из остаточных продуктов расщеплени  и липоидов , отдел нэт центрифугированием. Освоболеденный от пепсина ферментат сыворотки прогревают при 5б°С в течение 45 минв присутствии 14%-ного сернокислого аммони . Осажденные термолабиль ные неактивные белки отдел ют центрифугированием . В нейтрализованную надосадочную жидкость добавл ют 20% сухого сернокислого аммони  и выпавший в осадок активный белок диализуют против воды. Отдиализованный раствор белка обрабатывают 30%-ным раствором хлороформа с последующим подкислением до рН 5-5,3. Осадок, состо щий из остаточных продуктов расщеплени  и липоидов, отдел ют центрифугированием.

В нейтрализованной надосадочной жидкости (сыворотка «Диаферм-3) определ ют содержание антитоксина, объем и белок . По полученным данным рассчитывают выход антитоксина и его удельную активность (в ME на 0,1 г белка).

Отделенный иммобилизованный пепсин после суточного выдерживани  при 4°С примен ют дл  ферментировани  следующих порций сыворотки (всего 8 раз).

В контрольном опыте в аналогичных услови х ту же исходную сыворотку ферментируют неиммобилизованным пепсином (той же серии, котора  была использована дл  иммобилизации).

Дл  определени  группоспецифического фактора «А в опытных и контрольных сыворотках используют тест торможени  гемагглютинации с применением стандартной сыворотки крови П1 группы и эритроцитов И группы. В каждом из 8 экспериментов реакцию осуществл ют параллельно с. опытной и контрольной сывороткой (разведенных до содержани  белка 3% с последующими разведени ми до 512 раз (10 пробирок).

В таблице приведены характеристики ферментированных антитоксических сывороток , полученных с применением иммобилизованного пепсина при восьмикратном его использовании.

Приведенные данные свидетельствуют о том, что привосьмикратном использовании иммобилизованного пепсина средний выход антитоксина составл ет 53%, а при приме-40 нении неиммобилизованного пепсина 51%. В первом случае получены препараты антитоксических сывороток с более высокой удельной активностью.

Данные реакции торможени  гам агглютинации указывают на практическое отсутствие в ферментированных иммобилизованным иеисином сыворотках фактора «А (агглютинаци  во всех онытах наблюдаетс  с 1-й пробирки, в то врем  как контрольные тормоз т ее до разведений в 128-512 раз).

Claims (2)

1. Способ очистки антитоксической иммунной сыворотки путем ферментолиза, отличающийс  тем, что, с целью получени  препарата, свободного от группоспецифического фактора «А крови, ферментолиз провод т с помощью пепсина, иммобилизованного на модифицированном у-аминопропилтриэтоксисиланом силохроме через глутаровый альдегид при рН 4-4,6.

2. Способ по п. 1, отличающийс  тем, что используют силохром с размером пор 1200-700 А° и содержанием первичных аминогрупп 100-200 мк-экв/г.