SU1711078A1

SU1711078A1 - Method for determining immunocompetent cells

Info

Publication number: SU1711078A1
Application number: SU894782645A
Authority: SU
Inventors: Владимир Григорьевич Бебешко; Анатолий Андреевич Чумак; Димитрий Анатольевич Базыка; Надежда Владимировна Беляева; Виктория Константиновна Прахова; Андрей Владимирович Савран
Original assignee: Всесоюзный Научный Центр Радиационной Медицины
Priority date: 1989-12-14
Filing date: 1989-12-14
Publication date: 1992-02-07

Abstract

Изобретение относитс к медицине, а именно к иммунологии и аллергологии, и может быть использовано в биологии и ветеринарии . Цель изобретени - повышение точности и упрощение способа. Исследование попул ционного состава лимфоцитов провод т по количеству клеток, соединившихс с фиксированными в лунке плсйта эритроцитами, в среде, содержащей тео-4 филлин, вли ющий на экспрессию рецеп- торного аппарата лимфоцитов к эритроцитам барана в зависимости от функциональных характеристик клеток,. Использование за вленного способа позвол ет повысить точность при трудоемкости , уменьшить расход дефицитных реактивов дл проведени исследований. 1 табл.The invention relates to medicine, in particular to immunology and allergology, and can be used in biology and veterinary medicine. The purpose of the invention is to improve the accuracy and simplify the method. The population of lymphocytes was studied by the number of cells connected to red blood cells fixed in a well in a medium containing a theo-4 fillyn that affects the expression of the lymphocyte receptor apparatus to the erythrocytes of a ram depending on the functional characteristics of the cells. The use of the inventive method makes it possible to increase the accuracy in case of labor intensity, to reduce the consumption of scarce reagents for research. 1 tab.

Description

Изобретение относитс к медицине, а. именно к иммунологии и аллергологии, предназначено дл использовани в клинических и исследовательских цел х и может быть использовано в биологии и ветеринарии .The invention relates to medicine, and. specifically for immunology and allergology, it is intended for clinical and research purposes and can be used in biology and veterinary medicine.

Цель изобретени - повышение точно- сти и упрощение способа.The purpose of the invention is to improve the accuracy and simplify the method.

Способ осуществл ют следующим образом .The method is carried out as follows.

В лунки круглодонного плейта внос т по 0,05 мл 0,5%-ного раствора хлорида хрома и инкубируют 5 мин при комнатной температуре , после чего полностью удал ют хлорид хрома путем встр хивани плейта резким движением. В лунки внос т по 0,05 мл 0,5%-ной суспензии эритроцитов барана и центрифугируют 10 мин при 1000 об/мин дл осаждени и фиксации эритроцитов. В опытные лунки внос т по 0,05 мл теофилли- на в концентрации 1 мг/мл, в контрольные по 0,05 мл 0,9% раствора натри хлорида на фосфатном буфере (рН 7,2-7,4) и0.05 ml of a 0.5% aqueous solution of chromium chloride is added to the wells of the round-bottom plate and incubated for 5 minutes at room temperature, after which the chromium chloride is completely removed by shaking the plate with a sharp movement. 0.05 ml of a 0.5% suspension of sheep erythrocytes is added to the wells and centrifuged for 10 minutes at 1000 rpm for sedimentation and fixation of red blood cells. To the test wells, 0.05 ml of theophylline was added at a concentration of 1 mg / ml, 0.05 ml of 0.9% sodium chloride solution in phosphate buffer (pH 7.2-7.4) and

по 0,05 мл суспензии лимфоцитов в концентрации 5 105 клеток/мл. Инкубируют 30 мин при 37°С, затем помещают в холодильник на 1 ч при 4°С. После инкубации ресус- пендируют неприкрепившиес лимфоциты и удал ют надосадочную жидкость. В лунки добавл ют по 0,1 мл гемолитической жидкости , содержащей 0,8 г/л хлорида аммони и 0,04 г/л этилендиаминотетраацетата (рН 7,2-7,4), на 1 мин. Перенос т из каждой лунки по 0,1 мл содержимого в стаканчик с 6,25 мл 0,9%-ного раствора натри хлорида и подсчитывают число клеток в суспензии на проточном кондуктометрическом цитоанэ- лизаторе Лаборскаль ПСА-1-ПСЛ-1 или аналогичном. Соотношение регул торных субпопул ций Т-лимфоцитов определ ют по формуле.0.05 ml of suspension of lymphocytes at a concentration of 5 105 cells / ml. Incubate for 30 minutes at 37 ° C, then place in a refrigerator for 1 hour at 4 ° C. After incubation, unattached lymphocytes are resuspended and the supernatant is removed. 0.1 ml of hemolytic liquid containing 0.8 g / l of ammonium chloride and 0.04 g / l of ethylenediamine tetraacetate (pH 7.2-7.4) is added to the wells for 1 min. Transfer from each well 0.1 ml of the content into a glass with 6.25 ml of 0.9% sodium chloride solution and calculate the number of cells in suspension on a flow conductivity measuring laboracale cytoanalyzer PSA-1-PSL-1 or similar. The ratio of regulatory subpopulations of T-lymphocytes is determined by the formula.

К - соотношение теофиллин-резистент- ных и теофиллин-чувствительных лимфоцитов; А - количество лимфоцитов в опытной K is the ratio of theophylline-resistant and theophylline-sensitive lymphocytes; And the number of lymphocytes in the experimental

(Л(L

о 1about 1

0000

пробе; В - количество лимфоцитов в контрольной пробе.test; B - the number of lymphocytes in the control sample.

Способ был использован при проведении комплексного иммунологического исследовани 170 больных, находившихс на лечении в клиниках Всесоюзного научного центра радиационной медицины. Сравнительный анализ результатов по известному и предлагаемому способам приведены в таблице. /The method was used in a comprehensive immunological study of 170 patients who were treated in clinics of the All-Union Scientific Center for Radiation Medicine. Comparative analysis of the results of the known and proposed methods are given in the table. /

Как видно из таблицы,при использовании предлагаемого способа отмечена достаточна коррел ци показателей при сравнении с известным способом как в области низких, нормальных, так и повышенных значений соотношени субпопул ций.As can be seen from the table, when using the proposed method, a sufficient correlation of indicators was observed when compared with a known method, both in the area of low, normal, and elevated values of the ratio of subpopulations.

Способ подтверждаетс следующим примером.The method is confirmed by the following example.

Приме р. Больной Н., 33 года, диагноз: хронический гепатохрлецистит. Кровь больного 0,05 мл инкубируют 5 мин при комнат- ной температуре. В опытные лунки Primer p. Patient N., 33 years old, diagnosed with chronic hepatochrlecystitis. 0.05 ml of the patient's blood is incubated for 5 minutes at room temperature. In the experimental holes

добавл ют теофиллин, а в контрольные физический раствор. Количество клеток подсчитывают в цитоанализаторе Лаборскаль (табл.).theophylline is added, and the control solution is added. The number of cells is counted in a laborscal cytoanalyzer (table).

Технико-экономическа эффективность изобретени : использование за вленного способа позвол ет повысить точность при снижении трудоемкости способа, уменьшить расход дефицитных реактивов дл Technical and economic efficiency of the invention: the use of the inventive method improves the accuracy while reducing the labor intensity of the method, reduces the consumption of scarce reagents for

проведени исследований.conducting research.

Claims

Invention Formula

The method for determining immunocompetent cells. By detecting the number of theophylline-sensitive and theophylline-insensitive cells, characterized in that, in order to improve the accuracy and simplification of the method, lymphocyte subpopulations are determined by the number of cells attached fixed on the surface of the hole erythrocytes of sheep in a medium containing 1 mg / ml of theophylline.

Comparative analysis of detection of the ratio of regulatory subpopulations of T-lymphocytes in a patient with H-VA, 33 years old, diagnosis: chronic hepatocholecystitis.

Table continuation