SU415299A1

SU415299A1 - METHOD FOR DETERMINING THE CONDITION OF IMMUNITY TO KORI

Info

Publication number: SU415299A1
Application number: SU1712515A
Authority: SU
Original assignee: Л. М. Трубина, Ф. Яковенко , Е. М. Захарченко; Одесский научно исследовательский институт вирусологии , эпидемиологии И. И. Мечникова
Priority date: 1971-11-01
Filing date: 1971-11-01
Publication date: 1974-02-15

Description

Изобретение относитс к области медицины и касаетс способов-определени состо ни иммунитета к кори.This invention relates to the field of medicine and concerns methods for determining the state of immunity to measles.

Известен способ определени состо ни иммунитета к кори путем определени титра вирусспецифических антител в крови привитых . Однако наличие антител в крови не отражает истинного состо ни иммунитета к кори.There is a method for determining the state of immunity to measles by determining the titer of virus-specific antibodies in the grafted blood. However, the presence of antibodies in the blood does not reflect the true state of immunity to measles.

Целью предлагаемого способа вл етс повышение продолжительности индикации состо ни иммунитета.The aim of the proposed method is to increase the duration of indication of the state of immunity.

Поставленна цель достигаетс тем, что из крови выдел ют лейкоциты, воздействуют на них гомологичным вирусом и определ ют их способность синтезировать интерферон.This goal is achieved by leukocyte secretion from the blood, acting on them with a homologous virus and determining their ability to synthesize interferon.

Дл получени лейкоцитарного интерферона готов т культуру или взвесь лейкоцитов . Из прокола иальца в стерильную пробирку , содержащую 0,2-0,3 мл раствора гепарина (400-500 ед/лл), собирают 0,5-0,7 мл крови. После отстаивани в течение 1-1,5 час при комнатной температуре надосадочный слой нлазмы е лейкоцитами перенос т в центрифужные пробирки и лейкоциты отдел ют от плазмы центрифугироваиИем при 1000 об/лшн в течение 10-12 л««. Осадок лейкоцитов соедин ют с вирусом кори (штамм СССР-58) из расчета 1-5 ТЦДбо вируса на 1 лейкоцит. После полуторачасового контакта при 37°С осадок лейкоцитов ресуспен ируют в питательной среде 199 с 10% бычьей сыворотки и добавл ют 3-4 капли осадка эритроцитов.To obtain leukocyte interferon, a culture or suspension of leukocytes is prepared. From a puncture of a Yaletsa in a sterile tube containing 0.2-0.3 ml of heparin solution (400-500 u / l), 0.5-0.7 ml of blood is collected. After settling for 1-1.5 hours at room temperature, the supernatant layer of nlasma and leukocytes is transferred into centrifuge tubes and the leukocytes are separated from the plasma by centrifugation at 1000 rev / l for 10-12 liters. Leukocyte sediment is associated with the measles virus (strain USSR-58) at the rate of 1-5 TC of the virus per 1 leukocyte. After an hour and a half of contact at 37 ° C, the leukocyte sediment is resuspended in nutrient medium 199 with 10% bovine serum and 3-4 drops of erythrocyte sediment are added.

Дл приготовлени культуры лейкоцитовFor preparing a leukocyte culture

к полученной взвеси добавл ют еще фитогемагглютинин плп солевой экстрат фасоли.phytohemagglutinin plp salt extract of beans is added to the resulting suspension.

Содержимое флаконов встр хивают сразуThe contents of the vials are agitated immediately.

ж« после соединени всех ингредиентов, а з.атем черз 30 .мин, 24, 48 и 72 час инкубировани при 37°С.g “after combining all the ingredients, and then pour over 30 minutes, 24, 48 and 72 hours of incubation at 37 ° C.

На третьи сутки из культуры или взвеси лейкоцитов выдел ют жидкую фазу, обрабатывают ее 40%-ньп1 раствором сол ной кислоты до рН 2,0-2,5, а через 1-3 суток восстанавливают рН до 7,0-7,3 с помощью 40%-ного раствора едкого натра.On the third day, the liquid phase is separated from the culture or suspension of leukocytes, treated with its 40% n1 solution of hydrochloric acid to pH 2.0-2.5, and after 1-3 days the pH is restored to 7.0-7.3 s using a 40% aqueous solution of caustic soda.

Дл титровани интерферона двукратные разведени его по 0,5 мл разливают в пенициллиновые флаконы с монослоем клеток рН или первичных фибробластов человека, посе нных за 3 суток до начала титровани в объеме 1,5 мл но 100-150 тыс. клеток. Через 6 час инкубации интерферон сливают и в каждыйFor titration of interferon, its double dilution of 0.5 ml is poured into penicillin vials with a monolayer of pH cells or human primary fibroblasts, cultured 3 days before the start of titration in a volume of 1.5 ml but 100-150 thousand cells. After 6 hours of incubation, interferon is poured into each

флакон внос т по 1,5 мл поддерживающей среды, содержащей в 1,5 мл вирус осповакцины в дозе, кoтGipa через 24 час на монослое клеток об.р азует от 30 до 60 бл ше к. Че;рез 24 час среду из флаконов сливают, а монослой окрашивают фуксином Цил в разведе34the vial is injected with 1.5 ml of supporting medium containing 1.5 ml of vaccinia virus in a dose that Gipa after 24 hours on a monolayer of cells develops from 30 to 60 minutes before the Che. After 24 hours, the vials are drained from the vials , and monolayer stained with Fuchsin Zil

НИИ 1:2-1:4 в течение 2-5 мин, ополаски-Предмет изобретени SRI 1: 2-1: 4 for 2-5 minutes, rinsing-The subject invention

вают водой и производ т подсчет бл шек. - -...water and the counts are calculated. - -...

1 рупные и мелкие бл шки отчетливо высту- Способ определени состо ни иммунитета пают на красном фоне неповрежденных кле- к кори путем исследовани крови, отличаюток . За титр интерферона принимают. то„,.ег.О-,..л.а.йс тел1,:-Що..с..целью повышени продолнаибольшее ра-эвед-енее, которое пода вл ет н-а жительности индикации состо ни иммуните50% размножение вируса по сравнению с та, выдел ют лейкоциты, воздействуют на них контрольным и необработанным интерферо- гомологичным вирусом и определ ют их споном .собность синтезировать интерферон.1 Small and small plaques distinctly protrude. The method of determining the state of immunity is fallen against the red background of intact measles to measles by means of a blood test, which distinguishes it. For interferon titer take. This ",. er.O -, .. l.a.is tel1,: - Scho..s .. to increase the continuation of the greatest range, which gives the indication of the status of immunity50% virus reproduction in comparison with ta, leukocytes are isolated, the control and untreated interferomologous virus is affected by them, and their ability to synthesize interferon is determined by their spon.

415299 415299