Claims (2)
Папочки размером 1,5-6x1 мк, вибриоидные , почкующиес . Поко ща с стади - экзоспоры Б виде пузырька на полюсе, противоположном полюсу со жгутиком. Начальна стади спорул ции-виброидна . Клетки образуют розетки, капсулы, подвижные в молодом возрасте, грамм-отрицательные. Цвет колоний белый, водорастворимого пигмента не образуют. Колонии плотные, гладкие, край ровный размером до 2 мм. Культура непатогенна . При росте в жидкой среде с перемешиванием образует кольцо на стенках колбы. Бактерии облигатно растут на метане, не растут на среде с 0,1% метанола и на богатых органических средах: м сопептонный агар (МПА); м сопептонный агар, приготовленный на м сном бульоне, разбавленном Б 10 раз (МПА 1/10); сусло-агар и агар с разбавленным в 10 раз суслом. Культура лучше использует аммонийную форму источника азота, не растет на среде без азота. Температура роста 33°С. MethvEosinus tfidiosponuTn voir- posaceus Палочки размером 3,5-1,5x1 мк образуют розетки. Поко ща с стади - экзоспоры . Начальна стади спорул ции-грушевидна . Клетки в молодом возрасте подвижны , грамм-отрицательны, непатогенны.Пигмент колоний бледно-розовый, водораствори мого пигмента не образуют. Культура выживает в отсутствии метана , не нуждаетс в частных пересевах. Потребность в метане облигатна , на богатых органических средах роста нет, не растет на среде с 0,1% метанолй. Используют аммонийную форму источника азота, на среде без азота не развиваетс , хорошо растет при 30-32°С. ПРИ 38°С ррста нет. tovot)0icterium gdsotvpicuTn штамм 1. 2-6-суточна культура при росте на минеральной среде Бугинелла-Гааса (БГА) с ме таном образует одиночные неподвижные палочки размером 1,5-3x0,6 мк, не образующие ветвлений. На картофельной среде в односуточной культуре клетки длиннее, слегка искривленные , размером 3-4x0,6 мк, реже длиною до 7 мк, в п тисуточной культуре на этой среде клетки станов тс короче и толще, располага сь по двое или редко в цепочках, грамм-отрицательные, некислотоустойчивые. Колонии на среде БГА с метаном округлые, с ровным краем, выпуклые, гладкие, диамет ром 0,5 мм, плотные вначале кремовые, затем станов тс светло-желтыми. Растет на среде с метанолом и на богатых органических средах, не растет на среде с 0,11% метанола. Усваивает вышесто щие гомо логи метана: этан,пропано-бутановуюфракцию Хорошо растет как на среде Ср - 1 с глюкозой и капустном агаре, так и на среде БГА-метан. На МПА, дрожжевом и почвенном агаре слабо вырастает на седьмые сутки, на картофельном агаре - через 20 час. Консистенци на Ср-1 с глюкозой слизиста , на остальных средах пастообразна . Пигмент на всех средах светло-желтый, кроме дрожжевого агара, на котором он не образуетс . Цвет среды не измен ют. Желатин не разжигает , молоко не измен ет, восстанавливает нитраты до нитритов. Сероводород, аммиак и индол не образует. Растет на галактозе , сахарозе, декстрине без образовани кислоты; образует кислоту при росте на глюкозе, арабинозе, мальтозе и слабо на манните, не растет на лактозе. Хорошо раатет на этаноле и не растет на метаноле. Слабо усваивает соли уксусной, пропионовой , щавелевоуксгуской, лимонтюй, блочной, щавелевой и велериановой кислот; не растет на сол х муравьиной кислоты. В дальнейшем способ по сн етс примерами . Пример 1.В ферментер объемом Юле эжекционной системой аэрировани ввод т 6 л питательной среды, содержащей в 1 л водопроводной воды (в г): ( . /AgSO 0,0048 CuSOi -SHyO 0,0043 рН питательной среды поддерживают автоматически непрерывным добавлением 10%ного раствора N аОН. Смесь приводного газа с воздухом в соотношении 1:3 в количестве 10 л/л-мин непрерывно подают в ферментер, неутилизированную смесь вывод т на ферментера. Среду в ферментере засевают смешанной культурой 1-7О,выделенной в процессе непрерывного культивировани из смеси четырех накопительных культур, представл ющей собой симби- отическую смесь четырех микроорганизмов: Mei)ivBosinys tr-ictiospopiuTTj van posaceufls штамм 5, PEavobacteriom goisotypicuTTi штамм 1, Meilrvfococcus ccrpsueoftus штамм 2, MeHivfosi-nus SpOClUTn VOrr. 1TlCO OPO(iuS , Инокул том служит биомасса, полученна в предыдущих опытах. Исходна концентраци биомассы в ферментере 5 г/л. Через 20 час периодическое го культивировани при рН 6,7 и температуре 33°С получают 20 г/л сухой биомассы с содержанием белка 65%. Пример Daddies 1.5-6x1 microns in size, vibrioid, budding. The stage from the stage is exospores B as a bubble at the pole opposite to the pole with a flagellum. The initial stage of sporulation is vibroid. Cells form rosettes, capsules, motile at a young age, gram-negative. The color of the colonies is white, water-soluble pigment does not form. Colonies are dense, smooth, the edge is even in size to 2 mm. Culture is non-pathogenic. With growth in a liquid medium with mixing, it forms a ring on the walls of the flask. Bacteria grow obligately on methane, do not grow on a medium with 0.1% methanol and on rich organic media: m-septone agar (MPA); m of septon agar prepared in sleeping broth diluted B 10 times (MPA 1/10); wort agar and agar with wort diluted 10 times. The culture makes better use of the ammonium form of the nitrogen source, does not grow on a medium without nitrogen. Growth temperature 33 ° С. MethvEosinus tfidiosponuTn voirposaceus Chopsticks 3.5-1.5 x1 microns in size form sockets. Peace from stage - exospores. The initial stage of sporulation is pear-shaped. Cells at a young age are motile, gram-negative, non-pathogenic. A pale pink colony pigment does not form a water-soluble pigment. The culture survives in the absence of methane, it does not need private reseeding. The need for methane is obligate, there is no growth on rich organic media, it does not grow on a medium with 0.1% methanol. The ammonium form of the nitrogen source is used, does not develop on a medium without nitrogen, grows well at 30-32 ° C. AT 38 ° C there is no rrst. tovot) 0icterium gdsotvpicuTn strain 1. A 2-6-day culture with growth on the Buginella-Haas mineral medium (BHA) with methane forms single, fixed sticks, 1.5-3x0.6 microns in size, not forming branches. In a potato environment, in a one-day culture, the cells are longer, slightly curved, 3-4x0.6 microns in size, less often up to 7 microns, in a five-day culture on this medium, the cells become shorter and thicker, arranged in twos or seldom in chains, gram -negative, non-acid-resistant. The colonies on the BHA environment with methane are rounded, with a smooth edge, convex, smooth, 0.5 mm in diameter, thick creamy at first, then turn light yellow. It grows on medium with methanol and on rich organic media, does not grow on medium with 0.11% methanol. Assimilates higher homologues of methane: ethane, propane-butane fraction Grows well on Cp-1 medium with glucose and cabbage agar, and on BHA-methane medium. On MPA, yeast and soil agar grows weakly on the seventh day, on potato agar - after 20 hours. Consistency on Cp-1 with mucosal glucose, past-paste on other media. The pigment on all media is light yellow, except for yeast agar, on which it is not formed. The color of the medium does not change. Gelatin does not inflame, milk does not change, restores nitrates to nitrites. Hydrogen sulfide, ammonia and indole does not form. It grows on galactose, sucrose, dextrin without the formation of acid; forms acid with growth on glucose, arabinose, maltose and weakly on mannitol, does not grow on lactose. It is good in ethanol and does not grow in methanol. Poorly assimilates the salts of acetic, propionic, oxalo-Oxus, limonium, block, oxalic and velerianic acids; does not grow on formic acid salts. In the following, the method is illustrated by examples. Example 1. In a Üle fermenter, an ejection aeration system was injected with 6 liters of nutrient medium containing 1 liter of tap water (in g): (. / AgSO0.0048 CuSOi -SHyO 0.0043 pH of the nutrient medium was maintained automatically by continuous addition of 10% N aOH solution. A mixture of a feed gas with air in a ratio of 1: 3 in an amount of 10 l / l-min is continuously fed to a fermenter, the unutilized mixture is taken to a fermenter. The medium in the fermenter is seeded with a mixed culture of 1-7 O. from a mixture of four cumulative ku This is a symbiotic mixture of four microorganisms: Mei) ivBosinys tr-ictiospopiuTTj van posaceufls strain 5, PEavobacteriom goisotypicuTTi strain 1, Meilrvfococcus ccrpsueoftus strain 2, MeHivfosi-i-isuspicpicuTus I optus I tufiocopuscotus 2, MeHivfosi-i-o-thiopopiuctuTuTiTiTiPiTiTiTiTiTy 1TlCO OPO (iuS, Inoculum serves as the biomass obtained in previous experiments. The initial biomass concentration in the fermenter is 5 g / l. After 20 hours of periodic cultivation at pH 6.7 and a temperature of 33 ° C, 20 g / l of dry biomass is obtained with protein 65%. Example
2. В 1О-Л ферментер, указанный в примере 1, ввод т 6 л питательной среды, содержащей в л водопроводной во ды (в г): Н РО , KCt InSOjj-THj O 0,ОО29 MnSO|,-(HjO Си SO. -ffHiO 0,0054 О,ОО29 в процессе ферментации непрерывно осу ществл ют подачу смеси природного газа и воздуха в количестве 10 л/л-мин в соот нощении 1:3 и вывод неутилизированной газовой смеси, подачу питательных солей и отбор суспензии бактерий из ферментера В ферментере поддерживают рН на уров не 6,7 непрерывным добавлением 10%-ного раствора N аОН; температура культивировани 33°С, Исходна концентраци биомассы в ферментере 10 г/л сухого веса . После 1-2-часового выращивани культуры в периодическом режиме начинают непрерывное культивирование со скоростью протока среды, равной 0,13 час концен рации биомассы 11 г/л сухой биомассы и содержании белка 75%. Пример З.В 2ОО-Л ферментер с эжекционной системой аэрировани ввод т 100 л питательной среды того же состава ;что и во втором примере, и засевают сме45 щенной культурой 1-7О в количестве, соответствующем исходной концентрации сухой биомассы в ферментере 5 г/л. В ферментер подают 10 л/л мин газовой смеси, состо щей из 25% природного газа и 75% воздуха . Температура ферментации 33°С, рН поддерживают добавлением 10%-ного раствора МаОН на уровне 6,7. В периодическом процессе в течение 5 час концентраци биомассы достигает 10 г/п АСВ. После этого начинают непрерывное культивирова1ше сначала с коэффициентом разбавлени среды, равным 0,05 час ; по мере увеличени концентрации биомассы уменьщают врем пребывани ; при скорости протока 0,13 концентраци сухой биомассы 11 г/л. Формула изобретени Способ получени биомассы путем выращивани симбиотической культуры бактерий на питательной среде с газообразными углеводородами и необходимыми дл роста минеральными сол ми, отличающийс тем, что, с целью увеличени выхода биомассы, в качестве симбиотических культур бактерий используют видыMet}lV ococcas capsuEatus щтамм 2, Mettiylosfnus sporiutTi van iTTCoEofatus штамм 4, Melhvtosinus tricliosporiuTTi var.rosaceus щтамм 5, TlavobixcteriuTn fa oivpicuTn штамм 1.2. In the 1O-L fermenter specified in Example 1, 6 l of nutrient medium containing in l tap water (in g) are injected: H PO, KCt InSOjj – THj O 0, OO29 MnSO |, - (HjO Cu SO . -ffHiO 0.0054 O, OO29 during the fermentation process, the mixture of natural gas and air is continuously supplied in an amount of 10 l / l-min in a ratio of 1: 3 and the output of the unutilized gas mixture, the supply of nutrient salts and the selection of a suspension of bacteria from fermenter The fermenter is maintained at a pH of 6.7 by continuous addition of a 10% aqueous solution of N AON; the cultivation temperature is 33 ° C. The initial biomass concentration fermenter 10 g / l dry weight. After 1-2 hours of growing the culture in a batch mode, start continuous cultivation at a flow rate of the medium equal to 0.13 hour concentration of biomass of 11 g / l dry biomass and protein content 75%. Example Z. In a 2OO-L fermenter with an ejection aeration system, 100 l of nutrient medium of the same composition were injected, as in the second example, and seeded with a 1-7O mixed culture in an amount corresponding to the initial concentration of dry biomass in the fermenter of 5 g / l. 10 l / l of a gas mixture consisting of 25% natural gas and 75% air is fed to the fermenter. The fermentation temperature of 33 ° C, the pH is maintained by adding a 10% aqueous solution of NaOH at the level of 6.7. In a batch process over 5 hours, the biomass concentration reaches 10 g / p DIA. After that, continuous cultivation is started first with a dilution factor of 0.05 hour; as the concentration of biomass increases, the residence time decreases; at a flow rate of 0.13, the dry biomass concentration is 11 g / l. The invention of the method of obtaining biomass by growing a symbiotic culture of bacteria in a nutrient medium with gaseous hydrocarbons and mineral salts necessary for growth, characterized in that, in order to increase the yield of biomass, species of Methylcar ococcas capsules of Symma 2, Mettiylosfnus are used as symbiotic cultures of bacteria. sporiutTi van iTTCoEofatus strain 4, Melhvtosinus tricliosporiuTTi var.rosaceus strain 5, TlavobixcteriuTn fa oivpicuTn strain 1.