SU1659486A1 - Способ определени антикоагул нта протеина С в плазме крови животных - Google Patents
Способ определени антикоагул нта протеина С в плазме крови животных Download PDFInfo
- Publication number
- SU1659486A1 SU1659486A1 SU894658385A SU4658385A SU1659486A1 SU 1659486 A1 SU1659486 A1 SU 1659486A1 SU 894658385 A SU894658385 A SU 894658385A SU 4658385 A SU4658385 A SU 4658385A SU 1659486 A1 SU1659486 A1 SU 1659486A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- plasma
- protein
- activator
- blood plasma
- added
- Prior art date
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Изобретение относитс к способам определени биологически активных препаратов и может быть применено в физиологии, биохимии, гематологии, токсикологии, медицинской промышленности. Цель изобретени - повышение экономичности и надежности способа определени протеина С в плазме крови животных. Согласно предлагаемому способу протеин С в плазме крови животных определ ют путем смешени пробы , содержащей протеин С, и активатора с последующей регистрацией удлинени времени свертывани в тесте АЧТВ (активированное частичное тромбопластиновое врем ). Отличительными чертами способа вл ютс получение протромбинового комплекса из исследуемой плазмы, полное его растворение в растворе цитрата натри , использование активатора из да щитомордника вида Agklstrodon halys и применение обычной человеческой плазмы в качестве тестирующей в тесте АЧТВ.
Description
ъ
t
Изобретение относитс к способам оп- редел&ш биологически активных препаратов и может быть применено в физиологии, биохимии, гематологии, токсикологии, медицинской промышленности.
Цель изобретени - повышение экономичности и надежности способа определени антикоагул нта протеина С в плазме крови животных.
Дл этого берут осадок протромбинового комплекса, полученный из плазмы крови животных, раствор ют в 1/3-1/4 объема от количества исходной плазмы 0,19-0,22 М раствора цитрата натри , добавл ют 1/10- 1/17 объема (140-160 мкг/мл) активатора из да щитомордника Agklstrodon halys и инкубируют - мин при 36-38°С. Смесь разбавл ют в 14-21 раз физиологическим
раствором и смешивают ее с равным объемом тестирующей (обычной человеческой плазмы, добавл ют равное количество као- лин-кефалинового реактива, инкубируют 1- 2 мин и определ ют врем свертывани тестирующей плазмы. Количество протеина С в исходном образце крови определ ют по калибровочной кривой. Врем свертывани тестирующей плазмы в полулогарифмических координатах пр мо пропорционально содержанию протеина С в плазме крови.
Способ осуществл ют следующим образом .
Цитратную венозную кровь нормальных крыс с массой тела 250-280 г, вз тую из ремной вены, центрифугируют при 3000 об/мин в течение 30 мин. Плазму декантируют и используют дл определени
О
о
$
а о
протеина С. К 0,2-0,3 мл плазмы добавл ют 20 мкл 1 М раствора хлористого бари , перемешивают в течение 10 мин и центрифугируют при 2000 об/мин в течение 10 мин. Осадок раствор ют в 0,06-0,08 мл 0,19- 0,22 М раствора цитрата натри , добавл ют 15-25 мкл (140-160 мкг/мл) активатора из да щитомордника Agkistrodon halys и инкубируют 7-15 мин при 36-38°С. К смеси добавл ют 1,0-1,5 мл физиологического раствора, затем аликвоту ее смешивают с равным количеством тестирующей плазмы, добавл ют равное количество каолин-кефа- линового реактива, инкубируют 1-2 мин и определ ют врем свертывани тестирую- щей плазмы.
Пример 1. Берут осадок протромби- нового комплекса, полученный из 0,2 мл плазмы крови крысы, раствор ют в 0,06мл 0,19 М раствора цитрата натри , добавл ют 15 мкл (140 мкг/мл) активатора из да щитомордника Agkistrodon halys и инкубируют 7 мин при 36°С. К смеси добавл ют 1,0 мл физиологического раствора, затем аликвоту ее смешивают с равным количеством тести- рующей плазмы, добавл ют равное количество каолин-кефалинового реактива, инкубируют 1 мин и определ ют врем свертывани тестирующей плазмы. Получают 96% протеина С, содержащегос в плазме крови.
П р и м е,р 2. Берут осадок протромби- нового комплекса, полученный из 0,3 мл плазмы крови крысы, раствор ют в 0,08 мл 0,22 М раствора цитрата натри , добавл ют 25 мкл (160 мкг/мл) активатора из да щитомордника Agkistrodon halys и инкубируют 15 мин при 38°С. К смеси добавл ют 1,5 мл физиологического раствора, затем добавл ют равное количество каолин-кефалинового реактива, инкубируют 2 мин и определ ют врем свертывани тестирующей плазмы. Получают 97% протеина С, содержащегос в плазме крови,
Пример 3. Берут осадок протромби- нового комплекса, полученного из 0,25 мл плазмы крови крысы, раствор ют в 0,07 мл 0,2 М раствора цитрата натри , добавл ют 20 мкл (150 мкг/мл) активатора из да щито- мордника Agkistrodon halys и инкубируют 10 мин при 37°С. К смеси добавл ют 1,2 мл физиологического раствора, затем аликвоту ее смешивают с равным количеством тестирующей плазмы, добавл ют равное количе- ство каолин-кефалинового реактива, инкубируют 1 мин и определ ют врем свертывани тестирующей плазмы. Получают 100% протеина С, содержащегос в плазме крови.
Пример 4. Берут осадок протромби- нового комплекса, полученный из 0,25 мл плазмы крови крысы, добавл ют 0,05 мл 0,18 М раствора цитрата натри . Осадок не раствор етс , а следовательно, протеин С определить невозможно.
Пример 5. Берут осадок протромби- нового комплекса, полученный из 0,25 мл плазмы крови крысы, раствор ют в 0,09 мл 0,23 М раствора цитрата натри , добавл ют 30 мкл (170 мкг/мл) активатора из да щитомордника Agkistrodon halys и инкубируют 20 мин при 39°С. К смеси добавл ют 2,0 мл физиологического раствора, затем аликвоту ее смешивают с равным количеством тестирующей плазмы, добавл ют равное количество каолин-кефалинового реактива, инкубируют 3 мин и определ ют врем свертывани тестирующей плазмы. Получают 80% протеина С, содержащегос в плазме крови, что указывает невозможность определени 20% протеина С, содержащегос в плазме.
Пример 6. Берут осадок протромби- нового комплекса, полученный из 0,25 мл плазмы крови быка, раствор ют в 0,07 мл 0,2 М раствора цитрата натри , добавл ют 20 мкл (150 мкг/мл) активатора из да щитомордника Agkistrolon halys и инкубируют 10 мин при 37°С. К смеси добавл ют 1,2 мл физиологического раствора, затем аликвоту ее смешивают с равным количеством тестирующей плазмы, добавл ют равное количество каолин-кефалинового реактива, инкубируют 1 мин и определ ют врем свертывани тестирующей плазмы, Получают 100% протеина С, содержащегос в плазме крови,
Пример 7. Берут осадок протромби- нового комплекса, полученный из 0,25 мл плазмы крови крысы, раствор ют в 0,07 мл 0,2 М раствора цитрата натри , добавл ют 20 мкл (150 мкг/мл) активатора из да щитомордника Agkistrodon halys и инкубируют 5 мин при 35°С. К смеси добавл ют 1,2 мл физиологического раствора, затем аликвоту ее смешивают с равным количеством тестирующей плазмы, добавл ют равное количество каолин-кефалинового реактива, инкубируют 45 с и определ ют врем свертывани тестирующей плазмы. Получают 78% протеоина С, содержащегос в плазме крови, что указывает на невозможность определени 22 % протеина С, содержащегос в плазме.
Пример 8. Берут осадок протромби- нового комплекса, полученный из 0,25 мл плазмы крови крысы, раствор ют в 0.07 мл 0,2 М раствора цитрата натри , добавл ют 20 мкл (150 мкг/мл) активатора из да щитомордника Agklstrodon halys и инкубируют 10 мин при 37°С. К смеси добавл ют 0.8 мл физиологического раствора, затем аликвоту ее смешивают с равным количеством тестирующей плазмы, добавл ют равное количе- ство каолин-кефалинового реактива, инкубируют 1 мин и определ ют врем свертывани тестирующей плазмы. Получают 112% протеина С, содержащегос в плазме крови, что свидетельствует о завы- шении результата анализа.
Снижение времени инкубации раствора протромбинового комплекса активатором менее 7 мин приводит к неполной активации протеина С, а удлинение более 15 мин - к снижению активности образовавшегос активированного протеина С, так как этот белок термолабилен. Аналогично вли ет снижение или повышение темпера- туры инкубации. Во всех случа х результат анализа протеина С оказываетс заниженным (примеры 5 и 7). Разбавление активаци- онной смеси физиологическим раствором менее, чем указано в способе, ведет к сохранению в растворе высокой ионной силы, что тормозит свертывание тестирующей плазмы и приводит к завышению результата анализа (пример 8). Разбавление смеси более, чем указано в способе, ведет к разбавлению образовавшегос активированного протеина С, вследствие чего результат анализа занижаетс (пример 5).
Claims (1)
- Формула изобретениСпособ определени антикоагул нта протеина С в плазме крови животных путем смешени с активатором из да щитомордника , инкубации и определени времени свертывани тестирующей плазмы крови человека, отличающийс тем, что, с целью повышени воспроизводимости способа , из плазмы крови животных предварительно выдел ют протромбиновый комплекс, который раствор ют в 0,19- 0,22 М растворе цитрата натри в количестве 1/3-1/4 объема от исходной плазмы, смешивают его с активатором из да щитомордника вида Agklstrodon halys, инкубацию провод т в течение 7-15 мин, затем смесь разбавл ют в 14-21 раз физиологическим раствором, а в качестве тестирующей плазмы используют нативную плазму крови человека.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU894658385A SU1659486A1 (ru) | 1989-03-02 | 1989-03-02 | Способ определени антикоагул нта протеина С в плазме крови животных |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU894658385A SU1659486A1 (ru) | 1989-03-02 | 1989-03-02 | Способ определени антикоагул нта протеина С в плазме крови животных |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU1659486A1 true SU1659486A1 (ru) | 1991-06-30 |
Family
ID=21432290
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU894658385A SU1659486A1 (ru) | 1989-03-02 | 1989-03-02 | Способ определени антикоагул нта протеина С в плазме крови животных |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| SU (1) | SU1659486A1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998055875A1 (fr) * | 1997-06-06 | 1998-12-10 | Societe Diagnostica-Stago | Utilisation de venin de crotalus viridis helleri, procede et necessaire pour la determination de la reactivite de la proteine c activee |
-
1989
- 1989-03-02 SU SU894658385A patent/SU1659486A1/ru active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Авторское свидетельство СССР № 1565889, кл. С 12 N 9/50, 1989. * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998055875A1 (fr) * | 1997-06-06 | 1998-12-10 | Societe Diagnostica-Stago | Utilisation de venin de crotalus viridis helleri, procede et necessaire pour la determination de la reactivite de la proteine c activee |
| FR2764389A1 (fr) * | 1997-06-06 | 1998-12-11 | Stago Diagnostica | Utilisation de venin de crotalus viridis helleri, procede et necessaire pour la determination de la reactivite de la proteine c activee |
| US6251619B1 (en) | 1997-06-06 | 2001-06-26 | Societe Diagnostica Stago | Process for determining a resistance to activated protein C |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4219440A (en) | Multiple analysis hematology reference control reagent and method of making the same | |
| Lewis et al. | A one-stage method for the determination of accelerator globulin. | |
| US3574137A (en) | Multiple-analysis hematology control comprising human red blood cells and fowl red blood cells in an anticoagulant containing human serologically compatible plasma medium | |
| US3640896A (en) | Process for stabilizing fowl red blood cells | |
| Klein et al. | A colorimetric assay for chemical heparin in plasma | |
| US4067777A (en) | Determination of heparin in the blood | |
| US6248547B1 (en) | Reagent cocktail preparation for the rapid production of serum | |
| Hirsh et al. | Relation between bleeding time and platelet connective tissue reaction after aspirin | |
| Fass et al. | Factor VIII (Willebrand) antigen and ristocetin-Willebrand factor in pigs with von Willebrand's disease | |
| Baker et al. | Coagulation defects of aflatoxin intoxicated rabbits | |
| SU1659486A1 (ru) | Способ определени антикоагул нта протеина С в плазме крови животных | |
| US6146901A (en) | Composition for manipulating optical and electrical properties of particles to achieve target values for such properties and methods for using the composition | |
| Johnson et al. | The reduction of autoprothrombin II activity with dicumarol | |
| Kubisz et al. | Investigations on platelet function in diabetes mellitus | |
| Kimura et al. | Release of superoxide radicals by mouse macrophages stimulated by oxidative modification of glycated low density lipoproteins | |
| Teien et al. | On the value of the activated partial thrombo-plastin time (aptt) in monitoring heparin therapy | |
| JOHNSON et al. | Effect of oral anticoagulant (Marcumar) on prothrombin and related components in blood coagulation | |
| Winocour et al. | Time course of changes in in vitro platelet function and plasma von Willebrand factor activity (VIIIR: WF) and factor VIII-related antigen (VIIIR: Ag) in the diabetic rat | |
| Maurer et al. | Influence of bilirubin on human platelets | |
| Jaques | Blood clotting and hemostasis | |
| SOBEL et al. | Hypervolemia in mice bearing granulosa cell growths; time of onset and some associated physiological and chemical changes | |
| Fisher et al. | Blood coagulation changes in rats fed high fat diets | |
| Egeberg | Acquired circulating anticoagulant in classical hemophilia | |
| Hough et al. | Spectrophotometric Modification of the TAMe Assay for Prothrombin: Use for Control of Anticoagulant Therapy | |
| CA1120835A (en) | Multiple analysis hematology reference control reagent and method of making the same |