SU697056A3

SU697056A3 - Method of producing antibiotic complex of lysolipine

Info

Publication number: SU697056A3
Application number: SU762357857A
Authority: SU
Inventors: Ценер Ханс (Швейцария); Драуц Ханнелоре (Фрг); Келлер Вальтер (Швейцария)
Original assignee: Циба-Гейги Аг (Фирма)
Priority date: 1975-05-20
Filing date: 1976-05-18
Publication date: 1979-11-05
Also published as: HU174900B; CH603791A5; ZA762994B; ES448024A1; BE841972A

Description

Цепи спор разветвлены моноподиально и имеют форму тесных равномерных винтов, которые в большинстве случа имеют не более чем 3 витка. Споры эллипсоидны, их ширина примерно О,9.нм и длина примерно 1,2 нм;пове ность ровна . При росте на содержащих пептон питательных средах (пеп-тонжелезный агар) после инкубации в течение нескольких дней не наблюдаетс меланоидного изменени цвета. Штамм, таким образом, не показывает хромогенности, так как он не может образовать тирозиназу. Антибиотик лизолипин получают, выращива при аэробных услови х шта Streptomyces violaceaniger Tii 96 или образующий лизолипин мутант этого штамма в водном питательном раствора, содержащем источник, углерода и азота, а также неорганически соли, пока питательный раствор не покажет значительное антибиотическое действие, и выдел потом антибиотик лизолипин из культурального фильтрата. Образующие антибиотик танты можно получить, например, . при воздействии ультрафиолетовых ил рентгеновских лучей или азотистой горчичных масел-. в качестве источников углерода и прльзуют, например, ассимилируемые углеводы, например, глюкозу, сахаро ру, лактозу, маннит, крахмал, глице рин i В качестве содержащих азот питательных веществ используют аминокислоты , пептиды и протеины, атакж продукты их разложени , например пе тон или триптон, или м сные экстрак ты, водорастворимые доли злаковых зерен, например кукурузы и пшеницы остатков от перегонки при изготовле НИИ алкогол , дрожжей, бобов, в частности соевых сем н, например, хлопчатника и т.д а также аммониевые соли и нитраты. Питательный ра створ может содержать ещё другие неорганические соли, например хлориды , карбонаты, сульфаты, фосфаты щелочных или щелочно-земельных металлов , магни , )йелеза, цинка и марганца. ВЫраидивание провод т в аэробных услови х, например в п6 ко щейс поверхностной культуре, или, предпочтительно , под водой при взбалтывани или перемешивании с воздухом или кислородом в качалочных колбах или известных ферментерах. Пригодна те пература 18-40°с, предпочтительно 27°С. Значительное антибиотическое действие питательный раствор при э в общем показывает через 3-7 дней. Предпочтительно провод т выращивани в некоторых стади х, т.е. сначала приготовл ют одну или некоторые предварительные культуры в жидкой питательной среде, которые потом пересеивают в собственно продуцирующую среду, например, при соотношении 1:20. Предварительную культуру получают, например, путем пересева, полученного примерно 14-дневным выращиванием на питательной среде мицели со спорами в жидкую среду и оставл ют расти в течение 72 ч. Антибиотик содержитс в культуральном фильтрате. Выделение антибиотика из культурального фильтрата осуществл ют по общеизвестным методам , учитыва химические, физические и биологические, в частности, липофильные свойства антибиотика. Из культурального фильтрата можно экстрагировать антибиотик не смешиваемым с водой липофильным растворителем , например уксусным эфиром, углеводородами, такими как циклогексан , бензол, или галогенированными углеводородами, например метиленхлоридом , хлороформом, тетрахлорметаном , тетрахлорэтиленом. Дл очистки получаемого после упаривани растворител сырого продукта можно использовать, например, экстракцию, осаждение, распределение между несмешиваемыми фазами растворител , или адсорбцию, прежде всего хроматографию. Большую долю более липофильных примесей можно удал ть путем экстракции сырого продукта петролейным эфиром. Можно также раствор ть сырой продукт, например , в метаноле и вьщел ть от примесей при помощи адсорбентов, например активного угл , силикагел , силиката магни , окиси алюмини или их смесей,, или адсорбирующих смол, например сшитых декстранов, таких как Сефадекс. Сырой продукт можно очищать, например, путем повторной колоночной хроматографии с применением силикагел , целесообразно с незначительными добавками активированного угл . Антибиотик элюируют предпочтительно по градиентному способу при помощи смесей хлороформа или тетрахлорметана и метанола, прич-ем ступенчато повЕэпиают процентное содержание более пол рного растворител . Вышеуказанное распределение между несмешиваемыми фазами растворител можно также осуществл ть при помощи противоточного распределени в аппаратуре Крейга. Системой растворителей служит, например, смесь хлороформа, циклогексана, метанола и воды. Дл получени отдельных однородных компонентов антибиотика их разделение и выделение можно осуществл ть , например, по методу препаративной тонкослойной хроматографии.Chains of spores are branched monopodially and have the form of tight uniform screws, which in most cases have no more than 3 turns. The spores are ellipsoidal, their width is approximately O, 9. nm, and a length of approximately 1.2 nm; the surface is even. With growth on peptone-containing nutrient media (pep-iron agar), after a few days incubation, no melanoid discoloration is observed. The strain, therefore, does not show chromogenicity, since it cannot form tyrosinase. The antibiotic Lysolipin is obtained by growing under aerobic conditions of the head Streptomyces violaceaniger Tii 96 or forming a lysolipin mutant of this strain in an aqueous nutrient solution containing a source of carbon and nitrogen, as well as inorganic salts, until the nutrient solution shows a significant antibiotic effect, and then the antibiotic is extracted lysolipin from the culture filtrate. Antibiotic-forming tantas can be obtained, for example,. when exposed to ultraviolet silt X-rays or nitrogenous mustard oils. assimilated carbohydrates, for example, glucose, sugar, lactose, mannitol, starch, glycerol i, are used as carbon sources and, for example, amino acids, peptides and proteins, as well as decomposition products such as peton or tryptone, or meat extracts, water-soluble portions of cereal grains, for example, maize and wheat, residues from distillation at alcohol, yeast, beans, in particular soybean seeds, for example, cotton, etc., as well as ammonium salts and nitrates. The nutrient solution may contain other inorganic salts, for example, chlorides, carbonates, sulfates, phosphates of alkali or alkaline earth metals, magnesium, iron, zinc and manganese. Vyraivanie carried out under aerobic conditions, for example in p6 of the external culture of the surface, or, preferably, under water, while stirring or mixing with air or oxygen in a shaker flask or known fermenters. A temperature of 18-40 ° C, preferably 27 ° C, is suitable. A significant antibiotic effect of the nutrient solution when e generally shows in 3-7 days. Growth is preferably carried out in some stages, i.e. First, one or some preliminary cultures are prepared in a liquid nutrient medium, which are then sown in the production medium itself, for example, at a ratio of 1:20. The pre-culture is obtained, for example, by subcultured, obtained by approximately 14-day-growing mycelium with spores in liquid medium in a nutrient medium and allowed to grow for 72 hours. The antibiotic is contained in the culture filtrate. The selection of the antibiotic from the culture filtrate is carried out according to well-known methods, taking into account the chemical, physical and biological, in particular, the lipophilic properties of the antibiotic. An antibiotic can be extracted from the culture filtrate with a water-soluble lipophilic solvent, such as ethyl acetate, hydrocarbons, such as cyclohexane, benzene, or halogenated hydrocarbons, such as methylene chloride, chloroform, carbon tetrachloride, tetrachloroethylene. For purification of the crude product obtained after evaporation of the solvent, for example, extraction, precipitation, distribution between immiscible solvent phases, or adsorption, especially chromatography, can be used. A large proportion of more lipophilic impurities can be removed by extracting the crude product with petroleum ether. It is also possible to dissolve the crude product, for example, in methanol and remove impurities using adsorbents, for example active carbon, silica gel, magnesium silicate, aluminum oxide or their mixtures, or adsorbing resins, for example cross-linked dextrans, such as Sephadex. The crude product can be purified, for example, by repeated column chromatography using silica gel, expediently with minor additions of activated carbon. The antibiotic is eluted, preferably by a gradient method, using mixtures of chloroform or carbon tetrachloride and methanol, and the percentage of the more polar solvent is incrementally measured. The aforementioned distribution between the immiscible solvent phases can also be carried out using countercurrent distribution in a Craig apparatus. The solvent system is, for example, a mixture of chloroform, cyclohexane, methanol and water. To obtain separate homogeneous components of the antibiotic, their separation and isolation can be carried out, for example, by the method of preparative thin-layer chromatography.

Более предпочтительным вл етс разделение при помощи колоночной хроматографии , причем в качестве адсорбента примен ют, например, силикагель с содержанием 1-5% активированного угл , а элюирование предпочтительно провод т по градиентному способу при помощи смеси хлороформа и метанола. Повьицение концентрации менее пол рного растворител целесообразно проводить в маленьких процентных степен х, например 5-20%, хлороформа. Можно работать по непрерывному методу градиентного элюировани . Процесс очистки в соответствующем случае можно повтор ть.Separation by column chromatography is more preferred, with silica gel with 1-5% activated carbon being used as the adsorbent, and elution is preferably carried out by a gradient method using a mixture of chloroform and methanol. It is advisable to carry out the concentration of the less polar solvent in small percentage degrees, for example 5-20%, of chloroform. You can work on a continuous gradient elution method. The cleaning process can be repeated as appropriate.

В тонкослойной хроматограмме на плитках силикагел (силикагель 60, 254) компоненты показывают следую5 щив величины в хлороформе - метаноле (9:1) : X 0,58, 1 0,81, в бензоле метаноле (9:1) : X 0,26, 1 0,30 в хлороформе ацетоне (5:5) j X 0,40, 1 0,53; в бензоле - ацетоне (5;5) : X 0,47, 1 0,74. Дл лиэолипина (I) в опыте серийного разбавлени были найдены следующие минимальные концентрации торможени (МКТ).In the thin-layer chromatogram on silica gel plates (silica gel 60, 254), the components show the following 5 values in chloroform - methanol (9: 1): X 0.58, 1 0.81; in benzene and methanol (9: 1): X 0.26 , 1 0.30 in chloroform acetone (5: 5) j X 0.40, 1 0.53; in benzene - acetone (5; 5): X 0.47, 1 0.74. For Lieolipin (I) in the serial dilution test, the following minimum inhibitory concentrations (MCP) were found.

Таблица 1Table 1

Дпп лизолипина (X) МКТ повышаетс на фактор 10-50.Lysolipin (X) DTP increases by a factor of 10-50.

Компонент (I) лизолипина имеет следующие химические и физические свойства.Component (I) of lysolipin has the following chemical and physical properties.

Он представл ет собой темно-жел-. тое кристаллическое вещество, которое практически нерастворимо в воде и водных кислотах и основани х, в низших алканолах, например метаноле.It is a dark yellow. This is a crystalline substance, which is practically insoluble in water and aqueous acids and bases, in lower alkanols, for example methanol.

этаноле, н-пропаноле, а такжев эфире и петролейном эфире, где оно частично раствор етс . Оно хорошо раствор етс в ацетоне, диметилформамиде , диметилсульфоксиде, уксусном эфире, углеводородах, например циклогексане , бенэоле и галогенированных углеводородахethanol, n-propanol, and also in ether and petroleum ether, where it is partially dissolved. It is highly soluble in acetone, dimethylformamide, dimethyl sulfoxide, acetic ether, hydrocarbons, such as cyclohexane, benole, and halogenated hydrocarbons.

Лизолипин (1) плавитс после кристаллизации из ацетона-эфира при 260-262С с разложением о ff -50,2 (хлороформ). При тонкослойной хроматографии на силикагеле в системе хлороформ-метанол {1-9:1), Rf составл ет 0|6. Элементный анализ: Вычислено, %: С 58,25; Н 4,05; СЕ 5,93; N 2,34,3; ОСИj 15,57. С29Н24СеНО (597,95) Найдено, %: С 58,36 - 58, 30; Н. 4,22 - 4,27; СЕ 6,03; N 2;4&-2 ,38; OCHj 15,43. (ОСНз - определение по Цейзелю).Lysolipin (1) is melted after crystallization from acetone-ether at 260-262C with a decomposition of about ff -50.2 (chloroform). In thin layer chromatography on silica gel in the system chloroform-methanol {1-9: 1), Rf is 0 | 6. Elemental analysis: Calculated,%: C 58.25; H 4.05; CE 5.93; N 2.34.3; OSI 15.57. C29H24SeNO (597.95) Found,%: C 58.36 - 58, 30; N. 4.22 - 4.27; CE 6.03; N 2; 4 & 2, 38; Ochj 15.43. (OSSN - definition of Zeisel).

Молекул рный вес, определенный осмометрией давлени пара в этилацетате , составл ет 536. Микротитраци с 0,1 Н гидроокисью третраметиламмони в метилцеллосольве-воде (8:2) дает эквивалентный вес 545. Титраци с 0,1 Н..НС - нет ступен ( таким образом, атомазота не вл етс основным).The molecular weight determined by osmometry of vapor pressure in ethyl acetate is 536. Microtiter with 0.1 N tert-methylmethmonium hydroxide in methyl cellosolve-water (8: 2) gives an equivalent weight of 545. Titration with 0.1 H..NS - no steps ( thus, atom nitrogen is not essential.

Лизолипин (I) имеет по меньшей мере две ацилируемые гидроксильные группы. Путем более длительного ацетилировани (2 недели при комнатной температуре) получают ди-0-ацетил-лизолипин (1)t который кристаллизуют из ацетона-воды. Получают светло-желтые кристаллы в форме призам с точкой плавлени 216-224°С.Lysolipin (I) has at least two acylated hydroxyl groups. By longer acetylation (2 weeks at room temperature), di-0-acetyl-lysolipin (1) t is obtained which is crystallized from acetone-water. Light yellow prismatic crystals with a melting point of 216-224 ° C are obtained.

Если аЦилирование провод т тольк в течение ночи, как обычно, то получают смесь двух продуктов, очевидно моно- и полиацетат, которые не удаетс разделить путем кристаллизации В масс-спектре этой смеси сигналы по вл ютс при 683 и 681 мае. ед. со значительно уменьшенной интенсивностью . Путём рентгеновской спектрометрии дл компонента I лизолипина была найдена следующа структурна формулаIf the cyclization is carried out only overnight, as usual, a mixture of two products, apparently mono- and polyacetate, is obtained which cannot be separated by crystallization. In the mass spectrum of this mixture, signals appear at 683 and 681 May. units with significantly reduced intensity. By X-ray spectrometry for component I of lysolipin, the following structural formula was found:

ОСИ,OSI,

Cll50 if- 0 СН,Cll50 if- 0 CH,

Лизолипин (х) получают в виде бес цветного аморфного порошка. Он образует лизолипин при нагревании или при облучении ультрафиолетовым светом , в частности, в присутствии каталитического количества кислоты. 0н очень неустойчив в загр зненном состо нии, при хранении на воздухе , в частности при комнатной или повышенной температуре. Не будучи защищенным от вли ни света, он постепенно превращаетс в лизолипин 1, Частичного разделени лизолипина (X и I) можно достигнуть распределением в системе тетрахлорметан-хлороформ-метанол-вода (3,4 : 2,28:4:1 Полученный таким образом почти бесцветный аморфный Порошок лизолипина можно перекристаллизовывать из мтанола . Он разлагаетс при нагревании , начина с 230 С, и имеет оптическое вращение -- -3490 ± 1 (с 1,19 в СНСЕз). Полученное таким образом чистое соединение устойчиво в отсутствии света и кислот. Масс-спектрографический анализ показал , что соединение имеет тот же молекул рный вес и ту же эмпирическую формулу, что и лизолипин (I) и таким образом вл етс изомером лизолипина (I). Дл лизолипина (X) определена следующа структурна формулаLysolipin (x) is obtained in the form of a colorless amorphous powder. It forms lysolipin when heated or when irradiated with ultraviolet light, in particular in the presence of a catalytic amount of acid. It is very unstable in a contaminated state, when stored in air, in particular at room or elevated temperature. Without being protected from light, it gradually turns into lysolipin 1. Partial separation of lysolipin (X and I) can be achieved by distribution in the system of carbon tetrachloride-chloroform-methanol-water (3.4: 2.28: 4: 1). Lysolipin's almost colorless amorphous Powder can be recrystallized from methanol.It decomposes when heated, starting at 230 ° C, and has an optical rotation of -3490 ± 1 (from 1.19 in CHC) .The pure compound thus obtained is stable in the absence of light and acids. Mass spectrographic analysis It was stated that the compound had the same molecular weight and the same empirical formula as lysolipin (I) and thus is an isomer of lysolipin (I). The following structural formula is defined for lysolipin (X)

ОСИз -С1 OSIz-C1

СИчОSicho

В Тонкослойной хроматогра№/1е на силикагеле в системе хлороформаметанола (39:1) Rf 0,22 (Rf лизолипина (I) 0,39).In a thin layer chromatography no. / 1e on silica gel in the chloroform-methanol system (39: 1) Rf 0.22 (Rf of lysolipin (I) 0.39).

Лизолипин и его производные, кроме антибактериального действи , обладает также незначительным действием по отношению к тдрожжеподобным грибам, например Candida aEbicoms, Candida EipoEytica u Saccharamyces cerevisiae. Он действует как против растущих и поко щихс лдакробных клеток, так и против ихLysolipin and its derivatives, in addition to the antibacterial effect, also has a slight effect on yeast-like fungi, for example Candida aEbicoms, Candida EipoEytica and Saccharamyces cerevisiae. It acts against both growing and resting dacrobate cells, as well as against their

сферопластой. Его действие основываетс на торможении синтеза клeтoчp oй стенки. Действие отчасти устра1 етс избытком липидов, например сфинголипидов , фосфоглицеридов, липидовspheroplast. Its action is based on the inhibition of the synthesis of the cell wall. The action is partially controlled by an excess of lipids, for example, sphingolipids, phosphoglycerides, lipids

клеточных стенок бактерий.bacterial cell walls.

Лизолипин и его производные можно примен ть как таковые или вместе с другими тормоз щими синтез клеточной стенки антибиотиками, например пенициллинами , пефалоспоринами, циклосерином , дл борьбы с инфекци ми, вызванными бактери ми вышеуказанного рода, а также в качестве дезинфицирующих средств. Наблюдаетс синергитическое действие с некоторыми антибиотиками, например пенициллинами . Дл получени фармацевтических препаратов антибиотик можно персмаш аать с подход щим дл топического, энтерального или парентерального пр менени неорганическим или органическим наполнителем. Примен ют таки вещества- которые не реагируют с но вым соединением, например желатину молочный сахар, крах.мал, стеарат магни , растительные масла, е екзило спирты или другие наполнители лекарств . Фармацевтические пре-паратг-а Могут, например, иметь вид таблк- . ток, драже, порскака, суппозиториев г или например, растворов,, суспензий эмульсий, кремов или мазей. В соответствующем случае они стерилизованы и/или содержат всгю.мсьгз-тальные вещества, например коксерванть, ста билизаторыс смачиватели или знульга , торы. Они могут также содержать еще другие терапевтически ценные .«ещест saa Дезинфицирующие вещества молшо также известны. образом перемеизивать с подход а0-}1 ди наполнител ми Изобретение по сн етс нижесггедующими примераГШ. Пример .1 Лиоа1.шулу с 5 мл суспензии спор S« vio aceaniger Tii 96 суспендируют в 5 мл 0,2 М фосфат ного буфера с рН 7. В три колбы Эрленмейера с одной отбойной .регородкойр содержащие по 100 мл тательного раствора, который в свою очередь, на 1 л водопроводной во.оэсодержит 4 г дролскевого экстракта10 г солодового экстракта к 4 i глмтсозы и рН которого до стерилизац довод т до 7,3 при помощи 1 н раст вора едкого натра, прививают по 2 мл суспензии Streptorayces и инкуоиругот Е течение суток на вращающейс вибрационной машине (скорость вращени 250 об/ьшн) при , К 25 полученной таким образОхМ культуррл в б колбак Эрленмейера емкостью 2 ,п с 4 отбойными перегородками лрйвиBtiiOT 500 мл вышеуказанного питательного раствора. Колбы затем при 27° С HHKytSHpjfioT на. зравдагощейс вкбрац.иокной мелмке (скорость врадцени 3.20 обДгии) в течение. 48 час-, 0,75 л культуры перенос т i-i фер™ мег-5тер емкостью 50 Лр содержащий 30 л вышеуказанного питатель ого раствора f и .инкубируют Б эгечение суток при , Потом 15 л культуры перенос т в ферментер .300 л . указанного питательного раст.аора, УС.ПОБК.Ч выращивани в ферментере давление 0,5 ати, счокость перемецшБвни 450 об/ми:-5, reMOv-zpaTypa . расход воздуха 1 л/мин.-, Опти.аль.ное образовакке антибиотика лизолипина ПРОИС.ХОДИТ примерно после интсуба-ЦИК в 100 час. Культур ал ьный раствор HMOST рН 7,5, Он в опыте диффузии в агар BaciCCus subtlEis показывает лону подавлени в 14- П р к м ар 2, 600 л полученного по примйру Г культурального раствора фильтруют с прибавлением 2% ФильтроБ 1.пьр.ого вспомсгате.пьного вешестна дизтомоной зем.пи, 560 -л культурального фильтрата довод т до рк 9 при помощи раствора едкого изтра и кд негтрерывном экстракторе ги-сстрагнруют -иксцы хлороформом в соотношении 2:1s Неактивный водный сафииат выбрасывают 600 л х.поро фазь5; концентрируют в вакууме- Получают 290 г сухого остатка иго днг-еркруют 2 л петролейного эфира , HeaKTSiBHHH летролейно-эфкрный зкстракт пс орасквают и нерастворимую часть 5зксу :::йрают s вакууме OcTa йтс 46 г -й.чго-коричкевого полуткэр-дсго ос::г.тта. npKj.iep 3. 2fSr попучен О .г- по примеру 2 сырого хтэоматографкрукгх на. колонке Сефа .пекс LH--.20 (.злкн.пйрованный сшитьй лекстраггэ) , апнна 73 см, j iaweTp 3 см г с :-уторофоглу5ом -метанолом - .1:1 со скоросгы-э 20 мч/час.,- 5 лав ивают gpaKiiHJi 5 .ш, Откосиге ьное содер жанк-з лизолклйна плюсовых фракций определ ют фотоме-грически при 360 нм. Определенкое во фракд лк 40-47 содерт жание лиэолкпнна (I) произвольно счлтают ра.Енкт-5 1 Получает сле.цующее, рпспредделекие Фпакцп I Отггоси тельное содер га- . ние лизол и пи на .1., % Фракци 40--47 из ацетона-эфира .jasoT 416 мг темно-желтых кристаллов л-нолипина (15, т.пл, 260-262°С (с паз южениб -; . Из мaтc :iнык растворов кристаллит зацик и из соседних фракций при повТОРНО .Й ..ро; зтографи,15 на Сефадекс LH - 20 ;лож}зО по.пучить еще 360 мг .ллоэ,Lysolipin and its derivatives can be used as such or together with other antibiotics inhibiting cell wall synthesis, such as penicillins, pephalosporins, cycloserine, to combat infections caused by bacteria of the above genus, as well as disinfectants. Synergistic effects have been observed with some antibiotics, for example penicillins. For the preparation of pharmaceutical preparations, an antibiotic can be permixed with an inorganic or organic filler suitable for topical, enteral or parenteral administration. Substances that do not react with a new compound, such as gelatin, milk sugar, starch oil, magnesium stearate, vegetable oils, ecyl alcohol, or other drug excipients, are used. Pharmaceutical pre-paratha May, for example, be tabl-. current, dragee, poroskak, suppositories g or for example, solutions, suspensions of emulsions, creams or ointments. If appropriate, they are sterilized and / or contain all kinds of substances, for example, coking agent, stabilizers, wetting agents or zalulga, tori. They may also contain other therapeutically valuable ones. “Still saa Disinfectants are also well known. the way to interleave with approach a0-} 1 di fillers The invention is explained below by the examples of GSH. Example .1 Lioa. Shulu with 5 ml of spore suspension S a vio aceaniger Tii 96 is suspended in 5 ml of 0.2 M phosphate buffer with a pH of 7. In three Erlenmeyer flasks with a single baffle containing 100 ml of solution, turn, on 1 liter of tap water, contains 4 g of drolsk extract 10 g of malt extract to 4 i glassozy and whose pH is adjusted to sterilization to 7.3 with 1 n caustic soda solution, inoculate 2 ml of Streptorayces suspension and incubator E during the day on a rotating vibration machine (rotation speed of 250 rev / day) at, K 25 received minutes so obrazOhM kulturrl in Erlenmeyer kolbak b 2, n 4 baffles lryviBtiiOT 500 ml of the above nutrient solution. The flasks are then at 27 ° C HHKytSHpjfioT on. zravdagosheys vkbrats.ioknoy melmke (speed vradzeni 3.20 obDgii) for. 48 hr., 0.75 l of culture transferred i-i fer ™ meg-5ter with a capacity of 50 Lr containing 30 l of the above feed solution f and incubated for a day at, then 15 l of culture were transferred to a fermentor of .300 l. of the specified nutritive rasta.aora, UB.POBK.CH growing in a fermenter pressure of 0.5 MPa, perekotnost shVZhni 450 v / m: -5, reMOv-zpaTypa. air flow 1 l / min., Opti.al.noe obrazivke antibiotic lysolipin LISTING. COMES approximately after an insult CIC at 100 hours Cultures an HMOST pH 7.5 solution, It shows in the diffusion experiment in BaciCCus subtlEis agar a suppression wave in 14–2.0 to 600 ml of the culture solution prepared according to Primrora G with addition of 2% FiltroB 1.f. Aids are supplied with a diztomone zem.pi, 560 -l culture filtrate is brought to pk 9 using a caustic solution and a cd with a continuous extractor is discharged — ixes are chloroform in a ratio of 2: 1s. Inactive aqueous safiyat is released 600 lh.por phase5; concentrated in vacuo- 290 g of dry residue of yoke are dng-emitted 2 liters of petroleum ether, HeaKTSiBHHH light-efcry extract extracts and the insoluble part 5xxy ::: yr s vacuum of OcTa тs 46g ч.Hy-korichkovevym zakutkut yaskut yasku yaskuyu otkryt otsuyu ryutkomut ryutkomut ryutkomut ryutkomut ryutku-zamku ryutkomut komutkomut ryutkomut ryutkomut ryutkomut ryutkomut ryut rykut ут кори : tta. npKj.iep 3. 2fSr popuchen O.g- according to example 2 of the raw htomatographkrukgh on. Seph column. Pex LH -. 20 (. zlkn.pyirovanny stitched lestragge), apnna 73 cm, j iaweTp 3 cm g with: -tophoglu 5 -methanol - .1: 1 with a speed of 20 mth / hour., - 5 The gpaKiiHJi 5 .sh are found; the lag of the lysolcine plus fractions is determined by photomericia at 360 nm. The fraction of lyokolpnna (I) determined in frakd lk 40-47 is arbitrarily calculated. Unk-5 1 Receives the following, predetermined Fpaccp I Excerpt content. lysol and pi on .1.,% Fraction 40--47 from acetone-ether .jasoT 416 mg of dark yellow crystals of l-nolipine (15, m.p., 260-262 ° С (with a groove of judenib -;; mats: inyk solutions crystallizes zajtsi and from neighboring fractions with repetition .y ..ro; ztografiya, 15 on Sephadex LH - 20; lies} ZO, learn another 360 mg. lloe,