Claims (2)
Изобретение относитс к способам актТа нации тромболитических препаратов и может быть применена в медицине, фармакологии, физиологии. Известен способ активации плаэминогенй стрептокиназой, выделенной из гемолитичео кого стрептококка, путем введени фермента в организм, либо смешением его с плаз- миногеном IJ. Однако плазминоген, полученный извест ным способом, обладает повышенной токсичкостью . С целью снижени токсичности плазминогена по предлагаемому способу в качестве ш тйватора примен ют препарат протеолитических ферментов, выделенных из гриба TpnchottieciuTn t seafnФермент Tnichottieciuw розеитп примен ют дл активации плазмнногена в активный фибринолитический фермент - плазмин. Дл этого смешивают 4%-ный раствор фермента с таким, же раствором плазминогепа в соотношении 1:1 - 1:7 и инкубируют при 2228 С в теченне 2-х ч. Пример 1. Активацию плазминогена в организме животных провод т путем введени препарата из Tcictioiljeciutn roseUttt I внутривенно в количестве 15 мг на 200 г веса животных. До введени и спуст 10 мин после введени определ ют фибринолитическую активность крови , котора возрастает благодар активации. естественного плазминогена в русле крови. Дл определени кровь центрифугируют 10 мин при 2ООО об/мин с охлаждением. Плазму осторожно отбирают. Из плазмы получают эугл обули новую фракцию, дл чего 0,2 5 мл плазмы добавл ют к 4 мл дистиллированной воды, подкисленной до рН 5, 3%-ной уксусной кислотой. Смесь оставл ют при комнатной Tetvmepaiype на Ю мин. После центрифугировани при тех же услови х надосадоччую жидкость сливают, остатки жидкости удал ют фильтровальной бумагой. К осадку добавл ют 0,25 мл О,01%-ного тетрабората натри и раствор ют в течеш е 4О мин йри комнатной температуре. В полученном растворе эуглобулинов определ ют активаторную активность по разчо(;ти зон лизиса га прогретых и непрогретых фибриновых пластинках, нанос т 0,03 мл испытуемого раствора, получают большие по величине зоны лизиса на непрогретыу фибриновых пластинках вследствие наличи в них плазминогена , который активируетс в присутствии препарата из Тр;- oseoтп Пример This invention relates to methods for the actation of a nation of thrombolytic drugs and can be applied in medicine, pharmacology, physiology. A known method for the activation of plasminogenic streptokinase, isolated from hemolytic streptococcus, by introducing the enzyme into the body, or by mixing it with the plasminogen IJ. However, plasminogen obtained by a known method has a high toxicity. In order to reduce the toxicity of plasminogen by the proposed method, a preparation of proteolytic enzymes isolated from the fungus TpnchottieciuTn t seafn is used as a styvator. The Tnichottieciuw rozeitp enzyme is used to activate plasminnogen to the active fibrinolytic enzyme plasmin. For this, a 4% enzyme solution is mixed with the same plasmin solution in the ratio 1: 1-1: 7 and incubated at 2228 ° C for 2 hours. Example 1. Activation of plasminogen in the organism of animals is carried out by administering the preparation from Tcictioiljeciutn roseUttt I intravenously in an amount of 15 mg per 200 g of animal weight. Before administration and 10 minutes after administration, the fibrinolytic activity of the blood is determined, which increases due to activation. natural plasminogen in the bloodstream. To determine, the blood is centrifuged for 10 minutes at 2 ° C rpm with cooling. Plasma is carefully taken. A new fraction is obtained from the plasma eugl, for which 0.2 5 ml of plasma is added to 4 ml of distilled water, acidified to pH 5 with 3% acetic acid. The mixture is left at room Tetvmepaiype for 10 minutes. After centrifugation under the same conditions, the supernatant is drained, and the remaining liquid is removed with filter paper. 0.25 ml of 0.01% sodium tetraborate is added to the precipitate and dissolved in a 4O min at room temperature. In the resulting euglobulin solution, the activator activity is determined by razoch (; these lysis zones of heated and unheated fibrin plates, 0.03 ml of the test solution is applied, large lysis zones are obtained on the cold fibrin plates due to the presence of plasminogen, which is activated in the presence of a drug from Tr; - oseoot Example
2. Активййию плазминогена вне организма получают при инкубации смеси плазмичогена с раствором трихолизина , {препарата из TMctiothuciu-m PoSeurrt}, Полученна смесь приобретает способность пиэировать образованные сгустки фибрина. К 4 МП 4%-ного очищенного раствора плазминогена добавл ют Э, 5 мл растsopa трихолизина. Смесь инкубируют в течение , 30 мин при 24-28°С при рН 7,2 7 ,6. Затем 0,2 мл активированного плазминогена смешивают с 0,2 мл 0,03%-ного раствора фибриногена и 0,1 мл тромбина и 0,3 мл физиологического раствора. Смесь помещают в вод ную баню при 37°С, в течение 5-7 мин наблюдают растворение сгуст ка, В случае использовани неактивированного плазмцногена раствогание сгустка не происходит, а при испол1 зовании смеси трихолизина без плазминогена растворение сгустка происходит в течение 40 мин, Предлагаемый способ вл етс простым и эффективным и позвол ет проводить активацию плазминогена в организме и вне его и не оказывает побочного действи на животных . Формула из -Обретени Способ активации плезминогена с помощью протеолитических ; эрментов микробного происхождени ,; отличающийс тем, что, с целью снижени токсичности , в качестве активатора примен ют препарат протеолитических ферментов, выделенных из гриба Tfidio.heciu-m roseurnИсточники информации, прин тые во внимание при экспертизе: 1. Atrr. I-CoirdioB. 6,2, I960, с. 387.2. Activating plasminogen outside the body is obtained by incubating a mixture of plasmicogen with a solution of tricholysin, {a preparation from TMctiothuciu-m PoSeurrt}, The resulting mixture acquires the ability to peirovat the formed fibrin clots. E, 5 ml of tricholysin raspopa is added to 4 MP of a 4% purified solution of plasminogen. The mixture is incubated for 30 minutes at 24-28 ° C at a pH of 7.2-7.6. Then 0.2 ml of activated plasminogen is mixed with 0.2 ml of a 0.03% fibrinogen solution and 0.1 ml of thrombin and 0.3 ml of saline. The mixture is placed in a water bath at 37 ° C, a clot dissolution is observed for 5-7 minutes. In case of using non-activated plasmacytogen, clot dissolution does not occur, and when using a tricholysin mixture without plasminogen, clot dissolution occurs within 40 minutes, Proposed method is simple and effective and allows for the activation of plasminogen in and outside the body and does not have a side effect on animals. Formula from —Application Plasminogen activation method using proteolytic; germs of microbial origin,; characterized in that, in order to reduce toxicity, the preparation of proteolytic enzymes isolated from the fungus Tfidio.heciu-m roseurn is used as an activator. Sources of information taken into account during the examination: 1. Atrr. I-CoirdioB. 6.2, I960, p. 387.