Claims (2)
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КРИСТАЛЛИЧЕСКОЙ ГУАНИЛРИБОНУКЛЕАЗЫ при диализе против кислого разбавленного буфера, кристаллы фильтруют и раствор ют в буфере с рН 7,5 и затем провод т повторную перекристаллизацию (путем диализа. Пример. Гриб AspergiEEus c Pavcutus № 2654/4 выращивают глубинно в колбах на качалках при 190 об/мин и на среде следующего состава (в %): глюкоза - 5,0, пептон - 1,0, соева мука - 0,5, Нб Оц-ТН О - 0,05, СаСЕ,,2Н2О - 0,01, KHOj - 0,THE METHOD FOR OBTAINING CRYSTALLINE GUANILRIBONUCLEASE during dialysis against an acidic diluted buffer, the crystals are filtered and dissolved in a buffer of pH 7.5 and then recrystallized (by dialysis. Example. AspergiEEus fungus with Pavcutus No. 2654/4 is grown to be grown by dialysis. Example. AspergiEEus fungus with Pavcutus No. 2654/4 is grown deep by dialysis. Example. AspergiEEus fungus with Pavcutus No. 2654/4 is grown deep by dialysis. Example. AspergiEEus fungus with Pavcutus No. 2654/4 is grown deep by dialysis. Example. AspergiEEus fungus with Pavcutus No. 2654/4 grow depth using dialysis. Example. AspergiEEus fungus with Pavcutus No. 2654/4 grow depth using dialysis. Example. AspergiEEus fungus with Pavcutus No. 2654/4 grow depth using a dialysis process, such as AspergiEEus fungus with Pavcutus No. 2654/4, grown deep dialyzed (by dialysis). 190 rpm and on the medium of the following composition (in%): glucose - 5.0, peptone - 1.0, soybean flour - 0.5, Nb Ots-TH 0 - 0.05, SaCE, 2H2O - 0, 01, KHOj - 0,
2. Продолжительность выращивани при посеве од односуточным инокулюмом 3-4 суток. Мицелий отдел ют фильтрованием, белки кативного раствора концентрируюг высаливанием 0,9 насьлценным сульфа том аммони в 50-100 раз (после осаждени провод т отделение осадка центрифугированием при 5000, раствор ют риказу в 0,1 М буфере, рН 7,5 и удал ют нерастворившийс осадок центрифуги рованием) . Затем Провод т хроматогра .фию на колонке с ДЭАЭ-целлюлозой в у фере с нейтральным рН, элюцию провод градиентом NaCE в исходном буфере. Повторную хроматографию провод т в тех же услови х.Элюат, содержащий ри бонуклеазу, концентрируют с помощью высаливани сульфатом аммони или ультрафильтрацией, затем провод т гел фильтрацию, на сефадексе ( Q - Q,i5 или 100) в буфере слабощелочного рН. Фермент кристаллизуют при диализе против кислого разбавленного буфера , кристаллы отфильтровывают и раствор ют в буфере с рН 7,5, затем перекристаллизовывают при тех же услови х Предлагаемый способ получени Кристаллической гуанил-рибонуклеазы позвол ет при использовании отечественного продуцента повысить выход и чистоту целевого продукта, который может быть применен при изучении структуры РНК и белка и механизма действи рибонуклеазы . Формула изобретени Способ получени кристаллической гуанил-рибонуклеазы, предусматривающий культивирование ее продуцента на питательной среде, выделение фермента из фильтрата культуральной жидкости, хроматографию препарата, содержащего фермент, элюирование фермента, повторную хроматографию, высаливание сульфатом аммони , освобождение-от примесей и Кристаллизацию фермента, отличающийс тем, что, с целью повышени выхода и чистоты целевого продукта , в качестве продуцента фермента используют Aa-per-g EBu э cEavatus № 2654/4, а кристаллизацию осуществл IOT диализом против кислого разбавленного буфера с последук цей фильтрацией кристаллов, их растворением в буфере fj повторной перекристаллизацией путем диализа. Источники информации, прин тые вс. внимание при экспертизе: l.Mittato C yfoiaBEisation of TJibonueЕеаье Tj-Jout niaE of Biochemibtr-y № 5, 59, 1966, p. 443-448.2. Duration of cultivation at sowing with one-day inoculum of 3-4 days. The mycelium is separated by filtration, the proteins of the cationic solution are concentrated by salting out 50% to 100-100 times with saline ammonium sulfate (after sedimentation, the precipitate is separated by centrifugation at 5000, dissolved in 0.1 M buffer, pH 7.5 and removed undissolved precipitate centrifugation by panning). Then, chromatography was carried out on a column with DEAE-cellulose in a neutral pH ferrue, eluting with a gradient of NaCE in the original buffer. Re-chromatography was carried out under the same conditions. The eluate containing ribonuclease was concentrated by salting out with ammonium sulfate or ultrafiltration, and then gel filtration was carried out on Sephadex (Q-Q, i5 or 100) in a buffer with weak alkaline pH. The enzyme is crystallized during dialysis against an acidic diluted buffer, the crystals are filtered and dissolved in a buffer of pH 7.5, then recrystallized under the same conditions. The proposed method for the preparation of Crystalline guanyl ribonuclease allows using the domestic producer to increase the yield and purity of the target product, which can be applied in the study of the structure of RNA and protein and the mechanism of action of ribonuclease. The invention method for producing crystalline guanyl ribonuclease, including cultivation of its producer on a nutrient medium, isolation of the enzyme from the filtrate of the culture fluid, chromatography of the preparation containing the enzyme, elution of the enzyme, repeated chromatography, salting out with ammonium sulfate, release from impurities and crystallization of the enzyme, characterized by that, in order to increase the yield and purity of the target product, Aa-per-g EBu etavatus No. 2654/4 is used as an enzyme producer, and crystallization is IOT was dialysis against an acidic diluted buffer, followed by filtration of the crystals, dissolving them in buffer fj by repeated recrystallization by dialysis. Sources of information received by Sun. attention in the examination: l.Mittato C yfoiaBEisation of TJibonueEeee Tj-Jout niaE of Biochemibtr-y No. 5, 59, 1966, p. 443-448.