SU612958A1 - Штамм 123, несущий ост , сам , ан плазмиды, используемый при биологической очистке воды от нефти и нефтепродуктов - Google Patents

Description

1

Изобретение относитс  к микробиологической промышленности и касаетс  получени  мультиплазмидного штамма, используемого дл  очистки окружающей среды, в частности дл  резорбции пленки нефти и нефтепродуктов в воде.

Известен штамм Pseudornonas aeruginosa РАО, содержаш,ий нлазмиды САМ, ОСТ, NAH, SAL, контролируюш,ие утилизацию углеводородов , используемый дл  микробиологической деградации нефти и нефтепродуктов 1.

Недостатком известного мультиплазмидного штамма Р. aeruginosa РАО  вл етс  низка  скорость утилизации неочишенной нефти.

Исходным штаммом дл  получени  предлагаемого  вл етс  штамм Р. aeruginosa 121, способный утилизировать октан. Этот штамм использован в качестве реципиента дл  внесени  в него методом коньюгационного переноса плазмид биодеградации 2.

Недостатком этого штамма  вл етс  также невысока  скорость утилизации нефтепродуктов .

Целью изобретени   вл етс  получение штамма, способного с высокой скоростью осуществл ть деградацию нефти, мазута и смазочных масел, который может быть использован дл  очистки окрул ающеи среды от загр знений нефтью и нефтепродуктами.

Мультиплазмидный штамм Р. aeruginosa 123 получен путем коньюгационного переноса

в исходный штамм плазмид. Нервное САМ нлазмиды в исходный штамм был осуществлен из штамма Р. putida С. 19. Полученный эксконьюгант обладает способностью утилизировать октан и камфору в качестве единственных источников углерода. Затем в исходный штамм, растущий на октане и камфоре, был внесен NAH плазмид из штамма Р. putida 51, носле чего он приобретает способность деградировать октан, камфору, нафталин и салицилат.

В табл. приведена частота переноса СА.М и NAH плазмид.

На фиг. 1 приведены кривые роста штаммов Р. aeruginosa 121 и 123 на неочищенной нефти.

При выращивании штамма Р. aeruginosa 123 на минеральной среде, содержащей нафталин , камфору, октан, салицилат в концентрации 4 мм, наблюдаетс  увеличение скорости роста (крива  а) по сравнению с ростом на среде, где в качестве источника углеродТаблица

iioro питани  присутствует только один нз перечисленных углеводородов (крива  б).

Штамм Р. aeruginosa 123 хранитс  в коллекции Музе  лаборатории внехромосомной наследственности ИЬФМ АН СССР и имеет следующую характеристику.

Морфологические культуральные признаки.

Клетки пр мые, палочковидные, размеры (2-5}),(0,Ь-0,7) мк. Подвижные монотрихи, грамотрицательные, неспороноснБш.

М со-пептонный агар.

Колонии гладкие бесцветные, край неровный , в среде накапливаетс  пигмент зеленого цвета.

М со-пептоиный бульон.

Образуетс  муть, хлопьевидный осадок и флуоресцирующий пигмент.

На стандартных средах, перечисленных выше , образуетс  пигмент циоцианин.

Картофель. Отмечаетс  хороший рост с образованием слизи.

Физиологические признаки. Аэроб. Растет прн температуре 30-42 С, при 4°С - не растет .

Отношение к сахарам. Использует й-глюкозу , d-фруктозу, d-рибозу, глюконат. Не усваивает трегалозу.

Отношение к углеводородам. Иснользует нафталин, н-алканы, камфору.

Отношение к источникам питани . Ассимилирует аммонийный и нитратный азот.

Нример. Штамм Р. aeruginosa 123 выращивают на минеральной среде следующего состава , г:

10

1

2

0,05

0,01 мг

2 г

0,06 мг

0,3 , мг

3

20 10

0,5

1

В 250 мл колбы внос т 50 мл минеральной среды, 2,5 мл источника углеродного питани  (нефть, мазут и смазочное масло) и клеток (до конечной концентрации 10). Культивирование производ т на качалке при .

Ежесуточно берут пробы, количество /кизнеспособных клеток определ ют высевом разведений на среду М11А. Подсчет колонии осуществл ют через 24 часа. Кривые роста штаммов Р. aeruginosa 121

и 1/;3 на неочищенной нефти демонстрируют разницу в способности деградировать неочищенную нефть у экспериментально полученного штамма и исходного, выражающуюс  в скорости роста (см. фиг. Ij.

Крива  а показывает изменение плотности клеток (количество клеток в мл среды штамма ) штамма Р. aeruginosa 121 во времени при концентрации нефти в 5-ной среде. Крива  б показывает существенное увеличение

скорости роста штамма Р. aeruginosa 123 при наличии САМ, iNAH и ОСТ признаков, контролирующих деградацию алканов, бициклических , полициклоароматических, ароматических углеводородов нефти. Максимальную

плотность клеток bXltl штамм Р. aeruginosa 123 достигает на нефти на третьи сутки, исходный щтамм плотность З-Ш клеток/мм достигает на н тые сутки.

На фиг. 2 представлены ростовые характеристики двух штаммов Р. aeruginosa 121 и 123, утилизирующих мазут, как единственный источник углеродного питани .

Максимальна  плотность клеток штамма Р. aeruginosa 121 на мазуте 5-10 - Ю клеток/мл (крива  а). Крива  б показывает увеличение скорости роста штамма Р. aeruginosa 123 на мазуте п степени его деградации за счет включенных в клетку плазмид биодеградации . Минимальна  плотность клеток штамма Р. aeruginosa 123 на мазуте 10 клеток/мл. За двое суток экспериментально полученный штам Р. aeruginosa i23 осуществл ет резорбцию нефт ной пленки, утилизиру  составные части нефти и мазута.

При сравнении нредлагаемого мультиплазмидного штамма с известными видно, что скорость роста штамма Р. aeruginosa 123 на неочищенной нефти и мазуте значительно превышает скорость роста штамма аналога

Р. aeruginosa РАО, так как штамм Р. aeruginosa РАО нарастает до максимальной плотности за 5-6 суток, а сконструированный нами штамм Р. aeruginosa 123 - за 2-3 суток. Таким образом, характерной особенностью

мультиплазмидного штамма Р. aeruginosa 123,

сконструированного путем коньюгационного переноса плазмид биодеградацни,  вл етс  способность утнлизнровать алканы, ароматические , циклические и полициклическне органические соединени , а также способность деградировать нефть и нефтепродукты с высокой скоростью.

Claims (2)

1. Патент США Ns 3813316, кл. 195-28, опублик. 1974.

25

2. Штамм Pseudomonas aeruginosa 121. Хранитс  в коллекции музе  лаборатории внехромосомной наследственности ИБФМ АН СССР, 1976.

сз 5

tV)

-О

S

Cj

о

S

Q §

.

2.

Врем (дни)

Фиг.1

2.

Врем  (дни.)

Фиг.2.