SU1720004A1 - Способ определени альбумин-глобулинового коэффициента крови - Google Patents
Способ определени альбумин-глобулинового коэффициента крови Download PDFInfo
- Publication number
- SU1720004A1 SU1720004A1 SU904784560A SU4784560A SU1720004A1 SU 1720004 A1 SU1720004 A1 SU 1720004A1 SU 904784560 A SU904784560 A SU 904784560A SU 4784560 A SU4784560 A SU 4784560A SU 1720004 A1 SU1720004 A1 SU 1720004A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- plasma
- serum
- albumin
- dye
- blood
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 25
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 title claims abstract description 15
- 239000008280 blood Substances 0.000 title claims abstract description 15
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 10
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 claims abstract description 8
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 claims abstract description 7
- 239000013068 control sample Substances 0.000 claims abstract 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims abstract 3
- PSZYNBSKGUBXEH-UHFFFAOYSA-N naphthalene-1-sulfonic acid Chemical compound C1=CC=C2C(S(=O)(=O)O)=CC=CC2=C1 PSZYNBSKGUBXEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 abstract description 6
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 abstract description 5
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 abstract description 5
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 abstract description 3
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 abstract description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 abstract description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 abstract description 2
- YUTXDZUWGIJPGX-UHFFFAOYSA-N 8-amino-7-phenylnaphthalene-1-sulfonic acid Chemical compound C1=CC2=CC=CC(S(O)(=O)=O)=C2C(N)=C1C1=CC=CC=C1 YUTXDZUWGIJPGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 abstract 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 208000037581 Persistent Infection Diseases 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
Abstract
Изобретение, относитс к медицине, а именно к клинической биохимии, и касаетс определени альбумин-глобулинового коэффициента (АГК) в плазме или сыворотке крови. Цель изобретени - упрощение способа пр.и одновременном повышении его чувствительности. Кровь, плазму и сыворотку развод т буферным раствором/, отдел ют (в случае крови) форменные элементы, добавл ют флуоресцентный .краситель фенил-1-амино-8-сульфонафталин (АНС), измер ют интенсивность собственной флуоресценции в исследуемом и контрольном образцах до и после добавлени АНС и рассчитывают величину АГК по формуле. В качестве контрольного образца используют раствор триптофана. Дл проведени анализа по описанному способу достаточно 2- 40 мкл крови или 1-20 мкл плазмы или сыворотки (т.е. чувствительность возрастает на 1-2 пор дка), нет необходимости в проведении раздельного определени количества альбумина и глобулинов. Врем анализа одной пробы по предлагаемому способу .1-2 мин. сл
Description
Изобретение относитс к медицине, а точнее к клинической биохимии, и касаетс определени альбумин-глобулинового коэффициента (АГК) в плазме или сьГворотке крови с диагностической целью. АГК - величина , выражающа отношение количества альбуминов к количеству глобулинов в биологических жидкост х. В норме АГК крови колеблетс в пределах 1,2-2,0. При разнообразных патологических состо ни х (хронические инфекции, заболевани печени, почек, ожоги, воспалени и т.д.) наблюдаетс снижение АГК крови - и это служит важным диагностическим признаком.
Цель изобретени -упрощение способа при одновременном повышении его чувствительности . .
Способ осуществл етс следующим образом .
. Пробу крови развод т в 50-1000 раз, отдел ют форменные элементы, из полученного раствора плазмы готов т четыре пробы , в которых измер ют интенсивность флуоресценции (ее величины обозначены как Е:, Б, С и Д) и рассчитывают АГК по формуле
АГК
Е -D Б -С
К-2
(D.
где Е - интенсивность собственной флуоресценции разбавленной плазмы;
Б-тоже, в присутствии М-фенил-1-ами- но-8-сульфонафталина (АНС) в конечной концентрации 20-60 мкМ;
С - интенсивность флуоресценции 10- 50 мкМ раствора триптофана;
Д-то же в присутствии 20-60 мкМ АНС; . К-числовой коэффициент, который при средней концентрации АНС 40 мкм составл ет величину 2,13.
Коэффициент К св зан с концентрацией АНС следующим уравнением: .
К 2,25(1 -0.0013 Н).
где Н - концентраци АНС в мкМ.
Обычно используют концентрацию АНС 40 мкМ, и в уравнени х расчета АПК используют коэффициент, равный 2,13. В интервале концентраций 20-60 мкМ даже при использовании посто нного коэффициента (2,13) ошибка определени АПК находитс в пределах ±7%. Если же использовать переменный коэффициент, то значени АГК получаютс практически одинаковые. Результаты приведены в таблице.
В предлагаемом способе можно также использовать цельную плазму или сыворотку , которую перед измерени ми необходи- мо развести в 100-2000 раз (это соответствует разведению крови в 50-1000 раз).
Дл проведени анализа в зависимости от степени разведени достаточно 2-40 мкл крови, или 1-20 мкл сыворотки или плазмы (в известном способе - 110 мкл). Это повышает чувствительность по сравнению с известным способом в 5-110 раз. При дальнейшем разведении снижаетс сигнал, а следовательно, и точность измерени . Разведение крови менее, чем в 50 раз нецелесообразно , так как требует большего объема крови, и, следовательно, приводит к снижению чувствительности способа.
АНС используетс в способе в качестве тушител собственной флуоресценции альбумина . Конечна концентраци АНС в анализируемой пробе 20-60 мкМ, оптимальна концентраци - 40 мкМ.
В предлагаемом способе с целью стандартизации процедуры анализа используетс раствор триптофана (10-50 мкМ). Измерени интенсивности флуоресценции в растворе триптофана дл каждого конкретного прибора и измерительной кюветы достаточно провести один раз. Врем проведени одного анализа с момента получени разбавленной плазмы или сывбротки - 1-2 мин.
Приме р 1. В 30 образцах плазмы по предлагаемому способу было определено
соотношение альбумин/глобулин. С этой целью к 5 мкл плазмы каждого образца добавл ют 1 мл буферного раствора следующего состава: трмс-(оксиметил)-аминометан 10 мМ, ЭДТА 2 мМ, №CI 145 мМ, рН 7,4,
0 измер ют интенсивность флуоресценции . разбавленной плазмы до (Е) и после (Б) добавлени 40 мкМ АНС. Измер ют интенсивность флуоресценции 40 мкМ раствора триптофана до (С) и после (Д) добавлени 40
5 мкМ АНС. По формуле (1) и К 3.13 рассчитывают значени АГК. Среднее значение в труппе составило 1.40. Измерени провод т при следующих услови х: длина волны возбуждени 285 нм, длина волны флуоресцен0 ции 340 нм, рассто ни между внутренними поверхност ми пр моугольной кюветы 1 см. Параллельно в этих образцах крови вычислены значени АГК с помощью известного способа среднее значение 1,41). Коэффици5 ент коррел ции между данными обоих способов составл ет 0,92. При изменении концентрации АНС на 10 мкМ (25%) и использовании посто нного коэффициента К 2,13 определ емое значение АГК измен ет0 с на 0,05 единиц (3-4%). Следовательно, небольшие вариации в концентрации АНС слабо повли ют на точность анализа. Коэффициент (К) в уравнении (1) зависит от концентрации АНС и при 40 мкМ равен 2,13.
5 Если ввести поправку на концентрацию, то точность способа будет еще выше.
Предлагаемый способ позвол ет значительно упростить и ускорить определение АГК. Проведение одного анализа (вместо двух
0 в известном способе)с использованием одного флуоресцентного красител (вместо набора реактивов ) приводит к упрощению способа, а сокращение времени инкубации красител с образцом с 35-70 мин (в изеест5 ном способе) до 0,5-1,0 мин (в предлагаемом способе)- к сокращению времени анализа до 1-2 мин. При этом происходит значительна экономи красител - дл проведени анализа требуетс в 10 раз меньшее количество
0 красител , чем дл определени альбумина по известному способу.
Кроме того, повышаетс чувствительность анализа по сравнению с известным способом в 5-110 раз за счет использовани
5 микроколичества крови (2-40 мкл),
Положительные эффекты достигаютс
без уменьшени точности определени АГК.
Claims (1)
- Формула изобретениСпособ определени альбумин-глобулинового коэффициента крови, включающийполучение плазмы или сыворотки крови, добавление к ней красител с последующим анализом оптических свойств исследуемого и контрольного образцов, отличающий- с тем, что, с цельюупрощени способа при одновременном повышений его чувствительности , в качестве красител используют М-фенил-1-амино-8-сульфонафталинв концентрации 20-60 Mxlvf, измер ют интенсивность собственной флуоресценции в контрольном образце, содержащем триптофан , и в исследуемом образце, содержащем сыворотку или плазму до и после добавлени красител , а альбумин-глобулиновый коэффициент рассчитывают по формуле Е -Д.АГКБ -СК-2.где АГК - альбумин-глобулиновый коэффициент;Е - интенсивность собственной флуо- ресценции плазмы или сыворотки крови;Б-интенсивность флуоресценции плазмы или сыворотки в присутствии красител ;С - интенсивность флуоресценции кон- трольного образца, содержащего триптофан; ;:.. ; . -...- : . . .Д - флуоресценци образца, содержащего триптофан в присутствий красител : К - числовой коэффициент, завис щий от концентрации красител .
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU904784560A SU1720004A1 (ru) | 1990-01-18 | 1990-01-18 | Способ определени альбумин-глобулинового коэффициента крови |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU904784560A SU1720004A1 (ru) | 1990-01-18 | 1990-01-18 | Способ определени альбумин-глобулинового коэффициента крови |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU1720004A1 true SU1720004A1 (ru) | 1992-03-15 |
Family
ID=21492662
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU904784560A SU1720004A1 (ru) | 1990-01-18 | 1990-01-18 | Способ определени альбумин-глобулинового коэффициента крови |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| SU (1) | SU1720004A1 (ru) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001053829A1 (en) * | 2000-01-18 | 2001-07-26 | Council For The Central Laboratory Of The Research Councils | Lipoprotein assay |
| RU2253115C2 (ru) * | 2003-05-22 | 2005-05-27 | Клемин Виктор Александрович | Способ определения общего белка, белковых фракций и липидных компонентов сыворотки крови |
| MD4054C1 (ru) * | 2009-11-06 | 2011-02-28 | Государственный Медицинский И Фармацевтический Университет "Nicolae Testemitanu" Республики Молдова | Метод определения способности ишемически модифицированного альбумина к связыванию кобальта |
-
1990
- 1990-01-18 SU SU904784560A patent/SU1720004A1/ru active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Лабораторные методы исследовани в клинике /Под ред. В. В. Меньшикова. М.: Медицина, 1987, с. 174-176. * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001053829A1 (en) * | 2000-01-18 | 2001-07-26 | Council For The Central Laboratory Of The Research Councils | Lipoprotein assay |
| US7211441B2 (en) | 2000-01-18 | 2007-05-01 | Council For The Central Laboratory Of The Research Councils | Lipoprotein assay |
| RU2253115C2 (ru) * | 2003-05-22 | 2005-05-27 | Клемин Виктор Александрович | Способ определения общего белка, белковых фракций и липидных компонентов сыворотки крови |
| MD4054C1 (ru) * | 2009-11-06 | 2011-02-28 | Государственный Медицинский И Фармацевтический Университет "Nicolae Testemitanu" Республики Молдова | Метод определения способности ишемически модифицированного альбумина к связыванию кобальта |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Booker et al. | Enzymatic immunoassay vs. gas/liquid chromatography for determination of phenobarbital and diphenylhydantoin in serum | |
| Luxton et al. | A micro-method for measuring total protein in cerebrospinal fluid by using benzethonium chloride in microtiter plate wells. | |
| Heller et al. | A simplified assay for porphyrins in whole blood | |
| Peele Jr et al. | Semi-automated vs. visual reading of urinalysis dipsticks. | |
| US5197017A (en) | Potentiophotometric fibrinogen determination | |
| Schifman et al. | Measurement of near-normal concentrations of erythrocyte protoporphyrin with the hematofluorometer: influence of plasma on" front-surface illumination" assay. | |
| Levinson et al. | Measuring hemoglobin in plasma by reaction with tetramethylbenzidine. | |
| Grandjean et al. | Erythrocyte-Zn-protoporphyrin as an indicator of lead exposure | |
| Hiraoka et al. | Studies in histochemistry, LXXI. Measurement of protein in millimicrogram amounts by quenching of dye fluorescence | |
| Ramieri Jr et al. | New method for rapid determination of carboxyhemoglobin by use of double-wavelength spectrophotometry | |
| US4448889A (en) | Fluid analysis | |
| Van Lente et al. | Evaluation of a nephelometric assay for haptoglobin and its clinical usefulness. | |
| SU1720004A1 (ru) | Способ определени альбумин-глобулинового коэффициента крови | |
| US3558278A (en) | Determination of albumin | |
| US4511651A (en) | Reagent composition and assay for the determination of γ-glutamyltransferase activity | |
| Nakamichi et al. | Acrylamide-gel electrophoresis of hemoglobins | |
| Peake et al. | Bilirubin measured on a blood gas analyser: a suitable alternative for near-patient assessment of neonatal jaundice? | |
| DE69322242D1 (de) | Turbidimetrisches Immunassay mit Messung der Geschwindigkeit der Trübungsveränderung nach dem Anfang der Immunpräzipitationsreaktion | |
| Kessler et al. | Nonimmunological assay of urinary albumin based on laser-induced fluorescence | |
| Alstergren et al. | Measurement of joint aspirate dilution by a spectrophotometer capillary tube system | |
| Metcalf et al. | A simple, accurate, and rapid method for the quantitative determination of dextran in blood and urine | |
| Vesterberg | Quantification of albumin in urine by a new method: zone immuno-electrophoresis assay (ZIA) | |
| Stanton et al. | Empirically determined lead-poisoning screening cutoff for the Protofluor-Z hematofluorometer. | |
| US3477818A (en) | Method for the determination of the bilirubin content of body liquids | |
| Copeland et al. | Hemoglobin Determination in Plasma or Serum by First-Derivative Recording Spectrophotometry: Evaluation of the Procedure of Soloni, Cunningham, and Amazon |