SU1654748A1 - Method for determination of immuno-defficiency states - Google Patents
Method for determination of immuno-defficiency states Download PDFInfo
- Publication number
- SU1654748A1 SU1654748A1 SU894695450A SU4695450A SU1654748A1 SU 1654748 A1 SU1654748 A1 SU 1654748A1 SU 894695450 A SU894695450 A SU 894695450A SU 4695450 A SU4695450 A SU 4695450A SU 1654748 A1 SU1654748 A1 SU 1654748A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- interleukin
- interleukins
- cells
- chemiluminescence
- level
- Prior art date
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относитс к медицине и может использоватьс в клинической иммунологии дл оценки иммунного статуса больных и при проведении диспансеризации населени . Целью изобретени вл етс упрощение и повышение точности анализа . Способ определени иммунодефицит- ных состо ний заключаетс в определении уровн экспрессии рецепторов к факторам роста (интерлейкинам) на поверхности им- мунокомпетентных клеток с помощью хеми- люминесцетного метода. Мононуклеарные клетки из периферической крови человека культивируют в течение 16-18 ч в присутствии митогена, затем определ ют уровень активации этих клеток экзогенными интер- лейкинами по сравнению с уровнем спонтанной хемилюминесценции в суспензии клеток в присутствии пюминола. При имму- нодефицитных состо ни х отмечают резкое снижение активации хемилюминесценции интерлейкинами 1 и 2 (дл интерлейкина-1 18,5% и ниже, дл интерлейкина-2 17% и ниже). W feThe invention relates to medicine and can be used in clinical immunology to assess the immune status of patients and during clinical examination of the population. The aim of the invention is to simplify and improve the accuracy of the analysis. The method of determining immunodeficiency states is to determine the level of expression of receptors for growth factors (interleukins) on the surface of immunocompetent cells using the chemiluminescent method. Mononuclear cells from human peripheral blood are cultured for 16-18 h in the presence of a mitogen, then the level of activation of these cells by exogenous interleukins is determined compared to the level of spontaneous chemiluminescence in a cell suspension in the presence of pyuminol. In immunodeficient states, a sharp decrease in the activation of chemiluminescence by interleukins 1 and 2 is noted (for interleukin-1, 18.5% and below, for interleukin-2, 17% and below). W fe
Description
Изобретение относитс к медицине и может быть применено как лабораторный метод определени иммунологического статуса больного.The invention relates to medicine and can be applied as a laboratory method for determining the immunological status of a patient.
Цель изобретени - упрощение и повышение точности способа за счет определени иммунодефицитных состо ний, основанный на оценке экспрессии рецепторов к факторам роста (интерлейкинам) на клеточной мембране.The purpose of the invention is to simplify and improve the accuracy of the method by determining the immunodeficiency states, based on an assessment of the expression of growth factor receptors (interleukins) on the cell membrane.
Способ осуществл етс следующим образом .The method is carried out as follows.
Мононуклеарные клетки из венозной периферической крови, забранной стерильно из локтевой вены и гепаринизированной (10-25 ЕД/мл крови) выдел ют центрифугированием на градиенте плотности фиколлверографина по методу Вбут. Мононуклеарные клетки культивируют в среде N: 199 (Ин-т полиомиелита и вирусного энцефалита ) в концентрации 1-2 х 106 мл с ФГА или КОН А (Сэрва, ФРГ) в дозе 5-10 мкг/мл при 37°С. в течение 14-16 ч в центрифужных пробирках. После культивировани клетки центрифугировали при 500°С. Надосадок удал ли и клетки ресуспендировали в 0,1 мл среды № 199. Суспензию клеток переносили в кювету, содержащую 0,8 мл среды инкубации следующего состава: 110 мМ NaCI, 5 мМ глюкозы, 2,5 мМ MgCl2. 0,65 мМ люминала, 10 мМ трис HCI. рН 7,4. Определ ли уровень спонтанной хемилюминесценции с помощью люминометра (ЛКБ, Швеци ). Не наруша светоизол ции системы, в кюветуMononuclear cells from peripheral venous blood collected sterilely from the cubital vein and heparinized (10-25 U / ml of blood) were isolated by centrifugation on a density gradient of ficollarografin using the Wi-Fi method. Mononuclear cells are cultured in N: 199 medium (Institute of Polio and Viral Encephalitis) at a concentration of 1-2 x 106 ml with PHA or KOH A (Serva, HGF) at a dose of 5-10 μg / ml at 37 ° C. for 14-16 h in centrifuge tubes. After cultivation, the cells were centrifuged at 500 ° C. The supernatant was removed and the cells were resuspended in 0.1 ml of medium No. 199. The cell suspension was transferred to a cuvette containing 0.8 ml of the incubation medium of the following composition: 110 mM NaCI, 5 mM glucose, 2.5 mM MgCl2. 0.65 mM luminal, 10 mM tris HCI. pH 7.4. Determine the level of spontaneous chemiluminescence using a luminometer (LKB, Sweden). Do not disturb the light insulation of the system, in a cuvette
CNCN
слcl
VJVj
N 00N 00
добавл ли 0,1 мл среды, содержащей интер- лейкин-1 или интерлейкин-2, и определ ли уровень активированной хемилюминесценции . Вычисл ли отношение0.1 ml of medium containing interleukin-1 or interleukin-2 was added, and the level of activated chemiluminescence was determined. Does the ratio calculate
1 а1 a
1 СП1 SP
величин активированной и спонтанной хемилюми- несцении (индекс активации). Индексы активации , характерные дл здоровых доноров и дл больных с иммунопатологическими состо ни ми подтверждают изобретение . Иммунодефицитные состо ни были диагносцированы известным способом.values of activated and spontaneous chemiluminescence (activation index). Activation indices characteristic of healthy donors and for patients with immunopathological conditions confirm the invention. Immunodeficiency states were diagnosed in a known manner.
. Интерлейкин-1 и интерлейкин-2 получали из среды культивации мононуклеарных клеток периферической крови здоровых доноров . Мононуклеарные клетки раздел ли на прилипающие и неприлипающие к стеклу культивацией в пенициллиновых флаконах в концентрации 2-4x10 /мл с 20%-ной эмбриональной тел чьей сыворотки при 37°С в течение 45-60 мин. Неприлипшие клетки переносили в новые флаконы. Прилипшие клетки снимали холодным раствором Версена (4-6°С), центрифугировали и ресуспендировали в среде № 109. Дл получени среды, содержащей интерлейкин-1, прилипающие клетки культивировали в концентрации 0,2-0,4x10 /мл в среде № 199 с 10%-ной эмбриональной тел чьей сыворотки . Через 72 ч надосадок собирали и хранили при -20°С. Дл получени супернатанта, содержащего интерлейкин-2, неприлипающие клетки в концентрации 1x10 /мл культивировали в среде № 199 с 10%-ной эмбриональной тел чьей сыворотки и с 10 мкг/мл ФГА. Через 72 ч надосадок собирали и хранили при -20°С. При выполнении способа возможно использование коммерческих препаратов интерлейкина-1 или ин- терлейкина-2.. Interleukin-1 and interleukin-2 were obtained from the culture medium of mononuclear cells of the peripheral blood of healthy donors. Mononuclear cells were divided into adherent and non-adherent glass by cultivation in penicillin vials at a concentration of 2-4x10 / ml with 20% fetal calf serum at 37 ° C for 45-60 minutes. Non-adherent cells were transferred to new vials. Adherent cells were removed with a cold Versen solution (4-6 ° C), centrifuged and resuspended in medium No. 109. To obtain a medium containing interleukin-1, adherent cells were cultured at a concentration of 0.2-0.4x10 / ml in medium No. 199 s 10% fetal bovine serum. After 72 h, the supernatant was collected and stored at -20 ° C. To obtain a supernatant containing interleukin-2, non-adherent cells at a concentration of 1x10 / ml were cultured in medium No. 199 with 10% fetal calf serum and 10 µg / ml PHA. After 72 h, the supernatant was collected and stored at -20 ° C. When performing the method, it is possible to use commercial preparations of interleukin-1 or interleukin-2.
П р и м е р 1. Больной Б., 36 лет поступил в отделение рекоструктивной хирургии глаза ВНИИ ГБ МЗ СССР с жалобами на жгучие боли в правом глазу,-светобо знь и ухудшение зрени . При обследовании было вы влено , что роговица инфильтрирована, прозрачность нарушена, имеетс множество пузырьков высыпаний. Был диагностирован герпетический кератоувеит в стадии обострени заболевани . На основании длительного рецидивирующего течени заболевани было сделано предположение, что у больного имеет место иммунодефицитное состо ние , усугубл ющее течение заболевани . Дл параллельного проведени оценки экспрессии рецепторов к интерлейкинам у больного была забрана кровь. При использовании предлагаемого способа по снижению индекса активации хемилюминесценции интерлейкином-1 до 10,2%, интерлейкином-2 до 9,10% было диагностировано иммунодефицитное состо ние через 18ч после забора крови. Через 80 ч эти данные были подтверждены с помощью известного способа оценки экспрессии рецепторов к интерлейкинам .PRI me R 1. Patient B., 36 years old, was admitted to the Department of Reconstructive Eye Surgery of the All-Union Scientific Research Institute of the USSR Ministry of Public Health with complaints of burning pains in the right eye, lightening and deterioration of vision. On examination, it was found that the cornea was infiltrated, the transparency was disturbed, and there were many eruption bubbles. Herpetic keratouveitis has been diagnosed in the exacerbation stage. On the basis of a long relapsing course of the disease, it has been suggested that the patient has an immunodeficiency condition aggravating the course of the disease. For parallel evaluation of the expression of receptors for interleukins, the patient was bled. When using the proposed method to reduce the chemiluminescence activation index by interleukin-1 to 10.2%, interleukin-2 to 9.10% was diagnosed with an immunodeficiency state 18 hours after blood collection. After 80 h, these data were confirmed using a known method for assessing the expression of interleukin receptors.
П р и м е р 2. Больной И., 26 лет, поступил в радиологическое отделение МНИ РРИ с жалобами на опухолевидные образовани Example 2: Patient I., 26 years old, was admitted to the radiological department of the Moscow Scientific Research Institute of RRI with complaints of tumor-like formations.
0 в области шеи, лихорадку, плохое самочувствие . При обьективном обследовании в области шеи, подмышечных впадин пальпируютс уплотненные пакеты лимфоузлов. При биопсии обнаружены клетки Березовского5 Штернберга, на основании чего был поставлен диагноз лимфогранулематоза. Дл оценки экспрессии рецепторов к интерлейкинам у больного была забрана кровь. При использовании данного способа у больного0 in the neck, fever, feeling unwell. On a case-by-case examination of the neck, the armpits, palpable lymph node packages are palpated. A biopsy revealed Berezovsky5 Sternberg cells, on the basis of which a diagnosis of lymphogranulomatosis was made. Blood was collected from the patient to evaluate the expression of interleukin receptors. When using this method in a patient
0 было диагностировано иммунодефицитное состо ние по снижению индекса активации хемилюминесценции до 15% дл интерлейкина-1 и до 17% дл интерлейкина-2. Результаты были получены через 18 ч после0 was diagnosed with an immunodeficiency state by reducing the chemiluminescence activation index to 15% for interleukin-1 and to 17% for interleukin-2. Results were obtained 18 h after
5 забора крови. Полученные результаты были подтверждены с помощью известного способа через 80 ч после вз ти крови. Таким образом; диагностика иммунодефицитного состо ни была сокращена на 62 ч.5 blood sampling. The obtained results were confirmed using a known method 80 hours after blood collection. In this way; diagnosis of immunodeficiency was reduced by 62 hours.
0П р и м е р 3. Больной Г., 6 лет, находилс 0P e rm 3. Patient G., 6 years old, was
на лечении в детской клинической больнице № 10 г Москвы Жалоб не предъ вл л. Объективно - признаки болезни Дауна. Поступил по поводу длительной в лотекущейon treatment at the Children's Clinical Hospital No. 10 of Moscow. There were no complaints. Objectively - signs of Down syndrome. Entered about the lengthy in the lottery
5 болезни верхних дыхательных путей. При оценке экспрессии рецепторов к интерлейкинам у больного было диагностировано иммунодефицитное состо ние. При параллельной оценке экспресии рецепторов5 diseases of the upper respiratory tract. When assessing the expression of receptors for interleukins, the patient was diagnosed with an immunodeficiency state. With concurrent assessment of receptor expression
0 предлагаемым способом было также диагностировано иммунодефицитное состо ние поснижению индекса активации хемилюминесценции интерлейкином-1 до 18,5%, ин- терлейкином-2 до 14,2%. Срок диагностикиBy the proposed method, an immunodeficiency state was also diagnosed with a decrease in the chemiluminescence activation index by interleukin-1 to 18.5%, interleukin-2 to 14.2%. Diagnostic time
5 был также сокращен на 62 ч.5 was also reduced by 62 h.
Таким образом, предлагаемый способ обладает р дом преимуществ по сравнению с известным ранее способом диагностики иммунодефицитных состо ний: меньшейThus, the proposed method has several advantages compared with the previously known method for diagnosing immunodeficiency states: less
0 трудоемкостью и длительностью (сокращение срока постановки диагноза на 62 ч), высокой точностью и воспроизводимостью (значение индекса активации, вычисленное по данным хемилюминесцентного метода,0 laboriousness and duration (shortening the diagnosis by 62 hours), high accuracy and reproducibility (the value of the activation index calculated from the chemiluminescent method,
5 колеблетс в пределах 2-5% в п ти параллельных пробах), отсутствием необходимости дорогосто щих меченых реактивов, прогрессивностью (использование современного высокочувствительного метода биофизического анализа).5 ranges from 2–5% in five parallel samples), no need for expensive labeled reagents, progressiveness (using the modern highly sensitive method of biophysical analysis).
Claims (1)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU894695450A SU1654748A1 (en) | 1989-03-16 | 1989-03-16 | Method for determination of immuno-defficiency states |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU894695450A SU1654748A1 (en) | 1989-03-16 | 1989-03-16 | Method for determination of immuno-defficiency states |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU1654748A1 true SU1654748A1 (en) | 1991-06-07 |
Family
ID=21449536
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU894695450A SU1654748A1 (en) | 1989-03-16 | 1989-03-16 | Method for determination of immuno-defficiency states |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
SU (1) | SU1654748A1 (en) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP1027453A4 (en) * | 1997-10-17 | 2004-12-01 | Univ South Florida | Method to diagnose and monitor cellular immune deficiencies |
-
1989
- 1989-03-16 SU SU894695450A patent/SU1654748A1/en active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Frezenlus Z Annal. Chem. 1982, Bd 311 Ne 4, 354. * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP1027453A4 (en) * | 1997-10-17 | 2004-12-01 | Univ South Florida | Method to diagnose and monitor cellular immune deficiencies |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Rinaldo Jr et al. | Mechanisms of immunosuppression in cytomegaloviral mononucleosis | |
Peitersen et al. | The incidence of herpes zoster antibodies in patients with peripheral facial palsy1 | |
Springer et al. | Patients' immune response to breast and lung carcinoma-associated Thomsen-Friedenreich (T) specificity | |
Ben-Bassat et al. | Concanavalin A receptors on the surface membrane of lymphocytes from patient's with Hodgkin's disease and other malignant lymphomas. | |
Virolainen et al. | Cellular and humoral immunity in cartilage-hair hypoplasia | |
Patterson et al. | In vitro production of IgE by lymphocytes from a patient with hyperimmunoglobulinaemia E, eosinophilia and increased lymphocytes carrying surface IgE. | |
Frankenburg | A simplified microtechnique for measuring human lymphocyte proliferation after stimulation with mitogen and specific antigen | |
SU1654748A1 (en) | Method for determination of immuno-defficiency states | |
Aulisio et al. | Substitution of egg yolk for serum in indirect fluorescence assay for Rous sarcoma virus antibody | |
Lowry et al. | Cellular immunity in congestive cardiomyopathy. The normal cellular immune response. | |
Alvarado et al. | Delayed-type hypersensitivity and lymphocyte proliferation in response to Leishmania major infection in a group of children in Jericho | |
Turner et al. | Serological specificity of an auto-antibody in atypical pneumonia | |
JP2553606B2 (en) | Method for separating and using density-specific blood cells | |
Messinezy et al. | Primary thrombocythaemia: a composite approach to diagnosis | |
Rinaldo Jr et al. | Alteration of immunoregulatory mechanisms during cytomegalovirus mononucleosis: effect of in vitro culture on lymphocyte blastogenesis to viral antigens | |
AU673486B2 (en) | Method for determining capability of imparting growth activity | |
RU2054172C1 (en) | Method for studying phagocytosis in the whole blood | |
Henriksson et al. | Cerebrospinal fluid lymphocytes from patients with multiple sclerosis do not increase immunoglobulin or measles antibody production after stimulation with pokeweed mitogen | |
SU1409942A1 (en) | Method of diagnostics of psoriasis | |
SU1698784A1 (en) | Method for determining blood immune complexes | |
Rodriguez-Molina et al. | Studies on immunity to bilharziasis mansoni: evaluation of the circumoval precipitin test | |
RU2208786C1 (en) | Method determining spontaneous cell cytotoxicity | |
SU971317A1 (en) | Method of diagnosis of cytomegalovirus chorioretinitis and uveitis of children | |
RU1778703C (en) | Method for differential diagnosing of disseminated pulmonary tuberculosis and sarcoidosis | |
CN1098462C (en) | Method of determining suppressor cell component of immune status of individual and means for carrying out the same |