SU1675308A1

SU1675308A1 - 2,7-Бис-(3 @ -карбокси-1 @ ,2 @ ,4 @ -триазол-5 @ -азо)-1-окси-8-аминонафталин-3,6-дисульфокислота в качестве реагента дл обнаружени белков в полиакриламидных гел х

Info

Publication number: SU1675308A1
Application number: SU894638857A
Authority: SU
Inventors: Маруфджан Юсупов; Татьяна Порфирьевна Копиця; Ирина Валерьевна Игнатова; Виталий Кузьмич Буриченко
Original assignee: Институт химии им.В.И.Никитина
Priority date: 1989-01-19
Filing date: 1989-01-19
Publication date: 1991-09-07

Abstract

Изобретение относитс к области органической химии, в частности к новому химическому азосоединению р да триазола - 2,7-бис-(3 -карбокси-1/,2 4 -триазол 5 -азо)- 1-окси-8-аминонафталин-3.6-дисульфокис- лоте (БКТААК), котора может быть использована в качестве реагента дл обнаружени белков в полиакрилэмидных гел х. БКТААК требует в 90 раз меньше времени дл обнаружени белков и в 10 раз меньше расхода уксусной кислоты дл отмывани красител по сравнению с известными красител ми амидочерным 10Б или кумасси голубым R 250. 1 табл.

Description

Изобретение относитс к области органической химии, в частности к новому химическомуазосоединениюр да 1,2,4-триазола. конкретно 2,7-бис-(3 -кар- бокси-1 .2 ,4 -триазол-5 -азо)-1-окси-8-эми- нонафталин-З.б-дисульФпкислоте (БКТААК), формулы «ос V,N.NJTN-NHOjS SO,H

-с

N-С-СООН

NH-N

котора может Ьыть использована в качестве реагента дл ускоренного обнаружени белков в пониакриламидных гел х.

Цель изобретени - синтез 2.7-бис-(3 -карбокси-1 .2 ,4 у-триазол-5-азо)-1-окси-8- аминонафталин-3,6-дисульфокислоты и ее использование в качестве красител дл белков

Поставленна цель достигаетс синтезом нового бисазосоединени 1,2,4-триазола (БКТААК)) и применением его в качестве реагента дл обнаружени белков.

БКТААК получают азосочетэнием дизот- риазолкарбоновой кислоты с аш-кислотой о две стадии: сначала аш-кислоту обрабатывают в кислой сргде избытком диазотриа- золкарбонооой кислоты, высаждают продукт и сочетают с диазотриаэолклрбоно- вой кислотой в щелочной среде.

БКТААК взаимодействует с белками. Реакцию БКТААК с белками можно использовать дл обнаружени белков в полииакрилэмидных гел х.

П р и м е р 1 3,2 г (0,01 М) аш-кислоты раствор ют при слабом нагревании в 200 мл дистиллированной воды Смесь быстро охлаждают , интенсивно перемешива , и по капл м добавл ют охлажденный раствор 2,1 г (0,015 М)диазотрилзолкарбоновой кислоты в смеси 22 мл концентрированной HCI и 7.5 мл воды. Все это делаетс при охлаждении льдом

Реакционную смесь оставл ют при комнатной температуре на 10 12ч Смесь окрашиваетс в темно-красный цвет

СО

с

о ч ел

СА)

О 00

Момоазокрэситель высаливают с помощью NaCI Осадок раствор ют п 18 мл 5%-ной NaOl I, филы руют рэстиор и дейстпием кон- ценфириаишой IICI осаждают и отдел ют осадок красител Осадок повторно раство рчкл о 10 мл 5%-ного раствора NaOH, фильтруют и к полун иному раствору при иней ионом меррмеширпнии прибавл ю чпь ми порци ми 2,1 i (0,015 М) диазотри кчпл г арЬ новой кислоты Реакционную смесь оставл ют на 2 сут при комнатной температуре Смесь приобретает темно-зеленый цвет Ос.чдок раствор ют п 5%-ном растворе МэОН и аждтог 6 н HCI Пере- оса,тд:ют 3 pan Промывают осадок 5 1C раз кригл зллизовывают вещество из сюдпо-сппртогзои смеси (2 1)

А осоед.1не1 in, в особенности биазо соеди клип, п виде рндипидупльного веще- стиа получить трудно Обычно они пнчечлют ч в s и/Г кристаллогидратов со- /I и, адсорбирован ратшчное количество PV Неодно ратпо проведенные анализы показали что всегда остаетс иеорганиче- r KIM осадог при СОЖЖРНИИ Это подтверж- птм ч го аналнзируочое азосоединение

Чп ОДИТСП В 14 ПР СОЛИ

Результаты лемешного анализа

Найдено % С 23 12, I 2,55; N 1875, oriaio1 28 11

Имчислоно. % С 3 10, Н 2,77; М 18,58 огтаток 29 9

Из полученны результатов анализа можно сыпести следуюи1ую формулу соединени СибНтОпМпЗтГ- а/ 81120, молеку л рнып вес 824

К аООС С Чх9

-N- ,

U -NHJ- 1

UuOjbSOjNa

J- ( -COOMa

8II20

П р и м е р 2 Использование БКТААК в качестве реагента дл обнаружени белков в полиакриламидных гел х (ПААГ).

Электрофорез белков (гистонов, рибо- нуклеазы, и др ) в полиакриламидных гел х проводили по методу Паниума и Чокли в трубках диаметром 5 мм и высотой 100 мм.

После электрофореза гели окрашивали 02%-ным раствором красител БКТААК в смеси этанол.вода:СНзСООН в соотношении (551), а также дл сравнени окрашивали и 0,2%-ным раствором амидо черного 105 и кумасси голубого Р-250 Гели окрашивали в течение 16 ч

Применение БКТААК дл обнаружени белков в полиакриламидных гел х позвол ет определ ть белки при концентрации 10- 10 9 М и не требует многократной отмывки гел от избытка красител что очень удобно при серийных анализах белков

В случае известных красителей - амидо черного 10Б и кумасси голубого Р-250, требуетс длительное врем и большой расход уксусной кислоты дл отмывки полиакриламидных гелей от избыт ка красител , что зна- чигельно удлин ет врем анализа белков.

В таблице приведены сравнительные данные предлагаемого красител с извест- н ы м

Claims

Формула изобретени

2,7-Бис-(3 г-карбокси-1 2 4 -триазол-5 -азо)-1-окси-8-аминонафталин-3 6-дисульф окислота формулы

HOOOC-N,

II N-NH

H05S ,N- Cсоон

503Н

NH-N в качестве реагента дл обнаружени

бепков в полиакриламидных гел х

1

Краситель

Врем отмывани фона краси-. тел

БЮААК

Амидо черный 10Б L. / УмаЈРЧ °di PI1 JL250

5-10 мин

15-20ч

15ч

, мл

20

200 300

200 300

БКТЛАК-2 7 fmc (3 карбокси-1 2 41триазол-5 -азо)-1-окси-8-аминона4 талмн 3 К-ди- уль- фокисло а

а краси-.

Расход 7%-ной уксусной кисл рть , мл

20

200 300

200 300