SU459227A1

SU459227A1 - The method of obtaining lymphocytosis stimulating substance

Info

Publication number: SU459227A1
Application number: SU1838355A
Authority: SU
Inventors: Иван Андреевич Безвершенко; Марина Георгиевна Бойко; Римма Георгиевна Лукашова; Вадим Алексеевич Малыжев
Original assignee: Киевский научно-исследовательский институт эндокринологии и обмена веществ
Priority date: 1972-10-18
Filing date: 1972-10-18
Publication date: 1975-02-05

Description

1one

Изобретение относитс к производству лекарственных препаратов.The invention relates to the manufacture of drugs.

Известен способ получени лимфоцитозстимулирующего вещества путем гомогенизации тимуса, ультрадбНтрифугИ(роваН|И , добавлени ацетона, гельхраматографин, лиофилизации. Однако указанный способ имеет сложную технологию производства и не обеспечивает высокого качества целевого продукта.A known method for producing a lymphocytostimulating substance by homogenizing the thymus, ultradifferent (brovah | And, adding acetone, gelchromatograph, lyophilization. However, this method has a complicated production technology and does not provide the high quality of the target product.

Дл упрощени технологии и повышени качества продукта по предлагаемому способу гомогенат диализуют с последующей хроматографией диализата на анионите, например, Дауэксе 1X1 в летучем буфере, например амм ,иачно-ацетатнО:М, в интервале рН 10 - 3.To simplify the technology and improve the quality of the product according to the proposed method, the homogenate is dialyzed followed by chromatography of the dialysate on an anion exchanger, for example, Dowax 1X1 in a volatile buffer, for example amm, acetal-O: M, in the pH range 10-3.

Пример. Иавеску тимуса тщательно измельчают с помощью электрической м сорубки ,и заливают трем объемами 0,15М. NaCl. Гомогенат помещают в целлофановые трубки, примен емые в м сомолочной промыщленности , и укладывают в стекл нную или эмалированную металлическую посуду. При этом объем гомогената лимитируетс только налич ,ием целлофановых трубок и объемом посуды . Концы целлофановых трубок зажимают любым зажимом или зав зывают. Пространство между трубками заливают 1,5 объемамиExample. Thyme lavage is thoroughly minced with an electric m cutter, and poured with three volumes of 0.15M. NaCl. The homogenate is placed in cellophane tubes used in the dairy industry, and placed in glass or enameled metal dishes. At the same time, the volume of the homogenate is limited only by the presence of plastic tubes and the volume of dishes. The ends of the cellophane tubes are clamped with any clip or tied. The space between the tubes is filled with 1.5 volumes

(но отнощению к. тимусу) 0,3 М NaCl. Диализ при 4°С длитс 1-2 суток. При этом лимфоцитозстимулирующее вещество тимуса переходит в раствор.(but with respect to thymus) 0.3 M NaCl. Dialysis at 4 ° C lasts 1-2 days. When this lymphocytostimulating substance of the thymus goes into solution.

Из 0,3 М раствора NaCl осаждают лимфоцитозстимулирующий фактор 10-кратным объемом охлажденного ацетона. Осадок, содержащий лимфоцитозстимулирующий фактор, собирают на бумажном фильтре. Дл более полной очистки диализат (0,3 М раствор NaCl), в которо м содержитс лимфоцитозстимулирующий фактор, развод т 0,05 М аммиачно-ацетатным буфером рН 9 (1:1) и сорбируют анионитом Дауэкс 1X1 в ацетатной форме (двойной объем диализата по отнощению к набухщему Дауэкс в ацетатной форме, уравйовещенному 0,1 М аммиачно-ацетатным буфером). Сорбци длитс 6-12 час. После сорбции жидкость отсасывают на воронке. Промывают Дауэкс буфером рН 9 (трехкратным объемом), после чего Дауэкс заливают тем же буфером при рН 3 (объем элюирующего буфера 1 : 1 по отнощению к. набухщему Дауэкс 1X1) и элюируют 6-12 час при помещивании . Элюат отсасывают на воронке, лиофилизируют и промывают ацетоном. С помощью электрофореза в полиакриламидно.м 3 гел-е вы вл етс одна основ1на и две слабовыраженные фракции. Лимфоцитозстимулирующа активность дрепарата выражаетс в увеличении абсолютного количества лимфоцитов в периферической5 крови и ув-еличенЕИ селезенки. В культуре клеток селезеаии под вли нием препарата происходит интенсивное бластообразование. Препарат также усиливает иммунологичеокую реактивность лимфодитов, что выражаетс вю усилении реакции бластообразовани в смешанной культуре клеток селезений. 4 Предмет изобретени Способ получени лимфоцитозстимул рующето .вещества путем гомогенизации тимуса, осаждени , очистки, лиофилизации, о тли ч ающййс тем, что, с целью упрощени технологии и повышени качества целевого продукта , гомогенат диалйзуют с последующей хро матографией диализата на а нио-ните, например Дауэксе 1X1 в летучем буфере, например аммиачйо-ацетатном, в интервале рН .From a 0.3 M solution of NaCl, lymphocytostimulating factor is precipitated with a 10-fold volume of cooled acetone. Sediment containing lymphocytosis-stimulating factor is collected on a paper filter. For a more complete purification, dialysate (0.3 M NaCl solution) containing lymphocytostimulating factor is diluted with 0.05 M ammonium acetate buffer pH 9 (1: 1) and adsorbed with Dowex 1X1 anion exchange resin in acetate form (double dialysate volume in relation to the swelling Dowex acetate form, equilibrated with 0.1 M ammonium acetate buffer). Sorbtsi lasts 6-12 hours. After sorption, the liquid is sucked off on a funnel. Wash Dowex with pH 9 buffer (three times volume), after which Dowex is poured with the same buffer at pH 3 (volume of elution buffer 1: 1 relative to swellable Dowex 1X1) and eluted for 6-12 hours upon placement. The eluate is sucked off on a funnel, lyophilized and washed with acetone. By electrophoresis in polyacrylamide m 3 gel-e, one major and two mild fractions are detected. The lymphocytosis-stimulating activity of dreparate is expressed in an increase in the absolute number of lymphocytes in the peripheral blood5 and the magnification of the spleen. In the cell culture of spleiosis, under the influence of the drug, intense blast formation occurs. The drug also enhances the immunological reactivity of lymphodites, which is expressed in terms of the vu enhancement of the blast formation reaction in the mixed culture of spleen cells. 4 Subject of the invention. A method for producing lymphocytostimulant substances by homogenizing the thymus, precipitating, purifying, lyophilizing, or using the fact that, in order to simplify the technology and improve the quality of the target product, the homogenate is dialyzed with subsequent dialysate chromatography, for example, Dowex 1X1 in a volatile buffer, for example ammonium acetate, in the pH range.