SU567133A1

SU567133A1 - Способ определени содержани фосфолипидов в сливочном масле

Info

Publication number: SU567133A1
Application number: SU7502128806A
Authority: SU
Inventors: Гелинард Завалунович Якубов; Галина Петровна Браверман
Original assignee: Всесоюзный Научно-Исследовательский Институт Холодильной Промышленности
Priority date: 1975-04-23
Filing date: 1975-04-23
Publication date: 1977-07-30

Description

Изобретение относитс к пищевой промышленности . Известны различные способы определени содержани фосфолипидов в -сливочном масле . Наиболее близким к изобретению решением -поставленной задачи вл етс широко используемый в насто щее врем способ экстракции фосфолипидов из плазмы сливочного масла с последующим хроматографированием экстракта фосфоли идов в тонком слое силикагел . Известный Способ экстракции фосфолипидов заключаетс в следующем. Сливочное масло (80-100 г) расплавл ют при температуре 45°С и отдел ют плазму центрифугированием . Плазму выдерживают при низких положительных температурах и удал ют застывшие частицы молочного жира. Полученную плазму разбавл ют дистиллированной водой, добавл ют последовательно NaCl, концентрированный раствор аммиака, этиловый спирт, смесь петролейного и диэтилового эфиров, встр хивают и отдел ют орга-. ническую фазу. Затем к водной фазе вновь добавл ют этиловый спирт, смесь эфиров, встр хивают и отдел ют органическую фазу. Объединенные экстракты (органическа фаза ) упаривают в вакууме, и полученный концентрат используют дл определени фосфоилидов методом тонкослойной хроматографии . Однако на осуществление такого способа требуютс значительные затраты сливочного масла, реактивов, труда и времени, при отборе плазмы сливочное масло необходимо выдерживать в течение довольно длительного промежутка времени при , что может привести к частичному гидролизу и окислению фоСфолипидов. Известным способом знаетс извлечь не более 90% фосфолипидов сливочного масла. Целью изобретени вл етс интенсификаци процесса, обеспечение полного выделени фосфолипидов и исключение изменени фосфолипидов в процессе анализа. Дл этого по предлагаемому способу навеску сливочного масла раствор ют в хлороформе с получением хлороформного экстракта фосфолипидов с молочным жиром и нерастворимого белкоБО-фосфолиПИДного остатка, на который воздействуют метиловым спиртом дл получени метанольного раствора фосфолипидов с последующим удалением метанола упариванием в вакууме и смешиванием выделенных фосфолипидов с хлороформным экстрактом , полученный объединенный раствор нанос т капилл ром в одну точку на тонкий слой сорбента и затем хроматографируют в системе растворителей, например хлороформ-метанол-аммиак (25%-ный) в соотношении 14:6: 1.

Пример. К 1 г сливочного масла добавл ют 1,3 мл хлороформа, выдерживают в течение 30 мин, фильтруют через бумажный фильтр, Осадок на фильтре промывают 0,5 мл хлороформа и затем отдельно 2 мл метилового спирта, после чего осадок (белок) отбрасывают . Спирт удал ют в вакууме при комнатной температуре, и к остатку приливают хлороформный экстракт. Объем смеси довод т до 2 мл хлороформом.

Полученный хлороформный раствор фосфолипидов и молочного жира используют дл определени содержани фосфолипидов. С этой целью 100 мкл раствора нанос т стекл нным капилл ром (внутренний диаметр 0,5 мм, длина 40 мм) в одну точку в виде п тна (диаметр не более 12 мм) на хроматографическую пластину с тонким слоем силикагел КСК (200 меш).

Дл приготовлени хроматографической пластины (12X18 см) тонкий слой из смеси силикагел (6,0 г), гипса (0,3 г) и воды (15 мл) высушивают на воздухе в течение 24 час, активируют 40 мин при 105°С. При нанесении хлороформного раствора липидов сливочного масла на тонкий слой силикагел КСК фосфолипиды прочно сорбируютс в точке нанесени , в то врем как нейтральные липиды (молочный жир) образуют п тно значительно большего диаметра из-за их легкой растворимости в хлороформе. При последуюш ,ем хроматографировании в системе растворителей нейтральные липиды отдел ютс от старта и передвигаютс с фронтом системы, а фосфолипиды в этой системе образовывают четкие компактные п тна, соответствующие

отдельным фракци м фосфолипидов. Хроматографию осуществл ют в системе хлороформ-метанол-25%-ный аммиах (14:6:1 по объему).

После хроматографического разделени

пластину про вл ют реактивом Баськовского и Костецкого, с которым только фосфолипиды дают синие продукты реакции. Про вленные хроматограммы подвергают фотоденсито .метрированию дл определени содержани

суммы и отдельных фракций фосфолипидов. Следует от.метить, что хроматограммы можно использовать и дл определени содержани фосфолипидов другим путем, т. е. экстракцией фосфолипидо-в из силикагел с последующим

определением липидного фосфора сжиганием. Результаты определени содержани фосфолипидов в сливочном масле по известному и предлагаемому способам приведены в таблице .

Среднее значение ± стандартное отклонение (из п ти опытов).

Примечание. Определение фосфолипидов по обоим способам производ т после хроматографии экстракта фотоденсиметрическим методом.

Из представленных данных видно, что при определении содержани фосфора известным и предложенным способами большее извлечение фосфолипидов (на 25-35%) наблюдаетс при использоваиии предложенного способа. Отсюда следует, что при использовании известного способа истинное содержание фосфолипидов удаетс определить лишь с большой ошибкой.

На чертеже представлены результаты тонкослойной хроматографии на силикателе КСК фоофолипидов сливочного масла:

I- сладкосливочное масло, фосфолипиды определены известным способом;

II-сладкосливочное масло, фосфолипиды определены предложенным способом;

III- «кресть нское сливочное масло, фосфолипиды определены известным способом;

IV- «кресть нское сливочное масло, фосфолипиды определены предложенным способом;

1-6 - кефалин, лецитин, сфингомиелин, серинфосфатид, инозитфосфатид, фосфатидные кислоты соответственно.

При использованпи известного способа выделени фосфолипиды частично разрушаютс , поскольку, помимо основных фракций, на хроматограмме вы вл ютс продукты их частичного разрушени (фосфатидные кислоты). В то же врем при использовании предложенного способа продукты изменени фосфолипидов на хроматограмме не обнаруживаютс (см. чертеж).

Claims

Формула изобретени

Способ определени содержани фосфоли65 пидов в сливочном масле, предусматривающий извлечение фосфолипидов с истгользованием хлороформа и метилового спирта и тонкослойную хроматографию выделенных фосфолипидов на силикателе, отличающийс тем, что, с целью ускорени и повышени точности анализа, навеску сливочного масла раствор ют в хлороформе с получением хлороформного экстракта фосфолипидов с мо .лочным жиром и нерастворимого белковофосфолипидного остатка, на который воздействуют Метиловым спиртом дл получени метанольного раствора фосфолипидов с последующим удалением метанола упариванием в вакууме и смешиванием выделенных фосфолипидов с хлороформным экстрактом, а полученный объединенный раствор нанос т капилл ром в одну точку на тонкий слой сорбента и затем хроматографируют в Системе растворителей , например хлороформ-метанол-аммиак 25%-ный в соотношении 14:6: 1.

- . X .