SU1720004A1

SU1720004A1 - Способ определени альбумин-глобулинового коэффициента крови

Info

Publication number: SU1720004A1
Application number: SU904784560A
Authority: SU
Inventors: Рашид Кенжебекович Айдыралиев; Геннадий Евгеньевич Добрецов
Original assignee: Научно-Исследовательский Институт Физико-Химической Медицины Мз Рсфср
Priority date: 1990-01-18
Filing date: 1990-01-18
Publication date: 1992-03-15

Abstract

Изобретение, относитс к медицине, а именно к клинической биохимии, и касаетс определени альбумин-глобулинового коэффициента (АГК) в плазме или сыворотке крови. Цель изобретени - упрощение способа пр.и одновременном повышении его чувствительности. Кровь, плазму и сыворотку развод т буферным раствором/, отдел ют (в случае крови) форменные элементы, добавл ют флуоресцентный .краситель фенил-1-амино-8-сульфонафталин (АНС), измер ют интенсивность собственной флуоресценции в исследуемом и контрольном образцах до и после добавлени АНС и рассчитывают величину АГК по формуле. В качестве контрольного образца используют раствор триптофана. Дл проведени анализа по описанному способу достаточно 2- 40 мкл крови или 1-20 мкл плазмы или сыворотки (т.е. чувствительность возрастает на 1-2 пор дка), нет необходимости в проведении раздельного определени количества альбумина и глобулинов. Врем анализа одной пробы по предлагаемому способу .1-2 мин. сл

Description

Изобретение относитс к медицине, а точнее к клинической биохимии, и касаетс определени альбумин-глобулинового коэффициента (АГК) в плазме или сьГворотке крови с диагностической целью. АГК - величина , выражающа отношение количества альбуминов к количеству глобулинов в биологических жидкост х. В норме АГК крови колеблетс в пределах 1,2-2,0. При разнообразных патологических состо ни х (хронические инфекции, заболевани печени, почек, ожоги, воспалени и т.д.) наблюдаетс снижение АГК крови - и это служит важным диагностическим признаком.

Цель изобретени -упрощение способа при одновременном повышении его чувствительности . .

Способ осуществл етс следующим образом .

. Пробу крови развод т в 50-1000 раз, отдел ют форменные элементы, из полученного раствора плазмы готов т четыре пробы , в которых измер ют интенсивность флуоресценции (ее величины обозначены как Е:, Б, С и Д) и рассчитывают АГК по формуле

АГК

Е -D Б -С

К-2

(D.

где Е - интенсивность собственной флуоресценции разбавленной плазмы;

Б-тоже, в присутствии М-фенил-1-ами- но-8-сульфонафталина (АНС) в конечной концентрации 20-60 мкМ;

С - интенсивность флуоресценции 10- 50 мкМ раствора триптофана;

Д-то же в присутствии 20-60 мкМ АНС; . К-числовой коэффициент, который при средней концентрации АНС 40 мкм составл ет величину 2,13.

Коэффициент К св зан с концентрацией АНС следующим уравнением: .

К 2,25(1 -0.0013 Н).

где Н - концентраци АНС в мкМ.

Обычно используют концентрацию АНС 40 мкМ, и в уравнени х расчета АПК используют коэффициент, равный 2,13. В интервале концентраций 20-60 мкМ даже при использовании посто нного коэффициента (2,13) ошибка определени АПК находитс в пределах ±7%. Если же использовать переменный коэффициент, то значени АГК получаютс практически одинаковые. Результаты приведены в таблице.

В предлагаемом способе можно также использовать цельную плазму или сыворотку , которую перед измерени ми необходи- мо развести в 100-2000 раз (это соответствует разведению крови в 50-1000 раз).

Дл проведени анализа в зависимости от степени разведени достаточно 2-40 мкл крови, или 1-20 мкл сыворотки или плазмы (в известном способе - 110 мкл). Это повышает чувствительность по сравнению с известным способом в 5-110 раз. При дальнейшем разведении снижаетс сигнал, а следовательно, и точность измерени . Разведение крови менее, чем в 50 раз нецелесообразно , так как требует большего объема крови, и, следовательно, приводит к снижению чувствительности способа.

АНС используетс в способе в качестве тушител собственной флуоресценции альбумина . Конечна концентраци АНС в анализируемой пробе 20-60 мкМ, оптимальна концентраци - 40 мкМ.

В предлагаемом способе с целью стандартизации процедуры анализа используетс раствор триптофана (10-50 мкМ). Измерени интенсивности флуоресценции в растворе триптофана дл каждого конкретного прибора и измерительной кюветы достаточно провести один раз. Врем проведени одного анализа с момента получени разбавленной плазмы или сывбротки - 1-2 мин.

Приме р 1. В 30 образцах плазмы по предлагаемому способу было определено

соотношение альбумин/глобулин. С этой целью к 5 мкл плазмы каждого образца добавл ют 1 мл буферного раствора следующего состава: трмс-(оксиметил)-аминометан 10 мМ, ЭДТА 2 мМ, №CI 145 мМ, рН 7,4,

0 измер ют интенсивность флуоресценции . разбавленной плазмы до (Е) и после (Б) добавлени 40 мкМ АНС. Измер ют интенсивность флуоресценции 40 мкМ раствора триптофана до (С) и после (Д) добавлени 40

5 мкМ АНС. По формуле (1) и К 3.13 рассчитывают значени АГК. Среднее значение в труппе составило 1.40. Измерени провод т при следующих услови х: длина волны возбуждени 285 нм, длина волны флуоресцен0 ции 340 нм, рассто ни между внутренними поверхност ми пр моугольной кюветы 1 см. Параллельно в этих образцах крови вычислены значени АГК с помощью известного способа среднее значение 1,41). Коэффици5 ент коррел ции между данными обоих способов составл ет 0,92. При изменении концентрации АНС на 10 мкМ (25%) и использовании посто нного коэффициента К 2,13 определ емое значение АГК измен ет0 с на 0,05 единиц (3-4%). Следовательно, небольшие вариации в концентрации АНС слабо повли ют на точность анализа. Коэффициент (К) в уравнении (1) зависит от концентрации АНС и при 40 мкМ равен 2,13.

5 Если ввести поправку на концентрацию, то точность способа будет еще выше.

Предлагаемый способ позвол ет значительно упростить и ускорить определение АГК. Проведение одного анализа (вместо двух

0 в известном способе)с использованием одного флуоресцентного красител (вместо набора реактивов ) приводит к упрощению способа, а сокращение времени инкубации красител с образцом с 35-70 мин (в изеест5 ном способе) до 0,5-1,0 мин (в предлагаемом способе)- к сокращению времени анализа до 1-2 мин. При этом происходит значительна экономи красител - дл проведени анализа требуетс в 10 раз меньшее количество

0 красител , чем дл определени альбумина по известному способу.

Кроме того, повышаетс чувствительность анализа по сравнению с известным способом в 5-110 раз за счет использовани

5 микроколичества крови (2-40 мкл),

Положительные эффекты достигаютс

без уменьшени точности определени АГК.

Claims

Формула изобретени

Способ определени альбумин-глобулинового коэффициента крови, включающий

получение плазмы или сыворотки крови, добавление к ней красител с последующим анализом оптических свойств исследуемого и контрольного образцов, отличающий- с тем, что, с цельюупрощени способа при одновременном повышений его чувствительности , в качестве красител используют М-фенил-1-амино-8-сульфонафталинв концентрации 20-60 Mxlvf, измер ют интенсивность собственной флуоресценции в контрольном образце, содержащем триптофан , и в исследуемом образце, содержащем сыворотку или плазму до и после добавлени красител , а альбумин-глобулиновый коэффициент рассчитывают по формуле Е -Д.

АГК

Б -С

К-2.

где АГК - альбумин-глобулиновый коэффициент;

Е - интенсивность собственной флуо- ресценции плазмы или сыворотки крови;

Б-интенсивность флуоресценции плазмы или сыворотки в присутствии красител ;

С - интенсивность флуоресценции кон- трольного образца, содержащего триптофан; ;:.. ; . -...- : . . .Д - флуоресценци образца, содержащего триптофан в присутствий красител : К - числовой коэффициент, завис щий от концентрации красител .