SU1686361A1

SU1686361A1 - Method for estimation of functional activity of donor blood cells

Info

Publication number: SU1686361A1
Application number: SU884405783A
Authority: SU
Inventors: Ирина Петровна Балмасова
Original assignee: Самарский медицинский институт им.Д.И.Ульянова
Priority date: 1988-04-05
Filing date: 1988-04-05
Publication date: 1991-10-23

Abstract

Изобретение относитс к медицине, в частности к иммунологии и переливанию крови. и может быть использовано дл оценки функциональной активности больших гранул рных лимфоцитов (5 гл). Целью изобретени вл етс повышение точности способа Способ заключаетс в определении суммарного коэффициента аминосодержани (СКА) больших гранул рных лимфоцитов цитохимическими методами и.если величина СКА находитс в интервале от 2,1 до 3 6, БГЛ считают функционально активными, а кровь донора пригодной дл трансфузииThis invention relates to medicine, in particular to immunology and blood transfusion. and can be used to assess the functional activity of large granular lymphocytes (5 hl). The aim of the invention is to improve the accuracy of the method. The method consists in determining the total amine content ratio (SKA) of large granular lymphocytes by cytochemical methods and if the SKA value is in the range from 2.1 to 3-6, BHL is considered functionally active, and donor blood is suitable for transfusion

Description

Изобретение относитс к медицине, в час- к клинической иммунологии и трансфу- зионной терапии, и может быть использовано при переливании крови больным.The invention relates to medicine, in part to clinical immunology and transfusion therapy, and can be used in the transfusion of patients.

Цель изобретени упрощение и повышение точности способа за счет расширени спектра оценки функций клеток.The purpose of the invention is to simplify and improve the accuracy of the method by expanding the spectrum of evaluation of cell functions.

Способ осуществл етс следующим образом .The method is carried out as follows.

Из 10-15 мл гепаринизированной венозной крови человека получают суспензию лимфоцитов методом центрифугировани в градиенте плотности фиколл-гипака. Концентрацию лимфоцитов довод т до 2 -106 клеток в 1 мл среды 199 и по 0,2 мл разливают в четыре пробирки, после чего провод т инкубирование при 37° С в течение 40 мин. При этом в первой (контрольной) пробирке содержатс интактные лимфоциты, во вторую пробирку перед инкубированием добавл ют 0,2 мл М раствора гидрохлорида адреналина , в третью пробирку - 0,2 мл 10 М раствора креатининсульфата серотонина,в четвертую - 0,2 мл 10 М раствора гидрохлорида гистамина. После инкубации все четыре пробы подвергают центрифугированию, из осадков готов т мазки, последние фиксируют реактивом Севки (12 мл 40%-ного раствора формалина, 50 мл 5%-ного раствора двухро- мовокислого кали , 20 мл 1 М раствора уксуснокислого натри , до 100 мл дистиллированной воды) в течение 16-18 ч. Фиксированные мазки 1,5 ч отмывают в дистиллированной воде, .затем 30 мин окрашивают по методу Романовского . В готовых мазках определ ют раздельным подсчетом процентное содержание (по отношению к общему количеству лимфоид- ных клеток) БГЛ, имеющих гранулы фиолетового цвета - адреналинсодержащие. оранжевого цвета - серотонинсодержащие, красного цвета - гистаминсодержащие. По результатам определени рассчитывают СКАFrom 10-15 ml of human heparinized venous blood, a suspension of lymphocytes is obtained by centrifuging in a ficoll-hypaqua density gradient. The concentration of lymphocytes was adjusted to 2 -106 cells in 1 ml of medium 199 and 0.2 ml was poured into four tubes, followed by incubation at 37 ° C for 40 minutes. In the first (control) tube, intact lymphocytes are contained, 0.2 ml of M solution of adrenaline hydrochloride is added to the second test tube before incubation, 0.2 ml of 10 M serotonin creatinine sulfate solution is added to the third test tube, 0.2 ml in the fourth test tube M solution of histamine hydrochloride. After incubation, all four samples are centrifuged, smears are prepared from the sediments, the latter are fixed with Sevka reagent (12 ml of 40% formalin solution, 50 ml of 5% potassium bicaric acid, 20 ml of 1 M sodium acetate solution, up to 100 ml of distilled water) for 16-18 hours. Fixed smears are washed for 1.5 hours in distilled water, then stained for 30 minutes using the Romanovsky method. In the finished smears, the percentage (relative to the total number of lymphoid cells) BGL having purple-colored granules - adrenaline-containing is determined by separate calculation. orange - serotonin-containing, red - histamine-containing. According to the results of the determination, SKA is calculated.

СКА Кадр + Keep Кгист.SKA Frame + Keep Digger.

ьs

ЬB

оabout

CTJCTJ

JO (А) ОJO (A) O

где К - коэффициент, характеризующий количественное соотношение БГЛ дл каждого способа инкубировани в присутствии тестируемых биогенных аминов. В свою очередьwhere K is a coefficient characterizing the proportion of BGL for each method of incubation in the presence of the tested biogenic amines. In turn

с 4-с -г +а -г with 4-s + a-g

К TO

аbut

а с +сг +а г где а - процент БГЛ, несущих гранулы адреналина; с - процент БГЛ, несущих гранулы серотонина; г - процент БГЛ, несущих гранулы гистамина. В числителе - результаты определени дл лимфоцитов, инкубированных с одним из биогенных аминов; в знаменателе - показатели дл интактных лимфоцитов. Значени СКА в интервале от 2,1 до 3,6 говор т о пребывании натуральных киллеров в состо нии функциональной активности. СКА 2,0 расцениваетс как показатель насыщени гранул рного аппарата натуральных киллеров у данного субьекта биогенными аминами, а СКА 3,7 свидетельствует об истощении аминосодержащих гранул.a c + cg + a g where a is the percentage of BGL carrying adrenaline granules; c - the percentage of BGL carrying serotonin granules; g - the percentage of BGL carrying histamine granules. In the numerator, the determination results for lymphocytes incubated with one of the biogenic amines; in the denominator, indicators for intact lymphocytes. The values of SKA in the range from 2.1 to 3.6 speak about the presence of natural killers in the state of functional activity. SKA 2.0 is regarded as an indicator of the saturation of the granular apparatus of natural killers in a given subject with biogenic amines, and SKA 3.7 indicates a depletion of amine-containing granules.

Пример. Проведено исследование функциональной активности больших гранул рных лимфоцитов в крови 43 доноров в процессе консервации, у 60% проб исходна функциональна активность, выраженна в значени х СКА, находилась в интервале от 2,1 до 3,6. Исследовани повтор ли каждые 3 дн. Было показано, что в течение 6 дн. от момента забора крови СКА наход тс в этом же интервале, а после 6 дн. консервации принимал значени выше 3,6 или ниже 2,1. В эти же сроки начинал статистически достоверно снижатьс и процент жизнеспособных клеток с 87±2,3 до 75±1,9%, определ емый в пробе с трипановым синим.Example. The study of the functional activity of large granular lymphocytes in the blood of 43 donors in the preservation process, in 60% of the samples, the initial functional activity, expressed in terms of SKA, was in the range from 2.1 to 3.6. The study was repeated every 3 days. It has been shown that within 6 days. from the time of blood collection, the SKA is in the same interval, and after 6 days. preservation values of greater than 3.6 or lower than 2.1. At the same time, the percentage of viable cells began to statistically reliably decrease from 87 ± 2.3 to 75 ± 1.9%, which is determined in a sample with trypan blue.

В 24% проб исходна функциональна активность выражалась в величинах СКА больше 3,6, а в 16% - меньше 2,1. В этих пробах исходный процент жизнеспособныхIn 24% of samples, the initial functional activity was expressed in terms of SKA values greater than 3.6, and in 16% - less than 2.1. In these samples, the initial percentage of viable

клеток статистически достоверно был ниже (79±2,1%) и начинал снижатьс после 3 дн. консервации.cells were statistically significantly lower (79 ± 2.1%) and began to decrease after 3 days. conservation.

Таким образом, суммарный коэффициент аминосодержани , отражающий функциональную активность больших гранул рных лимфоцитов, может служить критерием при контроле клеток крови доноров в процессе консервации и при значени х от 2,1 до 3,6 показывает пригодность крови к трансфузии .Thus, the total amine content ratio, reflecting the functional activity of large granular lymphocytes, can serve as a criterion in monitoring donor blood cells during the preservation process and, at values from 2.1 to 3.6, shows the suitability of the blood for transfusion.

Фомула изобретени Способ определени функциональной активности клеток крови доноров путем исследовани больших гранул рных лимфоцитов , отличающийс тем, что, с целью повышени точности за счет расширени изучени спектра функций клеток и упрощени способа, лимфоциты инкубируют параллельно в средах, содержащие адреналин, серотонин, гистамин и не содержащие их, в течение 40 мин при 37РС, далее пробы центрифугируют , из каждого осадка готов т мазок , обрабатывают по методу Севки,The invention method of determining the functional activity of blood cells of donors by examining large granular lymphocytes, characterized in that, in order to increase accuracy by expanding the study of the spectrum of cell functions and simplifying the method, lymphocytes are incubated in parallel in media containing adrenaline, serotonin, histamine and containing them, for 40 min at 37PC, then the samples are centrifuged, a smear is prepared from each precipitate, processed by the Sevka method,

определ ют в каждом количество больших гранул рных лимфоцитов, содержащих адреналин , серотонин и гистамин, вычисл ют процент клеток, содержащих моноамины во всех исследованных мазках, рассчитываютdetermine in each the number of large granular lymphocytes containing adrenaline, serotonin and histamine, calculate the percentage of cells containing monoamines in all the smears examined, calculate

суммарный коэффициент аминосодержани и при его значении от 2,1 до 3,6 определ ют клетки функционально активными.the total coefficient of amino content and, when its value is from 2.1 to 3.6, the cells are determined functionally active.

Claims

A method for determining the functional activity of blood cells of donors by examining large granular lymphocytes, characterized in that, in order to increase accuracy by expanding the study of the range of cell functions and simplifying the method, lymphocytes are incubated in parallel in environments containing adrenaline, serotonin, histamine and not containing them, for 40 min at 37 ^C, then the sample was centrifuged, the precipitate of each swab was prepared, treated Sevka method determined in every the number of large granular lymphocytes comprising adren ling, serotonin and histamine, calculating the percentage of cells containing monoamines in all investigated smears calculated total aminosoderzhaniya coefficient and its value from 2.1 to 3.6 determined functionally active cells.

Compiled by R. Gumeniuk Editor N. Yatsola Tehred M. Morgenthal Corrector M. Demchik