SU697522A1

SU697522A1 - Method of isolating inorganic pyrophosphatase from baking yeast

Info

Publication number: SU697522A1
Application number: SU782613650A
Authority: SU
Inventors: Светлана Михайловна Аваева; Алевтина Трофимовна Мевх; Елена Александровна Плаксина; Вера Андреевна Склянкина
Priority date: 1978-05-03
Filing date: 1978-05-03
Publication date: 1979-11-15

Description

(54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ НЕОРГАНИЧЕСКОЙ(54) METHOD FOR ISOLATION OF INORGANIC

ПИРОФОСФАТАЗЫ ИЗ ПЕКАРСКИХ ДРОЖЖЕЙPYROPHOSPHATASES FROM BAKER'S YEAST

Изобретение относитс к ферментной промышленности , а именно к способу выделени неорганической пирофосфатазы из пекарских дрожжей. Известен.способ вьщелени неооганической пирофосфатазы из пекарских -дрожжей, предусматривающий плазмолиз дрожжевых клеток в толуоле, экстракцию водой, фракциош1рование сульфатом аммони , обессоливание и фракционирование спиртом 1. Выход фермента составл ет 12%, активност 645 Е. Наиболее близким к предлагаемому вл ет с способ выделени неорганической пирофосф тазы из пекарских дрожжей, предусматривающи плазмолиз дрожжевых клеток, фракционирование сульфатом аммони , обессолива1ше и хроматографирование на полисахаридном носителе 2. Способ позвол ет получить неорганическую фосфатазус активностью726-790 F, выход фермента составл ет 24%. Целью изобретени вл етс повышение вмхода фермента, а также упрощение процесса выделени . Цель достигаетс тем, что препарат, полученньв1 после плазмолиза дрожжевых клеток в толуоле , экстракдш белков водой, фракцконирова1ш сульфатом аммони и обессолив ани , хроматографируют на полисахаридном носителе, содержащем в качестве боковой цепи алкиламин. Использование такого носител основано на специфическом свойстве неорганической пирофосфатазы из пекарских дрожжей - ее гидрофобнЬсти . Дл повышени удельной активности полученного фермента его подвергают дополнительной очистке гельфильтрацией на ультрагеле А с А 44. Пример. 140 г пекарских дрожжей подвергают плазмолизу в толуоле в течение 4 ч при 40-45° С, прибавл ют 100 мл воды и оставл ют на ночь при 4°С. Водный слой отдел ют и центрифугируют. К надосадочной жидкости прибавл ют сульфат аммо1ш до насыщени 0,5, центрифугируют, осадок отбрасывают, кThe invention relates to the enzyme industry, in particular to a method for isolating inorganic pyrophosphatase from baker's yeast. A known method for separating neooganic pyrophosphatase from baking yeast involves plasmolysis of yeast cells in toluene, extraction with water, fractionation with ammonium sulfate, desalting and fractionation with alcohol 1. The output of the enzyme is 12%, activity is 645 E. The closest to the proposed method is with isolating inorganic pyrophosphate tazy from baker's yeast, involving plasmolysis of yeast cells, fractionation with ammonium sulfate, desalting, and chromatography on a polysaccharide carrier 2. The method allows to obtain inorganic phosphatazus activity 726-790 F, the yield of the enzyme is 24%. The aim of the invention is to increase the input of the enzyme as well as to simplify the isolation process. The goal is achieved by the fact that a preparation obtained after plasmolysis of yeast cells in toluene, extract proteins with water, fractionated ammonium sulfate and desalting, is chromatographed on a polysaccharide carrier containing alkylamine as a side chain. The use of such a carrier is based on the specific property of inorganic pyrophosphatase from Baker's yeast - its hydrophobicity. To increase the specific activity of the resulting enzyme, it is subjected to additional purification by gel filtration on ultra-gel A with A 44. Example. 140 g of Baker's yeast are plasmolized in toluene for 4 hours at 40-45 ° C, 100 ml of water are added and left overnight at 4 ° C. The aqueous layer was separated and centrifuged. Ammonium sulfate was added to the supernatant to saturation 0.5, centrifuged, the precipitate was discarded, to

надосадочной жвдкосга.прибавл ют сульфат аммони до насыщени 0,7. Пол){енльш после центрифугировани осадок обессоливают диализом против 0,025 М трисового буфера, рН 7,2. Обессоленный белок в 1000 мл трисового буфера рН 7,2 нанос т на колонку с 60 мл гексаметилендиаминсефарозы (диаметр колонки 1,5 см). Добавле1ше к элюирующему буферу хлористого натри приводит к десорбции фермента с колонки . Десорбированную неорганическую пирофосфатазу .подвергают гельфильтрации на колонке с ультрагелем А с А 44.supernatant ammonium sulfate was added to saturate 0.7. Paul) {Enlsh after centrifuging the precipitate is desalted by dialysis against a 0.025 M tris buffer, pH 7.2. Desalted protein in 1000 ml of tris buffer pH 7.2 was applied per column with 60 ml of hexamethylenediamine sepharose (column diameter 1.5 cm). Adding more to the eluting buffer sodium chloride leads to desorption of the enzyme from the column. The desorbed inorganic pyrophosphatase is subjected to gel filtration on a column of ultra-gel A with A 44.

Удельна активность полученного препарата 710 Е, выход - 50%.The specific activity of the obtained preparation is 710 E, the yield is 50%.

П р и м е р 2. Способ осуществл ют согласно примеру I, использу в качестве полисахаридного носител ультрагел А с А 44. Хроматогра .фирование провод т в колонке диаметром 1 см с 8 мл ультрагел в 1 мл 0,025 М трисового буфера, рН 7,2.EXAMPLE 2 The method is carried out according to Example I, using ultragel A with A 44 as a polysaccharide carrier. Chromatography is carried out in a 1 cm column with 8 ml of ultragel in 1 ml of 0.025 M tris buffer, pH 7 , 2.

Удельна активность полученного препарата 774 А, выход - 70%. ,The specific activity of the obtained preparation is 774 A, the yield is 70%. ,

Данный способ позвол ет получить неорганическую пирофосфатазу из пекарских дрожжейThis method allows the production of inorganic pyrophosphatase from Baker's yeast.

С ВЫСОКИМ выходом и упростить процесс выделени фермента за счет уменьшени количества стадий.With a high output and simplify the process of enzyme isolation by reducing the number of stages.

Claims

1.Kunitz, M., Archiv of Biochemistry and Biophysie, 1961, 92, 270.

2.Cooperman B.S., Chin N.J., Bruckmann R. Bunick J.J., Mekenna J.B., Biochemistry, 1973, 12 1965.