SU314356A1

SU314356A1 -

Info

Publication number: SU314356A1
Application number: SU1259048A
Authority: SU
Inventors: Анаклето Мингетти Туллио Скотти Селестино Спалла Алба Мариа Амичи; фнрма Сосиета Фармацеутики Итали Иностранна

Description

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АЛКАЛОИДОВ СПОРЫНЬИMETHOD OF OBTAINING ALKALOIDS OF SPORNEY

Изобретение относитс к медицине.This invention relates to medicine.

Известен способ получени алкалоидов спорыньи путем глубинной ферментации культуры рода Claviceps в аэробных услови х на питательной среде, содержащей источНИКИ углерода, азота и минеральные соли при температуре до 30°С и кислой среде, с последующим выделением целевого продукта .A known method for producing ergot alkaloids by deep fermentation of a culture of the genus Claviceps under aerobic conditions on a nutrient medium containing sources of carbon, nitrogen and mineral salts at temperatures up to 30 ° C and an acidic medium, followed by isolation of the target product.

Предложенный способ характеризуетс использованием штамма Claviceps purpurea F. I. 32/17.The proposed method is characterized by the use of the Claviceps purpurea F strain. I. 32/17.

Штамм Clnvicep.s purpurea Г. . 32/17 выделен из спорыньи в стадиии поко , собранной на колось х ржи близ Брунико (Бользано). The strain Clnvicep.s purpurea G. 32/17 isolated from ergot in the stage of rest, collected on the ears of rye near Brunico (Bolzano).

Мицелий молодых культур состоит из гифов диаметром 2,5-4 мк с мало заметными перегородками. Молодые гифы обычно не имеют ветвей. Растущие гифы ветв тс , и перегородки станов тс более отчетливыми, гифы утончаютс , и диаметр их получает значительное искривление, обусловленное наличием клеток различных диаметров. Врем от времени гифы разрываютс на уровне перегородок и образуют искривленные фрагменты , которые про вл ют свойства автоспор. В зависимости от состава среды щтамм F. .The mycelium of young cultures consists of hyphae 2.5-4 microns in diameter with slightly noticeable partitions. Young hyphae usually have no branches. The growing hyphae of the branches of the TC, and the partitions become more distinct, the hyphae thin out, and their diameter gets a significant curvature due to the presence of cells of different diameters. From time to time, hyphae break at the level of partitions and form curved fragments that exhibit autospore properties. Depending on the composition of the medium shtamm F..

32/17 образует или не образует конидии, которые имеют правильную овальную форму размером от 2,5-3,5 до 5,3-6,5 мк.32/17 forms or does not form conidia, which have a regular oval shape in size from 2.5-3.5 to 5.3-6.5 microns.

Штамм Claviceps purpurea F. I. 32/17 выращивают глубинным методов в аэробных услови х на питательной среде, содержащей источники азота, углерода и минеральные соли . Источниками углерода могут служить глюкоза, сахароза, декстрин, сорбит, маннит, глицерин, лимонна кислота, нтарна кислота , а источником азота - аммишс, аспарагин , пептон, творожные гидролизаты, дрожжевой экстракт, м сной экстракт, соева мука , соли аммони , например азотнокислые, сернокислые или хлориды. Минеральными сол ми вл ютс хлориды, нитраты, карбонаты, сульфаты, фосфаты щелочных металлов, магни , железа, цинка и марганца.The strain Claviceps purpurea F. I. 32/17 is grown by deep-seated methods under aerobic conditions on a nutrient medium containing sources of nitrogen, carbon and mineral salts. Carbon sources can be glucose, sucrose, dextrin, sorbitol, mannitol, glycerin, citric acid, succinic acid, and nitrogen source - ammonia, asparagine, peptone, cottage cheese hydrolysates, yeast extract, meat extract, soy flour, ammonium salts, for example nitric acid , sulphate or chlorides. Mineral salts are chlorides, nitrates, carbonates, sulfates, phosphates of alkali metals, magnesium, iron, zinc and manganese.

Пример 1. Исходную культуру, выращенную на скосе питательной среды, содержащей глюкозу 40 г, (NH-OaHPO,, 5 г, К-НР04 1 г, MgS04-7H2O 2,5 г, КС1 0,5 г, Ре5О4-7И2О 10 мг, ZnS04-71 20 10 мг, агар-агар 18 г, дистиллированную воду до 1000 см, высевают на скос аналогичной среды, выдерживают в течение 8 дней при 28°С. Полученную таким образом культуру высевают в колбы объемом ЗОО мл, в каждой из которых находилось по 50 с.из SC среды (глюкоза 80 г, пептон 16 г, водопроводна вода до 1000 мл, рН 5,9. Колбы выдерживают в течение 4 дней нри 24°С во вращающемс аппарате при непрерывном встр хивании, скорость вращени 220 об/лшн. От полученных таким способом культур 10% высевают в колбы объемом 300 мл со средой (сахароза 60 г, глицерин 60 см, глюкоза 80 г, дрожжевой экстракт 0,1 г лимонна кислота 15 г, КС1 0,125 г, К2НРО4 0,5 г, MgS04-7H2O 0,5 г, FeS04-7H2O 7 мг, ZnSO4-7H2O 6 мг, дистиллированна вода до 1000 мл). Колбы 13 дней выдерживают. Содержание смеси алкалоидов в культуре составл ло 2000Y мл, в которой эрготамина 48% и эргокриптипа 52%. Пример 2. Содержимое 120 колб с титром 2000-2500 Y см соедин ют и полученные 5 л культуры отфильтровывают. Фильтрат и мицелий экстрагируют порознь. Фильтрат при рН 9 экстрагируют дважды 3 л хлороформа (каждый раз). Хлороформ откачивают при 20-30°С до 1/5 первоначального объема и экстрагируют 2%-ным водным раствором нтарной кислоты. Мицелий смешивают с 50 /оным водным ацетоном, содержащим 2в/о нтарной кислоты, и отфильтровывают. Фильтрат при рН 9 экстрагируют хлороформом. Экстракт и фильтрат сливают, упаривают до небольщого объема и осаждают гексаном. Полученный сырой продукт раствор ют в 13 см лед ной уксусной кислоты и добавл ют к нему метанол в количестве ПО смз. Далее добавл ют 5%-ный раствор серной кислоты в метаноле в количестве 13 см, и реакционную массу выдерживают в течение ночи при 3°С. Маточную жидкость концентрируют в атмосфере азота при пониженном давлении до малого объема. Остаток разбавл ют водой и нри рН 9,5 экстрагируют хлороформом . Экстракт концентрируют в вакууме при 30°С до малого объема и пропускают через колонку с 400 г силикагел в хлороформе. Элюируют с помощью хлороформа эргокриптин , который упаривают досуха. Остаток раствор ют в бензоле, вз том в соотнощении 1 :20, и концентрируют до 1/4 исходного объема. Реакционную массу оставл ют на ночь при 5°С. При этом получают 4,8 г эргокриптина. При продолжительном элюировании из силикагел хлороформом с 4% метанола получают другие фракции, выход которых при испарении досуха составл л 0,7 г. Предмет изобретени Способ получени алкалоидов спорыньи, например эрготамипа и эргокриптина, путем глубинной ферментации культуры рода Claviceps в аэробных услови х на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли при температуре до 30°С и кислой среде, с последующим выделением целевого нродукта, отличающийс тем, что используют щтамм Claviceps purpurea F. . 32/17.Example 1. The original culture grown on the bevel of a nutrient medium containing glucose 40 g, (NH-OaHPO ,, 5 g, K-NR04 1 g, MgS04-7H2O 2.5 g, KC1 0.5 g, Fe5O4-7I2O 10 mg, ZnS04-71 20 10 mg, agar-agar 18 g, distilled water up to 1000 cm, sown on the bevel of the same medium, incubated for 8 days at 28 ° C. The culture thus obtained is sown in flasks with a volume of 30 ml, each containing of which there were 50 c. of SC medium (glucose 80 g, peptone 16 g, tap water up to 1000 ml, pH 5.9. Flasks were kept for 4 days at 24 ° C in a rotating apparatus with continuous shaking Spine of rotation 220 vol / ln. From 10% cultures obtained in this way, seeded into 300 ml flasks with medium (sucrose 60 g, glycerin 60 cm, glucose 80 g, yeast extract 0.1 g citric acid 15 g, KC1 0.125 g, K2HPO4 0.5 g, MgS04-7H2O 0.5 g, FeS04-7H2O 7 mg, ZnSO4-7H2O 6 mg, distilled water (up to 1000 ml) .The flasks are kept for 13 days .The mixture of alkaloids in the culture was 2000Y ml, in which ergotamine 48% and ergo cryptype 52%. Example 2. The contents of 120 flasks with a titer of 2000-2500 Y cm were combined and the resulting 5 l of culture was filtered. The filtrate and mycelium are extracted separately. The filtrate at pH 9 is extracted twice with 3 l of chloroform (each time). Chloroform is pumped out at 20–30 ° C to 1/5 of the initial volume and extracted with a 2% aqueous solution of succinic acid. Mycelium is mixed with 50 / aq aqueous acetone containing 2b / o succinic acid, and filtered. The filtrate at pH 9 is extracted with chloroform. The extract and the filtrate are drained, evaporated to a small volume and precipitated with hexane. The resulting crude product is dissolved in 13 cm of glacial acetic acid and methanol is added to it in the amount of 0.1 cm. Next, add a 5% solution of sulfuric acid in methanol in an amount of 13 cm, and incubate the reaction mixture overnight at 3 ° C. The mother liquor is concentrated in a nitrogen atmosphere under reduced pressure to a small volume. The residue is diluted with water and extracted at pH 9.5 with chloroform. The extract is concentrated in vacuo at 30 ° C to a small volume and passed through a column with 400 g of silica gel in chloroform. Chloroform ergocryptin is eluted and evaporated to dryness. The residue was dissolved in benzene at a ratio of 1:20, and concentrated to 1/4 of the original volume. The reaction was left overnight at 5 ° C. This gives 4.8 g ergocryptin. With continued elution from silica gel with chloroform with 4% methanol, other fractions are obtained, the yield of which upon evaporation to dryness was 0.7 g. Subject of the invention a medium containing carbon, nitrogen and mineral salts at temperatures up to 30 ° C and an acidic medium, followed by isolation of the desired product, characterized in that Claviceps purpurea F. is used. 32/17.